Virusli teri lezyonlari Coombs testi. Otoimmün gemolitik anemiyalar

Antikorlar, eritrotsitlar yuzasida joylashgan bo'lib, statik yoki erkin holatda bo'lishi mumkin qon plazmasi. Antikorlarning holatiga qarab, to'g'ridan-to'g'ri yoki bilvosita Kumbs reaktsiyasi amalga oshiriladi. Agar antikorlar qizil qon hujayralari yuzasida o'rnatilganligiga ishonish uchun asos bo'lsa, to'g'ridan-to'g'ri Coombs testi o'tkaziladi. Bunday holda, test bir bosqichda amalga oshiriladi - qo'shish antiglobulin sarum. Agar qizil qon hujayralari yuzasida to'liq bo'lmagan antikorlar mavjud bo'lsa, aglutinatsiya qizil qon hujayralari

Bilvosita reaktsiya

Bilvosita Kumbs reaktsiyasi 2 bosqichda sodir bo'ladi. Avval siz sun'iy ravishda amalga oshirishingiz kerak sensibilizatsiya qizil qon hujayralari Buning uchun qizil qon tanachalari va tekshirilayotgan qon zardobi inkubatsiya qilinadi, bu esa qizil qon tanachalari yuzasida antikorlarning biriktirilishiga olib keladi. Shundan so'ng Coombs testining ikkinchi bosqichi - antiglobulin sarum qo'shilishi amalga oshiriladi.

Yog'ingarchilik reaktsiyasi - RP (lotincha praecipilo dan cho'kma) - eruvchan molekulyar antigen kompleksining antikorlar bilan bulutlilik shaklida hosil bo'lishi va cho'kishi. cho'kma. Antigenlar va antikorlarni ekvivalent miqdorda aralashtirish natijasida hosil bo'ladi, ulardan birining ortishi immun kompleksining shakllanish darajasini pasaytiradi. Cho'kma reaktsiyasi probirkalarda (halqali cho'kma reaktsiyasi), jellarda, ozuqa muhitida va boshqalarda amalga oshiriladi. Cho'kma reaktsiyasining navlari yarim suyuq agar yoki agaroz jelda, ikki tomonlama immunodiffuzion. Ouchterloniya, radiap immunodiffuzioni, immunoepektroforez va boshq.

Halqali yog'ingarchilik reaktsiyasi. Reaktsiya tor cho'kma naychalarida amalga oshiriladi: eruvchan antijen immun zardobiga qatlamlanadi. Antigen va antikorlarning optimal nisbati bilan bu ikki eritmaning chegarasida shaffof bo'lmagan qatlam hosil bo'ladi. cho'kma halqasi. Reaksiyada antijen sifatida qaynatilgan va filtrlangan to‘qima ekstrakti ishlatilsa, bu reaksiya birinchi termopresipitatsiya reaksiyasi (kuydirgi haptenini aniqlash reaksiyasi) deb ataladi.
Ouchterlony qo'sh immunodiffuziya reaktsiyasi. Reaksiyani o'rnatish uchun shisha plastinka ustiga eritilgan agar jelining yupqa qatlami quyiladi va qattiqlashgandan so'ng unda quduqlar kesiladi. Antigenlar va immun zardoblar bir-biriga qarab tarqaladigan gelning quduqlariga alohida joylashtiriladi. Uchrashuv nuqtasida, ekvivalent nisbatda, ular oq chiziq shaklida cho'kma hosil qiladi. Ko'p komponentli tizimlarda antijenler va antikorlar bilan quduqlar o'rtasida cho'kmaning bir nechta chizig'i paydo bo'ladi; bir xil AGlarda cho'kma chiziqlari birlashadi; bir xil bo'lmagan AGlarda ular kesishadi.
Radial immunodiffuziya reaktsiyasi. Eritilgan agar jeli bilan immun zardobi stakanga teng ravishda quyiladi. Jelda qattiqlashgandan so'ng, quduqlar hosil bo'ladi, ularga antigen turli xil suyultirishlarga joylashtiriladi. Antigen jelga tarqalib, antitellar bilan quduqlar atrofida halqali yog'ingarchilik zonalarini hosil qiladi. Cho'kma halqasining diametri antigen konsentratsiyasiga mutanosibdir. Reaktsiya qon zardobidagi immunoglobulinlarni aniqlash uchun ishlatiladi turli sinflar, komplement tizimining tarkibiy qismlari va boshqalar.
Immunoelektroforez- elektroforez va immunopresipitatsiya usulining kombinatsiyasi: antigenlar aralashmasi gelning quduqlariga kiritiladi va elektroforez yordamida gelda ajratiladi, so'ngra immunoserum elektroforez zonalariga parallel ravishda truba ichiga qo'shiladi, ularning antikorlari tarqaladi. gel va antigen bilan "uchrashuv" joyida yog'ingarchilik chiziqlarini hosil qiladi.
Flokulyatsiya reaktsiyasi(Ramon bo'yicha) (lotincha f1oecus - jun yormalari) - toksin - antitoksin yoki toksoid - antitoksin reaktsiyasi paytida probirkada opalessensiya yoki flokulyant massa (immunoprecipitatsiya) paydo bo'lishi. Antitoksik sarum yoki toksoidning faolligini aniqlash uchun ishlatiladi.

