Ագլյուտինացման ռեակցիա (լատ. ագլյուտինացիա- սոսնձում) - դիակների (բակտերիաներ, կարմիր արյան բջիջներ և այլն) սոսնձում հակամարմիններով էլեկտրոլիտների առկայության դեպքում:

Ագլյուտինացման ռեակցիադրսևորվում է փաթիլների կամ նստվածքի տեսքով, որը բաղկացած է հակամարմիններով «սոսնձված» դիակներից (օրինակ՝ բակտերիաներից) (նկ. 7.37): Ագլյուտինացման ռեակցիան օգտագործվում է. որոշելու հիվանդից մեկուսացված հարուցիչը. հիվանդի արյան շիճուկում հակամարմինների որոշում; արյան խմբերի որոշում.

Բրինձ. 7.37 ա, բ. Ագլյուտինացման ռեակցիան հետIgM- հակամարմիններ (ա) ևIgG- հակամարմիններ (բ)

1. Հիվանդից մեկուսացված հարուցիչի որոշում ապակու վրա մոտավոր ագլյուտինացիոն ռեակցիա (նկ. 7.38): Հիվանդից մեկուսացված բակտերիաների կասեցումը ավելացվում է ագլյուտինացնող շիճուկի կաթիլին (1:20 նոսրացում): Առաջանում է ճկուն նստվածք։

Բրինձ. 7.38.

Ընդարձակ ագլյուտինացիոն ռեակցիա հիվանդից մեկուսացված պաթոգենով (նկ. 7.39): Հիվանդից մեկուսացված բակտերիաների կասեցումը ավելացվում է ագլյուտինացնող շիճուկի նոսրացումներին:

Բրինձ. 52

2. Հիվանդի արյան շիճուկում հակամարմինների որոշում
Մանրամասն ագլյուտինացիոն ռեակցիա հիվանդի արյան շիճուկով (նկ. 7.39): Diagnosticum-ը ավելացվում է հիվանդի շիճուկի նոսրացումներին:
- O-diagnosticum-ով (ջերմությունից սպանված բակտերիաներ, որոնք պահպանում են O-անտիգենը) ագլյուտինացիան տեղի է ունենում մանրահատիկ ագլյուտինացիայի տեսքով:
- Ագլյուտինացիան H-diagnosticum-ի հետ (մանրէներ, որոնք սպանվում են ֆորմալինի կողմից, պահպանելով դրոշակակիր H-հակագինը) մեծ է և տեղի է ունենում ավելի արագ:
3. Ագլյուտինացիոն ռեակցիա արյան խմբերի որոշման համարԱրյան խմբերը որոշելու համար ագլյուտինացիոն ռեակցիան օգտագործվում է ABO համակարգը հաստատելու համար (Աղյուսակ բ)՝ օգտագործելով էրիթրոցիտների ագլյուտինացիա իմունային շիճուկի հակամարմիններով՝ արյան A (I), B (III) անտիգենների դեմ: Վերահսկիչն է՝ շիճուկ, որը չի պարունակում հակամարմիններ, այսինքն. շիճուկ AB (IV) արյան խումբ; հակագեններ, որոնք պարունակվում են A (II), B (III) խմբերի կարմիր արյան բջիջներում: Բացասական վերահսկողությունը չի պարունակում անտիգեններ, այսինքն՝ օգտագործվում են O (I) խմբի էրիթրոցիտներ:

Աղյուսակ 7.6. ABO արյան խմբերի որոշում

Ռեակցիայի արդյունքները		Խումբ
		պատկանող
		հետազոտվել է արյուն
կարմիր արյան բջիջների հետ	շիճուկ (պլազմա)
ստանդարտ	ստանդարտով
շիճուկներ

Ագլյուտինացիոն ռեակցիան (RA) միկրոբների կամ այլ բջիջների կպչումն ու նստեցումն է հակամարմինների ազդեցության տակ էլեկտրոլիտի առկայության դեպքում: Ստացված նստվածքը կոչվում է ագլյուտինատ։

RA օգտագործվում է.

1. Հիվանդի արյան շիճուկում հակամարմիններ հայտնաբերելու համար (սերոախտորոշում):

2. Որոշել հիվանդից մեկուսացված ախտածին միկրոօրգանիզմների մաքուր մշակույթի տեսակը և սերովարը (սերոտիպավորում):

Ագլյուտինացիոն ռեակցիան օգտագործվում է հիվանդների արյան շիճուկում հակամարմինները որոշելու համար, օրինակ՝ տիֆով և պարատիֆով (Վիդալ ռեակցիա), բրուցելյոզով (Ռայթի ռեակցիա, Հեդլսոնի ռեակցիա), տուլարեմիա, լեպտոսպիրոզ և այլն։ վարակիչ հիվանդություններ, ինչպես նաև որոշել հիվանդից մեկուսացված հարուցիչը ( աղիքային վարակներ, կապույտ հազ և այլն): ՌԱ-ն օգտագործվում է արյան խմբերը, Rh գործոնը և այլն որոշելու համար։

Ռեակցիան պահանջում է հետևյալ բաղադրիչները.

1. Հակագենը (ագլյուտինոգեն) պետք է լինի կորպուսկուլյար, այսինքն՝ կենդանի կամ սպանված միկրոօրգանիզմների (ախտորոշիչ մ), էրիթրոցիտների կամ այլ բջիջների կասեցում է։ Որպես կանոն, օգտագործվում է ագարի թեքությունների վրա աճեցված միկրոօրգանիզմների ամենօրյա մշակույթ: Մշակույթը լվանում են 3-4 մլ իզոտոնիկ լուծույթով, տեղափոխում ստերիլ խողովակ և որոշվում է խտությունը։ Կախոցը պետք է լինի միատարր և պարունակի մինչև 3 միլիարդ մանրէաբանական բջիջ 1 մլ-ում: Սպանված մանրէների կասեցման օգտագործումը՝ դիագնոստիկա, հեշտացնում է աշխատանքը (պատրաստված է արտադրության մեջ):

2. Հակամարմիններ (ագլյուտինիններ) հայտնաբերվում են հիվանդի շիճուկում (սերոախտորոշման ժամանակ) կամ ագլյուտինացվող շիճուկում (սերոտիպավորման ժամանակ): Ագլյուտինացնող շիճուկները ձեռք են բերվում նապաստակներին սպանված բակտերիաներով պատվաստելով:

Aglutinating titerշիճուկը կոչվում է դրա ամենաբարձր նոսրացում, որի ժամանակ այն փոխազդում է համապատասխան հակագենի հետ որոշակի փորձարարական պայմաններում:

Ագլյուտինացնող շիճուկները կարող են լինել բնիկ (ոչ ներծծվող) և ներծծվող: Փոքր նոսրացումներով բնածին շիճուկները փոխազդում են ոչ միայն այն միկրոօրգանիզմների տեսակի հետ, որոնցով կենդանին իմունացվել է շիճուկ ստանալու համար, այլ նաև հարակից տեսակի միկրոօրգանիզմների հետ, քանի որ դրանք պարունակում են խմբային հակամարմիններ (հակամարմիններ միկրոօրգանիզմների նկատմամբ, որոնք ունեն ընդհանուր անտիգեններ): Մայրենի շիճուկները օգտագործվում են մանրակրկիտ ագլյուտինացիոն ռեակցիայի համար (սերոախտորոշման համար), որը հաշվի է առնում ոչ միայն ռեակցիայի առկայությունը, այլև հակամարմինների տիտրի բարձրացման դինամիկան։

Եթե ​​խմբային հակամարմինները դուրս են բերվում (ներծծվում) հայրենի շիճուկից՝ փոխազդեցությամբ հարակից բակտերիաների հետ, որոնք ունեն խմբային անտիգեններ, ստացվում են կլանված շիճուկներ: Ադսորբացված շիճուկները կարող են լինել մոնոռեցեպտորային (կամ տիպային), որոնք պարունակում են հակամարմիններ միայն մեկ անտիգենային ընկալիչի նկատմամբ, որը բաղկացած է մի քանի ներծծվող կամ ոչ կլանված շիճուկներից: Adsorbed շիճուկները օգտագործվում են ապակու ագլյուտինացիայի ռեակցիայի համար:

Երբ կենդանիներին իմունացվում են շարժական բակտերիաներով H- հակագենով, ստացվում են H-հակամարմիններ պարունակող H-ագլյուտինացնող շիճուկներ (օրինակ՝ Salmonella monoreceptor H-ագլյուտինացնող շիճուկ): O-անտիգենով իմունիզացիայի միջոցով ստացվում են O-հակամարմիններ պարունակող O-ագլյուտինացնող շիճուկներ (օրինակ՝ Salmonella խմբի ներծծված O-ագլյուտինացնող շիճուկ, հակախոլերային O-ագլյուտինացնող շիճուկ): H- և O-հակիգեններով իմունիզացիայի միջոցով ստացվում են շիճուկներ H- և O- հակամարմիններով:

Ավելին, O-ագլյուտինինները արտադրում են մանրահատիկ ագլյուտինատ, իսկ H-ագլյուտինինները արտադրում են կոպիտ հատիկավոր նստվածք:

3. Էլեկտրոլիտ - իզոտոնիկ NaCl լուծույթ (0,9% նատրիումի քլորիդի լուծույթ պատրաստված թորած ջրի մեջ):

Ագլյուտինացման ռեակցիան իրականացնելու երկու հիմնական մեթոդ կա՝ ռեակցիա ապակու վրա (երբեմն կոչվում է ցուցիչ կամ թիթեղային ռեակցիա) և մանրամասն ռեակցիա (փորձանոթներում):

Ապակու վրա ագլյուտինացիոն ռեակցիայի ստեղծում: Շիճուկի երկու կաթիլ և նատրիումի քլորիդի իզոտոնիկ լուծույթի մեկ կաթիլ քսվում են յուղազերծ ապակե սլայդի վրա: Ախտորոշիչ ագլյուտինացնող շիճուկն ընդունվում է մեկ նոսրացումով, որը, կախված իր տիտրից, կազմում է 1:10, 1:25, 1:50 կամ 1:100: Ուսումնասիրվող միկրոօրգանիզմի մշակույթը ավելացվում է մեկ կաթիլ շիճուկի և մեկ կաթիլ իզոտոնիկ լուծույթի մեջ՝ օգտագործելով օղակ և մանրակրկիտ խառնվում: Նատրիումի քլորիդի մի կաթիլը միկրոօրգանիզմների հետ հակագենի հսկողություն է, շիճուկի կաթիլն առանց միկրոօրգանիզմների՝ շիճուկի հսկողություն: Դուք չեք կարող կուլտուրան փոխանցել շիճուկով կաթիլից դեպի NaCl կաթիլ: Ռեակցիան տեղի է ունենում սենյակային ջերմաստիճանում 1-3 րոպե։ Եթե ​​շիճուկի հսկողությունը մնում է պարզ, անտիգենի հսկողության մեջ նկատվում է միատեսակ պղտորություն, և կաթիլում, որտեղ մշակույթը խառնվում է շիճուկին, հայտնվում են ագլյուտինատային փաթիլներ, ապա արդյունքը համարվում է դրական: Եթե ​​կաթիլում միատեսակ պղտորություն կա շիճուկով և անտիգենով, ապա դա բացասական արդյունք է: Մուգ ֆոնի վրա ռեակցիան ավելի հստակ երևում է։

Շիճուկ

1. ՀԱԿԱԾԻՆ հսկողություն

2. շիճուկի հսկողություն

Իմունային ռեակցիաներ. Իմունային ռեակցիաների կիրառումը ախտորոշման մեջ վարակիչ հիվանդություններ.

ՊԼԱՆ՝

Իմունային ռեակցիաների տեսակները.

Սերոլոգիական ռեակցիաների անցկացման պայմանները.

Շիճուկի պահանջները.

Դրական և բացասական արդյունքների հայեցակարգը.

ՀԻՄՆԱԿԱՆ ԲՈՎԱՆԴԱԿՈՒԹՅՈՒՆ.

Իմունային ռեակցիաների տեսակները.

Իմունաբանական ռեակցիա – Սա հակագենի փոխազդեցությունն է հակամարմինի հետ, որը որոշվում է հակամարմինների (պարատոպի) ակտիվ կենտրոնների հատուկ փոխազդեցությամբ անտիգենների էպիտոպների հետ։

Իմունոլոգիական ռեակցիաների ընդհանուր դասակարգում.

սերոլոգիական ռեակցիաներ - ռեակցիաներ անտիգենների (Ag) և հակամարմինների (Ig) միջև

արհեստական ​​պայմաններում ;

բջջային ռեակցիաներ իմունային կոմպետենտ բջիջների մասնակցությամբ;

ալերգիայի թեստեր - գերզգայունության հայտնաբերում.

Շճաբանական ռեակցիաներ. 1) սահմանում, 2) փուլեր, 3) նպատակներ, 4) ընդհանուր դասակարգում:

1) սահմանում

Շճաբանական մեթոդներհետազոտություն (լատիներեն Serum - շիճուկ և logos - ուսուցում) օգտագործելով հակագեն-հակամարմին ռեակցիա:

2) փուլեր

Փոխազդեցության 2 փուլ.

