Fibroblasti. Fibroblastu funkcijas

Galvenā darbība mūsdienu estētiskā medicīna- novecošanās novēršana, izmantojot augstās tehnoloģijas. Rezultātā zinātniskie pētījumi Ir konstatēts modelis, ka šūnām ir spēja atjaunoties. Šīs īpašības piemīt arī fibroblastiem, kuru atjaunošanās rezultātā āda atjaunojas un uz tiem tiek novērsti redzamie defekti.

Fibroblastu funkcijas un raksturs

Termins "fibroblasti" sastāv no diviem latīņu vārdiem, kas burtiski tulkoti kā "dīgsts" un "šķiedra". Pēc savas būtības tās ir šūnas saistaudi, sintezējot ekstracelulāro matricu (audu struktūru, kas nodrošina pārnesi ķīmiskās vielas un ādas šūnu mehāniskais atbalsts). Fibroblasti ražo vielas, kas ir kolagēna un elastīna šķiedru, hialuronskābes, fibrīna prekursori.

Tie nāk no mezenhīma - dīgļa audiem, kas atrodas cilvēku un dzīvnieku ķermeņa šūnās. Aktīvā stāvoklī fibroplastu struktūra nozīmē kodola un procesu klātbūtni; tiem ir palielināts izmērs un liels skaits ribosomu; miera stāvoklī tie samazinās un iegūst vārpstas formu.

Ādas fibroblastiem ir plaša spektra funkcijas. Pateicoties to klātbūtnei organismā, notiek šādi procesi:

• Kolagēna un elastīna sintēzes procesu aktivizēšana.
• Asinsvadu veidošanās.
• Imūnsistēmas šūnu virzīšana pret baktērijām un svešām daļiņām.
• Audu augšanas paātrināšana.
• Paaugstināta šūnu augšana.
• Bojātu ādas zonu dziedināšana.
• Vairāku olbaltumvielu (proteoglikāna, laminīna un citu) ražošana.

Ar vecumu saistītu izmaiņu cēloņi

Ādas jaunību nosaka ciklisks kolagēna un elastīna ražošanas process, kas pēc tam tiek sadalīti sastāvdaļās, kuras izmanto fibroblasti, lai tos atjaunotu. Laika gaitā pēdējie samazina savu aktivitāti, pārtraucot kolagēna un elastīna šķiedru ražošanu, kas galu galā provocē ādas novecošanos.

Ar vecumu saistītas izmaiņas sāk parādīties no 28 līdz 30 gadiem. Tie izpaužas kā elastības zudums un ptozes attīstība, ādas krāsas izmaiņas, palielināts sausums, grumbu veidošanās. Un tas viss tāpēc, ka katru desmitgadi fibroblastu skaits samazinās par 10% oriģinālais numurs.

Fibroblastu papildināšana

Tātad, lai palēninātu novecošanos un atjaunotu jaunību, ir nepieciešams atjaunot fibroblastus. Lielākā daļa mūsdienu kosmētikas paņēmienu noved tikai pie īslaicīga kolagēna šķiedru sintēzes paātrinājuma, bet nepalielina pašas šūnas. Ilgu laiku tika pieņemts, ka tas vienkārši nav iespējams.

Mūsdienās zinātne ir guvusi lielus soļus uz priekšu, un fibroblastu atjaunošana vairs nav fantāzija. Šī procedūra To sauc par SPRS terapiju, un to plaši praktizē valstīs, Eiropas valstīs un nesen arī Krievijā.

SPRS terapija: iezīmes un īstenošanas princips

Fibroblastu atjaunošana nav vienkārša, tas prasa sarežģītu injekcijas procedūru. Tās ieviešanas rezultāti ir ādas sabiezēšana un tās elastības palielināšanās, ptozes profilakse un samazināšana. Mazinās arī grumbas, pazūd pigmentācija un izlīdzinās rētas.

Terapija sākas ar pacienta šūnu savākšanu no ādas, kas atrodas aiz auss kaula. Iegūto paraugu izmanto diagnostikai un pētījumiem, ko sauc par biomateriālu. To izmanto, lai izstrādātu ārstēšanas shēmu un mākslīgi atjaunotu fibroblastus, kas pēc tam tiks injicēti atpakaļ ādā, izmantojot injekcijas.

Šūnas, kas audzētas no pacienta biomateriāliem, ķermenis neatraida. Pēc transplantācijas tie paliek aktīvi pusotru gadu, kura laikā uzlabojas ādas stāvoklis.

Fibroblastus nav ieteicams ievadīt injekcijas veidā hronisku slimību saasināšanās, saaukstēšanās, vīrusu infekciju, ko pavada paaugstināta temperatūraķermeņi. Kontrindikācijas ir imūndeficīts, ļaundabīgi veidojumi, infekcijas un hroniskas slimības V akūtā stadija. Pirms procedūras veikšanas ir nepieciešama iepriekšēja konsultācija ar speciālistu, lai noteiktu individuālās kontrindikācijas.

Procedūra ilgst ne vairāk kā stundu un tiek veikta 2 seansu kursā ar 5 līdz 7 nedēļu pārtraukumu. Pirms injekcijām ir nepieciešama vietēja anestēzija.

Fibroblastu ieviešana ir dārgs prieks. Pilns klāsts pakalpojumi, ieskaitot biomateriālu savākšanu, uzglabāšanu, izpēti un administrēšanu, ir aptuveni 400 000 rubļu.

Video: SPRS terapijas veikšana

Fibroblasti ir saistaudu šūnas, kas nodrošina kolagēna un elastīna ražošanu, tādējādi saglabājot mūsu ādas jaunību. Laika gaitā to skaits organismā nepārtraukti samazinās, kā rezultātā parādās ārējas ar vecumu saistītu izmaiņu pazīmes. Fibroblastu skaita atjaunošana tiek veikta, izmantojot injekcijas metodi, kuras pamatā ir mākslīgi audzētas šūnas.

Fibroblasti- vadošās irdeno saistaudu šūnas, kas ražo starpšūnu vielas komponentus. Tās ir sazarotas, vārpstveida vai izkliedētas šūnas, kuru izmērs ir aptuveni 20 mikroni. Tajās ir labi attīstītas iekšējās vielmaiņas vides organellas. Fibroblastu kodols ir ovālas formas, satur vienmērīgi izkliedētu hromatīnu un 2-3 nukleolus. Citoplazma ir skaidri sadalīta intensīvi iekrāsotā endoplazmā un vāji iekrāsotā ektoplazmā. Fibroblastu (īpaši jaunu) citoplazma ir bazofīla. Tas atklāj labi attīstītu endoplazmatisku tīklu ar lielu skaitu ribosomu, kas piestiprinātas pie membrānām 10-30 granulu ķēžu veidā. Šī granulētā endoplazmatiskā retikuluma ultrastruktūra ir raksturīga šūnām, kas aktīvi sintezē proteīnu “eksportam”. Ir arī daudzas brīvas ribosomas un labi attīstīts Golgi komplekss. Mitohondriji ir lieli, to skaits ir mazs. Citoķīmiskās metodes ir pierādījušas glikolītisko enzīmu un lizosomu hidrolītisko enzīmu (īpaši kolagenāzes) klātbūtni fibroblastu citoplazmā. Mitohondriju oksidatīvie enzīmi ir mazāk aktīvi.

Šūnas muskuļu un skeleta sistēma nodrošina to kustīgumu, formas maiņu, piesaisti substrātam, plēves mehānisko spriegojumu, pie kuras šūna ir piestiprināta kultūrā. Uz šūnas virsmas ir daudz mikrovillu un vezikulāru projekciju. Fibroblastiem, kas suspendēti šķidrā vidē, ir sfēriska forma. Fibroblasts izkliedējas pēc pielipšanas pie cietas virsmas, pa kuru tas pārvietojas pseidopodijas dēļ.

Fibroblastu galvenā funkcija- proteīnu un glikozaminoglikānu sintēze un sekrēcija, ko izmanto saistaudu starpšūnu vielas komponentu veidošanai, kā arī koloniju stimulējošu faktoru (granulocītu, makrofāgu) ražošana un sekrēcija. Fibroblasti ilgu laiku saglabāt spēju vairoties. Fibroblastus, kas ir pabeiguši attīstības ciklu, sauc par fibrocītiem. Tās ir ilgstošas ​​​​šūnas. Šūnu citoplazmā ir izsmelti organoīdi, šūna kļūst saplacināta, un proliferācijas potenciāls samazinās. Tomēr šūna nezaudē spēju piedalīties regulēšanā vielmaiņas procesi audumā.

