Аглютинацийн урвал (лат. агглютинати- наалт) - электролитийн дэргэд эсрэгбиемүүдээр бие махбодийг (нян, цусны улаан эс гэх мэт) наах.
Аглютинацийн урвалэсрэгбиемүүдээр "наалдсан" эсүүд (жишээлбэл, бактери) -аас тогтсон ширхэгүүд эсвэл тунадас хэлбэрээр илэрдэг (Зураг 7.37). Аглютинацийн урвалыг дараахь зорилгоор ашигладаг: өвчтөнөөс тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчийг тодорхойлох; өвчтөний цусны ийлдэс дэх эсрэгбиемийг тодорхойлох; цусны бүлгийг тодорхойлох.
Цагаан будаа. 7.37 а, б. -тэй наалдуулах урвалIgM- эсрэгбие (a) баIgG- эсрэгбие (б)
1. Өвчтөнөөс тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчийг тодорхойлох Ойролцоогоор урвалшилэн дээр наалдуулах (Зураг 7.38). Өвчтөнөөс тусгаарлагдсан бактерийн суспензийг наалдуулах ийлдэс (1:20 шингэрүүлсэн) дусал дээр нэмнэ. Флокулент тунадас үүснэ.
Цагаан будаа. 7.38.
Өвчтөнөөс тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчтэй өргөн хүрээтэй агглютинацийн урвал (Зураг 7.39). Өвчтөнөөс тусгаарлагдсан бактерийн суспензийг наалдуулах ийлдсийн шингэрүүлэлтэнд нэмнэ.
Цагаан будаа. 52
2. Өвчтөний цусны ийлдэс дэх эсрэгбие тодорхойлох
Өвчтөний цусны ийлдэстэй нарийвчилсан наалдуулах урвал (Зураг 7.39). Diagnosticum нь өвчтөний сийвэнгийн шингэрүүлэлтэнд нэмнэ.
- O-diagnosticum-тай агглютинаци (халуунаар үхсэн нянгууд, О-эсрэгтөрөгчийг хадгалж байдаг) нарийн ширхэгтэй агглютинацийн хэлбэрээр явагддаг.
- H-diagnosticum-тай агглютинаци (формальдегидийн нөлөөгөөр үхсэн нянгууд, тугны H-эсрэгтөрөгчийг хадгалж байдаг) их хэмжээтэй бөгөөд илүү хурдан явагддаг.
3. Цусны бүлгийг тодорхойлох агглютинацийн урвалЦусны бүлгийг тодорхойлох агглютинацийн урвалыг цусны бүлгийн эсрэгтөрөгчийн эсрэг дархлааны ийлдэс бүхий эритроцитыг наалдуулах замаар ABO системийг (Хүснэгт б) бий болгоход ашигладаг (Хүснэгт б). Хяналт нь: эсрэгбие агуулаагүй ийлдэс, i.e. ийлдэс AB (IV) цусны бүлэг; A (II), B (III) бүлгийн цусны улаан эсэд агуулагдах эсрэгтөрөгч. Сөрөг хяналт нь эсрэгтөрөгч агуулдаггүй, өөрөөр хэлбэл O (I) бүлгийн эритроцитуудыг ашигладаг.
Хүснэгт 7.6. ABO цусны бүлгийг тодорхойлох
| Урвалын үр дүн |
Бүлэг |
|
|
хамаарах |
||
|
судалсан |
||
|
цусны улаан эсүүдтэй |
ийлдэс (плазм) |
|
|
Стандарт |
стандарттай |
|
|
серумууд | ||
Нарийвчилсан наалдуулах урвал (РА). Өвчтөний цусны ийлдэс дэх AT-ийг тодорхойлохын тулд a өргөн агглютинацийн урвал (RA). Үүнийг хийхийн тулд цусны ийлдэсийг хэд хэдэн шингэрүүлэлтэнд оношлох бодис нэмнэ - устгасан бичил биетний суспенз эсвэл сорбсон Ag бүхий тоосонцор. Хамгийн их шингэрүүлэлт өгөх агглютинаци Ag-ийг ийлдсийн титр гэж нэрлэдэг.
Аглютинацийн урвалын төрлүүд (РА) AT-ийг илрүүлэх - туляремийн цусны дуслын шинжилгээ (цусны дусалд түрхэж, харагдахуйц цагаан өнгийн наалдуулах шинж тэмдэг илэрсэн) болон бруцеллёзын Хаддлесоны шинжилгээ (цусны дусал дээр гентиан ягаанаар будсан оношилгоо) ийлдэс).
Ойролцоогоор наалдуулах урвал (RA)
Тусгаарлагдсан бичил биетнийг тодорхойлохын тулд ойролцоогоор RA-г шилэн слайд дээр байрлуулна. Үүнийг хийхийн тулд эмгэг төрүүлэгчийн өсгөвөрийг стандарт оношлогооны эсрэг ийлдэс (1:10, 1:20 шингэрүүлсэн) дусал дээр нэмнэ. At эерэг үр дүнантисерумын шингэрүүлэлт ихсэх замаар нарийвчилсан урвал явуулна.
УрвалОношлогооны ийлдсийн титртэй ойролцоо шингэрүүлэлтэнд агглютинац ажиглагдвал эерэг гэж үзнэ.
OAS. Соматик O-Agsхалуунд тэсвэртэй, буцалгахад 2 цаг тэсвэрлэх чадвартай.АТ-тай харилцан үйлчлэхэд нарийн ширхэгтэй дүүргэгч үүсгэдэг.
N-Ag. N-Ag (тусгай)нь халуунд тэсвэртэй бөгөөд 100 ° C-д, түүнчлэн этилийн спиртийн нөлөөн дор хурдан мууддаг. H-antiserum-тай урвалд ороход 2 цагийн инкубацийн дараа сул том ширхэгүүд үүсдэг (бактерууд тугны хамт наалдсанаас үүсдэг).