Ի. Կոնկրետ (տեսանելի) – առաջանում է արագ, հակամարմինները միանում են իրենց համապատասխան անտիգեններին: Այս փուլում փոխազդում են անտիգենների (AG) որոշիչ խմբերը և հակամարմինների ակտիվ կենտրոնները (AT):

AG + AT համալիրի ձևավորման մեջ ներգրավված ուժերն են.

կախազարդ;

վան դեր Վալս

Ջրածնային կապեր.

Ոչ ոք տեսանելի փոփոխություններոչ այս փուլում: Էլեկտրոնային մանրադիտակը ցույց է տալիս AG+AT համալիրը ցանցի տեսքով։

II. Ոչ կոնկրետ – առաջանում է դանդաղ, արդյունքում առաջացած հակագեն-հակամարմին համալիրը արձագանքում է լրացուցիչ ոչ սպեցիֆիկ բնապահպանական գործոնի հետ, որի դեպքում ռեակցիան տեղի է ունենում, և դա տեսանելի է աչքի համար՝ սոսնձում, լուծարում, տեղումների փաթիլներ և այլն: Էլեկտրոլիտի առկայության դեպքում լիցքը նվազում է: Լուծելիությունը նվազում է, առաջանում են տեսանելի կոնգլոմերատներ՝ նստվածքային (ագլյուտինատիվ)։

3) Նպատակներ դնելը :

ա) բացահայտելու հակագենը (հակամարմինը հայտնի ախտորոշիչ շիճուկ).

• պաթոլոգիական նյութում (արագ ախտորոշում);

  մաքուր մշակույթում.

  1. սերոլոգիական նույնականացում (տեսակի նույնականացում);

     serotyping (serovar-ի որոշում) – շտամի որոշում;

բ) հայտնաբերելու հակամարմիններ (Ig) (անտիգենը հայտնի է-diagnosticum).

• ներկայություն (որակական ռեակցիաներ);

  քանակ (տիտրի ավելացում՝ «զույգացված շիճուկ» մեթոդ):

4) Ընդհանուր դասակարգում սերոլոգիական ռեակցիաներ :

ա) պարզ (2 բաղադրիչ՝ Ag+Ig).

ՀՀ ագլյուտինացիոն ռեակցիաներ (կորպուսուլյար անտիգենով);

PR տեղումների ռեակցիաներ (լուծվող անտիգենով);

բ) համալիր (3-բաղադրիչ՝ Ag+Ig+C);

գ) պիտակի օգտագործումը:

Ագլյուտինացիայի և տեղումների ռեակցիաների տարբերակներ

Ագլյուտինացման ռեակցիա :

Ագլյուտինացիոն ռեակցիան (ՀՀ) հակագենների (էրիթրոցիտներ, բակտերիաներ) կասեցման փոխազդեցության իմունային ռեակցիա է ֆիզիոլոգիական լուծույթում անտիգենների հետ:

Ագլյուտինացիայի ժամանակ AT մասնիկները կպչում են՝ առաջացնելով ճկուն նստվածք։

Ռեակցիա պասիվ հեմագլյուտինացիա(RPGA) ագլյուտինացիոն ռեակցիայի տեսակ է, որի ժամանակ օգտագործվում է էրիթրոցիտների ախտորոշման հակամարմին կամ հակագեն (Էրիտրոցիտներ՝ AT կամ AG ներծծված իրենց մակերեսին):

Այս ռեակցիայի մեջ կարմիր արյան բջիջները հանդես են գալիս որպես պասիվ կրիչներ:

RPGA-ի արդյունքների գնահատումն իրականացվում է հետևյալ կերպ.

- ժամը դրական արձագանք Պասիվ սոսնձված արյան կարմիր բջիջները ծածկում են U- կամ V- ձևավորված անցքի հատակը հարթ շերտով, փորված եզրերով («հովանոց»);

- ժամը բացասական արձագանք (ագլյուտինացիայի բացակայության դեպքում) արյան կարմիր բջիջները կուտակվում են անցքի կենտրոնական խորքում՝ ձևավորելով կոմպակտ «կոճակ»՝ կտրուկ ընդգծված եզրերով։

Հեմագլյուտինացիայի արգելակման թեստը (HAI) օգտագործվում է վիրուսային վարակների ախտորոշման համար: Որոշ վիրուսներ իրենց մակերեսին պարունակում են մի սպիտակուց, որը կոչվում է հեագգլուտինին, որը սոսնձում է արյան կարմիր բջիջները: Հատուկ հակավիրուսային հակամարմինների ավելացումը արգելափակում է վիրուսային հեագգլուտինինը - չկա հեմագլյուտինացիա:

Անուղղակի հեմագլյուտինացման ռեակցիան (IRHA) կամ Coombs ռեակցիան օգտագործվում է թերի հակամարմինները որոշելու համար։ Հակագլոբուլինի շիճուկի ավելացումը (AT դեմ մարդու Ig) ուժեղացնում է ռեակցիայի արդյունքները: RNGA-ն օգտագործվում է Rh գործոնը որոշելու համար:

Ագլուտինացման ռեակցիա (RA) իրականացնելու համար անհրաժեշտ է երեք բաղադրիչ.

1) հակագեն (ագլյուտինոգեն) AG;

2) հակամարմին(ագլյուտինին) AT;

3) էլեկտրոլիտ (իզոտոնիկ նատրիումի քլորիդի լուծույթ):
Ag + AT + էլեկտրոլիտ = ագլյուտինատ

Ագլյուտինացիա (լատիներեն agglutinatio - սոսնձում) - դիակների (բակտերիաներ, կարմիր արյան բջիջներ և այլն) սոսնձում հակամարմինների կողմից էլեկտրոլիտների առկայության դեպքում՝ նատրիումի քլորիդ։

ՌՀ-ն դրսևորվում է փաթիլների կամ նստվածքի տեսքով, որը բաղկացած է հակամարմիններով «կպչված» դիակներից (օրինակ՝ բակտերիաներից, կարմիր արյան բջիջներից):

ՀՀ-ն օգտագործվում է հետևյալի համար.

Ուղղակի մանրէային ագլյուտինացիայի ռեակցիա (ՀՀ):

Այս ռեակցիայի ժամանակ հակամարմինները (ագլյուտինիններ) ուղղակիորեն սոսնձում են կորպուսուլյար անտիգենները (ագլյուտինոգեններ):

Նրանք սովորաբար ներկայացված են անակտիվացված միկրոօրգանիզմների կասեցմամբ (մանրէաբանական ագլյուտինացիայի ռեակցիա):

Միկրոօրգանիզմների տեսակը որոշելու համար օգտագործեքստանդարտ ախտորոշիչ ագլյուտինացիա շիճուկ (հայտնի Ա.Թ ).

Առավել տարածված են շերտավոր (մոտավոր) և ընդլայնված ՀՀ-ն։

Ապակու վրա դրված է RA թիթեղը։ Օգտագործեք այն որպես արագացված մեթոդհակամարմինների հայտնաբերում կամ միկրոօրգանիզմների նույնականացում:

Բաղադրիչներ:

1. ստանդարտ ախտորոշիչ ագլուտինացնող շիճուկներ (AT);

2. հիվանդից ուսումնասիրվող մաքուր մշակույթ;

3. աղի լուծույթ.

Ուսումնասիրվող մաքուր մշակույթում անտիգենները (AG) ունեն մասնիկների (մանրէաբանական բջիջներ, էրիթրոցիտներ և այլ կորպուսուլյար անտիգեններ) ձև, որոնք սոսնձված են հակամարմիններով և նստվածք են ստանում:

Օրինակ:

Բեմականացում ցուցիչ ագլյուտինացիոն ռեակցիաներ (ՀՀ ) ապակու վրա կոլիֆորմ բակտերիաների հայտնաբերման նպատակով:

Կաթիլներ քսեք ապակե սլայդի վրա.

1 դիզենտերիա ;
2 -րդ կաթիլ. - ագլյուտինացնող շիճուկ պաթոգենների դեմորովայնային տիֆ ;

(1-2 ախտորոշիչ շիճուկ)
3 -րդ կաթիլ. - աղի լուծույթ (հսկիչ):
Յուրաքանչյուր կաթիլին ավելացրեք փորձարկված մաքուր բակտերիալ մշակույթը: Խառնել։

Արդյունք : դրական - ագլյուտինատային փաթիլների առկայություն,
բացասական - ագլյուտինատային փաթիլների բացակայություն
Եզրակացություն:Ուսումնասիրված բակտերիաները որովայնային տիֆի հարուցիչներ են (որոշվել են անտիգենները):

Հիվանդի շիճուկում AT-ն որոշելու համար (սերոլոգիական ախտորոշում), ստանդարտ մանրէաբանականախտորոշում , պարունակող կասեցումհայտնի մանրէները կամ դրանց անտիգեններըԱ.Գ .

ABO արյան խմբերի որոշում (հեմագլյուտինացման ռեակցիա (HRA)) – արյան կարմիր բջիջների ագլյուտինացիա:

Ռեակցիայի բաղադրիչներ.

1. AG (արյան կարմիր բջիջներ) արյան ստուգում

2. AT (էրիթրոտեստներ - զոլիկլոններ)

Զոլիկլոնների հավաքածու.

Coliclone հակա-A ռեագենտ (վարդագույն)

Կոլիկլոնե հակա-Բ ռեագենտ (կապույտ)

Reagent Tsoliklon anti-AV (անգույն)

3. էլեկտրոլիտ (աղի լուծույթ)

Որոշման տեխնիկա.

1 .

Պլանշետի հորերի վրա (վերահսկման համար) մեկ կաթիլ (0,1 մլ) հակա-Ա, հակա-Բ և հակա-ԱԲ զոլիկոն է կիրառվում:

2.

Ռեագենտի յուրաքանչյուր կաթիլի կողքին դրվում է հետազոտվող արյան փոքր (0,05-0,01 մլ) կաթիլ:

Այնուհետև մեկ կաթիլ զոլիկլոն խառնվում է արյան մի կաթիլով, օգտագործելով մաքուր ապակե ձող:

3.

Ագլյուտինացիոն ռեակցիան զարգանում է առաջին 3-5 վայրկյանների ընթացքում ափսեի մեղմ ճոճմամբ։

Ռեակցիայի արդյունքները հաշվի են առնվում կաթիլները խառնելուց 2,5 - 3 րոպե անց: Ձախից աջ հորերում հակա-Ա, հակա-Բ, հակա-ԱԲ են:

Դրական արդյունք է հատիկավոր նստվածքի առաջացումը (ագլյուտինատ):

դրական ՀՀ (+)

Բացասական - առանց նստվածքի:

բացասական ՀՀ (-)

4.

Արդյունքների վերլուծություն.

Օ(Ի) α β – ագլյուտինացիա չկա

Ա(II) β – ագլյուտինացիա հակա-Ա-ով

Բ(III) α – ագլյուտինացիա հակա-Բ-ով

ԱԲ(IV)O – ագլյուտինացիա հակա-Ա-ով, հակա-Բ-ով

Ագլյուտինացիայի սխեմատիկ ներկայացում:

Ag անտիգեններ էրիթրոցիտների վրա (հայտնաբերելի) + հակամարմիններAT(զոլիկոն) ախտորոշիչ շիճուկ

Պլանշետներում ագլյուտինացիայի հաշվառում

Տեղումների արձագանքը.

Տեղումների ռեակցիան ֆիզիոլոգիական լուծույթում անտիգենի հետ լուծելի վիճակում գտնվող հակագենի փոխազդեցության իմունային ռեակցիան է:

Տեղումների ժամանակ առաջանում է մակրոմոլեկուլային իմունային համալիր, որն արտահայտվում է թափանցիկ կոլոիդային լուծույթի անցումով անթափանց կախոցի կամ նստվածքի։

Երկու ռեակտիվների քանակը պետք է լինի խիստ սահմանված համամասնություններով, քանի որ դրանցից մեկի ավելցուկը նվազեցնում է արդյունքը:

Գոյություն ունենալ տարբեր ուղիներտեղումների ռեակցիայի փուլավորում.

1. Օղակաձեւ տեղումների ռեակցիան իրականացվում է փոքր տրամագծով տեղումների խողովակներում։ Իմունային շիճուկը ավելացվում է փորձանոթին և լուծվող հակագենը խնամքով շերտավորվում է: AG և AT խառնվում են մոլեկուլների ջերմային շարժման շնորհիվ և փոխազդում են։ ժամը դրական արդյունքերկու լուծույթների սահմանին գոյանում է անթափանց նստվածքի օղակ:

2. Ouchterlony կրկնակի իմունոդիֆուզիոն ռեակցիան իրականացվում է ագար գելի մեջ, որի հորերի մեջ ավելացվում է կամ AG լուծույթ կամ AT լուծույթ՝ ըստ սխեմայի: AG-ն և AT-ը ցրվում են գելի մեջ միմյանց ուղղությամբ և, եթե ռեակցիան դրական է, ձևավորում են իմունային համալիրներ, որոնք տեսանելի են տեղումների գծերի տեսքով:

Տեղումների ռեակցիա -սա ձևավորում էև լուծվող մոլեկուլային հակագեն-հակամարմին համալիրի նստեցումը որպես ամպ, որը կոչվում է նստվածք: Այն ձևավորվում է անտիգենների և հակամարմինների համարժեք քանակությամբ խառնելով։

ՀՀ բաղադրիչներ.

precipitating շիճուկ (հայտնի AT-precipitin);

թեստային շիճուկ (անհայտ precipitinogen հակագեն);

ֆիզիկական Լուծում.