Starpšūnu viela. Sastāv no fibrilāriem un pamata (amorfiem) komponentiem. Izmantojot histoautoradiogrāfijas metodes, ievadot iezīmētās aminoskābes (3H-prolīns, 3H-glicīns uc), tika noskaidrots, ka proteīna molekulas tiek sintezētas fibroblastu polisomās. Fibroblasti var vienlaikus sintezēt vairāku veidu specifiskus proteīnus un glikozaminoglikānus. Kolagēna proteīna sintēzei būtiska ir C vitamīna klātbūtne, kuras deficīta gadījumā kolagēna ģenēze tiek strauji kavēta. Starpšūnu vielu sintēze notiek intensīvāk pazeminātas skābekļa koncentrācijas apstākļos. Vienlaikus ar kolagēna sintēzi fibroblasts iznīcina aptuveni 2/3 šī proteīna, izmantojot fermentu kolagenāzi, kas novērš priekšlaicīgu audu sklerozi.

Sintezētas prokolagēna molekulas tiek nogādāti fibroblastu virsmā ar eksocitozes palīdzību. Šajā gadījumā proteīns pāriet no šķīstošās formas uz nešķīstošu - tropokolagēnu. Tropokolagēna molekulu apvienošanās supramolekulārās struktūrās - kolagēna fibrilās - notiek tiešā šūnas virsmas tuvumā, iedarbojoties īpašām šūnā izdalītajām vielām. Jo īpaši uz fibroblastu virsmas tika atrasts proteīns - fibronektīns, kas veic adhezīvu un citas funkcijas. Turpmākie fibrilloģenēzes posmi notiek, polimerizējoties un tropokolagēna agregācijai uz iepriekš izveidotajām fibrilām. Šajā gadījumā kolagēna šķiedru nobriešana var notikt bez tiešas saiknes ar fibroblastiem.
Glikozaminoglikāni ir kolagēna veidošanās regulatori un ir daļa no starpšūnu vielas galvenās (amorfās) sastāvdaļas.

Fibrillāra sastāvdaļa Irdeno saistaudu starpšūnu viela ietver trīs veidu šķiedras - kolagēnu, elastīgo un retikulāro. Viņiem ir līdzīgs veidošanās mehānisms, taču tie atšķiras viens no otra ķīmiskais sastāvs, ultrastruktūra un fizikālās īpašības. Kolagēna proteīnu identificē pēc tā aminoskābju sastāva un aminoskābju secības kolagēna molekulā. Atkarībā no aminoskābju variācijas polipeptīdu ķēdē, imūnās īpašības, molekulmasas utt., izšķir 14 vai vairāk kolagēna proteīnu šķirnes, kas ir daļa no orgānu saistaudiem. Tie visi veido 4 galvenos kolagēna veidus vai klases.

1. tipa kolagēns atrodami savienojošajā un kaulu audi, kā arī acs sklērā un radzenē; II tips - skrimšļa audos; III tips - asinsvadu sieniņās, augļa ādas saistaudos; IV-ro tips - bazālās membrānās.

Fibroblasti(fibroblastocīti) (no latīņu fibra - šķiedra, grieķu blastos - asns, dīglis) - šūnas, kas sintezē starpšūnu vielas sastāvdaļas: olbaltumvielas (piemēram, kolagēnu, elastīnu), proteoglikānus, glikoproteīnus.

Embrionālajā periodā rodas vairākas embrija mezenhimālās šūnas fibroblastu diferenciācija, kas iekļauj:

· cilmes šūnas,

puscilmes cilmes šūnas,

· nespecializēti fibroblasti,

diferencēti fibroblasti (nobrieduši, aktīvi funkcionējoši),

fibrocīti (galīgi šūnu formas),

miofibroblasti un fibroklasti.

AR galvenā funkcija fibroblasti ir saistīti ar galvenās vielas un šķiedru veidošanos (kas skaidri izpaužas, piemēram, brūču dzīšanas laikā, rētaudu veidošanās, saistaudu kapsulas veidošanās ap svešķermeni).

Zemi specializēti fibroblasti ir nedaudz apstrādātas šūnas ar apaļu vai ovālu kodolu un mazu kodolu, bazofīlu citoplazmu, kas bagāta ar RNS. Šūnas izmērs nepārsniedz 20-25 mikronus. Šo šūnu citoplazmā ir atrodams liels skaits brīvu ribosomu. Endoplazmatiskais tīkls un mitohondriji ir vāji attīstīti. Golgi aparātu attēlo īsu cauruļu un pūslīšu kopas.
Šajā citoģenēzes stadijā fibroblastiem ir ļoti zems olbaltumvielu sintēzes un sekrēcijas līmenis. Šie fibroblasti spēj mitotiski vairoties.

Diferencēti nobrieduši fibroblasti ir lielāki. Tās ir aktīvi funkcionējošas šūnas.

Nobriedušos fibroblastos tiek veikta intensīva kolagēna, elastīna proteīnu, proteoglikānu biosintēze, kas nepieciešama galvenās vielas un šķiedru veidošanai. Šie procesi tiek pastiprināti zemas skābekļa koncentrācijas apstākļos. Kolagēna biosintēzes stimulējošie faktori ir arī dzelzs, vara, hroma joni, askorbīnskābe. Viens no hidrolītiskajiem enzīmiem ir kolagenāze- noārda nenobriedušu kolagēnu šūnu iekšienē, kas regulē kolagēna sekrēcijas intensitāti šūnu līmenī.

Fibroblasti ir kustīgas šūnas. To citoplazmā, īpaši perifērajā slānī, ir mikrofilamenti, kas satur proteīnus, piemēram, aktīnu un miozīnu. Fibroblastu kustība kļūst iespējama tikai pēc tam, kad tie ir saistīti ar nesošām fibrilārām struktūrām fibronektīns- fibroblastu un citu šūnu sintezēts glikoproteīns, kas nodrošina šūnu un nešūnu struktūru adhēziju. Kustības laikā fibroblasts kļūst saplacināts, un tā virsma var palielināties 10 reizes.

Fibroblastu plazmlemma ir svarīga receptoru zona, kas veicina dažādu regulējošo faktoru ietekmi. Fibroblastu aktivāciju parasti pavada glikogēna uzkrāšanās un hidrolītisko enzīmu aktivitātes palielināšanās. Glikogēna metabolisma radītā enerģija tiek izmantota polipeptīdu un citu šūnas izdalīto komponentu sintezēšanai.

Pamatojoties uz spēju sintezēt fibrilāros proteīnus, fibroblastu saimē ietilpst asinsrades orgānu retikulārā saistaudu retikulārās šūnas, kā arī saistaudu skeleta dažādības hondroblasti un osteoblasti.

Fibrocīti- galīgās (galīgās) fibroblastu attīstības formas. Šīs šūnas ir vārpstas formas ar pterigoīdie procesi. [Tie satur nelielu skaitu organellu, vakuolu, lipīdu un glikogēna.] Kolagēna un citu vielu sintēze fibrocītos ir krasi samazināta.

Miofibroblasti- fibroblastiem līdzīgas šūnas, kas apvieno spēju sintezēt ne tikai kolagēnu, bet arī kontraktilos proteīnus ievērojamā daudzumā. Fibroblasti var pārveidoties par miofibroblastiem, kas funkcionāli ir līdzīgi gludiem muskuļu šūnas, bet atšķirībā no pēdējiem tiem ir labi attīstīts endoplazmatiskais tīkls. Grūtniecības laikā šādas šūnas tiek novērotas dziedinošo brūču granulācijas audos un dzemdē.

Fibroklasti- šūnas ar augstu fagocītisko un hidrolītisko aktivitāti, piedalās starpšūnu vielas “rezorbcijā” orgānu involūcijas periodā (piemēram, dzemdē pēc grūtniecības). Tie apvieno fibrilu veidojošo šūnu strukturālās iezīmes (attīstīts granulēts endoplazmatiskais tīkls, Golgi aparāts, salīdzinoši lieli, bet maz mitohondriju), kā arī lizosomas ar tiem raksturīgajiem hidrolītiskajiem enzīmiem. Fermentu komplekss, ko tie izdala ārpus šūnas, sadala kolagēna šķiedru cementējošo vielu, pēc tam notiek fagocitoze un intracelulāra kolagēna gremošana.

