Агглютинацийн урвал (RA) нь электролитийн дэргэд эсрэгбиеийн нөлөөн дор микроб эсвэл бусад эсүүдийн наалдац, тунадасжилт юм. Үүссэн тунадасыг агглютинат гэж нэрлэдэг.
RA ашигладаг:
1. Өвчтөний цусны ийлдэс дэх эсрэгбие илрүүлэх (серодиагностик).
2. Өвчтөнөөс ялгаж авсан эмгэг төрүүлэгч бичил биетний цэвэр өсгөврийн төрөл, сероварыг тодорхойлох (серотип хийх).
Агглютинацийн урвалыг өвчтөний цусны ийлдэс дэх эсрэгбиемүүдийг тодорхойлоход ашигладаг, жишээлбэл, хижиг, паратифийн халууралт (Видал урвал), бруцеллёз (Райт, Хеддлесон урвал), туляреми, лептоспироз болон бусад. Халдварт өвчин, түүнчлэн өвчтөнөөс тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчийг тодорхойлох (гэдэсний халдвар, ханиалгах гэх мэт). Шуурхай үнэлгээ нь цусны бүлэг, Rh хүчин зүйл гэх мэтийг тодорхойлоход ашиглагддаг.
Урвал нь дараахь бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг шаарддаг.
1. Антиген (агглютиноген) нь корпускуляртай байх ёстой, өөрөөр хэлбэл амьд эсвэл үхсэн бичил биетний суспенз (оношлогоо м), эритроцит эсвэл бусад эсүүд юм. Ихэвчлэн агар налуу дээр ургадаг бичил биетний өдөр тутмын өсгөвөрийг ашигладаг. Өсгөвөрийг 3 - 4 мл изотоник уусмалаар угааж, ариутгасан хоолойд шилжүүлж, нягтыг тодорхойлно. Суспенз нь нэгэн төрлийн байх ёстой бөгөөд 1 мл тутамд 3 тэрбум хүртэлх бичил биетний эсийг агуулсан байх ёстой. Үхсэн микробын суспензийг ашиглах - оношилгоо - ажлыг хөнгөвчлөх (үйлдвэрлэлд бэлтгэсэн).
2. Эсрэгбие (агглютинин) нь өвчтөний ийлдэс (серодиагнозын үед) эсвэл наалдуулах ийлдэс (серотипийн үед) олддог. Аглютинжуулагч ийлдэсийг туулайг устгасан бактерийн эсрэг дархлаажуулах замаар гаргаж авдаг.
Аглютинжих титрийлдэс нь туршилтын тодорхой нөхцөлд харгалзах эсрэгтөрөгчтэй урвалд ордог түүний хамгийн дээд шингэрүүлэлт гэж нэрлэгддэг.
Аглютинжуулагч ийлдэс нь уугуул (шингээгдээгүй) болон шингэсэн байж болно. Жижиг шингэрүүлэлтэнд агуулагдах уугуул ийлдэс нь тухайн амьтны ийлдсийг авахын тулд дархлаажуулсан бичил биетний төрөлтэй төдийгүй холбогдох төрлийн бичил биетүүдтэй харилцан үйлчилдэг, учир нь тэдгээр нь бүлгийн эсрэгбие (нийтлэг эсрэгтөрөгчтэй бичил биетний эсрэгбие) агуулдаг. Төрөлхийн ийлдэс нь агглютинацийн нарийвчилсан урвалд (серодиагнозын хувьд) ашиглагддаг бөгөөд энэ нь зөвхөн урвал байгаа эсэхээс гадна эсрэгбиеийн титрийн өсөлтийн динамикийг харгалзан үздэг.
Хэрэв бүлгийн эсрэгбиемүүдийг уугуул ийлдэсээс гаргаж авбал (шинж) бүлгийн эсрэгтөрөгч агуулсан холбогдох бактеритай харилцан үйлчлэлцэж байвал шингэсэн ийлдэс олж авна. Шингээсэн ийлдэс нь зөвхөн нэг эсрэгтөрөгчийн рецепторт эсрэгбие агуулсан монорецептор (эсвэл төрөл бүрийн өвөрмөц) байж болно. Шилэн наалдуулах урвалд шингэсэн ийлдэсийг ашигладаг.
Амьтдыг хөдөлгөөнт бактераар Н-эсрэгтөрөгчөөр дархлаажуулах үед H-эсрэгбие агуулсан H-агглютинжуулагч ийлдэс (жишээлбэл, Salmonella монорецепторын H-агглютинжуулагч ийлдэс) авдаг. О-эсрэгтөрөгчөөр дархлаажуулалт хийснээр O-эсрэгбие агуулсан О-агглютинжуулагч ийлдэс (жишээлбэл, сальмонелла бүлгийн шингэсэн O-агглютинжуулсан ийлдэс, антихолерийн O-агглютинжуулагч ийлдэс) авдаг. H- ба O-эсрэгтөрөгчөөр дархлаажуулалт хийснээр H- ба O-эсрэгбиемүүдтэй ийлдсийг олж авдаг.
Түүнчлэн О-агглютининууд нь нарийн ширхэгтэй агглютинат, H-агглютининууд нь бүдүүн ширхэгтэй тунадас үүсгэдэг.
3. Электролит - изотоник NaCl уусмал (нэрмэл усанд бэлтгэсэн 0.9% натрийн хлоридын уусмал).
Наалдуулах урвалыг гүйцэтгэх хоёр үндсэн арга байдаг: шилэн дээрх урвал (заримдаа индикатор эсвэл хавтангийн урвал гэж нэрлэдэг) ба нарийвчилсан урвал (туршилтын хоолойд)
Шилэн дээр наалдуулах урвал үүсгэх. Хоёр дусал ийлдэс, нэг дусал натрийн хлоридын изотоник уусмалыг өөх тосгүй шилэн слайд дээр хийнэ. Оношлогооны наалдуулах ийлдсийг нэг шингэрүүлэлтээр авдаг бөгөөд энэ нь титрээс хамааран 1:10, 1:25, 1:50 эсвэл 1:100 байна. Судалж буй бичил биетний өсгөвөрийг нэг дусал ийлдэс, дусал изотоник уусмалд гогцоо ашиглан хийж сайтар холино. Бичил биетэнтэй натрийн хлоридын дусал нь эсрэгтөрөгчийн хяналт, бичил биетэнгүй ийлдэс дусал нь ийлдсийн хяналт юм. Та өсгөврийг ийлдэстэй дусалаас NaCl дусал руу шилжүүлж болохгүй. Урвал нь тасалгааны температурт 1-3 минутын турш явагдана. Хэрэв ийлдсийн хяналт тодорхой хэвээр байвал эсрэгтөрөгчийн хяналтанд жигд булингартай байдал ажиглагдаж, өсгөвөрийг ийлдэстэй хольсон дусалд агглютинат ширхэгүүд гарч ирвэл үр дүнг эерэг гэж үзнэ. Хэрэв ийлдэс ба эсрэгтөрөгчтэй дуслаар жигд булингартай байвал энэ нь сөрөг үр дүн юм. Харанхуй дэвсгэр дээр хариу үйлдэл нь илүү тод харагдаж байна.
Ийлдэс
1. эсрэгтөрөгчийн хяналт
2. ийлдэсийг хянах
13.1. Антиген-эсрэгбиеийн урвал ба тэдгээрийн хэрэглээ
Антигенийг нэвтрүүлэх үед бие махбодид эсрэгбие үүсдэг. Эсрэгбие нь тэдгээрийн нийлэгжилтийг үүсгэсэн эсрэгтөрөгчийг нөхөж, түүнтэй холбогдох чадвартай байдаг. Антигенийг эсрэгбиетэй холбох нь хоёр үе шатаас бүрдэнэ. Эхний үе шат нь өвөрмөц бөгөөд эсрэгбиеийн Fab фрагментийн идэвхтэй төвтэй эсрэгтөрөгчийн тодорхойлогчийг хурдан холбодог. Холболт нь ван дер Ваалсын хүч, устөрөгч болон гидрофобик харилцан үйлчлэлээс үүдэлтэй гэдгийг тэмдэглэх нь зүйтэй. Бондын бат бөх чанарыг эсрэгбиеийн идэвхтэй хэсэг ба эсрэгтөрөгчийн эпитопын хоорондох орон зайн харгалзах зэргээр тодорхойлно. Тодорхой үе шат дууссаны дараа илүү удаан үе эхэлдэг - өвөрмөц бус, энэ нь харагдахуйц физик үзэгдлээр илэрдэг (жишээлбэл, наалдуулах үед ширхэгүүд үүсэх гэх мэт).
