Аглютинацийн урвал (лат. агглютинати- наалт) - электролитийн дэргэд эсрэгбиемүүдээр бие махбодийг (нян, цусны улаан эс гэх мэт) наах.
Аглютинацийн урвалэсрэгбиемүүдээр "наалдсан" эсүүд (жишээлбэл, бактери) -аас тогтсон ширхэгүүд эсвэл тунадас хэлбэрээр илэрдэг (Зураг 7.37). Аглютинацийн урвалыг дараахь зорилгоор ашигладаг: өвчтөнөөс тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчийг тодорхойлох; өвчтөний цусны ийлдэс дэх эсрэгбиемийг тодорхойлох; цусны бүлгийг тодорхойлох.
Цагаан будаа. 7.37 а, б. -тэй наалдуулах урвалIgM- эсрэгбие (a) баIgG- эсрэгбие (б)
1. Өвчтөнөөс тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчийг тодорхойлох нь шилэн дээрх наалдуулах урвал (Зураг 7.38). Өвчтөнөөс тусгаарлагдсан бактерийн суспензийг наалдуулах ийлдэс (1:20 шингэрүүлсэн) дусал дээр нэмнэ. Флокулент тунадас үүснэ.
Цагаан будаа. 7.38.
Өвчтөнөөс тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчтэй өргөн хүрээтэй агглютинацийн урвал (Зураг 7.39). Өвчтөнөөс тусгаарлагдсан бактерийн суспензийг наалдуулах ийлдсийн шингэрүүлэлтэнд нэмнэ.
Цагаан будаа. 52
2. Өвчтөний цусны ийлдэс дэх эсрэгбие тодорхойлох
Өвчтөний цусны ийлдэстэй нарийвчилсан наалдуулах урвал (Зураг 7.39). Diagnosticum нь өвчтөний сийвэнгийн шингэрүүлэлтэнд нэмнэ.
- O-diagnosticum-тай агглютинаци (халуунаар үхсэн нянгууд, О-эсрэгтөрөгчийг хадгалж байдаг) нарийн ширхэгтэй агглютинацийн хэлбэрээр явагддаг.
- H-diagnosticum-тай агглютинаци (формальдегидийн нөлөөгөөр үхсэн нянгууд, тугны H-эсрэгтөрөгчийг хадгалж байдаг) их хэмжээтэй бөгөөд илүү хурдан явагддаг.
3. Цусны бүлгийг тодорхойлох агглютинацийн урвалЦусны бүлгийг тодорхойлох наалдуулах урвалыг цусны бүлгийн эсрэгтөрөгчийн эсрэг цусны ийлдэс дэх дархлааны эсрэгбиемүүдтэй эритроцитыг агглютинжуулах замаар ABO системийг (Хүснэгт б) бий болгоход ашигладаг. Хяналт нь: эсрэгбие агуулаагүй ийлдэс, i.e. ийлдэс AB (IV) цусны бүлэг; A (II), B (III) бүлгийн цусны улаан эсэд агуулагдах эсрэгтөрөгч. Сөрөг хяналт нь эсрэгтөрөгч агуулдаггүй, өөрөөр хэлбэл O (I) бүлгийн эритроцитуудыг ашигладаг.
Хүснэгт 7.6. ABO цусны бүлгийг тодорхойлох
| Урвалын үр дүн |
Бүлэг |
|
|
хамаарах |
||
|
судалсан |
||
|
цусны улаан эсүүдтэй |
ийлдэс (плазм) |
|
|
Стандарт |
стандарттай |
|
|
серумууд | ||
Агглютинацийн урвал (RA) нь электролитийн дэргэд эсрэгбиеийн нөлөөн дор микроб эсвэл бусад эсүүдийн наалдац, тунадасжилт юм. Үүссэн тунадасыг агглютинат гэж нэрлэдэг.
RA ашигладаг:
1. Өвчтөний цусны ийлдэс дэх эсрэгбие илрүүлэх (серодиагностик).
2. Өвчтөнөөс ялгаж авсан эмгэг төрүүлэгч бичил биетний цэвэр өсгөврийн төрөл, сероварыг тодорхойлох (серотип хийх).
Агглютинацийн урвалыг өвчтөний цусны ийлдэс дэх эсрэгбиемүүдийг тодорхойлоход ашигладаг, жишээлбэл, хижиг, паратифийн халууралт (Видал урвал), бруцеллёз (Райт, Хеддлесон урвал), туляреми, лептоспироз болон бусад. Халдварт өвчин, түүнчлэн өвчтөнөөс тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчийг тодорхойлох ( гэдэсний халдвар, хөхүүл ханиалга гэх мэт). Шуурхай үнэлгээ нь цусны бүлэг, Rh хүчин зүйл гэх мэтийг тодорхойлоход ашиглагддаг.
Урвал нь дараахь бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг шаарддаг.
1. Антиген (агглютиноген) нь корпускуляртай байх ёстой, өөрөөр хэлбэл амьд эсвэл үхсэн бичил биетний суспенз (оношлогоо м), эритроцит эсвэл бусад эсүүд юм. Ихэвчлэн агар налуу дээр ургадаг бичил биетний өдөр тутмын өсгөвөрийг ашигладаг. Өсгөвөрийг 3 - 4 мл изотоник уусмалаар угааж, ариутгасан хоолойд шилжүүлж, нягтыг тодорхойлно. Суспенз нь нэгэн төрлийн байх ёстой бөгөөд 1 мл тутамд 3 тэрбум хүртэлх бичил биетний эсийг агуулсан байх ёстой. Үхсэн микробын суспензийг ашиглах - оношилгоо - ажлыг хөнгөвчлөх (үйлдвэрлэлд бэлтгэсэн).
2. Эсрэгбие (агглютинин) нь өвчтөний ийлдэс (серодиагнозын үед) эсвэл наалдуулах ийлдэс (серотипийн үед) олддог. Аглютинжуулагч ийлдэсийг туулайг устгасан бактерийн эсрэг дархлаажуулах замаар гаргаж авдаг.
Аглютинжих титрийлдэс нь туршилтын тодорхой нөхцөлд харгалзах эсрэгтөрөгчтэй урвалд ордог түүний хамгийн дээд шингэрүүлэлт гэж нэрлэгддэг.
Аглютинжуулагч ийлдэс нь уугуул (шингээгдээгүй) болон шингэсэн байж болно. Жижиг шингэрүүлэлтэнд агуулагдах уугуул ийлдэс нь тухайн амьтны ийлдсийг авахын тулд дархлаажуулсан бичил биетний төрөлтэй төдийгүй холбогдох төрлийн бичил биетүүдтэй харилцан үйлчилдэг, учир нь тэдгээр нь бүлгийн эсрэгбие (нийтлэг эсрэгтөрөгчтэй бичил биетний эсрэгбие) агуулдаг. Төрөлхийн ийлдэс нь агглютинацийн нарийвчилсан урвалд (серодиагнозын хувьд) ашиглагддаг бөгөөд энэ нь зөвхөн урвал байгаа эсэхээс гадна эсрэгбиеийн титрийн өсөлтийн динамикийг харгалзан үздэг.
Хэрэв бүлгийн эсрэгбиемүүдийг уугуул ийлдэсээс гаргаж авбал (шинж) бүлгийн эсрэгтөрөгч агуулсан холбогдох бактеритай харилцан үйлчлэлцэж байвал шингэсэн ийлдэс олж авна. Шингээсэн ийлдэс нь зөвхөн нэг эсрэгтөрөгчийн рецепторт эсрэгбие агуулсан монорецептор (эсвэл төрөл бүрийн өвөрмөц) байж болно. Шилэн наалдуулах урвалд шингэсэн ийлдэсийг ашигладаг.
Н-эсрэгтөрөгч бүхий хөдөлгөөнт нянгаар амьтдыг дархлаажуулах үед H-эсрэгбие агуулсан H-агглютинжуулагч ийлдэс (жишээлбэл, Salmonella монорецепторын H-агглютинжуулагч ийлдэс) авдаг. О-эсрэгтөрөгчөөр дархлаажуулалт хийснээр O-эсрэгбие агуулсан О-агглютинжуулагч ийлдэс (жишээлбэл, сальмонелла бүлгийн шингэсэн O-агглютинжуулсан ийлдэс, антихолерийн O-агглютинжуулагч ийлдэс) авдаг. H- ба O-эсрэгтөрөгчөөр дархлаажуулалт хийснээр H- ба O-эсрэгбиемүүдтэй ийлдсийг олж авдаг.
Түүнчлэн О-агглютининууд нь нарийн ширхэгтэй агглютинат, H-агглютининууд нь бүдүүн ширхэгтэй тунадас үүсгэдэг.
3. Электролит - изотоник NaCl уусмал (нэрмэл усанд бэлтгэсэн 0.9% натрийн хлоридын уусмал).
Наалдуулах урвалыг гүйцэтгэх хоёр үндсэн арга байдаг: шилэн дээрх урвал (заримдаа индикатор эсвэл хавтангийн урвал гэж нэрлэдэг) ба нарийвчилсан урвал (туршилтын хоолойд)
Шилэн дээр наалдуулах урвалыг бий болгох. Хоёр дусал ийлдэс, нэг дусал натрийн хлоридын изотоник уусмалыг өөх тосгүй шилэн слайд дээр хийнэ. Оношлогооны наалдуулах ийлдсийг нэг шингэрүүлэлтээр авдаг бөгөөд энэ нь титрээс хамааран 1:10, 1:25, 1:50 эсвэл 1:100 байна. Судалж буй бичил биетний өсгөвөрийг нэг дусал ийлдэс, дусал изотоник уусмалд гогцоо ашиглан хийж сайтар холино. Бичил биетэнтэй натрийн хлоридын дусал нь эсрэгтөрөгчийн хяналт, бичил биетэнгүй ийлдэс дусал нь ийлдсийн хяналт юм. Та өсгөврийг ийлдэстэй дусалаас NaCl дусал руу шилжүүлж болохгүй. Урвал нь тасалгааны температурт 1-3 минутын турш явагдана. Хэрэв ийлдсийн хяналт тодорхой хэвээр байвал эсрэгтөрөгчийн хяналтанд жигд булингартай байдал ажиглагдаж, өсгөвөрийг ийлдэстэй хольсон дусалд агглютинат ширхэгүүд гарч ирвэл үр дүнг эерэг гэж үзнэ. Хэрэв ийлдэс ба эсрэгтөрөгчтэй дуслаар жигд булингартай байвал энэ нь сөрөг үр дүн юм. Харанхуй дэвсгэр дээр хариу үйлдэл нь илүү тод харагдаж байна.
Ийлдэс
1. эсрэгтөрөгчийн хяналт
2. ийлдэсийг хянах
Дархлааны хариу урвал. Дархлааны урвалыг оношлоход ашиглах Халдварт өвчин.
ТӨЛӨВЛӨГӨӨ:
Дархлааны урвалын төрлүүд.
Серологийн урвал явуулах нөхцөл.
Сийвэнгийн шаардлага.
Эерэг ба сөрөг үр дүнгийн тухай ойлголт.
ҮНДСЭН АГУУЛГА:
Дархлааны урвалын төрлүүд.
Дархлаа судлалын урвал – Энэ нь эсрэгтөрөгчийн эсрэгбиемийн идэвхтэй төвүүдийн (паратоп) эсрэгтөрөгчийн эпитопуудтай тусгай харилцан үйлчлэлээр тодорхойлогддог эсрэгтөрөгчийн харилцан үйлчлэл юм.
Дархлаа судлалын урвалын ерөнхий ангилал:
серологийн урвал - эсрэгтөрөгч (Ag) ба эсрэгбие (Ig) хоорондын урвал
in vitro ;
эсийн урвал дархлаа дарангуйлах эсүүдийн оролцоотойгоор;
харшлын сорил - хэт мэдрэмтгий байдлыг илрүүлэх.
Серологийн урвал: 1) тодорхойлолт, 2) үе шат, 3) бэлдмэлийн зорилго, 4) ерөнхий ангилал.
1) Тодорхойлолт
Серологийн аргуудэсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн урвалыг ашиглан судалгаа (Латин ийлдэс - ийлдэс ба лого - сургаал).
