Reacción diagnóstica de aglutinación. Reacción de aglutinación

La reacción de aglutinación se basa en la interacción específica de anticuerpos (aglutininas) con células microbianas enteras u otras células. Como resultado de esta interacción, se forman partículas de aglomerado que precipitan (aglutinan). En la reacción de aglutinación pueden participar bacterias, protozoos, hongos, levaduras, rickettsias, eritrocitos y otras células, tanto vivas como muertas. La reacción se produce en dos fases: la primera es una combinación específica de antígeno y anticuerpo, la segunda es inespecífica, es decir, la formación de un aglutinado visible. La precipitación del aglutinado se produce en presencia de electrolitos, como el cloruro de sodio. Los microorganismos del aglutinado permanecen vivos, pero pierden su movilidad.

La reacción de aglutinación se utiliza ampliamente para el diagnóstico serológico de enfermedades infecciosas y la determinación de la estructura antigénica de microbios aislados. Para determinar la estructura antigénica de un patógeno aislado del cuerpo de un paciente o portador, se utiliza suero inmunológico específico, obtenido inmunizando animales (conejo, burro, oveja) con ciertos microorganismos. La identificación del microbio se realiza mediante reacción de aglutinación sobre vidrio con sueros adsorbidos o monorreceptores o en tubos de ensayo con sueros aglutinantes específicos. Los sueros adsorbidos contienen anticuerpos solo contra antígenos específicos de un microbio determinado, y los sueros monorreceptores contienen anticuerpos solo contra un antígeno específico del patógeno.

Los sueros de especies contienen anticuerpos contra todos los antígenos de un microbio en particular.

Si el cultivo de microorganismos aislado pertenece a esta especie determinado por aglutinación con un suero conocido al título de anticuerpos indicado en la etiqueta de la ampolla de suero. Se considera que el título de anticuerpos de un suero es su última dilución, en la que todavía se observa aglutinación del cultivo de microbios utilizados para inmunizar al animal. Los sueros adsorbidos y monorreceptores se suelen utilizar sin diluir en la reacción de aglutinación vítrea.

Para determinar la presencia de anticuerpos en el suero sanguíneo del paciente, se diluye con una solución isotónica de cloruro de sodio a partir de una dilución de 1: 50 a 1: 800 o más. A cada dilución se añade una suspensión de microbios vivos o muertos. Los preparados que contienen microbios destruidos por el calor o el formaldehído se denominan diagnosticums. Los diagnósticos obtenidos calentando cultivos de microorganismos contienen solo antígenos somáticos. Cuando se utiliza únicamente formaldehído, los microbios conservan sus antígenos flagelares.

En presencia de anticuerpos en la sangre del paciente, el diagnóstico tomado en la reacción se pega y se forma un sedimento (aglutinado) en dos tubos de ensayo. En este caso, los resultados de la reacción de aglutinación se consideran positivos. En el tubo de control, en el que se añaden la solución isotónica de cloruro de sodio y el diagnóstico, la suspensión de microbios debe ser homogénea (reacción de aglutinación negativa).

Los resultados de la reacción de aglutinación en algunas enfermedades, como la leptospirosis, se tienen en cuenta únicamente microscópicamente en el campo de visión oscuro de un microscopio (microaglutinación). Para realizar un diagnóstico serológico de una enfermedad hay que tener en cuenta enfermedad diagnóstica. Normalmente corresponde a una dilución de suero de 1:100 o 1:200.

Los anticuerpos en el suero sanguíneo del paciente se pueden detectar mediante la reacción de aglutinación en casos de fiebre tifoidea y paratifoidea (reacción de Vidal), brucelosis (reacción de Wright), tularemia, etc.
La reacción de Castellani. Para algunos enfermedades infecciosas o inmunización con microorganismos que contienen antígenos de grupo, en el suero sanguíneo, además de los anticuerpos específicos de un tipo determinado, también aparecen anticuerpos de grupo. En este caso, los sueros resultantes aglutinarán especies bacterianas relacionadas.

Castellani propuso un método para la adsorción de anticuerpos grupales a partir de sueros inmunes, basado en su eliminación con la ayuda de microorganismos de especies relacionadas que tienen antígenos grupales pero carecen de específicos. Un cultivo de tales microorganismos agregado al suero adsorbe anticuerpos de grupos no específicos y, después de que el complejo antígeno-anticuerpo se elimina mediante centrifugación, solo quedan inmunoglobulinas específicas en el suero. Los sueros procesados ​​según el método Castellani pueden utilizarse en la reacción de aglutinación por ser altamente específicos.

