Reakcja aglutynacji (od łac. aglutynacja- sklejanie) - sklejanie ciałek (bakterii, czerwonych krwinek itp.) przez przeciwciała w obecności elektrolitów.
Reakcja aglutynacji objawia się w postaci płatków lub osadu składającego się z ciałek (na przykład bakterii) „sklejonych” przez przeciwciała (ryc. 7.37). Reakcja aglutynacji służy do: określenia patogenu wyizolowanego od pacjenta; oznaczenie przeciwciał w surowicy krwi pacjenta; oznaczanie grup krwi.
Ryż. 7,37 a, ur. Reakcja aglutynacji zIgM-przeciwciała (a) iIgG-przeciwciała (np)
1. Oznaczenie patogenu wyizolowanego od pacjenta Przybliżona reakcja aglutynacja na szkle (ryc. 7.38). Do kropli surowicy aglutynującej (rozcieńczenie 1:20) dodaje się zawiesinę bakterii wyizolowanych od pacjenta. Tworzy się kłaczkowaty osad.
Ryż. 7.38.
Rozległa reakcja aglutynacji z patogenem wyizolowanym od pacjenta (ryc. 7.39). Do rozcieńczeń surowicy aglutynującej dodaje się zawiesinę bakterii wyizolowanych od pacjenta.
Ryż. 52
2. Oznaczenie przeciwciał w surowicy krwi pacjenta
Szczegółowa reakcja aglutynacji z surowicą krwi pacjenta (ryc. 7.39). Diagnosticum dodaje się do rozcieńczeń surowicy pacjenta.
- Aglutynacja z O-diagnosticum (bakterie zabite przez ciepło, zatrzymujące antygen O) zachodzi w postaci aglutynacji drobnoziarnistej.
- Aglutynacja z H-diagnosticum (bakterie zabite przez formaldehyd, zatrzymujące antygen H wici) jest duża i zachodzi szybciej.
3. Reakcja aglutynacji do oznaczania grup krwi Reakcję aglutynacji w celu określenia grup krwi wykorzystuje się do ustalenia układu ABO (tabela b) na podstawie aglutynacji erytrocytów z przeciwciałami surowicy odpornościowej przeciwko antygenom grup krwi A (I), B (III). Kontrolę stanowi: surowica niezawierająca przeciwciał, tj. grupa krwi AB (IV) w surowicy; antygeny zawarte w czerwonych krwinkach grup A (II), B (III). Kontrola ujemna nie zawiera antygenów, tzn. stosuje się erytrocyty grupy O (I).
Tabela 7.6. Oznaczanie grup krwi ABO
| Wyniki reakcji |
Grupa |
|
|
należący |
||
|
zbadane |
||
|
czerwone krwinki z |
surowica (osocze) |
|
|
standard |
ze standardem |
|
|
serum | ||
Szczegółowa reakcja aglutynacji (RA). Aby oznaczyć AT w surowicy krwi pacjenta, a rozległa reakcja aglutynacji (RA). W tym celu do serii rozcieńczeń surowicy krwi dodaje się środek diagnostyczny - zawiesinę zabitych mikroorganizmów lub cząstek z zaadsorbowanym Ag. Daje maksymalne rozcieńczenie aglutynacja Ag nazywa się mianem surowicy.
Rodzaje reakcji aglutynacji (RA) w celu wykrycia AT – test kroplowy w kierunku tularemii (z diagnostyką nałożoną na kroplę krwi i pojawieniem się widocznych białawych aglutynianów) oraz test Huddlesona na brucelozę (z diagnostyką zabarwioną fioletem goryczki nałożonym na kroplę krwi serum).
Przybliżona reakcja aglutynacji (RA)
Aby zidentyfikować wyizolowane mikroorganizmy, na szkiełkach szklanych umieszcza się przybliżony RA. W tym celu do kropli standardowej diagnostycznej surowicy odpornościowej (rozcieńczonej w stosunku 1:10, 1:20) dodaje się hodowlę patogenu. Na wynik pozytywny przeprowadzić szczegółową reakcję ze wzrastającymi rozcieńczeniami surowicy odpornościowej.
Reakcja uznaje się za pozytywny, jeśli aglutynację obserwuje się w rozcieńczeniach bliskich miano surowicy diagnostycznej.
OAS. Somatyczne O-Agi są stabilne termicznie i wytrzymują gotowanie przez 2 h. Podczas interakcji z AT tworzą drobnoziarniste agregaty.
