La reacción de hemaglutinación indirecta (pasiva) (IRHA) se basa en el hecho de que los glóbulos rojos, si se adsorbe un antígeno soluble en su superficie, adquieren la capacidad de aglutinarse al interactuar con anticuerpos contra el antígeno adsorbido. El diagrama RNGA se muestra en la Fig. 34. La RNGA se utiliza ampliamente en el diagnóstico de diversas infecciones.
Arroz. 34. Esquema de la reacción de hemaglutinación pasiva (RPHA). A - obtención de un diagnóstico de eritrocitos: B - RPGA: 1 - eritrocitos: 2 - antígeno en estudio; 3 - diagnóstico de eritrocitos; 4 - anticuerpo contra el antígeno en estudio: 5 - aglutinar
Preparando una reacción. El suero problema se calienta durante 30 minutos a 56° C, se diluye secuencialmente en una proporción de 1:10 - 1:1280 y se vierte en 0,25 ml en tubos de ensayo o pocillos, donde se colocan 2 gotas de eritrocitos diagnosticum (eritrocitos con antígeno adsorbido en ellos). ) luego se agregan.
Controles: una suspensión de eritrocitos diagnosticum con suero inmune conocido; suspensión del diagnosticum con suero normal; una suspensión de glóbulos rojos normales con suero problema. En el primer control debería producirse aglutinación, en el segundo y tercero no debería producirse.
Con RIGA, puede detectar un antígeno desconocido si los anticuerpos conocidos se adsorben en los glóbulos rojos.
La reacción de hemaglutinación se puede realizar en un volumen de 0,025 ml (micrométodo) utilizando un microvalorador Takachi.
1. ¿Qué indica un resultado positivo de un análisis de rayos X entre los glóbulos rojos y el material que se analiza para detectar la presencia del virus?
2. ¿Se producirá aglutinación de los glóbulos rojos si se les añade un virus y su correspondiente suero? ¿Cómo se llama la reacción que revela este fenómeno?
Ejercicio
Tener en cuenta y registrar el resultado RIGA.
Reacción de precipitación
En la reacción de precipitación se precipita un complejo inmune específico, formado por un antígeno soluble (lisado, extracto, hapteno) y un anticuerpo específico en presencia de electrolitos.
El anillo turbio o precipitado formado como resultado de esta reacción se llama precipitado. Esta reacción se diferencia principalmente de la reacción de aglutinación en el tamaño de las partículas de antígeno.
La reacción de precipitación se suele utilizar para determinar el antígeno en el diagnóstico de varias infecciones ( ántrax, meningitis, etc.); en medicina forense: para determinar el tipo de sangre, esperma, etc.; en estudios sanitarios e higiénicos, al establecer falsificación de productos; con su ayuda se determina la relación filogenética de animales y plantas. Para la reacción necesitas:
1. Anticuerpos (precipitinas): suero inmunológico con un título alto de anticuerpos (no inferior a 1:100.000). El título del suero precipitante está determinado por la dilución más alta del antígeno con el que reacciona. El suero se utiliza normalmente sin diluir o en una dilución de 1:5 - 1:10.
2. Antígeno: sustancias disueltas de naturaleza proteica o polisacárida lipoide (antígenos completos y haptenos).
3. Solución isotónica.
Los principales métodos para llevar a cabo la reacción de precipitación son: reacción de precipitación en anillo y reacción de precipitación en agar (gel).
¡Atención! Todos los componentes involucrados en la reacción de precipitación deben ser completamente transparentes.
Reacción de precipitación en anillo. Con una pipeta Pasteur, agregue 0,2-0,3 ml (5-6 gotas) de suero al tubo de precipitación (el suero no debe tocar las paredes del tubo). El antígeno en el mismo volumen se coloca cuidadosamente sobre el suero, vertiéndolo con una pipeta Pasteur delgada a lo largo de la pared del tubo de ensayo. El tubo de ensayo se mantiene en posición inclinada. Cuando se colocan en capas correctamente, debe haber un límite claro entre el suero y el antígeno. Con cuidado, para no mezclar el líquido, coloque el tubo de ensayo en un soporte. Si la reacción es positiva, se forma un "anillo" turbio en la interfaz del antígeno y el anticuerpo: un precipitado (ver Fig. 48).
La reacción va acompañada de varios controles (Tabla 18). La secuencia de adición de los ingredientes de la reacción al tubo de ensayo es muy importante. No se puede colocar una capa de suero sobre el antígeno (en el control, sobre una solución isotónica), ya que la densidad relativa del suero es mayor, se hundirá hasta el fondo del tubo de ensayo y no se revelará el límite entre los líquidos.
Tabla 18. Esquema para configurar la reacción de precipitación del anillo.
Nota. + presencia de un “anillo”; - ausencia de un “anillo”.
Los resultados se registran al cabo de 5-30 minutos, en algunos casos al cabo de una hora, como siempre empezando por los controles. El "anillo" en el segundo tubo de ensayo indica la capacidad del suero inmunológico para entrar en reacción específica con el antígeno correspondiente. En los 3-5 tubos de ensayo no debe haber "anillos"; no hay anticuerpos ni antígenos que se correspondan entre sí. Un "anillo" en el primer tubo (un resultado de reacción positivo) indica que el antígeno de prueba corresponde al suero inmunológico tomado, la ausencia de un "anillo" (un "anillo" solo en el segundo tubo) indica su inconsistencia: un resultado negativo resultado de la reacción.
