Аглютинацийн урвал нь эсрэгбие (агглютинин) нь бүхэл бүтэн бичил биетний эсүүд эсвэл бусад эсүүдтэй тусгай харилцан үйлчлэлд суурилдаг. Энэхүү харилцан үйлчлэлийн үр дүнд тунадас үүсгэдэг бөөмс-агломератууд (аглютинат) үүсдэг. Бактери, эгэл биетэн, мөөгөнцөр, мөөгөнцөр, риккетси, эритроцит болон амьд ба үхсэн бусад эсүүд наалдуулах урвалд оролцож болно. Урвал нь хоёр үе шаттайгаар явагддаг: эхнийх нь эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиеийн өвөрмөц хослол, хоёр дахь нь өвөрмөц бус, өөрөөр хэлбэл харагдах агглютинат үүсэх явдал юм. Натри хлорид гэх мэт электролитийн агууламжтай үед аглютинатын тунадас үүсдэг. Аглютинат дахь бичил биетүүд амьд хэвээр байгаа ч хөдөлгөөнөө алддаг.
Аглютинацийн урвалыг халдварт өвчний ийлдэс судлалын оношлогоо, тусгаарлагдсан микробын эсрэгтөрөгчийн бүтцийг тодорхойлоход өргөнөөр ашигладаг. Өвчтөн эсвэл тээвэрлэгчийн биеэс тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчийн эсрэгтөрөгчийн бүтцийг тогтоохын тулд амьтдыг (туулай, илжиг, хуц) тодорхой бичил биетээр дархлаажуулах замаар олж авсан тодорхой дархлааны ийлдэсийг ашигладаг. Микробыг тодорхойлох нь шингэсэн эсвэл монорецепторын ийлдэс бүхий шилэн дээр наалдуулах урвал эсвэл тодорхой наалдуулах ийлдэс бүхий туршилтын хоолойд хийгддэг. Шингээсэн ийлдэс нь зөвхөн тухайн микробын өвөрмөц эсрэгтөрөгчийн эсрэгбиемүүдийг агуулдаг ба монорецепторын ийлдэс нь зөвхөн эмгэг төрүүлэгчийн нэг өвөрмөц эсрэгтөрөгчийн эсрэгбиемүүдийг агуулдаг.
Зүйлийн ийлдэс нь тодорхой микробын бүх эсрэгтөрөгчийн эсрэгбиемүүдийг агуулдаг.
Бичил биетний тусгаарлагдсан өсгөвөрт хамаарах байдал энэ төрөлийлдэсийн ампулын шошгон дээр заасан эсрэгбиеийн титрийг мэдэгдэж байгаа ийлдэстэй наалдуулах замаар тодорхойлно. Сийвэнгийн эсрэгбиеийн титр нь түүний сүүлчийн шингэрүүлэлт гэж тооцогддог бөгөөд энэ нь амьтныг дархлаажуулахад ашигладаг микробын өсгөвөрийг наалдуулах явдал хэвээр байна. Шилэн дээрх наалдуулах урвалд шингэрүүлсэн болон монорецепторын ийлдэсийг ихэвчлэн шингэлээгүй хэрэглэдэг.
Өвчтөний цусны ийлдэс дэх эсрэгбие байгаа эсэхийг тодорхойлохдоо натрийн хлоридын изотоник уусмалаар 1: 50-аас 1: 800 ба түүнээс дээш хэмжээгээр шингэлнэ. Шингэрэлт бүрт амьд эсвэл үхсэн микробын суспензийг нэмнэ. Халуун эсвэл формалины нөлөөгөөр үхсэн микроб агуулсан бэлдмэлийг диагностикум гэж нэрлэдэг. Бичил биетний өсгөвөрийг халаах замаар олж авсан оношлогоо нь зөвхөн соматик эсрэгтөрөгч агуулдаг. Зөвхөн формалин хэрэглэх үед тугны эсрэгтөрөгч нь мөн микробуудад хадгалагддаг.
Өвчтөний цусан дахь эсрэгбие байгаа тохиолдолд урвалд авсан оношлогоо нь хоорондоо наалдаж, хоёр туршилтын хоолойд тунадас (аглютинат) үүсдэг. Энэ тохиолдолд наалдуулах урвалын үр дүнг эерэг гэж үзнэ. Натрийн хлоридын изотоник уусмал ба оношилгоог нэмсэн хяналтын хоолойд микробын суспенз нь нэгэн төрлийн байх ёстой (сөрөг наалдуулах урвал).
Лептоспироз зэрэг зарим өвчний агглютинацийн урвалын үр дүнг тооцоолохдоо зөвхөн микроскопийн харанхуй хэсэгт микроскопоор (микроагглютинаци) хийдэг. Өвчний ийлдэс судлалын оношлогоонд үндэслэнэ оношлогооны өвчин. Энэ нь ихэвчлэн 1:100 эсвэл 1:200 сийвэнгийн шингэрүүлэлттэй тохирдог.
Өвчтөний цусны ийлдэс дэх агглютинацийн урвалыг ашиглан эсрэгбие нь хижиг ба паратифийн халууралт (Видал урвал), бруцеллёз (Райтын урвал), туляреми гэх мэт өвчний үед илрүүлж болно.
Кастелланигийн хариу үйлдэл. Зарим нь Халдварт өвчинэсвэл цусны ийлдэс дэх бүлгийн эсрэгтөрөгч агуулсан бичил биетүүдтэй дархлаажуулалт хийх, энэ төрлийн эсрэгбиемүүдээс гадна бүлгийн эсрэгбиеүүд гарч ирдэг. Энэ тохиолдолд үүссэн ийлдэст холбогдох бактерийн зүйлүүд наалддаг.
Кастеллани бүлгийн эсрэгтөрөгчтэй боловч өвөрмөц шинж чанаргүй байдаг төрөл зүйлийн бичил биетний тусламжтайгаар тэдгээрийг арилгахад үндэслэсэн дархлааны ийлдэсээс бүлгийн эсрэгбиемийг шингээх аргыг санал болгосон. Сийвэн дэх ийм бичил биетний өсгөвөр нь өвөрмөц бус бүлгийн эсрэгбиемүүдийг шингээж авдаг бөгөөд центрифугийн аргаар эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолборыг зайлуулсны дараа ийлдэст зөвхөн тодорхой иммуноглобулинууд үлддэг. Кастеллани аргын дагуу эмчилсэн ийлдсийг наалдуулах урвалд өндөр өвөрмөц байдлаар ашиглаж болно.
