№ 43 Генно-інженерні вакцини. Принципи одержання, застосування.
Генно-інженерні вакцини – це препарати, одержані за допомогою біотехнології, яка по суті зводиться до генетичної рекомбінації.
Для початку отримують ген, який має бути вбудований у геном реципієнта. Невеликі гени можна отримати методом хімічного синтезу. Для цього розшифровується число та послідовність амінокислот у білковій молекулі речовини, потім за цими даними дізнаються черговість нуклеотидів у гені, далі слідує синтез гена хімічним шляхом.
Великі структури, які досить складно синтезувати, виходять шляхом виділення (клонування), прицільного вищеплення цих генетичних утворень за допомогою рестриктаз.
Отриманий одним із способів цільовий ген за допомогою ферментів зшивається з іншим геном, який використовується як вектор для вбудовування гібридного гена в клітину. Вектором можуть бути плазміди, бактеріофаги, віруси людини і тварин. Експресований ген вбудовується в бактеріальну або тваринну клітинуяка починає синтезувати невластиву їй раніше речовину, що кодується експресованим геном.
Як реципієнтів гена, що експресується, найчастіше використовується E. coli, B. subtilis, псевдомонади, дріжджі, віруси, деякі штами здатні перемикатися на синтез чужорідної речовини до 50% своїх синтетичних можливостей – ці штам називаються суперпродуцентами.
Іноді до генно-інженерних вакцин додається ад'ювант.
Прикладами таких вакцин є вакцина проти гепатиту В (енджерікс), сифілісу, холери, бруцельозу, грипу, сказу.
Є певні складнощі у розробці та застосуванні:
- довгий часдо генно-інженерних препаратів ставилися насторожено.
- на розробку технології отримання вакцини витрачаються значні кошти
- при отриманні препаратів у такий спосіб виникає питання про ідентичність отриманого матеріалу природній речовині.
Асоційовані та комбіновані вакцинні препарати. Переваги. Вакцинотерапія.
Асоційовані вакцини – препарати, що включають кілька різнорідних антигенів та дозволяють проводити імунізацію проти кількох інфекцій одночасно. Якщо препарат входять однорідні антигени, то таку асоційовану вакцину називають поливакциною. Якщо ж асоційований препарат складається з різнорідних антигенів, його доцільно називати комбінованої вакциною.
Можлива також комбінована імунізація, коли одночасно вводять кілька вакцин в різні ділянки тіла, наприклад, проти віспи (нашкірно) і чуми (підшкірно).
Прикладом полівакцини можна вважати живу поліомієлітну поливакцину, що містить штами вірусу поліомієліту I, II, III типів, що атенуйують. прикладом комбінованої вакциниє АКДС, куди входять інактивована корпускулярна вакцина кашлюку, дифтерійний і правцевий анатоксин.
Комбіновані вакцини застосовуються у складній протиепідемічній обстановці. В основі їх дії лежить здатність імунної системивідповідати кілька антигенів одночасно.
Генна інженерія – це експериментальна наука, що вивчає закономірності конструювання in vitro та поведінку в реципієнтній клітині функціонально активних молекул рекомбінантної ДНК.
Об'єктом дослідження генної інженеріїє гени - відрізки ДНК, що кодують синтез тих чи інших білків.
Принцип створення генно- інженерних вакцинполягає в тому, що цікавий для нас ген (відповідальний за синтез імунного білка вірусу) «вирізують» з ДНК вірусу за допомогою ферментів (рестриктаз) і вбудовують, використовуючи ферменти (лігази), в ДНК вектора (наприклад, в плазміду Е. coli - це автономна кільцева ДНК із 4-6 тис. пар нуклеотидів, здатна розмножуватися в клітинах Е. сой). Потім цю рекомбінантну ДНК вводять у клітини Е. coli, в яких рекомбінантна ДНК розмножується (реплікується) та відбувається експресія вбудованого гена, тобто синтез відповідного білка (кодованого вбудованим геном вірусу).
