Reacción de aglutinación (del lat. aglutinación- pegado) - pegado de corpúsculos (bacterias, glóbulos rojos, etc.) mediante anticuerpos en presencia de electrolitos.
Reacción de aglutinación se manifiesta en forma de escamas o sedimentos que consisten en corpúsculos (por ejemplo, bacterias) "pegados" por anticuerpos (fig. 7.37). La reacción de aglutinación se utiliza para: determinar el patógeno aislado del paciente; determinación de anticuerpos en el suero sanguíneo del paciente; determinación de grupos sanguíneos.
Arroz. 7.37 a, b. Reacción de aglutinación conIgM-anticuerpos (a) yIgG-anticuerpos (b)
1. Determinación del patógeno aislado del paciente. Reacción aproximada aglutinación sobre vidrio (Fig. 7.38). Se añade una suspensión de bacterias aisladas del paciente a una gota de suero aglutinante (dilución 1:20). Se forma un precipitado floculento.
Arroz. 7.38.
Una reacción de aglutinación extensa con un patógeno aislado de un paciente (fig. 7.39). A las diluciones del suero aglutinante se les añade una suspensión de bacterias aisladas del paciente.
Arroz. 52
2. Determinación de anticuerpos en el suero sanguíneo del paciente.
Reacción de aglutinación detallada con el suero sanguíneo del paciente (fig. 7.39). Diagnosticum se añade a las diluciones del suero del paciente.
- La aglutinación con O-diagnosticum (bacterias que mueren por el calor y retienen el antígeno O) se produce en forma de aglutinación de grano fino.
- La aglutinación con H-diagnosticum (bacterias muertas por el formaldehído que retienen el antígeno H flagelar) es grande y ocurre más rápido.
3. Reacción de aglutinación para determinar los grupos sanguíneos. La reacción de aglutinación para determinar los grupos sanguíneos se utiliza para establecer el sistema ABO (Tabla b) mediante la aglutinación de eritrocitos con anticuerpos séricos inmunes contra los antígenos de los grupos sanguíneos A (I), B (III). El control es: suero que no contiene anticuerpos, es decir. grupo sanguíneo AB (IV) en suero; antígenos contenidos en los glóbulos rojos de los grupos A (II), B (III). El control negativo no contiene antígenos, es decir, se utilizan eritrocitos del grupo O (I).
Tabla 7.6. Determinación de los grupos sanguíneos ABO.
| Resultados de la reacción |
Grupo |
|
|
pertenencia |
||
|
investigado |
||
|
glóbulos rojos con |
suero (plasma) |
|
|
estándar |
con estándar |
|
|
sueros | ||
Reacción de aglutinación detallada (REAL ACADEMIA DE BELLAS ARTES). Para determinar AT en el suero sanguíneo del paciente, se reacción de aglutinación extensa (AR). Para hacer esto, se agrega un diagnóstico a una serie de diluciones de suero sanguíneo: una suspensión de microorganismos muertos o partículas con Ag absorbido. La dilución máxima que da aglutinación Ag se llama título sérico.
Tipos de reacción de aglutinación (REAL ACADEMIA DE BELLAS ARTES) para detectar AT: una prueba de gota de sangre para la tularemia (con un diagnóstico aplicado a una gota de sangre y la aparición de aglutinados blanquecinos visibles) y la prueba de Huddleson para la brucelosis (con un diagnóstico teñido con violeta de genciana aplicado a una gota de sangre suero).
Reacción de aglutinación aproximada (RA)
Para identificar los microorganismos aislados se coloca una RA aproximada en portaobjetos de vidrio. Para hacer esto, se agrega un cultivo de patógenos a una gota de antisuero de diagnóstico estándar (diluido 1:10, 1:20). En resultado positivo realizar una reacción detallada con diluciones crecientes del antisuero.
Reacción Se considera positivo si se observa aglutinación en diluciones cercanas al título del suero de diagnóstico.
OEA. O-Ag somáticos son termoestables y pueden resistir la ebullición durante 2 horas y, al interactuar con AT, forman agregados de grano fino.
