№ 43 Genetycznie modyfikowane szczepionki. Zasady uzyskiwania, zastosowanie.
Szczepionki genetycznie modyfikowane to leki otrzymywane przy użyciu biotechnologii, która zasadniczo sprowadza się do rekombinacji genetycznej.
Najpierw uzyskuje się gen, który należy zintegrować z genomem biorcy. Małe geny można uzyskać w drodze syntezy chemicznej. W tym celu rozszyfrowuje się liczbę i sekwencję aminokwasów w cząsteczce białka substancji, następnie na podstawie tych danych określa się kolejność nukleotydów w genie, a następnie przeprowadza się chemiczną syntezę genu.
Duże struktury, które są dość trudne do syntezy, uzyskuje się poprzez izolację (klonowanie), ukierunkowaną eliminację tych formacji genetycznych za pomocą enzymów restrykcyjnych.
Gen docelowy uzyskany jedną z metod poddaje się fuzji enzymatycznej z innym genem, który służy jako wektor do wprowadzenia genu hybrydowego do komórki. Jako wektory mogą służyć plazmidy, bakteriofagi, wirusy ludzkie i zwierzęce. Wyrażony gen jest wstawiany do bakterii lub komórka zwierzęca, który zaczyna syntetyzować wcześniej niezwykłą substancję kodowaną przez wyrażany gen.
Jako biorców eksprymowanego genu najczęściej wykorzystywane są E. coli, B. subtilis, pseudomonady, drożdże, wirusy, niektóre szczepy potrafią przestawić się na syntezę obcej substancji aż do 50% swoich możliwości syntetycznych – szczepy te nazywane są superproducenci.
Czasami do szczepionek modyfikowanych genetycznie dodaje się adiuwant.
Przykładami takich szczepionek są szczepionka przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu B (Engerix), kiły, cholery, brucelozy, grypy i wścieklizny.
Istnieją pewne trudności w opracowywaniu i stosowaniu:
- długi czas leki modyfikowane genetycznie traktowano z ostrożnością.
- znaczne środki przeznaczane są na rozwój technologii uzyskania szczepionki
- przy otrzymywaniu leków tą metodą pojawia się pytanie o tożsamość powstałego materiału z substancją naturalną.
Preparaty szczepionek skojarzonych i skojarzonych. Zalety. Terapia szczepionkowa.
Szczepionki powiązane to preparaty zawierające kilka różnych antygenów i umożliwiające jednoczesną immunizację przeciwko kilku infekcjom. Jeśli lek zawiera jednorodne antygeny, wówczas taka powiązana szczepionka nazywa się poliszczepionką. Jeśli powiązany lek składa się z różnych antygenów, zaleca się nazwanie go szczepionką skojarzoną.
Możliwe jest także szczepienie skojarzone, polegające na jednoczesnym podaniu kilku szczepionek w różne części ciała, na przykład przeciwko ospie prawdziwej (skórnie) i dżumie (podskórnej).
Przykładem poliszczepionki jest żywa szczepionka przeciwko polio zawierająca atenuowane szczepy wirusa polio typu I, II, III. Przykład szczepionka skojarzona to DTP, który obejmuje inaktywowaną szczepionkę korpuskularną przeciwko krztuścowi, toksoidowi błoniczemu i tężcowi.
Szczepionki skojarzone stosuje się w trudnych sytuacjach antyepidemicznych. Ich działanie opiera się na zdolnościach układ odpornościowy reagują na kilka antygenów jednocześnie.
Inżynieria genetyczna to nauka eksperymentalna, która bada wzorce budowy in vitro i zachowanie funkcjonalnie aktywnych rekombinowanych cząsteczek DNA w komórce biorcy.
Przedmiot badań Inżynieria genetyczna to geny – odcinki DNA kodujące syntezę niektórych białek.