HLA yozish- insonning asosiy gistokompozitsiya kompleksini o'rganish - HLA kompleksi. Ushbu shakllanish 6-xromosomadagi genlar hududini o'z ichiga oladi, ular turli xil immunitet reaktsiyalarida ishtirok etadigan HLA antijenlarini kodlaydi.

uchun vazifalar HLA yozish juda boshqacha bo'lishi mumkin - biologik identifikatsiya (HLA turi ota-ona genlari bilan birga meros bo'lib o'tadi), moyillikni aniqlash turli kasalliklar, organ transplantatsiyasi uchun donorlarni tanlash - bu donor va qabul qiluvchi to'qimalarning HLA tiplash natijalarini taqqoslashni o'z ichiga oladi. HLA tiplashdan foydalanib, bepushtlik holatlarini tashxislash uchun gisto-moslashuvchanlik antijenlari nuqtai nazaridan turmush o'rtoqlar qanchalik o'xshash yoki turlicha ekanligi aniqlanadi.

HLA yozishni taklif qiladi HLA polimorfizmini tahlil qilish va ikki usul bilan amalga oshiriladi - serologik va molekulyar genetik. HLA tiplashning klassik serologik usuli mikrolimfotsitotoksik testga asoslangan va molekulyar usulda PCR (polimeraza zanjiri reaktsiyasi) qo'llaniladi.

Serologik HLA yozish izolyatsiya qilingan hujayra populyatsiyalarida amalga oshiriladi. Asosiy gistofotsitlar kompleksi antijenlari asosan limfotsitlar tomonidan olib boriladi. Shuning uchun I sinf antigenlarining asosiy tashuvchisi sifatida T limfotsitlar suspenziyasi, HLA II sinf antijenlarini aniqlash uchun esa B limfotsitlarining suspenziyasi qo'llaniladi. To'liq qondan kerakli hujayra populyatsiyalarini ajratib olish uchun santrifugalash yoki immunomagnit ajratish qo'llaniladi. Birinchi usul noto'g'ri ijobiy ma'lumotlarga olib kelishi mumkin, deb ishoniladi, chunki bu ba'zi hujayralarning o'limiga olib keladi. Ikkinchi usul aniqroq deb tan olingan - hujayralarning 95% dan ortig'i hayotiy bo'lib qoladi.

Ammo limfotsitotoksik testni o'tkazish uchun asos HLA yozish HLA I va II sinf antijenlarining turli xil allel variantlariga antikorlarni o'z ichiga olgan o'ziga xos sarumdir. Serologik test qaysi sarumlarning limfotsitlar bilan reaksiyaga kirishishini va qaysi biri reaksiyaga kirishmasligini tekshirish orqali HLA turini aniqlashi mumkin.

Agar hujayralar va sarum o'rtasida reaksiya yuzaga kelsa, natijada hujayra yuzasida antigen-antikor kompleksi hosil bo'ladi. Komplementni o'z ichiga olgan eritma qo'shilgandan so'ng, hujayra parchalanishi va o'limi sodir bo'ladi. Serologik HLA tiplash testi ijobiy (qizil floresans) va salbiy (yashil floresans) reaktsiyalarni baholash uchun floresan mikroskopiya yoki o'lik hujayralar yadrolarini bo'yash uchun faza-kontrast mikroskopiya yordamida baholanadi. HLA tiplash natijasi reaksiyaga kirgan sarumlar va antigenlarning oʻzaro reaksiyaga kirishuvchi guruhlari oʻziga xosligini hamda sitotoksiklik reaksiyasining intensivligini hisobga olgan holda olinadi.

Serologik usullarning kamchiliklari HLA yozish o'zaro reaktsiyalarning mavjudligi, zaif antikor yaqinligi yoki HLA antigenlarining past ifodasi, bir qator HLA genlarida protein mahsulotlarining yo'qligi.

Zamonaviyroq, molekulyar usullar HLA yozish ular allaqachon standartlashtirilgan sintetik namunalardan foydalanadilar, ular leykotsitlar yuzasida antijenler bilan emas, balki DNK bilan reaksiyaga kirishadilar va namunada qaysi antijenler mavjudligini bevosita ko'rsatadilar. Molekulyar usullar tirik leykotsitlarni talab qilmaydi; har qanday inson hujayrasi o'rganish mumkin va bir necha mikrolitr qon ishlash uchun etarli yoki siz o'zingizni og'iz bo'shlig'i shilliq qavatidan qirib tashlash bilan cheklashingiz mumkin.

Molekulyar genetik HLA yozish PCR usulidan foydalanadi, uning birinchi bosqichi sof genomik DNKni (to'liq qondan, leykotsitlar suspenziyasidan, to'qimalardan) olishdir.

Keyin DNK namunasi nusxalanadi - ma'lum bir HLA lokusuga xos bo'lgan primerlar (qisqa bir zanjirli DNK) yordamida in vitro kuchaytiriladi. Har bir primer juftining uchlari ma'lum bir allelga mos keladigan noyob ketma-ketlikni qat'iy ravishda to'ldirishi kerak, aks holda kuchaytirish sodir bo'lmaydi.

PCRdan so'ng, takroriy nusxalash paytida ko'p miqdordagi DNK bo'laklari olinadi, ularni vizual ravishda baholash mumkin. Buning uchun reaksiya aralashmalari elektroliz yoki gibridlanishga duchor bo'ladi va maxsus kuchaytirish sodir bo'lganligi dastur yoki jadval yordamida aniqlanadi. HLA tiplash natijasi gen va allel darajalarida keng qamrovli hisobot shaklida taqdim etiladi. Amaldagi namunalarni standartlashtirish tufayli molekulyar HLA yozish aniqrog'i serologik. Bundan tashqari, u ko'proq ma'lumot beradi (ko'proq yangi DNK allellari) va boshqalar yuqori daraja uning tafsiloti, chunki u nafaqat antijenlarni, balki hujayrada qaysi antigen mavjudligini aniqlaydigan allellarni ham aniqlash imkonini beradi.