Rocín. N-Ag (flagelados) son termolábiles y se degradan rápidamente a 100 °C, así como bajo la influencia del etanol. En las reacciones con el antisuero H, después de 2 horas de incubación, se forman escamas grandes y sueltas (formadas por bacterias que se pegan a los flagelos).
Vi-Ar la bacteria tifoidea es relativamente estable al calor (soporta temperaturas de 60-62 °C durante 2 horas); Cuando se incuba con antisuero Vi, se forma un aglutinado de grano fino.
Reacciones de hemaglutinación directa.
El más simple de estos reacciones - aglutinación glóbulos rojos, o hemaglutinación, utilizados para determinar los grupos sanguíneos en el sistema ABO. Para determinar aglutinación(o falta de ellos) utilice antisueros estándar con aglutininas anti-A y anti-B. La reacción se llama directa, ya que los Ag en estudio son componentes naturales de los glóbulos rojos.
Común con hemaglutinación directa La hemaglutinación viral tiene mecanismos. Muchos virus son capaces de aglutinar espontáneamente eritrocitos de aves y mamíferos; su adición a una suspensión de eritrocitos provoca la formación de agregados a partir de ellos.
Reacción de aglutinación Reacción de aglutinación
(RA) - un método para identificar y cuantificación Ag y At, en función de su capacidad para formar aglomerados visibles a simple vista. En el departamento de enfermedades infecciosas. enfermedades o para otros fines se utiliza para identificar microbios y células desconocidos, para determinar la presencia y cantidad de Ab en la sangre y otros líquidos. El principio de determinación se basa en la especificidad de la interacción entre Ag y Ab y consiste en encontrar lo conocido a partir de lo desconocido. Hay muchas opciones para la AR: métodos cuantitativos y cualitativos, en tubo de ensayo y de vidrio, volumétricos y en gotas, convencionales, acelerados y exprés. Para estadificar la AR necesita: 1) sangre s-ka. En la variante con determinación del tipo (var) de bacteria, se utilizan pruebas de aglutinación industrial, realizadas mediante la inmunización de conejos. En la variante con determinación del tipo de Ab, del test se extrae una muestra de sangre. personas o animales. La solución debe ser estéril y libre de partículas en suspensión. Preparar la dilución básica en solución salina. Debe ser de 2 a 4 veces menor que el título de diagnóstico de esta enfermedad; 2) Ag. En la versión de reacción con determinación del tipo Ab se utilizan kits de diagnóstico industrial; en la variante con determinación de Ag, los diagnósticos se preparan ellos mismos en forma de una suspensión de 1 a 3 mil millones en una solución salina de agar de 18 a 20 horas (con menos frecuencia caldo). microbio inactivado calentándolo en un baño de agua a 70°C durante 1 hora o mediante incubación durante 24 horas a 37°C con formaldehído (concentración final 0,2%); 3) electrolito en forma de solución salina. Técnica de puesta en escena tubo serie volumétrico RA para determinar el título de Ab en s-ki: se preparan varias filas de diluciones de trabajo a partir de la dilución principal de s-ki. El número de filas depende del número de diagnósticos tomados en el experimento; el número y los factores de dilución están determinados por el título diagnóstico de la enfermedad sospechada. La serie debe contener al menos una dilución correspondiente al título de Ab diagnóstico, dos diluciones por debajo y dos diluciones por encima. por ejemplo, si el título diagnóstico es 1:100, entonces con el método volumétrico de estadificación de la AR se deben preparar las siguientes diluciones: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; con el goteo método, no se necesita la primera dilución (1:25), pero se necesita otra dilución más alta: 1:800. investigación científica s-ku está titulado a reacción negativa. Se diluye de la siguiente manera: se vierten 0,25 ml de solución salina en todos los tubos de ensayo, excepto en el primero, cuando la reacción se realiza en un volumen de 0,5 ml, y 0,5 ml cuando la reacción se realiza en un volumen de 1 ml. Vierta 0,25 (0,5) ml de la dilución principal en el 1.º y 2.º tubo de ensayo, del 2.