Ви-Архижигний бактери нь халуунд харьцангуй тогтвортой байдаг (60-62 ° C-ийн температурыг 2 цагийн турш тэсвэрлэдэг); Vi antiseum-ээр өсгөвөрлөхөд нарийн ширхэгтэй агглютинат үүснэ.
Шууд гемагглютинацийн урвал
Эдгээрээс хамгийн энгийн нь урвалууд - агглютинациЦусны улаан эс буюу гемагглютинацийг ABO систем дэх цусны бүлгийг тодорхойлоход ашигладаг. Тодорхойлохын тулд агглютинаци(эсвэл дутагдалтай) анти-А ба анти-В агглютининуудтай стандарт антисера хэрэглэнэ. Судалж буй Ags нь цусны улаан эсийн байгалийн бүрэлдэхүүн хэсэг учраас урвалыг шууд гэж нэрлэдэг.
-тэй нийтлэг шууд гемагглютинацивирусын гемагглютинаци нь механизмтай байдаг. Олон тооны вирусууд шувууд, хөхтөн амьтдын эритроцитыг аяндаа наалдуулах чадвартай байдаг бөгөөд тэдгээр нь эритроцитуудын суспензийг нэмснээр тэдгээрээс хуримтлагдах бодис үүсдэг.
Аглютинацийн урвал Аглютинацийн урвал
(RA) - тодорхойлох арга ба тоон үзүүлэлтНүдэнд харагдах бөөгнөрөл үүсгэх чадварт үндэслэн Аг ба Ат. Халдварт өвчний тасагт. өвчин эсвэл бусад зорилгоор үл мэдэгдэх микроб, эсийг тодорхойлох, цус болон бусад шингэн дэх Ab-ийн хэмжээ, хэмжээг тодорхойлоход ашигладаг. Тодорхойлох зарчим нь Ag ба Ab хоёрын харилцан үйлчлэлийн онцлогт суурилдаг бөгөөд үл мэдэгдэхээс мэдэгдэж буйг олоход оршино. Шуурхай үнэлгээний олон сонголт байдаг: тоон ба чанарын, туршилтын хоолой ба шил, эзэлхүүн ба дусал, уламжлалт, хурдасгасан, экспресс аргууд. RA-ийг үе шатанд гаргахын тулд танд хэрэгтэй: 1) цус.Бактерийн төрлийг (var) тодорхойлох хувилбарт туулайг дархлаажуулах замаар үйлдвэрлэсэн агглютинжуулах туршилтыг ашигладаг. Ab-ийн төрлийг тодорхойлох хувилбарт цусны дээжийг шинжилгээнээс авдаг. хүмүүс эсвэл амьтан. Уусмал нь ариутгасан, түдгэлзүүлсэн тоосонцоргүй байх ёстой. Үндсэн шингэрүүлэлтийг давсны уусмалд бэлтгэнэ. Энэ өвчний оношлогооны титрээс 2-4 дахин бага байх ёстой; 2) Аг. Ab төрлийг тодорхойлох урвалын хувилбарт үйлдвэрлэлийн оношлогооны иж бүрдлийг ашигладаг; Ag-ийг тодорхойлох хувилбарт оношилгоог 18-20 цагийн турш давсны уусмалд 1-3 тэрбум суспенз хэлбэрээр бэлтгэдэг агар (багахан шөл) сорил. 700С-ийн усан ваннд 1 цаг халааж эсвэл формальдегид (эцсийн концентраци 0.2%) 370С-т 24 цагийн турш өсгөвөрлөх замаар идэвхгүйжүүлсэн микроб; 3) давсны уусмал хэлбэрээр электролит.Тайзны техник эзэлхүүний цуваа хоолой s-ki дахь Ab титрийг тодорхойлох RA: s-ki-ийн үндсэн шингэрүүлэлтээс хэд хэдэн эгнээ ажлын шингэрүүлэлтийг бэлтгэдэг. Мөрний тоо нь туршилтанд оруулсан оношлогооны тооноос хамаарна; тоо, шингэлэх хүчин зүйлийг сэжигтэй өвчний оношлогооны титрээр тодорхойлно. Цуврал нь наад зах нь оношлогооны Ab титртэй тохирох шингэрүүлэлт, доор нь хоёр шингэрүүлэлт, түүнээс дээш хоёр шингэрүүлэлт агуулсан байх ёстой. жишээлбэл, оношилгооны титр нь 1:100 бол RA-ийн хэмжээст аргыг ашиглан дараах шингэрүүлэлтийг бэлтгэх шаардлагатай: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; дуслаар Аргын хувьд эхний шингэрүүлэлт (1:25) шаардлагагүй, гэхдээ өөр илүү өндөр шингэрүүлэлт шаардлагатай - 1:800. Шинжлэх ухааны судалгаа s-ku нь титрлэгддэг сөрөг хариу үйлдэл. Үүнийг дараах байдлаар шингэлнэ: 0.25 мл давсны уусмалыг 1-ээс бусад бүх туршилтын хоолойд хийнэ, урвалыг 0.5 мл-ийн эзэлхүүнээр, 1-ийн эзэлхүүнтэй үед 0.5 мл-ийг хийнэ. мл. 0.25 (0.5) мл үндсэн шингэрүүлэлтийг 1 ба 2-р туршилтын хоолойд 2-р хоолойноос зүссэн эзэлхүүн рүү хийнэ. үржүүлгийн s-kба 2 дахин нэмэгдэж, 0.25 (0.5) мл-ийг 3-р, 3-аас 4-р зэрэгт шилжүүлнэ. Хамгийн сүүлд зүсэлтээс 0.25 (0.5) мл-ийг эзэлхүүнийг тэнцвэржүүлэхийн тулд бүх зүйлд хийнэ. Шингэрүүлэх бүрийг тусдаа