Бактеріальні клітини Е. coli культивують у живильному середовищі, і відбувається «напрацювання» імуногенного білка вірусу, який виділяють і після відповідного очищення використовують як матеріал для вакцини. Однак необхідно зазначити, що багато вірусних білків, успішно синтезованих в мікроорганізмах, мають дуже низьку імуногенну активність. Причина цього у особливостях формування структури вірусних білків. Як правило, вони глікозильовані, мають складну третинну чи четвертинну структуру. Так, гемаглютинін вірусу грипу знаходиться у віріоні у вигляді тримера, який утворюється з мономерних поліпепдидів у клітинах тварин. Отримати in vitro таку функціонально активну структуру гемаглютиніну не вдається. Імуногенність гемаглютиніну у віріоні у кілька тисяч разів вища, ніж мономерного поліпептиду, синтезованого у бактеріях.
При отриманні генно-інженерних вакцин як вектори крім плазмід використовують фаги, дріжджі, віруси тварин (вірус осповакцини, аденовіруси, бакуло- та герпесвіруси).
Найбільший ефект отримано з вірусом осповакцини, що використовується як вектор. Цей вірус має великий геном (близько 187 тис. пар нуклеотидів). З нього можна видалити значна ділянка(близько 30 тис. пар нуклеотидів), що не є життєво необхідним для репродукції цього вірусу у клітинах, але в його місце вбудувати чужорідні гени тих вірусів, проти яких отримують вакцину. Отримані при цьому рекомбінантні ДНК здатні розмножуватися в організмі щеплених та індукувати утворення імунітету не тільки проти віспи, а й проти того вірусу, чий ген вбудований у його геном. Використання вірусу осповакцини як вектор для вакцинації має ряд переваг: здатність розмножуватися в клітинах тварин багатьох видів; експресувати кілька генів; індукувати гуморальний та клітинний імунітети; термостабільність; економічне виробництво та легкість застосування. Виявлені раніше недоліки у вірусу осповакцини, пов'язані з реактогенністю, були здебільшого усунені за допомогою генетичних маніпуляцій. Можливість включення кількох генів, що кодують відповідні імуногени, дають можливість вакцинувати тварин одночасно проти кількох вірусних хвороб. Однак необхідно мати на увазі, що індивідууми, вже імунні до вірусу осповакцини, при вакцинації рекомбінантним вірусам не дають ефекту через відсутність його приживання.
У Останніми рокамиотримані профілактичні препаратиз рекомбінантного штаму вірусу осповакцини, що містить гени, що кодують поверхневі глікопротеїди вірусів грипу, сказу, респіраторно-сицитіального, хвороби Ауески, інфекційного ринотрахеїту великого. рогатої худобита ін.
Якщо ви знайшли помилку, будь ласка, виділіть фрагмент тексту та натисніть Ctrl+Enter.
Рекомбінантна технологія зробила прорив у створенні нових вакцин. Принцип створення генноінженерних вакцинполягає в тому, що геном живих атенуйованих вірусів, бактерій, дріжджів або клітин еукаріотів вбудовується ген, що кодує утворення протективного антигену того збудника, проти якого буде направлена вакцина.
Як вакцини використовуються самі модифіковані мікроорганізми.або протективний антиген, що утворюється при культивуванні в умовах in vitro. У першому випадку імунна відповідь спрямована не тільки на продукти вбудованого гена, а й на носій вектора.
Приклад рекомбінантної вакцини, що складається з готового антигену, є вакцина проти гепатиту В, а прикладом векторних вакцин, антигени яких утворюються in vivo, є антирабічна вакцина. Вона отримана на основі осповакцини та знайшла широке застосуванняу профілактиці сказу серед диких тварин за допомогою приманки, що містить цю вакцину.
Для створення векторних живих вірусних вакцин використовують атенуйований ДНК-вірус, в геном якого вбудовується необхідний попередньо клонований ген. Вірус, носій вектора активно розмножується, а продукт вбудованого гена забезпечує формування імунітету. Вектор може містити кілька вбудованих генів, які відповідають за експресію відповідних чужорідних антигенів. Експериментальні векторні вакцини на основі вірусу осповакцини отримані до вітряної віспи, грипу А, гепатиту А та В, малярії, простому герпесу. На жаль, вакцини випробувані переважно на тваринах, які стійкі до більшості цих інфекцій.
Рекомбінантний продукт який завжди має таку ж структуру, як і природний антиген. Імуногенність такого продукту може бути зниженою. Природні вірусні антигени в клітинах еукаріотів зазнають глікозилювання, що підвищує імуногенність таких антигенів. У бактеріях глікозилювання відсугує або воно відбувається не так, як у клітинах вищих еукаріотів. У нижчих еукаріотів (грибів) посттрансляційні процеси займають середнє становище.