Gderać. N-Ag (wiciowce) są termolabilne i szybko ulegają degradacji w temperaturze 100°C, a także pod wpływem etanolu. W reakcjach z surowicą odpornościową H po 2 godzinach inkubacji tworzą się luźne duże płatki (powstałe z bakterii sklejających się z wiciami).
Vi-Ar bakteria duru brzusznego jest stosunkowo stabilna termicznie (wytrzymuje temperatury 60-62°C przez 2 godziny); Po inkubacji z surowicą odpornościową Vi tworzy się drobnoziarnisty aglutynian.
Bezpośrednie reakcje hemaglutynacji
Najprostszy z nich reakcje - aglutynacja czerwone krwinki, czyli hemaglutynacja, stosowana do określenia grup krwi w układzie ABO. Do ustalenia aglutynacja(lub ich brak) należy stosować standardowe surowice odpornościowe z aglutyninami anty-A i anty-B. Reakcję nazywa się bezpośrednią, ponieważ badane Ag są naturalnymi składnikami czerwonych krwinek.
Wspólne z hemaglutynację bezpośrednią Hemaglutynacja wirusa ma mechanizmy. Wiele wirusów ma zdolność samoistnej aglutynacji erytrocytów ptaków i ssaków, a ich dodatek do zawiesiny erytrocytów powoduje powstawanie z nich agregatów.
Reakcja aglutynacji Reakcja aglutynacji
(RA) - metoda identyfikacji i ujęcie ilościowe Ag i At, w oparciu o ich zdolność do tworzenia aglomeratów widocznych gołym okiem. Na oddziale chorób zakaźnych. chorób lub do innych celów służy do identyfikacji nieznanych drobnoustrojów i komórek, do określenia obecności i ilości Ab we krwi i innych płynach. Zasada determinacji opiera się na specyfice oddziaływania Ag i Ab i polega na odnajdywaniu znanego od nieznanego. Istnieje wiele opcji dla RZS: ilościowe i jakościowe, probówkowe i szklane, wolumetryczne i kropelkowe, konwencjonalne, przyspieszone i ekspresowe. Do etapu RA potrzebujesz: 1) s-ka krew. W wariancie z określeniem rodzaju (var) bakterii stosuje się przemysłowe testy aglutynacyjne, otrzymywane w wyniku immunizacji królików. W wariancie z określeniem rodzaju Ab z badania pobierana jest próbka krwi. ludzie lub zwierzęta. Roztwór musi być sterylny i wolny od zawieszonych cząstek. Przygotować podstawowe rozcieńczenie w roztworze soli. Powinno być 2-4 razy niższe od miana diagnostycznego dla tej choroby; 2) Ag. W wersji reakcji z oznaczeniem typu Ab stosuje się przemysłowe zestawy diagnostyczne; w wariancie z oznaczaniem Ag preparaty diagnostyczne sporządza się samodzielnie w postaci 1-3 miliardowej zawiesiny w roztworze soli 18-20-godzinnego testu agarowego (rzadziej bulionowego). drobnoustrój inaktywowany poprzez ogrzewanie w łaźni wodnej w temperaturze 70°C przez 1 godzinę lub przez 24-godzinną inkubację w temperaturze 37°C z formaldehydem (końcowe stężenie 0,2%); 3) elektrolit w postaci roztworu soli. Technika inscenizacji wolumetryczna rurka szeregowa RA w celu określenia miana Ab w s-ki: z głównego rozcieńczenia s-ki przygotowuje się kilka rzędów rozcieńczeń roboczych. Liczba rzędów zależy od liczby diagnostyk przyjętych do doświadczenia, a liczba i współczynniki rozcieńczenia zależą od miana diagnostycznego podejrzanej choroby. Seria musi zawierać co najmniej rozcieńczenie odpowiadające miano diagnostycznemu Ab, dwa rozcieńczenia poniżej i dwa rozcieńczenia powyżej. np. jeśli miano diagnostyczne wynosi 1:100, to przy wolumetrycznej metodzie oceny stopnia zaawansowania RZS należy przygotować następujące rozcieńczenia: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; za pomocą kroplówki metody nie jest potrzebne pierwsze rozcieńczenie (1:25), ale potrzebne jest kolejne większe rozcieńczenie - 1:800. badania naukowe s-ku jest miareczkowane do reakcja negatywna. Rozcieńcza się w następujący sposób: 0,25 ml roztworu soli wlewa się do wszystkich probówek z wyjątkiem pierwszej, gdy reakcję prowadzi się w objętości 0,5 ml i 0,5 ml, gdy reakcję prowadzi się w objętości 1 ml Wlać 0,25 (0,5) ml głównego rozcieńczenia do 1. i 2. probówki, z 2. probówki do odciętej objętości i hodowla s-k i zwiększono 2 razy, 0,25 (0,5) ml przenosi się na 3., z 3. na 4. itd. do końca, z nacięcia wlewa się do wszystkiego 0,25 (0,5) ml, aby zrównoważyć objętości. Każde