Տեղումների ռեակցիան իրականացվում է կա՛մ հատուկ նեղ փորձանոթներում (օղակային տեղումների ռեակցիա), կա՛մ Պետրի ափսեներում՝ գելերում, սննդարար միջավայրերում և այլն։

Օղակաձեւ տեղումների ռեակցիա

Ռեակցիայի արդյունքների հայտարարություն և գրանցումօղակաձև տեղումներպաթոգեն հայտնաբերման համար սիբիրախտ(Ասկոլիի ռեակցիա):

Բեմականացում .

1. Ուսումնասիրվող նյութը (կաշի, բուրդ, ֆետրե, խոզանակ, կտոր, միս, հող, կենդանիների կղանք և այլն) եփում են աղի լուծույթում 5-45 րոպե։ իզոտոնիկ էքստրակտ (քաղվածք) ստանալու համար։ Զտված է:

2. Սիբիրախտի դեմ առաջացող շիճուկը լցվում է փորձանոթի մեջ:

3. Փորձարկման նյութը (քաղվածքը) զգուշորեն շերտավորեք դրա վրա:

Հաշվապահություն .

Առաջիկա 10 րոպեների ընթացքում։ Դրական դեպքերում շիճուկի և էքստրակտի միջերեսում հայտնվում է պղտորման օղակ (օղակային տեղումներ): Ասկոլիի ռեակցիան շատ զգայուն է և կոնկրետ

Նրա օգնությամբ հնարավոր է արագ բացահայտել սիբիրախտով վարակված նյութերը։

Տեղումների ռեակցիա ագարում

Արդյունքների հայտարարություն և գրանցումտեղումների ռեակցիաները ագարումորոշել կորինեբակտերիաների (դիֆթերիայի հարուցիչ) թունավորությունը

Բեմականացում

Ֆոսֆատ պեպտոն ագարի վրա դրվում է Պետրի ամանի մեջ:

1. Տեղադրել ստերիլ ֆիլտրի թղթի շերտ, որը խոնավացել է բաժակի մեջտեղի երկայնքով:հակատոքսիկ շիճուկ.

2. Չորացնելուց հետո շերտի եզրից 1 սմ հեռավորության վրա ցանում են 10 մմ տրամագծով թիթեղները։ընտրված մշակաբույսեր.

Մեկ բաժակում կարելի է ցանել 3-ից 10 բերք, որոնցից մեկըվերահսկողություն, պետք է հայտնի լինիթունավոր.

Մշակաբույսերը տեղադրվում են թերմոստատի մեջ:

Հաշվապահություն

Վերլուծությունը կատարվում է 24-48-72 ժամ հետո։

Դրական արդյունք - (մշակույթթունավոր) - թղթի շերտից որոշ հեռավորության վրա հայտնվում եննստվածքային գծեր, « սլաքային սլաքներ», որոնք հստակ տեսանելի են փոխանցվող լույսի ներքո։

Նկարը ցույց է տալիս տեղումների ռեակցիան ագարում՝ դիֆթերիայի բացիլների թունավորությունը որոշելու համար: Միջին կուլտուրաները չեն ձևավորել «սլաք-ջղոցներ», դրանք տոքսիկոգեն պաթոգեններ չեն:

Դիֆթերիայի հարուցիչի շտամները կարող են լինել թունավոր (արտադրող էկզոտոքսին) և ոչ թունավոր: Էկզոտոքսինի ձևավորումը կախված է էկզոտոքսինի ձևավորումը կոդավորող պրոֆագի բակտերիաներում թունավոր գենի առկայությունից:

Հիվանդության դեպքում դիֆթերիայի բոլոր հարուցիչները ստուգվում են թունավորության համար՝ դիֆթերիայի էկզոտոքսինի արտադրություն՝ օգտագործելով տեղումների ռեակցիան ագարում։

Բարդ սերոլոգիական ռեակցիաներ ( 3-բաղադրիչ՝ Ag+Ig+C):

Կոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիա (CFR):

Ռեակցիան իրականացվում է երկու փուլով.

Առաջին փուլում AT-ը փոխազդում է հակագենի և կոմպլեմենտի հետ, երկրորդ փուլում ավելացվում է ցուցիչ՝ հեմոլիտիկ համակարգ (էրիթրոցիտների և հակաէրիթրոցիտների շիճուկի խառնուրդ):

Եթե ​​արդյունքը դրական է, ապա առաջին փուլում հակամարմինները հակագենների հետ իմունային համալիր են կազմում, որը կապում է ռեակցիայի խառնուրդի լրացումը։

Այս դեպքում երկրորդ փուլում ավելացված հեմոլիտիկ համակարգի կարմիր արյան բջիջները չեն ոչնչացվում։

Հակառակ դեպքում, չկապված կոմպլեմենտը առաջացնում է ցուցիչի կարմիր արյան բջիջների լիզացիա:

Այն իրականացնելու համար անհրաժեշտ է հինգ բաղադրիչ՝ AG, AT և կոմպլեմենտ (առաջին համակարգ), ոչխարի էրիթրոցիտներ և հեմոլիտիկ շիճուկ (երկրորդ համակարգ) (նկ. 1):

Ռեակցիան տեղի է ունենում երկու փուլով (նկ. 3):

Առաջին փուլ - հակագենի և հակամարմինների փոխազդեցության ընթացքում պարտադիր մասնակցությունլրացնում.

Երկրորդ - ռեակցիայի արդյունքների նույնականացում ցուցիչ հեմոլիտիկ համակարգի միջոցով (ոչխարի կարմիր արյան բջիջներ և հեմոլիտիկ շիճուկ): Արյան կարմիր բջիջների ոչնչացումը հեմոլիտիկ շիճուկի միջոցով տեղի է ունենում միայն այն դեպքում, եթե լրացնում են հեմոլիտիկ համակարգին: Եթե ​​կոմպլեմենտը նախկինում ներծծվել է հակագեն-հակամարմին համալիրի վրա, ապա էրիթրոցիտների հեմոլիզ չի առաջանում (նկ.):

Փորձի արդյունք գնահատվել է (նկ. 2), նշելով հեմոլիզի առկայությունը կամ բացակայությունը բոլոր խողովակներում: Արձագանքը համարվում է դրական, երբ հեմոլիզն ամբողջությամբ հետաձգվում է, երբ փորձանոթի հեղուկը անգույն է, և արյան կարմիր բջիջները նստում են հատակին, բացասական՝ երբ կարմիր արյան բջիջները լիովին լուծվում են, երբ հեղուկը ինտենսիվ գունավորվում է («լաք» արյուն )

Հեմոլիզի հետաձգման աստիճանը գնահատվում է կախված հեղուկի գույնի ինտենսիվությունից և ներքևում գտնվող կարմիր արյան բջիջների նստվածքի չափից (++++, +++, ++, +):

Բրինձ. 4. ՌՀԿ-ի հայտարարություն և արդյունք.

Եզրակացություն:Փորձարկման շիճուկում հակամարմիններ են հայտնաբերվել:

RSK-ն թույլ է տալիս հայտնաբերել հակամարմիններ վիրուսի նույն սերոտիպի ցանկացած շտամի:

Ախտորոշիչ արժեքԱյն ունի:

հակամարմինների տիտրի քառապատիկ աճ զույգ շիճուկներում (գրիպի համաճարակի ժամանակ);

բնորոշ կլինիկական պատկերով հիվանդների արյան շիճուկի կրկնակի աճ:

Ռեակցիաներ՝ օգտագործելով պիտակ :

Այս մեթոդները շատ զգայուն են: Որպես անտիգենների կամ հակամարմինների պիտակներ օգտագործվում են ներկանյութեր, ռադիոակտիվ իզոտոպներ, ֆերմենտներ և այլն։

RIF - իմունֆլյորեսցենտային ռեակցիա

Իմունֆլյորեսցենտային ռեակցիան հիմնված է հակագեն-հակամարմին համալիրի թեթև ցուցման վրա

Կապակցված իմունոսորբենտային վերլուծություն:

Ժամանակակից լաբորատոր թեստ, որը որոնում է արյան մեջ հատուկ հակամարմիններ կամ կոնկրետ հիվանդությունների անտիգեններ՝ բացահայտելու ոչ միայն էթիոլոգիան, այլև հիվանդության փուլը:

ELISA-ի արդյունքները կարող են տրվել որակապես և քանակապես:

Ներկայումս ELISA-ն օգտագործվում է հետևյալ իրավիճակներում.

1) ցանկացած վարակիչ հիվանդության հատուկ հակամարմինների որոնում.

2) ցանկացած հիվանդությունների (վարակիչ, վեներոլոգիական) անտիգենների որոնում.

3) հետազոտություն հորմոնալ կարգավիճակհիվանդ;

4) ուռուցքային մարկերների հետազոտություն.

5) հետազոտություն աուտոիմուն հիվանդությունների առկայության համար.

Նկարում, պինդ փուլային ELISA - հայտնի անտիգեններ (ձախ կողմում) ներծծված ափսեի ջրհորի վրա, (աջ կողմում) ափսեի հորերի վրա հայտնի անտիգեններ

ELISA մեթոդի առավելությունները.

1) ELISA մեթոդի բարձր սպեցիֆիկություն և զգայունություն (ավելի քան 90%).

2) հիվանդությունը որոշելու և գործընթացի դինամիկան հետևելու, այսինքն՝ տարբեր ժամանակաշրջաններում հակամարմինների քանակը համեմատելու ունակություն.

3) ELISA ախտորոշման առկայություն ցանկացած բժշկական հաստատությունում.

Հարաբերական թերություն. իմունային պատասխանի (հակամարմինների) հայտնաբերում, բայց ոչ բուն պաթոգեն, որը կապված է պիտակ ֆերմենտի հետ:

ELISA թեստ (ընդհանուր մեխանիզմ).

Ֆերմենտային իմունային հետազոտության հիմքը հակագենի և հակամարմինների իմունային ռեակցիան է իմունային համալիրի ձևավորմամբ՝ հակագեն-հակամարմին, որը հանգեցնում է հակամարմինների մակերեսին հատուկ նշանների ֆերմենտային ակտիվության փոփոխության:

Ռեակցիայի բաղադրիչներ.

1. AG(AT) հայտնի - պլանշետի ջրհորի վրա։

2. ԱՏ (ԱԳ) ուսումնասիրվող.

3. AT ֆերմենտով, հատուկ AT(AG)-AG(AT) համալիրին

4. քրոմոգեն սուբստրատ, որը փոխազդում է ֆերմենտի հետ

5. կանգառի լուծում

ELISA-ի հիմնական փուլերը

1. Թիթեղի հորերի մակերեսին կա կոնկրետ պաթոգենի մաքրված հակագեն: Նրանք ավելացնում են կենսաբանական նյութհիվանդի, այս հակագենի և ցանկալի հակամարմինի (իմունոգլոբուլինի) միջև առաջանում է հատուկ ռեակցիա: Կազմվում է համալիր.

2. Ավելացվում է կոնյուգանտ՝ AT ֆերմենտի հետ: Կոնյուգանտը հատուկ է առաջին փուլի AT-AG համալիրին։ Ֆերմենտը ակտիվանում է։

3. Սուբստրատը ավելացվում է, և ակտիվ ֆերմենտը փոխազդում է դրա հետ՝ փոխելով լուծույթի անգույն գույնը։

4. Ֆերմենտ-սուբստրատ փոխազդեցությունը դադարեցնելու համար ավելացվում է կանգային լուծույթ:

Հաշվապահություն.

Դրական արդյունք - փոփոխությունգույները, նկարում` դեղին:

Իմունոքրոմատոգրաֆիկ վերլուծություն

Իմունոքրոմատոգրաֆիական վերլուծության մեթոդը (ICA, արագ թեստեր) բարձրորակ նախնական զննման մեթոդ է, որը թույլ է տալիս արագ, մի քանի րոպեի ընթացքում, վերլուծություն կատարել ցանկացած պայմաններում, ներառյալ: «դաշտ».

ICA-ի առավելությունները ներառում են.

Արագություն և օգտագործման հեշտություն;

Նմուշի փոքր ծավալներ, նմուշի պատրաստման բացակայություն;

Էժանություն արտադրողի և սպառողի համար;

Մեծ ծավալով թեստեր պատրաստելու հնարավորություն;

Արդյունքի ընթերցման և մեկնաբանման հեշտություն;

Բարձր զգայունություն և վերարտադրելիություն;

Քանակական որոշման հնարավորություն;

համակարգչի հետ համատեղելի շարժական ընթերցիչներ օգտագործելու հնարավորություն;

Բազմավերլուծության հնարավորություն։

Բաղադրիչներ (կիրառվում է թեստային շերտի վրա).