º tubo de ensayo al volumen cortado y crianza sk y aumentado 2 veces, se transfieren 0,25 (0,5) ml al 3º, del 3º al 4º, etc. hasta el último, del corte se vierten 0,25 (0,5) ml en todo para equilibrar los volúmenes. Cada dilución se realiza utilizando una pipeta separada. Si se llevan a cabo varios diagnósticos, para cada uno de ellos se prepara de la misma manera su propia serie de diluciones. Se agrega Diagnosticum a cada dilución del tubo de ensayo en un volumen igual al volumen del tubo de ensayo, como resultado de lo cual se duplica la dilución en cada tubo de ensayo. El experimento corresponde al control s-ki (0,25 - 0,5 ml de la dilución principal de s-ki y la misma cantidad de solución salina) y al control Ag (0,25 - 0,5 ml de diagnosticum y la misma cantidad de solución salina). Si se utilizan varios diagnósticos en el experimento, cada uno tiene su propio control de antígeno. La gradilla con los tubos de ensayo se agita bien y se coloca en un termostato a 37°C durante 4 horas, y luego se deja a temperatura ambiente hasta el día siguiente, después de lo cual se registra la PA en función de la cantidad de sedimento y el grado de aclaramiento de el líquido. La determinación de estos indicadores, dependiendo de la naturaleza de los aglutinados, se realiza a simple vista sobre un fondo oscuro, en un aglutinoscopio o sobre la superficie cóncava de un espejo microscópico. La contabilidad comienza con los controles: el control C debe ser transparente, Ag debe estar uniformemente turbio (después de agitar el tubo). Si los controles son buenos, establezca la presencia y el grado de aglutinación en todos los tubos de ensayo, que están designados con ventajas: sedimento grande y aclaramiento completo del líquido - 4 ventajas; sedimento grande y limpieza incompleta del líquido: 3 ventajas; Un sedimento notable y un aclaramiento notable del líquido son 2 ventajas. Después de eso, se determina el título: la dilución más alta con una intensidad de aglutinación de al menos 2 plus. investigación de títulos s-ki se comparan con el título de diagnóstico de esta enfermedad. Si se examina el título. s-ki es 2 veces menor que el valor de diagnóstico, la reacción se evalúa como dudosa; si el título es igual diagnóstico - cómo débilmente positivo; si es de 2 a 4 veces mayor, se considera positivo; si es de 8 o más veces mayor, se considera marcadamente positivo. Con la amplia distribución de Ab gente sana Para evaluar la AR, se utiliza un aumento en el título de Ab. Para determinar el tipo de Ar en la serie RA, el número de filas debe corresponder al número tomado para la identificación. pruebas de diagnóstico. A partir de la dilución principal de la prueba diagnóstica, se preparan una serie de diluciones dobles sucesivas de la misma forma que en la AR para determinar el título de Ab. Los factores de dilución dependen del título de la prueba aglutinante. En el experimento es necesaria la presencia de una dilución igual al título de la prueba, así como 2, 4, 6, 8 veces menor que éste. Por ejemplo, si el El título de la prueba de diagnóstico es 1 3200, entonces se deben usar diluciones 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200. Se agrega el mismo volumen de Ag probado a las diluciones de la prueba, como resultado, la dilución de la prueba aumenta 2 veces. Se agregan 2 controles de prueba y Ag al experimento. Si en el experimento están involucrados varios s-k, entonces cada uno de ellos necesita su propio control. Una vez completada la reacción, el soporte se agita vigorosamente y se coloca en un termostato a 37 ° C. Los resultados se tienen en cuenta como se describe anteriormente. La evaluación de la reacción tiene características para sacar una conclusión sobre la conformidad del estudio. Ag tomado en el experimento, el título de la reacción debe corresponder al menos a la mitad del título de la prueba de diagnóstico estándar. Los títulos de 1 4 e inferiores se consideran una reacción grupal. goteo md La estadificación de la RA se diferencia de la volumétrica en que s-ku se diluye en un volumen de 1 ml, se utiliza Ag en una concentración más alta (10 mil millones/ml) y se añade 1 - 2 gotas en un tubo de ensayo La dilución del fármaco después de agregar Ag se considera sin cambios. De lo contrario, el método de configuración, registro y evaluación es similar al método volumétrico
(Fuente: Diccionario de términos de microbiología)
ESTUDIOS INMUNOMICROBIOLÓGICOS
Los métodos inmunológicos se utilizan para resolver muchos problemas:
1. Evaluación de la condición sistema inmunitario persona ( estado inmunológico) por definición de cuantitativo y características funcionales células del sistema inmunológico y sus productos.