La aglutinación es el pegado de bacterias como resultado de la interacción de AT específicos con ellas. Para realizar la AR se requieren tres componentes: 1) AG (aglutinógeno); 2) AT (aglutinina); 3) solución de electrolitos (solución isotónica de cloruro de sodio). En la reacción de aglutinación sólo participan antígenos corpusculares (bacterias, glóbulos rojos, partículas de látex cargadas de antígenos).

Reacción de aglutinación sobre vidrio. Coloque una gota en un portaobjetos de vidrio sin grasa con una pipeta. suero de diagnostico(dilución de suero 1:10 - 1:20). Utilizando un asa bacteriológica, se toma un cultivo puro del microorganismo en estudio de la superficie del agar inclinado, se transfiere a una gota de suero y se mezcla. El resultado de la reacción se tiene en cuenta a simple vista después de 3-5 minutos. Si la reacción es positiva, se observa la aparición de escamas (grandes o pequeñas) en una gota de suero, claramente visibles sobre un fondo oscuro cuando se agita el portaobjetos. En caso de reacción negativa, el líquido permanece uniformemente turbio.

Reacción de aglutinación en tubos de ensayo. Se añade 1 ml de solución fisiológica a una fila de tubos de ensayo. Se añade un volumen igual del suero sanguíneo que se está analizando al primer tubo de ensayo. Se preparan diluciones seriadas de suero al doble (titulación de suero), después de lo cual se añaden a cada tubo de ensayo 2 gotas de una suspensión de bacterias inactivadas (diagnosticum). Los tubos se colocan en un termostato a 37 °C durante 2 horas. La reacción procede con la formación de pequeñas escamas, invisibles a simple vista, por lo que los resultados se registran con un ligero aumento en un dispositivo especial: un aglutinoscopio. La intensidad de la aglutinación se tiene en cuenta según el sistema "cuatro más": aglutinación completa - 4+, aglutinación parcial - 3+ o 2+, resultado cuestionable - +. La última dilución en la que se observa aglutinación de 2+ se toma como título de anticuerpos en el suero problema.

Se lleva a cabo una reacción de aglutinación en tubos de ensayo (una reacción de aglutinación extensa) para determinar el título de anticuerpos contra los agentes causantes de la fiebre tifoidea y paratifoidea (reacción de Vidal), la brucelosis (reacción de Wright) y el tifus (reacción de Weigl).

Aglutinación (del latín agglutinatio - pegado): pegado (combinación) de partículas corpusculares portadoras de antígenos (células enteras, partículas de látex, etc.) con moléculas de anticuerpos específicos en presencia de electrolitos, lo que termina en la formación de escamas o sedimentos ( aglutinados) visibles a simple vista. La naturaleza del sedimento depende de la naturaleza del antígeno: las bacterias flageladas producen un sedimento floculento grueso, las bacterias flageladas y no capsulares producen un sedimento de grano fino y las bacterias capsulares producen un sedimento fibroso. Se distingue entre aglutinación directa, en la que los propios antígenos de una célula bacteriana o de cualquier otra célula, como los eritrocitos, participan directamente en la interacción con anticuerpos específicos; e indirecto, o pasivo, en el que las células bacterianas, los eritrocitos o las partículas de látex no son portadores propios, sino de antígenos (o anticuerpos) extraños absorbidos en ellos para identificar anticuerpos (o antígenos) específicos de ellos. En la reacción de aglutinación participan principalmente anticuerpos que pertenecen a las clases IgG e IgM. Ocurre en dos fases: en la primera, se produce una interacción específica del centro activo de los anticuerpos con el determinante del antígeno; esta etapa puede ocurrir en ausencia de electrolitos y no va acompañada; cambios visibles sistema reactivo. Para la segunda etapa, la formación de aglutinado, es necesaria la presencia de electrolitos, que reducen carga eléctrica complejos antígeno + anticuerpo y acelerar el proceso de su pegado. Esta fase finaliza con la formación de un aglutinado.