Дархлааны урвалууд нь эсрэгбие ба эсрэгтөрөгчийн харилцан үйлчлэл бөгөөд эдгээр урвалууд нь өвөрмөц шинж чанартай байдаг. өндөр мэдрэмжтэй. Тэдгээрийг өргөнөөр ашигладаг эмнэлгийн практик. Дархлааны урвалын тусламжтайгаар дараахь асуудлуудыг шийдэж болно.
Мэдэгдэж буй эсрэгтөрөгчөөр үл мэдэгдэх эсрэгбиемийг тодорхойлох (antigenic diagnosticum). Энэ ажил нь өвчтөний цусны ийлдэс дэх эмгэг төрүүлэгчийн эсрэгбиемийг тодорхойлох шаардлагатай үед тохиолддог (серодиагностик). Эсрэгбиемийг олох нь оношийг батлах боломжийг олгодог;
Мэдэгдэж буй эсрэгбиемүүдийг ашиглан үл мэдэгдэх эсрэгтөрөгчийг тодорхойлох (оношлогооны ийлдэс). Энэхүү судалгаа нь өвчтөний материалаас тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчийн өсгөвөрийг тодорхойлох (серотип), түүнчлэн илрүүлэх үед хийгддэг.
цусан дахь микробын эсрэгтөрөгч ба тэдгээрийн хорт бодисууд болон бусад биологийн шингэн. Дархлалын урвалын олон төрлүүд байдаг бөгөөд тэдгээр нь үе шатлал, бүртгэгдсэн үр нөлөөгөөр ялгаатай байдаг. Эдгээр нь наалдуулах урвал (RA), хур тунадасны урвал (RP), комплемент агуулсан урвал (RSC), шошготой бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг ашигласан урвал (RIF, ELISA, RIA).
13.2. Аглютинацийн урвал
Аглютинацийн урвал (RA) нь дархлааны урвалэлектролитийн дэргэд эсрэгтөрөгчийн эсрэгбиетэй харилцан үйлчлэлцэх ба эсрэгтөрөгч нь корпускуляр төлөвт (эритроцит, бактери, шингэсэн антиген бүхий латекс хэсгүүд) байдаг. Аглютинацийн үед корпускулын эсрэгтөрөгч нь эсрэгбиемүүдээр наалддаг бөгөөд энэ нь флокулент тунадас үүсэх замаар илэрдэг. Эсрэгбие нь хоёр идэвхтэй төвтэй, эсрэгтөрөгч нь олон валенттай байдаг тул хальс үүсэх нь үүсдэг. хэд хэдэн антиген тодорхойлогчтой байдаг. Шуурхай үнэлгээ нь өвчтөний материалаас тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчийг тодорхойлох, түүнчлэн өвчтөний цусны ийлдэс дэх эмгэг төрүүлэгчийн эсрэгбиемүүдийг илрүүлэхэд ашиглагддаг (жишээ нь, бруцеллёзын Райт ба Хеддлсоны урвал, хижиг, паратифийн халууралтад Видалийн урвал).
Шуурхай үнэлгээний оношлогооны хамгийн энгийн арга бол шилэн дээрх хариу үйлдэл бөгөөд энэ нь өвчтөнөөс тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчийг тодорхойлоход хэрэглэгддэг. Урвал тогтоогдсон тохиолдолд оношилгооны наалдуулах ийлдсийг шилэн слайд дээр (1:10 эсвэл 1:20 шингэрүүлэлтээр) түрхэж, дараа нь өвчтөний өсгөвөр нэмнэ. Хэрэв дусалд флокулент тунадас гарч ирвэл урвал эерэг байна. Ойролцоох хяналтыг байрлуулсан: ийлдэсийн оронд натрийн хлоридын уусмалын дусал дуслаарай. Хэрэв оношилгооны наалдуулах ийлдэс 1 шингэхгүй бол шингэлнэ (титр хүртэл - агглютинац үүсэх ёстой шингэрүүлэлт), өөрөөр хэлбэл. Өргөтгөсөн RA-г нэмэгдүүлэх замаар туршилтын хоолойд хийнэ
1 Шингээгдээгүй наалдуулах ийлдэс нь нийтлэг (хөндлөн урвалд ордог) эсрэгтөрөгчтэй холбоотой бактериудыг агглютинжуулж чаддаг. Тиймээс тэд ашигладагшингээгдсэн наалдуулах ийлдэс, үүнээс хөндлөн урвалд орох эсрэгбие нь холбогдох бактериудад шингэж арилдаг. Ийм ийлдэс нь зөвхөн тухайн нянгийн өвөрмөц эсрэгбиемүүдийг хадгалдаг.
наалдамхай ийлдсийн шингэрүүлэлт, үүнд өвчтөнөөс тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчийн суспензээс 2-3 дусал нэмнэ. Аглютинацийг тунадасны хэмжээ болон туршилтын хоолой дахь шингэний цэвэршилтийн зэрэглэлээр тооцдог. Оношлогооны сийвэнгийн титртэй ойролцоо шингэрүүлэлтэнд агглютинаци ажиглагдвал урвал эерэг гэж үзнэ. Урвал нь хяналтыг дагалддаг: натрийн хлоридын изотоник уусмалаар шингэлсэн ийлдэс нь тунгалаг байх ёстой, нэг уусмал дахь микробын суспенз нь тунадасгүй жигд үүлэрхэг байх ёстой.
Өвчтөний цусны ийлдэс дэх эмгэг төрүүлэгчийн эсрэгбиемүүдийг тодорхойлохын тулд бүрэн хэмжээний RA-г ашигладаг. Үүнийг тохируулахдаа өвчтөний цусны ийлдэсийг туршилтын хоолойд шингэлж, туршилтын хоолойд ижил хэмжээний оношлогооны суспенз (үхсэн микробын түдгэлзүүлэлт) нэмнэ. Инкубацийн дараа агглютинац үүсэх үед сийвэнгийн хамгийн их шингэрүүлэлт тодорхойлогдоно. тунадас (сийвэнгийн титр) үүссэн. Энэ тохиолдолд O-diagnosticum-тай наалдуулах урвал (халуунаар үхсэн нян, термостат O-эсрэгтөрөгчийг хадгалж байдаг) нарийн ширхэгтэй агглютинацийн хэлбэрээр явагддаг. H-diagnosticum-тай наалдуулах урвал (формальдегидийн нөлөөгөөр үхсэн бактери, термолабил тугны H-эсрэгтөрөгчийг хадгалдаг) бүдүүн бөгөөд илүү хурдан явагддаг.
Шууд бус (идэвхгүй) гемагглютинацийн урвал(RNGA эсвэл RPGA) нь RA-ийн нэг төрөл юм. Энэ арга нь маш мэдрэмтгий байдаг. RNGA-ийн тусламжтайгаар хоёр асуудлыг шийдэж болно: өвчтөний цусны ийлдэс дэх эсрэгбиемийг тодорхойлох, үүнд антиген эритроцит диагностикум, энэ нь мэдэгдэж буй эсрэгтөрөгч шингэсэн эритроцитууд юм; шинжилгээний материалд эсрэгтөрөгч байгаа эсэхийг тодорхойлох. Энэ тохиолдолд урвалыг заримдаа урвуу шууд бус гемагглютинацийн урвал (RONHA) гэж нэрлэдэг. Процедурын явцад шинжилгээний материалд эсрэгбиеийн эритроцит оношилгоо (гадаргуу дээр шингэсэн эсрэгбие бүхий эритроцитууд) нэмнэ. Энэ урвалд цусны улаан эсүүд тээвэрлэгч болж, дархлааны агрегатыг үүсгэхэд идэвхгүй оролцдог. Эерэг хариу үйлдэл үзүүлснээр идэвхгүй наасан цусны улаан эсүүд нүхний ёроолыг хутгуур ирмэгээр бүрхсэн ("шүхэр"); агглютинаци байхгүй тохиолдолд цусны улаан эсүүд нүхний төв завсарт хуримтлагдаж, хурц тодорхойлогдсон ирмэг бүхий авсаархан "товчлуур" үүсгэдэг.