Өвөрмөц АТ-тай харилцан үйлчлэлийн үр дүнд бактерийн агглютинацийг наалдуулах гэж нэрлэдэг. Шуурхай үнэлгээний шинжилгээнд гурван бүрэлдэхүүн хэсэг шаардлагатай: 1) AG (агглютиноген); 2) AT (агглютинин); 3) электролитийн уусмал (изотоник натрийн хлоридын уусмал). Наалдуулах урвалд зөвхөн корпускуляр эсрэгтөрөгч (нян, эритроцит, эсрэгтөрөгчөөр дүүрсэн латекс тоосонцор) оролцдог.
Шилэн дээрх наалдуулах урвал. Өөх тосгүй шилэн слайд дээр пипеткээр дуслыг хэрэглэнэ. оношлогооны ийлдэс(1:10 - 1:20 ийлдсийг шингэлэх). Судалгаанд хамрагдаж буй бичил биетний цэвэр өсгөвөрийг нян судлалын гогцоо бүхий налуу агарын гадаргуугаас авч, ийлдэсийн дусал руу шилжүүлэн холино. Урвалын үр дүнг 3-5 минутын дараа нүцгэн нүдээр тооцдог. Сийвэнгийн дусалд эерэг хариу үйлдэл үзүүлснээр шилэн слайдыг сэгсрэх үед харанхуй дэвсгэр дээр тодорхой харагдахуйц ширхэгүүд (том эсвэл жижиг) гарч ирдэг. Сөрөг урвалын үед шингэн нь жигд булингартай хэвээр байна.
Туршилтын хоолой дахь наалдуулах урвал. Олон тооны туршилтын хоолойд 1 мл физиологийн давс нэмнэ. Шинжилгээний цусны ийлдэсийг ижил хэмжээгээр эхний туршилтын хоолойд нэмнэ. Цусны сийвэнгийн дараалсан хоёр дахин шингэрүүлэлт бэлтгэж (ийлдэс титрлэх), дараа нь туршилтын хоолой бүрт идэвхгүй бактерийн суспензийг (диагностикум) 2 дусал нэмнэ. Хоолойг 37 градусын температурт термостатад 2 цагийн турш байрлуулна. Урвал нь нүцгэн нүдэнд үл үзэгдэх жижиг ширхэгүүд үүсэх замаар үргэлжилдэг тул үр дүнг тусгай төхөөрөмж - агглютиноскопоор бага зэрэг нэмэгдүүлснээр тэмдэглэдэг. Аглютинацийн эрчмийг "дөрвөн нэмэх" системийн дагуу тооцдог: бүрэн наалдуулах - 4+, хэсэгчилсэн наалдуулах - 3+ эсвэл 2+, эргэлзээтэй үр дүн - +. Шинжилгээний ийлдэс дэх эсрэгбиеийн титрээр 2+-ийн агглютинац ажиглагдсан сүүлчийн шингэрүүлэлт авна.
Туршилтын хоолойд наалдуулах урвал (өргөтгөсөн наалдуулах урвал) нь хижиг, паратифийн халууралт (Видал урвал), бруцеллёз (Райтын урвал), хижиг (Weigl урвал) эмгэг төрүүлэгчдийн эсрэгбиеийн титрийг тодорхойлох зорилгоор хийгддэг.
Агглютинаци (Латин agglutinatio - холбох) - электролитийн дэргэд эсрэгтөрөгч агуулсан корпускуляр хэсгүүдийг (бүхэл эс, латекс тоосонцор г.м.) тусгай эсрэгбиеийн молекулуудтай холбох (холбох) бөгөөд энэ нь хальс эсвэл тунадас (агглютинат) үүсэх замаар төгсдөг. ) нүцгэн нүдэнд харагдахуйц. Тунасны шинж чанар нь эсрэгтөрөгчийн шинж чанараас хамаардаг: тугны бактери нь том ширхэгтэй тунадас, туг ба капсулгүй - нарийн ширхэгтэй, капсул - утаслаг байдаг. Өвөрмөц эсрэгбиемүүдтэй харилцан үйлчлэхэд бактерийн эсвэл бусад эсийн эсрэгтөрөгч, тухайлбал эритроцитууд шууд оролцдог шууд агглютинацийг ялгах; мөн шууд бус буюу идэвхгүй, нянгийн эс буюу эритроцит, эсхүл латекс тоосонцор нь бие даасан бус, харин тэдгээрт шингэсэн харийн эсрэгтөрөгч (эсвэл эсрэгбие)-ийн тээвэрлэгч бөгөөд тэдгээрт хамаарах эсрэгбие (эсвэл эсрэгтөрөгч)-ийг илрүүлэх. Аглютинацийн урвал нь голчлон IgG ба IgM ангиллын эсрэгбиемүүдийг агуулдаг. Энэ нь хоёр үе шаттайгаар явагддаг: нэгдүгээрт, эсрэгбиеийн идэвхтэй төв нь эсрэгтөрөгчийн тодорхойлогчтой тодорхой харилцан үйлчлэлцдэг бөгөөд энэ үе шат электролит байхгүй үед тохиолдож болох бөгөөд дагалддаггүй. харагдахуйц өөрчлөлтүүдурвалын систем. Хоёрдахь үе шатанд - агглютинат үүсэх - электролит байх шаардлагатай бөгөөд энэ нь буурдаг цахилгаан цэнэгэсрэгтөрөгч + эсрэгбиемийг нэгтгэж, тэдгээрийн холбох үйл явцыг хурдасгадаг. Энэ үе шат нь агглютинат үүсэх замаар дуусдаг.
