La reacción de Coombs es directa e indirecta. Prueba de Coombs para el diagnóstico de enfermedad hemolítica del recién nacido

La prueba de Coombs es un método investigación de laboratorio, elaborado al influir en la hemaglutinación. Se basa en la susceptibilidad de los anticuerpos a las inmunoglobulinas y elementos enzimáticos, así como en su capacidad para aglutinar eritrocitos recubiertos con C3 o Lg.

Diagnóstico directo de Coombs

Se utiliza para detectar anticuerpos o componentes del complemento instalados en el exterior de las células. La prueba de Coombs directa se realiza de la siguiente manera.

El uso de tal muestra.

El diagnóstico directo de Coombs se utiliza en determinados casos, como por ejemplo:

• efectos de la transfusión;
• hemólisis autoinmune;
• medicinal anemia hemolítica.

Prueba de Coombs indirecta

Este diagnóstico permite detectar anticuerpos contra las células en el suero, que se incuba, por regla general, con glóbulos rojos de donante tipo 0, y luego se realiza una prueba directa. Aplicar diagnóstico indirecto Coombs en los siguientes casos:

Cómo prepararse para el análisis

Existen algunas reglas para prepararse para el examen.

1. Si el paciente es un recién nacido, los padres deben saber que la prueba ayudará a diagnosticar la enfermedad hemolítica del recién nacido.
2. Si el paciente tiene sospechas de anemia hemolítica, se le debe explicar que el análisis le permitirá saber si es causada por trastornos protectores, medicamentos u otros factores.
3. La prueba de Coombs, directa e indirecta, no impone ninguna restricción en cuanto a nutrición o dieta.
4. Es necesario notificar al paciente que el examen requerirá extraer sangre de una vena y también decirle exactamente cuándo se realizará la punción venosa.
5. También se le debe advertir sobre la posibilidad malestar durante el período de aplicación del vendaje en el brazo y el procedimiento en sí.
6. Se deben suspender los medicamentos que puedan afectar el resultado de la muestra.

Estos medicamentos incluyen:

• "Estreptomicina";
• "Metildopa";
• "Procainamida";
• sulfonamidas;
• "Melfalán";
• "Quinidina";
• "Rifampicina";
• "Isoniazida";
• cefalosporinas;
• "Hidralazina";
• "Clorpromazina";
• "Levodopa";
• "Tetraciclina";
• "Difenilhidantoína";
• "Etosuximida";
• "Penicilina";
• Ácido mefenámico.

La muestra de sangre se realiza por la mañana con el estómago vacío.

Cómo se lleva a cabo el evento

La prueba de Coombs se realiza en el siguiente orden:

1. Al realizar diagnósticos en un paciente adulto, después de la punción venosa, la sangre se extrae en tubos con EDTA (etilendiaminotetraacetato).
2. La sangre del recién nacido se extrae del cordón umbilical y se deposita en un vaso que contiene EDTA.
3. El área de punción se presiona con un hisopo de algodón hasta que se detiene el sangrado.
4. Si aparece un hematoma en el lugar de la venopunción, se prescriben compresas tibias.
5. Después de la extracción de sangre, se permite al paciente volver a tomar medicamentos.
6. Es necesario informar a los padres del recién nacido que es posible que se requiera un análisis secundario para controlar la dinámica de la anemia.

Ventajas de la prueba de Coombs

Esta investigación tiene algunas ventajas, a saber:

Desventajas del análisis

La prueba de Coombs positiva es un método de examen bastante laborioso, que requiere una precisión de ejecución característica. Al usarlo, pueden surgir ciertas dificultades, especialmente relacionadas con la interpretación de los efectos débilmente positivos.

Se ha establecido que las reacciones erróneas negativas o débilmente positivas durante la realización de las pruebas de Coombs pueden ser consecuencia de un lavado celular insatisfactoriamente activo, debilitamiento del reactivo de antiglobulina por los residuos séricos, así como conexiones con superficies no grasas, sobre las cuales la antiglobulina puede adjuntar, perdiendo así su eficacia.

La prueba de Coombs tiene otro inconveniente: la baja estabilidad del reactivo de antiglobulina, cuya adquisición y almacenamiento características individuales, lo que también dificulta la evaluación numérica del efecto del suero de antiglobulina sobre la hemaglutinación.