Коагглютинацийн урвалшингэсэн эсрэгбие ашиглан эмгэг төрүүлэгч эсийг (эсрэгтөрөгч) тодорхойлоход ашигладаг Алтан стафилококк,уураг агуулсан. А уураг нь иммуноглобулины Fc фрагменттэй ойр дотно байдаг. Үүний ачаар эсрэгбие нь Fc фрагментээр дамжуулан стафилококктой шууд бусаар холбогддог бөгөөд Fab хэсгүүд нь гадагш чиглэсэн бөгөөд өвчтөнөөс тусгаарлагдсан холбогдох микробуудтай харьцах чадвартай байдаг. Энэ тохиолдолд ширхэгүүд үүсдэг.
Гемагглютинацийг дарангуйлах урвал (HAI)оношлогоонд ашигладаг вируст халдварууд, зөвхөн гемагглютинжуулагч вирусээр үүсгэгдсэн халдварууд. Эдгээр вирусууд нь гадаргуу дээр нь уураг агуулдаг - гемагглютинин нь вируст цусны улаан эсийг нэмэхэд гемагглютинацийн урвалыг (HRA) хариуцдаг. RTGA нь вирусын эсрэгтөрөгчийг эсрэгбиемүүдээр блоклодог бөгөөд үүний үр дүнд вирусууд цусны улаан эсийг агглютинжуулах чадвараа алддаг.
Кумбсын хариу үйлдэл -Бүрэн бус эсрэгбиемийг тодорхойлох RA. Зарим халдварт өвчний үед, жишээлбэл, бруцеллёзын үед эмгэг төрүүлэгчийн бүрэн бус эсрэгбие нь өвчтөний цусны ийлдэст эргэлддэг. Бүрэн бус эсрэгбиеБүрэн эсрэгбие шиг хоёр биш харин нэг эсрэгтөрөгчийг холбодог газар байдаг тул блоклогч эсрэгбие гэж нэрлэдэг. Тиймээс эсрэгтөрөгчийн оношлогооны нэмэлтийг нэмэхэд бүрэн бус эсрэгбие нь эсрэгтөрөгчтэй холбогддог боловч тэдгээрийг хооронд нь нааж болохгүй. Урвалыг харуулахын тулд антиглобулины ийлдэс (хүний иммуноглобулины эсрэгбие) нэмдэг бөгөөд энэ нь урвалын эхний үе шатанд үүссэн дархлааны цогцолборыг (антиген диагностикум + бүрэн бус эсрэгбие) наалдуулахад хүргэдэг.
Шууд бус Кумбсын урвалыг судсан доторх цус задралын үед хэрэглэдэг. Эдгээр өвчтөнүүдийн заримд бүрэн бус нэг валентын эсрэг резус эсрэгбиемүүд илэрдэг. Тэд Rh-эерэг эритроцитуудтай тусгайлан харьцдаг боловч тэдгээрийн наалдацыг үүсгэдэггүй. Тиймээс антиглобулины ийлдэс нь Rh-ийн эсрэг эсрэгбие + Rh-эерэг эритроцитуудын системд нэмэгдэж, эритроцитыг наалдуулах шалтгаан болдог. Оношлогооны хувьд Кумбсын тестийг ашигладаг эмгэгийн нөхцөл, дархлааны гаралтай эритроцитуудын судсан доторх задралтай холбоотой, жишээлбэл, Rh зөрчилдөөнөөс үүссэн нярайн цус задралын өвчин.
Цусны бүлгийг тодорхойлох RAцусны бүлгийн эсрэгтөрөгч A(II), B(III)-ийн эсрэг ийлдэсийн дархлааны эсрэгбиемүүдээр эритроцитыг наалдуулахад үндэслэсэн. Хяналт нь эсрэгбие агуулаагүй ийлдэс, i.e. ийлдэс AB (IV) цусны бүлэг, A (P) ба B (III) бүлгийн эритроцитын эсрэгтөрөгч. 0(I) бүлгийн улаан цусны эсүүд нь эсрэгтөрөгчгүй тул сөрөг хяналт болгон ашигладаг.
Rh хүчин зүйлийг тодорхойлохын тулд Rh эсрэг ийлдэс (дор хаяж хоёр өөр цуврал) ашигладаг. Судалгаанд хамрагдсан эритроцитуудын мембран дээр Rh эсрэгтөрөгч байгаа бол эдгээр эсүүдийн наалдац үүсдэг.
13.3. Хур тунадасны урвал
RP нь электролитийн дэргэд эсрэгбие нь эсрэгтөрөгчтэй харилцан үйлчлэх дархлааны урвал бөгөөд эсрэгтөрөгч нь уусдаг төлөвт байдаг. Хур тунадасны үед уусдаг эсрэгтөрөгчийг эсрэгбиемүүдээр тунадас үүсгэдэг бөгөөд энэ нь тунадасны тууз хэлбэрээр үүлэрхэг байдлаар илэрдэг. Хоёр урвалжийг тэнцүү харьцаагаар холих үед харагдахуйц тунадас үүсэх нь ажиглагддаг. Тэдгээрийн аль нэгийг нь хэтрүүлэх нь тунадасжсан дархлааны цогцолборуудын тоог бууруулдаг. Хур тунадасны урвалыг гүйцэтгэх янз бүрийн арга байдаг.
Цагираган хур тунадасны урвалжижиг диаметртэй хур тунадасны хоолойд байрлуулсан. Туршилтын хоолойд дархлааны ийлдэс нэмж, уусдаг эсрэгтөрөгчийг сайтар давхаргад хийнэ. Хэрэв үр дүн эерэг байвал хоёр уусмалын интерфейс дээр сүүн цагираг үүснэ. Эрхтэн, эд эсэд эсрэгтөрөгч байгаа эсэхийг тодорхойлох, хандыг нь буцалгаж, шүүдэг цагираган хур тунадасны урвалыг термопреципитацийн урвал (Асколи урвал нь халуунд тэсвэртэй боомын эсрэгтөрөгчийг тодорхойлох) гэж нэрлэдэг.
Ouchterlony давхар дархлаа задрах урвал.Энэ урвалыг агар гель дээр хийдэг. Нэг төрлийн зузаантай гель давхаргад худгийг бие биенээсээ тодорхой зайд хайчилж, эсрэгтөрөгч болон дархлааны ийлдэсээр дүүргэнэ. Үүний дараа эсрэгтөрөгч ба эсрэгбие нь гель рүү тархаж, бие биетэйгээ уулзаж, дархлааны цогцолбор үүсгэдэг бөгөөд тэдгээр нь гель дотор тунадасжиж, нарийн шугам хэлбэрээр харагдана.
тэжээл. Энэ урвалыг үл мэдэгдэх эсрэгтөрөгч эсвэл эсрэгбиемийг тодорхойлох, мөн өөр өөр эсрэгтөрөгчийн ижил төстэй байдлыг шалгахад ашиглаж болно: хэрэв эсрэгтөрөгч нь ижил байвал хур тунадасны шугамууд нийлдэг, эсрэгтөрөгч нь ижил биш бол хур тунадасны шугамууд огтлолцдог, эсрэгтөрөгч хэсэгчлэн байвал хур тунадасны шугамууд огтлолцдог. адилхан, салаа үүснэ.
Радиаль дархлааны урвал.Хайлсан агар гель дээр эсрэгбие нэмж, гелийг шилэн дээр жигд давхаргад хийнэ. Гель дотор худгийг хайчилж, өөр өөр концентрацитай антиген уусмалын стандарт хэмжээг нэмнэ. Инкубацийн үед эсрэгтөрөгч нь худгаас цацрагаар тархаж, эсрэгбиемүүдтэй уулзаж, хур тунадасны цагираг үүсгэдэг. Илүүдэл эсрэгтөрөгч нь худагт үлдэх тусам хур тунадасны цагирагийн диаметр аажмаар нэмэгддэг. Энэ аргыг шинжилгээний уусмал дахь эсрэгтөрөгч эсвэл эсрэгбиемийг тодорхойлоход ашигладаг (жишээлбэл, цусны ийлдэс дэх янз бүрийн ангиллын иммуноглобулины концентрацийг тодорхойлох).