2) Үе шатууд
Харилцааны 2 үе шат:
I. Тодорхой (харагдахуйц) - хурдан үүсдэг, эсрэгбие нь харгалзах эсрэгтөрөгчтэй нийлдэг. Энэ үе шатанд эсрэгтөрөгчийн тодорхойлогч бүлгүүд (AG) болон эсрэгбиеийн идэвхтэй төвүүд (AT) харилцан үйлчилдэг.
AG + AT цогцолбор үүсэхэд оролцдог хүчнүүд нь:
зүүлт;
Ван дер Ваальс
Устөрөгчийн холбоо.
Байхгүй харагдахуйц өөрчлөлтүүдэнэ үе шатанд биш. Электрон микроскопоор AG+AT цогцолборыг тор хэлбэрээр харуулдаг.
II. Өвөрмөц бус – аажмаар үүсдэг, үүссэн эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолбор нь урвал явагдах нэмэлт байгаль орчны өвөрмөц бус хүчин зүйлтэй урвалд ордог бөгөөд энэ нь нүдэнд харагдахуйц байдаг – наалт, уусах, тунадасжилт гэх мэт. Электролит байгаа тохиолдолд цэнэг буурдаг. , уусах чадвар буурч, харагдахуйц конгломерат үүсдэг , тунадас үүсгэдэг (аглютинат).
3) Зорилгоо тодорхойлох :
а) эсрэгтөрөгчийг тодорхойлох (эсрэгбиений мэдэгдэж буй оношлогооны ийлдэс):
ийлдэс судлалын тодорхойлолт (зүйл тодорхойлох);
серотип (сероварыг тодорхойлох) - омог тодорхойлох;
эмгэг судлалын материалд (хурдан оношлогоо);
цэвэр соёлд:
б) эсрэгбие (Ig) илрүүлэх (антиген нь мэдэгдэж байгаа-диагностикум):
оршихуй (чанарын урвал);
тоо хэмжээ (титр нэмэгдэх - "хосолсон ийлдэс" арга).
4) Ерөнхий ангилал серологийн урвал :
a) энгийн (2 бүрэлдэхүүн хэсэг: Ag+Ig):
RA наалдуулах урвал (корпускуляр антигентэй);
PR хур тунадасны урвал (уусдаг антигентэй);
b) цогцолбор (3 бүрэлдэхүүн хэсэг: Ag+Ig+C);
в) шошго ашиглах.
Аглютинаци ба хур тунадасны урвалын хувилбарууд
Аглютинацийн урвал :
Аглютинацийн урвал (RA) нь физиологийн уусмал дахь антиген (эритроцит, бактери) суспензийн эсрэгтөрөгчтэй харилцан үйлчлэх дархлааны урвал юм.
Аглютинацийн үед AT тоосонцор хоорондоо наалдаж флокулент тунадас үүсгэдэг.
Урвал идэвхгүй гемагглютинаци(RPGA) нь эсрэгбие эсвэл эсрэгтөрөгчийн эритроцит диагностикум (гадарга дээр шингэсэн AT эсвэл AG бүхий эритроцитууд) ашигладаг агглютинацийн урвалын нэг төрөл юм.
Цусны улаан эсүүд энэ урвалд идэвхгүй тээвэрлэгч болдог.
RPGA-ийн үр дүнгийн үнэлгээг дараах байдлаар гүйцэтгэнэ.
- цагт эерэг хариу үйлдэл идэвхгүй наалдсан цусны улаан эсүүд U- эсвэл V хэлбэрийн нүхний ёроолыг хуйхалсан ирмэгтэй тэгш давхаргад бүрхдэг ("шүхэр");
- цагт сөрөг хариу үйлдэл (нагглютин байхгүй тохиолдолд) цусны улаан эсүүд нүхний төв завсарт хуримтлагдаж, хурц тодорхойлогдсон ирмэг бүхий авсаархан "товчлуур" үүсгэдэг.
Гемагглютинацийг дарангуйлах тест (HAI) нь вируст халдварын оношлогоонд ашиглагддаг. Зарим вирүсийн гадаргуу дээр цусны улаан эсийг наалддаг гемагглютинин хэмээх уураг агуулагддаг. Вирусын эсрэг тусгай эсрэгбиемүүдийг нэмснээр вирусын гемагглютининыг блоклодог - гемагглютинаци байхгүй.
Шууд бус гемагглютинацийн урвал (IRHA) буюу Кумбсын урвал нь бүрэн бус эсрэгбиеийг тодорхойлоход хэрэглэгддэг. Антиглобулины ийлдэс (Хүний Ig-ийн эсрэг AT) нэмэх нь урвалын үр дүнг сайжруулдаг. RNGA нь Rh хүчин зүйлийг тодорхойлоход хэрэглэгддэг.
Аглютинацийн урвал (RA) хийхийн тулд гурван бүрэлдэхүүн хэсэг шаардлагатай.
1) эсрэгтөрөгч (аглютиноген) AG;
2) эсрэгбие(агглютинин) AT;
3)
электролит
(изотоник натрийн хлоридын уусмал).
Ag + AT + электролит = агглютинат
Агглютинаци (Латин agglutinatio - наалт) - электролит - натрийн хлоридын дэргэд эсрэгбиемүүдээр бие махбодийг (бактери, цусны улаан эс гэх мэт) наах.
Шуурхай үнэлгээ нь эсрэгбиемүүдээр "наалдсан" эсүүд (жишээлбэл, бактери, цусны улаан эс) -ээс бүрдэх үйрмэг эсвэл тунадас хэлбэрээр илэрдэг.
RA-г дараахь зорилгоор ашигладаг.
Шууд бичил биетний наалдуулах урвал (RA).
Энэ урвалын үед эсрэгбие (агглютинин) нь корпускулын эсрэгтөрөгчийг (агглютиноген) шууд агглютин болгодог.
Тэдгээрийг ихэвчлэн идэвхгүйжүүлсэн бичил биетний суспензээр төлөөлдөг (микробын агглютинацийн урвал).
Бичил биетний төрлийг тодорхойлохын тулд хэрэглэнэстандарт оношлогооны агглютинаци ийлдэс (алдартай А.Т ).
Хамгийн түгээмэл нь lamellar (ойролцоогоор) ба өргөтгөсөн RA юм.
Шуурхай үнэлгээний хавтанг шилэн дээр тавьдаг. Үүнийг ашиглана уу түргэвчилсэн аргаэсрэгбие илрүүлэх эсвэл бичил биетнийг тодорхойлох.
Бүрэлдэхүүн хэсгүүд:
1. стандарт оношлогооны наалдуулах ийлдэс (AT);
2. өвчтөнөөс судалж буй цэвэр өсгөвөр;
3. давсны уусмал.
Судалгаанд хамрагдаж буй цэвэр өсгөвөрт эсрэгтөрөгч (АГ) нь бөөмс (микробын эсүүд, эритроцитууд болон бусад корпускуляр антигенууд) хэлбэрээр байдаг бөгөөд тэдгээр нь эсрэгбие болон тунадасжилтаар хоорондоо наалддаг.
Жишээ:
Тайзны найруулга заалт наалдуулах урвалууд (РА ) шилэн дээр колиформ бактерийг тодорхойлох зорилгоор.
Шилэн слайд дээр дуслыг түрхэнэ:
1
цусан суулга
;
2
-р дусал: - эмгэг төрүүлэгчдийн эсрэг наалдуулах ийлдэсхижиг халууралт
;
(1-2 оношилгооны ийлдэс)
3
-р дусал: - давсны уусмал (хяналт).
Шинжилсэн цэвэр бактерийн өсгөвөрийг дусал бүрт нэмнэ. Хутгана.
Үр дүн
:
эерэг
- агглютинат ширхэгтэй байх;
сөрөг
- агглютинатын ширхэгүүд байхгүй
Дүгнэлт:Судалгаанд хамрагдсан бактери нь хижиг өвчний үүсгэгч бодис юм (эсрэгтөрөгчийг тодорхойлсон).
Өвчтөний ийлдэс дэх AT-ийг тодорхойлохын тулд (ийлдэс судлалын оношлогоо), стандарт бичил биетэноношлогоо , суспенз агуулсаналдартай микробууд эсвэл тэдгээрийн эсрэгтөрөгчAG .
ABO цусны бүлгийг тодорхойлох (гемагглютинацийн урвал (HRA)) - цусны улаан эсийг агглютинжуулах.
Урвалын бүрэлдэхүүн хэсгүүд:
1. AG (цусны улаан эс) цусны шинжилгээ
2. AT (эритротест - золиклонууд)
Золиклонуудын багц:
Reagent Tsoliklon anti-A (ягаан)
Coliclone anti-B урвалж (цэнхэр)
Reagent Tsoliklon anti-AV (өнгөгүй)
3. электролит (давсны уусмал)
Тодорхойлох техник:
1
.
Нэг дусал (0.1 мл) анти-A, anti-B, anti-AB золиконыг таблетын нүхэнд (хяналтанд) хэрэглэнэ.
2.
Урвалжийн дусал бүрийн хажууд шинжилж буй цуснаас бага зэрэг (0.05-0.01 мл) дусал хийнэ.
Дараа нь бие даасан цэвэр шилэн саваа ашиглан золиклоныг дусал цустай холино.
3.
Эхний 3-5 секундэд наалдуулах урвал нь хавтанг зөөлөн сэгсрэх үед үүсдэг.
Урвалын үр дүнг дуслыг холихоос 2.5 - 3 минутын дараа харгалзан үзнэ. Худагт зүүнээс баруун тийш эсрэг A, anti-B, anti-AB байна.
Эерэг үр дүн нь мөхлөгт хурдас (аглютинат) харагдах явдал юм.
эерэг RA (+)
Сөрөг - тунадас байхгүй.
сөрөг RA(-)
4.
Үр дүнгийн шинжилгээ.
О(I) α β – наалдуулахгүй
А(II) β – анти-А-тай наалдуулах
Б(III) α – эсрэг В-тэй наалдуулах
AB(IV)O – анти-А-тай агглютинаци, эсрэг-В-тэй
Аглютинацийн бүдүүвч дүрслэл.
Эритроцит дээрх Ag эсрэгтөрөгч (илрүүлэх боломжтой) + эсрэгбиеAT(золиклон) оношлогооны ийлдэс
Шахмал дахь агглютинацийг бүртгэх
Хур тунадасны урвал:
Хур тунадасны урвал нь физиологийн уусмал дахь антигентэй уусдаг төлөвт байгаа эсрэгтөрөгчийн харилцан үйлчлэлийн дархлааны урвал юм.
Хур тунадасны үед макромолекулын дархлааны цогцолбор үүсдэг бөгөөд энэ нь тунгалаг коллоид уусмалыг тунгалаг суспенз эсвэл тунадас болгон хувиргах замаар илэрдэг.
Аль нэг урвалжийн хэмжээ нь тодорхой харьцаатай байх ёстой, учир нь тэдгээрийн аль нэгийг нь хэтрүүлэх нь үр дүнг бууруулдаг.
Орших янз бүрийн арга замуудхур тунадасны урвалын үе шат.
1. Цагираган хур тунадасны урвалыг бага диаметртэй тунадасны хоолойд хийнэ. Туршилтын хоолойд дархлааны ийлдэс нэмж, уусдаг эсрэгтөрөгчийг сайтар давхаргад хийнэ. AG ба AT нь молекулуудын дулааны хөдөлгөөний улмаас холилдож, харилцан үйлчилдэг. At эерэг үр дүнхоёр уусмалын зааг дээр тунгалаг тунадасны цагираг үүснэ.
2. Оучтерлонийн давхар дархлаажуулалтын урвалыг агар гель дотор хийж, түүний нүхэнд схемийн дагуу AG уусмал эсвэл AT уусмал нэмнэ. AG ба AT нь гель рүү бие бие рүүгээ тархаж, эерэг хариу үйлдэл үзүүлбэл хур тунадасны шугам хэлбэрээр харагдахуйц дархлааны цогцолбор үүсгэдэг.
