Кумбсын урвал нь шууд ба шууд бус байдаг. Нярайн цус задралын өвчнийг оношлох Кумбсын шинжилгээ

Кумбсын тест бол арга юм лабораторийн судалгаа, гемагглютинацад нөлөөлөх замаар хийсэн. Энэ нь иммуноглобулин ба ферментийн элементүүдийн эсрэгбиеийн мэдрэмтгий байдал, түүнчлэн C3 эсвэл Lg-ээр бүрсэн эритроцитыг наалдуулах чадвар дээр суурилдаг.

Кумбсын шууд оношилгоо

Эсийн гадна талд суурилуулсан эсрэгбие эсвэл нэмэлт бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг илрүүлэхэд ашигладаг. Кумбсын шууд туршилтыг дараах байдлаар гүйцэтгэнэ.

Ийм дээжийг ашиглах

Шууд Кумбсын оношийг зарим тохиолдолд ашигладаг, тухайлбал:

• цус сэлбэх нөлөө;
• аутоиммун цус задрал;
• эмийн цус задралын цус багадалт.

Шууд бус Кумбсын тест

Энэхүү оношлогоо нь цусны ийлдэс дэх эсүүдэд эсрэгбие илрүүлэх боломжийг олгодог бөгөөд үүнийг дүрмээр бол 0-р хэлбэрийн донорын улаан цусны эсүүдээр өсгөвөрлөж, дараа нь шууд шинжилгээ хийдэг. Өргөдөл гаргах шууд бус оношлогооДараах тохиолдолд Кумбс:

Шинжилгээнд хэрхэн бэлдэх вэ

Шалгалтанд бэлтгэх зарим дүрэм журам байдаг.

1. Хэрэв өвчтөн шинэ төрсөн хүүхэд бол шинжилгээ нь нярайн цус задралын эмгэгийг оношлоход тусална гэдгийг эцэг эхчүүд мэдэж байх ёстой.
2. Хэрэв өвчтөн цус задралын цус багадалтыг сэжиглэж байгаа бол шинжилгээ нь хамгаалалтын эмгэг, эм, бусад хүчин зүйлээс үүдэлтэй эсэхийг олж мэдэх боломжийг олгоно гэдгийг тайлбарлах хэрэгтэй.
3. Кумбсын тест нь шууд болон шууд бус байдлаар хоол тэжээл, хоолны дэглэмд ямар нэгэн хязгаарлалт тавьдаггүй.
4. Шалгалтанд судаснаас цус авах шаардлагатайг өвчтөнд мэдэгдэж, венийн хатгалт хийх цагийг яг таг хэлэх шаардлагатай.
5. Мөн боломжийн талаар анхааруулах хэрэгтэй тав тухгүй байдалгарт боолт түрхэх үе ба процедур өөрөө.
6. Дээжний үр дүнд нөлөөлж болзошгүй эмийг зогсоох хэрэгтэй.

Эдгээр эмүүд нь:

• "Стрептомицин";
• "Метилдопа";
• "Прокаинамид";
• сульфаниламидууд;
• "Мелфалан";
• "Хинидин";
• "Рифампин";
• "Изониазид";
• цефалоспорин;
• "Гидралазин";
• "Хлорпромазин";
• "Леводопа";
• "Тетрациклин";
• "Дифенилгидантоин";
• "Этосуксимид";
• "Пенициллин";
• мефенамийн хүчил.

Цусны дээжийг өглөө өлөн элгэн дээр хийдэг.

Арга хэмжээ хэрхэн зохион байгуулагддаг

Кумбсын туршилтыг дараах дарааллаар гүйцэтгэнэ.

1. Насанд хүрсэн өвчтөнд оношлохдоо венийн хатгалт хийсний дараа цусыг EDTA (этилендиаминтетраацетат) бүхий хуруу шилэнд хийнэ.
2. Шинээр төрсөн хүүхдийн цусыг хүйн ​​хэсгээс EDTA агуулсан шилэн аяганд хийнэ.
3. Цус алдалт зогсох хүртэл цоорсон хэсгийг хөвөн арчдасаар дарна.
4. Хэрэв венийн хатгалтын талбайд хөхөрсөн байвал дулаан шахалтыг тогтооно.
5. Цус цуглуулсны дараа өвчтөн дахин эм уухыг зөвшөөрдөг.
6. Цус багадалтын динамикийг хянахын тулд хоёрдогч шинжилгээ хийх шаардлагатай байж болзошгүйг нярай хүүхдийн эцэг эхэд мэдэгдэх шаардлагатай.

Кумбсын тестийн давуу тал

Ийм судалгаа нь зарим давуу талуудтай, тухайлбал:

Шинжилгээний сул тал

Эерэг Кумбсын тест нь гүйцэтгэлийн тодорхой нарийвчлалыг шаарддаг нэлээд хөдөлмөр их шаарддаг шалгалтын арга юм. Үүнийг ашиглах үед та зарим хүндрэлтэй тулгардаг, ялангуяа сул эерэг нөлөөг тайлбарлахтай холбоотой.

Кумбын сорилыг үйлдвэрлэх явцад гарсан алдаатай сөрөг эсвэл сул эерэг урвалууд нь эсийг хангалтгүй идэвхтэй угааж, антиглобулин урвалжийг ийлдэсийн үлдэгдэлээр сулруулж, антиглобулиныг өөх тосгүй гадаргуутай холбосоны үр дагавар байж болох нь тогтоогдсон. хавсаргаж, улмаар үр нөлөөгөө алддаг.

Кумбсын тест нь өөр нэг сул талтай - антиглобулин урвалжийн тогтвортой байдал бага, түүнийг олж авах, хадгалахад хүргэдэг. хувь хүний ​​онцлогЭнэ нь гемагглютинаци дахь антиглобулины ийлдсэнд үзүүлэх нөлөөг тоон үзүүлэлтээр үнэлэхэд хүндрэл учруулдаг.