Иммуноэлектрофорез.Эсрэгтөрөгчийн хольцыг эхлээд электрофоретик аргаар ялгаж, дараа нь уургийн хөдөлгөөний чиглэлийн дагуу урсдаг ховилд тунадасжуулагч антисерум нэмнэ. Антиген ба эсрэгбие нь бие бие рүүгээ гель рүү тархдаг; харилцан үйлчилж, хур тунадасны нуман шугам үүсгэдэг.
Флокуляцийн урвал(Рамонын дагуу) - антитоксик ийлдэс эсвэл токсоидын идэвхийг тодорхойлоход ашигладаг хур тунадасны урвалын төрөл. Урвалыг туршилтын хоолойд хийнэ. Токсоид ба антитоксин нь тэнцүү харьцаатай туршилтын хоолойд булингар ажиглагддаг.
13.4. Комплемент бэхлэх урвал
Харгалзах эсрэгтөрөгчтэй харилцан үйлчилдэг эсрэгбие нь нэмэлт нэмэлтийг холбодог (1-р систем). Комплементийн бэхэлгээний үзүүлэлт нь цус задралын ийлдэстэй мэдрэмтгий эритроцитууд, i.e. цусны улаан эсийн эсрэгбие (2-р систем). Хэрэв нэмэлт нь 1-р системд тогтоогдоогүй бол, i.e. Хэрэв эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн урвал явагдахгүй бол мэдрэмтгий цусны улаан эсүүд бүрэн задралд орно (сөрөг урвал). Комплемент нь мэдрэмтгий эритроцитуудыг нэмсний дараа 1-р системийн дархлааны цогцолбороор бэхлэхэд цус задрал үүсдэг.
байхгүй (эерэг хариу үйлдэл). Комплемент бэхлэх урвал нь халдварт өвчнийг (заг хүйтэн, тэмбүү, томуу гэх мэт) оношлоход хэрэглэгддэг.
13.5. Саармагжуулах урвал
Микробууд болон тэдгээрийн хорт бодисууд нь хүний биеийн эд, эрхтэнд хортой нөлөө үзүүлдэг. Эсрэгбие нь эдгээр хор хөнөөлтэй бодисуудтай холбогдож, тэдгээрийг хааж чаддаг, өөрөөр хэлбэл. саармагжуулах. Оношлогооны саармагжуулах урвал нь эсрэгбиеийн энэ шинж чанарт суурилдаг. Энэ нь эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн хольцыг амьтан эсвэл мэдрэмтгий туршилтын объектуудад (эсийн өсгөвөр, үр хөврөл) нэвтрүүлэх замаар хийгддэг. Жишээлбэл, өвчтөний материалаас хорт бодисыг илрүүлэхийн тулд 1-р бүлгийн амьтдад өвчтөний материалыг тарьдаг. 2-р бүлгийн амьтдад ижил төстэй материалаар тарьж, зохих антисерумаар урьдчилан эмчилдэг. Материалд хорт бодис байгаа бол 1-р бүлгийн амьтад үхдэг. Хоёр дахь бүлгийн амьтад нь саармагжсан тул хордуулах нөлөө нь өөрөө илэрдэггүй;
13.6. Шошготой эсрэгбие эсвэл эсрэгтөрөгчийг ашиглан урвал
13.6.1. Immunfluorescence урвал (RIF, Koons арга)
Энэ аргыг экспресс оношлогоонд ашигладаг. Энэ нь бичил биетний эсрэгтөрөгч болон эсрэгбиемүүдийг илрүүлэхэд ашиглаж болно.
Шууд RIF арга- эсрэгбиеийн эсрэгтөрөгчтэй харилцан үйлчлэх дархлааны урвал ба эсрэгбие нь фторохромоор тэмдэглэгдсэн байдаг - тодорхой долгионы урттай гэрэлд өртөх үед тодорхой долгионы урттай гэрлийн квантуудыг ялгаруулах чадвартай бодис. Энэ аргын онцлог нь өвөрмөц бус гэрэлтэлтийг илрүүлэхээс зайлсхийхийн тулд урвалд ороогүй бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг арилгах шаардлагатай байдаг. Үүнийг хийхийн тулд урвалд ороогүй эсрэгбиемүүдийг угаана. Үр дүнг флюресцент микроскоп ашиглан үнэлдэг. Ийм гэрэлтсэн ийлдэсээр эмчилсэн түрхэц дэх бактери нь эсийн захын дагуу харанхуй дэвсгэр дээр гэрэлтдэг.
Шууд бус RIF аргаөмнөхөөсөө илүү их ашиглагддаг. Энэ урвалыг хоёр үе шаттайгаар явуулдаг. Эхний шатанд эсрэгтөрөгч харилцан үйлчилдэг
Харгалзах эсрэгбиемүүдтэй харилцан үйлчилж, дархлааны цогцолбор үүсгэдэг. Урвалд ороогүй бүх бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг (өөрөөр хэлбэл дархлааны цогцолборын нэг хэсэг биш) угаах замаар зайлуулах ёстой. Хоёр дахь шатанд үүссэн антиген-эсрэгбиеийн цогцолборыг фторохромжуулсан антиглобулины ийлдэс ашиглан илрүүлдэг. Үүний үр дүнд фторохромоор тэмдэглэгдсэн микроб + нянгийн эсрэг туулайн эсрэгбие + туулайн иммуноглобулины эсрэгбиеийн цогцолбор үүсдэг. Үр дүнг флюресцент микроскоп ашиглан үнэлдэг.
13.6.2. Ферментийн дархлаа судлалын арга буюу шинжилгээ
ELISA - хамгийн түгээмэл орчин үеийн арга, вируст, бактерийн, протозойн халдварыг оношлох, ялангуяа ХДХВ-ийн халдварыг оношлоход ашигладаг. вируст гепатитгэх мэт.
ELISA-ийн олон өөрчлөлтүүд байдаг. Хатуу фазын өрсөлдөх чадваргүй ELISA аргыг өргөн ашигладаг. Энэ нь 96 худагтай полистирол хавтан (хатуу фаз) дээр хийгддэг. Урвалыг явуулахдаа үе шат бүрт урвалд ороогүй бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг угаах шаардлагатай. Эсрэгбиемийг тодорхойлохдоо шинжилгээний цусны ийлдсийг эсрэгтөрөгчийг шингээж авдаг нүхэнд нэмж, дараа нь ферментээр тэмдэглэгдсэн антиглобулины ийлдэс нэмнэ. Ферментийн субстрат нэмэх замаар урвал явагдана. Ферментийн оролцоотойгоор субстрат өөрчлөгдөж, фермент-субстратын цогцолборыг сонгож, урвалд үүссэн бүтээгдэхүүнийг өнгөтэй болгодог. Тиймээс эерэг хариу үйлдэл хийснээр уусмалын өнгө өөрчлөгддөг. Антигенийг тодорхойлохын тулд хатуу фазын зөөвөрлөгчийг эсрэгбиемүүдээр мэдрэмтгий болгож, дараа нь туршилтын материал (антиген) болон ферментийн шошготой ийлдсийг эсрэгтөрөгч рүү дараалан нэмнэ. Урвал үүсэхийн тулд ферментийн субстрат нэмнэ. Уусмалын өнгөний өөрчлөлт нь эерэг урвалаар явагддаг.
13.6.3. Дархлаа арилгах
Энэ арга нь электрофорез ба ELISA-ийн хослол дээр суурилдаг. Immunoblotting хийх үед (Англи хэлнээс blotting. толбо- толбо) эсрэгтөрөгчийн цогц хольцыг эхлээд полиакриламидын гель дэх электрофорезд оруулдаг. Үүний үр дүнд хуваагдсан эсрэг
генийн пептидүүд нь нитроцеллюлозын мембран руу шилждэг. Дараа нь толбо нь тодорхой эсрэгтөрөгчтэй ферментийн шошготой эсрэгбиемүүдээр эмчилдэг, i.e. ELISA blot хийх. Immunoblotting нь ХДХВ зэрэг халдварын оношлогоонд ашиглагддаг.