Хур тунадасны урвал -энэ бол формацмөн уусдаг молекулын эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолборыг тунадас гэж нэрлэдэг үүл хэлбэрээр тунадас үүсгэдэг. Энэ нь эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиемүүдийг тэнцүү хэмжээгээр холих замаар үүсдэг.
RA бүрэлдэхүүн хэсгүүд:
тунадасжуулах ийлдэс (мэдэгдэж байгаа AT-precipitin);
шинжилгээний ийлдэс (тодорхойгүй преципитиноген антиген);
физик Шийдэл.
Хур тунадасны урвалыг тусгай нарийн туршилтын хоолойд (цагираг тунадасжих урвал), эсвэл Петрийн аяганд гель, шим тэжээлт бодис гэх мэт хэлбэрээр гүйцэтгэдэг.
Бөгжний тунадасны урвал
Урвалын үр дүнгийн мэдэгдэл, бүртгэлцагираган хур тунадасэмгэг төрүүлэгчийг илрүүлэх зорилгоор боом өвчин(Асколи урвал).
Тайзны найруулга .
1. Судалж буй материалыг (арьс шир, ноос, эсгий, хялгас, даавуу, мах, хөрс, малын баас гэх мэт) давсны уусмалд 5-45 минут буцалгана. изотоник ханд (ханд) авах. Шүүлгэсэн.
2. Боомын эсрэг тунадас үүсгэгч ийлдсийг туршилтын хоолойд хийнэ.
3. Туршилтын материалыг (ханд) дээр нь болгоомжтой хийнэ.
Нягтлан бодох бүртгэл .
Дараагийн 10 минутын дотор. Эерэг тохиолдолд ийлдэс ба ханд (цагираг хур тунадас) хоорондын зайд булингартай цагираг гарч ирдэг. Асколи урвал нь маш мэдрэмтгий бөгөөд өвөрмөц юм
Түүний тусламжтайгаар боомоор халдварласан материалыг хурдан тодорхойлох боломжтой.
Агар дахь хур тунадасны урвал
Үр дүнгийн мэдэгдэл, бүртгэлагар дахь хур тунадасны урвалкоринебактери (сахуугийн үүсгэгч бодис) -ийн хордлого чанарыг тодорхойлох
Тайзны найруулга
Петрийн аяганд фосфатын пептон агар дээр байрлуулна.
1. Ариутгасан шүүлтүүрийн цаасны туузыг аяганы дунд хэсэгт норгоно.хорны эсрэг ийлдэс.
2. Хатаасны дараа туузны ирмэгээс 1 см-ийн зайд 10 мм-ийн диаметртэй товруу суулгана.сонгосон үр тариа.
Нэг аяганд та 3-аас 10 үр тариа тарьж болно, тэдгээрийн нэг ньхяналт, мэддэг байх ёстойтоксиген.
Үр тариаг термостатад байрлуулна.
Нягтлан бодох бүртгэл
Шинжилгээг 24-48-72 цагийн дараа хийдэг.
Эерэг үр дүн - (соёлтоксиген) - цаасан туузаас тодорхой зайд гарч ирнэхур тунадасны шугам, « шөрмөсний сумнууд", дамжуулсан гэрэлд тод харагддаг.
Сахуугийн нянгийн хорыг тодорхойлохын тулд агар дахь хур тунадасны урвалыг зурагт үзүүлэв. Дунд зэргийн өсгөвөр нь "сумны шөрмөс" үүсгэдэггүй; эдгээр нь токсикоген эмгэг төрүүлэгчид биш юм.
Сахуу өвчний үүсгэгчийн омог нь токсиген (экзотоксин үүсгэдэг) ба хоргүй байж болно. Экзотоксин үүсэх нь экзотоксин үүсэхийг кодлодог хорт генийг агуулсан зөгнөгч бактерийн дотор байгаа эсэхээс хамаарна.
Өвчин эмгэгийн үед сахуугийн бүх эмгэг төрүүлэгчдийг токсиген эсэхийг шалгадаг - агар дахь хур тунадасны урвалыг ашиглан сахуугийн экзотоксин үүсгэдэг.
Цогцолбор ийлдэс судлалын урвал ( 3 бүрэлдэхүүн хэсэг: Ag+Ig+C):
Комплемент бэхлэх урвал (CFR).
Урвалыг хоёр үе шаттайгаар явуулдаг.
Эхний шатанд AT нь AG ба комплементтэй харилцан үйлчилдэг, хоёрдугаар шатанд индикатор нэмэгддэг - цус задралын систем (эритроцит ба эритроцитийн эсрэг ийлдсийн холимог).
Хэрэв үр дүн эерэг байвал эхний шатанд эсрэгбие нь эсрэгтөрөгчтэй дархлааны цогцолбор үүсгэдэг бөгөөд энэ нь урвалын хольцын нэмэлтийг холбодог.
Энэ тохиолдолд хоёр дахь шатанд нэмэгдсэн цус задралын системийн улаан эсүүд устдаггүй.
Үгүй бол холбоогүй комплемент нь цусны улаан эсийн задаргаа үүсгэдэг.
Үүнийг хэрэгжүүлэхийн тулд таван найрлага хэрэгтэй: AG, AT ба комплемент (эхний систем), хонины эритроцит ба цус задралын ийлдэс (хоёр дахь систем) (Зураг 1).
Урвал нь хоёр үе шаттайгаар явагддаг (Зураг 3).
Эхний үе шат - үед эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиеийн харилцан үйлчлэл заавал оролцохнэмэлт.
Хоёрдугаарт - индикаторын цус задралын систем (хонины улаан эс ба цус задралын ийлдэс) ашиглан урвалын үр дүнг тодорхойлох. Цус задлагч ийлдэс нь цусны улаан эсийг устгах нь зөвхөн цус задралын системд нэмэлт бодис нэмсэн тохиолдолд л тохиолддог. Хэрэв нэмэлт бодис өмнө нь эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолбор дээр шингэсэн бол эритроцитын гемолиз үүсэхгүй (Зураг).
Туршлагын үр дүн
бүх хуруу шилэнд цус задралын шинж тэмдэг илэрсэн эсвэл байхгүй байгааг тэмдэглэсэн (Зураг 2). Цус задрал бүрэн удаашрах үед, туршилтын хоолой дахь шингэн өнгөгүй, цусны улаан эсүүд ёроолд тогтох үед эерэг, цусны улаан эсүүд бүрэн задрах үед, шингэн нь эрчимтэй өнгөтэй болсон ("лак" цус) үед урвал эерэг гэж тооцогддог. ).
Цус задралын саатлын зэргийг шингэний өнгөний эрч хүч, доод хэсэгт байрлах цусны улаан эсийн тунадасны хэмжээ (++++, +++, ++, +) зэргээс хамаарч үнэлдэг.
Цагаан будаа. 4. RSC-ийн мэдэгдэл ба үр дүн.
Дүгнэлт:Туршилтын ийлдсэнд эсрэгбие илэрсэн.
RSK нь вирусын ижил төрлийн серотипийн аливаа омгийн эсрэгбиемийг илрүүлэх боломжийг олгодог.
Оношлогооны үнэ цэнэҮүнд:
хосолсон ийлдэс дэх эсрэгбиеийн титр 4 дахин нэмэгдсэн (томуугийн тархалтын үед);
өвөрмөц эмнэлзүйн зурагтай өвчтөнүүдийн цусны ийлдэс хоёр дахин ихэссэн.
Таг ашиглан хариу үйлдэл хийх :
Эдгээр аргууд нь маш мэдрэмтгий байдаг. Будаг, цацраг идэвхт изотоп, фермент гэх мэтийг эсрэгтөрөгч эсвэл эсрэгбиеийн шошго болгон ашигладаг.
RIF - иммунофлуоресценцийн урвал
Иммунофлуоресценцийн урвал нь эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолборын гэрлийн заалт дээр суурилдаг
Холбоотой иммуносорбентын шинжилгээ.
Цусан дахь өвөрмөц эсрэгбие эсвэл тодорхой өвчний эсрэгтөрөгчийг эрэлхийлдэг орчин үеийн лабораторийн шинжилгээ нь зөвхөн шалтгаанаас гадна өвчний үе шатыг тодорхойлох зорилготой юм.
ELISA үр дүнг чанарын болон тоон байдлаар өгч болно.
Одоогийн байдлаар ELISA-г дараахь тохиолдолд ашиглаж байна.
1) аливаа халдварт өвчний өвөрмөц эсрэгбие хайх;
2) аливаа өвчний эсрэгтөрөгчийг хайх (халдварт, венерологийн);
3) судалгаа дааврын байдалөвчтөн;
4) хавдрын маркерын шинжилгээ;
5) аутоиммун өвчин байгаа эсэхийг шалгах.
Зураг дээр хатуу фазын ELISA - мэдэгдэж буй эсрэгтөрөгч (зүүн талд) хавтангийн худаг дээр шингэсэн (баруун талд) ялтасны худаг дээр мэдэгдэж байгаа антигенууд.
ELISA аргын давуу талууд:
1) ELISA аргын өндөр өвөрмөц байдал, мэдрэмж (90% -иас дээш).
2) Өвчинг тодорхойлох, үйл явцын динамикийг хянах чадвар, өөрөөр хэлбэл өөр өөр хугацаанд эсрэгбиеийн тоог харьцуулах.
3) Аль ч эмнэлгийн байгууллагад ELISA оношилгоо хийх боломжтой байх.
Харьцангуй сул тал: Дархлалын хариу урвал (эсрэгбие) илрэх боловч эмгэг төрүүлэгч өөрөө биш, энзимтэй хавсарсан.
ELISA тест (ерөнхий механизм):
Ферментийн дархлаа судлалын үндэс нь эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиеийн дархлааны урвал бөгөөд дархлааны цогцолборыг үүсгэдэг: эсрэгтөрөгч-эсрэгбие нь эсрэгбиеийн гадаргуу дээрх өвөрмөц тэмдгүүдийн ферментийн идэвхийг өөрчилдөг.
Урвалын бүрэлдэхүүн хэсгүүд:
1. AG(AT) мэдэгдэж байгаа - таблетын худаг дээр.
2. AT (AG) судалж байна.
3. AT(AG)-AG(AT) цогцолборт хамаарах ферменттэй AT
4. ферменттэй харилцан үйлчилдэг хромоген субстрат
5. шийдлийг зогсоох
ELISA-ийн үндсэн үе шатууд
1. Хавтангийн худгийн гадаргуу дээр тодорхой эмгэг төрүүлэгчийн цэвэршүүлсэн эсрэгтөрөгч байдаг. Тэд нэмдэг биологийн материалөвчтөнд энэ эсрэгтөрөгч болон хүссэн эсрэгбие (иммуноглобулин) хооронд тодорхой урвал үүсдэг. Цогцолбор үүсдэг.
2. Коньюгант нэмсэн – ферменттэй AT. Коньюгант нь эхний шатны AT-AG цогцолборт өвөрмөц юм. Фермент идэвхжсэн.
3. Субстрат нэмж, идэвхтэй фермент түүнтэй урвалд орж, уусмалын өнгөгүй өнгийг өөрчилнө.
4. Фермент-субстратын харилцан үйлчлэлийг зогсоохын тулд зогсоох уусмал нэмнэ.
Нягтлан бодох бүртгэл.
Эерэг үр дүн - өөрчлөлтөнгө, зураг дээр - шар.
Иммунохроматографийн шинжилгээ
Иммунохроматографийн шинжилгээний арга (ICA, хурдан тест) нь ямар ч нөхцөлд, тэр дундаа хэдэн минутын дотор хурдан шинжилгээ хийх боломжийг олгодог өндөр чанартай урьдчилсан шинжилгээний арга юм. "талбай".
ICA-ийн давуу талууд нь:
Ашиглалтын хурд, хялбар байдал;
Дээжний хэмжээ бага, дээж бэлтгээгүй;
Үйлдвэрлэгч болон хэрэглэгчдэд хямд байх;
Туршилтыг их хэмжээгээр үйлдвэрлэх боломж;
Үр дүнг унших, тайлбарлахад хялбар;
Өндөр мэдрэмж, давтагдах чадвар;
Тоон үзүүлэлтээр тодорхойлох боломж;
Компьютерт тохирох зөөврийн уншигч ашиглах боломж;
Олон талт шинжилгээ хийх боломж.