1. Կոլոիդային ոսկով պիտակավորված կոնյուգատը հատուկ է հայտնաբերված անտիգենին:

2. AT փորձարկման գիծ – հատուկ AT-AG համալիրին

3. Հսկիչ գծի աբսերը հատուկ են կոնյուգատին:

ICA կարգավորում.

1. Կիրառեք նմուշը շերտի նշանակված մեկնարկային տարածքում:

2. Արդյունքի ստացում փորձարկման և հսկիչ գծերի տեղում գունավոր գծերի տեսքի տեսքով:

Հաշվապահություն

Դրական - երբ փորձարկման գիծը ներկված է:

Բացասական - եթե փորձարկման գծի ներկում չկա:

Անվավեր – եթե կառավարման գիծը ներկված չէ:

ICA-ի ընդհանուր մեխանիզմը.

1. Նմուշը ներմուծվում է մեկնարկային դաշտում (նմուշի բարձիկ) և կապված է կոնյուգատի հետ (գունավոր պիտակով հատուկ մարմին), որոնք գտնվում են զուգակցված բարձիկի վրա: Արդյունքում գոյանում է գունավոր համալիր։

2. Ստացված գունավոր իմունային համալիրը շարժվում է մազանոթային ուժերի ազդեցությամբ նիտրոցելյուլոզային թաղանթի երկայնքովԵվ փոխազդում էAT թեստային գծով:Արդյունքը մեկ գունավոր վարդագույն-կարմիր շերտագիծ է:

3. AT (կոնյուգատ) չի կապված փորձարկված ժապավենի վրաառաջ է շարժվում և հասնում կառավարման գիծ, ​​շփվում է հսկիչ գծի AT-ի հետ:Արդյունքում հայտնվում է երկրորդ գունավոր շերտագիծը։Եթե ​​վերլուծությունը ճիշտ է կատարվում, ապա պետք է միշտ հայտնվի Control գիծը՝ անկախ կենսաբանական հեղուկի նմուշում փորձարկման հակագենի (հակամարմին) առկայությունից:

2. Սերոլոգիական ռեակցիաների անցկացման պայմանները.

1. ներկայությունը հոմոլոգ - համապատասխան միմյանց ՀԱԿԱԾԻՆ եւ հակամարմին.

2. Մաքուր, չոր սպասք։

3. Դեղերի որոշակի հարաբերակցություն (առավել հաճախ հավասար):

4. Էլեկտրոլիտի (իզոտոնիկ NaCl լուծույթ) պարտադիր առկայությունը:

5. pH չեզոք կամ մոտ մի փոքր ալկալային:

6. Ջերմաստիճանը +37°C կամ սենյակային ջերմաստիճանը (պարտադիր դրական):

7. Իրականացվում է հակագենի հսկողություն և շիճուկի (հակամարմինների) հսկողություն։

3 Շիճուկի պահանջները

Շիճուկը պետք է լինի ամբողջովին թափանցիկ՝ առանց բջիջների խառնուրդի։

Սովորաբար այն ստանում են հիվանդության 2-րդ շաբաթում, երբ արդեն առկա են հակամարմիններ։

Արյունը վերցվում է 3-5 մլ չափով դատարկ ստամոքսին կամ ուտելուց 6 ժամ հետո։

Շիճուկ ստանալու համար արյունը թողնում են 1 ժամ սենյակային ջերմաստիճանում կամ ցենտրիֆուգում։ Շիճուկը շատ զգույշ ներծծվում է, որպեսզի չգրավի ձևավորված տարրերը։

Իմունային շիճուկները ստացվում են մարդկանց կամ կենդանիների (սովորաբար նապաստակների և ձիերի) արյունից, որոնք իմունացվում են որոշակի սխեմայով համապատասխան հակագենով (պատվաստանյութով): Շիճուկները սովորաբար պատրաստվում են արտադրության մեջ:

4. Դրական և բացասական արդյունքների հայեցակարգը:

ՀՀ.

Դրական արձագանքով, պասիվ սոսնձված կարմիր արյան բջիջները ծածկում են անցքի հատակը հարթ շերտով փորված եզրերով («հովանոց»); ագլյուտինացիայի բացակայության դեպքում արյան կարմիր բջիջները կուտակվում են անցքի կենտրոնական խորքում՝ ձևավորելով կոմպակտ «կոճակ»՝ կտրուկ արտահայտված եզրերով (տես վերևի նկարները):

RP.

Եթե ​​արդյունքը դրական է, ապա երկու լուծույթների միջերեսում ձևավորվում է կաթնագույն օղակ (տե՛ս վերևի նկարները):

ԷԼԻԶԱ.

Լուծման գույնի փոփոխությունը տեղի է ունենում դրական արձագանքով:

RSK.

Հետաձգված հեմոլիզ - արձագանքը դրական է; եթե կոմպլեմենտն անվճար է, նկատվում է հեմոլիզ՝ ռեակցիան բացասական է(տես վերևի նկարները):

Wasserman ռեակցիայի արդյունքները.

ա - հեմոլիզի ամբողջական ուշացում (+ + ++);

բ - հեմոլիզի ընդգծված ուշացում (+ ++);

գ - հեմոլիզի մասնակի ուշացում (++);

դ - հեմոլիզի փոքր ուշացում (+);

դ - ամբողջական հեմոլիզ (-):

Արձագանքը դրական է հեմոլիզի մասնակի, ընդգծված և ամբողջական ուշացումով, որը որոշվում է խողովակների պարունակության ներկման աստիճանով բաց վարդագույնից մինչև վառ կարմիր, այնուհետև ձևավորվում է կարմիր նստվածք:

Տնային աշխատանք:

1. Ուսումնասիրեք նյութը

Տեսանյութի վրա 3 նշում կատարեք

մանրէաբանության մեջ

«Ագլյուտինացիոն ռեակցիա և դրա տեսակները (ՀՀ)»

Պլան:

1. Ներածություն………………………………………………………………………………………..3

2. ՀՀ ապակու վրա………………………………………………………………………………….4

3. Փորձանոթ ՀՀ………………………………………………………………………………………….5

4. Օգտագործված գրականություն……………………………………………………………………..7

1. Ներածություն։

Մանրէաբանական հակագենի և հակամարմինների փոխազդեցությունը խիստ սպեցիֆիկ է և ուղղված է կենդանու օրգանիզմում՝ չեզոքացնել հարուցիչը և նրա տոքսինները: Անտիգենի և հակամարմինների փոխազդեցությունը in vitro, որոշակի պայմաններում, ուղեկցվում է տեսանելի երևույթներով (ագլյուտինացիա, տեղումներ, իմունային լիզ), ինչը թույլ է տալիս գործնական նպատակներով օգտագործել AG-AT ռեակցիաները, որոնք կոչվում են սերոլոգիական (լատիներեն շիճուկից): Կենսագործարաններում արտադրվում են հայտնի հատուկ բնույթի անտիգեններ և իմունային շիճուկներ (հակամարմիններ) (ախտորոշիչ): Օգտագործելով նման շիճուկներ շճաբանական ռեակցիաներում՝ հնարավոր է բացահայտել անհայտ միկրոօրգանիզմը կամ, օգտագործելով հայտնի անտիգեն, օրգանիզմում հայտնաբերել հակամարմիններ, որոնք սինթեզվում են ի պատասխան պաթոգենի ներմուծման, և այդպիսով կատարել ախտորոշում (սերոլոգիական ախտորոշում): Բացի այդ, սերոլոգիական ռեակցիաները կարող են օգտագործվել պատվաստումից կամ վարակիչ հիվանդությունից հետո իմունային պատասխանի ինտենսիվությունը գնահատելու համար:

Ագլյուտինացիոն ռեակցիաները, ինչպիսիք են անուղղակի ագլյուտինացիան և Coombs-ը, հիմնված են կորպուսուլյար անտիգենների in vitro փոխազդեցության վրա հակամարմինների և արդյունքում առաջացող բարդույթների նստվածքի ունակության վրա: Որպես կորպուսուլյար անտիգեններ օգտագործվում են մանրէային բջիջները կամ լուծվող անտիգենները, որոնք արդյունահանվում են միկրոօրգանիզմներից և ներծծվում կրող մարմինների վրա՝ կարմիր արյան բջիջները, լատեքսի մասնիկները և այլն:

Կորպուսուլյար անտիգենների հակագենային որոշիչները հատուկ փոխազդում են հոմոլոգ հակամարմինների հետ (ռեակցիայի հատուկ, անտեսանելի փուլ), այնուհետև հակագեն-հակամարմին համալիրները ձևավորում են անզեն աչքով տեսանելի խոշոր կոնգլոմերատներ, որոնք նստում են՝ ագլյուտինատ (ռեակցիայի ոչ սպեցիֆիկ, տեսանելի փուլ): ) Դրոշակազերծ մանրէների (Brucellae) ձևերը արտադրում են հատիկավոր ագլյուտինանտներ, մինչդեռ դրոշակավոր ձևերը (Escherichia, Salmonella) արտադրում են խոշոր բամբակյա ագլյուտինանտներ, որոնք նստում են փորձանոթի հատակին շրջված հովանոցի տեսքով և հեշտությամբ կոտրվում են, երբ թափահարում են: Հակագենները և հակամարմինները փոխազդում են միայն էլեկտրոլիտի առկայության դեպքում (0,8% նատրիումի քլորիդի լուծույթ): Ռեակցիայի ընթացքի վրա ազդում են էլեկտրոլիտում աղի կոնցենտրացիան, կախոցում մանրէաբանական բջիջների քանակը, շիճուկի կոնցենտրացիան, pH-ը, ջերմաստիճանը և այլ գործոններ։

Ագլյուտինացման ռեակցիա (ra).

Կան սպեցիֆիկ ագլյուտինացիա, որը հիմնված է հակագենի փոխազդեցության վրա Հետհոմոլոգ հակամարմին , պարունակվում է կենդանու մարմնում, որին ներմուծվել է այս հակագենը (իմունագլյուտինացիա); ոչ սպեցիֆիկ (քիմիական), որը առաջանում է շրջակա միջավայրի pH-ի փոփոխություններից, էլեկտրոլիտների կոնցենտրացիայից. ինքնաբուխ, որը նկատվում է, երբ բակտերիաները (R- ձևով) կասեցվում են ֆիզիոլոգիական լուծույթում և երբ տաքանում են, ինչը կապված է բակտերիալ բջջի կոլոիդային վիճակի փոփոխության հետ։ Հակագեն , RA-ում ներգրավված կոչվում է ագլյուտինոգեն, հակամարմինը կոչվում է ագլյուտինին, իսկ արդյունքում ստացված նստվածքը կոչվում է ագլյուտինատ: Երբ ձևավորվում է ագլյուտինատ, կարևոր է անտիգենի և հակամարմինների քանակական հարաբերակցությունը (օպտիմալ երևույթ): Հակամարմինների ավելցուկի կամ անբավարարության դեպքում առաջանում է ուշացում:

Ագլյուտինացիոն ռեակցիան (ՀՀ) մանրէաբանական պրակտիկայում օգտագործվող առաջին իմունոլոգիական ռեակցիաներից է։ Առաջին անգամ (1895 թ.) Ֆ.Վիդալը տիֆային տենդը ախտորոշելու համար օգտագործել է ՌԱ։ Ավելի ուշ (1897 թ.) Ա. Ռայթը նույն ռեակցիան օգտագործեց մարդկանց մոտ բրուցելոզը ախտորոշելու համար։ ՀՀ-ն նաև կիրառություն է գտել հավերի պուլորոզի, լեպտոսպիրոզի, ծովահենների վարակիչ աբորտի ախտորոշման, ինչպես նաև հայտնի ագլյուտինացնող շիճուկի միջոցով անհայտ մանրէաբանական կուլտուրաների տպագրման համար: ՀՀ-ն խիստ զգայուն է. այն կարող է օգտագործվել 1 մլ-ում 0,01 մկգ հակամարմինների սպիտակուցային ազոտ հայտնաբերելու համար:

Մշակվել են ագլյուտինացման ռեակցիայի մի քանի տարբերակներ, որոնք տարբերվում են մեթոդաբանական կատարմամբ և հետազոտության նպատակներով:

2. Ra ապակու վրա.

ՀՀ-ի այս տարբերակում փորձարկվողները կարող են լինել կա՛մ շիճուկ, կա՛մ հակագեն, բայց ամենից հաճախ այս տարբերակն օգտագործվում է միկրոօրգանիզմները հայտնաբերելու համար:

1. Միկրոօրգանիզմը (մ/օ) նույնականացնելու համար հայտնի ագլյուտինացնող շիճուկի մի կաթիլ, օրինակ՝ սալմոնելլա շիճուկ, և մի կաթիլ ֆիզիոլոգիական լուծույթ (հսկողություն) առանձին-առանձին քսվում են առանց ճարպի ապակու սլայդի վրա: Այնուհետև, օգտագործելով մանրէաբանական օղակ, ուսումնասիրվող կուլտուրայի բակտերիալ զանգվածը վերցվում է Պետրիի ափսեի գաղութից կամ թեք MPA-ի մակերևույթից փորձանոթի մեջ և առանձին կասեցվում իմունային շիճուկում և ֆիզիոլոգիական լուծույթում, մինչև միատարր կասեցումը ստացվի: ձեռք բերված։ Արդյունքը հաշվի է առնվում 2...4 րոպե անց։

Արդյունքների հաշվառում. հսկիչ նմուշում փոփոխություններ չպետք է լինեն: Եթե ​​բակտերիալ կուլտուրան հատուկ համընկնում է իմունային շիճուկի հետ, հայտնվում են ագլյուտինատային փաթիլներ (դրական արդյունք, եթե չկա ագլյուտինացիայի երևույթ, եզրակացություն է արվում, որ ուսումնասիրվող բակտերիալ մշակույթը չի համապատասխանում իմունային շիճուկին);

2. Եկեք դիտարկենք հետազոտվող արյան շիճուկում անիտելի հայտնաբերումը` օգտագործելով բրուցելոզի սերոդախտորոշման ժամանակ օգտագործվող վարդ բենգալ թեստի օրինակը: 0,3 մլ փորձարկվող կենդանիների արյան շիճուկ և 0,03 մլ բրուցելոզի հակագեն (վարդի-Բենգալով ներկված բրուցելայի բջիջներ) կիրառվում են ապակե սլայդի վրա: Բաղադրիչները մանրակրկիտ խառնվում են բաժակը թափահարելով և արդյունքը հաշվի է առնվում 4 րոպե անց։

Արդյունքների գրանցում. եթե ռեակցիան դրական է, հայտնվում են ագլյուտինատի վարդագույն փաթիլներ: Այս տեսակի սերոլոգիական ռեակցիան դասակարգվում է որպես որակական, քանի որ այն կարող է օգտագործվել կենդանու արյան շիճուկում պաթոգենին հակամարմիններ հայտնաբերելու համար, բայց դրանց քանակական պարունակությունը հնարավոր չէ գնահատել:

1.1. ԱԳԼՈՒՏԻՆԱՑՄԱՆ ՌԵԱԿՑԻԱ (ՀՀ)

ԱԳԼՈՒՏԻՆԱՑՄԱՆ ՌԵԱԿՑԻԱ (ՀՀ)

Իր յուրահատկության, կատարման հեշտության և ցուցադրականության շնորհիվ ագլյուտինացիոն ռեակցիան լայն տարածում է գտել մանրէաբանական պրակտիկայում բազմաթիվ վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման համար։

Ագլուտինացման ռեակցիան հիմնված է հակամարմինների (ագլյուտինինների) փոխազդեցության առանձնահատկությունների վրա ամբողջ մանրէաբանական կամ այլ բջիջների (ագլյուտինոգենների) հետ։ Այդ փոխազդեցության արդյունքում առաջանում են մասնիկներ և ագլոմերատներ, որոնք նստում են (ագլյուտինատվում) փաթիլների տեսքով։

Ագլյուտինացիայի ռեակցիան կարող է ներառել ինչպես կենդանի, այնպես էլ սպանված բակտերիաներ, սպիրոխետներ, սնկեր, նախակենդանիներ, ռիկետցիա, ինչպես նաև արյան կարմիր բջիջներ և այլ բջիջներ: Ռեակցիան տեղի է ունենում երկու փուլով` առաջին (անտեսանելի) սպեցիֆիկ, անտիգենի և հակամարմինների համադրություն, երկրորդ (տեսանելի) ոչ սպեցիֆիկ, անտիգենների սոսնձում, այսինքն. ագլյուտինատի ձևավորում.

Ագլուտինատը ձևավորվում է, երբ երկվալենտ հակամարմինի մեկ ակտիվ կենտրոնը միանում է անտիգենի որոշիչ խմբի հետ: Ագլյուտինացիայի ռեակցիան, ինչպես ցանկացած շճաբանական ռեակցիա, տեղի է ունենում էլեկտրոլիտների առկայության դեպքում:

Արտաքինից դրական ագլյուտինացիոն ռեակցիայի դրսեւորումը երկակի բնույթ ունի. Դրոշակավոր մանրէների մեջ, որոնք ունեն միայն սոմատիկ O2 հակագեն, մանրէային բջիջներն իրենք ուղղակիորեն կպչում են: Այս ագլյուտինացիան կոչվում է մանրահատիկ: Այն տեղի է ունենում 18 22 ժամվա ընթացքում: v

Դրոշակավոր մանրէներն ունեն երկու անտիգեն՝ սոմատիկ O2 հակագեն և դրոշակակիր H2 հակագեն: Եթե ​​բջիջները սոսնձված են դրոշակներով, առաջանում են խոշոր, չամրացված փաթիլներ, և այս ագլյուտինացիոն ռեակցիան կոչվում է կոպիտ հատիկավոր: Այն տեղի է ունենում 24 ժամվա ընթացքում:

Ագլյուտինացիոն ռեակցիան կարող է իրականացվել ինչպես հիվանդի արյան շիճուկում սպեցիֆիկ հակամարմինների որակական և քանակական որոշման, այնպես էլ մեկուսացված հարուցչի տեսակը որոշելու նպատակով: v

Ագլյուտինացման ռեակցիան կարող է իրականացվել ինչպես ընդլայնված տարբերակով, որը թույլ է տալիս աշխատել ախտորոշիչ տիտրով նոսրացված շիճուկով, այնպես էլ տարբերակով: ցուցիչ ռեակցիա, որը թույլ է տալիս, սկզբունքորեն, հայտնաբերել հատուկ հակամարմիններ կամ որոշել հարուցչի տեսակը։

Մանրամասն ագլյուտինացիոն ռեակցիա կատարելիս՝ հետազոտվողի արյան շիճուկում սպեցիֆիկ հակամարմիններ հայտնաբերելու նպատակով, թեստային շիճուկը վերցվում է 1։50 կամ 1։100 նոսրացումով։ Դա պայմանավորված է այն հանգամանքով, որ նորմալ հակամարմինները կարող են շատ բարձր կոնցենտրացիաներով առկա լինել ամբողջական կամ թեթևակի նոսրացված շիճուկում, և այդ դեպքում ռեակցիայի արդյունքները կարող են լինել ոչ ճշգրիտ: Ռեակցիայի այս տարբերակում փորձարկվող նյութը հիվանդի արյունն է:

Արյունը վերցվում է դատարկ ստամոքսին կամ ուտելուց ոչ շուտ, քան 6 ժամ հետո (հակառակ դեպքում արյան շիճուկում կարող են լինել ճարպի կաթիլներ՝ դարձնելով այն պղտոր և ոչ պիտանի հետազոտության համար): Հիվանդի արյան շիճուկը սովորաբար ստանում են հիվանդության երկրորդ շաբաթում՝ 3 × 4 մլ արյունը ստերիլ կերպով հավաքելով խորանարդի երակից (այս պահին խտացված է հատուկ հակամարմինների առավելագույն քանակը): Որպես հայտնի հակագեն օգտագործվում է ախտորոշումը, որը պատրաստված է սպանված, բայց չքայքայված կոնկրետ տեսակի մանրէաբանական բջիջներից՝ հատուկ հակագենային կառուցվածքով:

Պաթոգենի տեսակը և տեսակը որոշելու համար մանրակրկիտ ագլյուտինացիոն ռեակցիա կատարելիս անտիգենը կենդանի պաթոգեն է, որը մեկուսացված է ուսումնասիրվող նյութից: Իմունային ախտորոշիչ շիճուկում պարունակվող հակամարմինները հայտնի են։ v

Իմունիտետ ախտորոշիչ շիճուկստացված պատվաստված նապաստակի արյունից: Որոշելով տիտրը (առավելագույն նոսրացումը, որով հայտնաբերվում են հակամարմիններ), ախտորոշիչ շիճուկը լցվում է ամպուլների մեջ՝ կոնսերվանտի ավելացումով: Այս շիճուկը օգտագործվում է մեկուսացված պաթոգենի հակագենիկ կառուցվածքով նույնականացման համար:

ԱԳԼՈՒՏԻՆԱՑՄԱՆ ՌԵԱԿՑԻԱՅԻ ՏԱՐԲԵՐԱԿՆԵՐԸ

Այս ռեակցիաները ներառում են անտիգեններ մասնիկների տեսքով (մանրէաբանական բջիջներ, կարմիր արյան բջիջներ և այլ կորպուսկուլյար անտիգեններ), որոնք սոսնձվում են միմյանց հակամարմիններով և նստվածք են ստանում:

Ագլյուտինացիոն ռեակցիա (ՀՀ) իրականացնելու համար անհրաժեշտ է երեք բաղադրիչ՝ 1) հակագեն (ագլյուտինոգեն); 2) հակամարմին (ագլյուտինին) և 3) էլեկտրոլիտ (նատրիումի քլորիդի իզոտոնիկ լուծույթ):

ԿՈՂՄՆԱՑՆՈՂ (ՊԱԼԻԿ) ԱԳԼՈՒՏԻՆԱՑՄԱՆ ՌԵԱԿՑԻԱ (ՀՀ)

Սենյակային ջերմաստիճանում ապակե սլայդի վրա տեղադրվում է ցուցիչ կամ ափսե ՌԱ: Դա անելու համար օգտագործեք Pasteur pipette-ը առանձին շիճուկի մի կաթիլ 1:10 1:20 նոսրացումով և հսկիչ կաթիլ նատրիումի քլորիդի իզոտոնիկ լուծույթով ապակու վրա քսելու համար: Գաղութները կամ բակտերիաների ամենօրյա կուլտուրան (մի կաթիլ դիագնոստիկ) ներմուծվում են և՛ մանրէաբանական օղակների մեջ, և՛ մանրակրկիտ խառնվում: Ռեակցիաները տեսողականորեն հաշվի են առնվում մի քանի րոպե անց՝ երբեմն օգտագործելով խոշորացույց (x5): Դրական ՌԱ-ի դեպքում նշվում է շիճուկի մի կաթիլում մեծ և փոքր փաթիլների տեսքը, շիճուկը մնում է միատեսակ պղտոր:

ԱՆՈՒՂԻՂ (ՊԱՍԻՎ) ՀԵՄԱԳԼՈՒՏԻՆԱՑՄԱՆ ՌԵԱԿՑԻԱ (RNGA, RPGA)

Ռեակցիան իրականացվում է. այս խիստ ցրված նյութերը և ամենափոքր միկրոօրգանիզմները:

Անուղղակի կամ պասիվ ագլյուտինացիան հասկացվում է որպես ռեակցիա, որի ժամանակ հակամարմինները փոխազդում են անտիգենների հետ, որոնք նախապես կլանված են իներտ մասնիկների վրա (լատեքս, բջջանյութ, պոլիստիրոլ, բարիումի օքսիդ և այլն կամ ոչխարի արյան կարմիր բջիջներ, մարդու արյան խումբ I(0)):

Հեմագլյուտինացիայի պասիվ ռեակցիայի (RPHA) դեպքում արյան կարմիր բջիջները օգտագործվում են որպես կրող: Հակագենով բեռնված կարմիր արյան բջիջները կպչում են այս անտիգենին հատուկ հակամարմինների առկայության դեպքում և նստում են: Հակագենով զգայուն էրիթրոցիտները օգտագործվում են RPGA-ում որպես էրիթրոցիտների ախտորոշում հակամարմինների հայտնաբերման համար (սերոախտորոշում): Եթե ​​կարմիր արյան բջիջները բեռնված են հակամարմիններով (էրիթրոցիտային հակամարմիններ diagnosticum), այն կարող է օգտագործվել անտիգենները հայտնաբերելու համար:

Բեմականացում. Պոլիստիրոլային թիթեղների հորերում պատրաստվում են շիճուկի սերիական նոսրացումներ։ Նախավերջին հորին ավելացրեք 0,5 մլ ակնհայտ դրական շիճուկ, իսկ վերջին հորին` 0,5 մլ ֆիզիոլոգիական լուծույթ (հսկիչ): Այնուհետև բոլոր հորերին ավելացրեք 0,1 մլ նոսրացված էրիթրոցիտային դիագնոստիկ, թափահարեք և դրեք թերմոստատի մեջ 2 ժամով

Հաշվապահություն. IN դրական դեպքէրիթրոցիտները տեղավորվում են ջրհորի ներքևի մասում՝ ծալված կամ ատամնավոր եզրով բջիջների հավասար շերտի տեսքով (շրջված հովանոց, բացասական՝ դրանք նստում են կոճակի կամ օղակի տեսքով):