Immun lizis reaktsiyasi. Reaktsiya o'ziga xos antikorlarning hujayralar, shu jumladan eritrotsitlar va bakteriyalar bilan immun komplekslarini hosil qilish qobiliyatiga asoslanadi, bu klassik yo'l bo'ylab komplement tizimining faollashishiga va hujayra lizisiga olib keladi. Immun lizis reaksiyalaridan gemoliz reaksiyasi ko'p qo'llaniladi va bakterioliz reaksiyasi kam qo'llaniladi (asosan vabo va vaboga o'xshash vibrionlarni farqlashda).

Gemoliz reaktsiyasi. Komplement ishtirokida antikorlar bilan reaktsiya ta'sirida qizil qon hujayralarining bulutli suspenziyasi gemoglobinning chiqishi tufayli yorqin qizil shaffof suyuqlik - "lak qon" ga aylanadi. Diagnostik komplementni aniqlash reaktsiyasini (FFR) o'rnatishda gemoliz reaktsiyasi indikator sifatida ishlatiladi: erkin komplement mavjudligi yoki yo'qligi (fiksatsiyasi) ni tekshirish uchun.

Jeldagi mahalliy gemoliz reaktsiyasi(Erne reaksiyasi) gemoliz reaksiyasining variantlaridan biridir. Bu sizga antikor hosil qiluvchi hujayralar sonini aniqlash imkonini beradi. Antikorlarni - gemolizinlarni chiqaradigan hujayralar soni eritrotsitlar, o'rganilayotgan va to'ldiruvchi limfoid to'qimalarning hujayralari suspenziyasi bo'lgan agar jelida paydo bo'ladigan gemoliz plitalari soni bilan belgilanadi.

Immunofluoresans usuli

(RIF, immunofloressensiya reaktsiyasi) - ftoroxrom bilan konjugatsiyalangan Abs (Ags) yordamida o'ziga xos Ags (Abs) ni aniqlash usuli. U yuqori sezuvchanlik va o'ziga xoslikka ega. Infektsiyalarning ekspress diagnostikasi uchun ishlatiladi. kasalliklar (tadqiqot materialida patogenni aniqlash), shuningdek, Ab va sirt retseptorlari va leykotsitlar markerlarini (immunofenotiplash) va boshqa hujayralarni aniqlash uchun. Toʻgʻridan-toʻgʻri I. m. patologik materialdan yoki ftorxrom bilan konjugatsiyalangan o'ziga xos Absni o'z ichiga olgan mikrobial qobiqdan to'qimalarning bir qismini yoki smearni qayta ishlashdan iborat; preparat bog'lanmagan qorin bo'shlig'idan ozod qilish uchun yuviladi va floresan mikroskop ostida tekshiriladi. Ijobiy holatlarda ob'ektning atrofida porlayotgan immun kompleksi paydo bo'ladi. Nonspesifik luminesansni istisno qilish uchun nazorat qilish kerak. Da bilvosita. Ular. birinchi bosqichda to'qima bo'lagi yoki smear lyuminestsent bo'lmagan o'ziga xos vosita bilan, ikkinchisida - birinchi bosqichda ishlatilgan hayvonning -globulinlariga qarshi lyuminestsent vosita bilan ishlov beriladi. Ijobiy holatda Ar, At unga va Atga qarshi At (sendvich usuli) dan iborat yorug'lik majmuasi hosil bo'ladi. Hujayralarni fenotiplashda lyuminestsent mikroskopdan tashqari RIF ham hisobga olinadi. lazerli hujayralarni saralovchi .

Oqim sitometriyasi- hujayra, uning organellalari va unda sodir bo'ladigan jarayonlar parametrlarini optik o'lchash usuli.

Texnika lazer nuridan yorug'likning tarqalishini hujayra suyuqlik oqimida o'tayotganda aniqlashni o'z ichiga oladi va yorug'lik dispersiyasi darajasi hujayraning o'lchami va tuzilishi haqida tasavvurga ega bo'lishga imkon beradi. Bundan tashqari, tahlil hujayraning bir qismi bo'lgan (avtofloresans) yoki oqim sitometriyasidan oldin namunaga qo'shilgan kimyoviy birikmalarning floresans darajasini hisobga oladi.

Flüoresan monoklonal antikorlar yoki floresan bo'yoqlar bilan oldindan etiketlangan hujayra suspenziyasi oqim xujayrasi orqali o'tadigan suyuqlik oqimiga kiradi. Shartlar shunday tanlanganki, hujayralar birin-ketin so'zda tutilgan. reaktivda jetning gidrodinamik fokuslanishi. Ayni paytda hujayra lazer nurini kesib o'tadi, detektorlar quyidagilarni qayd qiladi:

yorug'likning kichik burchaklarda tarqalishi (1 ° dan 10 ° gacha) ( bu xususiyat hujayra hajmini aniqlash uchun ishlatiladi).

yorug'likning 90 ° burchak ostida tarqalishi (yadro / sitoplazma nisbati, shuningdek, hujayralarning heterojenligi va granularligi haqida hukm qilish imkonini beradi).

bir nechta floresan kanallari orqali floresans intensivligi (2 dan 18-20 gacha) - hujayra suspenziyasining subpopulyatsiya tarkibini aniqlash imkonini beradi va hokazo.

Antiglobulin printsipi. Eritrositlar yuzasida joylashgan to'liq bo'lmagan turdagi eritrotsitlarga qarshi antikorlar va to'ldiruvchi molekulalar (C) aniqlanadi - to'g'ridan-to'g'ri test - inson antiglobuliniga (antiglobulin zardobi) antitellarni o'z ichiga olgan hayvonlar zardobi bilan aloqa qilishda ularning aglutinatsiyasi bilan. Qon zardobida bo'sh bo'lgan to'liq bo'lmagan antikorlar aniqlanadi - bilvosita test - ularni barcha antigenlari ma'lum Rh tizimiga tegishli bo'lgan 0 qizil qon hujayralari aralashmasiga biriktirib, keyin antiglobulin zardobi ta'sirida aglutinatsiyalanadi.