rozcieńczenie przeprowadza się za pomocą osobnej pipety. Jeśli do doświadczenia zostanie wziętych kilka diagnostyk, to dla każdego z nich w ten sam sposób przygotowuje się własną serię rozcieńczeń. Do każdego rozcieńczenia probówki dodaje się Diagnosticum w objętości równej objętości probówki, w wyniku czego rozcieńczenie w każdej probówce ulega podwojeniu. Doświadczenie odpowiada kontroli s-ki (0,25 - 0,5 ml głównego rozcieńczenia s-ki i taka sama ilość roztworu soli) i kontroli Ag (0,25 - 0,5 ml Diagnostyki i taka sama ilość roztworu soli). Jeśli w eksperymencie wykorzystano kilka środków diagnostycznych, wówczas każdy miał własną kontrolę antygenową. Statyw z probówkami dobrze wytrząsa się i umieszcza w termostacie w temperaturze 37°C na 4 godziny, a następnie pozostawia w temperaturze pokojowej do następnego dnia, po czym rejestruje się PA na podstawie ilości osadu i stopnia oczyszczenia płyn. Oznaczanie tych wskaźników, w zależności od charakteru aglutynianów, przeprowadza się gołym okiem na ciemnym tle, w aglutynoskopie lub nad wklęsłą powierzchnią zwierciadła mikroskopu. Rozliczanie rozpoczyna się od kontroli: kontrola C powinna być przezroczysta, Ag powinna być równomiernie mętna (po wstrząśnięciu probówki). Jeżeli kontrole są dobre, należy ustalić obecność i stopień aglutynacji we wszystkich probówkach, co jest oznaczone plusami: duży osad i całkowite oczyszczenie cieczy - 4 plusy; duży osad i niepełne oczyszczenie cieczy - 3 plusy; zauważalny osad i zauważalne przejaśnienie płynu to 2 plusy. Następnie określa się miano: najwyższe rozcieńczenie o intensywności aglutynacji co najmniej 2 plusy. Badania miana s-ki porównuje się z mianem diagnostycznym tej choroby. Jeśli zbadane zostanie miano. s-ki jest 2 razy mniejsze od wartości diagnostycznej, reakcję ocenia się jako wątpliwą; jeśli miano jest równe diagnostyka - jak słabo pozytywny; jeśli jest 2-4 razy wyższy, uważa się go za dodatni, jeśli jest 8 lub więcej razy wyższy, uważa się go za zdecydowanie pozytywny. Wraz z powszechną dystrybucją Ab zdrowi ludzie Do oceny RZS wykorzystuje się wzrost miana Ab. Aby określić typ Ar w seryjnym RA, liczba wierszy musi odpowiadać liczbie pobranej do identyfikacji testy diagnostyczne. Z głównego rozcieńczenia testu diagnostycznego przygotowuje się serię kolejnych dwukrotnych rozcieńczeń w taki sam sposób jak w RZS w celu określenia miana Ab. Współczynniki rozcieńczenia zależą od miana testu aglutynacji.W doświadczeniu konieczna jest obecność rozcieńczenia równego miano testu, a także 2, 4, 6, 8 razy mniejsze od niego.Na przykład, jeśli miano testu diagnostycznego wynosi 1 3200, wówczas należy zastosować rozcieńczenia 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 Do rozcieńczeń testu dodaje się tę samą objętość badanego Ag, w efekcie rozcieńczenie próba wzrasta 2-krotnie.Do doświadczenia dodaje się 2 kontrole testu i Ag.Jeśli w doświadczeniu bierze udział kilka s-k, to każdy z nich potrzebuje własnej kontroli.Po zakończeniu reakcji stanowisko należy energicznie wstrząsnąć i umieścić w termostacie w temperaturze 37 ° C. Wyniki uwzględnia się w sposób opisany powyżej. Ocena reakcji ma cechy. Aby wyciągnąć wniosek na temat zgodności badania. Ag wzięte do doświadczenia, miano reakcji musi odpowiadać co najmniej połowie miana standardowego testu diagnostycznego. Miana 1 4 i mniejsze uważa się za reakcję grupową Kroplówka md Stopień zaawansowania RA różni się od wolumetrycznego tym, że s-ku rozcieńcza się w objętości 1 ml, Ag stosuje się w większym stężeniu (10 miliardów/ml) i dodaje się go 1 - 2 wpada do probówki Rozcieńczenie leku po dodaniu Ag uważa się za niezmienione, w przeciwnym razie sposób ustawiania, rejestrowania i oceny jest podobny do metody wolumetrycznej
(Źródło: Słownik terminów mikrobiologicznych)
BADANIA IMMUNOMIKROBIOLOGICZNE
Metody immunologiczne stosuje się do rozwiązania wielu problemów:
1. Ocena stanu układ odpornościowy osoba ( stan odporności) z definicji ilościowej i cechy funkcjonalne komórki układu odpornościowego i ich produkty.