Аглютинацийн урвалыг шилэн эсвэл гөлгөр картон хавтан дээр эсвэл ариутгасан наалдуулах хоолойд хийнэ. Шилэн дээрх наалдуулах урвалыг (шууд ба идэвхгүй) ихэвчлэн ашигладаг хурдасгасан аргаөвчтөний ийлдэс дэх өвөрмөц эсрэгбиемийг илрүүлэх (жишээлбэл, бруцеллёзтой) эсвэл эмгэг төрүүлэгчийг ийлдэс судлалын аргаар тодорхойлох. Сүүлчийн тохиолдолд зөвхөн монорецепторын эсрэгбие эсвэл тэдгээрийн янз бүрийн эсрэгтөрөгчийн багцыг агуулсан сайн цэвэршүүлсэн (шингээсэн) оношлогооны ийлдэсийг ихэвчлэн ашигладаг. Шилэн дээрх наалдуулах урвалын эргэлзээгүй давуу тал нь түүний найрлага дахь энгийн байдал, хоёр бүрэлдэхүүн хэсгийг төвлөрсөн хэлбэрээр ашигладаг тул хэдэн минут, бүр секунд зарцуулдаг явдал юм. Гэсэн хэдий ч энэ нь зөвхөн чанарын үнэ цэнэтэй бөгөөд туршилтын хоолойноос бага мэдрэмжтэй байдаг. Туршилтын хоолой дахь өргөтгөсөн наалдуулах тест нь илүү нарийвчлалтай үр дүнг өгдөг, учир нь энэ нь ийлдэс дэх эсрэгбиеийн тоон агуулгыг тодорхойлох (түүний титрийг тохируулах), шаардлагатай бол эсрэгбиеийн титр нэмэгдсэн баримтыг бүртгэх боломжийг олгодог. үнэ цэнэ. Урвалыг бий болгохын тулд 0.85% NaCl уусмалаар тодорхой хэмжээгээр шингэлсэн ийлдэс, 1 мл-т 1 тэрбум нян агуулсан стандарт диагностикумын суспенз (эсвэл туршилтын өсгөвөр) -ийг тэнцүү хэмжээгээр (ихэвчлэн 0.5 мл) агглютинжуулалтад оруулна. хоолой. Наалдуулах урвалын үр дүнг нягтлан бодох бүртгэлийг хоолойг 37 хэмд 2 цагийн дараа инкубацийн дараа 20-24 цагийн дараа тунадас байгаа эсэх, хэмжээ, тунгалаг байдлын зэрэг гэсэн хоёр шалгуурын дагуу хийдэг. супернатант. Үнэлгээг дөрвөн загалмайн системийн дагуу явуулдаг. Урвал нь ийлдэс ба эсрэгтөрөгчийн хяналтыг заавал дагалддаг. Эмгэг төрүүлэгчийг ийлдэс судлалын тодорхойлохын тулд туршилтын хоолойд наалдуулах нарийвчилсан шинжилгээг ашигладаг тохиолдолд оношилгооны ийлдэсийг титрийнхээ хагасаас доошгүй хэмжээгээр шингэлэх үед урвал эерэг гэж үнэлэгдсэн тохиолдолд энэ нь оношлогооны ач холбогдолтой болно.
Гомолог эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиеийн уусмалыг холих үед наалдуулах урвалын харагдахуйц илрэл үргэлж ажиглагддаггүй гэдгийг анхаарах хэрэгтэй. Тунадас нь урвалын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн тодорхой оновчтой харьцаагаар л үүсдэг. Эдгээр хязгаараас гадна эсрэгтөрөгч эсвэл эсрэгбие их хэмжээгээр нэмэгдвэл хариу үйлдэл ажиглагддаггүй. Энэ үзэгдлийг "прозоны үзэгдэл" гэж нэрлэдэг. Энэ нь наалдуулах урвал болон хур тунадасны урвалд хоёуланд нь ажиглагддаг. Дархлааны урвалд прозон үүсэх нь тэдгээрт оролцдог антигенүүд нь дүрмээр бол политерминант, молекулууд байдагтай холбон тайлбарладаг. IgG эсрэгбиехоёр идэвхтэй төвтэй. Илүүдэл эсрэгбиетэй бол эсрэгтөрөгчийн бөөм бүрийн гадаргуу нь эсрэгбиеийн молекулуудаар хучигдсан байдаг тул чөлөөт тодорхойлогч бүлгүүд үлдэхгүй тул эсрэгбиеийн хоёр дахь, холбоогүй идэвхтэй төв нь өөр эсрэгтөрөгчийн бөөмстэй харилцан үйлчилж, тэдгээрийг хооронд нь холбож чадахгүй. Үзэгдэх агглютинат эсвэл тунадас үүсэх нь эсрэгбиеийн нэг ч чөлөөт идэвхтэй цэг байхгүй тохиолдолд эсрэгтөрөгчийн илүүдэлтэй дарангуйлдаг тул эсрэгтөрөгч + эсрэгбие + эсрэгтөрөгчийн цогцолборыг цаашид нэмэгдүүлэх боломжгүй болно.
Түргэвчилсэн наалдуулах урвалын сонголтууд. Урвал идэвхгүй гемагглютинациба түүний хувилбарууд
Сонгодог наалдуулах урвал нь корпускуляр антигенийг ашиглах явдал юм. Гэсэн хэдий ч уусдаг антигенүүд ч бас оролцож болно. Үүнийг боломжтой болгохын тулд ийм эсрэгтөрөгчийг дархлаа судлалын идэвхгүй хэсгүүдэд шингээдэг. Тээвэрлэгчийн хувьд латекс эсвэл бентонитын тоосонцорыг ашиглаж болох боловч одоогоор амьтан эсвэл хүний эритроцитыг ихэвчлэн ашигладаг бөгөөд таннин, формалин эсвэл бензидиний уусмалаар шингээх шинж чанараа сайжруулдаг. Антигенийг өөртөө шингээж буй эритроцитуудыг энэ эсрэгтөрөгчөөр мэдрэмтгий гэж нэрлэдэг ба дархлааны хариу урвалЭритроцитууд үүнд идэвхгүй оролцдог тул шууд бус буюу идэвхгүй гемагглютинацийн урвал (RNHA эсвэл RPHA).