Zasada tworzenia genów modyfikowane szczepionki polega na tym, że interesujący nas gen (odpowiedzialny za syntezę białka odpornościowego wirusa) jest „wycinany” z DNA wirusa za pomocą enzymów (enzymów restrykcyjnych) i wstawiany za pomocą enzymów (ligaz), w DNA wektora (na przykład w plazmid E. coli - ten autonomiczny kolisty DNA o długości 4-6 tysięcy par nukleotydów, zdolny do namnażania się w komórkach E. soy). Następnie ten rekombinowany DNA wprowadza się do komórek E. coli, w których zrekombinowany DNA namnaża się (replikuje) i następuje ekspresja zintegrowanego genu, czyli synteza odpowiedniego białka (kodowanego przez zintegrowany gen wirusa).
Komórki bakteryjne E. coli hoduje się w pożywce, w wyniku czego „produkuje się” immunogenne białko wirusa, które izoluje się i po odpowiednim oczyszczeniu wykorzystuje jako materiał do szczepionki. Należy jednak zauważyć, że wiele białek wirusowych, które z sukcesem syntetyzowano w mikroorganizmach, ma bardzo niską aktywność immunogenną. Powodem tego jest specyfika tworzenia struktury białek wirusowych. Z reguły są glikozylowane i mają złożoną strukturę trzeciorzędową lub czwartorzędową. Zatem hemaglutynina wirusa grypy występuje w wirionie w postaci trimeru, który powstaje z monomerycznych polipeptydów w komórkach zwierzęcych. Nie jest możliwe otrzymanie takiej funkcjonalnie aktywnej struktury hemaglutyniny in vitro. Immunogenność hemaglutyniny w wirionie jest kilka tysięcy razy większa niż monomerycznego polipeptydu syntetyzowanego w bakteriach.
Przy produkcji szczepionek modyfikowanych genetycznie, oprócz plazmidów, jako wektory wykorzystuje się fagi, drożdże i wirusy zwierzęce (wirus krowianki, adenowirusy, bakulowirusy i wirusy opryszczki).
Największy efekt uzyskano, stosując wirusa krowianki jako wektor. Wirus ten ma duży genom (około 187 tysięcy par zasad). Możesz go usunąć z znaczący obszar(około 30 tysięcy par nukleotydów), co nie jest niezbędne do namnażania się tego wirusa w komórkach, i w jego miejsce wprowadza się obce geny wirusów, przeciwko którym otrzymuje się szczepionkę. Powstały rekombinowany DNA jest zdolny do namnażania się w organizmie zaszczepionej osoby i wywoływania wytworzenia odporności nie tylko przeciwko ospie prawdziwej, ale także przeciwko wirusowi, którego gen jest osadzony w jego genomie. Stosowanie wirusa krowianki jako wektora do szczepień ma wiele zalet: zdolność do namnażania się w komórkach zwierzęcych wielu gatunków; ekspresjonować wiele genów; wywoływać humor i odporności komórkowe; stabilność termiczna; ekonomiczna produkcja i łatwość użycia. Zidentyfikowane wcześniej braki wirusa krowianki związane z reaktogennością zostały w dużej mierze wyeliminowane za pomocą manipulacja genetyczna. Możliwość włączenia kilku genów kodujących odpowiednie immunogeny umożliwia jednoczesne szczepienie zwierząt przeciwko kilku chorobom wirusowym. Należy jednak pamiętać, że u osób już uodpornionych na wirusa krowianki szczepienie wirusami rekombinowanymi nie daje efektu ze względu na brak jego przeżycia.
W ostatnie lata otrzymane leki profilaktyczne z rekombinowanego szczepu wirusa krowianki zawierającego geny kodujące glikoproteiny powierzchniowe głównych wirusów grypy, wścieklizny, zapalenia układu oddechowego, choroby Aujeszky’ego i zakaźnego zapalenia nosa i tchawicy bydło itd.
Jeśli znajdziesz błąd, zaznacz fragment tekstu i kliknij Ctrl+Enter.
Technologia rekombinacji dokonała przełomu w tworzeniu zasadniczo nowych szczepionek. Zasada tworzenia szczepionki modyfikowane genetycznie polega na tym, że do genomu żywych atenuowanych wirusów, bakterii, drożdży czy komórek eukariotycznych wstawia się gen kodujący powstawanie antygenu ochronnego patogenu, przeciwko któremu szczepionka będzie skierowana.