Судалгааны явцад илрүүлж болох өвчин

Кумбсын оношлогоо нь зарим төрлийн өвчнийг илрүүлэх боломжийг олгодог, тухайлбал:

• нярайн цус задралын эмгэг;
• цус сэлбэх янз бүрийн урвал;
• аутоиммун цус задрал;
• мансууруулах бодисоос үүдэлтэй цус задралын цус багадалт.

Өнөөдөр Кумбсын тест нь насанд хүрэгчид болон нярайн аль алинд нь нэлээд түгээмэл цусны шинжилгээний систем гэж тооцогддог. Энэ нь янз бүрийн өвчнийг тодорхойлох боломжийг олгодог.

Эсрэгбие, эритроцитуудын гадаргуу дээр байрладаг, статик эсвэл чөлөөт төлөвт байж болно цусны сийвэн. Эсрэгбиеийн төлөв байдлаас хамааран Кумбсын шууд болон шууд бус урвал явагдана. Хэрэв цусны улаан эсийн гадаргуу дээр эсрэгбие тогтсон гэж үзэх үндэслэл байгаа бол Кумбсын шууд шинжилгээг хийдэг. Энэ тохиолдолд шалгалт нь нэг үе шатанд явагддаг - нэмэх антиглобулины ийлдэс. Хэрэв цусны улаан эсийн гадаргуу дээр бүрэн бус эсрэгбие байгаа бол. агглютинацицусны улаан эсүүд

Шууд бус урвал

Кумбын шууд бус урвал 2 үе шаттайгаар явагдана. Эхлээд та зохиомлоор хэрэгжүүлэх хэрэгтэй мэдрэмтгий байдалцусны улаан эсүүд Үүнийг хийхийн тулд цусны улаан эсүүд болон шинжилгээнд хамрагдсан цусны ийлдсийг өсгөвөрлөж, цусны улаан эсийн гадаргуу дээр эсрэгбиемүүдийг тогтооно. Үүний дараа Кумбсын тестийн хоёр дахь шатыг хийнэ - антиглобулин ийлдэс нэмнэ.

Хур тунадасны урвал - RP (Латин хэлнээс praecipilo - тунадас) гэдэг нь уусдаг молекулын эсрэгтөрөгчийн эсрэгбие бүхий үүлшилт хэлбэрээр үүсэх ба тунадасжилт юм. тунадас. Энэ нь эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиемүүдийг тэнцүү хэмжээгээр холих үед үүсдэг бөгөөд тэдгээрийн аль нэг нь илүүдэл нь дархлааны цогцолбор үүсэх түвшинг бууруулдаг. Хур тунадасны урвалыг туршилтын хоолойд (цагираган хур тунадасны урвал), гель, шим тэжээлт бодис гэх мэтээр гүйцэтгэдэг.. Хагас шингэн агар эсвэл агароз гель дэх хур тунадасны урвалын сортууд, давхар дархлаажуулалт. Ouchterlony, radiap immunodiffusion, иммуноэпектрофорезгэх мэт.

Цагираган хур тунадасны урвал. Урвал нь тунадасны нарийн хоолойд явагддаг: уусдаг антиген нь дархлааны ийлдэс дээр давхаргад ордог. Антиген ба эсрэгбиеийн оновчтой харьцаагаар эдгээр хоёр уусмалын хил дээр тунгалаг давхарга үүсдэг. тунадасны цагираг. Хэрэв буцалгаж, шүүсэн эдийн хандыг урвалын эсрэгтөрөгч болгон ашигладаг бол энэ урвалыг анхны термопреципитацийн урвал (боомын гаптен илрүүлсэн урвал) гэж нэрлэдэг.
Ouchterlony давхар дархлаа задрах урвал. Урвалыг бий болгохын тулд хайлсан агар гелийн нимгэн давхаргыг шилэн хавтан дээр цутгаж, хатуурсны дараа дотор нь цооногийг хайчилж ав. Антиген ба дархлааны ийлдэсийг гельний нүхэнд тусад нь байрлуулж, бие биен рүүгээ тархдаг. Уулзах цэг дээр тэнцүү хэмжээгээр тэд цагаан судал хэлбэрээр тунадас үүсгэдэг. Олон бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн системд эсрэгтөрөгч ба эсрэгбие бүхий худгийн хооронд хэд хэдэн шугам тунадас гарч ирдэг; ижил AG-д тунадасны шугамууд нийлдэг; ижил бус AG-д тэдгээр нь огтлолцдог.
Радиаль дархлааны урвал.Хайлсан агар гель бүхий дархлааны ийлдэсийг шилэн дээр жигд хийнэ. Гель дотор хатууруулсны дараа эсрэгтөрөгчийг янз бүрийн шингэрүүлэлтэнд байрлуулсан цооногуудыг хийдэг. Антиген нь гель рүү тархаж, эсрэгбие бүхий худгийн эргэн тойронд цагираган хур тунадасны бүсүүдийг үүсгэдэг. Хур тунадасны цагирагийн диаметр нь эсрэгтөрөгчийн концентрацтай пропорциональ байна. Энэ урвалыг цусны ийлдэс дэх иммуноглобулиныг тодорхойлоход ашигладаг янз бүрийн ангиуд, комплемент системийн бүрэлдэхүүн хэсгүүд гэх мэт.
Иммуноэлектрофорез- электрофорез ба иммунопреципитацийн аргын хослол: эсрэгтөрөгчийн холимогийг гельний нүхэнд хийж, электрофорез ашиглан гель дотор нь салгаж, дараа нь иммуносерумыг электрофорезын бүстэй зэрэгцээ ховилд нэмж, эсрэгбие нь тархдаг. гель болон эсрэгтөрөгчтэй "уулзах" газарт хур тунадасны шугам үүсгэдэг.
Флокуляцийн урвал(Рамонын хэлснээр) (Латин хэлнээс f1oecus - ноосны ширхэгүүд) - хорт бодис - антитоксин эсвэл токсоид - антитоксин урвалын үед туршилтын хоолойд цайвар эсвэл флокулент масс (дархлааны тунадас) гарч ирэх. Энэ нь antitoxic ийлдэс эсвэл токсоидын үйл ажиллагааг тодорхойлоход хэрэглэгддэг.