Enfermedades que se pueden detectar durante la investigación.

El diagnóstico de Coombs permite detectar ciertos tipos de enfermedades, como:

• malestar hemolítico del recién nacido;
• diversas reacciones transfusionales;
• hemólisis autoinmune;
• Anemia hemolítica inducida por fármacos.

Hoy en día, la prueba de Coombs se considera un sistema de análisis de sangre bastante popular tanto para adultos como para recién nacidos. Permite identificar muchas enfermedades diferentes.

Anticuerpos, ubicado en la superficie de los eritrocitos, puede estar en estado estático o libre en plasma sanguíneo. Dependiendo del estado de los anticuerpos se realiza una reacción de Coombs directa o indirecta. Si hay motivos para creer que los anticuerpos se fijan en la superficie de los glóbulos rojos, se realiza una prueba de Coombs directa. En este caso, la prueba se realiza en una etapa: añadiendo suero antiglobulina. Si hay anticuerpos incompletos en la superficie de los glóbulos rojos, aglutinación las células rojas de la sangre

Reacción indirecta

La reacción de Coombs indirecta ocurre en 2 etapas. Primero necesitas implementar artificialmente. sensibilización las células rojas de la sangre Para ello se incuban los glóbulos rojos y el suero sanguíneo analizado, lo que provoca que los anticuerpos se fijen en la superficie de los glóbulos rojos. Después de lo cual se lleva a cabo la segunda etapa de la prueba de Coombs: la adición de suero antiglobulina.

Reacción de precipitación - RP (del latín praecipilo precipitar) es la formación y precipitación de un complejo de antígeno molecular soluble con anticuerpos en forma de turbidez llamado precipitado. Se forma mezclando antígenos y anticuerpos en cantidades equivalentes; un exceso de uno de ellos reduce el nivel de formación del complejo inmunológico. La reacción de precipitación se lleva a cabo en tubos de ensayo (reacción de precipitación en anillo), en geles, medios nutritivos, etc. Variedades de la reacción de precipitación en agar semilíquido o gel de agarosa, doble inmunodifusión por Ouchterlony, inmunodifusión radiap, inmunoepectroforesis y etc.

Reacción de precipitación en anillo. La reacción se lleva a cabo en tubos de precipitación estrechos: se coloca un antígeno soluble sobre el suero inmunológico. Con una proporción óptima de antígeno y anticuerpos, se forma una capa opaca en el borde de estas dos soluciones. anillo de precipitado. Si se utilizan extractos de tejido hervidos y filtrados como antígenos en la reacción, entonces esta reacción se denomina primera reacción de termoprecipitación (la reacción en la que se detecta el hapteno del ántrax).
Reacción de doble inmunodifusión de Ouchterlony. Para iniciar la reacción, se vierte una fina capa de gel de agar derretido sobre una placa de vidrio y, una vez endurecido, se cortan pocillos. Los antígenos y los sueros inmunes se colocan por separado en los pocillos del gel, que se difunden entre sí. En el punto de encuentro, en proporciones equivalentes, forman un precipitado en forma de franja blanca. En los sistemas multicomponente, aparecen varias líneas de precipitado entre los pocillos con antígenos y anticuerpos; en AG idénticos, las líneas de precipitado se fusionan; en AG no idénticos se cruzan.
Reacción de inmunodifusión radial. Se vierte uniformemente suero inmunológico con gel de agar fundido sobre el vaso. Después de la solidificación en el gel, se hacen pocillos en los que se coloca el antígeno en varias diluciones. El antígeno, al difundirse en el gel, forma zonas de precipitación anular alrededor de los pocillos con anticuerpos. El diámetro del anillo de precipitación es proporcional a la concentración de antígeno. La reacción se utiliza para determinar las inmunoglobulinas en el suero sanguíneo. varias clases, componentes del sistema del complemento, etc.
Inmunoelectroforesis- una combinación del método de electroforesis e inmunoprecipitación: se introduce una mezcla de antígenos en los pocillos del gel y se separan en el gel mediante electroforesis, luego se agrega inmunosuero en el surco paralelo a las zonas de electroforesis, cuyos anticuerpos se difunden hacia el gel y forman líneas de precipitación en el lugar de “encuentro” con el antígeno.
Reacción de floculación(según Ramon) (del latín f1oecus - copos de lana) - la aparición de opalescencia o masa floculenta (inmunoprecipitación) en un tubo de ensayo durante la reacción toxina - antitoxina o toxoide - antitoxina. Se utiliza para determinar la actividad del suero o toxoide antitóxico.

tipificación HLA- estudio del complejo mayor de histocompatibilidad humano - complejo HLA. Esta formación incluye una región de genes en el cromosoma 6 que codifican antígenos HLA involucrados en diversas respuestas inmunes.