Sekojošās šķiedru saistaudu šūnas vairs nepieder fibroblastu diferenciācijai.

Ādas fibroblasti veido saistaudu pamatu. Tie ir hialuronskābes, kolagēna šķiedru un elastīna ražotāji. Ar vecumu saistītas izmaiņas palēnina fibroblastu darbību, kā rezultātā āda kļūst plāna un ļengana. Pateicoties mobilajam injekcijas tehnoloģija organisms patstāvīgi uzsāk dermas struktūras atjaunošanas funkciju.

Fibroblastu būtība

Ādas fibroblasti- tās ir dermas saistaudu slāņa šūnas, kuru priekšteči bija cilmes šūnas. Tie ir divos veidos:

1. Aktīvās - lielas šūnas, kas aprīkotas ar plakanu ovālas formas kodolu, lielu skaitu ribosomu un procesu. Tiem ir raksturīga intensīva dalīšanās, kolagēna un citu matricas komponentu ražošana.
2. Neaktīvi (fibrocīti) - šūnas ir nedaudz mazākas un tām ir vārpstveida forma. Tie veidojas no fibroblastiem un nevar dalīties. Piedalīties šķiedru sintēzē un brūču atjaunošanā.

Organismam novecojot, fibroblastu skaits samazinās un to aktivitāte samazinās. Tas noved pie starpšūnu vielu sintēzes pasliktināšanās. Šis process atspoguļojas uz ādas retināšanas, sausuma un nokarāšanās veidā. Tas stiepjas un veidojas grumbas.

Funkcijas

Viena no galvenajām fibroblastu funkcijām ir starpšūnu vielas ražošana un reģenerācija. Veidojot augšanas faktorus, ekstracelulārās matricas sastāvdaļas, fermentus, tie veicina kolagēna un hialuronskābes iznīcināšanu un jaunu sintēzi. Pateicoties nepārtrauktam procesam, starpšūnu viela tiek atjaunota. Turklāt tie ražo šūnu augšanas faktorus:

• Galvenais ir tas, ka tiek stimulēta visu dermas šūnu augšana, tiek ražots fibronektīns aizsargreakcijām;
• Transformējot - tiek sintezētas kolagēna un elastīna šķiedras, veidojas asinsvadi, imūnsistēmas šūnas tiek novirzītas pret svešiem aģentiem, baktērijām;
• Epiderma - tiek aktivizēta audu proliferācija, šūnu augšana un keratinocītu transports;
• Keratinocītu augšana ir epitelizācija, bojājumi tiek atjaunoti.

Fibroblastu augšanas faktorus pārstāv daudzfunkcionāli proteīni, kas ir mitogēni un veic arī endokrīno, regulējošo, strukturālā funkcija. Pateicoties fibroblastiem, tiek ražoti ādai svarīgi proteīni: proteoglikāni, tinascīns, nidogēns un laminīns.

Tehnikas būtība

SPRS terapija ir injekcijas ādas atjaunošanas paņēmiens, izmantojot fibroblastus, novēršot pašu ādas novecošanās cēloni. Autofibroblastu intradermālās transplantācijas tehnoloģijas patents pieder amerikāņu uzņēmumam FibrocellScience. Izmantojot šūnu tehnoloģiju, ir kļuvis iespējams audzēt fibroblastus no cilvēka ādas daļiņām (biopsija). Pašu biomateriāls novērš audu saderības problēmu un infekcijas risku. Autologās šūnas tiek uztvertas pozitīvi imūnsistēma un spēj pilnvērtīgi darboties.

Paraugu var ņemt jebkurā vecumā, bet vēlams to darīt jaunībā. Ieteicamais vecums ir no 20 līdz 30 gadiem. Jebkuras darbības laikā jūs varat saglabāt ādas gabalu un ievietot no tā izolētās šūnas kriogēnajā krātuvē uz daudziem gadiem. -196 grādu temperatūra ļauj tos uzglabāt visu mūžu, izmantojot pēc vajadzības. Tas ļaus jebkurā laikā veikt efektīvas kosmētiskās procedūras.

Pašu fibroblastiem kopā ar cilmes šūnām ir īpašība saglabāt potenciālu novecošanas laikā. Zem vietējā anestēzija Pacientam ņem nelielu ādas paraugu aiz auss, nabas vai apakšdelma. Šīs vietas ir vismazāk pakļautas ultravioletajam starojumam. Tās izmērs ir aptuveni 4 mm. No tā izolētie fibroblasti tiek ievietoti īpašos flakonos.

Kultivējot tos barotnē ar augļa serumu, jaunās šūnās tiek stimulēta spēja vairoties, un vecās tiek izskalotas. Notiek kultūras “atjaunošana”. Pēc mēneša šūnu skaits palielinās vairākus tūkstošus reižu. Pēc reaktivācijas šūnu kultūra tiek transplantēta pacientam un aktīvi aizpilda dermu. Pēc pusotra mēneša savairojušies fibroblasti tiek ievadīti pacienta sejas ādā, arī ap acīm, kā arī kaklā, dekoltē un rokās.

Procedūra

Kurss sastāv no 3-5 sesijām, kuru intervāli ir no 3 līdz 6 nedēļām. Procedūras posmi:

• pacienta pārbaude, lai noteiktu esošās kontrindikācijas;
• materiālu ņemšana;
• fibroblastu audzēšana;
• šūnu materiāla ievadīšana ādā, izmantojot divas metodes: tunelis - dziļās ādas krokās, papulārā mezoterapija;
• aizsargājot ādu no ultravioletā starojuma, uzklājot krēmu.

Pacienti atzīmē, ka procedūra ir sāpīga, tāpēc tiek izmantots Emla anestēzijas krēms. Vienā sesijā lietoto zāļu daudzums ir līdz 3 ml. Atveseļošanās periods ilgst 2-3 dienas. Pēc procedūras ir aizliegts lietot kosmētiku. Divas nedēļas jums jāatturas no saunas vai pirts apmeklējuma. Āda ir jāaizsargā no saules, eļļojot to ar krēmu ar augstu aizsardzības pakāpi. Procedūru ieteicams atkārtot reizi gadā. Rezultāts ir sejas ādas stāvokļa uzlabošanās vairāku mēnešu laikā.

Metodes efektivitāte un priekšrocības

Atjaunošanās ar fibroblastiem dod pirmos rezultātus pēc 1,5 vai 2 mēnešiem. Pilns efekts Procedūras efekts parādās pēc sešiem mēnešiem un saglabājas 2-3 gadus. Sākas pastiprināta augšanas faktoru un ekstracelulārās matricas ražošana. Fibroblasti iziet dabiskās cikla fāzes: tiek aktivizēti, sintezē elastīnu, kolagēnu un citas vielas, tad sākas degradācijas fāze, aizstājot tos ar jauniem fibroblastiem.

To lietošana plaši izplatīta medicīnā – pret apdegumiem, audu reģenerācijai laikā trofiskās čūlas, brūces To nozīme kosmetoloģijā ir liela. Ādas jaunību veido fibroblastu skaits. Ievietoti dermā, izaugušie fibroblasti tiek iestrādāti audos, uzsākot kolagēna un elastīna ražošanu. Rezultātā āda kļūst elastīga, iegūst vienmērīgu krāsu, izzūd smalkās krunciņas.

Bet no procedūras nevajadzētu sagaidīt savelkošu efektu. Šīs tehnikas mērķis ir uzlabot ādas kvalitātes īpašības. Galvenās SPRS terapijas priekšrocības:

• zāles darbojas ar gēniem, kas novērš ādas primārās struktūras traucējumus;
• tiek aktivizēti dabiski atjaunošanās procesi;
• drošība, nav noraidīšanas riska, alerģiska reakcija;
• ilgstoša rezultāta saglabāšana.

6 mēnešu laikā grumbas ap acīm tiek izlīdzinātas par 90%. Dekoltē zona un kakls izskatās jaunāki par 95%, vaigi par 87%. Krokas ap muti samazinās par 55%.