Jako szczepionki stosuje się same zmodyfikowane mikroorganizmy. lub antygen ochronny powstały podczas ich hodowli in vitro. W pierwszym przypadku odpowiedź immunologiczna jest skierowana nie tylko przeciwko produktom zintegrowanego genu, ale także przeciwko nośnikowi wektora.
Przykładem szczepionki rekombinowanej składającej się z gotowego antygenu jest szczepionka przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu B, a przykładem szczepionek wektorowych, których antygeny są wytwarzane in vivo jest szczepionka przeciwko wściekliźnie. Został on uzyskany ze szczepionki przeciwko ospie wietrznej i znaleziony szerokie zastosowanie w zapobieganiu wściekliźnie wśród dzikich zwierząt przy użyciu przynęty zawierającej tę szczepionkę.
Do stworzenia wektorowych szczepionek zawierających żywe wirusy wykorzystuje się atenuowany wirus zawierający DNA, do którego genomu wprowadza się niezbędny, wstępnie sklonowany gen. Wirus, będący nośnikiem wektora, aktywnie się namnaża, a produkt zintegrowanego genu zapewnia powstanie odporności. Wektor może zawierać kilka wbudowanych genów odpowiedzialnych za ekspresję odpowiednich obcych antygenów. Eksperymentalne szczepionki wektorowe na bazie wirusa krowianki otrzymano metodą: ospa wietrzna, grypa A, wirusowe zapalenie wątroby typu A i B, malaria, opryszczka zwykła. Niestety, szczepionki testowano głównie na zwierzętach, które są odporne na większość tych infekcji.
Produkt rekombinowany nie zawsze ma taką samą strukturę jak naturalny antygen. Immunogenność takiego produktu może zostać zmniejszona. Naturalne antygeny wirusowe w komórkach eukariotycznych ulegają glikozylacji, co zwiększa immunogenność takich antygenów. U bakterii glikozylacja jest nieobecna lub zachodzi inaczej niż w komórkach wyższych eukariontów. U niższych eukariontów (grzyby) procesy potranslacyjne zajmują środkową pozycję.
Deweloper genetycznie modyfikowana szczepionka musi dostarczyć danych na temat stabilności układu ekspresji antygenu podczas przechowywania roboczego banku komórek. Jeżeli w hodowli nasion zachodzą zmiany, którym może towarzyszyć rearanżacja, podział lub insercja nukleotydów, konieczne jest określenie sekwencji nukleotydów, zbadanie map peptydowych oraz sekwencji końcowych aminokwasów produktu inżynierii genetycznej. Zastosowanie mapowania enzymów restrykcyjnych w połączeniu z badaniem markerów kodowanych przez wektor (podatność na antybiotyki itp.) może wskazywać na pojawienie się zmian w strukturze wektora.
Zasady tworzenia bakteryjnych szczepionek rekombinowanych są podobne. Ważnym krokiem jest klonowanie genów i uzyskanie zmutowanych genów kodujących immunogenne, ale nie toksyczne formy antygenu. Sklonowano geny toksyn błonicy i tężca, toksyny Pseudomonas aeruginosa, toksyn wąglika, cholery, krztuśca i szigelozy. Czynione są próby uzyskania szczepionki rekombinowane przeciw rzeżączce i infekcjom meningokokowym.
Jako nośnik wektora bakteryjnego stosuje się BCG, Vibrio cholerae, Escherichia coli, Salmonella tythimurium. Grupa patogenów jelitowych jest obiecująca w kontekście rozwoju szczepionek dojelitowych. Żywe szczepionki rekombinowane podawane doustnie mają krótki czas życia, ale są w stanie wywołać w tym okresie trwałą odporność. Możliwe jest stworzenie wieloskładnikowych szczepionek do jednoczesnej profilaktyki kilku infekcji biegunkowych. Szczepionki wektorów bakteryjnych, w odróżnieniu od wirusowych, można zwalczać antybiotykami. Doustne szczepionki przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu B i malarii zostały przetestowane eksperymentalnie.