RPGA нь хагас бөмбөрцөг ёроолтой нүхтэй тусгай полистирол хавтангуудад байрладаг. Үүнийг ашиглах үед ийлдэс судлалын оношлогооЭдгээр цооногуудад шинжилгээний ийлдсийн физиологийн уусмалд хоёр дахин шингэрүүлэлт бэлтгэж, дараа нь мэдрэмтгий эритроцитуудын суспензийг оношилгооны хэрэгсэл болгон нэмнэ. Дөрвөн хөндлөн системийн дагуу 37 0С-д 2 цагийн инкубацийн дараа үр дүнг бүртгэнэ. Эерэг урвалаар наалдсан эритроцитууд нүхний ёроолд суурьшиж, урвуу шүхэр хэлбэрээр жигд бүрхэнэ. At хариу үйлдэлэритроцитууд мөн суурьшиж, шингэн нь тунгалаг болж, тунадас нь нүхний төвд жижиг "диск" шиг харагдана. RPHA дахь сийвэнгийн титр нь түүний сүүлчийн шингэрүүлэлт гэж тооцогддог бөгөөд энэ нь "диск" байгаагийн мэдэгдэхүйц шинж тэмдэггүйгээр тодорхой гемагглютинацийг өгдөг.
Мөн RPHA-ийг шинжилгээний материалаас шууд үл мэдэгдэх нян, вирус, хорт бодис, тухайлбал тахал үүсгэгч, стафилококкийн энтеротоксин гэх мэт хорт бодисыг илрүүлэх нян судлалын оношилгооны түргэвчилсэн арга болгон ашиглаж болно.antibody - antibody erythrocyte diagnosticum. Хэрэв шинжилгээний материал хангалттай хэмжээний мэдэгдэж буй эсрэгтөрөгч агуулсан бол TPHA эерэг байх болно.
RPGA ашиглах сонголтууд нь: эсрэгтөрөгчийг саармагжуулах урвал (RNAg), эсрэгбие саармагжуулах урвал (RNAt), идэвхгүй гемагглютинацийг дарангуйлах урвал (RPHA). Эдгээр урвалуудад антиген ба эсрэгбиеийн эритроцитыг оношлох аргыг хэрэглэдэг. Хоёр бие биенээ хянадаг нэг чиглэлтэй урвалыг нэгэн зэрэг ашиглаж болно, жишээлбэл, эсрэгтөрөгчийн оношлогоо бүхий RPHA, эсрэгбиеийн эритроцитын оношлогоо бүхий RNAg.
Эсрэгбиемийг саармагжуулах урвал (RNAt) нь хүссэн антиген агуулсан суспензийг зохих хэмжээгээр мэдэгдэж буй эсрэгбие агуулсан тодорхой дархлааны ийлдэстэй хольж, 37 ° C-т хоёр цагийн турш өсгөвөрлөхөд оршино. Үүний дараа эсрэгтөрөгчийн эритроцитийн оношлогоог нэмнэ. Холимогийг сэгсэрч, өрөөний температурт үлдээнэ. Үр дүнг 3-4 цагийн дараа, эцэст нь - 18-24 цагийн дараа харгалзан үздэг.Хэрэв шинжилгээний материалд эсрэгтөрөгч байгаа бол энэ нь эсрэгбиемүүдийг холбодог (тэдгээрийг саармагжуулах), улмаар гемагглютинаци үүсэхгүй.
Үүнтэй ижил зарчмын дагуу эсрэгтөрөгчийг саармагжуулах урвал (RNAg) хийгддэг. Зөвхөн энэ тохиолдолд шинжилгээний материалд эсрэгбие илэрсэн байна. Ийм туршилтын материалд нэмсэн тодорхой эсрэгтөрөгч нь түүнд агуулагдах эсрэгбиемүүдтэй холбогддог, өөрөөр хэлбэл эсрэгтөрөгч нь эсрэгбиемүүдээр саармагждаг тул эсрэгбиеийн эритроцит диагностикумыг нэмэхэд гемагглютинаци үүсэхгүй.
Коагглютинацийн урвал. Энэ нь шилэн дээр идэвхгүй, өөрөөр хэлбэл эсийн эсрэгбие тээгч түргэвчилсэн наалдуулах урвалын сонголтуудын нэг юм. Энэ урвал нь өвөрмөц шинж чанарт суурилдаг Staphylococcus aureusЭсийн хананд А уураг агуулсан , IgG ба IgM-ийн Fc фрагментуудтай холбогддог. Үүний зэрэгцээ эсрэгбиеийн идэвхтэй төвүүд чөлөөтэй хэвээр үлдэж, эсрэгтөрөгчийн тодорхой тодорхойлогчтой харилцан үйлчилж чаддаг. Харгалзах эсрэгбиемүүдээр мэдрэмтгий стафилококкийн 2% суспензийн дуслыг шилэн слайд дээр түрхэж, судалсан бактерийн суспензийн дусал нэмнэ. Антиген нь эсрэгбиемүүдтэй тохирч байвал 30-60 секундын дараа эсрэгбиемүүдээр дүүрсэн стафилококкийн тодорхой агглютинац үүсдэг.
Латекс наалдуулах урвал (LAH). Энэхүү оношлогооны систем дэх эсрэгбие тээвэрлэгч нь латексийн жижиг стандарт хэсгүүд юм. Урвалыг микро аргаар шилэн дээр худагт хийдэг. PAH-ийг амжилттай тогтоох гол нөхцөл бол системийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн тоон харьцааг чанд дагаж мөрдөх явдал юм: 50 мкл туршилтын материалд эсрэгбиемээр мэдрэмтгий болсон 10 мкл латекс бэлдмэл нэмнэ. PAH-ийн өвөрмөц чанарыг арилжааны тестийн системд агуулагдах гурван хяналтын тест ашиглан хянадаг: мэдэгдэж байна эерэг хариу үйлдэл, туршилтын материалтай PAH мэдрэмтгий бус (эсрэгбие агуулсан) латексуудад зориулсан латекс суспензийн сөрөг урвал ба чанарын хяналт нь илт. Манай орны хувьд янз бүрийн ширхэгийн диаметртэй (0.3; 0.66; 0.75; 0.8 мкм) монодисперс полистирол латексуудыг тусгай эсрэгбие тээгч болгон ашигладаг. LAH нь шинжилгээний материал дахь бичил биетэн эсвэл тэдгээрийн эсрэгтөрөгчийг хурдан илрүүлэхэд ашиглагддаг.