Reacción de precipitación en agar (gel). La peculiaridad de la reacción es que la interacción del antígeno y el anticuerpo se produce en un medio denso, es decir, en un gel. El precipitado resultante da una veta turbia en el espesor del medio. La ausencia de una banda indica una discrepancia entre los componentes de la reacción. Esta reacción se utiliza ampliamente en la investigación biomédica, en particular en el estudio de la formación de toxinas en el agente causante de la difteria.
Preguntas de control
1. ¿Cuál es la principal diferencia entre reacciones de aglutinación y precipitación?
2. ¿Por qué no se pueden utilizar ingredientes turbios en la reacción de precipitación?
Ejercicio
1. Configure la reacción de precipitación del anillo y dibuje el resultado.
2. Estudie la naturaleza de la interacción del antígeno con el anticuerpo en la reacción de precipitación en agar, dibuje el resultado (pida una taza a su profesor).
Reacción de lisis (citólisis inmune)
La lisis inmune es la disolución de células bajo la influencia de anticuerpos cuando participación obligatoria complementar. Para la reacción necesitas:
1. Antígeno: microbios, glóbulos rojos u otras células.
2. Anticuerpo (lisina): suero inmunológico, con menos frecuencia suero del paciente. El suero bacteriolítico contiene anticuerpos implicados en la lisis de bacterias; hemolítico: hemolisinas que promueven la lisis de los glóbulos rojos; para la lisis de espiroquetas, se necesitan espiroquetalisinas, células, itolisinas, etc.
3. Complemento. La mayor parte del complemento en suero. conejillos de indias. Este suero (una mezcla de varios animales) se suele utilizar como complemento. El complemento fresco (nativo) es inestable y se destruye fácilmente al calentarlo, agitarlo o almacenarlo, por lo que no puede usarse más de dos días después de recibirlo. Para conservar el complemento se le añade un 2%. ácido bórico y 3% de sulfato de sodio. Este complemento se puede conservar a 4°C hasta por dos semanas. El complemento seco se utiliza con mayor frecuencia. Antes de su uso, se disuelve en una solución isotónica hasta el volumen original (indicado en la etiqueta).
4. Solución isotónica.
Reacción de hemólisis(Tabla 19). Para la reacción necesitas:
1. Antígeno: suspensión al 3% de eritrocitos de oveja lavados a razón de 0,3 ml de sedimento de eritrocitos y 9,7 ml de solución isotónica.
2. Anticuerpo: suero hemolítico (hemolisina) contra eritrocitos de oveja; generalmente preparado en producción, liofilizado y con el título indicado en la etiqueta.
El título de hemolisina es la dilución más alta de suero en la que se produce la hemólisis completa de una suspensión de glóbulos rojos al 3% en presencia de complemento. Para la reacción de hemólisis, la hemolisina se toma en título triple, es decir, se diluye 3 veces menos que antes del título. Por ejemplo, con un título de suero de 1:1200, el suero se diluye 1:400 (0,1 ml de suero* y 39,9 ml de solución isotónica). Es necesario un exceso de hemolisina, ya que una parte puede ser absorbida por otros componentes de la reacción.
* (No debe tomar menos de 0,1 ml de suero; la precisión de la medición se verá afectada.)
3. El complemento se diluye 1:10 (0,2 ml de complemento y 1,8 ml de solución isotónica).
4. Solución isotónica.
Tabla 19. Esquema de reacción de hemólisis
Contabilización de resultados. Si la reacción se lleva a cabo correctamente, se producirá hemólisis en el primer tubo de ensayo y su contenido se volverá transparente. En los controles el líquido permanece turbio: en el 2º tubo no hay suficiente complemento para que se produzca la hemólisis, en el 3º tubo no hay hemolisina, en el 4º tubo no hay ni hemolisina ni complemento, en el 5º tubo el antígeno sí no coincide con el anticuerpo,
Si es necesario, el suero hemolítico se titula según siguiente diagrama(Tabla 20).
Antes de la titulación, preparar una dilución de suero inicial de 1:100 (0,1 ml de suero y 9,9 ml de solución isotónica), a partir de la cual diluciones necesarias, Por ejemplo:
De estas diluciones, agregue 0,5 ml de suero a los tubos de ensayo de titulación, como se muestra en la tabla. 20.
Tabla 20. Esquema de titulación de suero hemolítico (hemolisina)
En el ejemplo dado en la tabla. 20, el título de suero hemolítico es 1:1200.
Cuando se utiliza suero hemolítico fresco, se debe inactivar para destruir el complemento presente en él. Para ello se calienta durante 30 minutos a 56 ° C al baño maría o en un inactivador con termostato. El último método es mejor: elimina la posibilidad de sobrecalentar el suero, es decir, su desnaturalización. Los sueros desnaturalizados no son aptos para realizar pruebas.