HLA бичих- хүний ​​үндсэн гистокомпатын цогцолборын судалгаа - HLA цогцолбор. Энэ формацид янз бүрийн дархлааны хариу урвалд оролцдог HLA антигенийг кодлодог 6-р хромосом дээрх генийн бүс орно.

Даалгаврууд HLA бичихмаш өөр байж болно - биологийн таних (HLA төрөл нь эцэг эхийн генийн хамт өвлөгддөг), урьдал өвчнийг тодорхойлох янз бүрийн өвчин, эрхтэн шилжүүлэн суулгах донорыг сонгох - энэ нь донор болон хүлээн авагчийн эд эсийн HLA төрлийн үр дүнг харьцуулах явдал юм. HLA typing ашиглан үргүйдлийн тохиолдлыг оношлохын тулд гистокомпатын эсрэгтөрөгчийн хувьд эхнэр, нөхөр хэр төстэй эсвэл өөр болохыг тодорхойлдог.

HLA бичихийг санал болгож байна HLA полиморфизмын шинжилгээийлдэс судлалын болон молекул генетик гэсэн хоёр аргаар явагддаг. HLA төрлийн ийлдэс судлалын сонгодог арга нь микролимфоцитотоксик тест дээр суурилдаг ба молекулын арга нь ПГУ (полимеразын гинжин урвал) ашигладаг.

Серологийн HLA бичихтусгаарлагдсан эсийн популяци дээр хийгдсэн. Гол гистокомпатын цогцолборын эсрэгтөрөгчийг голчлон лимфоцитоор дамжуулдаг. Тиймээс I ангиллын эсрэгтөрөгчийн гол тээвэрлэгч болгон Т лимфоцитын суспензийг, HLA II ангиллын эсрэгтөрөгчийг тодорхойлохын тулд В лимфоцитын суспензийг ашигладаг. Бүхэл цуснаас шаардлагатай эсийн популяцийг тусгаарлахын тулд центрифуг эсвэл дархлаа соронзон тусгаарлалтыг ашигладаг. Эхний арга нь зарим эсийн үхэлд хүргэдэг тул хуурамч эерэг мэдээлэлд хүргэдэг гэж үздэг. Хоёрдахь аргыг илүү тодорхой гэж хүлээн зөвшөөрдөг - эсийн 95% -иас илүү нь амьдрах чадвартай хэвээр байна.

Гэхдээ лимфоцитотоксик шинжилгээ хийх үндэс HLA бичих HLA I ба II ангиллын эсрэгтөрөгчийн янз бүрийн аллелийн хувилбаруудын эсрэгбие агуулсан өвөрмөц ийлдэс юм. Серологийн шинжилгээгээр аль ийлдэс нь лимфоциттой урвалд орж, аль нь урвалд ордоггүйг судалж HLA төрлийг тодорхойлж болно.

Хэрэв эсүүд болон ийлдэс хоорондын урвал явагдах юм бол үр дүн нь эсийн гадаргуу дээр эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолбор үүсдэг. Комплемент агуулсан уусмал нэмсний дараа эсийн задрал, үхэл үүсдэг. Ийлдэс судлалын HLA бичилтийн тестийг флюресцент микроскоп ашиглан эерэг (улаан флюресцент) ба сөрөг (ногоон флюресценц) урвалыг үнэлэх эсвэл үхсэн эсийн цөмийг будах фазын тодосгогч микроскоп ашиглан үнэлдэг. HLA бичилтийн үр дүнг урвалд орсон ийлдэс ба эсрэгтөрөгчийн хөндлөн урвалын бүлгийн өвөрмөц байдал, цитотоксик урвалын эрчмийг харгалзан гаргаж авдаг.

Серологийн сул тал HLA бичихЭнэ нь хөндлөн урвал, сул эсрэгбиеийн хамаарал эсвэл HLA эсрэгтөрөгчийн бага илэрхийлэл, олон тооны HLA генд уургийн бүтээгдэхүүн байхгүй байх явдал юм.

Илүү орчин үеийн, молекул аргууд HLA бичихТэд аль хэдийн стандартчилагдсан синтетик дээжийг ашигладаг бөгөөд энэ нь лейкоцитын гадаргуу дээрх эсрэгтөрөгчтэй биш, харин ДНХ-тэй урвалд ордог бөгөөд дээжинд ямар антиген байгааг шууд харуулдаг. Молекулын аргууд нь ямар ч амьд лейкоцит шаарддаггүй; хүний ​​эссудалж болно, цөөн хэдэн микролитр цус ажиллахад хангалттай, эсвэл амны хөндийн салст бүрхэвчээс хусах замаар өөрийгөө хязгаарлаж болно.

Молекул генетик HLA бичихПГУ-ын аргыг ашигладаг бөгөөд эхний алхам нь цэвэр геномын ДНХ (бүх цус, лейкоцитын суспенз, эд эсээс) авах явдал юм.

Дараа нь ДНХ-ийн дээжийг хуулбарлаж, тодорхой HLA локусын өвөрмөц праймеруудыг (богино нэг судалтай ДНХ) ашиглан in vitro-д олшруулна. Праймерын хос бүрийн төгсгөлүүд нь тодорхой аллельд тохирсон өвөрмөц дарааллаар хатуу нэмэлт байх ёстой, эс тэгвээс олшруулалт үүсэхгүй.