Антигенийг дархлааны соронзон илрүүлэх. Шилэн дээр түргэвчилсэн наалдуулах урвалын сонголтуудын нэг нь тусгай эсрэгбиемүүдээр бүрхэгдсэн супер соронзон полимер хэсгүүдийг ашиглахтай холбоотой юм. Ийм нэг бөөмс нь бичил биетний 107-108 эсийг холбодог бөгөөд үүнээс болж мэдрэмж энэ арга 5 CFU / мл хүрдэг. Бичил биетний дархлал соронзон илрүүлэх аргыг CPR-тай хослуулан хэрэглэж болно.
Агрегат-гемагглютинацийн урвал (RAGA). Энэ нь өвчтөний цусанд чөлөөтэй эргэлддэг антиген (антигенеми) ба эсрэгбиемүүдтэй холбоотой эсрэгтөрөгчийг хурдан илрүүлэх боломжийг олгодог - эргэлтийн дархлааны цогцолбор (CIC). RAGA-ийн хувьд тохирох эсрэгбиемүүдээр мэдрэмтгий эритроцитуудыг хэрэглэдэг. Эсрэг биетүүд тогтсон мэдрэмтгий эритроцитуудад эсрэгтөрөгч агуулсан өвчтөний цусны ийлдэс нэмэх нь эритроцит ба дархлааны цогцолборыг наалдуулахад хүргэдэг.
Антиглобулин Кумбсын сорил (R. Coombs урвал). Шууд ба идэвхгүй агглютинацийн урвалын тусламжтайгаар бүрэн (хоёр валент) эсрэгбиемүүдийг тодорхойлно. Бүрэн бус (моновалент, блоклох) эсрэгбие нь эдгээр аргуудаар илэрдэггүй, учир нь эсрэгтөрөгчтэй хавсарч түүнийг блоклодог боловч эсрэгтөрөгчийг том конгломерат болгон нэгтгэхэд хүргэж чадахгүй. Бүрэн бус (хориглох) эсрэгбие нь зөвхөн нэг идэвхтэй төвийн үйл ажиллагаа явуулдаг; хоёр дахь идэвхтэй төв нь тодорхойгүй шалтгаанаар ажиллахгүй байна. Бүрэн бус эсрэгбиеийг тодорхойлохын тулд тусгай Кумбсын урвалыг ашигладаг (Зураг 72). Урвалд дараахь зүйлс оролцдог: бүрэн бус эсрэгбие тогтоогдсон өвчтөний ийлдэс, корпускуляр антиген-диагностикум, хүний глобулинтай эсрэгбие агуулсан антиглобулины ийлдэс. Урвал нь хоёр үе шаттайгаар явагдана:
Бүрэн бус эсрэгбиетэй эсрэгтөрөгчийн харилцан үйлчлэл. Ямар ч харагдахуйц илрэл байхгүй. Эхний үе шат нь өвчтөний ийлдсийн үлдэгдэлээс эсрэгтөрөгчийг угаах замаар дуусгавар болно.
Хүний глобулинтай амьтныг дархлаажуулсны үр дүнд олж авсан антиглобулины ийлдэс, эсрэгтөрөгч дээр шингэсэн бүрэн бус эсрэгбиетэй харилцан үйлчлэлцэх. Антиглобулины эсрэгбие нь хоёр валенттай байдаг тул тусдаа эсрэгтөрөгч + цогцолборын хоёр моновалент эсрэгбиемүүдийг холбодог. бүрэн бус эсрэгбие, энэ нь хоорондоо наалдаж, харагдахуйц тунадас үүсэхэд хүргэдэг.
Агглютинаци гэдэг нь электролит (натрийн хлоридын изотоник уусмал) байгаа нөхцөлд эсрэгбиеийн нөлөөн дор микробууд болон бусад эсүүд наалдац, тунадасжилт юм.Наалдамхай бактерийн бүлгүүдийг (эсүүд) агглютинат гэж нэрлэдэг. Аглютинацийн урвалын хувьд дараахь бүрэлдэхүүн хэсгүүд шаардлагатай.
1. Өвчтэй эсвэл дархлаатай амьтны ийлдэс дэх эсрэгбие (агглютинин).
2. Антиген - амьд эсвэл үхсэн микроб, эритроцит эсвэл бусад эсийн суспенз.
3. Изотоник (0.9%) натрийн хлоридын уусмал.
Серодиагнозын наалдуулах тестийг ашигладаг хижиг халууралтба паратиф (Видал урвал), бруцеллёз (Райт ба Хаддлесон урвал), туляреми гэх мэт. Энэ тохиолдолд өвчтөний ийлдэс нь эсрэгбие, мэдэгдэж буй микроб нь эсрэгтөрөгч юм. Микробууд эсвэл бусад эсүүд илрэх үед тэдгээрийн суспенз нь эсрэгтөрөгчийн үүрэг гүйцэтгэдэг бөгөөд мэдэгдэж буй дархлааны ийлдэс нь эсрэгбие болдог. Энэ урвалыг оношлоход өргөн ашигладаг гэдэсний халдвар, хөхүүл ханиалга гэх мэт.
Шуурхай үнэлгээний оношлогооны аргууд
Шилэн дээрх ойролцоогоор RA
Оруулсан RA
(эзэлхүүний арга)
Коагглютинацийн урвал
Шилэн дээрх өргөссөн RA (seroidification)
Шилэн дээрх наалдуулах урвал.Өөх тосгүй шилэн слайд дээр тусгай (шингээсэн) ийлдэс болон изотоник натрийн хлоридын уусмалын хоёр дусал дуслаарай. Шингээгдээгүй ийлдсийг 1:5 - 1:100 харьцаагаар урьдчилан шингэлнэ. Шилэн дээрх дуслыг хооронд нь зайтай байх ёстой. Өсгөвөрийг шилэн дээр гогцоо эсвэл пипеткээр сайтар үрж, дараа нь натрийн хлоридын изотоник уусмал, ийлдэсийн нэг дуслаар нэмж, нэг төрлийн суспенз үүсэх хүртэл хутгана. Өсгөвөргүй ийлдсийн дусал нь ийлдсийн хяналт юм.