Бүрэлдэхүүн хэсгүүд (туршилтын туузанд хэрэглэнэ):
1. Коллоид алтаар тэмдэглэгдсэн коньюгат нь илэрсэн эсрэгтөрөгчийн өвөрмөц шинж чанартай байдаг.
2. AT туршилтын шугам – AT-AG цогцолборын онцлог
3. Хяналтын шугамын хэвлийн булчингууд нь коньюгатийн онцлог шинж чанартай байдаг.
ICA тохиргоо:
1. Дээжийг туузны заасан эхлэх хэсэгт түрхэнэ.
2. Туршилтын болон хяналтын шугамын оронд өнгөт судлууд харагдах хэлбэрээр үр дүнг олж авах.
Нягтлан бодох бүртгэл
Эерэг - туршилтын шугам будагдсан үед.
Сөрөг - туршилтын шугамын будалт байхгүй бол.
Хүчингүй - хэрэв хяналтын шугам будаагүй бол.
ICA-ийн ерөнхий механизм:
1. Дээжийг эхлэл талбарт (дээжийн дэвсгэр) нэвтрүүлсэн ба коньюгат дэвсгэр дээр байрлах коньюгаттай (өнгөт шошготой тодорхой биетэй) холбоотой байна. Үүний үр дүнд өнгөт цогцолбор үүсдэг.
2. Үүссэн өнгөт дархлааны цогцолбор нь нитроцеллюлозын мембраны дагуу хялгасан судасны хүчний нөлөөн дор хөдөлдөг.Тэгээд харилцан үйлчилдэгAT туршилтын шугамтай.Үр дүн нь нэг өнгийн ягаан-улаан судал юм.
3. AT (коньюгат) нь шалгагдсан туузан дээр холбогдоогүйцааш хөдөлж, хяналтын шугамд хүрч, хяналтын шугамын AT-тай холбогдоно.Үүний үр дүнд хоёр дахь өнгийн судал гарч ирнэ.Хэрэв шинжилгээг зөв хийсэн бол биологийн шингэний дээжинд шинжилгээний эсрэгтөрөгч (эсрэгбие) байгаа эсэхээс үл хамааран хяналтын шугам үргэлж гарч ирэх ёстой.
2. Серологийн урвал явуулах нөхцөл.
1. Гомологийн оршихуй - эсрэгтөрөгч ба эсрэгбие бие биедээ харгалзах.
2. Цэвэр, хуурай аяга таваг.
3. Эмийн тодорхой харьцаа (ихэнхдээ тэнцүү).
4. Электролит (изотоник NaCl уусмал) заавал байх ёстой.
5. рН төвийг сахисан буюу бага зэрэг шүлтлэгтэй ойролцоо.
6. Температур +37 ° C буюу өрөөний температур (заавал эерэг).
7. Антигенийн хяналт, ийлдэс (эсрэгбие) хяналтыг гүйцэтгэдэг.
3 Сийвэнгийн шаардлага
Ийлдэс нь эсийн хольцгүй бүрэн ил тод байх ёстой.
Тэд үүнийг ихэвчлэн өвчний 2 долоо хоногт, эсрэгбиемүүд аль хэдийн бэлэн болсон үед авдаг.
Цусыг 3-5 мл-ийн хэмжээгээр өлөн элгэн дээрээ эсвэл хоолны дараа 6 цагийн дараа авна.
Сийвэнг авахын тулд цусыг тасалгааны температурт 1 цаг байлгана эсвэл центрифуг хийнэ. Үүссэн элементүүдийг барихгүйн тулд ийлдсийг маш болгоомжтой сорж авдаг.
Дархлааны ийлдсийг хүн, амьтны цуснаас (ихэвчлэн туулай, адуу) гаргаж авдаг бөгөөд тодорхой схемийн дагуу зохих эсрэгтөрөгч (вакцин) -аар дархлаажуулдаг. Ийлдэсийг ихэвчлэн үйлдвэрлэлд бэлтгэдэг.
4. Эерэг ба сөрөг үр дүнгийн тухай ойлголт.
РА.
Эерэг хариу үйлдэл үзүүлснээр идэвхгүй наасан цусны улаан эсүүд нүхний ёроолыг тэгш өнцөгт ирмэгээр бүрхсэн ("шүхэр"); наалдац байхгүй тохиолдолд цусны улаан эсүүд нүхний төв завсарт хуримтлагдаж, хурц тодорхойлогдсон ирмэг бүхий авсаархан "товчлуур" үүсгэдэг (дээрх зургийг үз).
RP.
Хэрэв үр дүн эерэг байвал хоёр уусмалын интерфейс дээр сүүн цагираг үүсдэг (дээрх зургийг үз).
ЭЛИЗА.
Уусмалын өнгөний өөрчлөлт нь эерэг урвалаар явагддаг.
RSK.
Цус задралын саатал - урвал эерэг байна; хэрэв комплемент үнэ төлбөргүй бол цус задрал ажиглагдаж байна - урвал сөрөг байна(дээрх зургуудыг үзнэ үү).
Вассерманы урвалын үр дүн:
a - цус задралын бүрэн саатал (+ + ++);
b - цус задралын тодорхой саатал (+ ++);
c - цус задралын хэсэгчилсэн саатал (++);
d - цус задралын бага зэрэг саатал (+);
d - бүрэн цус задрал (-).
Цус задралын хэсэгчилсэн, тодорхой, бүрэн удаашралтай эерэг урвал нь гуурсан хоолойн агууламжийг цайвар ягаанаас тод улаан хүртэл будах зэргээр тодорхойлогддог бөгөөд дараа нь улаан тунадас үүсгэдэг.
1. Материалыг судлах
Видеон дээр 3 тэмдэглэл хийх
микробиологийн чиглэлээр
"Аглютинацийн урвал ба түүний төрлүүд (RA)"
Төлөвлөгөө:
1. Оршил…………………………………………………………………………………..3
2. Шилэн дээрх RA………………………………………………………………………….4
3. Туршилтын хоолой RA…………………………………………………………………………………….5
4. Ашигласан уран зохиол………………………………………………………………..7
1. Танилцуулга.
Микробын эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиеийн харилцан үйлчлэл нь өвөрмөц шинж чанартай бөгөөд амьтны биед эмгэг төрүүлэгч болон түүний хорт бодисыг саармагжуулахад чиглэгддэг. Антиген ба эсрэгбиеийн харилцан үйлчлэл нь in vitro тодорхой нөхцөлд харагдахуйц үзэгдлүүд (агглютинаци, хур тунадас, дархлааны задрал) дагалддаг бөгөөд энэ нь ийлдэс судлалын (Латин ийлдэсээс) гэж нэрлэгддэг AG-AT урвалыг практик зорилгоор ашиглах боломжийг олгодог. Био үйлдвэрүүд нь тодорхой шинж чанартай (оношлогооны) эсрэгтөрөгч ба дархлааны ийлдэс (эсрэгбие) үүсгэдэг. Ийм ийлдэсийг ийлдэс судлалын урвалд ашигласнаар үл мэдэгдэх бичил биетнийг тодорхойлох, эсвэл мэдэгдэж буй эсрэгтөрөгчийг ашиглан эмгэг төрүүлэгчийг нэвтрүүлэхэд бие махбодид нийлэгжсэн эсрэгбиемүүдийг илрүүлэх, улмаар оношийг (ийлдэс судлалын оношлогоо) хийх боломжтой. Үүнээс гадна ийлдэс судлалын урвалыг вакцинжуулалт эсвэл халдварт өвчний дараа дархлааны хариу урвалын эрч хүчийг үнэлэхэд ашиглаж болно.
Шууд бус агглютинаци, Кумбс зэрэг агглютинацийн урвалууд нь корпускулярын эсрэгтөрөгчийн эсрэгбиемүүдтэй in vitro харилцан үйлчлэлцэж, үүссэн цогцолборуудын тунадасжих чадвар дээр суурилдаг. Бичил биетнээс гаргаж авсан бактерийн эсүүд буюу уусдаг эсрэгтөрөгчийг тээвэрлэгч эсүүд: цусны улаан эс, латекс хэсгүүд гэх мэтийг корпускулын эсрэгтөрөгч болгон ашигладаг.
Корпускуляр антигенийн эсрэгтөрөгчийн тодорхойлогч бодисууд нь гомолог эсрэгбиемүүдтэй тусгайлан харилцан үйлчилдэг (өвөрмөц, үл үзэгдэх урвалын үе шат), дараа нь эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолборууд нь нүцгэн нүдэнд харагдахуйц том конгломерат үүсгэдэг бөгөөд тэдгээр нь агглютинат (өвөрмөц бус, урвалын харагдах үе шат) тунадас үүсгэдэг. ). Туггүй хэлбэрийн микробууд (Brucellae) нь мөхлөгт агглютинант үүсгэдэг бол туглаг хэлбэрүүд (Escherichia, Salmonella) нь том хөвөн наалддаг бодис үүсгэдэг бөгөөд тэдгээр нь урвуу хэлбэртэй шүхэр хэлбэрээр туршилтын хоолойн ёроолд тунаж, сэгсрэх үед амархан эвдэрдэг. Антиген ба эсрэгбие нь зөвхөн электролит (0.8% натрийн хлоридын уусмал) байгаа тохиолдолд харилцан үйлчилдэг. Урвалын явц нь электролит дэх давсны концентраци, суспенз дэх бичил биетний эсийн тоо, ийлдэс дэх концентраци, рН, температур болон бусад хүчин зүйлээс хамаарна.
Аглютинацийн урвал (ra).
Эсрэгтөрөгчийн харилцан үйлчлэл дээр суурилдаг өвөрмөц наалдуулалт байдаг -тайгомолог эсрэгбие , энэ эсрэгтөрөгчийг нэвтрүүлсэн амьтны биед агуулагдах (иммуноагглютинаци); хүрээлэн буй орчны рН-ийн өөрчлөлт, электролитийн концентрациас үүдэлтэй өвөрмөц бус (химийн); аяндаа үүсдэг бөгөөд энэ нь бактери (R хэлбэрийн) физиологийн уусмалд түдгэлзэж, халах үед ажиглагддаг бөгөөд энэ нь бактерийн эсийн коллоид төлөвийн өөрчлөлттэй холбоотой юм. Антиген , RA-д оролцдог агглютиноген, эсрэгбиемийг агглютинин, үүссэн тунадасыг агглютинат гэж нэрлэдэг. Аглютинат үүсэх үед эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиеийн тоон харьцаа чухал (хамгийн оновчтой үзэгдэл). Эсрэгбиеийн илүүдэл буюу дутагдалтай үед саатал үүсдэг.
Аглютинацийн урвал (RA) нь микробиологийн практикт хэрэглэгддэг анхны дархлаа судлалын урвалуудын нэг юм. Ф.Видал анх удаа (1895) хижиг өвчнийг оношлоход RA-г ашигласан. Хожим нь (1897) А.Райт ижил урвалыг ашиглан бруцеллёзыг хүмүүст оношлоход ашигласан. Шуурхай судлалын шинжилгээ нь тахианы пульлороз, лептоспироз, гүүний халдварт үр хөндөлт, түүнчлэн мэдэгдэж байгаа наалдуулах ийлдсийг ашиглан үл мэдэгдэх бичил биетний өсгөвөрийг бичихэд ашигладаг. RA нь маш мэдрэмтгий байдаг; үүнийг 1 мл-т 0.01 мкг эсрэгбиеийн уургийн азотыг илрүүлэхэд ашиглаж болно.
Аглютинацийн урвалын хэд хэдэн хувилбарыг боловсруулсан бөгөөд энэ нь судалгааны арга зүйн гүйцэтгэл, зорилгын хувьд ялгаатай байдаг.
2. Шилэн дээрх Ра.
Шуурхай үнэлгээний энэ хувилбарт туршилтын субъектууд нь ийлдэс эсвэл эсрэгтөрөгч байж болох боловч ихэнхдээ энэ сонголтыг бичил биетнийг тодорхойлоход ашигладаг.