ПГУ-ын дараа давтан хуулбарлах явцад олон тооны ДНХ-ийн хэсгүүдийг олж авдаг бөгөөд үүнийг нүдээр үнэлэх боломжтой. Үүнийг хийхийн тулд урвалын хольцыг электролиз эсвэл эрлийзжүүлж, тодорхой олшруулалт үүссэн эсэхийг програм эсвэл хүснэгт ашиглан тодорхойлно. HLA бичилтийн үр дүнг генийн болон аллелийн түвшинд иж бүрэн тайлан хэлбэрээр үзүүлэв. Ашигласан дээжийг стандартчилсны улмаас молекулын HLA бичихилүү нарийвчлалтай ийлдэс судлалын. Үүнээс гадна, энэ нь илүү их мэдээлэл (илүү шинэ ДНХ аллел) болон бусад зүйлсийг өгдөг өндөр түвшинЭнэ нь зөвхөн эсрэгтөрөгч төдийгүй аллелийг өөрөө тодорхойлох боломжийг олгодог тул эсэд аль антиген байгааг тодорхойлох боломжийг олгодог.

Дархлаа задрах урвал.Урвал нь өвөрмөц эсрэгбиемүүдийн эсүүд, түүний дотор эритроцит ба бактериудтай дархлааны цогцолбор үүсгэх чадварт суурилдаг бөгөөд энэ нь сонгодог замын дагуу комплемент системийг идэвхжүүлж, эсийн задралд хүргэдэг. Дархлаа задрах урвалуудаас цус задралын урвалыг ихэвчлэн ашигладаг бөгөөд бактериолизийн урвалыг ховор хэрэглэдэг (голчлон холер ба холер шиг вибрионуудыг ялгахад).

Гемолизийн урвал.Цусны улаан эсийн үүлэрхэг суспенз нь гемоглобины ялгаралтаас болж тод улаан тунгалаг шингэн болох "лак цус" болж хувирдаг. Оношлогооны комплемент бэхлэх урвал (CFR) байгуулахдаа цус задралын урвалыг индикатор болгон ашигладаг: чөлөөт нэмэлт байгаа эсэх (бэхлэлт) эсэхийг шалгах.

Гель дэх орон нутгийн цус задралын урвал(Эрне урвал) нь цус задралын урвалын нэг хувилбар юм. Энэ нь эсрэгбие үүсгэдэг эсийн тоог тодорхойлох боломжийг олгодог. Эсрэгбие - гемолизин ялгаруулдаг эсийн тоог эритроцит агуулсан агар гель, судлагдсан лимфоид эд эсийн суспенз, нэмэлт бодис агуулсан гемолизийн товрууны тоогоор тодорхойлно.

Immunfluorescent арга

(RIF, иммунофлуоресценцийн урвал) нь фторхромтой нийлсэн Abs (Ags) ашиглан тодорхой Ags (Abs) илрүүлэх арга юм. Энэ нь өндөр мэдрэмж, өвөрмөц шинж чанартай байдаг. Халдварын экспресс оношлогоонд ашигладаг. өвчин (судалгааны материал дахь эмгэг төрүүлэгчийг тодорхойлох), түүнчлэн лейкоцитын (иммунофенотип) болон бусад эсийн Ab ба гадаргуугийн рецептор, маркерыг тодорхойлоход зориулагдсан. Шууд I. m.фторохромтой хавсарсан өвөрмөц Abs агуулсан эмгэг судлалын материал эсвэл бичил биетний царцдасын эд эсийн хэсэг, т рхэцийг боловсруулахаас бүрдэнэ; Бэлдмэлийг холбосон хэвлийн булчингаас чөлөөлөхийн тулд угааж, флюресцент микроскопоор шалгана. Эерэг тохиолдолд объектын захын эргэн тойронд гялалзсан дархлааны цогцолбор гарч ирдэг. Өвөрмөц бус гэрэлтэлтийг хасахын тулд хяналт шаардлагатай. At шууд бус. Тэд.эхний шатанд эд эсийн хэсэг эсвэл т рхэцийг флюресцент бус тусгай бодисоор, хоёр дахь шатанд эхний шатанд хэрэглэсэн амьтны -глобулины эсрэг гэрэлтэгч бодисоор эмчилдэг. Эерэг тохиолдолд Ar, At to it, At эсрэг At (сэндвич арга) -аас бүрдэх гэрэлтэгч цогцолбор үүсдэг. Флюресцент микроскопоос гадна эсийг фенотиплэхдээ RIF-ийг харгалзан үздэг. лазер эс ялгагч .

Урсгалын цитометр- эсийн параметрүүд, түүний органеллууд, түүн доторх үйл явцын оптик хэмжих арга.

Энэхүү техник нь лазер туяагаар эсийг шингэний урсгалаар дайран өнгөрөхөд гэрлийн тархалтыг илрүүлэх явдал бөгөөд гэрлийн тархалтын зэрэг нь эсийн хэмжээ, бүтцийн талаар ойлголттой болох боломжийг олгодог. Нэмж дурдахад, шинжилгээ нь эсийн нэг хэсэг болох (автофлуоресценц) эсвэл урсгалын цитометрийн өмнө дээжинд нэмсэн химийн нэгдлүүдийн флюресценцийн түвшинг харгалзан үздэг.

Флюресцент моноклональ эсрэгбие эсвэл флюресцент будагч бодисоор урьдчилан тэмдэглэсэн эсийн суспенз нь урсгалын эсээр дамжин өнгөрөх шингэний урсгалд ордог. Нөхцөл байдал гэж нэрлэгддэг байдлаас шалтгаалан эсүүд ар араасаа цуврах байдлаар сонгогддог. тийрэлтэт онгоцонд тийрэлтэт онгоцны гидродинамик фокус. Лазерын цацрагийг гатлах үед детекторууд дараахь зүйлийг тэмдэглэдэг.