Анхаар!Сийвэнгийн өсгөвөрийг эсрэгтөрөгчийн хяналт болох изотоник натрийн хлоридын дусал дусал руу шилжүүлж болохгүй. Урвал тасалгааны температурт 1-3 минутын турш явагдана. Хэрэв ийлдсийн хяналт ил тод хэвээр байвал эсрэгтөрөгчийн хяналтанд жигд булингартай байдал ажиглагдаж, өсгөвөрийг ийлдэстэй хольсон дусал дахь тунгалаг шингэний дэвсгэр дээр агглютинатын ширхэгүүд гарч ирвэл урвалын үр дүнг эерэг гэж үзнэ.
 |
Оношлогооны физиологи
ийлдэс + өсгөвөрийн уусмал + өсгөвөр
Өргөтгөсөн наалдуулах урвал (эзэлхүүний арга).Сийвэнгийн шингэрүүлэлтийг дараалсан, ихэвчлэн хоёр дахин шингэлэх хэлбэрээр бэлтгэдэг. Энэ аргыг бөөнөөр нь гэж нэрлэдэг. Цусны ийлдэс дэх эсрэгбиеийн титрийг тодорхойлохын тулд 6 туршилтын хоолой авна. Эхний хуруу шилэнд 1 мл сийвэнгийн 1:50 харьцаатай анхны шингэрүүлсэн уусмал хийнэ, бүх 6 хуруу шилэнд 1 мл физиологийн уусмал нэмнэ. Эхний туршилтын хоолойд 2 мл эзэлхүүнтэй ийлдсийн 1:100 шингэрүүлэлт авна. Эхний туршилтын хоолойноос 1 мл-ийг хоёр дахь туршилтын хоолой руу шилжүүлж, шингэрүүлэлт нь 1:200 болно. Тиймээс эхний 5 туршилтын хуруу шилэнд (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600) ийлдсийн цуврал шингэрүүлэлт хийнэ. Тав дахь хоолойноос 1 мл-ийг ариутгах уусмал руу хийнэ. Бүх 6 хуруу шилэнд 2 дусал оношилгоо нэмнэ. Зургаа дахь хоолой нь зөвхөн давсны уусмал, оношлогооны бодис агуулсан тул өсгөвөрлөлтийн хяналт юм.
Ийм хяналт нь аяндаа өсгөвөрлөх агглютинацийг арилгахад зайлшгүй шаардлагатай. Туршилтын хоолойг сэгсэрч, 370С-ийн температурт термостатад 2 цагийн турш байрлуулж, дараа нь тасалгааны температурт нэг өдөр байлгасны дараа наалдуулах урвалын үр дүнг тэмдэглэнэ. Амьдралын эхний саруудад хүүхдийн ийлдэстэй наалдуулах урвалыг бий болгохдоо эсрэгбие үүсэх функциональ сул байдлаас шалтгаалан ийлдсийг шингэлэх үед харгалзан үздэг эсрэгбиеийн доод титрийг тодорхойлох шаардлагатай. Сийвэнгийн анхны шингэрүүлэлт 1:25 байна. Эхний туршилтын хоолойд 1:50, дараа нь 1:100 гэх мэт шингэрүүлэлт авна.
At эерэг үр дүнТуршилтын хоолой, үр тариа эсвэл ширхэгтэй наасан эсүүд ил тод шингэний дэвсгэр дээр харагдана.Аглютинат нь "шүхэр" хэлбэрээр аажмаар ёроолд суурьшиж, тунадас дээрх шингэн нь тунгалаг болдог. Антиген хяналт нь жигд булингартай байдаг.
Хурдасны шинж чанараар нарийн ширхэгтэй, бүдүүн ширхэгтэй (хавсархаг) наалдацыг ялгадаг. O-sea-тай ажиллах үед нарийн ширхэгтэй агглютинацийг олж авдаг. Бүдүүн ширхэгтэй - хөдөлгөөнт бичил биетүүд тугны H-sea-тай харилцан үйлчлэх үед. Энэ нь нарийн ширхэгтэй илүү хурдан ирдэг, үүссэн тунадас нь маш сул, амархан эвдэрдэг.
Урвалын эрчмийг дараах байдлаар илэрхийлнэ.