1. Бичил биетнийг (m/o) тодорхойлохын тулд нэг дусал наалддаг ийлдэс, жишээ нь Salmonella ийлдэс, физиологийн уусмал (хяналтын) дуслыг өөх тосгүй шилэнд тусад нь хийнэ. Дараа нь нян судлалын гогцоо ашиглан судалж буй өсгөвөрийн нянгийн массыг Петрийн аяганд байгаа колониос эсвэл туршилтын хоолойд налуу MPA-ийн гадаргуугаас авч, нэгэн төрлийн суспенз үүсэх хүртэл дархлааны ийлдэс болон физиологийн уусмалд тусад нь түдгэлзүүлнэ. олж авсан. Үр дүнг 2...4 минутын дараа харгалзан үзнэ.
Үр дүнгийн нягтлан бодох бүртгэл: хяналтын дээжинд өөрчлөлт оруулах ёсгүй. Хэрэв бактерийн өсгөвөр нь дархлааны ийлдэстэй тохирч байвал наалдуулах үрэвсэх (эерэг үр дүн нь наалдуулах үзэгдэл байхгүй бол судалж буй бактерийн өсгөвөр нь дархлааны ийлдэстэй тохирохгүй байна гэсэн дүгнэлтэд хүрнэ);
2. Бруцеллёзын серодиагнозын шинжилгээнд ашигласан сарнайн бенгалийн шинжилгээний жишээн дээр цусны ийлдэс дэх аниттел илрэлтийг авч үзье. Шинжилгээнд хамрагдсан малын цусны ийлдсээс 0.3 мл, бруцеллёзын эсрэгтөрөгч (сарнай-Бенгалийн будсан бруцелла эс) 0.03 мл-ийг шилэн слайданд хийнэ. Бүрэлдэхүүн хэсгүүд нь шилийг сэгсэрч сайтар хольж, 4 минутын дараа үр дүнг тооцно.
Үр дүнг бүртгэх: хэрэв урвал эерэг байвал агглютинатын ягаан ширхэгүүд гарч ирнэ. Энэ төрлийн ийлдэс судлалын урвалыг чанарын шинж чанартай гэж үздэг, учир нь энэ нь амьтны цусны ийлдэс дэх эмгэг төрүүлэгчийн эсрэгбиемүүдийг илрүүлэхэд ашиглаж болох боловч тэдгээрийн тоон агууламжийг үнэлэх боломжгүй юм.
1.1. Агглютинацийн урвал (RA)
Агглютинацийн урвал (RA)
Өвөрмөц байдал, гүйцэтгэлийн хялбар байдал, үзүүлэх чадвараас шалтгаалан наалдуулах урвал нь олон халдварт өвчний оношлогоонд микробиологийн практикт өргөн тархсан.
Аглютинацийн урвал нь эсрэгбие (агглютинин) нь бүхэл бүтэн бичил биетний эсүүд эсвэл бусад эсүүд (агглютиноген) -ийн харилцан үйлчлэлийн онцлогт суурилдаг. Энэхүү харилцан үйлчлэлийн үр дүнд тоосонцор ба бөөгнөрөл үүсдэг бөгөөд тэдгээр нь ширхэгийн хэлбэрээр тунадас үүсгэдэг (нагдагч).
Агглютинацийн урвал нь амьд ба үхсэн бактери, спирохета, мөөгөнцөр, эгэл биетэн, риккетси, түүнчлэн цусны улаан эс болон бусад эсийг хамарч болно. Урвал нь хоёр үе шатанд явагддаг: эхний (үл үзэгдэх) өвөрмөц, эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиеийн хослол, хоёр дахь (харагдах) өвөрмөц бус, эсрэгтөрөгчийг наах, өөрөөр хэлбэл. агглютинат үүсэх.
Хоёр валентын эсрэгбиеийн нэг идэвхтэй төв нь эсрэгтөрөгчийн тодорхойлогч бүлэгтэй нэгдэх үед агглютинат үүсдэг. Агглютинацийн урвал нь аливаа ийлдэс судлалын урвалын нэгэн адил электролитийн дэргэд явагддаг.
Гаднах байдлаар эерэг наалдуулах урвалын илрэл нь хоёр талын шинж чанартай байдаг. Зөвхөн соматик O2 антиген агуулсан туглаг микробуудад бичил биетний эсүүд хоорондоо шууд наалддаг. Энэ наалдацыг нарийн ширхэгтэй гэж нэрлэдэг. Энэ нь 18 22 цагийн дотор тохиолддог. v
Flagellate микробууд нь соматик O2 антиген ба тугны H2 эсрэгтөрөгч гэсэн хоёр эсрэгтөрөгчтэй байдаг. Хэрэв эсийг туг далбаагаар наасан бол том, сул ширхэгүүд үүсэх бөгөөд энэ наалдуулах урвалыг бүдүүн ширхэгтэй гэж нэрлэдэг. Энэ нь 24 цагийн дотор тохиолддог.
Наалдуулах урвалыг өвчтөний цусны ийлдэс дэх тодорхой эсрэгбиемийг чанарын болон тоон байдлаар тодорхойлох, тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчийн төрлийг тодорхойлох зорилгоор хоёуланг нь хийж болно. v
Аглютинацийн урвалыг өргөтгөсөн хувилбарт хоёуланг нь хийж болох бөгөөд энэ нь оношлогооны титр хүртэл шингэлсэн ийлдэстэй ажиллах боломжийг олгодог. илтгэх урвал, энэ нь зарчмын хувьд тодорхой эсрэгбие илрүүлэх эсвэл эмгэг төрүүлэгчийн төрлийг тодорхойлох боломжийг олгодог.
Нарийвчилсан наалдуулах урвалыг хийхдээ тухайн хүний цусны ийлдэс дэх өвөрмөц эсрэгбиемийг илрүүлэхийн тулд шинжилгээний ийлдсийг 1:50 эсвэл 1:100 шингэрүүлэлтээр авна. Энэ нь хэвийн эсрэгбие нь бүхэлдээ эсвэл бага зэрэг шингэрүүлсэн ийлдэс дэх маш өндөр концентрацитай байж болох бөгөөд дараа нь урвалын үр дүн буруу байж болохтой холбоотой юм. Урвалын энэ хувилбарт туршиж буй материал нь өвчтөний цус юм.
Цусыг өлөн элгэн дээрээ эсвэл хоол идсэнээс хойш 6 цагийн өмнө авдаг (эс тэгвэл цусны ийлдэс дэх өөхний дуслууд үүсч, үүлэрхэг, судалгаа хийхэд тохиромжгүй болно). Өвчтөний цусны ийлдсийг ихэвчлэн өвчний хоёр дахь долоо хоногт авдаг бөгөөд 3х4 мл цусыг шоо венийн судсаар ариутган цуглуулдаг (энэ үед тусгай эсрэгбиеийн хамгийн их хэмжээ төвлөрч байна). Тодорхой эсрэгтөрөгчийн бүтэцтэй тодорхой зүйлийн үхсэн боловч устгагдаагүй бичил биетний эсээс бэлтгэсэн оношилгоог мэдэгдэж буй эсрэгтөрөгч болгон ашигладаг.
Эмгэг төрүүлэгчийн төрөл, төрлийг тодорхойлохын тулд нарийвчилсан наалдуулах урвалыг хийхдээ эсрэгтөрөгч нь судалж буй материалаас тусгаарлагдсан амьд эмгэг төрүүлэгч юм. Дархлааны оношлогооны ийлдэст агуулагдах эсрэгбиемүүдийг мэддэг. v
Дархлаатай оношлогооны ийлдэсвакцинжуулсан туулайн цуснаас гаргаж авсан. Титрийг (эсрэгбие илэрсэн хамгийн их шингэрүүлэлт) тодорхойлсны дараа оношлогооны ийлдэсийг хадгалах бодис нэмсэн ампулуудад хийнэ. Энэ ийлдэс нь тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчийн эсрэгтөрөгчийн бүтцээр тодорхойлоход ашиглагддаг.
ААГГЛЮТИНАЦИЙН РЕАКЦИЙН ХУВИЛБАР
Эдгээр урвалууд нь тоосонцор (микробын эсүүд, цусны улаан эсүүд болон бусад корпускуляр антигенууд) хэлбэрийн эсрэгтөрөгчийг агуулдаг бөгөөд тэдгээр нь эсрэгбие болон тунадасжилтаар наалддаг.
Агглютинацийн урвал (RA) хийхийн тулд гурван бүрэлдэхүүн хэсэг шаардлагатай: 1) эсрэгтөрөгч (агглютиноген); 2) эсрэгбие (агглютинин) ба 3) электролит (изотоник натрийн хлоридын уусмал).
ЧИГЛЭЛТ (ХАВТАН) ААГГЛЮТИНАЦИЙН РЕАКЦ (RA)
Үзүүлэлт буюу хавтан, RA-г тасалгааны температурт шилэн слайд дээр байрлуулна. Үүнийг хийхийн тулд Пастерийн пипеткээр 1:10 1:20 харьцаатай шингэрүүлсэн ийлдэс болон натрийн хлоридын изотоник уусмалын хяналтын дуслыг шилэн дээр тусад нь хийнэ. Бактерийн колони эсвэл өдөр тутмын өсгөвөрийг (диагностикумын дусал) хоёуланд нь бактериологийн гогцоонд оруулж, сайтар холино. Урвалыг хэдхэн минутын дараа, заримдаа томруулдаг шил (x5) ашиглан нүдээр тооцдог. Эерэг RA-ийн хувьд ийлдэс дэх том, жижиг ширхэгүүд нь сөрөг шинж чанартай байдаг тул ийлдэс нь жигд үүлэрхэг хэвээр байна.
ШУУД БУС (ИДЭВХИЙГҮЙ) ЦУСГАЛТЫН РЕАКЦИЯ (RNGA, RPGA)
Урвалыг: 1) полисахарид, уураг, бактерийн ханд болон бусад өндөр тархалттай бодис, риккетси, вирус, агглютининтай цогцолбор нь ердийн RA-д харагдахгүй байх, эсвэл 2) өвчтөний ийлдэс дэх эсрэгбиемийг илрүүлэх. эдгээр өндөр тархалттай бодисууд ба хамгийн жижиг бичил биетүүд.
Шууд бус буюу идэвхгүй агглютинацийг эсрэгбие нь идэвхгүй тоосонцор (латекс, целлюлоз, полистирол, барийн исэл гэх мэт эсвэл хонины цусны улаан эс, хүний цусны бүлэг I(0)) дээр урьдчилан шингэсэн эсрэгтөрөгчтэй харилцан үйлчлэх урвал гэж ойлгогддог.
Идэвхгүй гемагглютинацийн урвал (RPHA) үед цусны улаан эсийг тээвэрлэгч болгон ашигладаг. Антигенээр дүүрсэн цусны улаан эсүүд энэ эсрэгтөрөгчийн өвөрмөц эсрэгбиемүүдтэй хамт наалдаж, тунадас үүсгэдэг. Антиген мэдрэмтгий эритроцитуудыг RPGA-д эсрэгбиемийг илрүүлэх (серодиагностик) эритроцитийн оношлогоо болгон ашигладаг. Хэрэв цусны улаан эсүүд эсрэгбиемүүдээр дүүрсэн бол (эритроцит эсрэгбиеийн оношлогоо) эсрэгтөрөгчийг илрүүлэхэд ашиглаж болно.