жижиг өнцгөөр гэрлийн тархалт (1°-аас 10° хүртэл) ( энэ шинж чанарэсийн хэмжээг тодорхойлоход ашигладаг).

90 ° өнцгөөр гэрлийн тархалт (цөм / цитоплазмын харьцаа, түүнчлэн эсийн нэг төрлийн бус байдал, мөхлөгт байдлыг үнэлэх боломжийг бидэнд олгодог).

хэд хэдэн флюресценцийн сувгаар (2-оос 18-20 хүртэл) флюресценцийн эрч хүч - эсийн суспензийн дэд популяцийн найрлагыг тодорхойлох боломжийг олгодог.

Кумбсын тест

Шууд Кумбсын сорил нь цусны улаан эсийн гадаргуу дээр IgG ангиллын эсрэгбие болон комплементийн С3 бүрэлдэхүүнийг илрүүлдэг антиглобулины сорил (гель дэх агглютинаци нь бүрэн хоёр валент эсрэгбиемийг илрүүлэх) юм. Дүрмээр бол Кумбсын шууд сорилоор илрүүлсэн эсрэгбие нь сайн тогтоогдсон эсрэгтөрөгчтэй холбоогүй өргөн хүрээний өвөрмөц шинж чанартай байдаг. Шууд Кумбсын сорилын эерэг үр дүн нь өвчтөн цус задралын цус багадалттай болохыг тодорхой харуулж байгаа ч шууд антиглобулины шинжилгээ эерэг гарсан бүх өвчтөнүүд энэ өвчнөөр өвчилдөггүй. Өвчтөнүүдийн ойролцоогоор 10% -д цусны улаан эсийн мембран дээрх эсрэгбие эсвэл нэмэлт бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг Кумбсын шууд шинжилгээгээр тодорхойлох боломжгүй (шинжилгээ нь сөрөг), гэхдээ аутоиммун цус задралын цус багадалтаар өвчилдөг. Ийм тохиолдолд эсрэгбиеийн өвөрмөц байдлыг тодруулахын тулд тэдгээрийн шүүрэлтэй туршилтуудыг ашигладаг. Шууд Кумбсын сорил нь зөвхөн комплемент эерэг байдаг нь ихэвчлэн IgM төрлийн хүйтэн эсрэгбиемүүдийг хэлдэг. Энэ тохиолдолд IgM эсрэгбиецусны улаан эсэд байхгүй үед суурь температурбие. Гэсэн хэдий ч IgM эсрэгбие нь комплементийг идэвхтэй тогтоодог бөгөөд цусны улаан эсэд нэмэлт хэвээр үлддэг тул аутоиммун цус задралын цус багадалт (хүйтэн аггутины өвчин) -ийн хувьд Кумбсын сорил зөвхөн комплементийн хувьд эерэг байх болно.

Халуун эсрэгбиеийн улмаас үүссэн аутоиммун цус задралын цус багадалт, аутоиммун эмээр өдөөгдсөн цус багадалт (метилдопа хэрэглэх үед өвчтөнүүдийн 20% хүртэл) Coombs-ийн шууд сорил эерэг байдаг. эерэг хариу үйлдэл), цус задралын цус багадалтын эм шингээх төрөл, цус задралын цус багадалтын иммунокомплекс төрөл (шинжилгээ нь зөвхөн С3 эерэг байдаг), хүйтэн эсрэгбиеийн улмаас аутоиммун цус задралын цус багадалттай - хүйтэн агглютинины өвчин (шинжилгээ нь зөвхөн C3 эерэг). Пароксизмаль хүйтэн гемоглобинуриягийн үед Кумбын шууд сорил сөрөг байна.
IN хурц үецус задралын хямралын үед олон тооны эсрэгбие бүртгэгдсэн цусны улаан эсийг устгасан, түүнчлэн эсрэгбие хангалтгүй байгаатай холбоотой өвчин. архаг явцтайөвчин, сөрөг шууд Кумбсын тест ажиглагдаж болно.

:

• Лабораторийн цусны шинжилгээний чанарыг баталгаажуулах чухал нөхцөл бол материалыг өглөө, өлөн элгэн дээр (12:00 цагаас өмнө) авах явдал юм.
• Шинжилгээ хийхээс 12 цагийн өмнө архи, тамхи татах, хоол идэхээс зайлсхийх, биеийн хөдөлгөөнийг хязгаарлах хэрэгтэй.
• Цусны шинжилгээний өглөө та ус ууж болно.
• эм хэрэглэхээс зайлсхийх; Хэрэв эм уухаа болих боломжгүй бол лабораторид мэдэгдэх ёстой.
• Эмнэлгийн оношлогооны процедурыг хийхээс өмнө материалыг авах нь зүйтэй.
• Эмэгтэйчүүдийн дааврын түвшинг үнэлэхдээ тухайн өдрийг анхаарч үзэх хэрэгтэй сарын тэмдгийн мөчлөгЗарим дааврыг тодорхойлоход хамгийн тохиромжтой цаг хэзээ вэ? Та энэ мэдээллийг эмчээсээ авах боломжтой.