Kumbs antiglobulin testi uchun materiallar, reagentlar: probirkalar 10/100 ml; gradusli pipetkalar 1, 2 ml; Paster pipetkalari; tripodlar; tuproqsiz shisha slaydlar; 8,5 ‰ NaCl eritmasi; qizil qon hujayralari. Bemorning qizil qon tanachalari, shuningdek, 0-guruhga tegishli bo'lganlar, qon ivishiga qarshi vosita (EDTA eritmasi) yordamida yangi olingan qondan olinadi.

0-guruh qizil qon tanachalari shunday tanlanishi kerakki, ular oddiy odamlardan kelib chiqadi va barchasini o'z ichiga oladi Rh antijenlari. Ular + 4 ° C haroratda otologik plazmada 7 kungacha saqlanishi mumkin. 0-guruh qizil qon hujayralari bo'lmasa, ma'lum antijenik mozaika, 0-guruh qizil qon tanachalari, Rh-musbat va Rh-salbiy qizil qon hujayralari aralashmasidan foydalanish mumkin.

Sarum bemor yangi tanlangan bo'lishi kerak.

Antiglobulin sarum instituti tomonidan ishlab chiqarilgan. Doktor I. Cantacuzino, 1 ml ampulalarda liyofillangan shaklda mavjud. Eritgandan so'ng, sarumni -20 ° C da saqlang.

Coombs antiglobulin testi texnikasi:
A) To'g'ridan-to'g'ri Coombs testi: Bemorning qizil qon tanachalarini 3 marta 8,5 ‰ NaCl eritmasi bilan yuving.
Bir nechta shisha slaydlarga antiglobulin sarumining suyultirilishining katta tomchisini qo'llang va uning yonida bemorning eritrotsit cho'kmasining kichik tomchisi; tomchilarni stakanning burchagi bilan aralashtiring. Tayyorlangan materialni stolda 5 daqiqaga qoldiring, so'ngra aglutinatlar mavjudligini tekshiring. Natija ijobiy bo'lsa, maksimal aglutinatsiya titrini aniqlang.

b) Bilvosita Coombs testi: 0-guruh eritrotsitlari, Rh-musbat va Rh-manfiy, 3 marta 8,5‰ NaCl eritmasi bilan yuviladi va bemorning zardobiga 8-10 tomchi zardobga 2 tomchi eritrotsitlar miqdorida qo'llaniladi, so'ngra 60 daqiqa davomida inkubatsiya qilinadi. harorat 37° BILAN. Shundan so'ng, qizil qon hujayralarini yana uch marta yuving va to'g'ridan-to'g'ri Coombs testi bo'yicha ko'rsatmalarga muvofiq antiglobulin sarum bilan davolang.

Qachon keladi sovuq faol antikorlar haqida 60 daqiqa davomida 0-guruh qizil qon hujayralarini sezgirlash. + 4 ° C haroratda.

Eslatma 1) To'g'ridan-to'g'ri Kumbs testini bir yoki bir necha kun davomida + 4 ° C yoki xona haroratida saqlangan qizil qon tanachalarida o'tkazmang, chunki natijalar normal zardobda mavjud bo'lgan to'liq bo'lmagan sovuqqa faol antikorlarning fiksatsiyasi tufayli noto'g'ri ijobiy bo'lishi mumkin. 2) Jiddiy giperproteinemiya holatlarida qizil qon tanachalarini 4-5 marta yuving va sulfosalitsil kislotasi yordamida oxirgi yuvish suyuqligida sarum oqsillari yo'qligini tekshiring.

Eritrositlar cho'kindisida 2 mkg IgG/ml bo'lishi mumkin bo'lgan qoldiq antiglobulin sarumini neytrallash. Coombs testi, masalan, otoimmün gemolitik bilan og'rigan bemorlarda qizil qon tanachalari yuzasida joylashgan hujayralar turini aniqlash uchun monospesifik anti-IgG, -IgM, -IgA -C3 va -C4 sarumlari yordamida ham amalga oshirilishi mumkin. anemiya.

Coombs testi- sirtga biriktirilgan yoki plazmada erigan antikorlarni aniqlash uchun tahlil. U qizil qon hujayralariga immunizatsiya va antikorlarni aniqlash uchun ishlatiladi. Ikkinchi ism - antiglobulin testi. Bu to'g'ridan-to'g'ri yoki bilvosita bo'lishi mumkin.

Da to'g'ridan-to'g'ri antiglobulin testi qizil qon hujayralari yuzasida o'rnatilgan antikorlarni aniqlaydi. Agar boshqa otoimmün kasalliklarga shubha bo'lsa, dori-darmonlarni (metildopa, penitsillin, xinin) qabul qilgandan keyin amalga oshiriladi.

Qizil qon tanachalari in vivo jonli ravishda sensibilizatsiya qilingan - antikorlar allaqachon ularga mahkam bog'langan va antiglobulin zardobi (anti-IgG) qo'shilishi sensibilizatsiyalangan hujayralarning bir-biriga yopishib qolishiga olib keladi, bu oddiy ko'zga ko'rinadi.

Bilvosita Coombs testi qon plazmasida eritrotsitlarga qarshi antikorlarni aniqlaydi, u qon quyishdan oldin va davomida amalga oshiriladi.