Бүх эсүүд суурьшиж, туршилтын хоолой дахь шингэн нь бүрэн ил тод байна. Урвалын үр дүн нь огцом эерэг;
Тунадас бага, шингэний бүрэн гэгээрэл байхгүй. Урвалын үр дүн эерэг;
Тунадас нь бүр бага, шингэн нь үүлэрхэг. Урвалын үр дүн нь эргэлзээтэй;
хоолойн ёроолд бага зэргийн тунадас, шингэн нь булингартай байдаг. Эргэлзээтэй хариу урвал;
Тунадас байхгүй, шингэн нь эсрэгтөрөгчийн хяналттай адил жигд булингартай байдаг. Сөрөг хариу урвал
Аглютинацийн урвал Аглютинацийн урвал
(RA) - тодорхойлох арга ба тоон үзүүлэлтНүдэнд харагдах бөөгнөрөл үүсгэх чадварт үндэслэн Аг ба Ат. Халдварын клиникт. өвчин эсвэл бусад зорилгоор үл мэдэгдэх микроб, эсийг тодорхойлох, цус болон бусад шингэн дэх эсрэгбие байгаа эсэх, хэмжээг тодорхойлоход ашигладаг. Тодорхойлох зарчим нь Аг ба Ам хоёрын харилцан үйлчлэлийн онцлогт суурилдаг бөгөөд үл мэдэгдэхээс мэдэгдэж буйг олоход оршино. Шуурхай үнэлгээний олон хувилбарууд байдаг: тоон болон чанарын, in vitro болон шилэн дээр, эзэлхүүний болон дуслын, уламжлалт, хурдасгасан, экспресс аргууд. RA-г тохируулахын тулд танд хэрэгтэй: 1) цус.Бактерийн төрлийг (var) тодорхойлох хувилбарт туулайн дархлаажуулалтаар үйлдвэрлэсэн агглютинжуулагч s-ki-г ашигладаг. Ab-ийн төрлийг тодорхойлсон хувилбарт тэд судалгаанаас авсан цусны дээжийг авдаг. хүмүүс эсвэл амьтан. S-ka нь ариутгасан байх ёстой бөгөөд түдгэлзүүлсэн тоосонцор агуулаагүй болно. Үндсэн шингэрүүлэлтийг давсны уусмалд бэлтгэнэ. Энэ өвчний оношлогооны титрээс 2-4 дахин бага байх ёстой; 2) Аг . Ab-ийн төрлийг тодорхойлох урвалын хувилбарт үйлдвэрлэлийн оношлогоог ашигладаг; Ag тодорхойлох хувилбарт оношилгоог 1-3 тэрбум дахь суспенз хэлбэрээр 18-20 цагийн агар (багахан шөл) давсны уусмалд бэлтгэдэг. 70 градусын усан ваннд 1 цаг халааж эсвэл формалинтай 24 цагийн турш 37 градусын инкубацид (эцсийн концентраци 0.2%) идэвхгүйжүүлсэн микроб; 3) давсны электролит.Тохируулах техник бөөн цуваа хоолой s-ke дэх Ab титрийг тодорхойлох RA: s-ki-ийн үндсэн шингэрүүлэлтээс хэд хэдэн эгнээ ажлын шингэрүүлэлтийг бэлтгэдэг. Мөрний тоо нь туршилтанд авсан оношлогооны тооноос хамаарна, тоо, шингэлэх хүчин зүйлсийг сэжигтэй өвчний оношлогооны титрээр тодорхойлно. Мөр нь оношлогооны Ab титртэй тохирох шингэрүүлэлт, доор нь хоёр шингэрүүлэлт ба түүнээс дээш хоёр шингэрүүлэлт агуулсан байх ёстой. жишээлбэл, оношилгооны титр нь 1:100 бол RA-г тохируулах эзэлхүүний аргын тусламжтайгаар s-ki-ийн шингэрүүлэлтүүдийг дараах байдлаар бэлтгэнэ: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1 "400; дуслын аргын хувьд эхний шингэрүүлэлт (1:25) шаардлагагүй, гэхдээ өөр илүү өндөр шингэрүүлэлт шаардлагатай - 1:800. Шинжлэх ухааны судалгаа with-ku титрлэхэд сөрөг хариу үйлдэл үзүүлнэ. Үүнийг дараах байдлаар шингэлнэ: 1-ээс бусад бүх туршилтын хоолойд 0.5 мл-ийн эзэлхүүнтэй урвалыг тохируулахдаа 0.25 мл давсны уусмал, 1 мл-ийн эзэлхүүнтэй урвалыг тохируулах үед 0.5 мл-ийн уусмал хийнэ. s-ki-ийн үндсэн шингэрүүлэлтээс 0.25 (0.5) мл-ийг 1, 2-р туршилтын хоолойд 2-р хоолойноос зүссэн хэмжээс рүү хийнэ. хамт үржүүлж байнаба 2 дахин нэмэгдэж, 0.25 (0.5) мл-ийг 3-р, 3-аас 4-р байранд шилжүүлнэ. Эзлэхүүнийг тэнцвэржүүлэхийн тулд хамгийн сүүлд зүсэлтээс 0.25 (0.5) мл-ийг бүх зүйлд хийнэ. Ki-тэй шингэлэх бүрийг тусдаа пипеткээр гүйцэтгэнэ. Хэрэв туршилтанд хэд хэдэн оношилгоо авсан бол тэдгээр тус бүрт ижил аргаар шингэлэх цуврал бэлтгэнэ. Диагностикумыг s-ki-ийн шингэрүүлэлт бүрт s-ki-ийн эзэлхүүнтэй тэнцүү хэмжээгээр нэмдэг бөгөөд үүний үр дүнд туршилтын хоолой тус бүрийн шингэрүүлэлт 2 дахин нэмэгддэг. Туршлага нь s-ki-ийн хяналт (0.25 -0.5 мл s-ki-ийн үндсэн шингэрүүлэлт ба ижил хэмжээний давсны уусмал) ба AG-ийн хяналт (0.25 - 0.5 мл диагностикум ба ижил хэмжээний давсны уусмал) -тай тохирч байна. Хэрэв туршилтанд хэд хэдэн оношилгоо хийсэн бол тэдгээр нь тус бүр өөрийн хяналттай байдаг. Хоолойн тавиурыг сайтар сэгсэрч, термостатад 370С-т 4 цагийн турш байрлуулж, дараа нь тасалгааны температурт дараагийн өдөр хүртэл үлдээж, дараа нь тунадасны хэмжээ, шингэний тунгалаг байдлын зэрэгт үндэслэн RA-г тооцоолно. . Аглютинатын шинж чанараас хамааран эдгээр үзүүлэлтүүдийг тодорхойлохдоо харанхуй дэвсгэр дээр, агглютиноскоп эсвэл микроскопын толины хонхор гадаргуу дээр нүцгэн нүдээр хийдэг. Нягтлан бодох бүртгэл нь хяналтаас эхэлдэг: хяналт нь ил тод байх ёстой, Ag нь жигд үүлэрхэг байх ёстой (хоолойг сэгсэрсний