Reacción de bacteriólisis. En esta reacción, el complemento lisa las bacterias en presencia de suero apropiado (homólogo). El esquema de reacción es fundamentalmente similar al esquema de reacción de hemólisis. La diferencia es que después de una incubación de dos horas, todos los tubos de ensayo se siembran en placas de Petri con un medio favorable para el microorganismo introducido en el experimento para saber si está lisado. Si el experimento se realiza correctamente, los cultivos de 2 a 5 tubos de ensayo (controles) deberían mostrar un crecimiento abundante. La falta de crecimiento o un crecimiento débil en la inoculación del primer tubo de ensayo (experimento) indica la muerte de los microbios, es decir, que son homólogos al anticuerpo.
¡Atención! La reacción de bacteriólisis debe realizarse en condiciones asépticas.
Preguntas de control
1. ¿Qué pasará con los glóbulos rojos si se usa agua destilada en lugar de una solución isotónica de cloruro de sodio? ¿Cuál es la base de este fenómeno?
2. ¿Qué reacción ocurrirá cuando los eritrocitos interactúen con el suero inmune homólogo en ausencia de complemento?
Ejercicio
Configure la reacción de hemólisis. Registre y dibuje el resultado.
Información relacionada.
Utiliza glóbulos rojos o neutros. materiales sintéticos(por ejemplo, partículas de látex), en cuya superficie se absorben antígenos (bacterianos, virales, tisulares) o anticuerpos. Su aglutinación se produce cuando se añaden sueros o antígenos adecuados. Los glóbulos rojos sensibilizados con antígenos se denominan eritrocitos diagnósticos antigénicos y se utilizan para detectar y valorar anticuerpos. Eritrocitos sensibilizados con anticuerpos. se denominan inmunoglobulinas diagnósticas de eritrocitos y se utilizan para detectar antígenos.
La reacción de hemaglutinación pasiva se utiliza para diagnosticar enfermedades causadas por bacterias (fiebre tifoidea y paratifoidea, disentería, brucelosis, peste, cólera, etc.), protozoos (malaria) y virus (influenza, infecciones adenovirales, hepatitis viral B, sarampión, encefalitis transmitida por garrapatas, fiebre hemorrágica de Crimea, etc.), así como para determinar determinadas hormonas, identificar hipersensibilidad paciente a medicamentos y hormonas como la penicilina y la insulina.
Reacción de hemaglutinación pasiva (RPHA). La prueba de hemaglutinación pasiva es un método sensible diagnóstico serológico y se utiliza tanto para el diagnóstico temprano como retrospectivo, así como para determinar el estado inmunológico de las personas vacunadas. En pacientes con tularemia, los anticuerpos generalmente se detectan al final de la primera o segunda semana de la enfermedad; después de 1 a 1,5 meses, los títulos de RPHA alcanzan rendimiento máximo(1:100000-1:20000, rara vez más), después de lo cual disminuyen y permanecen durante mucho tiempo en el nivel 1:100-1:200.
En las personas vacunadas, los anticuerpos también se detectan constantemente, aunque en títulos más bajos, que no superan 1:2000-1:5000 entre 1 y 1,5 meses después de la vacunación, y permanecen durante varios años en un nivel bajo de 1:20-1:80.
El antígeno para la estadificación de la RPHA es el diagnóstico de eritrocitos de tularemia (antigénico). El fármaco son glóbulos rojos de oveja formalinizados, sensibilizados con antígeno de tularemia, disponibles en forma líquida y seca. Preparación líquida: una suspensión al 10% de glóbulos rojos en una solución de formaldehído al 10% de concentración. La preparación liofilizada seca es una suspensión al 10% de glóbulos rojos secada al vacío sin conservante. Antes de su uso, se diluye según las instrucciones de la etiqueta. Para preparar la reacción en placas de poliestireno, ambos fármacos se utilizan en una concentración del 2,5% y, cuando se prepara la reacción en microvolúmenes, en una concentración del 0,5%.
Técnica de instalación de RPGA. Los sueros problema se diluyen con solución fisiológica 1:5 (1:10) y se calientan a 56 grados C durante 30 minutos. Después de esto, para eliminar los anticuerpos heterogéneos contra los eritrocitos de oveja, los sueros se tratan con una suspensión al 50% de eritrocitos de oveja formalinizados. Para ello, agregue glóbulos rojos a razón de 2 gotas (0,05 ml) por 1 ml de suero y mezcle bien agitando. El suero se deja hasta que los eritrocitos se hayan asentado por completo o se centrifuga después de una hora a temperatura ambiente, después de lo cual está listo para el examen.