Тайзлах. Полистирол хавтангийн нүхэнд ийлдсийн цуврал шингэрүүлэлтийг бэлтгэдэг. Эцсийн өмнөх цооногт 0.5 мл илэрхий эерэг ийлдэс, сүүлчийн нүхэнд 0.5 мл физиологийн уусмал (хяналт) нэмнэ. Дараа нь бүх нүхэнд 0,1 мл шингэрүүлсэн эритроцитийн оношилгоо хийж, сэгсэрч термостатад 2 цагийн турш хийнэ
Нягтлан бодох бүртгэл. IN эерэг тохиолдолэритроцитууд нүхний ёроолд атираат эсвэл ирмэгтэй эсийн жигд давхарга хэлбэрээр байрладаг (урвуутай шүхэр нь товчлуур эсвэл цагираг хэлбэрээр байрладаг);
1.2. саармагжуулах урвал. ЛИЗИС,
ОПсонофагоцитийн урвал, хэт мэдрэмтгий байдлын урвал
ЭКЗОТОКСИНЫ АНТИТОКСИН (RN)-тай саармагжуулах урвал
Урвал нь антитоксин ийлдэс нь экзотоксины нөлөөг саармагжуулах чадварт суурилдаг. Энэ нь хорын эсрэг ийлдсийг титрлэх, экзотоксиныг тодорхойлоход хэрэглэгддэг.
Сийвэнг титрлэхдээ антиоксидант ийлдсийг янз бүрийн шингэрүүлэлтэнд зохих хорт бодисын тодорхой тунг нэмнэ. Антигенийг бүрэн саармагжуулж, ашиглагдаагүй эсрэгбие байхгүй үед анхны флокуляци үүсдэг. Флокуляцийн урвалыг зөвхөн ийлдэс (жишээ нь сахуу) титрлэхээс гадна токсин ба токсоидыг титрлэхэд ашиглаж болно. Хорт бодисыг саармагжуулах урвал нь антитоксины эсрэг эмчилгээний ийлдэсүүдийн үйл ажиллагааг тодорхойлох практик ач холбогдолтой юм. Энэ урвалын эсрэгтөрөгч нь жинхэнэ экзотоксин юм.
Antitoxic ийлдсийн бат бөх чанарыг AE-ийн ердийн нэгжээр тодорхойлно.
Ботулинумын ийлдсийн 1 AE нь түүний хэмжээ нь 1000 DLM ботулинум токсиныг саармагжуулдаг. Экзотоксины төрөл, төрлийг тодорхойлох саармагжуулах урвалыг (татран, ботулизм, сахуу гэх мэт өвчнийг оношлоход) in vitro (Рамонын дагуу), бичил биетний эсийн хоруу чанарыг тодорхойлохдоо гель хэлбэрээр хийж болно. Ouchterlony дагуу).
Лизисийн урвал (RL)
Дархлааны сийвэнгийн хамгаалалтын шинж чанаруудын нэг нь биед нэвтэрч буй микроб буюу эсийн элементүүдийг уусгах чадвар юм.
Эсийн задрал (лизис) үүсгэдэг өвөрмөц эсрэгбиемүүдийг лизин гэж нэрлэдэг. Эсрэгтөрөгчийн шинж чанараас хамааран тэдгээр нь бактериолизин, цитолизин, спирохетолизин, гемолизин гэх мэт байж болно.
Лизин нь нэмэлт нэмэлт хүчин зүйл байгаа тохиолдолд л үр нөлөөгөө харуулдаг. Өвөрмөц бус хүчин зүйл болгон нэмэлт хошин дархлаа, тархи нугасны шингэн болон урд талын хөндийн шингэнээс бусад биеийн бараг бүх шингэнд байдаг. Хүний цусны ийлдэс дэх нэмэлт бодисын нэлээд өндөр, тогтмол агууламж ажиглагдсан бөгөөд цусны ийлдсэнд маш их байдаг. далайн гахай. Бусад хөхтөн амьтдын хувьд цусны ийлдэс дэх нэмэлт бодисын агууламж өөр өөр байдаг.
Нэмэлт нь нарийн төвөгтэй системшар сүүний уураг. Энэ нь тогтворгүй бөгөөд 55 градусын температурт 30 минутын турш унадаг. Өрөөний температурт нэмэлт бодисыг хоёр цагийн дотор устгадаг. Удаан хугацаагаар сэгсрэх, хүчил, хэт ягаан туяанд маш мэдрэмтгий. Гэсэн хэдий ч нэмэлт бодисыг бага температурт хатаасан байдалд удаан хугацаагаар (зургаан сар хүртэл) хадгална. Комплемент нь бичил биетний эс болон цусны улаан эсийн задралыг дэмждэг.
Бактериолиз ба гемолизийн урвалын хооронд ялгаа бий.
Бактериолизийн урвалын мөн чанар нь тодорхой дархлааны ийлдэс нь комплементийн дэргэд харгалзах гомолог амьд бичил биетний эсүүдтэй нэгдэх үед бичил биетний задрал үүсдэг.
Цус задралын урвал нь эритроцитууд нь тэдгээрийн эсрэг дархлаатай (цус задлагч) тусгай ийлдэст өртөх үед эритроцитууд уусах нь ажиглагддаг, өөрөөр хэлбэл. цус задрал.
Лабораторийн практикт цус задралын урвалыг комплементийн хүрээг тодорхойлох, түүнчлэн үр дүнг бүртгэхэд ашигладаг оношлогооны урвалнэмэлт бэхэлгээ. Комплемент титр нь түүний хамгийн бага хэмжээ бөгөөд энэ нь 2.5 мл-ийн эзэлхүүнтэй цус задралын системд 30 минутын дотор улаан эсийн задралыг үүсгэдэг. Лизисийн урвал нь бүх ийлдэс судлалын урвалын нэгэн адил электролитийн дэргэд явагддаг.
Хэт мэдрэмтгий байдлын урвал (харшлын)
Антигенийн тодорхой хэлбэрүүд нь бие махбодтой дахин дахин харьцахдаа түүний үндсэн дээр өвөрмөц урвал үүсгэж болох боловч цочмог үрэвслийн хариу урвалын өвөрмөц бус эсийн болон молекулын хүчин зүйлсийг агуулдаг. Хэт мэдрэмтгий байдлын хоёр хэлбэр байдаг: шууд хэт мэдрэгшил (IHT) болон хойшлогдсон хэт мэдрэгшил (DTH). Эхний төрлийн урвал нь эсрэгбиеийн оролцоотойгоор явагддаг бөгөөд харшил үүсгэгчтэй олон удаа харьцсанаас хойш 2 цагийн дараа урвал үүсдэг. Хоёрдахь төрөл нь үрэвслийн гол нөлөөлөгч болох үрэвслийн Т эсүүд (Tgc) -ийн тусламжтайгаар үрэвслийн талбайд макрофаг хуримтлагдахыг баталгаажуулдаг бөгөөд 6-8 цагийн дараа урвал илэрдэг.
Хэт мэдрэмтгий байдлын урвал үүсэхээс өмнө эсрэгтөрөгчтэй тулгарах, мэдрэмтгий байдал үүсэх, өөрөөр хэлбэл. эсрэгбие, идэвхтэй мэдрэмтгий лимфоцит ба бусад лейкоцитын (макрофаг, гранулоцит) идэвхгүй мэдрэмтгий цитофилик эсрэгбие үүсэх.
Хэт мэдрэмтгий байдлын урвал нь хөгжлийн гурван үе шаттай: дархлаа судлалын; эмгэг химийн; эмгэг физиологийн.
Эхний тодорхой үе шатанд харшил үүсгэгч нь эсрэгбие ба (эсвэл) мэдрэмтгий эсүүдтэй харилцан үйлчилдэг. Хоёр дахь үе шатанд биологийн ялгаралт үүсдэг идэвхтэй бодисуудидэвхжүүлсэн эсүүдээс. Суллагдсан зуучлагч (гистамин, серотонин, лейкотриен, брадикинин гэх мэт) нь гурав дахь үе шатны харгалзах төрлийн урвалын төрөл бүрийн захын нөлөөг үүсгэдэг.
Хариу үйлдэл хэт мэдрэг байдалдөрөв дэх төрөл
Энэ төрлийн урвалууд нь мэдрэмтгий Т-туслах эсүүд, цитотоксик Т-лимфоцитууд (Т-алуур эсүүд) ба мононуклеар фагоцитын системийн идэвхжсэн эсүүдийн эмгэг төрүүлэгч эс хоорондын харилцан үйлчлэлээс үүдэлтэй бөгөөд энэ нь бактерийн эсрэгтөрөгчийн дархлааны системийг удаан хугацаагаар өдөөдөг. арилгах биеийн дархлааны тогтолцооны харьцангуй дутагдал дотоод орчинхалдварт өвчний бактерийн эмгэг төрүүлэгчид. Эдгээр хэт мэдрэгшлийн урвалууд нь сүрьеэгийн уушигны хөндий, тэдгээрийн казеоз үхжил, сүрьеэтэй өвчтөнд ерөнхий хордлого үүсгэдэг. Морфопатогенетикийн хувьд сүрьеэ, уяман өвчний үед арьсны грануломатоз нь дөрөв дэх хэлбэрийн хэт мэдрэгжүүлэлтийн урвалаас бүрддэг.
Ихэнх алдартай жишээДөрөв дэх хэлбэрийн хэт мэдрэмтгий байдлын урвал нь бие махбодь, систем нь микобактерийн эсрэгтөрөгчид мэдрэмтгий байдаг өвчтөнд туберкулиныг арьсанд тарьсан газарт үүсдэг Mantoux урвал юм. Урвалын үр дүнд төв хэсэгт үхжил бүхий өтгөн гиперемик папулуляци үүсдэг бөгөөд энэ нь туберкулиныг арьсанд тарьснаас хойш хэдхэн цагийн дараа (удаан) гарч ирдэг. Папуляци үүсэх нь цусны эргэлтийн цусны мононуклеар фагоцитуудыг судасны орноос эс хоорондын зайд ялгаруулж эхэлдэг. Үүний зэрэгцээ, судасны орноос полиморфон цөмийн эсийн шилжилт хөдөлгөөн эхэлдэг. Дараа нь нейтрофилийн нэвчилт буурч, нэвчдэс нь ихэвчлэн лимфоцит ба мононуклеар фагоцитуудаас бүрдэж эхэлдэг. Энэ нь Мантугийн урвалаас Артусын урвалаас ялгаатай бөгөөд гол төлөв полиморф цөмийн лейкоцитууд гэмтлийн талбайд хуримтлагддаг.
Хэт мэдрэмтгий байдлын 4-р хэлбэрийн урвалын үед мэдрэмтгий лимфоцитыг антигенээр удаан хугацаагаар өдөөхөд хүргэдэг. эмгэг өөрчлөлтүүдэд эсийг Т туслах эсүүдээр цитокиныг эмгэгийн хувьд эрчимтэй, удаан хугацаагаар ялгаруулдаг. Эд эсийн гэмтлийн цэгүүдэд цитокинуудын эрчимтэй ялгаралт нь тэнд байрлах мононуклеар фагоцитын системийн эсүүдийн хэт идэвхжилтийг үүсгэдэг бөгөөд тэдгээрийн ихэнх нь хэт идэвхжсэн төлөвт эпителоид эсийн хэлхээ үүсгэдэг ба зарим нь бие биетэйгээ нийлж аварга том эсүүдийг үүсгэдэг. Бактерийн болон вирусын эсрэгтөрөгчийн гадаргуу дээр ил гарсан макрофагууд нь Tkillers (байгалийн алуурчид) -ийн үйл ажиллагааны тусламжтайгаар устгагдах боломжтой.
Дөрөв дэх хэлбэрийн хэт мэдрэгшил нь гадны бактерийн эсрэгтөрөгчийг мэдрэмтгий Т туслагч эсүүдээр таних замаар өдөөгддөг. Хүлээн зөвшөөрөх зайлшгүй нөхцөл бол эндоцитоз болон гадны иммуногенийг мононуклеар фагоцитоор боловсруулсны дараа эсрэгтөрөгчийг илчлэх эсийн гадаргуу дээр илэрсэн эсрэгтөрөгчтэй индукторуудын харилцан үйлчлэл юм. Өөр шаардлагатай нөхцөлүндсэн гистокомпатын цогцолборын 1-р зэрэглэлийн молекулуудтай хослуулан эсрэгтөрөгчийн өртөлт. Антигенийг хүлээн зөвшөөрсний дараа мэдрэмтгий туслах эсүүд нь цитокин, ялангуяа байгалийн алуурчин эсүүд болон мононуклеар фагоцитуудыг идэвхжүүлдэг интерлейкин2-ийг ялгаруулдаг. Идэвхжүүлсэн мононуклеар фагоцитууд нь уураг задлах фермент, чөлөөт хүчилтөрөгчийн радикалуудыг ялгаруулж, эд эсийг гэмтээдэг.