13.6.4. Дархлааны электрон микроскоп
Энэ арга нь микроскопоос бүрдэнэ электрон микроскопферритин гэх мэт төмөр агуулсан уураг гэх мэт электрон оптикийн нягт бэлдмэлээр тэмдэглэгдсэн зохих дархлааны ийлдэсээр урьдчилан эмчилсэн вирус (бусад микробууд).
13.7. Урсгалын цитометр
Цусны эсийг лазер цитофлуорометрийн үндсэн дээр ялгадаг. Үүнийг хийхийн тулд хүссэн эсийг CD антигентэй флюресцент моноклональ эсрэгбиемүүдээр будна. Цусны дээжийг шошготой эсрэгбиемүүдээр эмчилсний дараа нимгэн хоолойгоор дамжуулж, түүгээр лазер туяа дамжуулдаг бөгөөд энэ нь фторхромыг гэрэлтүүлэхэд хүргэдэг. Флюресценцийн эрч хүч нь эсийн гадаргуу дээрх эсрэгтөрөгчийн нягттай хамааралтай бөгөөд фото үржүүлэгч хоолойг ашиглан тоон хэмжээгээр хэмжиж болно. Хүлээн авсан үр дүнг гистограмм болгон хөрвүүлнэ.
Урсгалын цитометрийг тодорхойлоход ашигладаг дархлааны байдал(лимфоцитын үндсэн популяцийн агууламж, эсийн доторх болон эсийн гаднах цитокинуудын агууламж, NK эсийн функциональ идэвхжил, фагоцитозын идэвхжил гэх мэт).
ДАРХЛАГЫН МИРОБИОЛОГИЙН СУДАЛГАА
Дархлаа судлалын аргыг олон асуудлыг шийдвэрлэхэд ашигладаг.
1. Нөхцөл байдлын үнэлгээ дархлааны системхүн (дархлааны байдал) тодорхойлох замаар тоон болон функциональ шинж чанарууддархлааны тогтолцооны эсүүд ба тэдгээрийн бүтээгдэхүүн.
2. Хүний эд эсийн бүтэц, шинж чанарыг тодорхойлох: цусны бүлэг, Rh хүчин зүйл, шилжүүлэн суулгах эсрэгтөрөгч.
3. Халдварт өвчнийг оношлох, эсрэгбиеийн титр (серодиагностик) тогтоох, тогтоох, бие махбод дахь эмгэг төрүүлэгчийн эсрэгтөрөгчийг тодорхойлох, эдгээр эсрэгтөрөгчийн эсийн урвалыг тодорхойлох.
4. Хүн, амьтны биеэс тусгаарлагдсан бактери, вирүсийн өсгөвөрийг сероид тодорхойлох.
5. Хүний биед болон дотор илрүүлэх гадаад орчинантиген эсвэл гаптен шинж чанартай аливаа бодис (гормон, фермент, хор, эм, эм гэх мэт).
6. Дархлаа судлалын эмгэг, харшил, шилжүүлэн суулгах, хавдрын эсрэг урвалыг тодорхойлох.
Антиген ба эсрэгбие хоорондын харилцан үйлчлэлийн үйл явц серологийн урвалхоёр үе шаттайгаар явагдана:
1) тодорхой- эсрэгбие (паратоп) ба эсрэгтөрөгчийн эпитопуудын идэвхтэй төвүүдийн нэмэлт хослол үүсэх харилцан үйлчлэлийн үе шат. Энэ үе шат нь ихэвчлэн хэдэн секунд эсвэл минут үргэлжилдэг;
2) өвөрмөц бус- илрэлийн үе шат, тодорхойлогддог гадаад шинж тэмдэгдархлааны цогцолбор үүсэх. Энэ үе шат хэдэн минутаас хэдэн цаг хүртэл хөгжиж болно.
Эсрэгбиемүүдийн эсрэгтөрөгчтэй оновчтой өвөрмөц харилцан үйлчлэл нь саармагтай ойролцоо рН бүхий изотоник уусмалд явагддаг. In vitro систем дэх эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн урвал нь хэд хэдэн үзэгдэл дагалдаж болно.
· агглютинаци,
· хур тунадас,
· лизис.
Гадаад илрэлүүдурвал нь эсрэгтөрөгчийн физик-химийн шинж чанараас хамаардаг (бөөмийн хэмжээ, биеийн байдал), эсрэгбиеийн ангилал ба төрөл (бүрэн ба бүрэн бус), түүнчлэн туршилтын нөхцөл (дунд тууштай байдал, давсны концентраци, рН, температур).
Антиген ба эсрэгбиеийн поливалент байдал нь нүцгэн нүдэнд харагдах агрегатууд үүсэхийг баталгаажуулдаг. Энэ нь сүлжээ үүсэх онолын дагуу явагддаг бөгөөд үүний дагуу бусад эсрэгбие ба эсрэгтөрөгчийн молекулууд үүссэн эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолборт дараалан наалддаг. Үүний үр дүнд сүлжээний бүтэц үүсч, тэдгээр нь тунадас үүсгэдэг дүүргэгч болж хувирдаг. Урвалын шинж чанар, ноцтой байдал нь эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиеийн тоон харьцаанаас хамаарна. Хамгийн хүчтэй урвал нь урвалжууд тэнцүү харьцаатай байх үед тохиолддог.
Урьдчилсан нөхцөлтор үүсэх (сүлжээ) - эсрэгтөрөгчийн молекул бүрт гурваас дээш эсрэгтөрөгчийн тодорхойлогч, эсрэгбиеийн молекул бүрт хоёр идэвхтэй төв байдаг. Антиген молекулууд нь торны зангилаа бөгөөд эсрэгбиеийн молекулууд нь холбох холбоос юм. Тунадас үүссэний дараа дээд давхаргад чөлөөт эсрэгтөрөгч, чөлөөт эсрэгбие илрээгүй тохиолдолд эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиеийн концентрацийн оновчтой харьцаа (тэнцүү бүс) бүс.
Антиген нь бүрэн эсрэгбиетэй нэгдэх үед тунадас үүсгэж болох агрегатууд үүсдэг. Бүрэн бус эсрэгбие (моновалент) нь сүлжээний бүтэц, том агрегатууд үүсэх шалтгаан болдоггүй. Ийм эсрэгбиемийг илрүүлэхийн тулд хэрэглэнэ тусгай аргуудантиглобулиныг хэрэглэхэд үндэслэсэн (Кумбсын урвал).
Ийлдэс судлалын шинжилгээ нь өндөр өвөрмөц чанар, мэдрэмжтэй тул илрүүлэхэд ашиглагддаг тоон үзүүлэлтэсрэгтөрөгч ба эсрэгбие. Урвал дахь иммунореагентуудын хэмжээг титрээр илэрхийлдэг - урвал ажиглагдаж байгаа ийлдэс эсвэл эсрэгтөрөгчийн хамгийн их шингэрүүлэлт.
Микробиологийн болон дархлаа судлалын лабораторид ийлдэс судлалын урвалыг хоёр зорилгоор ашигладаг.
1) мэдэгдэж буй эсрэгбие (дархлааны оношлогооны ийлдэс) ашиглан бичил биетэн, хорт бодис, эсрэгтөрөгчийг ерөнхийд нь сероид тодорхойлох зорилгоор;
2) серодиагностикийн хувьд - мэдэгдэж буй антиген (диагностикум) ашиглан нян, вирус, бусад халдварт өвчний эсрэгбиеийн шинж чанарыг өвчтөний цусны ийлдсэнд тодорхойлох.
Антигенийн ерөнхий, төрөл, төрлийг тодорхойлохын тулд мэдэгдэж буй дархлааны оношлогооны ийлдэс шаардлагатай. Эдгээрийг амьтдад (ихэвчлэн туулай) дахин дахин хэрэглэх замаар устгасан эсвэл амьд бичил биетэн, тэдгээрийн задралын бүтээгдэхүүн, саармагжуулсан эсвэл уугуул хорт бодисыг ихэсгэх замаар олж авдаг. Амьтны дархлаажуулалтын тодорхой мөчлөгийн дараа малын их хэмжээний цус алдалт эсвэл нийт цус алдалт хийгддэг. Ариутгасан саванд цуглуулсан цусыг эхлээд 370С-ийн температурт термостатад 4-6 цагийн турш байрлуулж, цусны бүлэгнэлтийг түргэсгэж, дараа нь мөсөн хайрцагт нэг хоног байлгана. Үүссэн ил тод ийлдсийг ариутгасан саванд соруулж, хадгалалтын бодис нэмж, эсрэгбиеийн титрийг тодорхойлж, ариутгалыг шалгаж, ампуланд хийнэ.