Tareas para tipificación HLA puede ser muy diferente: identificación biológica (el tipo HLA se hereda junto con los genes de los padres), determinación de la predisposición a varias enfermedades, selección de donantes para trasplante de órganos: esto implica comparar los resultados de la tipificación HLA de los tejidos del donante y del receptor. Mediante la tipificación HLA se determina qué tan similares o diferentes son los cónyuges en términos de antígenos de histocompatibilidad para diagnosticar casos de infertilidad.

La tipificación HLA sugiere Análisis de polimorfismo HLA. y se lleva a cabo mediante dos métodos: serológico y genético molecular. El método serológico clásico de tipificación HLA se basa en una prueba microlinfocitotóxica y el método molecular utiliza PCR (reacción en cadena de la polimerasa).

Serológico tipificación HLA llevado a cabo en poblaciones de células aisladas. Los antígenos del complejo mayor de histocompatibilidad son transportados principalmente por linfocitos. Por tanto, se utiliza una suspensión de linfocitos T como principales portadores de antígenos de clase I y una suspensión de linfocitos B para determinar los antígenos HLA de clase II. Para aislar las poblaciones de células necesarias a partir de sangre total, se utiliza centrifugación o separación inmunomagnética. Se cree que el primer método puede dar lugar a datos falsos positivos, ya que esto provoca la muerte de algunas células. El segundo método se considera más específico: más del 95% de las células siguen siendo viables.

Pero la base para realizar una prueba linfocitotóxica. tipificación HLA es un suero específico que contiene anticuerpos contra diversas variantes alélicas de los antígenos HLA de clase I y II. Una prueba serológica puede determinar el tipo de HLA examinando qué sueros reaccionan con los linfocitos y cuáles no.

Si se produce una reacción entre las células y el suero, el resultado es la formación de un complejo antígeno-anticuerpo en la superficie de la célula. Después de agregar una solución que contiene complemento, se produce la lisis y muerte celular. La prueba serológica de tipificación HLA se evalúa mediante microscopía de fluorescencia para evaluar reacciones positivas (fluorescencia roja) y negativas (fluorescencia verde), o microscopía de contraste de fases para teñir los núcleos de las células muertas. El resultado de la tipificación HLA se obtiene teniendo en cuenta la especificidad de los sueros que han reaccionado y los grupos de antígenos con reacción cruzada, así como la intensidad de la reacción de citotoxicidad.

Desventajas de la serología. tipificación HLA son la presencia de reacciones cruzadas, afinidad débil de los anticuerpos o baja expresión de antígenos HLA, la ausencia de productos proteicos en varios genes HLA.

Métodos moleculares más modernos. tipificación HLA utilizan muestras sintéticas ya estandarizadas que reaccionan no con los antígenos de la superficie de los leucocitos, sino con el ADN e indican directamente qué antígenos están presentes en la muestra. Los métodos moleculares no requieren leucocitos vivos; célula humana Se puede estudiar, y unos pocos microlitros de sangre son suficientes para funcionar, o puedes limitarte a raspar la mucosa oral.

genética molecular tipificación HLA utiliza el método PCR, cuyo primer paso es obtener ADN genómico puro (de sangre completa, suspensión de leucocitos, tejidos).

Luego, la muestra de ADN se copia y se amplifica in vitro utilizando cebadores (ADN monocatenario corto) específicos de un locus HLA específico. Los extremos de cada par de cebadores deben ser estrictamente complementarios a la secuencia única correspondiente a un alelo específico; de lo contrario, no se producirá la amplificación.