El líquido de dilución se vierte en un volumen de 0,5 ml en una fila de pocillos sobre una placa de poliestireno. Durante el estudio preliminar de los sueros, es aconsejable probarlos estableciendo la reacción en una fila corta de la placa (6 pocillos). Si se detectan anticuerpos en una serie corta, los sueros se vuelven a analizar en una serie larga de diluciones (12 pocillos). Después de derramar el líquido de dilución, agregue 0,5 ml de suero problema en una dilución 1:5 al primer pocillo de cada fila (corta o larga). Luego se titulan los mismos volúmenes de suero con diluciones dobles. Así, se obtienen diluciones de suero en la serie corta de 1:10 a 1:320, y en la serie larga de 1:10 a 1:20480. Después de la titulación de los sueros, se añade a cada pocillo una gota (0,05 ml) de una suspensión de trabajo al 2,5% de eritrocitos sensibilizados. El contenido de las placas se agita vigorosamente hasta obtener una suspensión homogénea. Los platos se dejan a temperatura ambiente sobre una superficie de mesa estacionaria. El registro preliminar de la reacción se lleva a cabo después de 2-3 horas, la determinación final del título se realiza después de la sedimentación completa de los glóbulos rojos en los pocillos. Se proporcionan los siguientes controles para la reacción: 1) suero problema diluido 1:10 en un volumen de 0,5 ml + 1 gota de una suspensión de eritrocitos no sensibilizados al 2,5%; 2) líquido de dilución en un volumen de 0,5 ml + 1 gota de una suspensión al 2,5% de eritrocitos no sensibilizados; 3) líquido de dilución en un volumen de 0,5 ml + 1 gota de una suspensión de eritrocitos sensibilizados al 2,5%. Todos los controles deberían dar una reacción claramente negativa.
Contabilidad y valoración de RPGA. La reacción se evalúa según el siguiente esquema:
1) bruscamente reacción positiva(++++) - los glóbulos rojos caen al fondo del orificio en una capa uniforme en forma de "paraguas", que a menudo tiene una fusión festoneada de los bordes;
2) reacción positiva (+++): los glóbulos rojos cubren al menos 2/3 del fondo del pocillo;
3) reacción débilmente positiva (++): el aglutinado es pequeño y está ubicado en el centro del pozo;
4) reacción cuestionable (+): alrededor del sedimento de eritrocitos en el centro del pozo hay granos individuales de aglutinado;
5) negativo (-): en el fondo del orificio, los glóbulos rojos se depositan en forma de un "botón" o un pequeño anillo con bordes lisos y bien definidos.
El título del suero se tiene en cuenta en función de la última dilución del suero, que dio una reacción muy clara (al menos tres ventajas). Una dilución de 1:100 o superior se considera un título diagnóstico, sin embargo, al igual que en el caso de la AR, es necesario controlar su aumento.
La RPGA para la tularemia es bastante específica y detecta algunos reacciones cruzadas sólo con sueros de brucelosis. Diagnóstico diferencial posible por la altura de los títulos en RPGA, que son significativamente más altos con el antígeno homólogo.
Técnica de configuración de RPHA en microvolúmenes. La RPGA se puede realizar en microvolúmenes utilizando un microtitulador tipo Takachi (o microplacas de fondo redondo con micropipetas), que permite la titulación del material en volúmenes de 25 μl y 50 μl. La técnica de reacción y la secuencia de todas las operaciones son las mismas que cuando se estudian en placas de poliestireno. Sin embargo, debe tenerse en cuenta que la sensibilidad del micrométodo suele ser una dilución (es decir, 2 veces) menor que la del macrométodo.
Para preparar la reacción en un microtitrador, se añade a cada pocillo un líquido de dilución en un volumen de 50 µl utilizando una pipeta cuentagotas. Luego, utilizando valoradores con un cabezal de 50 µl, se recoge el suero problema sumergiendo el cabezal en él. Asegúrese de que el líquido haya llenado el cabezal del titulador. El titulador con suero se transfiere al primer pocillo y, manteniéndolo en posición vertical, haz varios movimientos rotacionales ida y vuelta. Luego se transfiere el valorador al siguiente pocillo y se repite la manipulación. La titulación se puede realizar simultáneamente en varias filas. Después de titular toda la serie, el valorador se lava con agua destilada (cambiando 2 porciones) mediante movimientos giratorios, se retira el agua del cabezal con un hisopo y se quema sobre la llama de un mechero.
Después de la titulación, agregue 25 µl de líquido de diagnóstico de eritrocitos a los pocillos. La concentración de diagnóstico para RPHA en microvolúmenes debe ser del 0,5% (es decir, una suspensión de glóbulos rojos al 2,5% se diluye adicionalmente 5 veces). Después de añadir los glóbulos rojos, las placas se deben agitar ligeramente hasta obtener una suspensión homogénea. Los resultados se pueden registrar en 1 a 1,5 horas, lo cual es una ventaja significativa de RPGA en una microtitulación. Además, esta técnica requiere pequeñas cantidades de todos los ingredientes de la reacción y sueros de prueba.
La reacción se tiene en cuenta según el siguiente esquema:
1) “+” – hemaglutinación completa, en la que los glóbulos rojos caen al fondo del pocillo en una capa uniforme en forma de “paraguas”, ocupando al menos 2/3 del fondo;
2) “+-“ - hemaglutinación parcial, en la que los glóbulos rojos caen al fondo en forma de un anillo suelto de tamaño pequeño;
3) “-“ – ausencia de hemaglutinación, cuando los glóbulos rojos caen al fondo en forma de un pequeño botón o anillo con un borde liso.
Especificidad resultado positivo, obtenido en RPHA, se puede probar mediante una reacción de tres componentes: la reacción de inhibición de la hemaglutinación pasiva (RPHA).