дараа). Хяналт сайн байвал бүх туршилтын туршилтын хоолойд наалдуулах байдал, зэрэг нь тогтоогдсон бөгөөд энэ нь эерэг талуудаар тодорхойлогддог: их хэмжээний тунадас, шингэний бүрэн тунгалаг байдал - 4 давуу тал; их хэмжээний тунадас, шингэний бүрэн бус гэгээрэл -3 давуу тал; мэдэгдэхүйц тунадас, шингэний мэдэгдэхүйц гэгээрэл - 2 давуу тал. Үүний дараа титрийг тодорхойлно: наалдуулах эрчимтэй хамгийн их шингэрүүлэлт нь дор хаяж 2 нэмэх юм. Шалгалтын титр s-ki-ийг энэ өвчний оношлогооны титртэй харьцуулдаг. Хэрэв судалгааны титр s-ki нь оношлогооноос 2 дахин бага, хариу урвалыг эргэлзээтэй гэж үнэлдэг; хэрэв титр бол оношлогоо - гэх мэтсул эерэг; түүнээс 2-4 дахин их байвал эерэг, 8 ба түүнээс дээш дахин их байвал огцом эерэг байна. At өргөн тархсан нь эрүүл хүмүүсШуурхай үнэлгээг үнэлэхийн тулд At титрийн өсөлтийг ашигладаг. Цуваа RA дахь Ag-ийн төрлийг тодорхойлохын тулд мөрийн тоо нь таних зорилгоор авсан тоотой тохирч байх ёстой. оношлогооны s-to. Оношлогооны s-ki-ийн үндсэн шингэрүүлэлтээс At-ийн титрийг тодорхойлохын тулд RA-ийн нэгэн адил дараалсан хоёр дахин шингэрүүлэлтийг бэлтгэдэг. Шингэрүүлэх хүчин зүйлүүд нь наалдуулах s-ийн титрээс хамаарна.Туршилтанд s-ийн титртэй тэнцэх шингэрүүлэлт байгаа эсэх.1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 Судалгааны ижил хэмжээ Ag байна. s-ki-ийн шингэрүүлэлтүүд дээр нэмснээр үр дүнд нь s-ийн шингэрүүлэлт 2 дахин нэмэгддэг.хэд хэдэн s-to оролцдог бол тэдгээр нь тус бүр өөрийн хяналтыг шаарддаг.Урал дуусмагц tripod. хүчтэй сэгсэрч, 37 ° C-ийн термостатад байрлуулна. Үр дүнг дээр дурдсанчлан харгалзан үзнэ. Ag-тэй туршилтаар авсан урвалын титр нь стандарт оношилгооны титрээс дор хаяж тал хувьтай тохирч байх ёстой. 1 4 ба түүнээс доош титрийг бүлгийн урвал гэж үзнэ. дуслах м d RA-ийн тохиргоо нь эзэлхүүнээс ялгаатай нь s-ku-г 1 мл-ээр шингэлж, Ag-ийг илүү өндөр концентрацид (10 тэрбум / мл) хэрэглэж, 1 нэмнэ. - 2 туршилтын хоолойд дусал Ag нэмсний дараа s-ki-ийн шингэрүүлэлт өөрчлөгдөөгүй гэж үзнэ.Үгүй бол тохируулах, бүртгэх, үнэлэх арга нь эзэлхүүний аргатай төстэй.
(Эх сурвалж: Микробиологийн нэр томьёоны тайлбар толь)
Аглютинацийн урвал (лат. агглютинаци- холболт) - электролитийн дэргэд бие махбодийг (нян, эритроцит гэх мэт) эсрэгбиетэй холбох.
Аглютинацийн урвалэсрэгбиемүүдээр "хамтдаа наасан" эсүүд (жишээлбэл, бактери) -аас бүрдэх үйрмэг эсвэл тунадас хэлбэрээр илэрдэг (Зураг 7.37). Аглютинацийн урвалыг дараахь зорилгоор ашигладаг: өвчтөнөөс тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчийг тодорхойлох; өвчтөний цусны ийлдэс дэх эсрэгбиемийг тодорхойлох; цусны бүлгийг тодорхойлох.
Цагаан будаа. 7.37 а, б. -тэй наалдуулах урвалIgM- эсрэгбие (a) баIgG- эсрэгбие (б)
1. Өвчтөнөөс тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчийг тодорхойлох Ойролцоогоор урвалшилэн дээр наалдуулах (Зураг 7.38). Өвчтөнөөс тусгаарлагдсан бактерийн суспензийг нэг дусал наалдуулах ийлдэс дээр нэмнэ (шингэрэлт 1:20). Хагархай тунадас үүснэ.
Цагаан будаа. 7.38.
Өвчтөнөөс тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчтэй өргөтгөсөн наалдуулах урвал (Зураг 7.39). Өвчтөнөөс тусгаарлагдсан бактерийн суспензийг наалдуулах ийлдсийн шингэрүүлэлтэнд нэмнэ.
Цагаан будаа. 52
2. Өвчтөний цусны ийлдэс дэх эсрэгбиемийг тодорхойлох
Өвчтөний цусны ийлдэстэй өргөтгөсөн наалдуулах урвал (Зураг 7.39). Diagnosticum нь өвчтөний сийвэнгийн шингэрүүлэлтэнд нэмнэ.
- O-diagnosticum-тай агглютинаци (0-эсрэгтөрөгчийг хадгалан халааж үхсэн нян) нь нарийн ширхэгтэй агглютинацийн хэлбэрээр явагддаг.
- H-diagnosticum-тай агглютинаци (нянгууд формалины нөлөөгөөр үхэж, тугны H-эсрэгтөрөгчийг хадгалж байдаг) бүдүүн ширхэгтэй бөгөөд илүү хурдан явагддаг.
3. Цусны бүлгийг тодорхойлох агглютинацийн шинжилгээЦусны бүлгийг тодорхойлох агглютинацийн урвалыг цусны бүлгийн эсрэгтөрөгчийн эсрэг цусны ийлдэс дэх дархлааны эсрэгбие бүхий эритроцитыг агглютинжуулах замаар ABO системийг (Хүснэгт б) бий болгоход ашигладаг. Хяналтууд нь: эсрэгбие агуулаагүй ийлдэс, i.e. ийлдэс AB (IV) цусны бүлэг; A (II), B (III) бүлгийн эритроцитуудад агуулагдах эсрэгтөрөгч. Сөрөг хяналт нь эсрэгтөрөгч агуулдаггүй, өөрөөр хэлбэл O (I) бүлгийн эритроцитуудыг ашигладаг.
Хүснэгт 7.6. ABO цусны бүлгийг тодорхойлох
| Урвалын үр дүн |
бүлэг |
|
|
хамаарах |
||
|
судалсан |
||
|
эритроцитуудтай |
ийлдэс (плазм) |
|
|
Стандарт |
стандарттай |
|
|
сера | ||