Después de la PCR, durante las copias repetidas, se obtiene una gran cantidad de fragmentos de ADN, que se pueden evaluar visualmente. Para ello, las mezclas de reacción se someten a electrólisis o hibridación y se determina mediante un programa o una tabla si se ha producido una amplificación específica. El resultado de la tipificación HLA se presenta en forma de un informe completo a nivel genético y alélico. Debido a la estandarización de las muestras utilizadas, molecular tipificación HLA más precisamente serológico. Además, proporciona más información (más alelos de ADN nuevos) y más nivel alto su detalle, ya que permite identificar no solo los antígenos, sino también los propios alelos, que determinan qué antígeno está presente en la célula.

Reacción de lisis inmune. La reacción se basa en la capacidad de anticuerpos específicos para formar complejos inmunes con células, incluidos eritrocitos y bacterias, lo que conduce a la activación del sistema del complemento por la vía clásica y a la lisis celular. De las reacciones de lisis inmunitaria, la reacción de hemólisis se utiliza con mayor frecuencia y la reacción de bacteriólisis rara vez se utiliza (principalmente para diferenciar el cólera y los vibrios similares al cólera).

Reacción de hemólisis. Bajo la influencia de una reacción con anticuerpos en presencia de complemento, una suspensión turbia de glóbulos rojos se convierte en un líquido transparente de color rojo brillante, "sangre lacada", debido a la liberación de hemoglobina. Al establecer una reacción de fijación del complemento (FFR) de diagnóstico, la reacción de hemólisis se utiliza como indicador: para probar la presencia o ausencia (fijación) de complemento libre.

Reacción de hemólisis local en el gel.(Reacción de Erne) es una de las variantes de la reacción de hemólisis. Le permite determinar la cantidad de células formadoras de anticuerpos. El número de células que secretan anticuerpos (hemolisinas) está determinado por el número de placas de hemólisis que aparecen en un gel de agar que contiene eritrocitos, una suspensión de células del tejido linfoide en estudio y complemento.

Método inmunofluorescente

(RIF, reacción de inmunofluorescencia) es un método para detectar Ags (Abs) específicos utilizando Abs (Ags) conjugados con un fluorocromo. Tiene alta sensibilidad y especificidad. Se utiliza para el diagnóstico rápido de infecciones. enfermedades (identificación del patógeno en el material de investigación), así como para la determinación de Ab y receptores de superficie y marcadores de leucocitos (inmunofenotipado) y otras células. Directo I. m. consiste en procesar una sección de tejido o un frotis de material patológico o costra microbiana que contiene Abs específicos conjugados con fluorocromo; la preparación se lava para liberarla de Abs no unidos y se examina bajo un microscopio fluorescente. En los casos positivos, aparece un complejo inmunológico brillante alrededor de la periferia del objeto. Es necesario un control para excluir la luminiscencia inespecífica. En indirecto. A ellos. en la primera etapa, se trata una sección de tejido o un frotis con un agente específico no fluorescente, en la segunda, con un agente luminiscente contra las -globulinas del animal que se utilizó en la primera etapa. En el caso positivo se forma un complejo luminoso formado por Ar, At to y At contra At (método sándwich). Además de un microscopio fluorescente, el RIF se tiene en cuenta al fenotipificar las células. clasificador de células láser .

Citometría de flujo- un método de medición óptica de los parámetros de una célula, sus orgánulos y los procesos que ocurren en ella.

La técnica consiste en detectar la dispersión de la luz de un rayo láser cuando una célula lo atraviesa en una corriente de líquido, y el grado de dispersión de la luz permite hacerse una idea del tamaño y la estructura de la célula. Además, el análisis tiene en cuenta el nivel de fluorescencia de los compuestos químicos que forman parte de la célula (autofluorescencia) o añadidos a la muestra antes de la citometría de flujo.