Розробник генноінженерної вакциниповинен надати дані про стабільність системи експресії антигену під час зберігання робочого банку клітин. За наявності змін у посівній культурі, які можуть супроводжуватися перебудовою, розподілом або вставками нуклеотидів, необхідно визначити нуклеотидну послідовність, дослідити пептидні карти та послідовність кінцевих амінокислот генноінженерного продукту. Використання рестриктазного картування у поєднанні з вивченням маркерів, що кодуються вектором (чутливість до антибіотиків тощо), можуть вказати про появу змін у структурі вектора.
Принципи створення бактеріальних вакцин рекомбінантних аналогічні. Важливим етапом є клонування генів та отримання мутантних генів, що кодують імуногенні, але не токсичні форми антигену. Клоновані гени для дифтерійного та правцевого токсинів, токсину синьогнійної палички, сибірки, холерного, кашлюкового, шигельозного токсинів. Робляться спроби отримати рекомбінантні вакцинипроти гонореї та менінгококової інфекції.
Як носій бактеріального вектора використовується БЦЖ, Vibrio cholerae, Escherichia coli, Salmonella tythimurium. Кишкова група збудників є перспективною для розробки ентеральних вакцин. Живі рекомбінантні вакцини, що введені через рот, мають короткий період життя, але здатні за цей період викликати стійкий імунітет. Можливе створення багатокомпонентних вакцин для миттєвої профілактики проти кількох діарейних інфекцій. Бактеріальні векторні вакцини, на відміну від вірусних, можна контролювати за допомогою антибіотиків. Пройшли експериментальну перевірку оральні вакцини проти гепатиту В та малярії.
У перспективі передбачається використовувати вектори, у яких вбудовані як гени, контролюють синтез протективних антигенів, а й гени, що кодують різні медіатори імунної відповіді. Отримано рекомбінантні штами БЦЖ, які секретують уінтерферон, інтерлейкіни, гранупоцит-стимулюючий фактор. Попередні дослідження свідчать про високу ефективність штамів щодо туберкульозу та раку сечового міхура. Отримувати ефективну векторну вакцину на основі бактерій досить важко через нестабільність транфекції генного матеріалу, токсичність чужорідного антигену для бактерій, малу кількість експресованого антигену.
Вакцинацію можна охарактеризувати по-різному: геноцид, знищення населення, широкомасштабний експеримент над живими дітьми, маніпуляція масової свідомості. У будь-якому випадку здоровий погляд на дзеркало показує, що здоров'я та вакцини – речі не сумісні.
РГІВ – нова продукція у профілактиці інфекційних хвороб. Прикладом такої вакцини є вакцина проти гепатиту В. Озброївшись методами генної інженерії, медико-біологи отримали прямий доступ до геному. Тепер можна вбудовувати гени, видаляти їх або подвоювати.
Наприклад, ген одного організму можна вбудувати у геном іншого. Подібне перенесення генетичної інформації можливе навіть через «еволюційну відстань, що розділяє людину та бактерію». Молекулу ДНК можна розрізати на окремі фрагменти за допомогою специфічних ферментів та ввести ці фрагменти в інші клітини.
Стало можливим включати до бактеріальних клітин гени інших організмів, у тому числі гени, відповідальні за синтез білків. Таким способом сучасних умоваходержують значну кількість інтерферону, інсуліну та інших біопрепаратів. Аналогічним шляхом отримано вакцину проти гепатиту В – ген вірусу гепатиту вбудований у клітину дріжджів.
Як і все нове, тим більше генно-інженерний лікарський засіб, призначений для парентерального введення (у нас знову-таки масово і через три години після народження дитини!), ця вакцина вимагає проведення тривалих спостережень - тобто йдеться про ті ж широкомасштабних випробуваннях… на дітях».
З численних публікацій випливає: «Спостереження стають більш точними та цінними, якщо вони проводяться у період масових кампаній імунізації. У таких кампаніях протягом короткого часу прищеплюється багато дітей. Поява в цей період групи певних патологічних синдромів свідчить, як правило, про їх причинний зв'язок із вакцинацією». У поняття певного патологічного синдрому може входити як короткочасна лихоманка і кашель, і повний чи частковий параліч чи відставання у розумовому розвитку.