пипеткээр гүйцэтгэдэг. Хэрэв хэд хэдэн оношилгоог туршилтанд оруулбал тэдгээр тус бүрийн хувьд өөрийн цуврал шингэрүүлэлтийг ижил аргаар бэлтгэдэг. Диагностикумыг туршилтын хоолойн шингэрүүлэлт бүрт туршилтын хоолойн эзэлхүүнтэй тэнцүү хэмжээгээр нэмдэг бөгөөд үүний үр дүнд туршилтын хоолой тус бүрийн шингэрүүлэлт хоёр дахин нэмэгддэг. Туршилт нь s-ki хяналт (0.25 - 0.5 мл s-ki үндсэн шингэрүүлэлт ба ижил хэмжээний давсны уусмал) ба Ag хяналт (0.25 - 0.5 мл диагностикум ба ижил хэмжээний давсны уусмал) -тай тохирч байна. Туршилтанд хэд хэдэн оношлогооны аргыг ашигладаг бол тус бүр өөрийн гэсэн эсрэгтөрөгчийн хяналттай байдаг. Туршилтын хоолой бүхий тавиурыг сайтар сэгсэрч, 37 хэмийн температурт термостатад 4 цагийн турш байрлуулж, дараа нь тасалгааны температурт дараагийн өдөр хүртэл байлгасны дараа тунадасны хэмжээ, цэвэршилтийн зэрэг дээр үндэслэн PA-г тэмдэглэнэ. шингэн. Аглютинатын шинж чанараас хамааран эдгээр үзүүлэлтүүдийг тодорхойлохдоо харанхуй дэвсгэр дээр, агглютиноскоп эсвэл микроскопын толины хонхор гадаргуу дээр нүцгэн нүдээр хийдэг. Нягтлан бодох бүртгэл нь хяналтаас эхэлдэг: хяналтын С нь ил тод байх ёстой, Ag нь жигд үүлэрхэг байх ёстой (хоолойг сэгсэрсний дараа). Хэрэв хяналт сайн байвал бүх туршилтын хоолойд наалдуулах байдал, зэргийг тогтооно, эдгээрийг нэмэлтээр тэмдэглэнэ: их хэмжээний тунадас, шингэнийг бүрэн цэвэрлэх - 4 давуу тал; их хэмжээний тунадас, шингэнийг бүрэн цэвэрлээгүй - 3 давуу тал; мэдэгдэхүйц тунадас, шингэний мэдэгдэхүйц цэвэршилт нь 2 давуу тал юм. Үүний дараа титрийг тодорхойлно: наалдуулах эрчимтэй хамгийн их шингэрүүлэлт нь дор хаяж 2 нэмэх юм. Титр судалгаа s-ki-ийг энэ өвчний оношлогооны титртэй харьцуулсан. Хэрэв титрийг шалгаж үзвэл. s-ki нь оношлогооны утгаас 2 дахин бага, хариу урвалыг эргэлзээтэй гэж үнэлдэг; хэрэв титр тэнцүү бол оношлогоо - яажсул эерэг; 2-4 дахин их байвал эерэг, 8 дахин их бол огцом эерэг гэж үзнэ. Ab-ийн өргөн тархсанаар эрүүл хүмүүсШуурхай үнэлгээний үнэлгээний хувьд Ab titer-ийн өсөлтийг ашигладаг. Цуваа RA дахь Ar-ийн төрлийг тодорхойлохын тулд мөрийн тоо нь тодорхойлоход авсан тоотой тохирч байх ёстой. оношлогооны тестүүд. Оношлогооны шинжилгээний үндсэн шингэрүүлэлтээс эхлээд хоёр дахин дараалсан шингэрүүлэлтүүдийг RA-тай ижил аргаар бэлтгэж, Ab титрийг тодорхойлно. Шингэрүүлэх хүчин зүйлүүд нь наалдуулах тестийн титрээс хамаарна.Туршилтанд туршилтын титртэй тэнцэх шингэрүүлэлт байх шаардлагатай ба түүнээс 2, 4, 6, 8 дахин бага байх шаардлагатай.Жишээ нь хэрэв Оношлогооны шинжилгээний титр 13200 байвал 13200, 11600, 1800, 1400, 1200 шингэрүүлэлтийг хэрэглэнэ. Шинжилгээнд хамрагдсан Ag-ийн ижил хэмжээний хэмжээг шинжилгээний шингэрүүлэлтэнд нэмж, үр дүнд нь шингэрүүлэлт хийнэ. туршилт 2 дахин нэмэгдэнэ.Тест болон Ag-ийн 2 хяналтыг туршилтанд нэмнэ.Хэрэв туршилтанд хэд хэдэн s-k оролцсон бол тэдгээр нь тус бүрийг хянах шаардлагатай. Урвал дууссаны дараа тавиурыг хүчтэй сэгсэрч байрлуулна. 37°С температурт термостат.Үр дүнг дээр дурдсанчлан харгалзан үзнэ.Урвалын үнэлгээ нь онцлогтой.Судалгааны нийцлийн талаар дүгнэлт гаргахын тулд. Туршилтанд авсан урвалын титр нь стандарт оношилгооны титрийн дор хаяж тал хувьтай тохирч байх ёстой.1 4 ба түүнээс доош титрийг бүлгийн урвал гэж үзнэ. Drip mdШуурхай үнэлгээний үе шат нь эзэлхүүнээс ялгаатай нь s-ku-г 1 мл-ээр шингэлж, Ag-ийг илүү өндөр концентрацид (10 тэрбум / мл) хэрэглэж, 1 нэмдэг. - 2 туршилтын хоолойд дусаана Аг нэмсний дараа эмийг шингэрүүлэлтийг өөрчлөгдөөгүй гэж үзнэ.Үгүй бол тохируулах, бүртгэх, үнэлэх арга нь эзэлхүүний аргатай төстэй.