La suspensión celular, premarcada con anticuerpos monoclonales fluorescentes o tintes fluorescentes, ingresa a la corriente de fluido que pasa a través de la celda de flujo. Las condiciones se seleccionan de tal manera que las células se alineen una tras otra debido al llamado. Enfoque hidrodinámico del chorro en el chorro. En el momento en que una célula cruza el rayo láser, los detectores registran:

dispersión de la luz en ángulos pequeños (de 1° a 10°) ( esta característica utilizado para determinar el tamaño de la celda).

dispersión de la luz en un ángulo de 90° (permite juzgar la relación núcleo/citoplasma, así como la heterogeneidad y granularidad de las células).

intensidad de fluorescencia a través de varios canales de fluorescencia (de 2 a 18-20): le permite determinar la composición de la subpoblación de la suspensión celular, etc.

prueba de coombs

La prueba de Coombs directa es una prueba de antiglobulina (aglutinación en gel que permite la detección de anticuerpos divalentes completos), que detecta anticuerpos de clase IgG y el componente C3 del complemento en la superficie de los glóbulos rojos. Normalmente, los anticuerpos detectados mediante la prueba de Coombs directa tienen una especificidad amplia que no está asociada con un antígeno bien establecido. Una prueba de Coombs directa positiva indica claramente que el paciente tiene anemia hemolítica, aunque no todos los pacientes con una prueba de antiglobulina directa positiva padecen esta enfermedad. En aproximadamente el 10% de los pacientes, los anticuerpos o los componentes del complemento en la membrana de los glóbulos rojos no pueden determinarse mediante una prueba de Coombs directa (la prueba es negativa), pero, sin embargo, padecen anemia hemolítica autoinmune. Para aclarar la especificidad de los anticuerpos en tales casos, se utilizan pruebas con su elución. Una prueba de Coombs directa, positiva sólo para el complemento, generalmente se refiere a anticuerpos fríos del tipo IgM. En este caso Anticuerpos IgM no presente en los glóbulos rojos cuando temperatura basal cuerpos. Sin embargo, debido al hecho de que los anticuerpos IgM fijan activamente el complemento y el complemento permanece en los glóbulos rojos, en esta forma de anemia hemolítica autoinmune (enfermedad de crioagutininas), la prueba de Coombs será positiva solo para el complemento.

La prueba de Coombs directa es positiva en la anemia hemolítica autoinmune causada por anticuerpos calientes, anemia autoinmune inducida por fármacos (al tomar metildopa, hasta el 20% de los pacientes tienen reacción positiva), anemia hemolítica por adsorción de fármacos, anemia hemolítica de tipo inmunocomplejo (la prueba es positiva solo para C3), con anemia hemolítica autoinmune causada por anticuerpos contra el resfriado: enfermedad de aglutininas frías (la prueba es positiva solo para C3). En la hemoglobinuria fría paroxística, la prueba de Coombs directa es negativa.
EN periodo agudo enfermedades, debido a la destrucción de glóbulos rojos, en los que se registró una gran cantidad de anticuerpos, durante una crisis hemolítica, así como con una cantidad insuficiente de anticuerpos durante curso crónico enfermedad, se puede observar una prueba de Coombs directa negativa.

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• Una condición importante para garantizar la calidad de los análisis de sangre de laboratorio es tomar el material en ayunas, por la mañana (antes de las 12:00).
• 12 horas antes de la prueba se debe evitar beber alcohol, fumar, comer y limitar la actividad física.
• La mañana del análisis de sangre, puede beber agua.
• Evite tomar medicamentos; Si no es posible suspender la toma del medicamento, deberá informar al laboratorio.
• Es recomendable tomar el material antes de realizar cualquier procedimiento de diagnóstico médico.
• Al evaluar los niveles hormonales en las mujeres, es importante considerar el día. ciclo menstrual¿Cuándo es más óptimo determinar determinadas hormonas? Puede obtener esta información de su médico.

Índice	Característica
Analizador y sistema de prueba.	Tarjetas de gel; DiaMed AG (Suiza)
Valores de referencia	Resultado negativo / Resultado positivo
Factores que interfieren. Medicamentos
Es posible obtener una prueba positiva cuando se toman los siguientes medicamentos: acetaminofén, ácido salicílico, aminopirina, antihistamínicos, carbromal, cefalosporinas, clorpromazina, clorpropamida, cisplatino, clonidina, dipirona, etosuximida, fenfluramina, fuadin, hidralazina, hidroclorotiazida, ibuprofeno, insulina, isoniazida, levodopa, ácido mefenámico, melfalán, metadona, metildopa, metilsergida, nomifensina, penicilamina, nosotros, fenacetina, fenilbutazona, probenecid, procainamida, quinidina, quinina, rifampicina, estreptomicina, sulfonamidas, derivados de sulfonilurea, tetraciclina, triamtereno, anhídrido trimelítico
Indicaciones para el uso
Diagnóstico de anemia hemolítica inmune. enfermedad hemolítica recién nacidos, anemia hemolítica inmune inducida por fármacos, reacciones transfusionales hemolíticas
interpretación de resultados
Normalmente, la prueba de Coombs directa es negativa. prueba positiva Coombs en: anemia hemolítica autoinmune; enfermedad hemolítica de los recién nacidos; anemia hemolítica inmunitaria inducida por fármacos; reacciones transfusionales hemolíticas