Kontrindikācijas

Neskatoties uz pilnīgu drošību, procedūrai ir dažas kontrindikācijas:

• grūtniecība, laktācijas periods;
• traucēta asins recēšana;
• ļaundabīgi audzēji;
• autoimūnas slimības;
• nosliece uz rētu veidošanos;
• ARVI;
• iekaisums uz ādas.

Dienas laikā pēc sesijas var novērot ādas apsārtumu un mikrohematomas. Nākamajā dienā simptomi izzūd.

Autofibroblastu transplantācijas tehnoloģijai ir oficiāla Roszdravnadzor atļauja. Tās drošību apstiprina šūnu dzīvotspējas laboratorijas uzraudzība.

Patenta RU 2536992 īpašnieki:

Izgudrojums attiecas uz biotehnoloģiju jomu, īpaši uz šūnu tehnoloģijām, un to var izmantot medicīnā. Metode ietver M-20 līnijas diploīdu šūnu mērogošanu no IPVE kriobankas, kas nosaukta pēc nosaukuma. M.P. Čumakova Krievijas Medicīnas zinātņu akadēmija no 7. fragmenta sēklu šūnu bankas ampulas, lai iegūtu 16. fragmenta darba šūnu banku. Šajā gadījumā šūnas ar 20-33 pasāžām, kas piemērotas izmantošanai terapeitiskos un/vai diagnostikas nolūkos, tiek iegūtas, kultivējot cilvēka barotnē, kas satur 10% fibrinolītiski aktīvās plazmas (FAP), kas satur trombocītu izcelsmes augšanas faktoru PDGF. koncentrācija no 155 līdz 342 pg/ml. Izgudrojums ļauj palielināt diploīdu cilvēka fibroblastu šūnu proliferācijas aktivitāti. 1 alga faili, 2 tabulas.

Izgudrojums attiecas uz biotehnoloģiju, imunoloģiju, medicīnu, jo īpaši uz metodi cilvēka diploīdu fibroblastu šūnu proliferācijas īpašību palielināšanai, lai šādas šūnas izmantotu terapeitiskos un diagnostikas nolūkos, tostarp cilvēka interferonu pretvīrusu aktivitātes noteikšanai, šūnu aizstāšanai. terapija.

Cilvēka diploīdu šūnu līnijām (HDCL) ir nenoliedzamas priekšrocības salīdzinājumā ar visiem zināmajiem šūnu kultūru veidiem, jo ​​tās spēj saglabāt stabilas bioloģiskās un ģenētiskās īpašības pasāžas laikā. Vakcīnu ražošanai paredzētās LDCC sertifikācija tiek veikta saskaņā ar Pasaules Veselības organizācijas izstrādātām vienotām prasībām. Šīs rekomendācijas ir ņemtas par pamatu nacionālajiem LDKCH vakcīnas sertifikācijas kritērijiem, ko izstrādājis vārdā nosauktais Valsts Infektoloģijas klīniskās pētniecības institūts. L.A. Tarasevičs un PSRS Veselības ministrija [ Vadlīnijas“Nepārtraukto šūnu līniju sertifikācija - substrāti medicīnas ražošanai un kontrolei imunobioloģiskie preparāti» RD-42-28-10-89. PSRS Veselības ministrija. M., 1989. - 16. lpp.]. Sertificētajai cilvēka diploīdu šūnu līnijai ir ierobežots dzīves ilgums, un tai ir stabilas bioloģiskās, kultūras un ģenētiskās īpašības, tā ir brīva no piesārņotājiem (baktērijām, sēnītēm, mikoplazmām, vīrusiem) un neizraisa audzēju veidošanos dzīvniekiem ar imūnsupresiju. Diploīdajai šūnu līnijai jābūt sertificētai sēklu šūnu bankai agrīnā pasāžas līmenī (līdz 10. pasāžai), kas sastāv no vismaz 200 krioviāliem. Pārvadot sēklu šūnas no viena vai vairākiem krioviāliem līdz 16. pasāžas līmenim, tiek iegūta darba šūnu banka, no kuras var iegūt nepieciešamās ražošanas kultūras ražošanai vai ražošanai. pētnieciskais darbs. Krievijā un ārzemēs ir tikai dažas cilvēka diploīdu šūnu līnijas (Wi-38, MRC-5, M-22 utt.), kas sertificētas atbilstoši uzskaitītajām prasībām. Sertificētas LDCV tiek izmantotas vakcīnu ražošanā pret poliomielītu, masalām, masaliņām, trakumsērgu, elpceļu un citomegalovīrusa infekcijas, kā arī interferonu [T.K. Borisova, L.L. Mironova, O.I. Konjuško, V.D. Popova, V.P. Gračovs, N.R. Šukhmina, V.V. Zverevs. Iekšzemes cilvēka diploīdu šūnu celmi ir substrāts vakcīnu ražošanai. Medicīniskā virusoloģija. Materiāli zinātniski praktiskā konference « Reālas problēmas medicīniskā virusoloģija, veltīta 100. gadadienai M.P. Čumakovs." M. 2009. XXVI sējums. 305.-307.lpp.; L.L. Mironova, V.D. Popova, O.I. Konjuško. Pieredze transplantējamo šūnu oriģinālo līniju bankas veidošanā un to izmantošanā virusoloģiskajā praksē. Biotehnoloģija. 2000., 1. lpp. 41-47]. LDCN plaši izmanto in vitro vīrusu infekciju diagnosticēšanai un toksicitātes analīzei dažādas narkotikas un aizstājterapijas produkti [RF patents Nr. 2373944, 23.06.2008. Ārstēšanas metode apdeguma brūce. A.S. Ermolovs, S.V. Smirnovs, V.B. Khvatovs, L.L. Mironovs; S.V. Smirnovs, V.B. Hvatovs. Inovatīvas tehnoloģijas vietēja apdegumu ārstēšana Neatliekamās medicīnas pētniecības institūtā, kas nosaukts pēc. N.V. Sklifosovskis. Grāmatā: Jaunā ekonomika. Novatorisks Krievijas portrets. M., Stratēģiskās partnerības centrs, 2009. 388.-390. lpp.].

IPVE im. M.P. Čumakova RAMS 20. gadsimta 80. gados no 8-10 nedēļas vecu cilvēka embriju ādas un muskuļiem tika izveidotas vairākas diploīdu šūnu līnijas. Šis darbs ir veltīts cilvēka diploīdu šūnu ražošanas modificēšanai diagnostikas nolūkos un šūnu aizstāšanas terapijā, proti, diploīdu cilvēka fibroblastu šūnu ražošanai ar paaugstinātām proliferācijas īpašībām.

Prototips. RF patents Nr.1440029, datēts ar 1993.gada 22.martu [Mironova L.L., Preobrazhenskaya N.K., Solovjova M.N., Orlova T.G. Stobetsky V.I., Kryuchkova G.P., Karmysheva V.Ya., Kudinova S.I., Popova V.D., Alpatova G.A. IPVE un NIIEiM im. N.F. Gamaleja. Diploīdu cilvēka embrija ādas un muskuļu šūnu celms, ko izmanto kā testa sistēmu cilvēka interferonu pretvīrusu aktivitātes un vīrusa izplatīšanās noteikšanai].

Šis LDCC celms ir apzīmēts ar M-21, tomēr M-21 fibroblastu kultūrai bija nepietiekama proliferatīvā aktivitāte, kas samazināja monoslāņa veidošanās laiku un palielināja šūnu un materiālu patēriņu, un tas galu galā noveda pie tā rezervju pilnīgas izsīkšanas. Rezultātā radās nepieciešamība pēc jaunas šūnu līnijas, kas piemērota cilvēka interferonu pretvīrusu aktivitātes noteikšanai un citiem medicīniskiem un bioloģiskiem mērķiem, rentablāka, ar augstu proliferatīvo aktivitāti un ar sēklu un darba šūnu bankām. Šī līnija ir apzīmēta ar M-20. 7. pasāžas līmenī tika sagatavota sēklu šūnu banka. 2012. gadā no 7. ejas krasta ampulas tika izgatavota darba šūnu banka 16. ejas līmenī. Sēklu un darba šūnu bankas 7. un 16. eju līmenī tiek glabātas Eksperimentālās fizikas kuģu institūtā, kas nosaukts vārdā. M.P. Chumakov RAMS un ļauj mums nodrošināt gan ražošanas procesi un zinātniskiem pētījumiem.