Крім вакцини «Енджерікс проти гепатиту В» «такою ж безпечною та ефективною» заявлена протигепатитна південнокорейська вакцина, яка активно нав'язується нашій країні. Генно-інженерні вакцини – «профілактичний» засіб із багатьма невідомими. Наша країна не в змозі перевірити безпеку цієї продукції через відсутність відповідних експериментальних баз. Ми не можемо ні якісно проконтролювати вакцини, що докуповуються, ні створити умови для приготування безпечних власних вакцин. Перевірка рекомбінантних лікарських засобів- Високотехнологічний експеримент, що вимагає величезних витрат. На жаль, ми в цьому відношенні дуже далекі від передових лабораторій світу і практично зовсім не орієнтовані на контроль подібної продукції. У зв'язку з цим у Росії (й Україні) реєструється все те, що не пройшло клінічних випробуваньу закордонних виробників цих вакцин, або випробування пройшли, але в недостатньому обсязі… Звідси лавиноподібна кількість вакцин від різних доброзичливостей, «які прагнуть допомогти Росії» і везуть нам не завтрашні і не сьогоднішні технології, а позавчорашні – «по суті, відходи від їхнього сучасного виробництва, або ті вакцини, які необхідно дослідити в «широкомасштабних експериментах на дітях» ». Найчастіше це називають «широкомасштабними спостереженнями», а завдання одне – досліди наших дітей!
ЗДАВАЛОСЯ Б, БЕЗПОЗНАНО І БЕЗГОДНО ДОКАЗУВАТИ НЕБЕЗПЕКА СОЛІЙ РТУТІ ДЛЯ ГРУДНИХ ДІТЕЙ, КОЛИ ШИРОКО ВІДОМІ НАСЛІДКИ ЇХ ВПЛИВУ НА ОРГАНІЗМ ВІР.
Нагадаємо, що солі ртуті небезпечніші, ніж сама ртуть. Проте вітчизняна вакцина АКДС, Що містить 100 мкг/мл мертіоляту (ртутьорганічної солі) та 500 мкг/мл формаліну (найсильнішого мутагена та алергену) застосовується близько 40 років. До алергенних властивостей формаліну відносяться: набряк Квінке, кропив'янка, ринопата ( хронічний нежить), астматичні бронхіти, бронхіальна астма, алергічні гастрити, холецистити, коліт, еритеми та тріщини шкіри та ін. Все це відзначається педіатрами більше 40 років, але статистика захована за залізними дверима від широкого загалу. Тисячі дітей страждають на десятки років, але чиновникам від медицини до цього діла немає.
Немає жодних даних про дію мертіодята і формаліну, НІКОЛИ І НІХТО НЕ вивчав ЦЬОГО КОНГЛОМЕРАТУ на дитинчатах тварин у плані безпосередніх реакцій та віддалених наслідків; скажімо, для підлітків. Фірми ПОПЕРЕДЖУЮТЬ, отже, не несуть жодної відповідальності за дії наших вакцинаторів та контролерів! Таким чином, у нашій країні продовжуються багаторічні, «широкомасштабні випробування» на наших дітях з розвитком різноманітних патологічних синдромів. З кожним днем у цю пекельну м'ясорубку кидають все нових і нових невинних немовлят (тих, хто уникнув аборту), поповнюючи ряди дітей-інвалідів та їхніх нещасних батьків, які не підозрюють про справжню причину страждань їхніх дітей. Ретельно підготовлена та проведена «кампанія із залякування населення» епідеміями дифтерії, туберкульозу, грипу з одного боку та заборонні заходи щодо дитячих садків та шкіл не залишають жодних шансів батькам.
НЕ МОЖНА ДОПУСКАТИ, ЩОБ ТІЛЬКИ ФІРМИ І МАЛОКОМПЕТЕНТНІ ВАКЦІНАТОРИ КОРПОРАТИВНО ВИРІШУВАЛИ ДОЛУ НАШИХ ДІТЕЙ.