Anti-eritrosit antikorlari otoantikorlarning bir turi, ya'ni. o'z to'qimalariga qarshi antikorlar. Patologik reaktivlik paytida otoantikor paydo bo'ladi immun tizimi ba'zi dorilar uchun, masalan, penitsillinning yuqori dozalari.

Qizil qon hujayralari yuzasida turli xil kimyoviy tuzilmalar (glikolipidlar, saxaridlar, glikoproteinlar va oqsillar) mavjud bo'lib, ular tibbiyotda antigenlar deb ataladi. Biror kishi ota-onasidan har bir qizil qon hujayralarida antijenlarning ma'lum bir xaritasini meros qilib oladi.

Antijenler guruhlarga birlashtiriladi va keyin qon bir necha guruhlarga bo'linadi - AB0, Rh, Kell, Lyuis, Kidd, Duffy tizimiga ko'ra. Shifokor ishidagi eng mashhur va ahamiyatli AB0 va Rh omil (Rh).

AB0 tizimi

Insonning Rh holati bu antijenlarning mavjudligi bilan belgilanadi. Eritrotsitlarning ayniqsa muhim antijeni antigen D. Agar u mavjud bo'lsa, unda ular haqida gapirishadi Rh-musbat qon RhD, va agar u erda bo'lmasa - oh Rh salbiy Rhd.

Agar tegishli antikor eritrotsitlar antijenlariga yopishsa, eritrotsitlar yo'q qilinadi - gemoliz.

Ko'rsatkichlar

uchun asosiy ko'rsatkich bevositaantiglobulin testi- gemolitik anemiyaga shubha. Ko'pincha u birlamchi autoimmun gemolitik anemiya, revmatik gemoliz, o'sma, yuqumli kasalliklar, dori ta'sirida gemoliz.

Agar anemiya qon quyishdan keyin bir necha kun yoki oy o'tgach yoki yangi tug'ilgan chaqaloqda uzoq muddatli sariqlik bilan paydo bo'lsa, to'g'ridan-to'g'ri Coombs testi ham o'tkaziladi.

Bilvositaantiglobulin testi o'tkaziladi qon quyishdan oldin va Rh-salbiy ayolning homiladorligi paytida.

Otoimmün gemolitik anemiya

Otoimmün gemolitik anemiya (birlamchi)- noma'lum sabablarga ega klassik otoimmün kasallik. Immunitet tizimidagi o'zaro ta'sir buziladi, bu o'z qizil qon hujayralarini begona deb qabul qilishga olib keladi. Limfa tugunlarida IgG sinfidagi (t 37 ° C da reaksiyaga kirishadi) va / yoki IgM (t 40 ° C da) antikorlari sintezlanadi, ular eritrotsitlar yuzasiga biriktirilganda, bir qator fermentlarni qo'zg'atadi. komplement tizimi) va eritrotsitlar devorini "teshadi", bu uning yo'q qilinishiga olib keladi - gemoliz.

Birinchi alomatlar qizil qon hujayralarining yo'q qilinishi va gemoglobinning pasayishi tufayli yuzaga keladi. Ular orasida:

• charchoq, umumiy zaiflik, asabiylashish
• nafas qisilishi
• qorin va ko'krak og'rig'i, ko'ngil aynishi
• quyuq siydik rangi
• orqa og'riq
• teri va shilliq pardalarning ikterik rangi o'zgarishi
• qizil qon hujayralari sonining kamayishi va

Ijobiy natija Streyt Coombs testlari 100% otoimmun gemolitik anemiya tashxisini tasdiqlaydi, uning otoimmun kelib chiqishini isbotlaydi. Shu bilan birga, salbiy natija tashxisni olib tashlashga imkon bermaydi.

Ikkilamchi gemolitik anemiya

Ikkilamchi otoimmun gemolitik anemiya va ijobiy Kumbs testi quyidagi kasalliklarda paydo bo'lishi mumkin:

• Evans sindromi
• pnevmoniya infektsiyasi

Ushbu kasalliklar uchun ijobiy antiglobulin testi diagnostika mezoni emas, balki alomatlardan biridir.

Yangi tug'ilgan chaqaloqning gemolitik kasalligi

Sabab gemolitik kasallik yangi tug'ilgan chaqaloqlar - ona va homilaning qon guruhining mos kelmasligi, ko'p hollarda Rh tizimiga ko'ra, bitta holatlarda - AB0 tizimiga ko'ra, kazuistik - boshqa antijenlarga ko'ra.

Agar Rh-salbiy ayolning homilasi otadan Rh-musbat qonni meros qilib olsa, Rh-mojaro rivojlanadi.

Yangi tug'ilgan chaqaloqda kasallik faqat onada tegishli antijenlarga antikorlar ishlab chiqilgan bo'lsa, bu avvalgi homiladorlik, abortlar va mos kelmaydigan qon quyishdan keyin sodir bo'ladi. Ko'pchilik umumiy sabab eritrotsitlar membranasining antijenlariga antikorlarning sintezini qo'zg'atish - tug'ilish (feto-ona qon ketishi). Birinchi tug'ilish odatda asoratlarsiz sodir bo'ladi, ammo keyingi tug'ilish tug'ilgandan keyingi birinchi kunlarda yangi tug'ilgan chaqaloqning gemolitik kasalligi bilan to'la.