reacción de coombs - método efectivo detección de antígenos eritrocitarios y anticuerpos antieritrocitos en sangre humana reacción indirecta aglutinación. La base de la prueba es el uso de reactivos monoclonales específicos basados ​​en inmunoglobulinas de clase G (IgG) para tipificar antígenos eritrocitarios, seguido del uso de suero antiglobulina de Coombs (AGS) en la segunda etapa.

AGS se produce mezclando suero de la sangre de animales de laboratorio inmunizados con inmunoglobulinas G humanas y anticuerpos monoclonales contra uno de los componentes: el complemento C3D del suero humano. AGS provoca la aglutinación de glóbulos rojos sensibilizados con anticuerpos específicos. En ausencia de anticuerpos en los glóbulos rojos bajo la influencia de AGS, no se produce una reacción positiva.

La reacción de Coombs indirecta le permite determinar la presencia de:

• antígenos de eritrocitos detectados por reactivos de IgG (anticuerpos "incompletos", por ejemplo, reactivos monoclonales anti-D, anti-F Y a, anti-F Y b);
• Anticuerpos antieritrocitos de la clase IgG.

Prueba de antiglobulina indirecta: detección de antígenos de glóbulos rojos.

Presentamos el método de la reacción de Coombs indirecta utilizando el ejemplo del coliclón anti-D IgG.

1. Etiquete un tubo de ensayo limpio: indique el nombre de la persona que se está analizando.
2. Agregue 2 gotas (aproximadamente 0,1 ml) de zoliclona anti-D IgG al tubo de ensayo.
3. Agregar 2 gotas de una suspensión al 5% de los eritrocitos analizados, previamente lavados con solución fisiológica. Mezclar las muestras de prueba con zoliclon.
4. Incubar la mezcla al baño maría o en un termostato a 37 °C durante 30 minutos.
5. Agregue de 5 a 10 ml de solución salina al tubo de ensayo usando una pipeta Pasteur.
6. Centrifugar el tubo con una aceleración centrífuga de 1200 ga 18 - 25 ° C durante un minuto.
7. Retire la solución salina.
8. Repita el procedimiento de lavado de glóbulos rojos mediante centrifugación otras 2 o 3 veces.
9. Agregue 2 gotas de suero antiglobulina al sedimento de células sanguíneas y mezcle.
10. Centrifugar el tubo con aceleración centrífuga de 1200 g durante un minuto a una temperatura de 18 - 25 ° C.
11. Usando un dosificador o una pipeta Pasteur, agregue de 3 a 5 gotas de solución salina.
12. Resuspender el sedimento y evaluar visualmente la aglutinación. Aglutinados pronunciados en el fondo del tubo de ensayo contra el fondo solución clara indicar la detección del antígeno eritrocitario. Una suspensión opaca de células sanguíneas indica la ausencia de antígeno.

Prueba de Coombs: detección de anticuerpos antieritrocitos isoinmunes

El estudio se lleva a cabo como parte de una prueba de compatibilidad individual para todos los antígenos de los glóbulos rojos del donante y del receptor. Conclusión sobre compatibilidad total Los sueros del receptor con eritrocitos del donante se obtienen basándose en la ausencia de hemólisis y/o aglutinación en todas las etapas del análisis. Los signos de hemólisis y/o aglutinación en cualquier etapa de la prueba indican incompatibilidad de las muestras de sangre.