Técnica para configurar RTPGA. Esta reacción se utiliza para confirmar la especificidad de un resultado positivo de RPGA cuando está en duda o es de particular interés epidemiológico. El mecanismo de la reacción es la inhibición específica de la hemaglutinación cuando se añade al suero problema una suspensión de bacterias muertas de la tularemia. En la reacción interactúan tres componentes: el suero problema, el antígeno de tularemia específico y el diagnóstico antigénico de eritrocitos. RTPHA generalmente se coloca en una fila de 7-8 pocillos. Es recomendable instalar un RPGA repetido en paralelo con el RTPGA. Se vierten 0,25 ml del líquido de dilución en dos filas de pocillos, luego se añade el suero problema en un volumen de 0,25 ml a los primeros pocillos de ambas filas y se realiza la titulación. Se obtienen dos filas idénticas de diluciones de suero. Agregue 0,25 ml de líquido de dilución a todos los pocillos de la segunda fila y 0,25 ml de una suspensión de bacterias de tularemia a los pocillos de la primera fila. Se utiliza Tularemia diagnosticum (que contiene 25 mil millones de bacterias de tularemia en 1 ml), previamente diluida 50 veces. Esta suspensión contiene 500 millones de bacterias en 1 ml o 125 millones en un volumen de 0,25 ml. Después de agregar el antígeno, la placa se deja durante 1 hora a temperatura ambiente, después de lo cual se agrega una gota (0,05 ml) de eritrocitos diagnosticum a todos los pocillos de ambas filas, la placa se agita y se deja sobre una superficie plana de la mesa. La contabilidad se realiza después de 2-3 horas.
Contabilidad y valoración de RTPGA. Si el suero problema contiene anticuerpos específicos de tularemia, el antígeno añadido los neutraliza y no se producirá hemaglutinación en la primera fila de pocillos o, si título alto suero, se observará hemaglutinación en un número menor (2-4) de pocillos que en la fila con RPGA. En este caso, se confirmó la especificidad de los resultados. Si se observa hemaglutinación en ambas filas, es decir Si los resultados de RTPGA y RPGA coinciden, esto indica la ausencia de anticuerpos de tularemia en el suero problema. En este caso, el resultado primario de RPGA se considera inespecífico.
Técnica de estadificación de RTHG en microvolúmenes. RTPGA, al igual que RPGA, se puede realizar en microvolúmenes utilizando una microtitulación tipo Takachi. Para ello, añadir 0,25 μl de líquido diluyente en los pocillos de las microplacas en dos filas de 7-8 pocillos cada una. Luego, utilizando un titulador, se añaden 0,25 µl del suero problema y se titula en ambas filas. Después de esto, se añaden 25 µl de antígeno de tularemia (cuya concentración es de 500 millones de bacterias de tularemia en 1 ml) a cada pocillo de la primera fila y 25 µl de líquido de dilución a la segunda fila. Las placas se dejan durante 1 hora a temperatura ambiente, después de lo cual se añaden 25 µl de diagnóstico zritrocítico antigénico (concentración del 0,5%) a todos los pocillos de ambas filas. La contabilidad y evaluación de los resultados se llevan a cabo de manera similar a las reacciones en macrovolúmenes.
Índice del tema "Inmunomoduladores. Inmunodiagnóstico de enfermedades infecciosas":Reacciones de aglutinación pasiva. Reacciones de aglutinación indirecta. Reacción de hemaglutinación indirecta o pasiva (IRHA, RPHA). RNGA inverso. Reacción de inhibición pasiva de la hemaglutinación (PHA).
Estos reacciones son llamados indirecto (pasivo), ya que utilizan Ag (o AT) absorbidos artificialmente en la superficie de diversas partículas corpusculares.
Reacción de hemaglutinación indirecta o pasiva. (RNGA, RPGA) es una de las reacciones serológicas más sensibles. Se basa en la capacidad de la AT para interactuar con Ag fijado en varios glóbulos rojos, que luego se aglutinan. Para una mayor estabilidad de los diagnósticos, los glóbulos rojos se formalinizan.
RNGA inverso utilizado para detectar Ag en suero sanguíneo; Para ello, no se fijan Ag, sino AT en los eritrocitos. Reacciones de este tipo se utilizan mucho para diagnosticar enfermedades infecciosas, establecer un embarazo, detectar hipersensibilidad a fármacos, etc.
Reacción de inhibición pasiva de la hemaglutinación. (RTPGA) - mayor desarrollo RNGA; en cierto sentido controla su especificidad. A diferencia de RNGA, incluye tres componentes; Ag, AT y Ag (AT) adsorbidos en los eritrocitos. Inicialmente, Ag reacciona con AT (antisuero estándar), luego se agregan a la mezcla eritrocitos sensibilizados con el mismo Ag (o AT). Si, durante la interacción de Ag con AT, no queda AT (o Ag) libre en el sistema, entonces no se observa aglutinación del diagnóstico de eritrocitos.
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Las reacciones serológicas se designan de acuerdo con los fenómenos que acompañan a la formación de un complejo antígeno-anticuerpo durante la interacción de componentes con diferentes propiedades. Hay reacciones de aglutinación, precipitación y lisis.