Yangi tug'ilgan chaqaloqning gemolitik kasalligining belgilari:

• terining sarg'ayishi
• , va shilliq pardalar
• kattalashgan jigar va taloq
• nafas olish muammolari
• butun tananing shishishi
• markaziy qo'zg'alish va asta-sekin tushkunlik asab tizimi

Qon quyishdan keyin anemiya

Bilvosita Coombs testi muvofiqlikni baholash uchun qon quyishdan oldin amalga oshiriladi va to'g'ridan-to'g'ri Kumbs testi - undan keyin, agar transfüzyondan keyingi gemolizga shubha bo'lsa, ya'ni. isitma, sug'orish kabi alomatlar mavjudligida (quyida o'qing). Tahlilning maqsadi retsipientning qizil qon tanachalari bilan bog'langan va transfüzyondan keyingi gemolizning sababi bo'lgan transfüzyon qilingan qizil qon tanachalariga antikorlarni aniqlash, shuningdek donor qizil qon hujayralarini qon aylanishidan muddatidan oldin olib tashlashdir. qabul qiluvchi (qon olgan).

Alomatlar:

• tana haroratining oshishi
• teri toshmasi
• orqa og'riq
• qizil
• ko'ngil aynishi
• bosh aylanishi

Dekodlash

Shuni esda tutish kerakki, to'g'ridan-to'g'ri va bilvosita antiglobulin testlarini ochishning asosiy qoidalari bir xil. Faqatgina farq antikorlarning joylashishi - qonda yoki qizil qon hujayralarida.

• Agar To'g'ridan-to'g'ri Coombs testi salbiy- bu antikor qizil qon tanachalarida "o'tirmaydi" degan ma'noni anglatadi va simptomlarning sababini qo'shimcha izlash va amalga oshirish kerak. bilvosita namuna Kumbs
• Agar qon quyish, infektsiyalar, dori-darmonlarni qabul qilishdan keyin Kumbs testining ijobiy natijasi aniqlansa - pozitivlik 3 oygacha davom etadi (qizil qon hujayralarining umri 120 kun - 3 oy).
• bilan antiglobulin testining ijobiy natijasi otoimmün kasallik oylar va hatto yillar davom etadi

Norm

• to'g'ridan-to'g'ri Coombs testi - salbiy
• bilvosita Coombs testi - salbiy

Sifatli ijobiy natija birdan to'rtgacha bo'lgan plyuslar sonida (+, ++, +++, ++++) va miqdoriy jihatdan raqamli shaklda - 1:16, 1:256 va boshqalar bilan o'lchanadi.

Ha. Sizning shifokoringiz qon quyganligingizni aniq bilishi kerak, chunki bu test natijalarini to'g'ri talqin qilishga ta'sir qiladi. Birovning qonini (ko'p marta tekshirilgan bo'lsa ham) qabul qilganda, sizning tanangiz quyiladigan qonga qarshi antikorlarni ishlab chiqish ehtimoli doimo mavjud. Aynan shu antikorlar salomatlikka salbiy ta'sir qiladi. Keyingi qon quyish uchun shifokor siz allaqachon qon quyganingizni bilishi kerak, ya'ni antikorlarning sintezi uchun vaqt bor. Homilador ayollar uchun bu ma'lumot yanada dolzarbroqdir.

3. Agar ona va bola o'rtasida Rh omilida nomuvofiqlik bo'lsa, barcha bolalar kasal bo'ladimi?

Bolaning Rh musbat yoki salbiy (RhD) ekanligiga bog'liq. I, II, III va IV qon guruhlari tashuvchilari Rh ijobiy yoki salbiy bo'lishi mumkin. Agar onaning rezussi salbiy bo'lsa va bolada Rh musbat bo'lsa, antikorlar birinchi homiladorlik bilan allaqachon ishlab chiqariladi, lekin faqat birinchi tug'ilishdan keyin (yoki homiladorlik tugaganidan keyin) onaning qoni bilan to'g'ridan-to'g'ri aloqa bo'ladi. bola. Antikorlarning gemolitik ta'siri faqat ikkinchi va davomida amalga oshiriladi keyingi tug'ilish, bu yangi tug'ilgan chaqaloqda gemolitik kasallikka olib keladi.

Salbiy Rh faktori bo'lgan har bir ayol homiladorlik paytida va tug'ilgandan keyin diqqat bilan tekshirilishi kerak profilaktik davolash antikorlarning ko'rinishini va keyingi asoratlarni oldini olish.

4. Homiladorlik davrida Coombs testini o'tkazishdan oldin erimning qon guruhini bilish kerakmi?

Siz nafaqat bilishingiz kerak, balki homiladorlik paytida bolaning biologik otasining qon guruhini ham tekshirishingiz kerak.

Ma'lumotlar

• birinchi marta 1945 yilda Kembrijda taklif qilingan
• sezuvchanlik chegarasi - bitta eritrotsitda kamida 300 ta antikor molekulasi
• gemolizni qo'zg'atuvchi antikorlar soni - har bir kishi uchun alohida (16-30 dan 300 gacha)
• gemolitik anemiyaning boshqa laboratoriya ko'rsatkichlarining dinamikasi (gemoglobin, bilirubin, retikulotsitlar) normallashishi mumkin va Kumbs testi bir xil darajada qoladi.

Coombs testi oxirgi marta o'zgartirilgan: 2018 yil 16 mart Mariya Bodyan

Kumbs reaktsiyasi - samarali usul inson qonida eritrotsitlar antijeni va anti-eritrotsit antikorlarini aniqlash bilvosita reaktsiya aglutinatsiya. Sinovning asosi eritrotsitlar antijenlarini terish uchun G sinfidagi immunoglobulinlar (IgG) asosidagi o'ziga xos monoklonal reagentlardan foydalanish, keyin esa ikkinchi bosqichda Coombs antiglobulin sarumini (AGS) qo'llashdir.