2. Determinación de la composición y características de los tejidos humanos: grupos sanguíneos, factor Rh, antígenos de trasplante.
3. Diagnóstico de enfermedades infecciosas y resistencia a las mismas mediante la detección y establecimiento de títulos de anticuerpos (serodiagnóstico), la identificación de antígenos patógenos en el organismo y la determinación de reacciones celulares a estos antígenos.
4. Identificación seroide de cultivos de bacterias y virus aislados del cuerpo de humanos y animales.
5. Detección en el cuerpo humano y en ambiente externo cualquier sustancia con propiedades antigénicas o haptenos (hormonas, enzimas, venenos, medicamentos, fármacos, etc.).
6. Identificación de condiciones inmunopatológicas, alergias, trasplantes y reacciones antitumorales.
El proceso de interacción entre antígeno y anticuerpo. reacciones serológicas ocurre en dos fases:
1) específico- la fase de interacción en la que se produce una combinación complementaria de los centros activos de anticuerpos (paratopos) y epítopos de antígenos. Normalmente esta fase dura unos segundos o minutos;
2) no específico- fase de manifestación, caracterizada signos externos formación de complejos inmunes. Esta fase puede desarrollarse desde varios minutos hasta varias horas.
La interacción específica óptima de los anticuerpos con el antígeno se produce en una solución isotónica con un pH cercano al neutro. La reacción antígeno-anticuerpo en un sistema in vitro puede ir acompañada de la aparición de varios fenómenos.
· aglutinación,
· precipitación,
· lisis.
Manifestaciones externas Las reacciones dependen de las propiedades fisicoquímicas del antígeno (tamaño de partícula, estado fisico), clase y tipo de anticuerpos (completos e incompletos), así como condiciones experimentales (consistencia del medio, concentración de sal, pH, temperatura).
La polivalencia de antígenos y anticuerpos asegura la formación de agregados visibles a simple vista. Esto ocurre de acuerdo con la teoría de la formación de redes, según la cual otras moléculas de anticuerpos y antígenos se unen secuencialmente al complejo antígeno-anticuerpo resultante. Como resultado, se forman estructuras de red que se convierten en agregados que precipitan. La naturaleza y gravedad de la reacción dependen de la proporción cuantitativa de antígenos y anticuerpos. Las reacciones más intensas ocurren cuando los reactivos están en proporciones equivalentes.
Requisito previo formación de red (redes): la presencia de más de tres determinantes antigénicos para cada molécula de antígeno y dos centros activos para cada molécula de anticuerpo. Las moléculas de antígeno son nodos de red y las moléculas de anticuerpo son enlaces de conexión. La región de proporciones óptimas (zona de equivalencia) de concentraciones de antígenos y anticuerpos, cuando no se detectan antígenos ni anticuerpos libres en el sobrenadante después de la formación del sedimento.
Los agregados que pueden precipitar se forman cuando los antígenos se combinan con anticuerpos completos. Anticuerpos incompletos(monovalentes) no provocan la formación de estructuras de red y grandes agregados. Para detectar tales anticuerpos, utilice métodos especiales basado en el uso de antiglobulinas (reacción de Coombs).
Las reacciones serológicas, por su alta especificidad y sensibilidad, se utilizan para la detección y cuantificación de antígenos y anticuerpos. La cantidad de inmunorreactivos en las reacciones se expresa mediante el título: la dilución máxima de suero o antígeno a la que todavía se observa una reacción.