Las reacciones de aglutinación se realizan sobre placas de vidrio o cartón liso, o en tubos de aglutinación estériles. Las reacciones de aglutinación (directa y pasiva) sobre vidrio se suelen utilizar como método acelerado detección de anticuerpos específicos en el suero del paciente (por ejemplo, con brucelosis) o para la identificación serológica del patógeno. En este último caso, generalmente se utilizan sueros de diagnóstico bien purificados (adsorbidos), que contienen solo anticuerpos monorreceptores o un conjunto de ellos contra varios antígenos. La indudable ventaja de la reacción de aglutinación sobre vidrio es la sencillez de su realización y el hecho de que tarda varios minutos o incluso segundos, ya que ambos componentes se utilizan en forma concentrada. Sin embargo, sólo tiene un valor cualitativo y es menos sensible que un tubo de ensayo. Una reacción de aglutinación extensa en tubos de ensayo proporciona resultados más precisos, ya que permite determinar el contenido cuantitativo de anticuerpos en el suero (establecer su título) y, si es necesario, registrar el hecho de un aumento en el título de anticuerpos, que tiene valor diagnóstico. . Para preparar la reacción, se añade un suero diluido de cierta manera con una solución de NaCl al 0,85% y un volumen igual (generalmente 0,5 ml) de una suspensión de un diagnóstico estándar (o cultivo de prueba) que contiene mil millones de bacterias en 1 ml. tubos de aglutinación. Los resultados de la reacción de aglutinación se registran primero después de 2 horas de incubación de los tubos a 37 °C y finalmente después de 20-24 horas según dos criterios: la presencia y el tamaño del precipitado y el grado de transparencia del líquido sobrenadante. La evaluación se realiza según el sistema de cuatro cruces. La reacción va necesariamente acompañada de control sérico y antigénico. En los casos en que se realiza una reacción de aglutinación detallada en un tubo de ensayo para la identificación serológica del patógeno, tiene valor diagnóstico si la reacción se evalúa como positiva cuando el suero de diagnóstico se diluye al menos a la mitad de su título.

Debe tenerse en cuenta que al mezclar soluciones de antígenos y anticuerpos homólogos, no siempre se observan manifestaciones visibles de la reacción de aglutinación. Sólo se forma un precipitado con ciertas proporciones óptimas de ambos componentes de la reacción. Fuera de estos límites, con un exceso significativo de antígeno o anticuerpos, no se observa ninguna reacción. Este fenómeno se denomina “fenómeno prozona”. Se observa tanto en la reacción de aglutinación como en la reacción de precipitación. La aparición de prozona en las reacciones inmunes se explica por el hecho de que los antígenos involucrados en ellas, por regla general, son polideterminantes y las moléculas Anticuerpos IgG Tener dos centros activos. En caso de exceso de anticuerpos, la superficie de cada partícula de antígeno se cubre con moléculas de anticuerpo, de modo que no quedan grupos determinantes libres, por lo que el segundo centro activo libre de los anticuerpos no puede interactuar con otra partícula de antígeno y unirlas entre sí. La formación de un aglutinado o precipitado visible también se suprime cuando hay un exceso de antígeno, cuando no queda ni un solo centro activo libre de los anticuerpos y, por lo tanto, los complejos antígeno + anticuerpo + antígeno ya no pueden aumentar de tamaño.

Opciones para reacciones de aglutinación acelerada. Reacción hemaglutinación pasiva y sus variantes

La reacción de aglutinación clásica implica el uso de antígenos corpusculares. Sin embargo, también pueden estar implicados antígenos solubles. Para que esto sea posible, dichos antígenos se adsorben en partículas inmunológicamente inertes. Se pueden utilizar partículas de látex o bentonita como portador, pero actualmente se utilizan con mayor frecuencia eritrocitos animales o humanos, mejorando sus propiedades adsorbentes tratándolos con soluciones de tanino, formalina o bencidina. Los glóbulos rojos que han absorbido un antígeno sobre sí mismos se denominan sensibilizados por este antígeno y reacción inmune en la que participan es una reacción de hemaglutinación indirecta o pasiva (IRHA, o RPHA), ya que en ella participan los glóbulos rojos de forma pasiva.

RPGA se coloca en placas especiales de poliestireno con orificios que tienen un fondo semiesférico. Al usarlo para diagnóstico serológico En estos pocillos, se preparan diluciones dobles del suero problema en una solución fisiológica y luego se le agrega una suspensión de eritrocitos sensibilizados como agente de diagnóstico. Los resultados se registran después de 2 horas de incubación a 37 °C utilizando el sistema de cuatro cruces. Con una reacción positiva, los glóbulos rojos aglutinados se depositan en el fondo del agujero y lo cubren uniformemente en forma de paraguas invertido. En reacción negativa Los glóbulos rojos también se depositan, el líquido se vuelve transparente y el sedimento parece un pequeño "disco" en el centro del agujero. El título sérico de RPHA se considera su última dilución, lo que aún produce una hemaglutinación pronunciada sin signos significativos de la presencia de un "disco".