Индекс	Онцлог шинж чанартай
Анализатор ба туршилтын систем	Гель картууд; DiaMed AG (Швейцарь)
Лавлах утгууд	Сөрөг үр дүн / Эерэг үр дүн
Хөндлөнгийн хүчин зүйлүүд. Эм
Дараах эмүүдийг хэрэглэх үед эерэг шинжилгээ өгөх боломжтой: ацетаминофен, салицилийн хүчиламинопирин, антигистаминууд, карбромал, цефалоспорин, хлорпромазин, хлорпропамид, цисплатин, клонидин, дипирон, этосуксимид, фенфлурамин, фуадин, гидралазин, гидрохлоротиазид, ибупрофен, инсулин, изониазид, леводопа, инсулин, изониазид де, номифенсин, пеницилламин, бид, фенацетин, фенилбутазон, пробенецид, прокаинамид, хинидин, хинин, рифампин, стрептомицин, сульфонамидууд, сульфонилмоурын деривативууд, тетрациклин, триамтерен, тримелит ангидрид
Хэрэглэх заалт
Дархлааны цус задралын цус багадалтын оношлогоо, гемолитик өвчиншинэ төрсөн хүүхэд, эмээс үүдэлтэй дархлааны цус задралын цус багадалт, цус задралын урвал
Үр дүнгийн тайлбар
Ихэвчлэн Кумбсын шууд тест сөрөг байдаг. Эерэг тестКумбс: аутоиммун цус задралын цус багадалт; шинэ төрсөн хүүхдийн цус задралын өвчин; эмээс үүдэлтэй дархлааны цус задралын цус багадалт; цус задралын урвал

Кумбсын хариу үйлдэл - үр дүнтэй аргахүний ​​цусан дахь эритроцитын эсрэгтөрөгч ба эритроцитын эсрэг эсрэгбиемүүдийг илрүүлэх шууд бус урвалагглютинаци. Туршилтын үндэс нь эритроцитын эсрэгтөрөгчийг бичихэд G ангиллын иммуноглобулин (IgG) дээр суурилсан тусгай моноклональ урвалжуудыг, дараа нь Кумбсын антиглобулины ийлдэс (AGS) хоёр дахь шатанд хэрэглэнэ.

AGS нь хүний ​​​​иммуноглобулин G-ээр дархлаажуулсан лабораторийн амьтдын цусан дахь ийлдэс ба моноклональ эсрэгбиеийн нэг бүрэлдэхүүн хэсэг болох хүний ​​ийлдсийн С3D комплементтэй холих замаар үүсдэг. AGS нь тусгай эсрэгбиемүүдэд мэдрэмтгий цусны улаан эсийг агглютин үүсгэдэг. AGS-ийн нөлөөн дор цусны улаан эсэд эсрэгбие байхгүй тохиолдолд эерэг хариу үйлдэл үзүүлэхгүй.

Кумбсын шууд бус урвал нь дараахь зүйлийг тодорхойлох боломжийг олгодог.

• IgG урвалжаар илрүүлсэн эритроцитын эсрэгтөрөгч ("бүрэн бус" эсрэгбие, жишээлбэл, моноклональ урвалжууд anti-D, anti-F Y a, anti-F Y b);
• IgG ангиллын эритроцитын эсрэг эсрэгбие.

Шууд бус антиглобулины шинжилгээ: цусны улаан эсийн эсрэгтөрөгчийг илрүүлэх

Бид анти-D IgG коликлоны жишээг ашиглан Кумбсын шууд бус урвалын аргыг танилцуулж байна.

1. Цэвэр туршилтын хоолойд шошго: шинжилгээнд хамрагдаж буй хүний ​​нэрийг заана.
2. Туршилтын хоолойд 2 дусал (ойролцоогоор 0.1 мл) D IgG-ийн эсрэг золиклон нэмнэ.
3. Шинжилгээнд хамрагдсан эритроцитуудын 5% суспензээс 2 дуслыг нэмж, өмнө нь физиологийн уусмалаар угаана. Туршилтын дээжийг золиклонтой холино.
4. Холимогийг усан ваннд эсвэл термостатад 37 ° C температурт 30 минутын турш өсгөвөрлөнө.
5. Пастерийн пипеткээр туршилтын хоолойд 5-10 мл давсны уусмал нэмнэ.
6. Хоолойг 1200 г төвөөс зугтах хурдатгалтайгаар 18-25 хэмд нэг минутын турш центрифуг хийнэ.
7. Давсны уусмалыг зайлуулна.
8. Цусны улаан эсийг угаах процедурыг центрифуг ашиглан дахин 2-3 удаа давтана.
9. Цусны эсийн тунадас дээр 2 дусал антиглобулины ийлдэс нэмж холино.
10. Хоолойг 1200 г төвөөс зугтах хурдатгалтайгаар 18-25 хэмийн температурт минутын турш центрифуг хийнэ.
11. Диспенсер эсвэл Пастерийн пипетк ашиглан 3-5 дусал давсны уусмал нэмнэ.
12. Тунадасыг дахин түдгэлзүүлж, наалдуулах эсэхийг нүдээр үнэлнэ. Туршилтын хоолойн ёроолд арын дэвсгэр дээр тод томруун агглютинатууд тодорхой шийдэлэритроцитын эсрэгтөрөгчийг илрүүлэхийг заана. Цусны эсийн тунгалаг суспенз нь эсрэгтөрөгч байхгүй байгааг илтгэнэ.

Кумбсын сорил: эритроцитын эсрэг изоиммун эсрэгбие илрүүлэх

Судалгааг хандивлагч болон хүлээн авагчийн бүх улаан эсийн эсрэгтөрөгчийн бие даасан нийцтэй байдлын шинжилгээний нэг хэсэг болгон явуулдаг. тухай дүгнэлт бүрэн нийцтэй байдалШинжилгээний бүх үе шатанд цус задрал ба/эсвэл наалдуулахгүй байх үндсэн дээр донорын эритроцит бүхий хүлээн авагчийн ийлдэс үүсдэг. Шинжилгээний аль ч үе шатанд цус задрал ба/эсвэл агглютинацийн шинж тэмдэг илэрвэл цусны дээж таарахгүй байгааг илтгэнэ.