Las reacciones serológicas en los laboratorios microbiológicos e inmunológicos se utilizan con dos fines:
1) para la seroidentificación de microorganismos, toxinas y antígenos en general utilizando un anticuerpo conocido (suero de diagnóstico inmunológico),
2) para el serodiagnóstico: determinar la naturaleza del anticuerpo en el suero sanguíneo del paciente para enfermedades bacterianas, virales y, con menor frecuencia, otras enfermedades infecciosas utilizando un antígeno conocido (diagnosticum).
Para determinar el género, la especie y el tipo de antígeno, se requieren pruebas inmunes conocidas. sueros de diagnóstico. Se obtienen mediante la administración repetida a animales (generalmente conejos) en dosis crecientes de microorganismos vivos o muertos, sus productos de descomposición, toxinas neutralizadas o nativas. Después de un determinado ciclo de inmunización de los animales, se realiza una sangría masiva o sangrado total del animal. La sangre recogida en un recipiente estéril se coloca primero en un termostato a una temperatura de 37°C durante 4 a 6 horas para acelerar la coagulación, luego en una nevera durante un día. El suero transparente resultante se aspira en un recipiente estéril, se añaden conservantes, se determina el título de anticuerpos, se comprueba la esterilidad y se vierte en ampollas.
Son usados no adsorbido Y adsorbido sueros de diagnóstico. Los sueros no adsorbidos tienen títulos altos anticuerpos, pero son capaces de dar reacciones grupales (cruzadas).
Los sueros adsorbidos se caracterizan por una estricta especificidad de acción (reaccionan solo con un antígeno homólogo). Los sueros que contienen anticuerpos contra un solo antígeno específico se denominan monorreceptor.
También producen sueros marcados con fluorocromos, enzimas y radioisótopos, que permiten detectar incluso trazas del antígeno con un alto grado de precisión.
Como antígenos (diagnosticums) en reacciones serológicas se utilizan suspensiones de bacterias vivas o muertas, sus productos de degradación, toxinas y virus. En algunos casos se utilizan extractos o antígenos aislados químicamente de microorganismos y tejidos animales.
Todos los métodos inmunomicrobiológicos se pueden dividir en 3 grupos.:
1) basado en interacción directa del antígeno con el anticuerpo(fenómenos de aglutinación, precipitación, hemaglutinación, inmovilización, etc.);
2) basado en interacción mediada de antígeno con anticuerpo(reacciones hemaglutinación indirecta, coaglutinación, aglutinación de látex, aglomeración de carbono, aglutinación de bentonita, fijación del complemento, etc.);
3) usando anticuerpos o antígenos marcados(método de anticuerpos fluorescentes, inmunoabsorción ligada a enzimas y radioinmunoensayos y otros métodos).
REACCIONES DE AGLUTINACIÓN
En estas reacciones intervienen antígenos en forma de partículas (células microbianas, glóbulos rojos y otros antígenos corpusculares), que se unen mediante anticuerpos y precipitan.
Para realizar una reacción de aglutinación.(RA) se necesitan tres componentes: 1) antígeno (aglutinógeno);
2) anticuerpo (aglutinina)
3) electrolito (solución isotónica de cloruro de sodio).
Reacción de aglutinación aproximada (RA)
Se coloca una AR indicativa o en placa sobre un portaobjetos de vidrio a temperatura ambiente. Para ello, utilice una pipeta Pasteur para aplicar por separado sobre el vaso una gota de suero con una dilución de 1:10 a 1:20 y una gota de control de solución isotónica de cloruro de sodio. Se introducen colonias o un cultivo diario de bacterias (una gota de diagnosticum) en ambos asas bacteriológicas y se mezclan bien. Las reacciones se tienen en cuenta visualmente al cabo de unos minutos, a veces utilizando una lupa (x5). Con RA positiva, se observa la aparición de escamas grandes y pequeñas en la gota de suero; con RA negativa, el suero permanece uniformemente turbio.
Reacción de aglutinación detallada para identificar el título de anticuerpos específicos en un paciente.