Арьсны харшлын сорил нь бие махбодийн харшил үүсгэгчдэд мэдрэмтгий байдлыг тогтоох, халдварын түвшинг тодорхойлох, тухайлбал сүрьеэ, бруцеллёз, сүргийн дархлаажишээлбэл, туляреми. Харшил үүсгэгчийг хэрэглэх газар дээр үндэслэн: 1) арьсны сорил; 2) сорвижуулах; 3) арьсны доторх; 4) арьсан доорх. Арьсны харшлын сорилын үед харшил үүсгэгчийн эмнэлзүйн хариу урвалыг орон нутгийн, ерөнхий болон голомтот, түүнчлэн шууд болон хожимдсон гэж хуваадаг.
Зуучлагч төрлийн GNT-ийн орон нутгийн урвалууд нь 520 минутын дараа гарч ирдэг, улайлт, цэврүү хэлбэрээр илэрхийлэгддэг, хэдхэн цагийн дараа алга болж, мм-ээр хэмжигддэг эритемийн хэмжээгээр нэмэх аргаар үнэлдэг. Орон нутгийн HRT урвал нь 24-48 цагийн дотор тохиолддог, удаан үргэлжилдэг, нэвчдэс хэлбэрээр илэрдэг, заримдаа төвд үхжилтэй байдаг ба нэвчдэсийн хэмжээгээр мм-ээр үнэлэгддэг, мөн нэмэх системийг ашиглана. HNT-ийн цитотоксик ба иммунокомплекс хэлбэрийн үед гипереми, нэвчилт 3-4 цагийн дараа ажиглагдаж, 6-8 цагийн дараа дээд тал нь хүрч, нэг өдрийн дараа буурдаг. Заримдаа хосолсон урвал ажиглагддаг.
1.3. НЭМЭГДҮҮЛЭХ ТОГТООХ РЕАКЦИЯ (FFR)
Энэ урвалыг лабораторийн судалгаагаар янз бүрийн халдварын эсрэг цусны ийлдэс дэх эсрэгбие илрүүлэх, түүнчлэн эмгэг төрүүлэгчийг эсрэгтөрөгчийн бүтцээр нь тодорхойлоход ашигладаг.
Комплемент бэхлэх урвал нь ийлдэс судлалын нарийн төвөгтэй урвал бөгөөд өндөр мэдрэмж, өвөрмөц шинж чанартай байдаг.
Энэ урвалын онцлог нь эсрэгтөрөгчийн өвөрмөц эсрэгбиемүүдтэй харилцан үйлчлэх явцад өөрчлөлт нь зөвхөн комплемент байгаа тохиолдолд л тохиолддог явдал юм. Комплемент нь зөвхөн "эсрэгбиеийн эсрэгтөрөгч" цогцолбор дээр шингэдэг. "Эсрэгбиеийн эсрэгтөрөгч" цогцолбор нь ийлдэс дэх эсрэгтөрөгч ба эсрэгбие хоёрын хооронд ойр дотно байх үед л үүсдэг.
Комлементыг "эсрэгтөрөгчийн эсрэгбие"-ийн цогцолбор дээр шингээх нь түүний шинж чанараас хамааран эсрэгтөрөгчийн хувь заяанд өөр өөр нөлөө үзүүлдэг.
Антигенүүдийн зарим нь эдгээр нөхцөлд татан буулгах (цус задрал, Исаев-Пфайферийн үзэгдэл, цитолитик үйлдэл) зэрэг огцом морфологийн өөрчлөлтөд ордог. Бусад нь хөдөлгөөний хурдыг өөрчилдөг (treponema immobilization). Бусад нь гэнэтийн хор хөнөөлтэй өөрчлөлтгүйгээр үхдэг (нян устгах эсвэл цитотоксик нөлөө). Эцэст нь, нэмэлт шингээлт нь амархан ажиглагдах боломжтой эсрэгтөрөгчийн өөрчлөлтүүд дагалддаггүй.
RSC механизмын дагуу энэ нь хоёр үе шаттайгаар явагддаг.
- Эхний үе шат нь "эсрэгтөрөгчийн эсрэгбие"-ийн цогцолбор үүсэх ба энэхүү нэмэлт цогцолбор дээр шингээлт юм. Үе шатын үр дүн нь нүдэнд харагдахгүй (антиген ба эсрэгбиеийн харилцан үйлчлэл нь нэмэлт бүрэлдэхүүнийг заавал оролцуулдаг).
- Хоёрдахь үе шат нь комплементийн дэргэд тусгай эсрэгбиеийн нөлөөн дор эсрэгтөрөгчийн өөрчлөлт юм. Үе шатын үр дүн нь нүдээр харагдах эсвэл харагдахгүй байж болно (индикатор цус задралын систем (хонины улаан эс ба цус задралын ийлдэс) ашиглан урвалын үр дүнг илрүүлэх).
Цус задлагч ийлдэс нь цусны улаан эсийг устгах нь зөвхөн цус задралын системд нэмэлт бодис нэмсэн тохиолдолд л тохиолддог. Хэрэв нэмэлт бодис өмнө нь эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолбор дээр шингэсэн бол эритроцитын гемолиз үүсэхгүй.
Туршилтын үр дүнг бүх туршилтын хоолойд цус задралын шинж тэмдэг илэрсэн эсвэл байхгүй байгааг тэмдэглэж үнэлдэг. Цус задрал бүрэн удаашрах үед, туршилтын хоолой дахь шингэн өнгөгүй, цусны улаан эсүүд ёроолд нь тогтоход эерэг, цусны улаан эсүүд бүрэн задрах үед, шингэн нь эрчимтэй өнгөтэй болсон үед сөрөг гэж үзнэ (“лак”). цус). Цус задралын саатлын зэргийг шингэний өнгөний эрч хүч, доод хэсэгт байрлах цусны улаан эсийн тунадасны хэмжээ (++++, +++, ++, +) зэргээс хамаарч үнэлдэг.
Хэрэв эсрэгтөрөгчийн өөрчлөлтийг харааны ажиглалтад ашиглах боломжгүй бол нэмэлтийн төлөв байдлыг үнэлэх, урвалын үр дүнгийн талаар дүгнэлт гаргах боломжийг олгодог индикаторын үүрэг гүйцэтгэдэг хоёр дахь системийг ашиглах шаардлагатай.
Энэ үзүүлэлтийн системийг цус задралын урвалын бүрэлдэхүүн хэсгүүдээр төлөөлдөг бөгөөд үүнд хонины эритроцит ба цус задралын ийлдэс нь эритроцитод (гемолизин) өвөрмөц эсрэгбие агуулсан боловч комплемент агуулаагүй болно. Энэхүү индикаторын системийг үндсэн RSC байрлуулсанаас хойш нэг цагийн дараа туршилтын хоолойд нэмнэ. Хэрэв нэмэлт бэхэлгээний урвал эерэг байвал эсрэгбиеийн эсрэгтөрөгчийн цогцолбор үүсдэг бөгөөд энэ нь комплементийг өөртөө шингээдэг. Комплементийг зөвхөн нэг урвалд шаардлагатай хэмжээгээр хэрэглэдэг бөгөөд эритроцитуудын задрал нь зөвхөн комплементийн дэргэд явагддаг тул "эсрэгтөрөгчийн эсрэгбие"-ийн цогцолбор дээр шингэсэн тохиолдолд цус задралын (заагч) систем дэх эритроцитуудын задралд орно. тохиолддоггүй. Хэрэв комплемент бэхлэх урвал сөрөг байвал "эсрэгтөрөгчийн эсрэгбие"-ийн цогцолбор үүсэхгүй, нэмэлт нь чөлөөтэй хэвээр үлдэж, цус задралын систем нэмэгдэхэд эритроцит задрал үүсдэг.
1.4. ДНХ-ийн шинжилгээ. Полимеразын гинжин урвал (ПГУ),
ИММУНОФЕРМЕНТИЙН АРГА (ЭЛИЗА), ФЛУОРЖИНГИЙН ЭСРЭГ БИЕИЙН АРГА (FFA)
ГЕН ШИНЖИЛГЭЭНИЙ АРГУУД
Молекул биологийг эрчимтэй хөгжүүлж, генетикийн судалгааны төгс арга зүйн баазыг бий болгосон нь генийн инженерчлэлийн үндэс болсон. Оношлогооны салбарт ДНХ, РНХ-ийн нуклеотидын тодорхой дарааллыг тодорхойлох чиглэл гарч ирсэн бөгөөд генийн судалгаа гэж нэрлэгддэг. Ийм аргууд нь нэмэлт нуклеотидын (AT, GC) харилцан үйлчлэлийн улмаас нуклейн хүчлүүдийн эрлийзжих, хоёр судалтай бүтэц үүсгэх чадварт суурилдаг.
Хүссэн ДНХ (эсвэл РНХ)-ийн дарааллыг тодорхойлохын тулд тодорхой суурь дараалал бүхий полинуклеотид гэж нэрлэгддэг датчикийг тусгайлан бүтээдэг. Түүний найрлагад тусгай шошгыг нэвтрүүлсэн бөгөөд энэ нь цогцолбор үүсэхийг тодорхойлох боломжийг олгодог.
Генийн шинжилгээг иммунохимийн шинжилгээний арга гэж ангилах боломжгүй ч түүний үндсэн зарчим (нэмэлт бүтцийн харилцан үйлчлэл) нь дархлааны оношлогооны индикатор аргуудтай ижил аргаар хэрэгждэг. Нэмж дурдахад генийг судлах аргууд нь фенотипийн илэрхийлэл (геномд суулгагдсан вирус, "чимээгүй" генүүд) байхгүй тохиолдолд халдварт өвчний талаархи мэдээллийг нөхөх боломжийг олгодог.
ДНХ-ийн шинжилгээ хийхийн тулд ДНХ эсвэл РНХ датчикийн молекулууд урвалд ордог нэг судалтай бүтцийг олж авахын тулд дээжийг денатурат болгодог. Пробуудыг бэлтгэхийн тулд байгалийн эх үүсвэрээс (жишээлбэл, тодорхой бичил биетнээс) тусгаарлагдсан ДНХ-ийн (эсвэл РНХ) янз бүрийн хэсгүүдийг ихэвчлэн вектор плазмид дахь генетикийн дараалал хэлбэрээр эсвэл химийн нийлэгжүүлсэн олигонуклеотидуудыг ашигладаг. Зарим тохиолдолд фрагмент болгон гидролизжүүлсэн геномын ДНХ-ийн бэлдмэлийг датчик, заримдаа РНХ-ийн бэлдмэл, ялангуяа рибосомын РНХ болгон ашигладаг. Үүнтэй ижил үзүүлэлтүүдийг янз бүрийн төрлийн иммунохимийн шинжилгээний шошго болгон ашигладаг: цацраг идэвхт изотоп, флуоресцен, биотоп (авидин-ферментийн цогцолборын цаашдын хөгжил) гэх мэт.
Шинжилгээний дарааллыг боломжит датчикийн шинж чанараар тодорхойлно
Одоогийн байдлаар шаардлагатай бүх найрлагыг агуулсан арилжааны иж бүрдэл улам бүр ашиглагдаж байна.
Ихэнх тохиолдолд шинжилгээний процедурыг дараах үе шатуудад хувааж болно: дээж бэлтгэх (ДНХ-ийн олборлолт, денатураци орно), дээжийг зөөгч дээр бэхлэх (ихэнхдээ полимер мембран шүүлтүүр), эрлийзжүүлэх, эрлийзжүүлэх, холбоогүй бүтээгдэхүүнийг угаах, илрүүлэх. . Стандарт ДНХ эсвэл RNAprobe бэлдмэл байхгүй тохиолдолд эхлээд үүнийг авч, шошголодог.