(Эх сурвалж: Микробиологийн нэр томьёоны толь бичиг)
ДАРХЛАГЫН МИРОБИОЛОГИЙН СУДАЛГАА
Дархлаа судлалын аргыг олон асуудлыг шийдвэрлэхэд ашигладаг.
1. Нөхцөл байдлын үнэлгээ дархлааны системхүн ( дархлааны байдал) тоон үзүүлэлтийн тодорхойлолтоор ба функциональ шинж чанарууддархлааны тогтолцооны эсүүд ба тэдгээрийн бүтээгдэхүүн.
2. Хүний эд эсийн бүтэц, шинж чанарыг тодорхойлох: цусны бүлэг, Rh хүчин зүйл, шилжүүлэн суулгах эсрэгтөрөгч.
3. Халдварт өвчнийг оношлох, эсрэгбиеийн титр (серодиагностик) тогтоох, тогтоох, бие махбод дахь эмгэг төрүүлэгчийн эсрэгтөрөгчийг тодорхойлох, эдгээр эсрэгтөрөгчийн эсийн урвалыг тодорхойлох.
4. Хүн, амьтны биеэс тусгаарлагдсан бактери, вирүсийн өсгөвөрийг сероид тодорхойлох.
5. Хүний биед болон дотор илрүүлэх гадаад орчинантиген эсвэл гаптен шинж чанартай аливаа бодис (гормон, фермент, хор, эм, эм гэх мэт).
6. Дархлаа судлалын эмгэг, харшил, шилжүүлэн суулгах, хавдрын эсрэг урвалыг тодорхойлох.
Антиген ба эсрэгбие хоорондын харилцан үйлчлэлийн үйл явц серологийн урвалхоёр үе шаттайгаар явагдана:
1) тодорхой- эсрэгбие (паратоп) ба эсрэгтөрөгчийн эпитопуудын идэвхтэй төвүүдийн нэмэлт хослол үүсэх харилцан үйлчлэлийн үе шат. Ихэвчлэн энэ үе шат хэдэн секунд эсвэл минут үргэлжилдэг;
2) өвөрмөц бус- илрэлийн үе шат, тодорхойлогддог гадаад шинж тэмдэгдархлааны цогцолбор үүсэх. Энэ үе шат хэдэн минутаас хэдэн цаг хүртэл хөгжиж болно.
Эсрэгбиемүүдийн эсрэгтөрөгчтэй оновчтой өвөрмөц харилцан үйлчлэл нь саармагтай ойролцоо рН бүхий изотоник уусмалд явагддаг. In vitro систем дэх эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн урвал нь хэд хэдэн үзэгдэл дагалдаж болно.
· агглютинаци,
· хур тунадас,
· лизис.
Гадаад илрэлүүдурвал нь эсрэгтөрөгчийн физик-химийн шинж чанараас хамаардаг (бөөмийн хэмжээ, биеийн байдал), эсрэгбиеийн ангилал ба төрөл (бүрэн ба бүрэн бус), түүнчлэн туршилтын нөхцөл (дунд тууштай байдал, давсны концентраци, рН, температур).
Антиген ба эсрэгбиеийн поливалент байдал нь нүцгэн нүдэнд харагдах агрегатууд үүсэхийг баталгаажуулдаг. Энэ нь сүлжээ үүсэх онолын дагуу явагддаг бөгөөд үүний дагуу бусад эсрэгбие ба эсрэгтөрөгчийн молекулууд үүссэн эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолборт дараалан наалддаг. Үүний үр дүнд сүлжээний бүтэц үүсч, тэдгээр нь тунадас үүсгэдэг дүүргэгч болж хувирдаг. Урвалын шинж чанар, ноцтой байдал нь эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиеийн тоон харьцаанаас хамаарна. Хамгийн хүчтэй урвал нь урвалжууд тэнцүү харьцаатай байх үед тохиолддог.
Урьдчилсан нөхцөлтор үүсэх (сүлжээ) - эсрэгтөрөгчийн молекул тус бүрд гурваас дээш эсрэгтөрөгчийн тодорхойлогч, эсрэгбиеийн молекул бүрт хоёр идэвхтэй төв байдаг. Антиген молекулууд нь торны зангилаа бөгөөд эсрэгбиеийн молекулууд нь холбох холбоос юм. Тунадас үүссэний дараа супернатантад чөлөөт эсрэгтөрөгч болон чөлөөт эсрэгбие илрээгүй үед эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиеийн концентрацийн оновчтой харьцаа (тэнцэх бүс) бүс.
Антиген нь бүрэн эсрэгбиетэй нэгдэх үед тунадас үүсгэж болох агрегатууд үүсдэг. Бүрэн бус эсрэгбие(моновалент) нь сүлжээний бүтэц, том агрегатууд үүсэх шалтгаан болдоггүй. Ийм эсрэгбиемийг илрүүлэхийн тулд хэрэглэнэ тусгай аргуудантиглобулиныг хэрэглэхэд үндэслэсэн (Кумбсын урвал).
Ийлдэс судлалын урвал нь өндөр өвөрмөц, мэдрэмжтэй тул эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиемийг илрүүлэх, тоо хэмжээг тогтооход ашиглагддаг. Урвал дахь иммунореагентуудын хэмжээг титрээр илэрхийлдэг - урвал ажиглагдаж байгаа ийлдэс эсвэл эсрэгтөрөгчийн хамгийн их шингэрүүлэлт.
Микробиологийн болон дархлаа судлалын лабораторид ийлдэс судлалын урвалыг хоёр зорилгоор ашигладаг.
1) мэдэгдэж буй эсрэгбие (дархлааны оношлогооны ийлдэс) ашиглан бичил биетэн, хорт бодис, эсрэгтөрөгчийг ерөнхийд нь сероид тодорхойлох зорилгоор;
2) серодиагностикийн хувьд - мэдэгдэж буй антиген (диагностикум) ашиглан нян, вирус, бусад халдварт өвчний эсрэгбиеийн шинж чанарыг өвчтөний цусны ийлдсэнд тодорхойлох.