2. Oznaczanie składu i cech tkanek ludzkich: grupy krwi, czynnik Rh, antygeny transplantacyjne.
3. Diagnostyka chorób zakaźnych i odporności na nie poprzez wykrywanie i oznaczanie mian przeciwciał (serodiagnoza), identyfikację antygenów patogenów w organizmie oraz określenie reakcji komórkowych na te antygeny.
4. Identyfikacja seroidowa kultur bakterii i wirusów izolowanych z organizmu ludzi i zwierząt.
5. Wykrywanie w organizmie człowieka iw otoczenie zewnętrzne wszelkie substancje o właściwościach antygenowych lub haptenowych (hormony, enzymy, trucizny, leki, narkotyki itp.).
6. Identyfikacja stanów immunopatologicznych, alergii, reakcji transplantacyjnych i przeciwnowotworowych.
Proces interakcji pomiędzy antygenem i przeciwciałem reakcje serologiczne zachodzi w dwóch fazach:
1) konkretny- faza interakcji, w której następuje komplementarna kombinacja aktywnych centrów przeciwciał (paratopów) i epitopów antygenu. Zazwyczaj ta faza trwa kilka sekund lub minut;
2) niespecyficzny- faza manifestacji, scharakteryzowana znaki zewnętrzne powstawanie kompleksów immunologicznych. Faza ta może trwać od kilku minut do kilku godzin.
Optymalna specyficzna interakcja przeciwciał z antygenem zachodzi w roztworze izotonicznym o pH zbliżonym do obojętnego. Reakcji antygen-przeciwciało w układzie in vitro może towarzyszyć wystąpienie kilku zjawisk
· aglutynacja,
· opad atmosferyczny,
· Liza.
Objawy zewnętrzne reakcje zależą od właściwości fizykochemicznych antygenu (wielkość cząstek, stan fizyczny), klasę i rodzaj przeciwciał (pełne i niekompletne), a także warunki doświadczenia (konsystencja medium, stężenie soli, pH, temperatura).
Wielowartościowość antygenów i przeciwciał zapewnia powstawanie agregatów widocznych gołym okiem. Dzieje się to zgodnie z teorią tworzenia sieci, zgodnie z którą do powstałego kompleksu antygen-przeciwciało przyłączane są kolejno inne przeciwciała i cząsteczki antygenu. W efekcie powstają struktury sieciowe, które zamieniają się w wytrącające się agregaty. Charakter i nasilenie reakcji zależą od ilościowego stosunku antygenów i przeciwciał. Najbardziej intensywne reakcje zachodzą, gdy odczynniki są w równoważnych proporcjach.
Warunek wstępny tworzenie sieci (sieci) - obecność więcej niż trzech determinant antygenowych dla każdej cząsteczki antygenu i dwóch centrów aktywnych dla każdej cząsteczki przeciwciała. Cząsteczki antygenu są węzłami sieci, a cząsteczki przeciwciał są ogniwami łączącymi. Obszar optymalnych stosunków (strefa równoważności) stężeń antygenu i przeciwciał, gdy po utworzeniu osadu w supernatancie nie wykrywa się ani wolnych antygenów, ani wolnych przeciwciał.
Agregaty, które mogą wytrącać się, powstają, gdy antygeny łączą się z pełnymi przeciwciałami. Niekompletne przeciwciała(jednowartościowe) nie powodują powstawania struktur sieciowych i dużych agregatów. Aby wykryć takie przeciwciała, użyj specjalne metody w oparciu o zastosowanie antyglobulin (reakcja Coombsa).
Reakcje serologiczne, ze względu na swoją wysoką swoistość i czułość, służą do wykrywania i oznaczania ilościowego antygenów i przeciwciał. Ilość immunoodczynników w reakcjach wyraża się mianem miana – maksymalnego rozcieńczenia surowicy lub antygenu, przy którym nadal obserwuje się reakcję.