La AR completa para el serodiagnóstico se realiza en el suero de los pacientes. También se diluye en una solución isotónica de cloruro de sodio de 1:50 - 1:100 a 1:800 o 1:1600, ya que los títulos séricos más bajos pueden contener aglutininas normales que se encuentran en personas sanas o pacientes con otro diagnóstico (título diagnóstico). Como antígeno en esta reacción se utilizan diagnosticums, suspensiones conocidas, generalmente de bacterias muertas.
Primero se vierte 1 ml de solución isotónica de cloruro de sodio en tubos de aglutinación. Al primero de ellos se le añade 1 ml de suero diluido 1:100, y tras mezclarlo se pasa 1 ml al segundo, del segundo al tercero, etc. A las diluciones dobles de suero resultantes se añaden 1-2 gotas de una suspensión bacteriana que contiene 3 mil millones de cuerpos microbianos en 1 ml (de 1:100 a 1:1600 o más). Los tubos se agitan y se colocan en un termostato a 37°C durante 2 horas, luego se mantienen a temperatura ambiente durante 24 horas.
La reacción de aglutinación detallada se tiene en cuenta evaluando cada tubo de ensayo secuencialmente, comenzando por los de control, con agitación suave. No debe haber aglutinación en los tubos de control. La intensidad de la reacción de aglutinación está marcada por los siguientes signos: ++++ - aglutinación completa (aglutinar escamas en un líquido absolutamente transparente); +++ - aglutinación incompleta (escamas en un líquido ligeramente opalescente); ++ - aglutinación parcial (las escamas son claramente visibles, el líquido está ligeramente turbio); + - aglutinación débil y cuestionable: el líquido está muy turbio, las escamas que contiene son difíciles de distinguir; - - ausencia de aglutinación (el líquido está uniformemente turbio).
El título de suero se considera su última dilución, en la que la intensidad de la aglutinación se evalúa en al menos dos ventajas (++)
Conferencia No. 16
Diccionario
DIRECTO - directamente al lado sin nada, sin enlaces posteriores.
INDIRECTAMENTE– a través de otras células, no directamente.
DISMINUCIÓN ≠ AUMENTO (actividad celular).
RECHAZAR - No aceptar, rechazar. El cuerpo rechaza el órgano trasplantado.
Reacciones inmunes.
Las reacciones inmunes son reacciones de interacción específica (unión) de un antígeno y un anticuerpo o de un antígeno y un linfocito T sensibilizado.
Estas reacciones ocurren in vitro (en un tubo de ensayo) e in vivo (en un organismo vivo).
Estas reacciones involucran suero (suero), por eso se llaman serológico.
Las respuestas inmunes se utilizan para diagnóstico de enfermedades infecciosas. En este caso, el componente desconocido está determinado por el componente conocido, que se basa en la especificidad de la interacción del antígeno con el anticuerpo. Si anticuerpo conocido, entonces tú puedes identificar (descubrir) un antígeno desconocido. Si antígeno conocido, entonces puedes usarlo detectar anticuerpos desconocidos.
Así, se utilizan respuestas inmunes:
1) para diagnóstico serológico(serodiagnóstico) de enfermedades - detección en el suero sanguíneo de personas enfermas de anticuerpos contra un agente causante específico de una enfermedad infecciosa (antígeno conocido); Si hay anticuerpos contra cualquier patógeno en el suero sanguíneo de una persona enferma, entonces es este patógeno el que causó esto. infección;
2) para identificación serológica (seroidentificación) de microbios - determinar el tipo de patógeno mediante sueros de diagnóstico inmunológico (anticuerpos conocidos); Si los anticuerpos se unen a un patógeno aislado de una persona enferma, entonces este microbio es idéntico a aquel con el que se inmunizó al animal. recepción suero de diagnóstico inmunológico .
Las reacciones inmunes ocurren en 2 fases:
1) fase especifica– conexión del centro activo del anticuerpo con el grupo determinante del antígeno con la formación de complejos antígeno-anticuerpo; esta fase avanza rápidamente, pero no hay ningún efecto visible;
2) fase no específica- apariencia efecto visible interacción de antígeno y anticuerpo - pérdida borrador(aglutinación) o abundancia de nubes(precipitación), lo que permite ver educación complejos antígeno-anticuerpo y sacar una conclusión sobre cumplimiento antígeno y anticuerpo entre sí.