RPGA también se puede utilizar como método acelerado de diagnóstico bacteriológico para detectar directamente en el material de prueba bacterias, virus, toxinas desconocidas, por ejemplo, patógenos de la peste, enterotoxinas estafilocócicas, etc. Con esta versión de RPGA, los eritrocitos adsorbidos conocidos por su La especificidad se utiliza como componente conocido de los anticuerpos de reacción: anticuerpo de diagnóstico de eritrocitos. Si el material de prueba contiene una cantidad suficiente de un antígeno conocido, RPGA será positivo.

Las opciones para usar RPHA son: reacción de neutralización de antígenos (ARNg), reacción de neutralización de anticuerpos (ARNb), reacción de inhibición pasiva de la hemaglutinación (PHA). Para estas reacciones se utilizan diagnósticos de eritrocitos con antígenos y anticuerpos. Se pueden usar simultáneamente dos reacciones unidireccionales que se controlan mutuamente, por ejemplo, RPHA con un diagnóstico de antígeno y RNAg con un diagnóstico de eritrocitos de anticuerpo.

La reacción de neutralización de anticuerpos (ARNb) consiste en mezclar una suspensión que contiene el antígeno deseado con un suero inmune específico que contiene anticuerpos conocidos en volúmenes adecuados e incubar a 37 °C durante dos horas. Después de esto, se agrega un diagnóstico de eritrocitos antigénicos. La mezcla se agita y se deja a temperatura ambiente. Los resultados se tienen en cuenta después de 3-4 horas y finalmente después de 18-24 horas. Si el material de prueba contiene antígeno, se unirá a los anticuerpos (los neutralizará) y, por lo tanto, no se producirá hemaglutinación.

La reacción de neutralización del antígeno (ARNg) se realiza siguiendo el mismo principio. Sólo en este caso se detectan anticuerpos en el material de prueba. Un antígeno específico agregado a dicho material de prueba se unirá a los anticuerpos que contiene, es decir, se producirá la neutralización del antígeno por los anticuerpos y, por lo tanto, no se producirá hemaglutinación al agregar un anticuerpo de diagnóstico de eritrocitos.

Reacción de coaglutinación. Es una de las opciones para una reacción de aglutinación pasiva, es decir, acelerada, sobre vidrio, mediada por células portadoras de anticuerpos. Esta reacción se basa en una propiedad única. Estafilococo aureus, que contiene proteína A en su pared celular, se une a los fragmentos Fc de IgG e IgM. En este caso, los centros activos de anticuerpos permanecen libres y pueden interactuar con determinantes específicos de antígenos. Se aplica una gota de una suspensión de estafilococos al 2%, sensibilizada con los anticuerpos apropiados, sobre un portaobjetos de vidrio y se agrega una gota de una suspensión de las bacterias en estudio. Si el antígeno coincide con los anticuerpos, se produce una clara aglutinación de los estafilococos cargados de anticuerpos en 30-60 s.

Reacción de aglutinación del látex (LAR). Los portadores de anticuerpos en este sistema de diagnóstico son pequeñas partículas de látex estándar. La reacción se realiza mediante el micrométodo en pocillos sobre vidrio. La condición principal para una estadificación exitosa de la HAP es el estricto cumplimiento de las proporciones cuantitativas de los componentes del sistema: se agregan 10 µl de una preparación de látex sensibilizada con anticuerpos a 50 µl del material de prueba. La especificidad de la HAP se controla mediante tres pruebas de control contenidas en sistemas de prueba comerciales: conocida reacción positiva, reacción obviamente negativa y control de calidad de la suspensión de látex para látex no sensibilizados a HAP (que no portan anticuerpos) con el material de prueba. En nuestro país se utilizan látex monodispersos de poliestireno con diferentes diámetros de partícula (0,3; 0,66; 0,75; 0,8 μm) como portadores de anticuerpos específicos. LAG se utiliza para la detección rápida de microorganismos o sus antígenos en el material de prueba.