Антигенийн ерөнхий, төрөл зүйл, төрлийг тодорхойлохын тулд мэдэгдэж буй дархлааны тест хийх шаардлагатай. оношлогооны ийлдэс. Эдгээрийг амьтдад (ихэвчлэн туулай) дахин дахин хэрэглэх замаар устгасан эсвэл амьд бичил биетэн, тэдгээрийн задралын бүтээгдэхүүн, саармагжуулсан эсвэл уугуул хорт бодисыг ихэсгэх замаар олж авдаг. Амьтны дархлаажуулалтын тодорхой мөчлөгийн дараа малын их хэмжээний цус алдалт эсвэл нийт цус алдалт хийгддэг. Ариутгасан саванд цуглуулсан цусыг эхлээд 370С-ийн температурт термостатад 4-6 цагийн турш байрлуулж, цусны бүлэгнэлтийг түргэсгэж, дараа нь мөсөн хайрцагт нэг хоног байлгана. Үүссэн ил тод ийлдсийг ариутгасан саванд соруулж, хадгалалтын бодис нэмж, эсрэгбиеийн титрийг тодорхойлж, ариутгалыг шалгаж, ампуланд хийнэ.
Ашиглаж байна шингэдэггүйТэгээд шингэсэноношлогооны ийлдэс. Шингээгдээгүй серумууд байдаг өндөр титрэсрэгбие, гэхдээ бүлгийн (хөндлөн) урвал өгөх чадвартай.
Шингээсэн ийлдэс нь үйл ажиллагааны хатуу өвөрмөц шинж чанартай байдаг (тэдгээр нь зөвхөн гомолог эсрэгтөрөгчтэй урвалд ордог). Зөвхөн нэг өвөрмөц эсрэгтөрөгчийн эсрэгбие агуулсан ийлдэс гэж нэрлэдэг монорецептор.
Тэд мөн фторхром, фермент, радиоизотопоор шошготой ийлдсүүдийг үйлдвэрлэдэг бөгөөд энэ нь эсрэгтөрөгчийн ул мөрийг ч өндөр нарийвчлалтайгаар илрүүлэх боломжийг олгодог.
Амьд эсвэл үхсэн бактери, тэдгээрийн задралын бүтээгдэхүүн, хорт бодис, вирусын суспензийг ийлдэс судлалын урвалын эсрэгтөрөгч (оношлогоо) болгон ашигладаг. Зарим тохиолдолд бичил биетэн, амьтны эд эсээс ханд эсвэл химийн аргаар тусгаарлагдсан эсрэгтөрөгчийг хэрэглэдэг.
Дархлалын микробиологийн бүх аргыг 3 бүлэгт хувааж болно:
1) дээр үндэслэсэн эсрэгтөрөгчийн эсрэгбиемтэй шууд харилцан үйлчлэх(агглютинаци, хур тунадас, гемагглютинаци, хөдөлгөөнгүй болох гэх мэт үзэгдлүүд);
2) дээр үндэслэсэн эсрэгтөрөгчийн эсрэгбиемтэй харилцан үйлчлэлцэх(реакци шууд бус гемагглютинаци, коагглютинаци, латекс агглютинаци, нүүрстөрөгчийн бөөгнөрөл, бентонит наалдац, комплемент бэхэлгээ гэх мэт);
3) ашиглах шошготой эсрэгбие эсвэл эсрэгтөрөгч(флюресцент эсрэгбиеийн арга, ферменттэй холбоотой иммуносорбент ба радиоиммун шинжилгээ болон бусад аргууд).
ААГГЛЮТИНАЦИЙН РЕАКС
Эдгээр урвалууд нь тоосонцор (микробын эсүүд, цусны улаан эсүүд болон бусад корпускуляр антигенууд) хэлбэрийн эсрэгтөрөгчийг агуулдаг бөгөөд тэдгээр нь эсрэгбие болон тунадасжилтаар наалддаг.
Аглютинацийн урвалыг гүйцэтгэх(RA) гурван бүрэлдэхүүн хэсэг шаардлагатай: 1) эсрэгтөрөгч (агглютиноген);
2) эсрэгбие (агглютинин)
3) электролит (изотоник натрийн хлоридын уусмал).
Ойролцоогоор наалдуулах урвал (RA)
Үзүүлэлт буюу хавтан, RA-г тасалгааны температурт шилэн слайд дээр байрлуулна. Үүнийг хийхийн тулд Пастерийн пипеткээр 1:10-1:20 шингэрүүлсэн ийлдэс болон натрийн хлоридын изотоник уусмалын хяналтын дуслыг тус тусад нь шилэн дээр хийнэ. Бактерийн колони эсвэл өдөр тутмын өсгөвөрийг (диагностикумын дусал) хоёуланд нь бактериологийн гогцоонд оруулж, сайтар холино. Урвалыг хэдхэн минутын дараа, заримдаа томруулдаг шил (x5) ашиглан нүдээр тооцдог. Эерэг RA-тай үед ийлдэс дуслаар том, жижиг ширхэгүүд гарч ирдэг; сөрөг RA-тай үед ийлдэс нь жигд үүлэрхэг хэвээр байна.
Нарийвчилсан наалдуулах урвалөвчтөнд тодорхой эсрэгбиеийн титрийг тодорхойлохын тулд.
Серодиагнозын бүрэн хэмжээний RA нь өвчтөнүүдийн ийлдэст хийгддэг. Үүнийг мөн натрийн хлоридын изотоник уусмалаар 1:50 - 1:100-аас 1:800 эсвэл 1:1600 хүртэл шингэлнэ. Цусны сийвэнгийн доод титр нь эрүүл хүмүүс эсвэл өөр оноштой өвчтөнүүдэд (оношлогооны титр) хэвийн агглютининыг агуулж болно. Энэ урвалын эсрэгтөрөгчийн хувьд оношилгоог ашигладаг - ихэвчлэн үхсэн бактерийн мэдэгдэж буй суспензүүд.