Las reacciones inmunes incluyen reacción de aglutinación (RA), reacción de precipitación (RP), reacción de fijación del complemento (CFR).
Reacción de aglutinación- se trata del pegado y precipitación de células microbianas u otras (eritrocitos) bajo la influencia de anticuerpos en presencia de un electrolito. El efecto visible de la reacción (fenómeno de aglutinación) es la formación de un precipitado llamado aglutinar.
Esta reacción se utiliza para serodiagnóstico Y seroidentificación. La RA se utiliza para el serodiagnóstico (detección de anticuerpos en el suero sanguíneo de los pacientes) fiebre tifoidea y paratifoidea(Reacción de Vidal), brucelosis(La reacción de Wright) tularemia y leptospirosis. La AR se utiliza para la seroidentificación (determinar el tipo de patógeno aislado de un paciente) cuando infecciones intestinales, tos ferina, cólera y etc.
Componentesreacciones:
1. Un ntigen (aglutinógeno) – Estas son células microbianas u otras células enteras (no destruidas) ( corpuscular, antígeno insoluble). Aglutinógenos- esto es una suspensión vivo o delicado células microbianas o cualquier otra célula. Los antígenos pueden ser conocidos o desconocidos. Un aglutinógeno desconocido es un cultivo microbiano aislado del cuerpo del paciente que debe determinarse. Antígeno conocido – diagnóstico– fármaco de diagnóstico - suspensión de los muertos microbios especies conocidas en solución salina. Esta suspensión nublado (opaco), porque Las células microbianas no se disuelven, sino que permanecen intactas. Se utilizará un aglutinógeno conocido para detectar anticuerpos desconocidos en el suero sanguíneo de los pacientes.
2. Anticuerpo (aglutinina)- encontrado en el suero sanguíneo. Los anticuerpos también pueden ser conocidos o desconocidos. Anticuerpos desconocidos por determinar se encuentran en el suero sanguíneo persona enferma. Los anticuerpos conocidos se encuentran en sueros de diagnóstico inmunológico que se llaman sueros aglutinantes. Se utilizan para la seroidentificación, es decir para determinar un antígeno desconocido, un tipo de cultivo microbiano.
3. Electrólito– Solución de cloruro de sodio al 0,9%.
Obtención de una prueba diagnóstica.
Un cultivo puro de un patógeno de una especie conocida cultivado en agar inclinado (por ejemplo, el agente causante de la fiebre tifoidea) se lava con 3-4 ml de una solución isotónica, se coloca en un tubo estéril, los microbios se matan en algunos manera (por ejemplo, hirviendo y se determina la densidad (debe haber 3 mil millones de células microbianas en 1 ml). Si las células microbianas mueren alta temperatura, luego obtienen O-diagnosticum (antígeno O), pero si se trata con formaldehído, obtienen H-diagnosticum (antígeno H).
Ejemplos de diagnóstico: salmonella diagnosticum, brucelosis diagnosticum, tularemia diagnosticum.
Preparación de sueros aglutinantes.
A los animales (generalmente conejos) se les inyecta por vía parenteral diagnóstico microbiano en dosis crecientes de 5 a 7 veces a intervalos ( realizar hiperinmunización), y luego se les extrae suero sanguíneo, que contiene anticuerpos contra los microbios a partir de los cuales se prepara el diagnóstico. Si la inmunización se realiza con O-diagnosticum, se obtienen sueros O-aglutinantes (contienen anticuerpos O), si con H-diagnosticum se obtienen sueros H-aglutinantes.
Los sueros aglutinantes pueden ser no absorbido o nativo y adsorbido.
Sueros no adsorbidos Contienen anticuerpos grupales contra varias especies de microbios estrechamente relacionadas.
Sueros adsorbidos contienen anticuerpos contra uno o más antígenos de un tipo de microbio. Si el suero contiene anticuerpos contra un solo antígeno, se denomina monorreceptor o monovalente, si a varios antígenos – grupo sueros adsorbidos .