Reakcje serologiczne w laboratoriach mikrobiologicznych i immunologicznych wykorzystywane są do dwóch celów:
1) do seroidentyfikacji drobnoustrojów, toksyn, antygenów ogólnie przy użyciu znanego przeciwciała (immunologicznej surowicy diagnostycznej),
2) do serodiagnostyki - określenie charakteru przeciwciał w surowicy krwi pacjenta na choroby bakteryjne, wirusowe i rzadziej inne choroby zakaźne przy użyciu znanego antygenu (diagnosticum).
Aby określić rodzaj, gatunek i typ antygenu, wymagane są znane testy immunologiczne. surowice diagnostyczne. Uzyskuje się je poprzez wielokrotne podawanie zwierzętom (najczęściej królikom) w rosnących dawkach zabitych lub żywych mikroorganizmów, produktów ich rozkładu, toksyn zneutralizowanych lub natywnych. Po pewnym cyklu immunizacji zwierząt przeprowadza się masowe upuszczanie krwi lub całkowite wykrwawienie zwierzęcia. Krew pobraną do sterylnego pojemnika umieszcza się najpierw w termostacie w temperaturze 37°C na 4 – 6 godzin w celu przyspieszenia krzepnięcia, a następnie na jeden dzień w lodówce. Powstałą przezroczystą surowicę zasysa się do sterylnego pojemnika, dodaje konserwanty, określa się miano przeciwciał, sprawdza pod kątem sterylności i rozlewa do ampułek.
Są używane nieadsorbowane I zaadsorbowany surowice diagnostyczne. Niezaadsorbowane serum mają wysokie miana przeciwciała, ale są zdolne do wywoływania reakcji grupowych (krzyżowych).
Zaadsorbowane surowice charakteryzują się ścisłą swoistością działania (reagują jedynie z antygenem homologicznym). Nazywa się surowice zawierające przeciwciała tylko przeciwko jednemu specyficznemu antygenowi monoreceptor.
Produkują także surowice znakowane fluorochromami, enzymami i radioizotopami, które umożliwiają wykrycie nawet śladów antygenu z dużą dokładnością.
Zawiesiny żywych lub zabitych bakterii, produktów ich rozkładu, toksyn i wirusów stosuje się jako antygeny (diagnosticums) w reakcjach serologicznych. W niektórych przypadkach stosuje się ekstrakty lub chemicznie izolowane antygeny z mikroorganizmów i tkanek zwierzęcych.
Wszystkie metody immunomikrobiologiczne można podzielić na 3 grupy:
1) na podstawie bezpośrednie oddziaływanie antygenu z przeciwciałem(zjawiska aglutynacji, wytrącania, hemaglutynacji, immobilizacji itp.);
2) na podstawie pośrednie oddziaływanie antygenu z przeciwciałem(reakcje hemaglutynacja pośrednia, koaglutynacja, aglutynacja lateksowa, aglomeracja węgla, aglutynacja bentonitu, wiązanie dopełniacza itp.);
3) używanie znakowane przeciwciała lub antygeny(metoda fluorescencyjna, immunoenzymatyczna i radioimmunologiczna oraz inne metody).
REAKCJE Aglutynacji
Reakcje te obejmują antygeny w postaci cząstek (komórki drobnoustrojów, krwinki czerwone i inne antygeny korpuskularne), które są sklejane ze sobą przez przeciwciała i wytrącają się.
Aby przeprowadzić reakcję aglutynacji(RA) potrzebne są trzy składniki: 1) antygen (aglutynogen);
2) przeciwciało (aglutynina)
3) elektrolit (izotoniczny roztwór chlorku sodu).
Przybliżona reakcja aglutynacji (RA)
Wskaźnikowy lub płytkę RA umieszcza się na szkiełku w temperaturze pokojowej. W tym celu za pomocą pipety Pasteura nanieść na szybę kroplę surowicy w rozcieńczeniu od 1:10 do 1:20 i oddzielnie kroplę kontrolną izotonicznego roztworu chlorku sodu. Do obu pętli bakteriologicznych wprowadza się kolonie lub codzienną hodowlę bakterii (kropla Diagnostyka) i dokładnie miesza. Reakcje ocenia się wizualnie po kilku minutach, czasami przy użyciu szkła powiększającego (x5). W przypadku dodatniego RA obserwuje się pojawienie się dużych i małych płatków w kropli surowicy, w przypadku ujemnego RA surowica pozostaje jednolicie mętna.
Szczegółowa reakcja aglutynacji w celu określenia miana swoistych przeciwciał u pacjenta.