AGS inson immunoglobulinlari G va monoklonal antikorlar bilan immunizatsiya qilingan laboratoriya hayvonlarining qonidan zardobni inson zardobining C3D to'ldiruvchisi bo'lgan tarkibiy qismlardan biriga aralashtirish orqali ishlab chiqariladi. AGS maxsus antikorlar bilan sezgir bo'lgan qizil qon hujayralarining aglutinatsiyasiga olib keladi. AGS ta'sirida qizil qon hujayralarida antikorlar yo'qligida ijobiy reaktsiya sodir bo'lmayapti.

Bilvosita Kumbs reaktsiyasi quyidagilarning mavjudligini aniqlashga imkon beradi:

• IgG reagentlari tomonidan aniqlangan eritrotsitlar antijenleri ("to'liq bo'lmagan" antikorlar, masalan, monoklonal reagentlar anti-D, anti-F Y a, anti-F Y b);
• IgG sinfining eritrotsitlarga qarshi antikorlari.

Bilvosita antiglobulin testi: qizil qon hujayralari antijenlarini aniqlash

Anti-D IgG koliklon misolida bilvosita Kumbs reaksiyasi usulini taqdim etamiz.

1. Toza probirkaga belgi qo'ying: tekshirilayotgan shaxsning ismini ko'rsating.
2. Probirkaga 2 tomchi (taxminan 0,1 ml) anti-D IgG zoliklon qo'shing.
3. Oldindan fiziologik eritma bilan yuvilgan tahlil qilingan eritrotsitlarning 5% suspenziyasidan 2 tomchi qo'shing. Sinov namunalarini zoliklon bilan aralashtiring.
4. Aralashmani suv hammomida yoki termostatda 37 ° C da 30 daqiqa davomida inkubatsiya qiling.
5. Probirkaga Paster pipetkasi yordamida 5 - 10 ml fiziologik eritma soling.
6. Naychani 1200 g markazdan qochma tezlashuv bilan 18-25°C da bir daqiqaga santrifüj qiling.
7. Tuzli eritmani olib tashlang.
8. Yana 2-3 marta santrifüj yordamida qizil qon hujayralarini yuvish tartibini takrorlang.
9. Qon hujayralari cho'kindisiga 2 tomchi antiglobulin sarum qo'shing va aralashtiring.
10. Naychani 18 - 25 ° S haroratda bir daqiqa davomida 1200 g markazdan qochiruvchi tezlashtirish bilan santrifüj qiling.
11. Dispenser yoki Paster pipetkasidan foydalanib, 3-5 tomchi fiziologik eritma qo'shing.
12. Cho'kmani qayta to'xtating va aglutinatsiyani vizual tarzda baholang. Fonda probirkaning pastki qismida aniq aglyutinatlar aniq yechim eritrotsitlar antijenini aniqlashni ko'rsatadi. Qon hujayralarining shaffof bo'lmagan suspenziyasi antigen yo'qligini ko'rsatadi.

Kumbs testi: izoimmunga qarshi eritrotsitlar antikorlarini skrining qilish

Tadqiqot donor va qabul qiluvchining barcha qizil qon hujayralari antijenlari uchun individual muvofiqlik testining bir qismi sifatida amalga oshiriladi. haqida xulosa to'liq muvofiqlik donor eritrotsitlari bo'lgan qabul qiluvchi sarumlar tahlilning barcha bosqichlarida gemoliz va / yoki aglutinatsiyaning yo'qligi asosida ishlab chiqariladi. Sinovning har qanday bosqichida gemoliz va/yoki aglutinatsiya belgilari qon namunalarining mos kelmasligini ko'rsatadi.

AB0 tizimi yordamida muvofiqlikni baholash, "sovuq" antikorlarni aniqlash

1. Donor qon namunasini tayyorlang:
   • avtomatik dispenser yordamida probirkaga 0,2 ml qon qo'shing;
   • Qizil qon hujayralarini 5,0 ml sho'r suvda 3 marta yuving;
   • Pelletni 3 dan 4 ml gacha past ionli kuchli LISS eritmasiga soling.
2. Ikkinchi toza naychani belgilang: qabul qiluvchining ismini va donorning ismini ko'rsating.
3. Avtomatik dispenserdan foydalanib, 0,1 ml qabul qiluvchining sarumini etiketli naychaga soling.
4. LISS eritmasiga 2 tomchi 5% li qizil qon tanachalari suspenziyasini qo'shing.
5. Aralashmani 1200 g markazdan qochma tezlashuv bilan 18 - 25 ° C haroratda 15 - 20 soniya davomida darhol santrifüj qiling.
6. Probirkani muloyimlik bilan silkitib, cho'kindini pastdan ajrating. Agglyutinatlar mavjudligini baholang. Gemoliz va/yoki aglutinatlar mavjudligi quyidagilarni anglatadi:
   • AB0 tizimiga muvofiq nomuvofiqlik;
   • bemorning sarumida "sovuq" antikorlarning mavjudligi IgM klassi yoki AB0 antijenlariga xos bo'lmagan IgA.

"Issiq" antikorlarni aniqlash

1. Agar gemoliz va/yoki aglutinatlar bo'lmasa, trubkani 37 °C da 10-15 daqiqa davomida inkubatsiya qiling.
2. Naychani xona haroratida 1200 g 15-20 soniya davomida santrifüj qiling.
3. Naychani silkitib, supernatantda gemoliz va/yoki aglyutinatlar mavjudligini tekshiring. Ijobiy natija bemorning zardobida donor eritrotsitlar antijenlariga qarshi "iliq" IgM antikorlarini aniqlashni ko'rsatadi.