1.2. Չեզոքացման ՌԵԱԿՑԻԱ. ԼԻՍԻՍ,
ՕՊՍՈՆՈՖԱԳՈՑԻՏԱԿԱՆ ՌԵԱԿՑԻԱ, ԳԵՐԶԳԱՅՆՈՒԹՅԱՆ ՌԵԱԿՑԻԱ

ԷԿԶՈՏՈՔՍԻՆԻ ՉԵՆՔԱԶԱՆՑՄԱՆ ԱՐՁԱԳԱՆՔԸ ՀԱԿԱՏՈՔՍԻՆՈՎ (RN)

Ռեակցիան հիմնված է էկզոտոքսինի ազդեցությունը չեզոքացնելու հակատոքսիկ շիճուկի ունակության վրա։ Այն օգտագործվում է հակատոքսիկ շիճուկների տիտրման և էկզոտոքսինի որոշման համար։

Շիճուկը տիտրելիս հակատոքսիկ շիճուկի տարբեր նոսրացումներին ավելացվում է համապատասխան թույնի որոշակի չափաբաժին: Երբ անտիգենն ամբողջությամբ չեզոքացվում է, և չկան չսպառված հակամարմիններ, տեղի է ունենում նախնական ֆլոկուլյացիա։ Ֆլոկուլյացիայի ռեակցիան կարող է օգտագործվել ոչ միայն շիճուկի տիտրման համար (օրինակ՝ դիֆթերիա), այլ նաև տոքսինի և տոքսոիդի տիտրման համար։ Տոքսինների չեզոքացման ռեակցիան հակատոքսինի հետ մեծ գործնական նշանակություն ունի՝ որպես հակատոքսիկ բուժական շիճուկների ակտիվության որոշման մեթոդ։ Այս ռեակցիայի հակագենը իսկական էկզոտոքսին է:

Հակատոքսիկ շիճուկի ուժը որոշվում է AE-ի սովորական միավորներով:

Բոտուլինի շիճուկի 1 AE դրա քանակությունը չեզոքացնում է 1000 DLM բոտուլինային տոքսին: Էկզոտոքսինի տեսակը կամ տեսակը որոշելու համար չեզոքացման ռեակցիան (տետանուս, բոտուլիզմ, դիֆթերիա և այլն) կարող է իրականացվել in vitro (ըստ Ռամոնի), իսկ մանրէաբանական բջիջների թունավորությունը որոշելիս՝ գելում ( ըստ Ouchterlony-ի):

Լիզիսի ռեակցիա (RL)

Իմունային շիճուկի պաշտպանիչ հատկություններից է օրգանիզմ մտնող միկրոբները կամ բջջային տարրերը լուծարելու ունակությունը:

Հատուկ հակամարմինները, որոնք առաջացնում են բջիջների տարրալուծում (լիզ), կոչվում են լիզիններ: Կախված անտիգենի բնույթից՝ դրանք կարող են լինել բակտերիոլիզիններ, ցիտոլիզիններ, սպիրոխետոլիզիններ, հեմոլիզիններ և այլն։

Լիզիններն իրենց ազդեցությունն են ցուցաբերում միայն լրացուցիչ հավելյալ գործոնի առկայության դեպքում: Կոմպլեմենտը որպես ոչ հատուկ գործոն հումորալ իմունիտետ, հայտնաբերվել է մարմնի գրեթե բոլոր հեղուկներում, բացառությամբ ողնուղեղային հեղուկի և առաջի խցիկի հեղուկի: Մարդու արյան շիճուկում նկատվել է կոմպլեմենտի բավականին բարձր և մշտական ​​պարունակություն, և արյան շիճուկում այն ​​շատ է ծովախոզուկ. Այլ կաթնասունների մոտ արյան շիճուկում կոմպլեմենտի պարունակությունը տարբեր է։

Լրացումն է բարդ համակարգշիճուկի սպիտակուցներ. Այն անկայուն է և փլուզվում է 55 աստիճան ջերմաստիճանում 30 րոպե: Սենյակային ջերմաստիճանում կոմպլեմենտը քայքայվում է երկու ժամվա ընթացքում: Շատ զգայուն է երկարատև ցնցումների, թթուների և ուլտրամանուշակագույն ճառագայթների նկատմամբ: Այնուամենայնիվ, կոմպլեմենտը երկար ժամանակ (մինչև վեց ամիս) պահվում է չոր վիճակում՝ ցածր ջերմաստիճանի պայմաններում։ Կոմպլեմենտը նպաստում է մանրէաբանական բջիջների և արյան կարմիր բջիջների լիզմանը:

Տարբերում են բակտերիոլիզի և հեմոլիզի ռեակցիաները։

Բակտերիոլիզի ռեակցիայի էությունն այն է, որ երբ սպեցիֆիկ իմունային շիճուկը կոմպլեմենտի առկայության դեպքում միանում է իր համապատասխան հոմոլոգ կենդանի մանրէաբանական բջիջների հետ, տեղի է ունենում մանրէաբանական լիզ:

Հեմոլիզի ռեակցիան այն է, որ երբ էրիթրոցիտները ենթարկվում են հատուկ շիճուկի, որը նրանց նկատմամբ անձեռնմխելի է (հեմոլիտիկ) կոմպլեմենտի առկայության դեպքում, նկատվում է էրիթրոցիտների տարրալուծում, այսինքն. հեմոլիզ.

Հեմոլիզի ռեակցիան լաբորատոր պրակտիկայում օգտագործվում է կոմպլեմենտի տիրույթը որոշելու, ինչպես նաև արդյունքները գրանցելու համար ախտորոշիչ ռեակցիաներլրացման ամրագրում. Կոմպլեմենտի տիտրը նրա ամենափոքր քանակությունն է, որն առաջացնում է կարմիր արյան բջիջների լիզացիա 30 րոպեի ընթացքում հեմոլիտիկ համակարգում 2,5 մլ ծավալով: Լիզի ռեակցիան, ինչպես բոլոր սերոլոգիական ռեակցիաները, տեղի է ունենում էլեկտրոլիտի առկայության դեպքում:

ԳԵՐզգայունության ռեակցիաներ (ԱԼԵՐԳԻԱԿԱՆ)

Հակագենի որոշ ձևեր, մարմնի հետ կրկնվող շփման դեպքում, կարող են առաջացնել ռեակցիա, որը հատուկ է իր հիմքում, բայց ներառում է սուր բորբոքային պատասխանի ոչ սպեցիֆիկ բջջային և մոլեկուլային գործոններ: Գոյություն ունի գերզգայունության երկու հայտնի ձև՝ անմիջական տիպի գերզգայունություն (IHT) և հետաձգված տիպի գերզգայունություն (DTH): Առաջին տեսակի ռեակցիան առաջանում է հակամարմինների մասնակցությամբ, իսկ ռեակցիան զարգանում է ոչ ուշ, քան ալերգենի հետ կրկնվող շփումից հետո 2 ժամ հետո։ Երկրորդ տեսակն իրականացվում է բորբոքային T բջիջների (Tgc) օգնությամբ՝ որպես ռեակցիայի հիմնական էֆեկտորներ՝ ապահովելով մակրոֆագների կուտակումը բորբոքման տարածքում, ռեակցիան դրսևորվում է 6-8 ժամ հետո և ավելի ուշ։

Գերզգայունության ռեակցիայի զարգացմանը նախորդում է անտիգենի հետ հանդիպումը և զգայունության առաջացումը, այսինքն. հակամարմինների, ակտիվորեն զգայուն լիմֆոցիտների և այլ լեյկոցիտների (մակրոֆագեր, գրանուլոցիտներ) պասիվ զգայուն ցիտոֆիլ հակամարմինների տեսքը:

Գերզգայունության ռեակցիաներն ունեն զարգացման երեք փուլ՝ իմունոլոգիական; պաթոքիմիական; պաթոֆիզիոլոգիական.

Առաջին, կոնկրետ փուլում ալերգենը փոխազդում է հակամարմինների և (կամ) զգայուն բջիջների հետ։ Երկրորդ փուլում տեղի է ունենում կենսաբանական ազատում ակտիվ նյութերակտիվացված բջիջներից: Ազատված միջնորդները (հիստամին, սերոտոնին, լեյկոտրիեններ, բրադիկինին և այլն) առաջացնում են տարբեր ծայրամասային էֆեկտներ, որոնք բնորոշ են ռեակցիայի երրորդ փուլին համապատասխան տեսակի։

Ռեակցիաներ գերզգայունությունչորրորդ տեսակ

Այս տեսակի ռեակցիաները առաջանում են զգայուն T-օգնական բջիջների, ցիտոտոքսիկ T-լիմֆոցիտների (T-մարդասպան բջիջների) և մոնոմիջուկային ֆագոցիտային համակարգի ակտիվացված բջիջների պաթոգեն միջբջջային փոխազդեցությունների հետևանքով, որոնք առաջանում են բակտերիալ անտիգենների կողմից իմունային համակարգի երկարատև խթանման հետևանքով, ինչը առաջացնում է. վերացնելու մարմնի իմունային համակարգի հարաբերական անբավարարությունը ներքին միջավայրըվարակիչ հիվանդությունների բակտերիալ պաթոգեններ. Գերզգայունության այս ռեակցիաները տուբերկուլյոզով հիվանդների մոտ առաջացնում են տուբերկուլյոզային թոքերի խոռոչներ, դրանց կազային նեկրոզ և ընդհանուր թունավորում: Տուբերկուլյոզի ժամանակ մաշկային գրանուլոմատոզը և մորֆոպաթոգենետիկ առումով բորոտությունը հիմնականում բաղկացած է չորրորդ տեսակի գերզգայունության ռեակցիաներից:

Մեծ մասը հայտնի օրինակՉորրորդ տիպի գերզգայունության ռեակցիաները սա Mantoux-ի ռեակցիա է, որը զարգանում է տուբերկուլինի ներմաշկային ներարկման տեղում մի հիվանդի մոտ, որի մարմինը և համակարգը զգայուն են միկոբակտերիալ անտիգենների նկատմամբ: Ռեակցիայի արդյունքում առաջանում է խիտ հիպերեմիկ պապուլա՝ կենտրոնում նեկրոզով, որն առաջանում է տուբերկուլինի ներմաշկային ներարկումից ընդամենը մի քանի ժամ (դանդաղ) հետո։ Պապուլայի ձևավորումը սկսվում է անոթային մահճակալից շրջանառվող արյան մոնոմիջուկային ֆագոցիտների արտազատմամբ միջբջջային տարածություններ: Միաժամանակ սկսվում է անոթային հունից պոլիմորֆոնուկլեար բջիջների արտագաղթը։ Այնուհետև նեյտրոֆիլների ներթափանցումը թուլանում է, և ինֆիլտրատը սկսում է հիմնականում կազմված լինել լիմֆոցիտներից և միամիջուկային ֆագոցիտներից: Սա տարբերվում է Mantoux-ի ռեակցիայից Arthus-ի ռեակցիայից, որի ժամանակ ախտահարման վայրում կուտակվում են գերակշռող պոլիմորֆոնուկլեար լեյկոցիտներ:

4-րդ տիպի գերզգայունության ռեակցիաների դեպքում անտիգեններով զգայուն լիմֆոցիտների երկարատև խթանումը հանգեցնում է. պաթոլոգիական փոփոխություններհյուսվածքները՝ պաթոլոգիկորեն ինտենսիվ և երկարատև ցիտոկինների թողարկումը T օգնական բջիջների կողմից: Հյուսվածքների վնասման վայրերում ցիտոկինների ինտենսիվ արտազատումը առաջացնում է այնտեղ տեղակայված մոնոմիջուկային ֆագոցիտային համակարգի բջիջների հիպերակտիվացում, որոնցից շատերը հիպերակտիվացված վիճակում ձևավորում են էպիթելիոիդ բջիջների շղթաներ, իսկ ոմանք միաձուլվում են միմյանց հետ՝ ձևավորելով հսկա բջիջներ: Մակրոֆագները, որոնց մակերեսին ենթարկվում են բակտերիալ և վիրուսային անտիգենները, կարող են ոչնչացվել Tkillers-ի (բնական մարդասպանների) գործունեության միջոցով:

Գերզգայունության ռեակցիայի չորրորդ տեսակն առաջանում է օտար բակտերիալ անտիգենի ճանաչմամբ դրա նկատմամբ զգայուն T օգնական բջիջների կողմից: Ճանաչման համար անհրաժեշտ պայմանը էնդոցիտոզից հետո ինդուկտորների փոխազդեցությունն է հակագեն ներկայացնող բջիջների մակերևույթի վրա հայտնված անտիգենների հետ և մոնոմիջուկային ֆագոցիտների կողմից օտար իմունոգենների մշակումը: Մեկ այլ անհրաժեշտ պայմանանտիգենների ազդեցությունը I դասի մոլեկուլների հետ համակցված հիմնական հյուսվածհամատեղելիության համալիրից: Հակագենի ճանաչումից հետո զգայուն օգնական բջիջներն ազատում են ցիտոկիններ և, մասնավորապես, ինտերլեյկին2, որն ակտիվացնում է բնական մարդասպան բջիջները և մոնոմիջուկային ֆագոցիտները: Ակտիվացված մոնոմիջուկային ֆագոցիտները ազատում են պրոտեոլիտիկ ֆերմենտներ և ազատ թթվածնային ռադիկալներ, որոնք վնասում են հյուսվածքը։