Reacción de aglutinación (RA)
La reacción de aglutinación (AR) se basa en el uso de un antígeno corpuscular (una suspensión de bacterias, eritrocitos sensibilizados, partículas de látex, etc.) que interactúa con anticuerpos específicos, como resultado de lo cual precipita el complejo antígeno-anticuerpo resultante. Esta reacción se utiliza ampliamente en la práctica de laboratorio para el diagnóstico serológico. infecciones bacterianas y para la identificación de microorganismos aislados.
La AR se utiliza para diagnosticar muchas enfermedades infecciosas: brucelosis (reacción de Wright, Heddleson), tularemia, leptospirosis (RAL - reacción de aglutinación y lisis de Leptospira), listeriosis, tifus (RAR - reacción de aglutinación de Rickettsia), shigelosis, yersiniosis, pseudotuberculosis, etc.
Reacción de aglutinación indirecta o pasiva (RIGA o RPGA).
Para escenificar esta reacción se utilizan glóbulos rojos de animales (oveja, mono, cobaya, algunas aves) sensibilizados con anticuerpos o antígeno, lo que se consigue incubando una suspensión de glóbulos rojos y una solución de antígeno o suero inmune.
Los diagnósticos obtenidos a partir de eritrocitos sensibilizados con antígenos se denominan diagnóstico de antígenos de eritrocitos. Están destinados a la determinación de anticuerpos en diluciones seriadas de sueros sanguíneos, por ejemplo, eritrocitos Shigella diagnosticums, eritrocitos Salmonella O-diagnosticums.
En consecuencia, los diagnósticos basados en eritrocitos sensibilizados con inmunoglobulinas específicas se denominan anticuerpos(inmunoglobulina) diagnósticos y sirven para detectar antígenos en diversos materiales, por ejemplo, inmunoglobulina diftérica diagnóstica de eritrocitos para RIGA, que se utiliza para detectar exotoxina diftérica de corinebacterias en un medio nutritivo líquido cuando se inocula material de la nariz y la orofaringe.
La reacción de hemaglutinación se utiliza para diagnosticar infecciones tanto bacterianas (fiebre tifoidea, paratifoidea, disentería, brucelosis, peste, cólera, etc.) como virales (gripe, infecciones adenovirales, sarampión, etc.). En términos de sensibilidad y especificidad, RIGA es superior a la AR.
Reacción de inhibición de la hemaglutinación (HAI)
La reacción de inhibición de la hemaglutinación (HAI) se utiliza para titular los anticuerpos antivirales en el suero sanguíneo, así como para establecer el tipo de cultivos virales aislados. RTGA se puede utilizar para diagnosticar aquellos infecciones virales, cuyos patógenos tienen propiedades hemaglutinantes.
El principio del método es que el suero que contiene anticuerpos contra un tipo específico de virus suprime su actividad hemaglutinante y los glóbulos rojos permanecen no aglutinados.
Reacción de inhibición (retraso) pasiva de la hemaglutinación (RPHA).
En RTPGA intervienen tres componentes: suero inmune, antígeno (material de prueba) y eritrocitos sensibilizados.
Si el material de prueba contiene un antígeno que reacciona específicamente con anticuerpos inmunes suero estándar, luego los une y, con la posterior adición de eritrocitos sensibilizados con un antígeno homólogo al suero, no se produce hemaglutinación.
RTPHA se utiliza para detectar antígenos microbianos, para su determinación cuantitativa y también para controlar la especificidad de RTPGA.
Reacción de aglutinación del látex (RLA)
Las partículas de látex se utilizan como portador de anticuerpos (inmunoglobulinas). RLA es un método rápido para diagnosticar enfermedades infecciosas, teniendo en cuenta el tiempo requerido (hasta 10 minutos) y la capacidad de detectar antígenos en un pequeño volumen de material de prueba.
RLA se utiliza para indicar antígenos de Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae tipo b, Neisseria meningitidis en el líquido cefalorraquídeo, para detectar estreptococos del grupo A en frotis de garganta, para diagnosticar salmonelosis, yersiniosis y otras enfermedades. La sensibilidad del método es de 1 a 10 ng/ml, o 10³ -10⁶ células bacterianas en 1 µl.
Reacción de coaglutinación (CoA)
La reacción de coaglutinación (CoA) se basa en la capacidad de la proteína A de los estafilococos para unir inmunoglobulinas específicas. RCA, un método de diagnóstico rápido, sirve para identificar antígenos termoestables solubles en las secreciones humanas y en la composición de complejos inmunes circulantes (CIC). La detección de antígenos específicos en la CCA requiere su precipitación preliminar del suero sanguíneo.
Reacción de precipitación
En la reacción de precipitación (RP), como resultado de la interacción de anticuerpos con antígenos solubles altamente dispersos (proteínas, polisacáridos), se forman complejos con la participación del complemento-precipitados. Es una prueba sensible que se utiliza para detectar y caracterizar una variedad de antígenos y anticuerpos. El ejemplo más simple de RP de alta calidad es la formación de una banda de precipitación opaca en un tubo de ensayo en el límite de la capa de antígeno en el suero inmune: la reacción de precipitación en anillo. Se utilizan ampliamente varios tipos de RP en agar semilíquido o geles de agarosa (método de doble inmunodifusión, método de inmunodifusión radial, inmunoelectroforesis).