Atšķirība starp šo izgudrojumu un tuvāko analogu (prototipu) ir M-20 šūnu proliferatīvās aktivitātes palielināšanās, izmantojot 10% fibrinolītiski aktīvās plazmas (FAP).

Tādējādi izgudrojuma objekts ir metode diploīdu cilvēka fibroblastu šūnu proliferācijas īpašību paaugstināšanai medicīniskiem un bioloģiskiem nolūkiem, kultivējot šūnas no Veterinārās fizikas institūta kriobankas, kas ir nosaukta vārdā. M.P. Čumakova Krievijas Medicīnas zinātņu akadēmija, kurā tiek izmantotas raksturīgās M-20 līnijas diploīdās šūnas, kas tiek mērogotas no 7. pasāžas sēklu šūnu bankas ampulas un iegūta 16. fragmenta darba šūnu banka ar šūnām. 20.–33. fragmenti, kas piemēroti izmantošanai terapeitiskos un/vai diagnostikas nolūkos, kas iegūti, kultivējot uzturvielu barotnē, kas satur 10% cilvēka fibrinolītiski aktīvās plazmas (FAP). Kultivējot šūnas, vēlams izmantot barotni DMEM ar 10% FAP.

Raksturīgās M-20 līnijas cilvēka diploīdajām šūnām, kas iegūtas ar iepriekš minēto metodi, ir augsta proliferatīvā aktivitāte un tās ir piemērotas izmantošanai terapeitiskos un/vai diagnostikas nolūkos.

Metodes ieviešanas shēma:

1. Tiek izmantots viens krioviāls no IPVE 7. ejas sēklu šūnu bankas, kas nosaukta vārdā. M.P. Čumakova RAMS

2. Darba šūnu bankas sagatavošana IPVE nosauktā 16. fragmenta līmenī. M.P. Čumakova RAMS

3. M-20 līnijas fibroblastu atgūšana no 16. ejas darba šūnu bankas (IPVE, kas nosaukta M. P. Čumakova vārdā, Krievijas Medicīnas zinātņu akadēmija).

4. Fibroblastu līnijas M-20 vienslāņu kultūras iegūšana, 17. fragments.

5. M-20 līnijas fibroblastu bioloģisko īpašību atjaunošana ar trīskāršu pasāžu (līdz 20. pasāžai ieskaitot), lai labotu iespējamos DNS bojājumus kriokonservācijas procesā.

6. Šūnu kultūru iegūšana diagnostikas nolūkos un šūnu aizstājterapijas nolūkā, replikējot M-20 līnijas fibroblastus no 20. līdz 33. pasāžai, izmantojot barotni, kas satur 10% fibrinolītiski aktīvās plazmas (ar PDGF saturu no 155 līdz 342 pg/ml).

Piedāvātā metode nodrošina tādu šūnu veidošanos, kurām ir augsta proliferācijas aktivitāte un kuras ir piemērotas izmantošanai diagnostikā un/vai medicīniskiem nolūkiem.

Šāds tehniskais rezultāts tiek sasniegts, kultivējot M-20 līnijas cilvēka fibroblastus uzturvielu barotnē, pievienojot 10% fibrinolītiski aktīvās plazmas (FAP), kam piemīt augšanu stimulējoša iedarbība un pastiprina šūnu kultūras proliferācijas aktivitāti.

FAP ir klīniski lietojama transfūzijas vide, ko iegūst no cilvēku asinīm, kas pēkšņi miruši no miokarda infarkta, akūtas sirds mazspējas, smadzeņu asiņošanas, pirmajās 6 stundās pēc nāves [PSRS Veselības ministrijas jūnija rīkojums Nr. 482 14, 1972 “Par ārstniecības un profilaktisko iestāžu un klīniku nodrošinājuma uzlabošanu ar līķa audiem” kaulu smadzenes un asinis"]. Pēcnāves asinis ir pilnīga pārliešanas vide, kurai ir vairākas bioloģiskas īpašības - galvenokārt palielināts fibrinolītiskais potenciāls. Šajā sakarā tiek ierosināts saukt arī pēcnāves asiņu fibrinolīzi. Galvenās indikācijas pēcnāves asins pārliešanai: akūts asins zudums, šoks, dažādas izcelsmes anēmija, apdeguma traumas, vielmaiņas aizstāšana laikā eksogēna saindēšanās, aizpildot AIK, izmantojot ekstrakorporālo cirkulāciju ķirurģijā [E.G. Tsurinova. Fibrinolīzes asins pārliešana. M., 1960, 159 lpp.; S.V. Rižkovs. Fibrinolīzes asiņu sagatavošana un izmantošanas iespējas atkarībā no savākšanas laika un nāves cēloņa. Autora kopsavilkums. doc. diss. L., 1968, 21 lpp.; G.A. Pafomovs. Pēkšņi mirušo asiņu bioloģiskās īpašības un to izmantošana ķirurģiskajā praksē. Diss. doc. medus. Sci. M., 1971, 355 lpp.; K.S. Simonjans, K.P. Gutiontova, E.G. Tsurinova. Pēcnāves asinis transfuzioloģijas aspektā. M., Medicīna, 1975, 271 lpp.]. Pašlaik tiek izmantoti pēcnāves asins komponenti: fibrinolītiski aktīva plazma, sarkano asins šūnu masa, leikocītu masa, trombocītu masa [G.Ya. Levins. Hemokoagulācijas īpašības un klīniskais pielietojums līķu asiņu plazma un trombocīti. Autora kopsavilkums. doc. diss. M., 1978, 31 lpp.; V.B. Hvatovs. Fibrinolītiskas un antiproteāzes iedarbības preparāti no pēkšņi mirušu cilvēku asins plazmas. Diss. doc. Med Sciences, 1984, 417 lpp.; V.B. Khvatov Plasmakinase - jauns trombolītisks preparāts no pēcnāves plazmas In: Thrombosis and Trombolysis edd. E.I. Čazovs, V.V. Smirnovs). Consultants Bureau, N.Y., L, 1986, lpp. 283-310; V.B. Hvatovs. Pēcnāves asiņu izmantošanas medicīniskie un bioloģiskie aspekti. PSRS Medicīnas zinātņu akadēmijas Biļetens, 1991, 9. 18.-24.lpp.; V.B. Hvatovs. Līķa asinis — problēmas vēsture un pašreizējais stāvoklis. Problēma hematols. un pārplūde. asinis, 1997, 1. S. 51-59]. Klīniski izmantotas arī no orgānu donoriem iegūtās līķu asiņu sastāvdaļas [miris indivīds ar pukstošu sirdi saskaņā ar 2001.gada 20.decembra "Instrukcijas personas nāves konstatēšanai, pamatojoties uz smadzeņu nāves diagnozi" Nr.460, Tieslietu ministrijas 2002.gada 17.janvāra reģistrācijas Nr.3170] . Orgānu, audu un šūnu transplantācija tiek veikta saskaņā ar Krievijas Federācijas likumu “Par cilvēka orgānu un (vai) audu transplantāciju” ar grozījumiem. Federālie likumi 2000.gada 20.jūnija Nr.91-F3, 2006.gada 16.oktobra Nr.160-F3; V.B. Khvatovs, S.V. Žuravels, V.A. Guļajevs, E.N. Kobzeva, M.S. Makarovs. Orgānu donoru asins šūnu komponentu bioloģiskā lietderība un funkcionālā aktivitāte. Transplantoloģija, 2011, 4, lpp. 13-19; Khubutia M.Sh., Khvatov V.B., Guļajevs V.A. uc Metode globulārā asins tilpuma un imūnmodulējošās iedarbības kompensēšanai transplantācijas laikā. RF patents izgudrojumam Nr. 2452519, publ. 10.06.2012., biļetens. Nr.16].