Pełnoobjawowe RZS do celów serodiagnostyki przeprowadza się w surowicy pacjentów. Rozcieńcza się go również w izotonicznym roztworze chlorku sodu od 1:50 - 1:100 do 1:800 lub 1:1600, ponieważ niższe miana w surowicy mogą zawierać normalne aglutyniny występujące u osób zdrowych lub pacjentów z inną diagnozą (miano diagnostyczne). Jako antygen w tej reakcji stosuje się środki diagnostyczne – znane zawiesiny, zwykle zabitych bakterii.
Do probówek aglutynacyjnych wlewa się najpierw 1 ml izotonicznego roztworu chlorku sodu. Do pierwszego z nich dodaje się 1 ml surowicy rozcieńczonej 1:100, po wymieszaniu 1 ml przenosi się do drugiego, z drugiego do trzeciego itd. Do otrzymanych dwukrotnych rozcieńczeń surowic (od 1:100 do 1:1600 lub więcej) dodaje się 1-2 krople zawiesiny bakteryjnej zawierającej 3 miliardy ciał drobnoustrojów w 1 ml. Probówki wytrząsa się i umieszcza w termostacie w temperaturze 37°C na 2 godziny, następnie utrzymuje w temperaturze pokojowej na 24 godziny.
Szczegółową reakcję aglutynacji uwzględnia się oceniając kolejno każdą probówkę, zaczynając od kontrolnej, delikatnie potrząsając. W probówkach kontrolnych nie powinno występować aglutynacja. Intensywność reakcji aglutynacji oznacza się następującymi znakami: ++++ - aglutynacja całkowita (aglutynacja płatków w całkowicie przezroczystej cieczy); +++ - niepełna aglutynacja (płatki w lekko opalizującej cieczy); ++ - częściowa aglutynacja (płatki są wyraźnie widoczne, płyn jest lekko mętny); + - słaba, wątpliwa aglutynacja - ciecz jest bardzo mętna, zawarte w niej płatki są trudne do odróżnienia; - - brak aglutynacji (płyn jest jednolicie mętny).
Za miano surowicy przyjmuje się jej ostatnie rozcieńczenie, w którym intensywność aglutynacji ocenia się na co najmniej dwa plusy (++)
Wykład nr 16
Słownik
BEZPOŚREDNI - prosto dalej bez niczego, bez kolejnych linków.
POŚREDNIO– poprzez inne komórki, a nie bezpośrednio.
SPADEK ≠ WZROST (aktywność komórek).
ODRZUCIĆ - nie akceptować, odrzucać. Organizm odrzuca przeszczepiony narząd.
Reakcje immunologiczne.
Reakcje immunologiczne to reakcje specyficznego oddziaływania (wiązania) antygenu i przeciwciała lub antygenu i uwrażliwionego limfocytu T.
Reakcje te zachodzą in vitro (w probówce) i in vivo (w żywym organizmie).
Reakcje te obejmują surowicę (surowicę) i dlatego są nazywane serologiczne.
Do tego przyzwyczajona jest reakcja immunologiczna diagnostyka chorób zakaźnych. W tym przypadku nieznany składnik jest określany przez znany składnik, który opiera się na specyficzności interakcji antygenu z przeciwciałem. Jeśli znane przeciwciało, wtedy możesz zidentyfikować (odkryć) nieznany antygen. Jeśli znany antygen, wtedy możesz z niego skorzystać wykryć nieznane przeciwciała.
W związku z tym wykorzystuje się odpowiedzi immunologiczne:
1) za diagnostyka serologiczna(serodiagnostyka) chorób - wykrycie w surowicy krwi chorych przeciwciał przeciwko konkretnemu czynnikowi wywołującemu chorobę zakaźną (znany antygen); jeśli w surowicy krwi chorego znajdują się przeciwciała przeciwko jakiemukolwiek patogenowi, to jest to spowodowane tym patogenem infekcja;
2) za identyfikacja serologiczna (seroidentyfikacja) drobnoustrojów - określenie rodzaju patogenu za pomocą surowic do diagnostyki immunologicznej (znane przeciwciała); jeśli przeciwciała wiążą patogen wyizolowany od chorego, to drobnoustrój ten jest identyczny z tym, którym zwierzę zostało zaszczepione otrzymujący Surowica do diagnostyki układu odpornościowego .
Reakcje immunologiczne zachodzą w 2 fazach:
1) konkretna faza– połączenie centrum aktywnego przeciwciała z grupą determinacyjną antygenu z utworzeniem kompleksów antygen-przeciwciało; faza ta przebiega szybko, ale nie ma widocznego efektu;
2) faza niespecyficzna- wygląd widoczny efekt interakcja antygenu i przeciwciała - utrata projekt(aglutynacja) lub zachmurzenie(opady), co pozwala Widzieć Edukacja kompleksy antygen-przeciwciało i wyciągnij wnioski na temat zgodność antygen i przeciwciało względem siebie.