Detección inmunomagnética de antígenos. Una de las opciones para la reacción de aglutinación acelerada sobre vidrio está asociada al uso de partículas de polímero supermagnéticas recubiertas con anticuerpos específicos. Una de esas partículas une hasta 107-108 células de microorganismos, por lo que la sensibilidad este método alcanza 5 UFC/ml. La detección inmunomagnética de microorganismos se puede utilizar en combinación con la RCP.

Reacción de hemaglutinación agregada (AHA). Le permite detectar rápidamente en la sangre de los pacientes tanto antígenos que circulan libremente (antigenemia) como antígenos asociados con anticuerpos: complejos inmunes circulantes (CIC). Para RAHA, se utilizan glóbulos rojos sensibilizados con anticuerpos apropiados. La adición del suero sanguíneo del paciente, que contiene antígenos, a los eritrocitos sensibilizados en los que se fijan los anticuerpos, provoca el pegado (aglutinación) de los eritrocitos y los complejos inmunes.

Prueba de antiglobulina de Coombs (reacción de R. Coombs). Los anticuerpos completos (divalentes) se determinan mediante reacciones de aglutinación directa y pasiva. Los anticuerpos incompletos (monovalentes, bloqueantes) no se detectan con estos métodos, ya que, cuando se combinan con el antígeno, lo bloquean, pero no pueden provocar la agregación del antígeno en grandes conglomerados. Los anticuerpos incompletos (bloqueantes) son aquellos en los que sólo funciona un centro activo; el segundo centro activo no funciona por alguna razón desconocida. Para detectar anticuerpos incompletos, se utiliza una reacción de Coombs especial (Fig. 72). La reacción involucra: suero del paciente, en el que se determinan anticuerpos incompletos, diagnóstico de antígeno corpuscular, suero antiglobulina que contiene anticuerpos contra la globulina humana. La reacción se produce en dos etapas:

Interacción del antígeno con anticuerpos incompletos. No hay manifestaciones visibles. La primera etapa se completa lavando el antígeno del suero restante del paciente.

Interacción del suero antiglobulina obtenido como resultado de la inmunización de un animal con globulina humana con anticuerpos incompletos adsorbidos en el antígeno. Debido a que los anticuerpos antiglobulina son bivalentes, se unen a dos anticuerpos monovalentes de complejos AG+ separados. anticuerpo incompleto, lo que provoca su pegado y la aparición de sedimentos visibles.

La aglutinación es el pegado y precipitación de microbios u otras células bajo la influencia de anticuerpos en presencia de un electrolito (solución isotónica de cloruro de sodio). Los grupos de bacterias (células) pegadas se llaman aglutinados. Para la reacción de aglutinación se necesitan los siguientes componentes:

1. Anticuerpos (aglutininas) que se encuentran en el suero de un animal enfermo o inmune.

2. Antígeno: una suspensión de microbios, glóbulos rojos u otras células vivos o muertos.

3. Solución isotónica de cloruro de sodio (0,9%).

La prueba de aglutinación para el serodiagnóstico se utiliza para fiebre tifoidea y fiebre paratifoidea (reacción de Vidal), brucelosis (reacción de Wright y Heddleson), tularemia, etc. El anticuerpo es el suero del paciente y el antígeno es un microbio conocido. Al identificar microbios u otras células, se utiliza su suspensión como antígeno y un suero inmunológico conocido como anticuerpo. Esta reacción se usa ampliamente para el diagnóstico. infecciones intestinales, tos ferina, etc.

Métodos para estadificar la AR

RA aproximada sobre vidrio

RA implementada

(método de volumen)

Reacción de coaglutinación

RA desplegada sobre vidrio (seroidentificación)

Reacción de aglutinación sobre vidrio. Se aplican dos gotas de suero específico (adsorbido) y una gota de solución isotónica de cloruro de sodio a un portaobjetos de vidrio sin grasa. Los sueros no adsorbidos están prediluidos en una proporción de 1:5 - 1:100. Se deben aplicar gotas sobre el vidrio de manera que quede una distancia entre ellas. El cultivo se muele cuidadosamente sobre vidrio con un asa o una pipeta y luego se agrega a una gota de solución isotónica de cloruro de sodio y a una de las gotas de suero, revolviendo en cada uno hasta que se forme una suspensión homogénea. Una gota de suero sin cultivo es un suero control.