Fibrinolītiski aktīvo plazmu iegūst no pēkšņi mirušu cilvēku asinīm, kas sagatavota ar konservantu Glyugitsir (asins: konservantu attiecība 4:1), lai saglabātu tās fibrinolītiski aktīvās īpašības. Plazmas atdalīšana no asins šūnu elementiem tiek veikta sterilā kastē, ievērojot visus aseptikas un antiseptikas noteikumus, un ir līdzīga donora plazmas iegūšanai no konservētām donoru asinīm. FAP klīniskā izmantošana ķirurģijā un traumatoloģijā ir atklājusi brūču dzīšanu stimulējošu efektu [I.Yu. Kļukvins, M.V. Zvezdina, V.B. Khvatovs, F.A. Burdyga. Metode sakostu brūču ārstēšanai. Krievijas Federācijas izgudrojuma patents Nr.2372927, publ., 2009.gada 20.novembris, biļetens. Nr.32]. Mēs saistījām šo efektu ar augšanu stimulējošu faktoru klātbūtni FAP, ko izdala aktivēti trombocīti. Pēc tam mēs FAP identificējām trombocītu izcelsmes augšanas faktoru (PDGF). FAP augšanu stimulējošā iedarbība cilvēka šūnu kultūrā ir pierādīta īpašos pētījumos. Pētītie FAP paraugi 10% koncentrācijā tika pievienoti M-20 līnijas cilvēka fibroblastu šūnu suspensijai, kas satur zināmu skaitu šūnu, un 10 ml iegūtā maisījuma ievietoja kultivēšanas kolbās ar augšanas virsmas laukumu 25 cm2. Šūnas tika audzētas 3–4 dienas 5% CO 2 atmosfērā un 37 °C temperatūrā. Pēc 3-kārtīgas pasāžas izaugušās šūnas tika saskaitītas Fuksa-Rozentāla kamerā un noteikta izaugušo šūnu skaita attiecība pret iestādīto šūnu skaitu - proliferācijas indekss (1. tabulā).

No veiktajiem eksperimentiem izriet, ka FAP augšanas īpašības nodrošina augstu proliferācijas aktivitāti un neatšķiras no augļa liellopu seruma īpašībām. Turklāt FAP satur cilvēka trombocītu augšanas faktorus, t.i. alogēns tips, atšķirībā no liellopu augļa seruma - ksenogēnais tips. Šis fakts ir izšķirošs šūnu transplantācijai aizstājterapijas laikā. Ņemiet vērā, ka augšanu stimulējošā iedarbība uz M-20 šūnu kultūru jo īpaši ir saistīta ar PDGF klātbūtni FAP koncentrācijā no 155 līdz 342 pg/ml. Šie dati tika iegūti, izmantojot Qantikine, Human PDGF-BB Immunoassay komplektu no R&D Systems un Multiskan Ascent sistēmu no Thermo. PDGF-BB koncentrācija FAP ir līdzīga tā saturam asins serumā. Tādējādi asins donoru un izmeklēto pacientu serumā PDGF saturs bija robežās no 110 līdz 880 pg/l, vidēji 244 pg/ml, savukārt plazmā PDGF saturs svārstījās no 0-2 pg/ml.

Lai labāk izprastu piedāvāto tehnisko risinājumu "M-20 līnijas cilvēka diploīdu šūnu ražošana medicīniskiem un bioloģiskiem nolūkiem", mēs sniedzam šādu piemēru.

M-20 līnijas šūnas, 16. fragments, tiek atgūtas no darba bankas. Lai to izdarītu, krioviāls ar šūnām tiek izņemts no šķidrā slāpekļa un ievietots tajā ūdens vanna 38°C temperatūrā un pēc atkausēšanas saturu pārnes kultivēšanas traukā ar DMEM barotni, kas satur 10% FAP (ar PDGF saturu no 155 līdz 342 pg/ml), pievieno antibiotiku gentamicīnu ar ātrumu 1 ml 4% šķīduma uz 1 litru barotnes . Lai izveidotu monoslāni, šūnas 4-5 dienas kultivē 37°C un 5% CO 2 atmosfērā. Pēc viena šūnu slāņa veidošanās tiek veiktas 3 secīgas pasāžas, kas nepieciešamas DNS atjaunošanai pēc kriokonservācijas. Pēc tam šūnas tiek replicētas no 20. fragmenta uz 33. fragmentu. Šūnas no šīm eju ir paredzētas biomedicīnas nolūkiem. Iegūtā šūnu līnija tika detalizēti raksturota saskaņā ar PVO prasībām un nosaukto GNIISiK MIBP. L.A. Tarasevičs, tostarp M-20 šūnu līnijas HLA tipizēšana, kā arī tās citokīnu spektra pētījums. Mēs sniedzam līnijas M-20 un M-22 īpašību salīdzinošu aprakstu (2. tabula). Līnija M 22 (cilvēka diploīdie fibroblasti) ir licencēta kā vakcīnas substrāts un apstiprināta jebkura veida medicīnisko vīrusu vakcīnu ražošanai, kā arī tiek izmantota II-IIIA pakāpes apdegumu brūču ārstēšanai [RF patents par izgudrojumu Nr. 2373944 , 23.06.2008. Metode apdeguma brūces ārstēšanai. A.S. Ermolovs, S.V. Smirnovs, V.B. Khvatovs, L.L. Mironova, O.I. Klnyushko, E.A. Žirkova, B.C. Bočarova].

Line M-20 tika instalēta IPVE, kas nosaukts pēc nosaukuma. M.P. Čumakovs RAMS 1986. gadā no 10 nedēļas ilga cilvēka embrija ādas un muskuļiem, kas iegūts aborta rezultātā no veselas sievietes. Anamnēzē nebija vēža, seksuāli transmisīvo slimību, hepatīta vai tuberkulozes; ģenētiskā un iedzimtas slimībasģimenē netika novērots. Šūnu barotne DMEM, kas papildināta ar 10% FAP. Sēšanas attiecība ir 1:3-1:4 divas reizes nedēļā ar šūnu iesēšanas devu 7×10 4 šūnas/ml. Šūnu monoslānis sastāv no orientētām viendabīgām vārpstveida šūnām ar ovāliem kodoliem, kas satur 1-3 nukleolus un mazas hromatīna gabaliņus. IN dzīves cikls Līniju var iedalīt 3 attīstības fāzēs: veidošanās 1-3 ejas, aktīva augšana 4-40 un novecošanās 41-52, tad iestājas nāve. Līnijas šūnām ir cilvēka kariotips 2m=46, XY. Līnijai raksturīga augsta ģenētiskā stabilitāte: 93,3-96,9% šūnu ir diploīds hromosomu komplekts, šūnas ar poliploīdu komplektu ir ne vairāk kā 1,6%. Netika novērotas spraugas, pārtraukumi vai gredzena hromosomas. Izoenzīmu G-6PDE un LDE joslu skaits un to elektroforētiskā mobilitāte sakrīt ar cilvēka eritrocītu joslu skaitu. G-6FDG lēns tips. Sējot uz selektīvām barotnēm, netika konstatēts piesārņojums ar baktērijām, sēnītēm vai mikoplazmām. Turklāt, krāsojot ar DNS fluorohromiem Hochst 33258 un olivomicīnu, mikoplazmas piesārņojums netika konstatēts, kā arī PCR metode. Piesārņojums ar vīrusiem eksperimentos ar zīdītājiem un pieaugušām baltajām pelēm, jūrascūciņas, trušiem un vistu embrijiem, kā arī uz homologām un heterologām šūnu kultūrām. Tumorogenitātes kontrole. Kad līnijas šūnas tika ievadītas dzīvniekiem ar imūnsupresiju, audzēji neveidojās. Reversā transkriptāze netika atklāta. HLA marķieri: I klase: A*(02.03)/B*(07.40)/CW*(03.07). II klase: DRB1*(15.16)/DQB1*(05.06). M-20 līnijas šūnas 20. pasāžas līmenī ražo mRNS α-interferonam (IFNα) un interleikīniem: IL1β, 2, 4, 6, 8, 10, 18.

Tādējādi piedāvātā līnija ir diploīda – tai ir ierobežots dzīves ilgums, tā saglabā normālu cilvēka šūnu kariotipu visu mūžu, ir brīva no piesārņotājiem un tai nav onkogēna potenciāla. Tas ir raksturots ar drošību saskaņā ar PVO ieteikumiem un GNIISiK MIBP prasībām. L.A. Tarasevičs. IPVE im. M.P. Chumakov RAMS ir sēklu un darba šūnu bankas, kas var apmierināt visas ražošanas un zinātniskās pētniecības vajadzības. M-20 līnijas šūnas ir jutīgas pret dažādu vīrusu infekciju. Turklāt tika pētīts M-20 līnijas citokīnu spektrs. Zināšanas par šūnu citokīnu spektru ļauj precīzāk novērtēt rezultātus, nosakot interferona statusu pacientiem un sniegt informētus ieteikumus par terapeitisko un profilaktisko zāļu lietošanu.