Reakcje immunologiczne obejmują reakcja aglutynacji (RA), reakcja strącania (RP), reakcja wiązania dopełniacza (CFR).
Reakcja aglutynacji- jest to sklejanie i wytrącanie komórek drobnoustrojów lub innych komórek (erytrocytów) pod wpływem przeciwciał w obecności elektrolitu. Widocznym efektem reakcji (zjawiskiem aglutynacji) jest utworzenie się osadu tzw aglutynować.
Reakcja ta służy do serodiagnoza I seroidentyfikacja. RA służy do serodiagnostyki (wykrywania przeciwciał w surowicy krwi pacjentów) dur brzuszny i paratyfus(reakcja Vidala), bruceloza(reakcja Wrighta) tularemia i leptospiroza. RA służy do seroidentyfikacji (określenia rodzaju patogenu wyizolowanego od pacjenta). infekcje jelitowe, krztusiec, cholera itd.
składnikireakcje:
1. A ntigen (aglutynogen) – są to całe (nie zniszczone) komórki drobnoustrojów lub innych komórek ( korpuskularny, nierozpuszczalny antygen). Aglutynogeny- to jest zawieszenie żywy Lub zabity komórki drobnoustrojów lub inne komórki. Antygeny mogą być nieznane lub znane. Nieznany aglutynogen to kultura drobnoustrojów wyizolowana z organizmu pacjenta, którą należy oznaczyć. Znany antygen – diagnostyka– lek diagnostyczny – zawieszenie zmarłych mikroby znane gatunki w roztworze soli. To zawieszenie mętny (nieprzezroczysty), ponieważ komórki drobnoustrojów nie rozpuszczają się, lecz pozostają nienaruszone. Znany aglutynogen zostanie wykorzystany do wykrycia nieznanych przeciwciał w surowicy krwi pacjentów.
2. Przeciwciało (aglutynina)- występuje w surowicy krwi. Przeciwciała mogą być również nieznane lub znane. W surowicy krwi znajdują się nieznane przeciwciała, które należy oznaczyć chora osoba. Znane przeciwciała występują w surowice do diagnostyki układu odpornościowego które nazywają się aglutynujące surowice. Służą do seroidentyfikacji, tj. w celu określenia nieznanego antygenu - rodzaj hodowli drobnoustrojów.
3. Elektrolit– 0,9% roztwór chlorku sodu.
Uzyskanie testu diagnostycznego.
Czystą kulturę patogenu znanego gatunku wyhodowanego na skośnym agarze (na przykład czynnika wywołującego dur brzuszny) zmywa się 3-4 ml roztworu izotonicznego, umieszcza się w sterylnej probówce, drobnoustroje zabija się w pewnym sposób (np. przez gotowanie i określenie gęstości (w 1 ml powinno znajdować się 3 miliardy komórek drobnoustrojów). Jeżeli komórki drobnoustrojów zostaną zabite wysoka temperatura, wówczas dostają O-diagnosticum (antygen O), ale jeśli zostanie potraktowany formaldehydem, otrzymają H-diagnosticum (antygen H).
Przykłady diagnostyki: diagnostyka salmonelli, diagnostyka brucelozy, diagnostyka tularemii.
Przygotowanie surowic aglutynujących.
Zwierzętom (zwykle królikom) wstrzykuje się pozajelitowo drobnoustroje diagnostyczne w rosnących dawkach 5–7 razy w odstępach ( przeprowadzić hiperimmunizację), a następnie pobiera się od nich surowicę krwi zawierającą przeciwciała przeciwko drobnoustrojom, z których przygotowywana jest diagnostyka. Jeśli immunizację przeprowadza się za pomocą O-diagnosticum, uzyskuje się surowice O-aglutynujące (zawierające O-przeciwciała), jeśli za pomocą H-diagnosticum uzyskuje się surowice aglutynujące H.
Mogą występować aglutynujące surowice niezaadsorbowany lub rodzimy i zaadsorbowany.
Nieadsorbowane serum zawierają przeciwciała grupowe przeciwko kilku blisko spokrewnionym gatunkom drobnoustrojów.
Adsorbowane serum zawierają przeciwciała przeciwko jednemu lub większej liczbie antygenów jednego rodzaju drobnoustroju. Jeśli surowice zawierają przeciwciała tylko dla jednego antygenu, nazywa się je monoreceptor Lub jednowartościowy, jeśli do kilku antygenów – Grupa adsorbowane serum .