1 мл изотоник натрийн хлоридын уусмалыг эхлээд наалдуулах хоолойд хийнэ. Эхнийх нь дээр 1:100 харьцаагаар шингэлсэн 1 мл ийлдэс нэмж, хольсны дараа 1 мл-ийг хоёр дахь, хоёр дахь, гурав дахь гэх мэтээр шилжүүлнэ. 1 мл-т 3 тэрбум бичил биет агуулсан бактерийн суспензийн 1-2 дуслыг хоёр дахин шингэрүүлсэн ийлдэс (1:100-аас 1:1600 ба түүнээс дээш) нэмнэ. Хоолойнуудыг сэгсэрч, 37 градусын температурт термостатад 2 цагийн турш байрлуулж, дараа нь тасалгааны температурт 24 цагийн турш байлгана.
Нарийвчилсан наалдуулах урвалыг хяналтын хоолойноос эхлээд зөөлөн сэгсрэх замаар туршилтын хоолой бүрийг дарааллаар үнэлнэ. Хяналтын хоолойд наалдац байх ёсгүй. Агглютинацийн урвалын эрчмийг дараах шинж тэмдгээр тэмдэглэнэ: ++++ - бүрэн наалдуулах (үнэмлэхүй тунгалаг шингэн дэх наалдсан ширхэгүүд); +++ - бүрэн бус наалдуулах (бага зэрэг цайвар шингэн дэх ширхэгүүд); ++ - хэсэгчилсэн наалдуулах (хавсаргууд тод харагдаж, шингэн нь бага зэрэг үүлэрхэг); + - сул, эргэлзээтэй агглютинаци - шингэн нь маш үүлэрхэг, доторх ширхэгүүд нь ялгахад хэцүү байдаг; - - наалдуулахгүй байх (шингэн нь жигд үүлэрхэг).
Цусны сийвэнгийн титрийг сүүлчийн шингэрүүлэлт гэж үздэг бөгөөд наалдуулах эрчмийг хоёроос багагүй эерэг (++) гэж үнэлдэг.
Лекц №16
Толь бичиг
ШУУД -юу ч, дараагийн холбоосуудгүйгээр шууд дараагийн.
ШУУД БУС– шууд бус бусад эсүүдээр дамждаг.
БУУРАХ ≠ ӨСӨХ (эсийн үйл ажиллагаа).
ТАТГАЛЗАХ -хүлээн зөвшөөрөхгүй, татгалзах. Шилжүүлэн суулгасан эрхтнийг бие нь үгүйсгэдэг.
Дархлааны хариу урвал.
Дархлааны урвал нь эсрэгтөрөгч ба эсрэгбие эсвэл эсрэгтөрөгч ба мэдрэмтгий Т-лимфоцитийн өвөрмөц харилцан үйлчлэлийн (холбох) урвал юм.
Эдгээр урвалууд нь in vitro (туршилтын хоолойд) болон in vivo (амьд организмд) тохиолддог.
Эдгээр урвалууд нь ийлдэс (ийлдэс) -ийг агуулдаг тул тэдгээрийг нэрлэдэг ийлдэс судлалын.
Дархлааны хариу үйлдэл нь дассан байдаг халдварт өвчний оношлогоо.Энэ тохиолдолд үл мэдэгдэх бүрэлдэхүүн хэсэг нь мэдэгдэж буй бүрэлдэхүүн хэсэг нь тодорхойлогддог бөгөөд энэ нь эсрэгтөрөгчийн эсрэгбиемтэй харилцан үйлчлэлийн өвөрмөц байдал дээр суурилдаг. Хэрэв мэдэгдэж байгаа эсрэгбие, тэгвэл та чадна үл мэдэгдэх эсрэгтөрөгчийг тодорхойлох (нээх).. Хэрэв мэдэгдэж байгаа антиген, тэгвэл та үүнийг ашиглаж болно үл мэдэгдэх эсрэгбие илрүүлэх.
Тиймээс дархлааны урвалыг ашигладаг:
1) төлөө ийлдэс судлалын оношлогооөвчний (серодиагностик) -өвчтэй хүмүүсийн цусны ийлдэс дэх халдварт өвчний тодорхой үүсгэгч бодис (мэдэгдэж буй антиген) эсрэгбие илрүүлэх; Хэрэв өвчтэй хүний цусны ийлдэст ямар нэгэн эмгэг төрүүлэгчийн эсрэгбие байгаа бол энэ эмгэг төрүүлэгч нь үүнийг үүсгэсэн. халдвар;
2) төлөө микробыг ийлдэс судлалын таних (сероид тодорхойлох) -дархлааны оношлогооны ийлдэс (мэдэгдэж буй эсрэгбие) ашиглан эмгэг төрүүлэгчийн төрлийг тодорхойлох; Хэрэв эсрэгбие нь өвчтэй хүнээс тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчийг холбодог бол энэ бичил биет нь тухайн амьтныг дархлаажуулж байсантай ижил байна. хүлээн авч байнадархлааны оношлогооны ийлдэс .
Дархлааны урвал 2 үе шаттайгаар явагддаг.
1) тодорхой үе шат– эсрэгбиеийн идэвхтэй төвийг эсрэгтөрөгчийн тодорхойлогч бүлэгтэй холбох, эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолбор үүсэх; энэ үе шат хурдан явагддаг боловч харагдахуйц нөлөө байхгүй;
2) өвөрмөц бус үе шат- Гадаад төрх харагдах нөлөөэсрэгтөрөгч ба эсрэгбиеийн харилцан үйлчлэл - алдагдал ноорог(агглютинаци) эсвэл үүлэрхэг(хур тунадас), үүнийг зөвшөөрдөг үзнэ үүболовсрол эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолборуудталаар дүгнэлт гаргана дагаж мөрдөхэсрэгтөрөгч ба эсрэгбие бие биендээ.