W przyszłości planuje się wykorzystanie wektorów zawierających nie tylko geny kontrolujące syntezę antygenów ochronnych, ale także geny kodujące różne mediatory odpowiedzi immunologicznej. Otrzymano rekombinowane szczepy BCG wydzielające interferon, interleukiny i czynnik stymulujący granulocyty. Wstępne badania wskazują na wysoką skuteczność szczepów przeciwko gruźlicy i nowotworom Pęcherz moczowy. Uzyskanie skutecznej szczepionki wektorowej na bazie bakterii jest dość trudne ze względu na niestabilność transfekcji materiału genetycznego, toksyczność obcego antygenu dla bakterii oraz małą ilość eksprymowanego antygenu.
Szczepienia można scharakteryzować na różne sposoby: ludobójstwo, eksterminacja populacji, eksperyment na dużą skalę na żywych dzieciach, manipulacja zbiorową świadomością. W każdym razie zdrowe spojrzenie przez lustro pokazuje, że zdrowie i szczepionki to rzeczy nie do pogodzenia.
RGIV – nowe produkty w profilaktyce chorób zakaźnych. Przykładem takiej szczepionki jest szczepionka przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu B. Biolodzy medyczni, uzbrojeni w metody inżynierii genetycznej, mają bezpośredni dostęp do genomu. Obecnie możliwe jest wstawianie genów, usuwanie ich lub duplikowanie.
Na przykład gen z jednego organizmu można wstawić do genomu innego. Taki transfer informacji genetycznej jest możliwy nawet pomimo „dystansu ewolucyjnego oddzielającego człowieka od bakterii”. Cząsteczkę DNA można pociąć na pojedyncze fragmenty za pomocą specyficznych enzymów i fragmenty te można wprowadzić do innych komórek.
Do komórek bakteryjnych stało się możliwe wbudowywanie genów innych organizmów, w tym genów odpowiedzialnych za syntezę białek. W ten sposób w nowoczesne warunki otrzymują znaczną ilość interferonu, insuliny i innych produktów biologicznych. W podobny sposób otrzymano szczepionkę przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu B – gen wirusa zapalenia wątroby jest wbudowany w komórkę drożdży.
Jak wszystko nowe, zwłaszcza genetycznie modyfikowany lek przeznaczony do podawania pozajelitowego (znowu w dużych ilościach i w trzy godziny po urodzeniu dziecka!), tak i ta szczepionka wymaga długotrwałych obserwacji – czyli mówimy o tym samym „dużym próby na skalę… na dzieciach.”
Z licznych publikacji wynika: „Obserwacje stają się dokładniejsze i wartościowsze, jeśli przeprowadza się je w czasie kampanii masowych szczepień. W ramach takich kampanii w krótkim czasie szczepiona jest duża liczba dzieci. Pojawienie się w tym okresie grupy pewnych zespołów patologicznych wskazuje z reguły na ich związek przyczynowy ze szczepieniem.” Pojęcie pewnego zespołu patologicznego może obejmować krótkotrwałą gorączkę i kaszel, a także całkowity lub częściowy paraliż lub upośledzenie umysłowe.
Oprócz szczepionki Engerix przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu B, południowokoreańska szczepionka przeciw wirusowemu zapaleniu wątroby, która jest aktywnie narzucana naszemu krajowi, jest uznawana za „równie bezpieczną i skuteczną”. Szczepionki modyfikowane genetycznie to leczenie „profilaktyczne” owiane wieloma niewiadomymi. Nasz kraj nie jest w stanie zweryfikować bezpieczeństwa tych produktów ze względu na brak odpowiedniego zaplecza doświadczalnego. Nie jesteśmy w stanie kontrolować jakościowo zakupionych szczepionek ani stworzyć warunków do przygotowania bezpiecznych szczepionek własnych. Testowanie rekombinacyjne leki- zaawansowany technologicznie eksperyment wymagający ogromnych kosztów. Niestety, pod tym względem jesteśmy bardzo daleko od poziomu zaawansowanych laboratoriów na świecie i praktycznie zupełnie nie koncentrujemy się na kontroli tego typu produktów. Pod tym względem w Rosji (i Ukrainie) rejestrowane jest wszystko, co nie minęło Badania kliniczne od zagranicznych producentów tych szczepionek, lub testy przeszły pomyślnie, ale w niewystarczająca głośność... Stąd lawinowa ilość szczepionek od różnych życzliwych osób, „próbujących pomóc Rosji” i przynoszących nam nie technologie jutra czy dzisiejsze, ale przedwczoraj – „w zasadzie odpady z ich nowoczesnej produkcji, czyli te szczepionki które należy zbadać w „eksperymentach na dużą skalę na dzieciach” Częściej nazywa się to „obserwacjami na dużą skalę”, ale zadanie jest jedno – eksperymenty na naszych dzieciach!