Evaluación de compatibilidad mediante el sistema AB0, detección de anticuerpos "fríos"

1. Prepare una muestra de sangre de un donante:
   • agregue 0,2 ml de sangre al tubo de ensayo utilizando un dispensador automático;
   • Lavar los glóbulos rojos en 5,0 ml de solución salina 3 veces;
   • Resuspender el precipitado en 3 a 4 ml de solución LISS de baja fuerza iónica.
2. Etiquete el segundo tubo limpio: indique el nombre del receptor y el nombre del donante.
3. Utilice un dispensador automático para dispensar 0,1 ml de suero receptor en un tubo etiquetado.
4. Agregue 2 gotas de suspensión de glóbulos rojos al 5% en solución LISS.
5. Centrifugar inmediatamente la mezcla con una aceleración centrífuga de 1200 g a una temperatura de 18 - 25 ° C durante 15 - 20 segundos.
6. Agitando suavemente el tubo de ensayo, separe el sedimento del fondo. Evaluar la presencia de aglutinados. La presencia de hemólisis y/o aglutinados significa:
   • incompatibilidad según el sistema AB0;
   • la presencia en el suero del paciente de anticuerpos "fríos" de clase IgM o IgA, no específicos de los antígenos AB0.

Detección de anticuerpos “calientes”

1. Si no hay hemólisis y/o aglutinados, incubar el tubo durante 10 - 15 minutos a 37 °C.
2. Centrifugar el tubo a 1200 g durante 15 a 20 segundos a temperatura ambiente.
3. Agitar el tubo y comprobar si hay hemólisis y/o aglutinados en el sobrenadante. Un resultado positivo indica la detección de anticuerpos IgM "tibios" contra antígenos de eritrocitos del donante en el suero del paciente.

Detección de anticuerpos IgG en la prueba de Coombs

1. Si el resultado es negativo en la etapa anterior del estudio, añadir 5 ml de solución de NaCl al 0,9% al tubo de ensayo con una pipeta Pasteur.
2. Centrifugar el tubo a 1200 g durante 15 a 20 segundos a una temperatura del aire de 18 a 25 °C. Utilice una pipeta Pasteur para desechar con cuidado el sobrenadante.
3. Repita el lavado de glóbulos rojos 2 o 3 veces más.
4. Agregue 1 a 2 gotas de suero antiglobulina al tubo de ensayo. Realice una mezcla completa.
5. Centrifugar el tubo a 1200 g durante 15 a 20 segundos.
6. Rompa con cuidado el sedimento de glóbulos rojos y evalúe visualmente el resultado de la reacción. La detección de aglutinación significa la presencia en el suero del paciente de anticuerpos IgG contra los antígenos de eritrocitos del donante.

Anemia hemolítica, causadas por cuerpos autoinmunes que se dirigen contra sus propios glóbulos rojos, no se comprenden con precisión. Sin embargo, se supone que algunos factores (por ejemplo, un virus, una proteína anormal) modifican los glóbulos rojos de tal manera que el cuerpo los percibe "como algo extraño" y los combate con la ayuda de anticuerpos. Según otra teoría, los anticuerpos dirigidos contra los glóbulos rojos surgen casi accidentalmente durante la formación de cuerpos proteicos plasmáticos anormales en algunas enfermedades. Estos cuerpos proteicos, también "al azar", pueden dar reacciones que pueden usarse para hacer un diagnóstico (por ejemplo, la neumonía viral, como se sabe, produce una reacción de Wasserman positiva, una reacción de Paul-Bunnel positiva y una reacción de aglutinación fría). .

Hay dos principales tipos de autoanticuerpos para la anemia hemolítica, a saber: anticuerpos calientes (reaccionan a 37°C) y anticuerpos fríos (cuya reactividad aumenta a medida que la temperatura se acerca a cero). Los anticuerpos calientes son más comunes que los anticuerpos fríos. Dacie descubrió que las hemolisinas calientes ocurren 2 veces más a menudo que las frías. Las hemolisinas y las aglutininas no son anticuerpos fundamentalmente diferentes: sólo difieren en la naturaleza de su acción. Las aglutininas aglutinan los glóbulos rojos y las hemolisinas los hacen más susceptibles al complejo proceso de hemólisis (¡complemento!). Los autoanticuerpos, que se fijan en los eritrocitos, forman un complejo eritrocito-globina. Este complejo se detecta mediante la prueba de antiglobina de Coombs.