Coombs testida IgG antikorlarini aniqlash

1. Agar tadqiqotning oldingi bosqichida natija manfiy bo‘lsa, Paster pipetkasi yordamida probirkaga 5 ml 0,9% li NaCl eritmasidan qo‘shing.
2. Naychani 1200 g da 15 - 20 soniya davomida 18 - 25 ° C havo haroratida santrifüj qiling. Supernatantni ehtiyotkorlik bilan tashlash uchun Paster pipetkasidan foydalaning.
3. Qizil qon hujayralarini yuvishni yana 2-3 marta takrorlang.
4. Probirkaga 1 - 2 tomchi antiglobulin zardobi qo'shing. To'liq aralashtirishni amalga oshiring.
5. Naychani 1200 g da 15-20 soniya davomida santrifüj qiling.
6. Ehtiyotkorlik bilan qizil qon tanachalari cho'kmasini parchalab tashlang va reaktsiya natijasini ingl. Agglyutinatsiyani aniqlash bemorning qon zardobida donorning eritrotsit antijenlariga qarshi IgG antikorlarining mavjudligini anglatadi.

To'g'ridan-to'g'ri Coombs testi. Ushbu test bolaning qizil qon hujayralarida o'rnatilgan blokirovka qiluvchi antikorlarning mavjudligini isbotlash uchun ishlatiladi. To'g'ridan-to'g'ri ijobiy test sensibilizatsiyani ko'rsatadi va boshqa tug'ilgan chaqaloqlar paydo bo'lishidan oldin ham gemolitik kasallikning ishonchli belgisi bo'lib xizmat qiladi. klinik belgilar. Istisno sifatida va faqat o'ta og'ir holatlarda, sezgir qizil qon hujayralarining allaqachon sodir bo'lgan, deyarli to'liq gemolizi tufayli bevosita Kumbs testi salbiy bo'lishi mumkin.

To'g'ridan-to'g'ri Coombs testi quyidagicha amalga oshiriladi: bolaning tovonidan olingan 5 tomchi qon probirkaga solinadi va 5 ml sho'r suv qo'shiladi. Yaxshilab aralashtiramiz va 10 daqiqa davomida santrifüj qiling. Qizil qon hujayralari cho'kmasi ustidagi shaffof suyuqlik ajratiladi. Keyin yana 5 ml fiziologik eritma qo'shing, aralashtiriladi va sentrifuga qilinadi. Uch marta sho'r suv bilan aralashtirilgandan so'ng, qizil qon tanachalari yaxshi yuviladi. Supernatant oxirgi ajratilgandan so'ng, 0,1 ml miqdoridagi eritrotsitlar cho'kmasi 0,9 ml fiziologik eritma bilan aralashtiriladi. Ushbu aralashmaning 2-3 tomchisini shisha slaydga qo'llang va bir tomchi Coombs sarum qo'shing. Agglyutinatsiyaning mavjudligi reaktsiyaning ijobiy ekanligini ko'rsatadi (musbat to'g'ridan-to'g'ri Kumbs testi). Sovuq aglutininlarning ta'sirini oldini olish uchun o'rganish 16 ° dan yuqori xona haroratida o'tkazilishi kerak.

Bilvosita Coombs testi ona zardobida erkin antikorlar mavjudligini tasdiqlovchi dalil bo'lib xizmat qiladi va ona zardobi bilan amalga oshiriladi.

Rh nomuvofiqligi bilan yangi tug'ilgan chaqaloqdagi gemolitik kasallik odatda ikkinchi homiladorlikdan keyin o'zini namoyon qiladi. Birinchi bola sog'lom, ikkinchisi engil kamqonlik belgilari bilan tug'iladi va faqat uchinchi homiladorlikdan keyin bolalar tug'iladi. aniq belgilar gemolitik kasallik. Birinchi homiladorlik davrida gemolitik kasallik belgilari bo'lgan bolani faqat oldindan sezgir bo'lgan ayollar tug'ishi mumkin. Ba'zi hollarda emlash abort va tug'ilishga olib keladi o'lik bolalar. Kasallikning boshlanishi va og'irligi uchun platsentaning holati va onaning aglutininlarining homilaga ta'sir qilish muddati muhim ahamiyatga ega. Agglyutininlar tug'ilishdan 10-14 hafta oldin paydo bo'lganda, bola odatda subklinik shakllarni boshdan kechiradi. Agglyutininlarning erta paydo bo'lishi, tug'ilishdan 15-26 hafta oldin sabab bo'ladi og'ir shakllar kasalliklar. Kasallikning barcha shakllarida asosiy jarayon gemoliz hisoblanadi. Antigen-antikor reaktsiyasining natijasi gemoliz, jigar va miya kapillyarlarining shikastlanishi. Qaysi lezyon ustunlik qilishiga qarab, ular ham bor turli shakllar kasalliklar. Ba'zi anafilaktik hodisalar ham xavflidir. Ular gistaminga o'xshash moddalarning paydo bo'lishiga olib keladi, jigar hujayralariga va ayniqsa, bazal ganglionlarning ganglion hujayralariga, ammon shoxiga, medulla oblongatalariga va hatto miya yarim korteksiga jiddiy zarar etkazadi. Jigar hujayralari zararlanganda, jigar sariqligi ekstrahepatik sariqlikka qo'shiladi. Bolalar kernikterusning og'ir belgilari tufayli o'lishadi. Agar ular omon qolsa, asab tizimining shikastlanish belgilari saqlanib qoladi (xoreoatetotik harakatlar bilan ekstrapiramidal tizimning buzilishi, o'ziga xos raqs yurishi, boshning majburiy harakatlari, ba'zida muvofiqlashtirish buzilishi). ixtiyoriy harakatlar tez-tez tushish bilan, ohangni oshirdi mushaklar, aqliy zaiflik, ya'ni deb atalmish belgilar bilan. ensefalopatiya posticteria infantum).