AB0 системийг ашиглан нийцтэй байдлын үнэлгээ, "хүйтэн" эсрэгбиемүүдийг илрүүлэх

1. Донорын цусны дээжийг бэлтгэх:
   • автомат диспенсер ашиглан туршилтын хоолойд 0.2 мл цус нэмнэ;
   • Цусны улаан эсийг 5.0 мл давсны уусмалд 3 удаа угаана;
   • Үрлэнг 3-4 мл бага ионы чадалтай LISS уусмалд дахин уусгана.
2. Хоёр дахь цэвэр хоолойг шошго: хүлээн авагчийн нэр, хандивлагчийн нэрийг зааж өгнө.
3. 0.1 мл хүлээн авагчийн ийлдэсийг шошготой хуруу шилэнд хийхдээ автомат диспенсер ашиглана.
4. LISS уусмалд 5%-ийн улаан эсийн суспензээс 2 дуслыг нэмнэ.
5. Хольцыг нэн даруй 1200 г төвөөс зугтах хурдатгалтайгаар 18-25 хэмийн температурт 15-20 секундын турш центрифуг хийнэ.
6. Туршилтын хоолойг зөөлөн сэгсэрснээр тунадасыг ёроолоос нь салгана. Аглютинат байгаа эсэхийг үнэлнэ. Цус задрал ба/эсвэл агглютинат байгаа нь:
   • AB0 системийн дагуу үл нийцэх байдал;
   • өвчтөний ийлдэс дэх AB0 эсрэгтөрөгчийн өвөрмөц бус IgM эсвэл IgA ангиллын "хүйтэн" эсрэгбие байгаа эсэх.

"Халуун" эсрэгбие илрүүлэх

1. Хэрэв цус задрал ба/эсвэл агглютинат байхгүй бол гуурсыг 37°С-т 10-15 минутын турш өсгөвөрлөнө.
2. Хоолойг тасалгааны температурт 1200 граммаар 15-20 секундын турш центрифуг хийнэ.
3. Хоолойг сэгсэрч, дээд давхаргад цус задрал ба/эсвэл агглютинат байгаа эсэхийг шалгана. Эерэг үр дүн нь өвчтөний ийлдэс дэх донорын эритроцитын эсрэгтөрөгчийн эсрэг "дулаан" IgM эсрэгбие илрүүлж байгааг харуулж байна.

Кумбсын тестээр IgG эсрэгбие илрүүлэх

1. Хэрэв судалгааны өмнөх шатанд сөрөг үр дүн гарсан бол Пастерийн соруур ашиглан 5 мл 0.9% NaCl уусмалыг туршилтын хоолойд хийнэ.
2. Хоолойг 1200 г-т 15-20 секундын турш 18-25 хэмийн агаарын температурт центрифуг хийнэ. Пастерийн пипеткийг ашиглан дээд давхаргыг болгоомжтой хаяна.
3. Цусны улаан эсийг угаахыг 2-3 удаа давтана.
4. Туршилтын хоолойд 1-2 дусал антиглобулины ийлдэс нэмнэ. Холих ажлыг сайтар гүйцэтгэнэ.
5. Хоолойг 1200 граммаар 15-20 секундын турш центрифуг хийнэ.
6. Эритроцитын тунадасыг болгоомжтой задалж, урвалын үр дүнг нүдээр үнэлнэ. Агглютинацийг илрүүлэх нь донорын эритроцитын эсрэгтөрөгчийн эсрэг IgG эсрэгбие өвчтөний ийлдсэнд байгааг хэлнэ.

Гемолитик цус багадалтӨөрсдийн цусны улаан эсийн эсрэг чиглэсэн аутоиммун биетүүдээс үүсдэг нь нарийн ойлгогдоогүй байна. Гэсэн хэдий ч зарим хүчин зүйл (жишээлбэл, вирус, хэвийн бус уураг) цусны улаан эсийг өөрчилдөг тул бие нь тэдгээрийг "гадны зүйл" гэж хүлээн зөвшөөрч, эсрэгбиеийн тусламжтайгаар тэдэнтэй тэмцдэг гэж үздэг. Өөр нэг онолын дагуу цусны улаан эсийн эсрэг чиглэсэн эсрэгбие нь зарим өвчний үед сийвэнгийн уургийн хэвийн бус бие үүсэх үед бараг санамсаргүй байдлаар үүсдэг. Ийм уургийн бие нь "санамсаргүй байдлаар" онош тавихад ашиглаж болох урвалыг өгч чаддаг (жишээлбэл, вируст уушгины үрэвсэл нь Вассерманы эерэг урвал, Пол-Буннелийн эерэг урвал, хүйтэн наалдуулах урвал өгдөг) .

Хоёр байна аутоэсрэгбиеийн үндсэн төрлүүдцус задралын цус багадалт, тухайлбал: дулаан эсрэгбие (37 ° C-д урвалд ордог) ба хүйтэн эсрэгбие (тэмператур нь тэг рүү ойртох тусам урвалын идэвхжил нэмэгддэг). Халуун эсрэгбие нь хүйтэн эсрэгбиемүүдээс илүү түгээмэл байдаг. Даси дулаан гемолизин нь хүйтнээс 2 дахин их тохиолддог болохыг тогтоожээ. Гемолизин ба агглютининууд нь үндсэндээ ялгаатай эсрэгбие биш: тэдгээр нь зөвхөн үйл ажиллагааны шинж чанараараа ялгаатай байдаг. Агглютининууд нь цусны улаан эсийг агглютинжуулж, гемолизин нь цус задралын нарийн төвөгтэй үйл явцад илүү мэдрэмтгий болгодог (нэмэлт!). Эритроцитууд дээр тогтсон автоэсрэгбие нь эритроцит-глобины цогцолбор үүсгэдэг. Энэ цогцолборыг Coombs antiglobin тест ашиглан илрүүлдэг.