Przykłady surowic aglutynujących:Surowica aglutynująca z monoreceptorem H Salmonella, surowica O-aglutynująca zaadsorbowana przez grupę Salmonella, surowica O-aglutynująca przeciwko cholerze itp..
Miano surowica aglutynująca – najwyższe rozcieńczenie surowicy, przy którym nadal stwierdza się reakcję aglutynacji z antygenem (miano zależy od ilości przeciwciał we krwi: im więcej przeciwciał, tym wyższe miano surowicy).
Metody oceny stopnia zaawansowania RZS.
1. Przybliżony (lamelarny) RA– wykonane na szkle. Na szkiełko nałożyć 2 krople serum i 1 kroplę roztworu izotonicznego. Do jednej z kropli surowicy oraz do kropli roztworu izotonicznego wprowadza się w pętli kulturę drobnoustrojów i miesza. Kropla roztworu izotonicznego z zarazkami – kontrola antygenu, Kropla serum wolne od zarazków – kontrola przeciwciał, Kropla serum z drobnoustrojami – doświadczenie. Jeśli w surowicy znajdują się przeciwciała odpowiadające antygenom drobnoustrojów, które się z nią mieszają, wówczas przeciwciała i antygeny specyficznie się ze sobą zwiążą i po 1–3 minutach w kropli testowej pojawią się płatki aglutynatu. Kontrola antygenowa powinna być mętna, a kontrola przeciwciał powinna być klarowna. Wyniki reakcji rejestruje się na podstawie pojawienia się płatków aglutynatu . Jeśli wypadną płatki, reakcja jest pozytywna, tj. Antygen odpowiada przeciwciału i antygen można zastosować do określenia przeciwciała lub odwrotnie. Jeżeli zmętnienie utrzymuje się, reakcja jest negatywna.
2. Szczegółowa reakcja aglutynacji - przeprowadzane w probówkach. Najpierw należy przygotować 2-krotne rozcieńczenia surowicy krwi chorego od 1:50 do 1:1600. Do 6 probówek wlewa się 1 ml izotonicznego roztworu chlorku sodu. Do pierwszej probówki dodaje się 1 ml surowicy krwi pacjenta w rozcieńczeniu 1:50, miesza i otrzymuje rozcieńczenie 1:100, następnie do drugiej probówki przenosi się 1 ml w rozcieńczeniu 1:100 i otrzymuje się rozcieńczenie 1:200, itd. Dwie probówki są przechowywane do kontroli antygenu i surowicy. Do kontroli surowicy dodać wyłącznie surowicę w rozcieńczeniu 1:50, do kontroli antygenowej – tylko antygen. Do wszystkich pozostałych probówek dodać 0,1 ml antygenu diagnostycznego (O- lub H-) i umieścić wszystkie probówki w termostacie w temperaturze 37°C na 18-20 godzin. Wyniki reakcji rejestruje się w zależności od charakteru, ilości utworzonego osadu (aglutynatu) i stopnia zmętnienia. Rozliczanie przeprowadza się tylko dla następujących wyników w kontrolach: kontrola surowicy – przezroczysta, kontrola antygenu – mętna. O-przeciwciała dają drobnoziarnisty osad. Przeciwciała H – gruboziarniste. Ustala się to na podstawie ostatniej probówki, w której nadal widoczna jest reakcja aglutynacji miano diagnostyczne.
Podczas serodiagnostyki W przypadku chorób ważne jest nie tylko wykrycie swoistych przeciwciał przeciwko konkretnemu patogenowi, ale także określenie ich ilości, czyli tzw. ustalić takie miano przeciwciał dla Kiedy możemy mówić o obecności choroby wywołanej tym patogenem? . Miano to nazywane jest mianem diagnostycznym. Na przykład, aby zdiagnozować dur brzuszny, należy określić miano przeciwciał wynoszące 1:400, ale nie mniej. Daje jeszcze dokładniejsze wyniki wykrycie wzrostu przeciwciał w sparowanych surowicach. Surowicę pacjenta pobiera się na początku choroby oraz po 3–5 lub więcej dniach. Jeśli miano przeciwciał wzrośnie co najmniej 4 razy, możemy mówić o tym obecna choroba.
Jeżeli w celu seroidentyfikacji przeprowadza się szczegółową reakcję aglutynacji, stosuje się aglutynujące surowice diagnostyczne rozcieńczone do miana lub do połowy miana. RZS uznaje się za dodatnie, jeśli aglutynację wykryje się przy rozcieńczeniu zbliżonym do miana surowicy diagnostycznej.