Ашиглаж байна шингэдэггүйТэгээд шингэсэноношлогооны ийлдэс. Шингээгдээгүй серумууд байдаг өндөр титрэсрэгбие, гэхдээ бүлгийн (хөндлөн) урвал өгөх чадвартай.
Шингээсэн ийлдэс нь үйл ажиллагааны хатуу өвөрмөц шинж чанартай байдаг (тэдгээр нь зөвхөн гомолог эсрэгтөрөгчтэй урвалд ордог). Зөвхөн нэг өвөрмөц эсрэгтөрөгчийн эсрэгбие агуулсан ийлдэс гэж нэрлэдэг монорецептор.
Тэд мөн фторхром, фермент, радиоизотопоор шошготой ийлдсүүдийг үйлдвэрлэдэг бөгөөд энэ нь эсрэгтөрөгчийн ул мөрийг ч өндөр нарийвчлалтайгаар илрүүлэх боломжийг олгодог.
Амьд эсвэл үхсэн бактерийн суспенз, тэдгээрийн задралын бүтээгдэхүүн, хорт бодис, вирусыг ийлдэс судлалын урвалын эсрэгтөрөгч (оношлогоо) болгон ашигладаг. Зарим тохиолдолд бичил биетэн, амьтны эд эсээс ханд эсвэл химийн аргаар тусгаарлагдсан эсрэгтөрөгчийг хэрэглэдэг.
Дархлалын микробиологийн бүх аргыг 3 бүлэгт хувааж болно:
1) дээр үндэслэсэн эсрэгтөрөгчийн эсрэгбиемтэй шууд харилцан үйлчлэх(агглютинаци, хур тунадас, гемагглютинаци, хөдөлгөөнгүй болох гэх мэт үзэгдлүүд);
2) дээр үндэслэсэн эсрэгтөрөгчийн эсрэгбиемтэй харилцан үйлчлэлцэх(урвал шууд бус гемагглютинаци, коагглютинаци, латекс агглютинаци, нүүрстөрөгчийн бөөгнөрөл, бентонит наалдац, комплемент бэхэлгээ гэх мэт);
3) ашиглах шошготой эсрэгбие эсвэл эсрэгтөрөгч(флюресцент эсрэгбиеийн арга, ферменттэй холбоотой иммуносорбент ба радиоиммун шинжилгээ болон бусад аргууд).
ААГГЛЮТИНАЦИЙН РЕАКС
Эдгээр урвалууд нь тоосонцор (микробын эсүүд, цусны улаан эсүүд болон бусад корпускуляр антигенууд) хэлбэрийн эсрэгтөрөгчийг агуулдаг бөгөөд тэдгээр нь эсрэгбие болон тунадасжилтаар наалддаг.
Агглютинацийн урвалыг гүйцэтгэх(RA) гурван бүрэлдэхүүн хэсэг шаардлагатай: 1) эсрэгтөрөгч (агглютиноген);
2) эсрэгбие (агглютинин)
3) электролит (изотоник натрийн хлоридын уусмал).
Ойролцоогоор наалдуулах урвал (RA)
Үзүүлэлт буюу хавтан, RA-г тасалгааны температурт шилэн слайд дээр байрлуулна. Үүнийг хийхийн тулд Пастерийн пипеткээр 1:10-1:20 шингэрүүлсэн ийлдэс болон натрийн хлоридын изотоник уусмалын хяналтын дуслыг тус тусад нь шилэн дээр хийнэ. Бактерийн колони эсвэл өдөр тутмын өсгөвөрийг (диагностикумын дусал) хоёуланд нь бактериологийн гогцоонд оруулж, сайтар холино. Урвалыг хэдхэн минутын дараа, заримдаа томруулдаг шил (x5) ашиглан нүдээр тооцдог. Эерэг RA-ийн үед ийлдэс дуслаар том, жижиг ширхэгүүд гарч ирэх нь RA-ийн сөрөг шинж тэмдэгтэй, ийлдэс нь жигд үүлэрхэг хэвээр байна.
Нарийвчилсан наалдуулах урвалөвчтөнд тодорхой эсрэгбиеийн титрийг тодорхойлохын тулд.
Серодиагнозын бүрэн хэмжээний RA-г өвчтөний ийлдэст хийдэг. Мөн натрийн хлоридын изотоник уусмалд 1:50 - 1:100-аас 1:800 эсвэл 1: 1600 хүртэл шингэлнэ. Цусны сийвэнгийн доод титр нь хэвийн агглютининыг агуулж болно. эрүүл хүмүүсэсвэл өөр оноштой өвчтөнүүд (оношлогооны титр). Энэ урвалын эсрэгтөрөгчийн хувьд оношилгоог ашигладаг - ихэвчлэн үхсэн бактерийн мэдэгдэж буй суспензүүд.
1 мл изотоник натрийн хлоридын уусмалыг эхлээд наалдуулах хоолойд хийнэ. Эхнийх нь дээр 1:100 харьцаагаар шингэлсэн 1 мл ийлдэс нэмж, хольсны дараа 1 мл-ийг хоёр дахь, хоёр дахь, гурав дахь гэх мэтээр шилжүүлнэ. 1 мл-т 3 тэрбум бичил биет агуулсан бактерийн суспензийн 1-2 дуслыг хоёр дахин шингэрүүлсэн ийлдэс (1:100-аас 1:1600 ба түүнээс дээш) нэмнэ. Хоолойнуудыг сэгсэрч, термостатад 37 градусын температурт 2 цагийн турш байрлуулж, дараа нь тасалгааны температурт 24 цагийн турш байлгана.
Нарийвчилсан наалдуулах урвалыг хяналтын хоолойноос эхлээд зөөлөн сэгсрэх замаар туршилтын хоолой бүрийг дарааллаар үнэлнэ. Хяналтын хоолойд наалдац байх ёсгүй. Агглютинацийн урвалын эрчмийг дараах шинж тэмдгээр тэмдэглэнэ: ++++ - бүрэн наалдуулах (үнэмлэхүй тунгалаг шингэн дэх наалдсан ширхэгүүд); +++ - бүрэн бус наалдуулах (бага зэрэг цайвар шингэн дэх хайрс); ++ - хэсэгчилсэн наалдуулах (хавсаргууд тод харагдаж, шингэн нь бага зэрэг үүлэрхэг); + - сул, эргэлзээтэй наалдуулах - шингэн нь маш үүлэрхэг, доторх ширхэгүүд нь ялгагдахгүй; - - наалдуулахгүй байх (шингэн нь жигд үүлэрхэг).
Цусны сийвэнгийн титрийг сүүлчийн шингэрүүлэлт гэж үздэг бөгөөд агглютинацийн эрчмийг дор хаяж хоёр нэмэх (++) гэж үнэлдэг.