Дархлааны хариу урвалууд орно наалдуулах урвал (RA), хур тунадасны урвал (RP), комплемент бэхлэх урвал (CFR).
Аглютинацийн урвал- энэ нь электролитийн дэргэд эсрэгбиеийн нөлөөн дор бичил биет эсвэл бусад эсийг (эритроцит) нааж, тунадасжуулах явдал юм. Урвалын харагдах нөлөө (агглютинацийн үзэгдэл) нь тунадас үүсэх явдал юм. агглютинат.
Энэ урвалыг ашигладаг серодиагностикТэгээд сероид таних. RA нь серодиагностик (өвчтөний цусны ийлдэс дэх эсрэгбие илрүүлэх) зорилгоор ашиглагддаг. хижиг халууралтба паратиф(Видаль урвал), бруцеллёз(Райтын хариу үйлдэл), туляреми ба лептоспироз. Шуурхай үнэлгээний шинжилгээг сероидентификацияд (өвчтөнөөс тусгаарлагдсан эмгэг төрүүлэгчийн төрлийг тодорхойлох) ашигладаг гэдэсний халдвар, хөхүүл ханиалга, холергэх мэт.
Бүрэлдэхүүн хэсгүүдхариу үйлдэл:
1. А нтиген (агглютиноген) -Эдгээр нь бүхэл бүтэн (устгаагүй) бичил биетэн эсвэл бусад эсүүд ( корпускуляр, уусдаггүй антиген). Агглютиноген- энэ бол түдгэлзүүлэлт юм амьдэсвэл алагдсанбичил биетний эсүүд эсвэл бусад эсүүд. Антиген нь үл мэдэгдэх эсвэл мэддэг байж болно. Үл мэдэгдэх агглютиноген нь өвчтөний биеэс тусгаарлагдсан бичил биетний өсгөвөр бөгөөд үүнийг тодорхойлох шаардлагатай. Мэдэгдэж буй антиген - оношилгоо- оношилгооны эм нас барагсдыг түдгэлзүүлэхмикроб мэдэгдэж байгаа төрөл зүйлдавсны уусмалд. Энэ түдгэлзүүлэлт үүлэрхэг (тунгалаг), учир нь бичил биетний эсүүд уусдаггүй, гэхдээ бүрэн бүтэн хэвээр байна. Өвчтөний цусны ийлдэс дэх үл мэдэгдэх эсрэгбиемийг илрүүлэхийн тулд мэдэгдэж буй агглютиногенийг ашиглана.
2. Эсрэгбие (агглютинин)- цусны ийлдэсээс олддог. Эсрэгбие нь үл мэдэгдэх эсвэл мэдэгдэж байж болно. Тодорхойлогдох үл мэдэгдэх эсрэгбие нь цусны ийлдэст байдаг өвчтэй хүн. Мэдэгдэж буй эсрэгбие нь олддог дархлааны оношлогооны ийлдэсгэж нэрлэдэг наалдуулах ийлдэс. Тэдгээрийг серог тодорхойлоход ашигладаг, i.e. үл мэдэгдэх эсрэгтөрөгчийг тодорхойлох - бичил биетний өсгөвөрлөх төрөл.
3. Электролит- 0.9% натрийн хлоридын уусмал.
Оношлогооны тест авах.
Ташуу агар дээр ургадаг мэдэгдэж буй зүйлийн эмгэг төрүүлэгчийн цэвэр өсгөвөрийг (жишээлбэл, хижиг өвчний үүсгэгч бодис) 3-4 мл изотоник уусмалаар угааж, ариутгасан хоолойд хийж, зарим газарт микробуудыг устгадаг. арга (жишээ нь, буцалгах замаар нягтыг тодорхойлно (1 мл-т 3 тэрбум бичил биетний эс байх ёстой). Хэрэв бичил биетний эсүүд үхсэн бол. өндөр температур, дараа нь тэд O-diagnosticum (O-эсрэгтөрөгч) авдаг, гэхдээ формальдегидээр эмчилсэн бол H-diagnosticum (H-эсрэгтөрөгч) авдаг.
Оношлогооны жишээ: salmonella diagnosticum, brucellosis diagnosticum, туляреми оношилгоо.
Наалдуулах ийлдэс бэлтгэх.
Амьтанд (ихэвчлэн туулай) бичил биетний оношилгооны эмийг 5-7 удаа нэмэгдүүлэх тунгаар тариалдаг. хэт дархлаажуулалт хийх), дараа нь тэдгээрийн цусны ийлдсийг авдаг бөгөөд энэ нь оношлогооны бэлдмэлийг бэлтгэсэн микробын эсрэгбиемүүдийг агуулдаг. Хэрэв дархлаажуулалтыг O-diagnosticum-ээр хийсэн бол O-агглютинжуулагч ийлдэс (O-эсрэгбие агуулсан), H-diagnosticum-тай бол H-агглютинжуулагч ийлдэс авна.
Agglutinating ийлдэс байж болно шингээгүйэсвэл уугуул болон шингэсэн.
Шингээгээгүй серумуудхоорондоо нягт холбоотой хэд хэдэн төрлийн микробын бүлгийн эсрэгбиемүүдийг агуулдаг.
Шингээсэн серумууднэг төрлийн микробын нэг буюу хэд хэдэн эсрэгтөрөгчийн эсрэгбие агуулсан. Хэрэв ийлдэс нь зөвхөн нэг эсрэгтөрөгчийн эсрэгбие агуулдаг бол тэдгээрийг нэрлэдэг монорецепторэсвэл моновалент,хэд хэдэн эсрэгтөрөгчтэй бол - бүлэгшингэсэн ийлдэс .