Udowodnienie szkodliwości soli rtęci dla niemowląt wydawałoby się bezsensowne i niemoralne, skoro powszechnie znane są konsekwencje ich działania na organizm osoby dorosłej.
Pamiętajmy, że sole rtęci są bardziej niebezpieczne niż sama rtęć. Jednak domowe Szczepionka DPT, zawierający 100 µg/ml mertiolanu (organicznej soli rtęci) i 500 µg/ml formaliny (najsilniejszy mutagen i alergen) jest stosowany od około 40 lat. Do właściwości alergizujących formaldehydu zalicza się: obrzęk naczynioruchowy, pokrzywkę, rinopatię ( chroniczny katar), astmatyczne zapalenie oskrzeli, astma oskrzelowa, alergiczne zapalenie błony śluzowej żołądka, zapalenie pęcherzyka żółciowego, zapalenie okrężnicy, rumień i pęknięcia skóry itp. Wszystko to odnotowują pediatrzy od ponad 40 lat, ale statystyki są ukryte za żelaznymi drzwiami przed opinią publiczną. Tysiące dzieci cierpi od dziesięcioleci, ale lekarzy to nie obchodzi.
Brak danych na temat wpływu mertiodyatu i formaliny, NIKT NIGDY NIE BADAŁ TEGO KONGLOMERATU na młodych zwierzętach pod kątem natychmiastowych reakcji i długoterminowych konsekwencji; powiedzmy, dla nastolatków. Firmy OSTRZEGAJ nie ponoszą zatem żadnej odpowiedzialności za działania naszych szczepiących i kontrolerów! Tak więc w naszym kraju trwają wieloletnie „badania na dużą skalę” na naszych dzieciach z rozwojem różnych zespołów patologicznych. Każdego dnia coraz więcej niewinnych dzieci (tych, którym udało się uniknąć aborcji) wrzuca się do tej piekielnej maszynki do mielenia mięsa, dołączając do grona niepełnosprawnych dzieci i ich nieszczęsnych rodziców, nieświadomych prawdziwej przyczyny cierpienia swoich dzieci. Starannie przygotowana i przeprowadzona „akcja zastraszania ludności” z epidemiami błonicy, gruźlicy i grypy z jednej strony oraz zakazami wobec przedszkoli i szkół nie pozostawia rodzicom szans.
NIE MOŻEMY POZWOLIĆ TYLKO FIRMOM I MAŁO KOMPETENCYJNYM SZCZEPIENIOM NA KORPORACYJNĄ DECYZJĘ O LOSIE NASZYCH DZIECI.
Ponieważ nigdzie indziej na świecie nie prowadzi się szczepień BCG noworodków, działania prowadzone w Rosji i na Ukrainie mają charakter eksperymentalny, ponieważ „ocenia się skuteczność skojarzonego szczepienia noworodków przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu B i gruźlicy na tle masowych immunizacja." Niedopuszczalny stres na ciele noworodków! Ten eksperyment, „szczepienia na wielką skalę w celu wykrycia zespołów patologicznych”, realizowany jest na skalę państwa, które na takie obserwacje przekazało nieograniczoną liczbę własnych dzieci... bez informowania o tym rodziców! Ponadto „zespoły patologiczne” mogą pojawić się rok później, pięć lat lub znacznie później… Istnieją dowody na to, że ta szczepionka może powodować marskość wątroby po 15-20 latach.
Jakie składniki zawiera ENGERIX (szczepionka przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu B)?