Ejemplos de sueros aglutinantes:Suero monorreceptor H-aglutinante de Salmonella, suero O-aglutinante adsorbido por el grupo Salmonella, suero O-aglutinante anticólera, etc..
Título suero aglutinante: la dilución más alta de suero en la que todavía se detecta una reacción de aglutinación con un antígeno (el título depende de la cantidad de anticuerpos en la sangre: cuantos más anticuerpos, mayor será el título sérico).
Métodos para estadificar la AR.
1. AR aproximada (laminar)– realizado sobre vidrio. Aplicar 2 gotas de suero y 1 gota de solución isotónica en un portaobjetos de vidrio. Se introduce un cultivo microbiano en una de las gotas de suero y en una gota de solución isotónica en un asa y se mezcla. Una gota de solución isotónica. con gérmenes – control de antígenos, una gota sueros libres de gérmenes – control de anticuerpos, una gota sueros con microbios – experiencia. Si el suero contiene anticuerpos correspondientes a antígenos microbianos que se mezclan con él, entonces los anticuerpos y los antígenos se unirán específicamente entre sí y después de 1 a 3 minutos aparecerán escamas aglutinadas en la gota de prueba. El control de antígeno debe estar turbio y el control de anticuerpos debe ser claro. Los resultados de la reacción se registran en función de la aparición de escamas de aglutinado. . Si caen escamas, la reacción es positiva, es decir. Un antígeno corresponde a un anticuerpo y el antígeno se puede utilizar para determinar el anticuerpo o viceversa. Si persiste la turbidez, la reacción es negativa.
2. Reacción de aglutinación detallada - realizado en tubos de ensayo. Primero, prepare diluciones dobles del suero sanguíneo de una persona enferma de 1:50 a 1:1600. Se vierte 1 ml de solución isotónica de cloruro de sodio en 6 tubos de ensayo. Se añade 1 ml de suero sanguíneo del paciente en una dilución de 1:50 al primer tubo de ensayo, se mezcla y se obtiene una dilución de 1:100, luego se transfiere 1 ml de una dilución de 1:100 al segundo tubo de ensayo. y se obtiene una dilución de 1:200, etc. Se mantienen dos tubos para el control de antígenos y suero. Al control de suero agregue solo suero en una dilución de 1:50, al control de antígeno, solo el antígeno. Añadir 0,1 ml de antígeno - diagnosticum (O- o H-) a todos los demás tubos de ensayo y colocar todos los tubos de ensayo en un termostato a 37°C durante 18 a 20 horas. Los resultados de la reacción se registran según la naturaleza, la cantidad de precipitado (aglutinado) formado y el grado de turbidez. La contabilidad se lleva a cabo únicamente con los siguientes resultados en los controles: control de suero - transparente, control de antígeno - turbio. Los anticuerpos O dan un precipitado de grano fino. Anticuerpos H – de grano grueso. A partir del último tubo de ensayo en el que aún es visible la reacción de aglutinación, se establece título diagnóstico.
Durante el serodiagnóstico enfermedades, es importante no sólo detectar anticuerpos específicos contra un patógeno en particular, sino también identificar su cantidad, es decir, establecer tal título de anticuerpos para¿Cuándo podemos hablar de la presencia de una enfermedad provocada por este patógeno? . Este título se denomina título de diagnóstico. Por ejemplo, para diagnosticar la fiebre tifoidea, es necesario identificar un título de anticuerpos de 1:400, pero no menos. Da resultados aún más precisos detección de un aumento de anticuerpos en sueros pareados. El suero del paciente se recoge al inicio de la enfermedad y después de 3 a 5 o más días. Si el título de anticuerpos aumenta al menos 4 veces, entonces podemos hablar de enfermedad actual.
Si se realiza una reacción de aglutinación detallada para la seroidentificación, se utilizan sueros de diagnóstico aglutinantes, diluidos al título o a la mitad de su título. La AR se considera positiva si se detecta aglutinación en una dilución cercana al título del suero de diagnóstico.