¡Atención! No se puede transferir el cultivo del suero a una gota de solución isotónica de cloruro de sodio, que sirve como control de antígeno. La reacción tiene lugar a temperatura ambiente durante 1-3 minutos. Si el suero de control permanece transparente, se observa una turbidez uniforme en el control de antígeno y aparecen escamas de aglutinado en la gota donde se mezcla el cultivo con el suero en el fondo de un líquido transparente, el resultado de la reacción se considera positivo.

Diagnóstico Fisiológico

suero + solución de cultivo + cultivo

Reacción de aglutinación detallada (método de volumen). Se preparan diluciones de suero en serie, con mayor frecuencia al doble. El método se llama volumétrico. Para determinar el título de anticuerpos en el suero sanguíneo, se toman 6 tubos. Vierta 1 ml de la dilución de suero original 1:50 en el primer tubo de ensayo y agregue 1 ml de solución salina en los 6 tubos de ensayo usando una pipeta graduada. El primer tubo de ensayo producirá una dilución de suero de 1:100 con un volumen de 2 ml. Transfiera 1 ml del primer tubo de ensayo al segundo tubo de ensayo, donde la dilución será 1:200. Así que haga una serie de diluciones seriadas del suero en los primeros 5 tubos de ensayo (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600). Del quinto tubo de ensayo, vierta 1 ml en la solución desinfectante. Agregue 2 gotas de diagnosticum a los 6 tubos de ensayo. El sexto tubo es un control de cultivo, ya que contiene sólo solución salina y diagnóstico.

Este control es necesario para excluir la aglutinación espontánea del cultivo. Los tubos se agitan y se colocan en un termostato a una temperatura de 37°C durante 2 horas, y luego se dejan durante un día a temperatura ambiente, después de lo cual se registran los resultados de la reacción de aglutinación. Al realizar una reacción de aglutinación con sueros de niños en los primeros meses de vida, debido a la inferioridad funcional en la formación de anticuerpos, es necesario identificar títulos de anticuerpos más bajos, lo que se tiene en cuenta al diluir el suero. La dilución inicial del suero es 1:25. En el primer tubo de ensayo se obtiene una dilución de 1:50, luego 1:100, etc.

En resultado positivo reacciones en los tubos de ensayo, las células pegajosas en forma de granos o escamas son visibles sobre el fondo de un líquido transparente. El aglutinado se deposita gradualmente en el fondo en forma de "paraguas" y el líquido que se encuentra encima del sedimento se vuelve claro. El control del antígeno es uniformemente turbio.

Según la naturaleza del sedimento, se distingue la aglutinación de grano fino y grueso (escamosa). Cuando se trabaja con O-sera se obtiene una aglutinación de grano fino. De grano grueso: cuando los microbios móviles interactúan con los sueros H flagelares. Se produce más rápido que el de grano fino y el sedimento resultante es muy suelto y se rompe fácilmente.

La intensidad de la reacción se expresa de la siguiente manera:

Todas las células se han asentado, el líquido del tubo de ensayo es completamente transparente. El resultado de la reacción es marcadamente positivo;

Hay menos sedimentos, no se produce una limpieza completa del líquido. El resultado de la reacción es positivo;

El sedimento es aún más pequeño y el líquido más turbio. El resultado de la reacción es dudoso;

Hay un ligero sedimento en el fondo del tubo de ensayo, el líquido está turbio. Resultado de reacción cuestionable;

No hay sedimentos, el líquido está uniformemente turbio, como en el control de antígeno. Resultado de reacción negativa