Аглютинацийн урвал Аглютинацийн урвал
(RA) нь энгийн нүдэнд харагдах бөөгнөрөл үүсгэх чадварт тулгуурлан Ag болон Ab-ийг тодорхойлох, тоо хэмжээг тодорхойлох арга юм. Халдварт өвчний тасагт. өвчин эсвэл бусад зорилгоор үл мэдэгдэх микроб, эсийг тодорхойлох, цус болон бусад шингэн дэх эсрэгбие байгаа эсэх, хэмжээг тодорхойлоход ашигладаг. Тодорхойлох зарчим нь Ag ба Ab хоёрын харилцан үйлчлэлийн онцлогт суурилдаг бөгөөд үл мэдэгдэхээс мэдэгдэж буйг олоход оршино. Шуурхай үнэлгээний олон сонголт байдаг: тоон ба чанарын, туршилтын хоолой ба шил, эзэлхүүн ба дусал, уламжлалт, хурдасгасан, экспресс аргууд. RA-ийг үе шатанд гаргахын тулд танд хэрэгтэй: 1) цус.Бактерийн төрлийг (var) тодорхойлох хувилбарт туулайг дархлаажуулах замаар үйлдвэрлэсэн агглютинжуулах туршилтыг ашигладаг. Ab-ийн төрлийг тодорхойлох хувилбарт цусны дээжийг шинжилгээнээс авдаг. хүмүүс эсвэл амьтан. Уусмал нь ариутгасан, түдгэлзүүлсэн тоосонцоргүй байх ёстой. Үндсэн шингэрүүлэлтийг давсны уусмалд бэлтгэнэ. Энэ өвчний оношлогооны титрээс 2-4 дахин бага байх ёстой; 2) Аг. Ab төрлийг тодорхойлох урвалын хувилбарт үйлдвэрлэлийн оношлогооны иж бүрдлийг ашигладаг; Ag-ийг тодорхойлох хувилбарт оношилгоог 18-20 цагийн турш давсны уусмалд 1-3 тэрбум суспенз хэлбэрээр бэлтгэдэг агар (багахан шөл) сорил. 700С-ийн усан ваннд 1 цаг халааж эсвэл формальдегид (эцсийн концентраци 0.2%) 370С-т 24 цагийн турш өсгөвөрлөх замаар идэвхгүйжүүлсэн микроб; 3) давсны уусмал хэлбэрээр электролит.Тайзны техник эзэлхүүний цуваа хоолой s-ki дахь Ab титрийг тодорхойлох RA: s-ki-ийн үндсэн шингэрүүлэлтээс хэд хэдэн эгнээ ажлын шингэрүүлэлтийг бэлтгэдэг. Мөрний тоо нь туршилтанд орсон оношлогооны тооноос хамаарна, шингэрүүлэх хүчин зүйл нь сэжигтэй өвчний оношлогооны титрээр тодорхойлогддог. Цуврал нь наад зах нь оношлогооны Ab титртэй тохирох шингэрүүлэлт, доор нь хоёр шингэрүүлэлт, түүнээс дээш хоёр шингэрүүлэлт агуулсан байх ёстой. жишээлбэл, оношилгооны титр нь 1:100 бол RA-ийн хэмжээст аргыг ашиглан дараах шингэрүүлэлтийг бэлтгэнэ: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; дуслаар аргын хувьд эхний шингэрүүлэлт (1:25) шаардлагагүй, гэхдээ өөр илүү өндөр шингэрүүлэлт шаардлагатай - 1:800 B. Шинжлэх ухааны судалгаа s-ku нь титрлэгддэг сөрөг хариу үйлдэл. Үүнийг дараах байдлаар шингэлнэ: 0.25 мл давсны уусмалыг 1-ээс бусад бүх туршилтын хоолойд хийнэ, урвалыг 0.5 мл-ийн эзэлхүүнээр, 1-ийн эзэлхүүнтэй үед 0.5 мл-ийг хийнэ. мл. 0.25 (0.5) мл үндсэн шингэрүүлэлтийг 1 ба 2-р туршилтын хоолойд 2-р хоолойноос зүссэн эзэлхүүн рүү хийнэ. үржлийн s-kба 2 дахин нэмэгдэж, 0.25 (0.5) мл-ийг 3-р, 3-аас 4-р зэрэгт шилжүүлнэ. Хамгийн сүүлд зүсэлтээс 0.25 (0.5) мл-ийг эзэлхүүнийг тэнцвэржүүлэхийн тулд бүх зүйлд хийнэ. Шингэрүүлэх бүрийг тусдаа пипеткээр гүйцэтгэдэг. Хэрэв хэд хэдэн оношилгоог туршилтанд оруулбал тэдгээр тус бүрийн хувьд өөрийн цуврал шингэрүүлэлтийг ижил аргаар бэлтгэдэг. Диагностикумыг туршилтын хоолойн шингэрүүлэлт бүрт туршилтын хоолойн эзэлхүүнтэй тэнцүү хэмжээгээр нэмдэг бөгөөд үүний үр дүнд туршилтын хоолой тус бүрийн шингэрүүлэлт хоёр дахин нэмэгддэг. Туршилт нь s-ki хяналт (0.25 - 0.5 мл s-ki үндсэн шингэрүүлэлт ба ижил хэмжээний давсны уусмал) ба Ag хяналт (0.25 - 0.5 мл диагностикум ба ижил хэмжээний давсны уусмал) -тай тохирч байна. Туршилтанд хэд хэдэн оношлогооны аргыг ашигладаг бол тус бүр өөрийн гэсэн эсрэгтөрөгчийн хяналттай байдаг. Туршилтын хоолой бүхий тавиурыг сайтар сэгсэрч, 37 хэмийн температурт термостатад 4 цагийн турш байрлуулж, дараа нь тасалгааны температурт дараагийн өдөр хүртэл байлгасны дараа тунадасны хэмжээ, цэвэршилтийн зэрэг дээр үндэслэн PA-г тэмдэглэнэ. шингэн. Аглютинатын шинж чанараас хамааран эдгээр үзүүлэлтүүдийг тодорхойлохдоо харанхуй дэвсгэр дээр, агглютиноскоп эсвэл микроскопын толины хонхор гадаргуу дээр нүцгэн нүдээр хийдэг. Нягтлан бодох бүртгэл нь хяналтаас эхэлдэг: хяналтын С нь ил тод байх ёстой, Ag нь жигд үүлэрхэг байх ёстой (хоолойг сэгсэрсний дараа). Хэрэв хяналт сайн байвал бүх туршилтын хоолойд наалдуулах байдал, зэргийг тогтооно, эдгээрийг нэмэлтээр тэмдэглэнэ: их хэмжээний тунадас, шингэнийг бүрэн цэвэрлэх - 4 давуу тал; их хэмжээний тунадас, шингэнийг бүрэн цэвэрлээгүй - 3 давуу тал; мэдэгдэхүйц тунадас, шингэний мэдэгдэхүйц цэвэршилт нь 2 давуу тал юм. Үүний дараа титрийг тодорхойлно: наалдуулах эрчимтэй хамгийн их шингэрүүлэлт нь дор хаяж 2 нэмэх юм. Титр судалгаа s-ki-ийг энэ өвчний оношлогооны титртэй харьцуулсан. Хэрэв титрийг шалгаж үзвэл. s-ki нь оношлогооны утгаас 2 дахин бага, хариу урвалыг эргэлзээтэй гэж үнэлдэг; хэрэв титр тэнцүү бол оношлогоо - яажсул эерэг; 2-4 дахин их бол 8 ба түүнээс дээш бол эерэг гэж үзнэ. Эрүүл хүмүүст Ab нь өргөн тархсан тохиолдолд RA-ийг үнэлэхэд Ab titer-ийн өсөлтийг ашигладаг. Цуваа RA дахь Ar-ийн төрлийг тодорхойлохын тулд мөрийн тоо нь тодорхойлоход авсан тоотой тохирч байх ёстой. оношлогооны тестүүд. Оношлогооны шинжилгээний үндсэн шингэрүүлэлтээс эхлээд хоёр дахин дараалсан шингэрүүлэлтүүдийг RA-тай ижил аргаар бэлтгэж, Ab титрийг тодорхойлно. Шингэрүүлэх хүчин зүйлүүд нь агглютинжуулсан тестийн титрээс хамаарна Оношлогооны шинжилгээний титр 13200 байвал 13200, 11600, 1800, 1400, 1200 шингэрүүлэлтийг хэрэглэнэ. Шинжилгээнд хамрагдсан Ag-ийн ижил хэмжээний хэмжээг шинжилгээний шингэрүүлэлтэнд нэмж, үр дүнд нь шингэрүүлэлт хийнэ. туршилт 2 дахин нэмэгддэг ба Ag туршилтанд хэд хэдэн s-k орсон бол тэдгээр нь тус бүрдээ өөрийн хяналтыг хийх шаардлагатай 37 ° C-д термостат. Судалгааны нийцлийн талаар дүгнэлт гаргахын тулд урвалын үнэлгээг дээр дурдсанчлан харгалзан үзнэ. Туршилтанд авсан урвалын титр нь стандарт оношилгооны титрээс дор хаяж тал хувьтай тохирч байх ёстой 1 4 ба түүнээс доош титрийг бүлгийн урвал гэж үзнэ Drip mdШуурхай үнэлгээний үе шат нь эзэлхүүнээс ялгаатай нь s-ku-г 1 мл-ээр шингэлж, Ag-ийг илүү өндөр концентрацид (10 тэрбум / мл) хэрэглэж, нэг удаад 1 нэмнэ. - 2 туршилтын хоолойд дусаана Ag-ийг нэмсний дараа шингэлэх эмийг өөрчлөгдөөгүй гэж үзнэ. Эс тэгвэл найруулах, бүртгэх, үнэлэх арга нь эзэлхүүний аргатай төстэй
(Эх сурвалж: Микробиологийн нэр томьёоны толь бичиг)
Аглютинацийн урвал.