Оскільки більше ніде у світі не проводиться вакцинація БЦЖ новонародженим, заходи, що проводяться в Росії та Україні, є експериментом, тому що «проводять оцінку ефективності поєднаної імунізації новонароджених проти гепатиту В і проти туберкульозу на тлі масової імунізації». Неприпустиме навантаження на організм новонароджених! Цей експеримент, «широкомасштабна вакцинація на предмет виявлення патологічних синдромів» проводиться в масштабі держави, що надала для таких спостережень необмежену кількість власних дітей ... не повідомивши про це батьків! До того ж «патологічні синдроми» можуть проявитися і через рік, і п'ять років і значно пізніше… Існують дані, що ця вакцина через 15 -20 років може викликати цироз печінки.
Які компоненти входять до складу ЕНДЖЕРИКС (вакцина проти гепатиту В)?
1. Основа препарату- «модифіковані» пекарські дріжджі, які «широко застосовуються у виробництві хліба та пива». Тут явно пропущено слово «генетично-модифіковані» – мабуть через те, що це поєднання вже неабияк налякало населення на прикладі сої, картоплі, кукурудзи, що ввозяться з-за кордону. Генетично-модифікований продукт поєднує в собі властивості інгредієнтів, що входять до нього, що призводять при застосуванні до непередбачуваних наслідків. Що запроторювали генні інженери в дріжджову клітину крім вірусу гепатиту В? Можна підселити туди ген вірусу СНІДу чи ген будь-якого онкозахворювання.
2. Гідроокис алюмінію. Тут слід наголосити, що багато десятиліть не рекомендується (!) використовувати цей ад'ювант для вакцинації дітей.
3. Тіомеросаль - це мертіолят (ртутьорганічна сіль), про згубний вплив якого на центральну нервову системувідомо давно, належить до розряду пестицидів.
4. Полісорбент (не розшифровується).
Молекулярні вакцини.
АГ нах-ся у молекулярної формі чи вигляді фрагментів його молекул, визначальних специфічність антигенності, тобто як епітопів, детермінант.
Антигени в молекулярному вигляді одержують:
а) у процесі біосинтезу при вирощуванні природних, а також рекомбінантних штамів бактерій та вірусів та
б) хімічним синтезом. (більш трудомісткий і має обмежені можливостіпроти біосинтезом.
Типовим прикладоммолекулярних антигенів, що утворюються біосинтезом природними штамами, є анатоксини(правцевий, дифтерійний, ботулінічний та ін), що отримуються з знешкоджених токсинів. У медичній практиці використовується молекулярна вакцина проти Вір. Гепатиту В, отриману з АГ вірусу, що продукується рекомбінантним штамом дріжджів.
Генно-інженерні вакцини. Генно-інженерні вакцини містять Аг збудників, отримані з використанням методів генної інженерії, і включають лише високоімуногенні компоненти, що сприяють формуванню захисного імунітету
Можливі кілька варіантів створення генно-інженерних вакцин.
Внесення генів вірулентності до авірулентних або слабовірулентних мікроорганізмів.
Внесення генів вірулентності в неспоріднені мікроорганізми з подальшим виділенням Аг та його використанням як імуноген.
Штучне видалення генів вірулентності та використання модифікованих організмів у вигляді корпускулярних вакцин.
Векторні (рекомбінантні) вакцини
Вакцини, одержані методами генної інженерії. Суть методу: гени вірулентного мікроорганізму, що відповідає за синтез протективних антигенів, вбудовують у геном будь-якого нешкідливого мікроорганізму (e. Coli), який при культивуванні продукує та накопичує відповідний антиген.
Рекомбінантні вакцини - для цих вакцин застосовують рекомбінантну технологію, вбудовуючи генетичний матеріал мікроорганізму в дріжджові клітини, продукуючі антиген. Після культивування дріжджів їх виділяють потрібний антиген, очищають і готують вакцину. Прикладом таких вакцин може бути вакцина проти гепатиту В (Еувакс В).
Вакцини переважно використовують для активної специфічної профілактики, іноді для лікування хвороб.
Хлопчик Коля І., 7 років, став примхливим, цурається їжі, сон неспокійний, температура 38,5. На другий день після захворювання педіатр при огляді дитини виявив збільшену праву привушну залозу. Шкіра над припухлістю напружена, але не запалена. Лікар поставив діагноз « Епідемічний паротит» Перерахуйте ланки епідемічного ланцюжка: джерело, можливі шляхипередачі. Які методи лаб діагностики варто використовувати для підтвердження діагнозу? Якими препаратами має бути підведена профілактика?