Reacción de aglutinación Reacción de aglutinación

(RA): un método para identificar y cuantificación Ag y At, en función de su capacidad para formar aglomerados visibles a simple vista. En el departamento de enfermedades infecciosas. enfermedades o para otros fines se utiliza para identificar microbios y células desconocidos, para determinar la presencia y cantidad de anticuerpos en la sangre y otros líquidos. El principio de determinación se basa en la especificidad de la interacción entre Ag y Ab y consiste en encontrar lo conocido a partir de lo desconocido. Hay muchas opciones para la AR: métodos cuantitativos y cualitativos, en tubo de ensayo y de vidrio, volumétricos y en gotas, convencionales, acelerados y exprés. Para estadificar la AR necesita: 1) sangre s-ka. En la variante con determinación del tipo (var) de bacteria, se utilizan pruebas de aglutinación industrial, realizadas mediante la inmunización de conejos. En la variante con determinación del tipo de Ab, del test se extrae una muestra de sangre. personas o animales. La solución debe ser estéril y libre de partículas en suspensión. Preparar la dilución básica en solución salina. Debe ser de 2 a 4 veces menor que el título de diagnóstico de esta enfermedad; 2) Ag. En la versión de reacción con determinación del tipo Ab se utilizan kits de diagnóstico industrial; en la variante con determinación de Ag, los diagnósticos se preparan ellos mismos en forma de una suspensión de 1 a 3 mil millones en una solución salina de agar de 18 a 20 horas (con menos frecuencia caldo). microbio inactivado calentándolo en un baño de agua a 70°C durante 1 hora o mediante incubación durante 24 horas a 37°C con formaldehído (concentración final 0,2%); 3) electrolito en forma de solución salina. Técnica de puesta en escena tubo serie volumétrico RA para determinar el título de Ab en s-ki: se preparan varias filas de diluciones de trabajo a partir de la dilución principal de s-ki. El número de filas depende del número de diagnósticos tomados en el experimento; el número y los factores de dilución están determinados por el título diagnóstico de la enfermedad sospechada. La serie debe contener al menos una dilución correspondiente al título de Ab diagnóstico, dos diluciones por debajo y dos diluciones por encima. por ejemplo, si el título diagnóstico es 1:100, entonces con el método volumétrico de estadificación de la AR se deben preparar las siguientes diluciones: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; con el goteo método, la primera dilución (1:25) no es necesaria, pero se requiere otra dilución más alta: 1:800 B. investigación científica s-ku se titula ante una reacción negativa. Se diluye de la siguiente manera: se vierten 0,25 ml de solución salina en todos los tubos, excepto en el primero, cuando la reacción se realiza en un volumen de 0,5 ml, y 0,5 ml cuando la reacción se realiza en un volumen de 1 ml. Vierta 0,25 (0,5) ml de la dilución principal en el 1.º y 2.º tubo de ensayo, del 2.º tubo de ensayo al volumen cortado y cría sk y aumentado 2 veces, se transfieren 0,25 (0,5) ml al 3º, del 3º al 4º, etc. hasta el último, del corte se vierten 0,25 (0,5) ml en todo para equilibrar los volúmenes. Cada dilución se realiza utilizando una pipeta separada. Si se llevan a cabo varios diagnósticos, para cada uno de ellos se prepara de la misma manera su propia serie de diluciones. Se agrega Diagnosticum a cada dilución del tubo de ensayo en un volumen igual al volumen del tubo de ensayo, como resultado de lo cual se duplica la dilución en cada tubo de ensayo. El experimento corresponde al control s-ki (0,25 - 0,5 ml de la dilución principal de s-ki y la misma cantidad de solución salina) y al control Ag (0,25 - 0,5 ml de diagnosticum y la misma cantidad de solución salina). Si se utilizan varios diagnósticos en el experimento, cada uno tiene su propio control de antígeno. La gradilla con los tubos de ensayo se agita bien y se coloca en un termostato a 37°C durante 4 horas, y luego se deja a temperatura ambiente hasta el día siguiente, después de lo cual se registra la PA en función de la cantidad de sedimento y el grado de aclaramiento de el líquido. La determinación de estos indicadores, dependiendo de la naturaleza de los aglutinados, se realiza a simple vista sobre un fondo oscuro, en un aglutinoscopio o sobre la superficie cóncava de un espejo microscópico. La contabilidad comienza con los controles: el control C debe ser transparente, Ag debe estar uniformemente turbio (después de agitar el tubo). Si los controles son buenos, establezca la presencia y el grado de aglutinación en todos los tubos de ensayo, que están designados con ventajas: sedimento grande y aclaramiento completo del líquido - 4 ventajas; sedimento grande y limpieza incompleta del líquido: 3 ventajas; Un sedimento notable y un aclaramiento notable del líquido son 2 ventajas. Después de eso, se determina el título: la dilución más alta con una intensidad de aglutinación de al menos 2 plus. investigación de títulos s-ki se comparan con el título de diagnóstico de esta enfermedad. Si se examina el título. s-ki es 2 veces menor que el valor de diagnóstico, la reacción se evalúa como dudosa; si el título es igual diagnóstico - cómo débilmente positivo; si es de 2 a 4 veces mayor, se considera positivo; si es 8 o más veces mayor, se considera marcadamente positivo; Con la amplia distribución de Ab gente sana Para evaluar la AR, se utiliza un aumento en el título de Ab. Para determinar el tipo de Ar en la serie RA, el número de filas debe corresponder al número tomado para la identificación. pruebas de diagnóstico. A partir de la dilución principal de la prueba diagnóstica, se preparan una serie de diluciones dobles sucesivas de la misma forma que en la AR para determinar el título de Ab. Los factores de dilución dependen del título de la prueba aglutinante. En el experimento, es necesario tener una dilución igual al título de la prueba, así como 2, 4, 6, 8 veces menor que éste, por ejemplo. El título de la prueba de diagnóstico es 1 3200, entonces se deben usar diluciones 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200. Se agrega el mismo volumen de Ag probado a las diluciones de la prueba, como resultado, la dilución de la prueba se multiplica por 2. Se agregan 2 controles de prueba y Ag al experimento. Si en el experimento participan varios s-k, cada uno de ellos necesita su propio control. Al finalizar la reacción, el soporte se agita vigorosamente y se coloca. en un termostato a 37 ° C. Los resultados se tienen en cuenta como se describe anteriormente. La evaluación de la reacción tiene características para sacar una conclusión sobre el cumplimiento del estudio. Ag tomado en el experimento, el título de la reacción debe corresponder al menos a la mitad del título de la prueba de diagnóstico estándar. Los títulos de 1 4 e inferiores se consideran una reacción grupal. goteo md La estadificación de la AR se diferencia de la volumétrica en que s-ku se diluye en un volumen de 1 ml, Ag se usa en una concentración más alta (10 mil millones/ml) y se agrega uno a la vez. - 2 gotas en un tubo de ensayo La dilución del fármaco después de la adición de Ag se considera sin cambios. De lo contrario, el método de formulación, registro y evaluación es similar al método volumétrico.