Кумбсын тестКумбсын ийлдэсээр хийсэн бөгөөд үүнийг бэлтгэхийн тулд туулайг хүний ​​ийлдэсээр мэдрэмтгий болгодог бөгөөд үүний эсрэг туулайн ийлдсэнд эсрэгбие үүсдэг. Ийм мэдрэмтгий ийлдэс нь хүний ​​эритроцитод үйлчилдэг бол эритроцитын рецепторууд нь эсрэгбиемүүдийг блоклодог бол тэдгээрийн агглютинаци үүсдэг. Эдгээр хориглогч эсрэгбие нь хүний ​​ийлдэсээс гаралтай тул хүний ​​сийвэнд мэдрэмтгий, тунадас агуулсан туулайн ийлдэстэй агглютин болдог. Энэ урвалыг Кумбсын тест гэж нэрлэдэг; аутоиммун бие (Lo tit) улмаас цус задралын цус багадалт нь энэ нь бараг тодорхой (дэлгэрэнгүйг Maier үзнэ үү).

Ерөнхийдөө цус задралын цус багадалтЭритроцитуудын анхдагч эмгэгийн үед Кумбсын тест сөрөг, олдмол шинж чанартай бол эерэг байдаг. Гэсэн хэдий ч энэ дүрмээс үл хамаарах зүйлүүд байдаг: үндсэн хуулийн цус задралын цус багадалтын хямралын үед Кумбсын тест хуурамч эерэг гарсан. сул зэрэг- мөн заримдаа дэлүү хагалгааны дараа, ревматик артрит, саркоидоз, байнга цус сэлбэсний дараа, системийн чонон хөрвөс. Мэдээжийн хэрэг, аутоиммун бие үүсэхгүйгээр олдмол цус задралын цус багадалт нь сөрөг байдаг.

Гемолитик цус багадалтАутоиммун биетүүдээс үүдэлтэй дараахь зүйлийг хувааж болно.
a) цочмог, субакут ба архаг хэлбэрүүд, түүнчлэн дээр
б) тодорхойгүй шалтгаантай идиопатик ба в) шинж тэмдгийн [вируст уушгины хатгалгаа (зөвхөн хүйтэн агглютинин), архаг лимфийн лейкеми, ретикулосаркома, лимфосаркома, системийн чонон хөрвөс (ихэвчлэн халуун, бага хүйтэн агглютинин), тэмбүү (хүйтэн өвчин), ажилчидтай)).
в) шинж тэмдгийн [вируст уушгины хатгалгаа (зөвхөн хүйтэн агглютининууд), архаг лимфийн лейкеми, ретикулосаркома, лимфосаркома, системийн чонон хөрвөс (ихэвчлэн дулаан, бага ихэвчлэн хүйтэн агглютининууд), тэмбүү (хүйтэн агглютининууд), өндгөвчний хавсарсан хавдар).

Цус задралын цус багадалтын клиник, аутоиммун биетүүдийн нөлөөн дор үүсдэг нь маш олон янз байдаг тул тэдгээрийн ерөнхий байдлыг зурах нь бараг боломжгүй юм. эмнэлзүйн зураг. Бүх насны болон хүйсийн хүмүүс адилхан өртдөг. Гэсэн хэдий ч идиопатик хэлбэр нь эмэгтэйчүүдэд илүү их ажиглагддаг (Sacks and Workman).

Идиопатик хэлбэрийн клиник зурагөвчний хүнд байдлаас хамаарч өөр өөр байдаг. IN архаг тохиолдолӨвчин нь аажмаар эхэлдэг, өвчин нь олон жилийн турш үргэлжилдэг бөгөөд байнга хурцаддаг. Цус багадалтын зэрэг нь цус задралын зэргээс хамаарч өөр өөр байдаг. Гемоглобины хэмжээ 10% хүртэл буурч, бусад тохиолдолд гемоглобин 50-60% хэвээр байна. Арьс ба ийлдэс дэх ретикулоцитоз ба icteric өнгөний эрч хүч нь цус задралын зэрэгтэй тохирч байна. Билирубин нь шээсэнд маш ховор байдаг, учир нь энэ нь бөөрөөр дамждаггүй, харин гемоглобинурия ажиглагддаг. Архаг тохиолдлын үед дэлүү ихэвчлэн томорч, бүр маш их хэмжээгээр хүрч чаддаг боловч бусад тохиолдолд энэ нь мэдрэгддэг. Элэг томрохгүй байх нь ховор.

Ихэнх тохиолдолд цусанд байдагмакроцитоз ажиглагдаж байна, онд цочмог үе шатуудмөн олон микроцитууд байдаг, нормобластоз, полихромази ховор тохиолддог, лейкоцитоз 30,000 хүрч чаддаг, ялтасууд хэвийн байдаг. Гэсэн хэдий ч зарим тохиолдолд тромбоцитопени нь хүнд байдаг. Эванс эдгээр тохиолдлуудыг тромбоцитуудын эсрэг эсрэгбиемүүд нэгэн зэрэг байгаатай холбон тайлбарлаж байгаа тул аутоиммун биетүүдийн үйл ажиллагааны улмаас цус задралын цус багадалт, тромбоцитопени хоёулаа байдаг - Эвансын хам шинж. Осмосын эсэргүүцэл бага зэрэг буурсан боловч үндсэн хуулийн бөмбөрцөг эсийн цус багадалттай адил хэмжээгээр биш, байнгын биш юм. 6 цагийн дараа халуунд тэсвэртэй байдлын сорил (Хегглин-Майер) нь бага зэргийн цус задрал (өөрийн ажиглалт) өгдөг боловч Марчиафавын цус багадалтаас бага хэмжээгээр. Гемосидерин нь шээсэнд бас байдаг (өөрийн ажиглалт).