Cilvēka diploīdās šūnas - M-20 celma fibroblastus ar paaugstinātu proliferācijas aktivitāti, kas iegūti ar piedāvāto metodi, var izmantot diagnostikas nolūkos, jo īpaši interferona (IFN) aktivitātes noteikšanai cilvēka asins serumā, kā arī medicīniskiem nolūkiem. , piemēram, lokālai izgulējumu, sakostu brūču, ilgstoši nedzīstošu un apdegumu brūču ārstēšanai.

1. Metode cilvēka diploīdu fibroblastu šūnu proliferācijas īpašību palielināšanai, kas raksturīga ar to, ka raksturotās M-20 līnijas diploīdās šūnas no Kuģu institūta kriobankas. M.P. Čumakova RAMS tiek mērogots no 7. pasāžas sēklu šūnu bankas ampulas un tiek iegūta 16. pasāžas darba šūnu banka, savukārt 20.-33. pasāžas šūnas, kas piemērotas lietošanai terapeitiskiem un/vai diagnostikas mērķiem, tiek iegūtas kultivēšana barotnē, kas satur 10% fibrinolītiski aktīvās cilvēka plazmas (FAP), kas satur trombocītu izcelsmes augšanas faktoru PDGF koncentrācijā no 155 līdz 342 pg/ml.

2. Paņēmiens saskaņā ar 1. punktu, kurā šūnu kultivēšanai izmanto barotni DMEM ar 10% FAP.

Līdzīgi patenti:

Izgudrojums attiecas uz farmācijas nozari, proti, uz cilvēka placentas perfūzijas šūnu izmantošanu ražošanā. medicīna lai nomāktu audzēja šūnu proliferāciju indivīdā.

Izgudrojumu grupa attiecas uz biotehnoloģijas un onkoloģijas jomu. Metode ietver: a) pēcdzemdību audiem specifisku multipotentu autologo cilmes šūnu (ASC) un/vai autologo cilmes šūnu (APC) izolēšanu to turpmākajām proteomiskajām un pilnas transkriptomiskajām analīzēm; b) ASC un/vai APC un/vai multipotentu alogēnu HLA-haploidentisko cilmes šūnu (HLA-CK) izolēšana turpmākai to proteomiskā profila pārveidošanai; c) CSC izolēšana no pacienta audzēja; d) ASC un/vai APC un RSC proteomiskā analīze; e) ASC un/vai APC un CSC pilnīga transkripta analīze; f) proteīnu kopas noteikšana, no kurām katra ir ietverta gan ASC un/vai APC, gan CSC proteomiskajos profilos; g) iepriekš noteikta proteīnu kopuma analīze, lai identificētu intracelulāros signalizācijas ceļus CSC, kas nav pakļauti neoplastiskai transformācijai kanceroģenēzes rezultātā, un lai noteiktu mērķa proteīnus, kas ir identificēto signalizācijas ceļu membrānas akceptori; h) CSC pilna transkripta gēnu ekspresijas profila analīze un CSC identificēto signalizācijas ceļu strukturālo komponentu integritātes un funkcionālās nozīmes apstiprināšana; i) ligandu proteīnu identificēšana, kas spēj aktivizēt mērķa proteīnus; uz) salīdzinošā analīze pilni ASA un/vai APC transkriptomiski profili ar transkripta profiliem, kas ietverti zināmās transkriptu datu bāzēs, lai identificētu perturbogēnus, kas spēj modificēt ASA un/vai APC un/vai HLA-CK gēnu ekspresijas profilu, kas izolēti, lai pārveidotu to proteomisko profilu. sekrēcijas virziens agrāk noteiktas ligandu olbaltumvielas; k) ASA un/vai APC un/vai HLA-CK proteomiskā profila pārveidošana ar perturbogēniem, lai iegūtu dažādu transkriptomisko profilu modificētu. šūnu sistēmas, kas spēj radīt regulējošu ietekmi uz pacienta RSC.

Izgudrojums attiecas uz biotehnoloģiju jomu, īpaši uz šūnu tehnoloģijām, un to var izmantot medicīnā. Mononukleāro šūnu vai neembrionālo cilmes šūnu populācija, kas bagātināta ar monocītu cilmes šūnām, kas satur promonocītus, tiek izmantota, lai ārstētu pacienta išēmiju.

Izgudrojums attiecas uz biotehnoloģiju un šūnu tehnoloģiju jomu. Pieprasītā izgudrojuma mērķis ir radīt pluripotentas, multipotentas un/vai pašatjaunojošas šūnas, kas spēj sākt diferencēties kultūrā Dažādi veidišūnas un spēj tālāk diferencēties in vivo.

Izgudrojums attiecas uz medicīnas jomu un var tikt izmantots spermas atlasei palīgreproduktīvo tehnoloģiju metodēs. Metode ietver spermas piliena un barotnes piliena ievietošanu Petri trauciņā ne vairāk kā 5 cm attālumā viens no otra, savienojot pilienus ar viskozas barotnes sloksni ar viskozitātes parametriem 1-4 Pa s, pēc tam trauku inkubē ar saturu 30-90 minūtes simulējošos apstākļos dabiska vide dzemdes kakla kanāls sieviešu reproduktīvais trakts.

Izgudrojums attiecas uz medicīnas, biotehnoloģijas un šūnu tehnoloģiju jomu. Metode pluripotento cilmes šūnu, kas pārstāv cilvēka šūnu līniju, diferencēšanai šūnās, kas ekspresē izveidotajai endodermas līnijai raksturīgus marķierus, ietver pluripotento cilmes šūnu apstrādi ar barotni, kas raksturojas ar to, ka tā nesatur aktivīnu A un satur GDF-8 noteiktu laika periodu. , kas ir pietiekams, lai pluripotentās cilmes šūnas diferencētu šūnās, kas ekspresē izveidotās endodermas līnijai raksturīgus marķierus.

Šis izgudrojums attiecas uz imunoloģijas jomu. Ir ierosināti oligopeptīda varianti, kas izolēti no RAB6KIFL proteīna (KIFL20A), kas spēj inducēt citotoksiskus T limfocītus (CTL) kā daļu no kompleksa ar HLA-A*0201 molekulu.

Izgudrojums attiecas uz pārtikas rūpniecības jomu un ir brūvēšanas metode, kas ietver termostabilas proteāzes pievienošanu misai pēc misas filtrēšanas, bet pirms misas vārīšanas, kur proteāzes siltuma stabilitāte nozīmē, ka šīs proteāzes aktivitāte tiek samazināta. vismaz 70% no tās aktivitātes, mērot saskaņā ar uz nākamo metodi: proteāzi atšķaida līdz koncentrācijai 1 mg/ml testa buferšķīdumā, kas satur 100 mmol dzintarskābes, 100 mmol HEPES, 100 mmol CHES, 100 mmol CABS, 1 mmol CaCl2, 150 mmol KCl, 0,01% Triton X-100 un c pH noregulēts uz 5,5 ar NaOH; pēc tam proteāzi iepriekš inkubē i) ledū un ii) 10 minūtes 70°C temperatūrā; substrāts, kuram ir aktīva proteāze, tiek suspendēts 0,01% Triton X-100: lai sāktu reakciju, mēģenē pievieno 20 μl proteāzes un inkubē Eppendorf termomiksierī 70°C, 1400 apgr./min 15 minūtes; reakcija tiek apturēta, ievietojot mēģenes ledū; paraugus centrifugē auksti pie 14000 g 3 minūtes un mēra supernatanta optisko blīvumu OD590; iegūto paraugu bez proteāzes OD590 vērtību atņem no iegūtās ar proteāzi apstrādāto paraugu OD590 vērtības; nosaka proteāzes termostabilitāti, aprēķinot proteāzes aktivitātes procentuālo daudzumu paraugos, kas iepriekš inkubēti 70 °C temperatūrā, attiecībā pret proteāzes aktivitāti paraugos, kas inkubēti uz ledus, kā 100% aktivitāti.