prueba de coombs Se realiza con suero de Coombs, para cuya preparación se sensibiliza al conejo con suero humano, contra el cual se forman anticuerpos en el suero de conejo. Cuando un suero sensibilizado de este tipo actúa sobre los eritrocitos humanos, se produce su aglutinación si los receptores de los eritrocitos están ocupados por anticuerpos bloqueantes. Dado que estos anticuerpos bloqueantes derivan del suero humano, se aglutinan con suero de conejo sensibilizado al plasma humano y que contiene precipitinas. Esta reacción se llama prueba de Coombs; para la anemia hemolítica debida a cuerpos autoinmunes (Lo tit) es casi específica (para más detalles, consulte Maier).

En general para anemias hemolíticas. con un trastorno primario de los eritrocitos, la prueba de Coombs es negativa y con los adquiridos, positiva. Sin embargo, existen algunas excepciones a esta regla: se encontró una prueba de Coombs falsamente positiva durante las crisis de anemia hemolítica constitucional y en grado débil- también a veces después de una esplenectomía, en artritis reumática, sarcoidosis, después de transfusiones de sangre frecuentes y en lupus eritematoso sistémico. Naturalmente, en la anemia hemolítica adquirida sin formación de cuerpos autoinmunes, es negativo.

Anemia hemolítica causadas por cuerpos autoinmunes se pueden dividir en:
a) aguda, subaguda y formas crónicas, así como en
b) idiopático con etiología desconocida y c) sintomático [neumonía viral (solo aglutininas frías), leucemia linfática crónica, reticulosarcoma, linfosarcoma, lupus eritematoso sistémico (principalmente aglutininas frías, con menos frecuencia aglutininas frías), sífilis (aglutininas frías), tumores de ovario (Miescher con empleados)).
c) sintomático [neumonía viral (solo aglutininas frías), leucemia linfática crónica, reticulosarcoma, linfosarcoma, lupus eritematoso sistémico (principalmente aglutininas frías, con menos frecuencia), sífilis (aglutininas frías), tumores de ovario (Miescher y colaboradores)).

Clínica de anemia hemolítica., que se desarrolla bajo la influencia de cuerpos autoinmunes, es muy diverso y, por lo tanto, es casi imposible dibujar su general cuadro clinico. Personas de todas las edades y de ambos sexos se ven igualmente afectadas. Aún así, las formas idiopáticas parecen observarse con mayor frecuencia en mujeres (Sacks y Workman).

Cuadro clínico de la forma idiopática. varía según la gravedad de la enfermedad. EN casos crónicos La aparición es gradual, la enfermedad se prolonga durante muchos años con frecuentes exacerbaciones. La gravedad de la anemia varía según el grado de hemólisis. Se observan caídas de hemoglobina de hasta el 10%; en otros casos, la hemoglobina permanece en 50-60% durante mucho tiempo. La intensidad de la reticulocitosis y la coloración ictérica de la piel y el suero corresponde al grado de hemólisis. La bilirrubina rara vez se encuentra en la orina, ya que no pasa por los riñones, pero se observa hemoglobinuria. En los casos crónicos, el bazo suele estar agrandado e incluso puede alcanzar un tamaño muy importante, pero en otros casos aún puede palparse. El hígado rara vez no está agrandado.

En la sangre en la mayoría de los casos. Se observa macrocitosis, en etapas agudas También hay muchos microcitos, la normoblastosis y la policromasia rara vez están ausentes, la leucocitosis puede alcanzar 30.000 y las plaquetas son normales. En algunos casos, sin embargo, se produce una trombocitopenia grave. Evans explica estos casos por la presencia simultánea de anticuerpos contra las plaquetas, por lo que se produce tanto anemia hemolítica como trombocitopenia debido a la acción de cuerpos autoinmunes: el síndrome de Evans. La resistencia osmótica se reduce ligeramente, pero no en la misma medida ni de forma tan permanente como en la anemia de células globulares constitucionales. La prueba de resistencia al calor (Hegglin-Maier) después de 6 horas también puede provocar una ligera hemólisis (observación propia), pero en menor medida que en la anemia de Marchiafava. La hemosiderina también se encuentra en la orina (observación propia).