Наалдуулах ийлдсийн жишээ:Салмонелла монорецептор H-агглютинжуулагч ийлдэс, Сальмонелла бүлгийн шингэсэн O-агглютинжуулагч ийлдэс, антихолера О-агглютинжуулагч ийлдэс гэх мэт..
Титрнаалдуулах ийлдэс - эсрэгтөрөгчтэй наалдуулах урвал илэрсэн хэвээр байгаа ийлдсийн хамгийн их шингэрүүлэлт (титр нь цусан дахь эсрэгбиеийн хэмжээнээс хамаарна: эсрэгбие их байх тусам ийлдсийн титр өндөр болно).
RA-г тодорхойлох аргууд.
1. Ойролцоогоор (ламеляр) РА- шилэн дээр хийсэн. 2 дусал ийлдэс, 1 дусал изотоник уусмалыг шилэн слайд дээр хийнэ. Микробын өсгөвөрийг сийвэнгийн дусал дусал болон изотоник уусмалын дусал руу гогцоо хэлбэрээр нэмж, холино. Нэг дусал изотоник уусмал нянгаар – эсрэгтөрөгчийн хяналт, дусал нян агуулаагүй серумууд – эсрэгбиеийн хяналт, дусал микроб бүхий ийлдэс – туршлага.Хэрэв ийлдэс нь түүнтэй холилддог бичил биетний эсрэгтөрөгчтэй тохирох эсрэгбие агуулсан бол эсрэгбие ба эсрэгтөрөгч нь бие биетэйгээ тусгайлан холбогдож, 1-3 минутын дараа агглютинатын ширхэгүүд шинжилгээний дусал дээр гарч ирнэ. Эсрэгтөрөгчийн хяналт нь үүлэрхэг, эсрэгбиеийн хяналт нь тодорхой байх ёстой. Урвалын үр дүнг агглютинатын ширхэгийн харагдах байдал дээр үндэслэн тэмдэглэнэ . Хэрэв ширхэгүүд унавал хариу үйлдэл нь эерэг, өөрөөр хэлбэл. Антиген нь эсрэгбиемтэй тохирч, эсрэгтөрөгчийг эсрэгбиемийг тодорхойлоход ашиглаж болно. Хэрэв үүлэрхэг хэвээр байвал хариу үйлдэл нь сөрөг байна.
2. Нарийвчилсан наалдуулах урвал -туршилтын хоолойд хийсэн. Эхлээд өвчтэй хүний цусны ийлдэсийг 1:50-1:1600-ийн хооронд 2 дахин шингэлнэ. 1 мл изотоник натрийн хлоридын уусмалыг 6 туршилтын хоолойд хийнэ. Өвчтөний цусны ийлдсээс 1:50 харьцаатай 1 мл-ийг эхний туршилтын хоолойд нэмж, хольж, 1:100 шингэрүүлсний дараа 1 мл 1:100 шингэрүүлсэн уусмалыг хоёр дахь хуруу шилэнд хийнэ. ба 1:200-ийн шингэрүүлэлт гэх мэт. Антиген болон ийлдэсийг хянахын тулд хоёр хуруу шилийг хадгалдаг. Сийвэнгийн хяналтанд зөвхөн ийлдэсийг 1:50-ийн шингэрүүлэлтээр, эсрэгтөрөгчийн хяналтанд зөвхөн эсрэгтөрөгчийг нэмнэ. Бусад бүх туршилтын хоолойд 0.1 мл антиген - диагностикум (O- эсвэл H-) нэмээд бүх туршилтын хоолойг 37 ° C температурт 18-20 цагийн турш термостатад хийнэ. Урвалын үр дүнг шинж чанар, үүссэн тунадас (аглютинат) хэмжээ, булингаржилтын зэргээс хамаарч тэмдэглэнэ. Нягтлан бодох бүртгэлийг зөвхөн хяналтын үр дүнгийн дагуу хийдэг: ийлдсийн хяналт - ил тод, эсрэгтөрөгчийн хяналт - үүлэрхэг. O-эсрэгбие нь нарийн ширхэгтэй тунадас үүсгэдэг. H-эсрэгбие - бүдүүн ширхэгтэй. Агглютинацийн урвал харагдаж байгаа сүүлчийн туршилтын хоолойд үндэслэн үүнийг тогтооно оношлогооны титр.
Серодиагнозын үедӨвчин эмгэгийн үед зөвхөн тодорхой эмгэг төрүүлэгчийн эсрэгбиемүүдийг илрүүлэх төдийгүй тэдгээрийн тоо хэмжээг тодорхойлох нь чухал юм. ийм эсрэгбиеийн титр тогтоохЭнэ эмгэг төрүүлэгчээс үүдэлтэй өвчин байгаа эсэхийг хэзээ ярьж болох вэ? . Энэ титрийг оношлогооны титр гэж нэрлэдэг.Жишээлбэл, хижиг өвчнийг оношлохын тулд 1:400 эсрэгбиеийн титрийг тодорхойлох хэрэгтэй, гэхдээ үүнээс багагүй байна. Бүр илүү нарийвчлалтай үр дүнг өгдөг хосолсон ийлдэс дэх эсрэгбиеийн өсөлтийг илрүүлэх.Өвчтөний ийлдсийг өвчний эхэн үед болон 3-5 ба түүнээс дээш хоногийн дараа цуглуулдаг. Хэрэв эсрэгбиеийн титр дор хаяж 4 дахин нэмэгдвэл бид энэ тухай ярьж болно одоогийн өвчин.
Хэрэв сероидификацийн нарийвчилсан наалдуулах урвал явагдсан бол наалдуулах оношилгооны ийлдэсийг титр хүртэл эсвэл титрийнхээ хагас хүртэл шингэлнэ. Оношлогооны сийвэнгийн титртэй ойролцоо шингэрүүлэлтээр агглютинаци илэрсэн тохиолдолд RA эерэг гэж үзнэ.