Reacción de fijación del complemento (CFR)
La reacción de fijación del complemento (CFR) se basa en el fenómeno de la hemólisis con la participación del complemento, es decir. capaz de detectar únicamente anticuerpos fijadores del complemento.
RSC se usa ampliamente para el diagnóstico de muchas infecciones bacterianas y virales, infecciones por rickettsias, clamidia, mononucleosis infecciosa, infecciones por protozoarios, helmintiasis. RSK es complejo reacción serológica, en el que intervienen dos sistemas: el sistema de prueba (suero sanguíneo), representado por el sistema antígeno-anticuerpo y complemento, y el sistema hemolítico (glóbulos rojos de oveja + suero hemolítico). El suero hemolítico es suero sanguíneo de conejo inactivado por calor e inmunizado con eritrocitos de oveja. Contiene anticuerpos contra los glóbulos rojos de oveja.
Se observa un resultado positivo de RSC (ausencia de hemólisis) si el suero problema contiene anticuerpos homólogos al antígeno. En este caso, el complejo antígeno-anticuerpo resultante se une al complemento y, en ausencia de complemento libre, la adición del sistema hemolítico no va acompañada de hemólisis. Si no hay anticuerpos correspondientes al antígeno en el suero, no se produce la formación de un complejo antígeno-anticuerpo, el complemento permanece libre y el suero provoca hemólisis de los glóbulos rojos, es decir, la presencia de hemólisis es un resultado negativo de la reacción.
Yushchuk N.D., Vengerov Yu.Ya.
Reacción de aglutinación - RA(del lat. aglutinación- adhesión) es una reacción simple en la que los anticuerpos se unen a antígenos corpusculares (bacterias, eritrocitos u otras células, partículas insolubles con antígenos adsorbidos en ellas, así como agregados macromoleculares). Ocurre en presencia de electrolitos, por ejemplo, cuando se añade una solución isotónica de cloruro de sodio.
Aplicar varias opciones reacciones de aglutinación: extensiva, indicativa, indirecta, etc. La reacción de aglutinación se manifiesta por la formación de escamas o sedimentos.
La RA se utiliza para:
determinación de anticuerpos en el suero sanguíneo de pacientes, por ejemplo, con brucelosis (reacciones de Wright, Heddelson), fiebre tifoidea y fiebre paratifoidea (reacción de Vidal) y otras enfermedades infecciosas;
determinación del patógeno aislado del paciente;
determinación de grupos sanguíneos mediante anticuerpos monoclonales contra aloantígenos de eritrocitos.
Para determinar anticuerpos en un paciente. ponerexpandido reacción de aglutinación: añadir a las diluciones del suero sanguíneo del paciente diagnóstico(suspensión de microbios muertos) y después de varias horas de incubación a 37 °C, se observa la dilución sérica más alta (título sérico), en la que se produjo la aglutinación, es decir, se formó un precipitado.
La naturaleza y la velocidad de la aglutinación dependen del tipo de antígeno y anticuerpos. Un ejemplo son las peculiaridades de la interacción de los diagnósticos (antígenos O y R) con anticuerpos específicos. Reacción de aglutinación con O-diagnóstico(bacterias muertas por el calor, reteniendo calor-estable antígeno O) Se produce en forma de aglutinación de grano fino. La reacción de aglutinación con H-diagnosticum (bacterias muertas por formaldehído que retienen el antígeno H flagelar termolábil) es burda y avanza más rápido.
Si es necesario determinar el patógeno aislado del paciente, poner reacción de aglutinación indicativa, utilizando anticuerpos de diagnóstico (suero aglutinante), es decir, se realiza la serotipación del patógeno. Se lleva a cabo una reacción indicativa sobre un portaobjetos de vidrio. Se añade un cultivo puro del patógeno aislado del paciente a una gota de suero aglutinante de diagnóstico en una dilución de 1:10 o 1:20. Se coloca un control cerca: en lugar de suero, se aplica una gota de solución de cloruro de sodio. Cuando aparece un sedimento floculento en una gota que contiene suero y microbios, se reacción de aglutinación extensa en tubos de ensayo con diluciones crecientes de suero aglutinante, a los que se añaden 2-3 gotas de la suspensión del patógeno. La aglutinación se tiene en cuenta por la cantidad de sedimento y el grado de claridad del líquido. La reacción se considera positiva si se observa aglutinación en una dilución cercana al título del suero de diagnóstico. Al mismo tiempo, se tienen en cuenta los controles: el suero diluido con una solución isotónica de cloruro de sodio debe ser transparente, la suspensión de microbios en la misma solución debe estar uniformemente turbia, sin sedimentos.
Diferentes bacterias relacionadas pueden ser aglutinadas por un mismo suero aglutinante diagnóstico, lo que dificulta su identificación. Por eso usan sueros aglutinantes adsorbidos, de los cuales se han eliminado los anticuerpos de reacción cruzada mediante adsorción a bacterias relacionadas. Estos sueros retienen anticuerpos que son específicos únicamente de una bacteria determinada. A. Castellani (1902) propuso la producción de sueros aglutinantes de diagnóstico monorreceptores especiales.