Izgudrojums attiecas uz šūnu bioloģijas, šūnu transplantoloģijas un audu inženierijas jomu. Metode taukaudu stromas šūnu angiogēnās aktivitātes palielināšanai audos un orgānos ietver taukaudu stromas šūnu izolēšanu, izolēto šūnu kultivēšanu audzēja nekrozes faktora-alfa klātbūtnē 5 vai 100 ng/ml 24-72 stundas. , kam seko transplantācija audos vai orgānos .

Izgudrojums attiecas uz biotehnoloģiju, šūnu tehnoloģiju un audu ķirurģijas jomu. Gludās muskulatūras šūnu kultūras iegūšanas metode sastāv no asinsvada fragmenta izgriešanas, sasmalcināšanas gabalos, kuru izmērs nepārsniedz 2 mm jebkurā dimensijā, un gabalu inkubēšanu kultivēšanas kolbā ar iepriekš uzklātiem skrāpējumiem. līdz kolbas dibenam, kurā ir barotne, kurā ir 10% embrija augļa seruma, vismaz 10 dienas, bet ne ilgāk kā 24 dienas, 37°C temperatūrā CO2 inkubatorā, kas raksturīgs ar to, ka minētais asinsvads ir augšupejošās ekstremitātes fragments krūšu aorta, kas izgriezts koronāro artēriju šuntēšanas procedūras laikā, un minētos augšupejošās krūšu aortas fragmenta gabalus glabā barotnē, kas satur 0,1% kolagenāzes, vismaz 30 minūtes, bet ne ilgāk kā 60 minūtes 37 ° C temperatūrā. °C pirms inkubācijas un pēc tam mazgā ar šūnu barotni.

Metode mezenhimālo cilmes šūnu iegūšanai no cilvēka pluripotentām cilmes šūnām un mezenhimālajām cilmes šūnām, kas iegūtas ar šo metodi // 2528250

Izgudrojums attiecas uz gēnu inženierijas, audu tehnoloģijas un medicīnas jomu. Metode mezenhimālo cilmes šūnu iegūšanai no pluripotentām cilvēka cilmes šūnu līnijām ietver embriju ķermeņu iegūšanu no cilvēka pluripotentām cilmes šūnām, embriju ķermeņu pievienošanu Petri trauciņai, lai izraisītu embriju ķermeņu spontānu diferenciāciju mezenhimālās cilmes šūnās, kultivēšanu ar mezenhimālo cilmes šūnu proliferāciju. saglabājot mezenhimālo cilmes šūnu identitāti un kur spontānas stadijas diferenciācijas indukcija notiek, veidojot autologas citokīna cilpas, nepievienojot ārēju citokīnu, arī atbilstošās šūnas, to izmantošana, vervēšanas un kultivēšanas metode.

Izgudrojums attiecas uz molekulārās bioloģijas, bioķīmijas un medicīnas jomu. Pieaugušo taukaudu cilmes šūnu migrācijas ierosināšanai tiek piedāvāta kompozīcija, kas kā aktīvā sastāvdaļa satur cilvēka mezenhimālās cilmes šūnas no pieauguša cilvēka taukaudiem daudzumā no 1x107 līdz 1x1010, kas uz šūnas virsmas ekspresē ķīmokīna vai augšanas faktora receptoru, vai sekrēcijas produkts no šīm cilmes šūnām ietver ķīmokīna vai augšanas faktora receptoru; kur pieaugušo taukaudu cilmes šūnu izdalītais produkts ir adiponektīns; un kur pieauguša cilvēka taukaudu cilmes šūnas ir sagatavotas ar maisījumu, kas satur chemokīnu vai augšanas faktoru.

Izgudrojums attiecas uz biotehnoloģiju un medicīnu. Ir ierosināta metode nabassaites asiņu mononukleāro šūnu (pcBMC) paplašināšanai ex vivo daudzpatentu mezenhimālo šūnu (MMSC) klātbūtnē, kas ietver MMSC kultivēšanu no taukaudu stromas-vaskulārās frakcijas, līdz tiek sasniegts vienslānis. O2 koncentrācija barotnē 5%, pcMNC suspensijas pievienošana MMSC monoslānim, kultivēšana 72 stundas ar O2 koncentrāciju barotnē 5%, nesaistītu psMNC atlase un barotnes aizstāšana, MMSC turpmāka kultivēšana ar pievienotiem psMNC. 7 dienas ar O2 koncentrāciju vidē 5%.

Izgudrojums attiecas uz biotehnoloģijas un medicīnas jomu. Tiek piedāvāta kompozīcija, kas satur cilvēka augļa šķidruma cilmes šūnas ar CD73+/CD90+/CD105+/CK19+ fenotipu, uzturvielu barotni, eritropoetīnu, epidermas augšanas faktoru un kolagēnu, kas uzņemti efektīvā daudzumā.

Izgudrojums attiecas uz medicīnas un šūnu tehnoloģiju jomu. Šūnu produkts, kas satur submandibular kanālu cilmes šūnu populāciju siekalu dziedzeris, ko raksturo CD49f+/EpCAM+ fenotips un pēc apstrādes ar valproskābi koncentrācijā 0,1-40 mM un kultivēšanas kolagēna gēlā, mainot ekspresijas profilu uz 1AAT+/PEPCK+/G6P+/TDO+/CYP P4503A13+, kā arī acquiring spēju. sintezēt urīnvielu un albumīnu.

Izgudrojums attiecas uz biotehnoloģiju, šūnu un audu inženierijas jomu. Aprakstīta metode zīdītāju sirds rezistentu cilmes šūnu iegūšanai, kas ekspresē virsmas marķierus c-kit, un/vai sca-1, un/vai MDR1, kuras laikā miokarda audu paraugus izolē, sasmalcina, apstrādā ar kolagenāzi un tripsīnu un kultivēts uz kultivēšanas trauka, kas pārklāts ar fibronektīnu, ar sasmalcinātu paraugu eksplanta kultūru, kam seko imūnselekcija.

Izgudrojums attiecas uz bioķīmijas, biotehnoloģijas un medicīnas jomu. Tiek piedāvāts šķīstošā imūnās atbildes nomācēja N-gala fragments ar garumu 21 aminoskābe ar aminoskābju secību pēc Seq ID NO: 1, kas ļauj stimulēt regulējošo T-limfocītu veidošanos, kā arī metode regulējošo T-limfocītu veidošanās stimulēšanai ar imūnās atbildes reakcijas šķīstošā supresora N-gala fragmentu ar Seq ID NO: 1, ja to ievada koncentrācijā 0,1-50 μg/ml.

Izgudrojums attiecas uz farmācijas nozari un ir dermatoloģisks krēms, kas paredzēts lokālai bakteriālu ādas infekciju ārstēšanai un ar to saistīto brūču dziedināšanai, kas satur framicetīna sulfātu un biopolimēru, kas iekļauts krēma bāzē, kas satur vismaz vienu vielu no katras no šīm grupām. : konservants ; primāro un sekundāro emulgatoru, kas izvēlēts no grupas, kas sastāv no ketostearilspirta, ketomakrogola 1000, polisorbāta-80 un Span-80; parafīns kā vaskains produkts; līdzšķīdinātājs, kas izvēlēts no grupas, kas sastāv no propilēnglikola, heksilēnglikola un polietilēnglikola-400; slāpekļskābe vai pienskābe un ūdens, un minētais biopolimērs vēlams ir hitozāns.

Izgudrojums attiecas uz biotehnoloģiju jomu, īpaši uz šūnu tehnoloģijām, un to var izmantot medicīnā. Metode ietver M-20 līnijas diploīdu šūnu mērogošanu no IPVE kriobankas, kas nosaukta pēc nosaukuma. M.P. Čumakova Krievijas Medicīnas zinātņu akadēmija no 7. fragmenta sēklu šūnu bankas ampulas, lai iegūtu 16. fragmenta darba šūnu banku. Šajā gadījumā 20–33 pasāžu šūnas, kas piemērotas lietošanai ārstniecības un diagnostikas nolūkos, iegūst, kultivējot barotnē, kas satur 10 fibrinolītiski aktīvu cilvēka plazmu, kas satur trombocītu izcelsmes augšanas faktoru PDGF koncentrācijā no 155 līdz 342 pgml. Izgudrojums ļauj palielināt diploīdu cilvēka fibroblastu šūnu proliferācijas aktivitāti. 1 alga faili, 2 tabulas.