(Fuente: Diccionario de términos de microbiología)

Reacción de aglutinación (del lat. aglutinación- pegado) - pegado de corpúsculos (bacterias, glóbulos rojos, etc.) mediante anticuerpos en presencia de electrolitos.

Reacción de aglutinación se manifiesta en forma de escamas o sedimentos que consisten en corpúsculos (por ejemplo, bacterias) "pegados" por anticuerpos (fig. 7.37). La reacción de aglutinación se utiliza para: determinar el patógeno aislado del paciente; determinación de anticuerpos en el suero sanguíneo del paciente; determinación de grupos sanguíneos.

Arroz. 7.37 a, b. Reacción de aglutinación conIgM-anticuerpos (a) yIgG-anticuerpos (b)

1. Determinación del patógeno aislado del paciente. Reacción aproximada aglutinación sobre vidrio (Fig. 7.38). Se añade una suspensión de bacterias aisladas del paciente a una gota de suero aglutinante (dilución 1:20). Se forma un precipitado floculento.

Arroz. 7.38.

Una reacción de aglutinación extensa con un patógeno aislado de un paciente (fig. 7.39). A las diluciones del suero aglutinante se les añade una suspensión de bacterias aisladas del paciente.

Arroz. 52

2. Determinación de anticuerpos en el suero sanguíneo del paciente.
Reacción de aglutinación detallada con el suero sanguíneo del paciente (fig. 7.39). Diagnosticum se añade a las diluciones del suero del paciente.
- La aglutinación con O-diagnosticum (bacterias muertas por el calor que retienen el antígeno O) se produce en forma de aglutinación de grano fino.
- La aglutinación con H-diagnosticum (bacterias muertas por formalina que retienen el antígeno H flagelar) es grande y ocurre más rápido.
3. Reacción de aglutinación para determinar los grupos sanguíneos. La reacción de aglutinación para determinar los grupos sanguíneos se utiliza para establecer el sistema ABO (Tabla b) mediante la aglutinación de eritrocitos con anticuerpos séricos inmunes contra los antígenos de los grupos sanguíneos A (I), B (III). El control es: suero que no contiene anticuerpos, es decir. grupo sanguíneo AB (IV) en suero; antígenos contenidos en los glóbulos rojos de los grupos A (II), B (III). El control negativo no contiene antígenos, es decir, se utilizan eritrocitos del grupo O (I).

Tabla 7.6. Determinación de los grupos sanguíneos ABO.

Resultados de la reacción		Grupo
		pertenencia
		investigado sangre
glóbulos rojos con	suero (plasma)
estándar	con estándar
sueros