Аглютинацийн урвал нь электролитийн дэргэд эсрэгбиеийн нөлөөн дор бичил биетний эсүүд (эритроцитууд) нааж, тунадас үүсгэдэг. Урвалын харагдахуйц нөлөө (наалдацын үзэгдэл) нь агглютинат гэж нэрлэгддэг тунадас үүсэх явдал юм.
Энэ урвалыг ашигладаг серодиагностикТэгээд сероид тодорхойлох. RA нь серодиагностик (өвчтөний цусны ийлдэс дэх эсрэгбие илрүүлэх) зорилгоор ашиглагддаг. хижиг халууралтболон паратиф(Видаль урвал), бруцеллёз(Райтын хариу үйлдэл), туляреми ба лептоспироз. Шуурхай үнэлгээний шинжилгээг сероидентификацияд (өвчтөнөөс тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчийн төрлийг тодорхойлох) ашигладаг гэдэсний халдвар, хөхүүл ханиалга, холергэх мэт.
Бүрэлдэхүүн хэсгүүдхариу үйлдэл:
1. А нтиген (агглютиноген) -Эдгээр нь бүхэл бүтэн (устгаагүй) бичил биетэн эсвэл бусад эсүүд ( корпускуляр, уусдаггүй антиген). Агглютиноген- энэ бол түдгэлзүүлэлт юм амьдэсвэл алагдсанбичил биетний эсүүд эсвэл бусад эсүүд. Антиген нь үл мэдэгдэх эсвэл мэддэг байж болно. Үл мэдэгдэх агглютиноген нь өвчтөний биеэс тусгаарлагдсан бичил биетний өсгөвөр бөгөөд үүнийг тодорхойлох шаардлагатай. Мэдэгдэж буй эсрэгтөрөгч - оношлогоо- оношилгооны эм нас барагсдыг түдгэлзүүлэхмикроб мэдэгдэж байгаа төрөл зүйлдавсны уусмалд. Энэ түдгэлзүүлэлт үүлэрхэг (тунгалаг), учир нь бичил биетний эсүүд уусдаггүй боловч бүрэн бүтэн хэвээр үлддэг. Мэдэгдэж буй агглютиногенийг өвчтөний цусны ийлдэс дэх үл мэдэгдэх эсрэгбиемүүдийг илрүүлэхэд ашиглана.
2. Эсрэгбие (агглютинин)- цусны ийлдэсээс олддог. Эсрэгбие нь үл мэдэгдэх эсвэл мэдэгдэж байж болно. Тодорхойлогдох үл мэдэгдэх эсрэгбие нь цусны ийлдэст байдаг өвчтэй хүн. Мэдэгдэж буй эсрэгбие нь олддог дархлаатай оношлогооны ийлдэс гэж нэрлэдэг наалдуулах ийлдэс. Тэдгээрийг серог тодорхойлоход ашигладаг, i.e. үл мэдэгдэх эсрэгтөрөгчийг тодорхойлох - бичил биетний өсгөвөрлөх төрөл.
3. Электролит- 0.9% натрийн хлоридын уусмал.
RA-г тодорхойлох аргууд.
1. Ойролцоогоор (ламеляр) РА- шилэн дээр хийсэн. 2 дусал ийлдэс, 1 дусал изотоник уусмалыг шилэн слайд дээр хийнэ. Микробын өсгөвөрийг ийлдэсийн аль нэг дусал болон изотоник уусмалын дусал руу гогцоонд хийж, холино. Нэг дусал изотоник уусмал нянгаар – эсрэгтөрөгчийн хяналт, дусал нян агуулаагүй серумууд – эсрэгбиеийн хяналт, дусал микроб бүхий ийлдэс – туршлага.Хэрэв ийлдэс нь түүнтэй холилддог бичил биетний эсрэгтөрөгчтэй тохирох эсрэгбие агуулсан бол эсрэгбие ба эсрэгтөрөгч нь бие биетэйгээ тусгайлан холбогдож, 1-3 минутын дараа агглютинатын ширхэгүүд шинжилгээний дусал дээр гарч ирнэ. Эсрэгтөрөгчийн хяналт нь үүлэрхэг, эсрэгбиеийн хяналт нь тодорхой байх ёстой. Урвалын үр дүнг агглютинатын ширхэгийн харагдах байдал дээр үндэслэн тэмдэглэнэ . Хэрэв ширхэгүүд унавал хариу үйлдэл нь эерэг, өөрөөр хэлбэл. Антиген нь эсрэгбиемтэй тохирч, эсрэгтөрөгчийг эсрэгбиемийг тодорхойлоход ашиглаж болно. Хэрэв үүлэрхэг хэвээр байвал хариу үйлдэл нь сөрөг байна.
2. Нарийвчилсан наалдуулах урвал -туршилтын хоолойд хийсэн. Эхлээд өвчтэй хүний цусны ийлдэсийг 1:50-1:1600-ийн хооронд 2 дахин шингэлнэ. 1 мл изотоник натрийн хлоридын уусмалыг 6 туршилтын хоолойд хийнэ. Өвчтөний цусны ийлдсээс 1:50 харьцаатай 1 мл-ийг эхний туршилтын хоолойд нэмж, хольж, 1:100 шингэрүүлсний дараа 1 мл 1:100 шингэрүүлсэн уусмалыг хоёр дахь хуруу шилэнд хийнэ. ба 1:200-ийн шингэрүүлэлт гэх мэт. Антиген болон ийлдэсийг хянахын тулд хоёр хуруу шилийг хадгалдаг. Сийвэнгийн хяналтанд зөвхөн ийлдэсийг 1:50-ийн шингэрүүлэлтээр, эсрэгтөрөгчийн хяналтанд зөвхөн эсрэгтөрөгчийг нэмнэ. Бусад бүх туршилтын хоолойд 0.1 мл антиген - diagnosticum (O- эсвэл H-) нэмээд бүх туршилтын хоолойг 37 ° C температурт 18-20 цагийн турш термостатад хийнэ. Урвалын үр дүнг шинж чанар, үүссэн тунадас (аглютинат) хэмжээ, булингаржилтын зэрэг дээр үндэслэн тэмдэглэнэ. Нягтлан бодох бүртгэлийг зөвхөн хяналтын үр дүнгийн дагуу хийдэг: ийлдсийн хяналт - ил тод, эсрэгтөрөгчийн хяналт - үүлэрхэг. O-эсрэгбие нь нарийн ширхэгтэй тунадас үүсгэдэг. H-эсрэгбие - бүдүүн ширхэгтэй. Агглютинацийн урвал харагдаж байгаа сүүлчийн туршилтын хоолойд үндэслэн үүнийг тогтооно оношлогооны титр.
Өвчин эмгэгийг оношлохдоо зөвхөн тодорхой эмгэг төрүүлэгчийн эсрэгбиемүүдийг илрүүлэхээс гадна тэдгээрийн тоо хэмжээг тодорхойлох нь чухал юм. Энэ эмгэг төрүүлэгчээс үүдэлтэй өвчин байгаа эсэх талаар ярих боломжтой эсрэгбиеийн титрийг тогтооно. Энэ титрийг оношилгооны титр гэж нэрлэдэг. Жишээлбэл, хижиг өвчнийг оношлохын тулд 1:400 эсрэгбиеийн титрийг тодорхойлох хэрэгтэй, гэхдээ үүнээс багагүй байна. Хосолсон ийлдэс дэх эсрэгбиеийн өсөлтийг илрүүлснээр илүү нарийвчлалтай үр дүн нь өвчний эхэн үед болон 3-5 ба түүнээс дээш хоногийн дараа цуглуулдаг. Хэрэв эсрэгбиеийн титр дор хаяж 4 дахин нэмэгдвэл бид одоогийн өвчний талаар ярьж болно.