Дээж бэлтгэхийн тулд бактерийн бие даасан колонийг тодорхойлох эсвэл эсийн өсгөвөрт вирусын концентрацийг нэмэгдүүлэхийн тулд шинжилгээний материалыг урьдчилан "ургах" шаардлагатай байж болно. Мөн хэрэгжүүлдэг шууд шинжилгээцусны ийлдэс, шээсний дээж, хэлбэртэй элементүүдхалдварт бодис байгаа эсэхийг цус эсвэл бүхэл бүтэн цус. Эсийн бүтцээс нуклейн хүчлийг суллахын тулд эсийн задралыг хийдэг бөгөөд зарим тохиолдолд ДНХ-ийн бэлдмэлийг фенол ашиглан цэвэршүүлдэг.
ДНХ-ийн денатураци, өөрөөр хэлбэл нэг судалтай хэлбэрт шилжих нь шүлтлэг бодисоор эмчлэхэд тохиолддог. Дараа нь нуклейн хүчлийн дээжийг тулгуур, нитроцеллюлоз эсвэл нейлон мембранд бэхэлдэг бөгөөд ихэвчлэн вакуумд 80 ° C-д 10 минутаас 4 цагийн турш өсгөвөрлөнө. Цаашилбал, урьдчилан эрлийзжүүлэх явцад датчикийн мембрантай өвөрмөц бус харилцан үйлчлэлийг багасгахын тулд чөлөөт холболтын газруудыг идэвхгүйжүүлдэг. Гибридизацийн процесс нь дээж дэх ДНХ-ийн концентраци, ашигласан датчикийн концентраци, түүний хэмжээ зэргээс хамаарч 2-20 цаг үргэлжилнэ.
Эрлийзжүүлэлт дууссаны дараа холбоогүй бүтээгдэхүүнийг угааж цэвэрлэсний дараа үүссэн цогцолборыг илрүүлдэг. Хэрэв датчик нь цацраг идэвхт шошго агуулсан бол урвалыг харуулахын тулд мембраныг гэрэл зургийн хальсанд (автор радиографи) үзүүлнэ. Бусад шошгоны хувьд зохих журмыг ашигладаг.
Хамгийн ирээдүйтэй нь цацраг идэвхт бус (хүйтэн гэж нэрлэгддэг) датчик авах явдал юм. Үүний үндсэн дээр гибридизацийн аргыг боловсруулж байгаа бөгөөд энэ нь секцийн бэлдмэл, эд эсийн цооролтод эмгэг төрүүлэгч байгаа эсэхийг тогтоох боломжийг олгодог бөгөөд энэ нь эмгэг судлалын шинжилгээнд (in situ эрлийзжүүлэх) онцгой ач холбогдолтой юм.
Генийн судалгааны аргыг хөгжүүлэх чухал алхам бол полимеразын олшруулах урвал (ПГУ) ашиглах явдал байв. Энэ арга нь in vitro олон хуулбарыг нэгтгэх замаар дээж дэх тодорхой (урьдчилан мэдэгдэж байгаа) ДНХ-ийн дарааллын концентрацийг нэмэгдүүлэх боломжтой болгодог. Урвалыг гүйцэтгэхийн тулд судалж буй ДНХ-ийн дээжинд ДНХ-ийн полимеразын ферментийн бэлдмэл, нийлэгжилтэд зориулагдсан илүүдэл дезоксинуклеотид ба праймер гэж нэрлэгддэг бодисууд - төгсгөлийн хэсгүүдэд тохирох 2025 суурьтай хоёр төрлийн олигонуклеотидыг нэмнэ. Сонирхсон ДНХ-ийн дараалал. Праймеруудын нэг нь унших чиглэлийн 53 дахь кодлогч ДНХ-ийн хэлхээний унших хэсгийн эхлэлийн хуулбар, хоёр дахь нь кодчилдоггүй хэлхээний эсрэг талын төгсгөлийн хуулбар байх ёстой. Дараа нь полимеразын урвалын мөчлөг бүрт ДНХ-ийн хуулбарын тоо хоёр дахин нэмэгддэг.
Праймерыг холбохын тулд 94 ° C-т ДНХ-ийн денатураци (хайлах) шаардлагатай бөгөөд дараа нь хольцыг 40-55 ° C хүртэл халаана.
Урвалыг гүйцэтгэхийн тулд програмчлагдсан микро сорьцын инкубаторыг урвалын үе шат бүрт оновчтой температурын өөрчлөлтийг хялбархан сольж байхаар зохион бүтээсэн.
Олшруулах урвал нь генийг шалгах явцад шинжилгээний мэдрэмжийг ихээхэн нэмэгдүүлэх боломжтой бөгөөд энэ нь халдварт бодисын бага концентрацид онцгой ач холбогдолтой юм.
Олшруулалт бүхий генийн шинжилгээний чухал давуу талуудын нэг нь микроскопийн субмикроскопийн хэмжээний эмгэг судлалын материалыг судлах чадвар юм.
Халдвартай материалыг шинжлэхэд илүү чухал ач холбогдолтой аргын өөр нэг онцлог нь далд (чимээгүй) генийг тодорхойлох чадвар юм. Генийн шинжилгээг ашиглахтай холбоотой аргууд нь илүү хялбар, хямд болохын хэрээр халдварт өвчнийг оношлох практикт илүү өргөнөөр нэвтрүүлэх нь дамжиггүй.
ELISA болон RIF аргууд нь үндсэндээ чанарын эсвэл хагас тоон шинж чанартай байдаг. Бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн маш бага концентрацитай үед эсрэгтөрөгчийн эсрэгбиеийн цогцолбор үүсэхийг нүдээр эсвэл энгийн багаж хэрэгслээр илрүүлэх боломжгүй юм. Ийм тохиолдолд эсрэгтөрөгчийн эсрэгбиеийн цогцолборын заалтыг антиген эсвэл эсрэгбиеийн анхны бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн аль нэгэнд нэвтрүүлсэн тохиолдолд хийж болно.
Цацраг идэвхт изотопууд (жишээлбэл, 125I), флюресцент бодис, ферментийг шошго болгон ашиглаж болно.
Ашигласан шошгооос хамааран радиоиммун (RIA), флюресцент дархлаа (FIA), фермент холбоот иммуносорбент шинжилгээ (ELISA) гэх мэт шинжилгээний аргууд байдаг. өнгөрсөн жил ELISA нь өргөн практик хэрэглээг хүлээн авсан бөгөөд энэ нь боломжтой болсонтой холбоотой юм тоон тодорхойлолт, өндөр мэдрэмжтэй, нягтлан бодох бүртгэлийн онцлог, автоматжуулалт.
Ферментийн дархлаа судлалын аргууд нь ферментээр задарч, өнгө үүсгэдэг субстрат ашиглан эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолборыг илрүүлэх боломжийг олгодог бүлэг аргууд юм.
Аргын мөн чанар нь эсрэгтөрөгчийн эсрэгбиеийн урвалын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг хэмжсэн ферментийн шошготой хослуулах явдал юм. Урвалж буй эсрэгтөрөгч эсвэл эсрэгбие нь ферментээр тэмдэглэгдсэн байдаг. Ферментийн нөлөөн дор субстратын хувирал дээр үндэслэн эсрэгтөрөгчийн эсрэгбиеийн урвалын харилцан үйлчлэлийн бүрэлдэхүүн хэсгийн хэмжээг шүүж болно. Фермент дотор энэ тохиолдолдтэмдэглэгээний үүрэг гүйцэтгэдэг дархлааны урвалмөн үүнийг нүдээр эсвэл багажаар ажиглах боломжийг олгодог.
Ферментүүд нь маш тохиромжтой шошго юм, учир нь тэдний катализаторын шинж чанар нь өсгөгчөөр ажиллах боломжийг олгодог, учир нь нэг ферментийн молекул нь минутанд 1 × 105 молекулын каталитик урвалын бүтээгдэхүүн үүсэхийг дэмждэг. Катализаторын үйл ажиллагааг удаан хугацаанд хадгалах, эсрэгтөрөгч, эсрэгбиемтэй холбогдоход алдагдахгүй, субстратын хувьд өндөр өвөрмөц шинж чанартай ферментийг сонгох шаардлагатай.
Ферментийн шошготой эсрэгбие эсвэл эсрэгтөрөгч ба коньюгатуудыг үйлдвэрлэх үндсэн аргууд нь химийн, дархлаа судлалын болон генетикийн инженерчлэл юм. ELISA-д ихэвчлэн ашигладаг ферментүүд нь тунхууны пероксидаза, шүлтлэг фосфатаза, галактозидаза гэх мэт.
Антиген-эсрэгбиеийн цогцолбор дахь ферментийн идэвхийг илрүүлэхийн тулд урвалыг харааны болон багажаар бүртгэхийн тулд хромоген субстратуудыг ашигладаг бөгөөд тэдгээрийн уусмал нь ферментийн урвалын явцад эхлээд өнгөгүй, эрч хүч нь хэмжээтэй пропорциональ өнгөтэй болдог. ферментийн. Тиймээс хатуу фазын ELISA дахь тунхууны пероксидазын идэвхийг илрүүлэхийн тулд эрчимтэй бор өнгө үүсгэдэг 5-аминосалицилийн хүчил, улбар шар-шар өнгө үүсгэдэг орто-фенилендиаминыг субстрат болгон ашигладаг. Шүлтлэг фосфатаза ба β-галатозидазын идэвхийг илрүүлэхийн тулд нитрофенилфосфат ба нитрофенилгалактозидуудыг тус тус ашигладаг.
Өнгөт бүтээгдэхүүн үүсэх урвалын үр дүнг нүдээр эсвэл тодорхой долгионы урттай гэрлийн шингээлтийг хэмждэг спектрофотометр ашиглан тодорхойлно.
ELISA хийх олон сонголт байдаг. Нэг төрлийн болон гетероген сонголтууд байдаг.
Үйлдвэрлэлийн аргын дагуу өрсөлдөөнт болон өрсөлдөх чадваргүй ELISA аргуудыг ялгадаг. Хэрэв эхний үе шатанд системд зөвхөн шинжлэгдсэн нэгдэл ба түүний холбогдох төвүүд (эсрэгтөрөгч ба өвөрмөц эсрэгбие) байгаа бол энэ арга нь өрсөлдөх чадваргүй болно. Хэрэв эхний шатанд шинжилгээнд хамрагдсан нэгдэл (эсрэгтөрөгч) ба түүний аналог (фермент шошготой антиген) байгаа бол дутагдалтай байгаа тусгай холбох төвүүд (эсрэгбие) -тэй холбогдохын тулд бие биетэйгээ өрсөлдөж байгаа бол арга нь өрсөлдөх чадвартай болно. Энэ тохиолдолд уусмал дахь туршилтын эсрэгтөрөгч хэдий чинээ их байна, холбогдох шошготой эсрэгтөрөгчийн тоо төдий чинээ бага байна.
ФЛУОРЕСЦЕНТИЙН ЭСРЭГ БИЕ (MFA) буюу IMMUNOFLUORESCENCE REACTION (RIF) АРГА
Туршилтын материал дахь үл мэдэгдэх бичил биетнийг хурдан илрүүлэх, тодорхойлох сонголт бол иммунофлуоресценцийн арга юм.
Ag + AT + электролит = Хэт ягаан туяанд нийлмэл гэрэлтдэг
Фторхромоор шошготой бичил биетний ийлдэс
Ихэнхдээ хэрэглэдэг будаг нь флуоресцеин изотиоцианат FITC юм
Энэ аргыг судлахдаа флюресцент микроскоп ашигладаг.
RIF үе шат
Т рхэцэд FITC шошготой 30 мкл эсрэгбиеийн уусмалыг хэрэглэнэ.
Шилийг чийгтэй камерт хийж тасалгааны температурт 20-25 минут, эсвэл термостатад 370С-т 15 минут байлгана.
Шилийг ажиллаж байгаа машинд угаана крантны ус 2 минут, нэрмэл усаар зайлж, агаарт хатаана.
Хатаасан т рхэцэд нэг дусал бэхэлгээний шингэний дусал дусааж, т рхэцийг халхавчаар хучиж, флюресцент микроскоп эсвэл ердийн оптик микроскопын флюресцент хавсралтыг ашиглан микроскопоор шалгана.