1. Podstawą leku są „modyfikowane” drożdże piekarskie, „szeroko stosowane w produkcji chleba i piwa”. Wyraźnie brakuje tu słowa „genetycznie modyfikowane”, najwyraźniej dlatego, że to połączenie już dość przestraszyło społeczeństwo na przykładzie importowanej z zagranicy soi, ziemniaków i kukurydzy. Produkt genetycznie modyfikowany łączy w sobie właściwości składników wchodzących w jego skład, które w przypadku użycia prowadzą do nieprzewidywalnych konsekwencji. Co inżynierowie genetyczni ukryli w komórce drożdży oprócz wirusa zapalenia wątroby typu B? Można tam dodać gen wirusa AIDS lub gen dowolnej choroby nowotworowej.
2. Wodorotlenek glinu. Należy w tym miejscu podkreślić, że od wielu dziesięcioleci nie zaleca się (!) stosowania tego adiuwantu przy szczepieniu dzieci.
3. Tiomerosal jest mertiolanem (organiczną solą rtęci), którego szkodliwy wpływ na ośrodkowy system nerwowy jest znany od dawna i należy do kategorii pestycydów.
4. Polisorbent (nieodszyfrowany).
Szczepionki molekularne.
AG występuje w postaci molekularnej lub w postaci fragmentów jej cząsteczek, które decydują o swoistości antygenowości, czyli w postaci epitopów, determinantów.
Otrzymuje się antygeny w postaci molekularnej:
a) w procesie biosyntezy podczas hodowli naturalnych i rekombinowanych szczepów bakterii i wirusów oraz
b) synteza chemiczna (bardziej pracochłonna i ma ograniczone możliwości w porównaniu z biosyntezą.
Typowy przykład antygeny molekularne powstałe w wyniku biosyntezy przez naturalne szczepy, są toksoidy(tężec, błonica, botulinum itp.), otrzymywany z zneutralizowanych toksyn. W praktyce medycznej stosuje się szczepionkę molekularną przeciwko wirusowi. Wirusowe zapalenie wątroby typu B otrzymane z Ag wirusa wytwarzanego przez rekombinowany szczep drożdży.
Genetycznie modyfikowane szczepionki. Szczepionki modyfikowane genetycznie zawierają patogeny Ag uzyskane metodami inżynierii genetycznej i zawierają jedynie wysoce immunogenne składniki, które przyczyniają się do powstawania odporność ochronna
Możliwych jest kilka opcji tworzenia szczepionek modyfikowanych genetycznie.
Wprowadzenie genów zjadliwości do mikroorganizmów awirulentnych lub słabo zjadliwych.
Wprowadzenie genów zjadliwości do niepowiązanych mikroorganizmów z późniejszą izolacją Ag i jego zastosowaniem jako immunogenu.
Sztuczne usuwanie genów zjadliwości i wykorzystanie zmodyfikowanych organizmów w postaci szczepionek korpuskularnych.
Szczepionki wektorowe (rekombinowane).
Szczepionki otrzymywane metodami inżynierii genetycznej. Istota metody: geny zjadliwego mikroorganizmu odpowiedzialnego za syntezę antygenów ochronnych wprowadza się do genomu nieszkodliwego mikroorganizmu (np. Coli), który hodowany wytwarza i gromadzi odpowiedni antygen.
Szczepionki rekombinowane – do produkcji tych szczepionek wykorzystuje się technologię rekombinacji, integrującą materiał genetyczny drobnoustroju z komórkami drożdży wytwarzającymi antygen. Po wyhodowaniu drożdży izoluje się z nich pożądany antygen, oczyszcza go i przygotowuje szczepionkę. Przykładem takich szczepionek jest szczepionka przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu B (Euvax B).
Szczepionki stosuje się głównie w celu aktywnej, specyficznej profilaktyki, czasami w celu leczenia chorób.
Chłopiec Kola I., lat 7, stał się kapryśny, nie chce jeść, ma niespokojny sen, temperaturę 38,5. W drugiej dobie po chorobie pediatra podczas badania dziecka stwierdził powiększoną prawą stronę ślinianka przyuszna. Skóra nad obrzękiem jest napięta, ale nie zaogniona. Lekarz zdiagnozował Zapalenie przyusznic» Wymień ogniwa w łańcuchu epidemii: źródło, możliwe sposoby transfery. Jakie metody diagnostyki laboratoryjnej należy zastosować w celu potwierdzenia rozpoznania? Jakie leki stosować profilaktycznie?