Reacción de hemaglutinación indirecta (pasiva)(RNGA, RPGA) se basa en el uso de eritrocitos con antígenos o anticuerpos adsorbidos en su superficie, cuya interacción con los anticuerpos o antígenos correspondientes del suero sanguíneo hace que los eritrocitos se peguen y caigan al fondo de la prueba. tubo o celda V en forma de sedimento festoneado (Fig. 13.2). En reacción negativa Los glóbulos rojos se depositan ■ en forma de “botón”. Normalmente, los anticuerpos se detectan en el RNGA mediante un diagnóstico de eritrocitos antigénico, que son eritrocitos con adsorbidos. en con antígenos. A veces se utilizan diagnósticos de eritrocitos anti-A, en los que se adsorben anticuerpos. Por ejemplo, la toxina botulínica se puede detectar agregando toxina botulínica de anticuerpos eritrocitarios (esta reacción se llama reacción de hemaglutinación indirecta inversa- RONG). RNGA se utiliza para diagnosticar enfermedades infecciosas y determinar la hormona gonadotrópica. V orina al establecer el embarazo, para identificar hipersensibilidad a medicamentos, hormonas y en algunos otros casos.
REACCIÓN DE COMBES
(Prueba de Coombs): un método para determinar los anticuerpos Rh en la superficie de los glóbulos rojos, que provocan la precipitación de globulinas en el suero sanguíneo. Esta prueba se utiliza para el diagnóstico. anemia hemolítica en bebés con incompatibilidad Rh que experimentan destrucción de glóbulos rojos.
Reacción de coaglutinación. Las células patógenas se determinan utilizando estafilococos pretratados con suero de diagnóstico inmunológico. Estafilococos que contienen proteínas. A, Al tener afinidad por el fragmento Fc de las inmunoglobulinas, adsorbe de forma inespecífica los anticuerpos antimicrobianos, que luego interactúan con los centros activos con los microbios correspondientes aislados de los pacientes. Como resultado de la coaglutinación, se forman escamas que consisten en estafilococos, anticuerpos séricos de diagnóstico y el microbio detectado.
Reacción de inhibición de la hemaglutinación.(RTGA) se basa en el bloqueo, la supresión de los antígenos virales mediante anticuerpos séricos inmunes, como resultado de lo cual los virus pierden su capacidad para aglutinar glóbulos rojos (fig. 13.3). RTGA se utiliza para diagnosticar muchas enfermedades virales, cuyos agentes causantes (virus de la influenza, sarampión, rubéola, encefalitis transmitida por garrapatas, etc.) pueden aglutinar los glóbulos rojos de varios animales.
- Un grupo de médicos de la OMS llegó a la India para identificar a los pacientes con polio y ayudar en la vacunación universal contra la polio. En una de las aldeas encuestadas, un niño de 6 años de una familia numerosa fue llevado al médico, que enfermó hace 5 días. La temperatura subió repentinamente, hubo un fuerte dolor de cabeza, vómitos repetidos, dolor en brazos y piernas. Tras la inspección: calor, debilidad severa, síntomas meníngeos, en pierna derecha reducido tono muscular, los reflejos tendinosos están muy debilitados, el pie cuelga. Durante la punción del canal espinal, el líquido cefalorraquídeo fluyó por debajo hipertensión, aumenta el número de linfocitos, las bacterias no se aíslan. Entregado diagnóstico preliminar"forma paralítica de polio". ¿Cómo pudo infectarse el niño? ¿Cómo se lleva a cabo la prevención activa específica de la polio? ¿Existe peligro de contagiar a otros niños de esta familia, qué se debe hacer?
Respuesta: El niño podría haberse infectado por vía fecal-oral a través de alimentos, agua y también a través de gotitas en el aire. La principal medida para la prevención de la polio es la inmunización con una vacuna de cultivo vivo de tres serotipos de la cepa Sabin. En Rusia se utiliza vacunación contra la polio para administración oral elaborado por el Instituto de Poliomielitis y Encefalitis Viral que lleva su nombre. MP Chumakova. La vacuna es una preparación trivalente de cepas Sabin atenuadas del virus de la polio tipos 1, 2, 3, obtenidas de un cultivo primario de células renales de mono verde africano. . Los niños de 3 meses a 6 años están sujetos a vacunas rutinarias contra la polio. La vacunación con vacuna oral contra la polio se realiza con 2 o 4 gotas de vacuna por vía oral tres veces a los 3, 4, 5 y 6 meses con tres revacunaciones a los 18, 20 meses y 14 años. El niño enfermo debe ser hospitalizado y todos los demás niños de esta familia deben ser vacunados con vacuna viva contra la polio.
- Composición y uso de la vacuna líquida contra la influenza con subunidades de polímero trivalente (influenza)
Esta es una vacuna molecular. Composición: Ag de superficie del virus de la influenza de tres subtipos (A/H1N1, A/H3N2, B). Aplicación: para la prevención de la influenza.
Tarjeta de examen No. 23