Մաշկի ալերգիայի թեստերը ստուգելու համար մարմնի զգայունությունը ալերգենների նկատմամբ, որոշելու վարակի մակարդակը, օրինակ՝ տուբերկուլյոզ, բրուցելյոզ, հոտի անձեռնմխելիությունօրինակ՝ տուլարեմիայի համար։ Ալերգենի ընդունման վայրի հիման վրա կան՝ 1) մաշկի թեստեր. 2) scarification; 3) ներմաշկային; 4) ենթամաշկային. Կլինիկական ռեակցիան ալերգենի նկատմամբ մաշկի ալերգիայի թեստի ժամանակ բաժանվում է տեղային, ընդհանուր և կիզակետային, ինչպես նաև անմիջական և հետաձգված:

Միջնորդ տիպի GNT-ի տեղական ռեակցիաները տեղի են ունենում 520 րոպե հետո, արտահայտվում են էրիթեմայի և բլիստերի տեսքով, անհետանում են մի քանի ժամից և գնահատվում են պլյուս մեթոդով՝ ըստ էրիթեմայի չափի՝ մմ-ով: Տեղական HRT ռեակցիաները տեղի են ունենում 24-48 ժամվա ընթացքում, երկար են տևում, ի հայտ են գալիս ինֆիլտրատի տեսքով, երբեմն՝ կենտրոնում նեկրոզով և գնահատվում են ինֆիլտրատի չափսով մմ-ով՝ նաև պլյուս համակարգի միջոցով։ ՀՆԹ-ի ցիտոտոքսիկ և իմունոկոմպլեքս տեսակների դեպքում հիպերմինիա և ինֆիլտրացիա նկատվում է 3-4 ժամ հետո, առավելագույնը հասնում է 6-8 ժամվա ընթացքում և թուլանում մոտ մեկ օր հետո: Երբեմն նկատվում են համակցված ռեակցիաներ.

1.3. Կոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիա (FFR)

Այս ռեակցիան օգտագործվում է լաբորատոր հետազոտություններում՝ տարբեր վարակների ժամանակ արյան շիճուկում հակամարմիններ հայտնաբերելու, ինչպես նաև պաթոգենն իր հակագենային կառուցվածքով բացահայտելու համար։

Կոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիան բարդ շճաբանական ռեակցիա է և բնութագրվում է բարձր զգայունությամբ և յուրահատկությամբ։

Այս ռեակցիայի առանձնահատկությունն այն է, որ հակագենի փոփոխությունը հատուկ հակամարմինների հետ փոխազդեցության ժամանակ տեղի է ունենում միայն կոմպլեմենտի առկայության դեպքում։ Կոմպլեմենտը ներծծվում է միայն «հակամարմին հակագեն» համալիրի վրա: «Հակամարմինների հակագեն» համալիրը ձևավորվում է միայն այն դեպքում, երբ շիճուկում առկա է անտիգենի և հակամարմինների միջև կապ:

Կոմպլեմենտի կլանումը «հակագին հակամարմին» համալիրի վրա կարող է տարբեր ազդեցություն ունենալ հակագենի ճակատագրի վրա՝ կախված դրա բնութագրերից:

Որոշ անտիգեններ այս պայմաններում ենթարկվում են մորֆոլոգիական կտրուկ փոփոխությունների, այդ թվում՝ տարրալուծման (հեմոլիզ, Իսաև-Պֆայֆերի ֆենոմեն, ցիտոլիտիկ գործողություն)։ Մյուսները փոխում են շարժման արագությունը (տրեպոնեմայի անշարժացում): Մյուսները մահանում են առանց հանկարծակի կործանարար փոփոխությունների (բակտերիալ կամ ցիտոտոքսիկ ազդեցություն): Վերջապես, կոմպլեմենտի կլանումը կարող է չուղեկցվել անտիգենային փոփոխություններով, որոնք հեշտությամբ նկատելի են:

RSC մեխանիզմի համաձայն, այն տեղի է ունենում երկու փուլով.

1. Առաջին փուլը «հակագին հակամարմինների» համալիրի ձևավորումն է և ադսորբցիան ​​այս կոմպլեմենտային համալիրի վրա: Ֆազի արդյունքը տեսանելի չէ (հակագենի և հակամարմինների փոխազդեցությունը կոմպլեմենտի պարտադիր մասնակցությամբ)։
2. Երկրորդ փուլը հակագենի փոփոխությունն է հատուկ հակամարմինների ազդեցության տակ կոմպլեմենտի առկայության դեպքում: Ֆազի արդյունքը կարող է տեսանելի լինել կամ տեսանելի լինել (ռեակցիայի արդյունքների հայտնաբերում ցուցիչ հեմոլիտիկ համակարգի միջոցով (ոչխարի կարմիր արյան բջիջներ և հեմոլիտիկ շիճուկ):

Արյան կարմիր բջիջների ոչնչացումը հեմոլիտիկ շիճուկի միջոցով տեղի է ունենում միայն այն դեպքում, եթե լրացնում են հեմոլիտիկ համակարգին: Եթե ​​կոմպլեմենտը նախկինում ներծծվել է հակագեն-հակամարմին համալիրի վրա, ապա էրիթրոցիտների հեմոլիզ չի առաջանում:

Փորձի արդյունքը գնահատվում է՝ նշելով բոլոր փորձանոթներում հեմոլիզի առկայությունը կամ բացակայությունը։ Արձագանքը համարվում է դրական, երբ հեմոլիզը լիովին հետաձգվում է, երբ փորձանոթի հեղուկը անգույն է, և արյան կարմիր բջիջները նստում են հատակին, բացասական, երբ կարմիր արյան բջիջները լիովին լուծվում են, երբ հեղուկը ինտենսիվ գունավորվում է («լաք» արյուն): Հեմոլիզի հետաձգման աստիճանը գնահատվում է կախված հեղուկի գույնի ինտենսիվությունից և ներքևում գտնվող կարմիր արյան բջիջների նստվածքի չափից (++++, +++, ++, +):

Այն դեպքում, երբ անտիգենի փոփոխությունները մնում են անմատչելի տեսողական դիտարկման համար, անհրաժեշտ է օգտագործել երկրորդ համակարգ, որը հանդես է գալիս որպես ցուցիչ՝ թույլ տալով գնահատել կոմպլեմենտի վիճակը և եզրակացություն անել ռեակցիայի արդյունքի մասին:

Այս ցուցիչ համակարգը ներկայացված է հեմոլիզի ռեակցիայի բաղադրիչներով, որը ներառում է ոչխարի էրիթրոցիտներ և հեմոլիտիկ շիճուկ, որը պարունակում է հատուկ հակամարմիններ էրիթրոցիտների (հեմոլիզինների) նկատմամբ, բայց չի պարունակում կոմպլեմենտ: Այս ցուցիչ համակարգը փորձանոթներին ավելացվում է հիմնական RSC-ի տեղադրումից մեկ ժամ անց: Եթե ​​կոմպլեմենտի ֆիքսման ռեակցիան դրական է, ապա ձևավորվում է հակամարմինների հակագենային համալիր, որը կլանում է իր վրա: Քանի որ կոմպլեմենտն օգտագործվում է միայն մեկ ռեակցիայի համար անհրաժեշտ քանակությամբ, և էրիթրոցիտների լիզը կարող է տեղի ունենալ միայն կոմպլեմենտի առկայության դեպքում, ապա երբ այն ներծծվում է «հակագին հակամարմինների» համալիրի վրա, հեմոլիտիկ (ցուցանիշ) համակարգում էրիթրոցիտների լիզը տեղի կունենա: տեղի չի ունենում. Եթե ​​կոմպլեմենտի ֆիքսման ռեակցիան բացասական է, ապա «հակագին հակամարմին» համալիրը չի ձևավորվում, կոմպլեմենտը մնում է ազատ, և երբ ավելանում է հեմոլիտիկ համակարգը, տեղի է ունենում էրիթրոցիտների լիզ:

1.4. ԴՆԹ ԶՈՆԴԵՐ. ՊՈԼԻՄԵՐԱԶԱՅԻՆ Շղթայական ՌԵԱԿՑԻԱ (PCR),
ԻՄՈՒՆՈՖԵՐՄԵՆՏԻ ՄԵԹՈԴ (ELISA), ՖԼՅՈՒՈՐՍՑԻՆԳ ՀԱԿԱՄԱՐՄԻՆԻ ՄԵԹՈԴ (FFA)

ԳԵՆՆԵՐԻ ԶՈՆԳՄԱՆ ՄԵԹՈԴՆԵՐ

Մոլեկուլային կենսաբանության ինտենսիվ զարգացումը և գենետիկական հետազոտությունների կատարյալ մեթոդաբանական բազայի ստեղծումը հիմք են հանդիսացել գենետիկական ինժեներիայի համար։ Ախտորոշման ոլորտում ի հայտ է եկել և արագորեն զարգանում է մի ուղղություն՝ որոշելու ԴՆԹ-ի և ՌՆԹ-ի հատուկ նուկլեոտիդային հաջորդականությունները, այսպես կոչված, գենային զոնդավորումը: Նման տեխնիկան հիմնված է նուկլեինաթթուների հիբրիդացման և երկկողմանի կառուցվածքներ ձևավորելու ունակության վրա, որոնք պայմանավորված են կոմպլեմենտար նուկլեոտիդների (AT, GC) փոխազդեցությամբ:

Ցանկալի ԴՆԹ (կամ ՌՆԹ) հաջորդականությունը որոշելու համար հատուկ ստեղծվում է այսպես կոչված պոլինուկլեոտիդային զոնդ՝ հատուկ բազային հաջորդականությամբ։ Նրա կազմի մեջ ներդրված է հատուկ պիտակ, որը հնարավորություն է տալիս բացահայտել համալիրի ձևավորումը:

Չնայած գեների զոնդավորումը չի կարող դասակարգվել որպես իմունաքիմիական վերլուծության մեթոդ, դրա հիմնական սկզբունքը (լրացուցիչ կառուցվածքների փոխազդեցությունը) մեթոդաբար իրականացվում է նույն ձևերով, ինչ իմունոախտորոշման ցուցիչ մեթոդները: Բացի այդ, գեների հետազոտման մեթոդները հնարավորություն են տալիս համալրել վարակիչ գործակալի մասին տեղեկատվությունը նրա ֆենոտիպային արտահայտության բացակայության դեպքում (գենոմում ներկառուցված վիրուսներ, «լուռ» գեներ):

ԴՆԹ-ի վերլուծություն իրականացնելու համար նմուշը դենատուրացվում է, որպեսզի ստացվեն միաշղթա կառուցվածքներ, որոնց հետ փոխազդում են ԴՆԹ-ի կամ ՌՆԹ-ի զոնդերի մոլեկուլները: Զոնդերը պատրաստելու համար օգտագործվում են բնական աղբյուրից մեկուսացված ԴՆԹ-ի (կամ ՌՆԹ-ի) տարբեր հատվածներ (օրինակ՝ որոշակի միկրոօրգանիզմ), որոնք սովորաբար ներկայացված են վեկտորային պլազմիդներում գենետիկական հաջորդականությունների տեսքով, կամ քիմիապես սինթեզված օլիգոնուկլեոտիդներ: Որոշ դեպքերում բեկորների մեջ հիդրոլիզացված գենոմային ԴՆԹ-ի պատրաստուկներն օգտագործվում են որպես զոնդ, երբեմն՝ ՌՆԹ պատրաստուկներ և հատկապես հաճախ՝ ռիբոսոմային ՌՆԹ։ Որպես պիտակ օգտագործվում են նույն ցուցանիշները, ինչ տարբեր տեսակի իմունաքիմիական անալիզներում՝ ռադիոակտիվ իզոտոպներ, ֆլուորեսցիններ, բիոտոպներ (ավիդին-ֆերմենտային համալիրի հետագա մշակմամբ) և այլն։

Վերլուծության կարգը որոշվում է առկա զոնդի հատկություններով

Ներկայումս բոլոր անհրաժեշտ բաղադրիչները պարունակող կոմերցիոն փաթեթները գնալով ավելի են օգտագործվում:

Շատ դեպքերում վերլուծության գործընթացը կարելի է բաժանել հետևյալ փուլերի՝ նմուշի պատրաստում (ներառյալ ԴՆԹ-ի արդյունահանումը և դենատուրացումը), նմուշի ամրագրումը կրիչի վրա (առավել հաճախ՝ պոլիմերային թաղանթային ֆիլտր), նախահիբրիդացում, ինքնին հիբրիդացում, չկապված արտադրանքի լվացում, հայտնաբերում։ . ԴՆԹ-ի կամ ՌՆԹ-ի ստանդարտ պատրաստուկի բացակայության դեպքում այն ​​սկզբում ձեռք է բերվում և պիտակավորվում:

Նմուշ պատրաստելու համար կարող է անհրաժեշտ լինել նախնական «աճեցնել» թեստային նյութը՝ բացահայտելու բակտերիաների առանձին գաղութները կամ բարձրացնել վիրուսների կոնցենտրացիան բջիջների կուլտուրայում: Կատարվում է նաև ուղղակի վերլուծությունարյան շիճուկի, մեզի նմուշներ, ձևավորված տարրերարյուն կամ ամբողջական արյուն վարակիչ գործակալի առկայության համար. Բջջային կառուցվածքներից նուկլեինաթթուները ազատելու համար կատարվում է բջիջների լիզ, իսկ որոշ դեպքերում ԴՆԹ-ի պատրաստումը մաքրվում է ֆենոլի միջոցով:

ԴՆԹ-ի դենատուրացիա, այսինքն՝ դրա անցում դեպի միաշղթա ձևի, տեղի է ունենում ալկալիներով մշակելիս: Նուկլեինաթթվի նմուշն այնուհետև ամրացվում է հենարանի՝ նիտրոցելյուլոզային կամ նեյլոնե թաղանթի վրա, սովորաբար ինկուբացիայի միջոցով 10 րոպեից մինչև 4 ժամ 80°C-ում վակուումում: Ավելին, նախահիբրիդացման գործընթացում ձեռք է բերվում ազատ կապակցման վայրերի ապաակտիվացում՝ թաղանթի հետ զոնդի ոչ սպեցիֆիկ փոխազդեցությունը նվազեցնելու համար: Հիբրիդացման գործընթացը տևում է 2-ից 20 ժամ՝ կախված նմուշում ԴՆԹ-ի կոնցենտրացիայից, օգտագործվող զոնդի կոնցենտրացիայից և դրա չափից:

Հիբրիդացման ավարտից և չկապված արտադրանքը լվանալուց հետո հայտնաբերվում է ձևավորված բարդույթը: Եթե ​​զոնդը պարունակում է ռադիոակտիվ պիտակ, ապա ռեակցիան ցուցադրելու համար թաղանթը ենթարկվում է լուսանկարչական ֆիլմի (ավտորադիոգրաֆիա): Այլ պիտակների համար կիրառվում են համապատասխան ընթացակարգերը։

Ամենահեռանկարայինը ոչ ռադիոակտիվ (այսպես կոչված՝ սառը) զոնդեր ստանալն է։ Նույն հիմքի վրա մշակվում է հիբրիդացման տեխնիկա, որը հնարավորություն է տալիս հաստատել պաթոգենի առկայությունը հատվածային պատրաստուկներում և հյուսվածքների պունկցիաներում, ինչը հատկապես կարևոր է պաթոմորֆոլոգիական վերլուծության մեջ (in situ հիբրիդացում):

Գենների հետազոտման մեթոդների մշակման մեջ նշանակալի քայլ էր պոլիմերազային ուժեղացման ռեակցիայի (PCR) օգտագործումը: Այս մոտեցումը հնարավորություն է տալիս մեծացնել հատուկ (նախապես հայտնի) ԴՆԹ հաջորդականության կոնցենտրացիան նմուշում` սինթեզելով բազմաթիվ պատճեններ in vitro: Ռեակցիան իրականացնելու համար ԴՆԹ-ի պոլիմերազային ֆերմենտային պատրաստուկը, սինթեզի համար դեզօքսինուկլեոտիդների ավելցուկը և այսպես կոչված այբբենարանները ավելացվում են ուսումնասիրվող ԴՆԹ-ի նմուշին՝ երկու տեսակի օլիգոնուկլեոտիդներ՝ 2025 հիմքով, որոնք համապատասխանում են ԴՆԹ-ի տերմինալ հատվածներին: հետաքրքրության հաջորդականությունը. Պրայմերներից մեկը պետք է լինի 53-րդ ընթերցման ուղղությամբ կոդավորող ԴՆԹ-ի ընթերցման շրջանի սկզբի պատճենը, իսկ երկրորդը պետք է լինի ոչ կոդավորող շղթայի հակառակ ծայրի պատճենը: Այնուհետև պոլիմերազային ռեակցիայի յուրաքանչյուր ցիկլով ԴՆԹ-ի կրկնօրինակների թիվը կրկնապատկվում է:

Պրայմերների կապակցման հասնելու համար անհրաժեշտ է ԴՆԹ-ի դենատուրացիա (հալում) 94°C-ում, որին հաջորդում է խառնուրդը հասցնել 40-55°C ջերմաստիճանի:

Ռեակցիան իրականացնելու համար նախագծվել են ծրագրավորվող միկրոնմուշի ինկուբատորներ, որպեսզի հեշտությամբ փոխարինեն ռեակցիայի յուրաքանչյուր փուլի օպտիմալ ջերմաստիճանի փոփոխությունները:

Ուժեղացման ռեակցիան կարող է զգալիորեն մեծացնել վերլուծության զգայունությունը գեների հետազոտման ժամանակ, ինչը հատկապես կարևոր է վարակիչ նյութի ցածր կոնցենտրացիաների դեպքում:

Ամպլիֆիկացմամբ գեների հետազոտման նշանակալի առավելություններից է պաթոլոգիական նյութի ենթամանրադիտակային քանակություններն ուսումնասիրելու ունակությունը:

Մեթոդի մեկ այլ առանձնահատկություն, որն ավելի կարևոր է վարակիչ նյութի վերլուծության համար, թաքնված (լուռ) գեների նույնականացումն է։ Գենային հետազոտության կիրառման հետ կապված մեթոդները, անշուշտ, ավելի լայնորեն կներդրվեն վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման պրակտիկայում, քանի որ դրանք դառնում են ավելի պարզ և էժան:

ELISA և RIF մեթոդները հիմնականում որակական կամ կիսաքանակական բնույթ ունեն: Բաղադրիչների շատ ցածր կոնցենտրացիաների դեպքում հակագենային հակամարմինների համալիրի ձևավորումը հնարավոր չէ հայտնաբերել ոչ տեսողական, ոչ էլ պարզ գործիքային միջոցներով: Հակագենային հակամարմինների համալիրի նշումը նման դեպքերում կարող է իրականացվել, եթե սկզբնական բաղադրիչներից մեկի մեջ պիտակավորվի հակագեն կամ հակամարմին, որը հեշտությամբ կարելի է հայտնաբերել անալիտի որոշված ​​կոնցենտրացիայի հետ համեմատելի կոնցենտրացիաներում:

Ռադիոակտիվ իզոտոպները (օրինակ՝ 125I), լյումինեսցենտային նյութերը և ֆերմենտները կարող են օգտագործվել որպես պիտակներ։

Կախված օգտագործվող պիտակից՝ առանձնանում են ռադիոիմունային (RIA), լյումինեսցենտային իմունային (FIA), ֆերմենտային կապակցված իմունոսորբենտային հետազոտության (ELISA) վերլուծության մեթոդները և այլն։ վերջին տարիները ELISA-ն ստացել է լայն գործնական կիրառություն, ինչը պայմանավորված է հնարավորությամբ քանակական որոշումներ, բարձր զգայունություն, հաշվապահական հաշվառման առանձնահատկությունն ու ավտոմատացումը։

Ֆերմենտային իմունային վերլուծության մեթոդները մեթոդների խումբ են, որոնք թույլ են տալիս հայտնաբերել հակագեն-հակամարմին համալիր՝ օգտագործելով սուբստրատ, որը ճեղքվում է ֆերմենտի կողմից և արտադրում գույն:

Մեթոդի էությունը հակագենային հակամարմինների ռեակցիայի բաղադրիչները համադրելն է չափված ֆերմենտային պիտակի հետ: Անտիգենը կամ հակամարմինը, որը արձագանքում է, պիտակավորված է ֆերմենտով: Ելնելով ֆերմենտի գործողության ներքո սուբստրատի փոխակերպումից, կարելի է դատել հակագենային հակամարմինների ռեակցիայի փոխազդող բաղադրիչի քանակի մասին: Ֆերմենտ ներս այս դեպքումծառայում է որպես մարկեր իմունային ռեակցիաև թույլ է տալիս դիտել այն տեսողական կամ գործիքային:

Ֆերմենտները շատ հարմար պիտակներ են, քանի որ նրանց կատալիտիկ հատկությունները թույլ են տալիս նրանց հանդես գալ որպես ուժեղացուցիչներ, քանի որ մեկ ֆերմենտի մոլեկուլը կարող է նպաստել րոպեում կատալիտիկ ռեակցիայի արտադրանքի ավելի քան 1 × 105 մոլեկուլների ձևավորմանը: Անհրաժեշտ է ընտրել այնպիսի ֆերմենտ, որը երկար ժամանակ պահպանում է իր կատալիտիկ ակտիվությունը, չի կորցնում այն ​​անտիգենին կամ հակամարմինին միանալիս և ունի բարձր սպեցիֆիկություն սուբստրատի նկատմամբ:

Ֆերմենտային պիտակավորված հակամարմինների կամ անտիգենների և կոնյուգատների արտադրության հիմնական մեթոդներն են՝ քիմիական, իմունոլոգիական և գենետիկական ճարտարագիտությունը։ ELISA-ի համար առավել հաճախ օգտագործվող ֆերմենտներն են ծովաբողկի պերօքսիդազը, ալկալային ֆոսֆատազը, գալակտոզիդազը և այլն։

Հակագեն-հակամարմին համալիրում ֆերմենտային ակտիվությունը հայտնաբերելու համար՝ ռեակցիայի տեսողական և գործիքային գրանցման նպատակով, օգտագործվում են քրոմոգեն սուբստրատներ, որոնց լուծույթները, սկզբում անգույն, ֆերմենտային ռեակցիայի ընթացքում ձեռք են բերում գույն, որի ինտենսիվությունը համաչափ է քանակին։ ֆերմենտի. Այսպիսով, պինդ փուլային ELISA-ում ծովաբողկի պերօքսիդազի ակտիվությունը հայտնաբերելու համար որպես ենթաշերտ օգտագործվում են 5-ամինոսալիցիլաթթուն, որն առաջացնում է ինտենսիվ շագանակագույն երանգ, և օրթո-ֆենիլենդիամինը, որն առաջացնում է նարնջագույն-դեղին գույն: Ալկալային ֆոսֆատազի և β-գալատոսիդազի ակտիվությունը հայտնաբերելու համար օգտագործվում են համապատասխանաբար նիտրոֆենիլֆոսֆատներ և նիտրոֆենիլգալակտոզիդներ։

Գունավոր արտադրանքի ձևավորման ռեակցիայի արդյունքը որոշվում է տեսողականորեն կամ օգտագործելով սպեկտրոֆոտոմետր, որը չափում է լույսի կլանումը որոշակի ալիքի երկարությամբ:

Կան բազմաթիվ տարբերակներ ELISA-ի իրականացման համար: Կան միատարր և տարասեռ տարբերակներ։

Ըստ արտադրության մեթոդի՝ առանձնանում են մրցակցային և ոչ մրցակցային ELISA մեթոդները։ Եթե ​​առաջին փուլում համակարգում առկա են միայն վերլուծված միացությունը և դրա համապատասխան կապակցման կենտրոնները (հակագին և հատուկ հակամարմիններ), ապա մեթոդը ոչ մրցակցային է։ Եթե ​​առաջին փուլում առկա են վերլուծված միացությունը (հակագինը) և դրա անալոգը (ֆերմենտով պիտակավորված անտիգեն), որոնք մրցակցում են միմյանց հետ կապվելու համար պակաս մատակարարվող հատուկ կապակցման կենտրոններին (հակամարմիններին), ապա մեթոդը մրցունակ է: Այս դեպքում, որքան շատ է լուծույթը պարունակում թեստային հակագեն, այնքան պակաս է կապված պիտակավորված անտիգենների քանակը:

ՖԼՅՈՒՈՐՍԵՆՑՈՂ ՀԱԿԱՄԱՐՄԻՆՆԵՐԻ (MFA) կամ իմունոֆլյուորեսցենտային ռեակցիայի (RIF) մեթոդ

Իմունֆլյորեսցենցիայի մեթոդը փորձարկման նյութում անհայտ միկրոօրգանիզմի արագ հայտնաբերման և նույնականացման ընտրության մեթոդ է:

Ag + AT + էլեկտրոլիտ = համալիր, որը փայլում է ուլտրամանուշակագույն ճառագայթների տակ

Ֆտորոքրոմով պիտակավորված մանրէաբանական շիճուկ

Հաճախ օգտագործվող ներկը ֆլուորեսցեին իզոթիոցիանատ FITC է

Այս մեթոդը ուսումնասիրելիս օգտագործվում է լյումինեսցենտային մանրադիտակ:

RIF-ի բեմականացում

30 մկլ FITC պիտակավորված հակամարմինների լուծույթը կիրառվում է քսուքի վրա:

Ապակին դնել խոնավ խցիկում և 20-25 րոպե պահել սենյակային ջերմաստիճանում կամ 15 րոպե 37°C ջերմաստիճանի թերմոստատի մեջ։

Լվացեք բաժակը աշխատող մեքենայի մեջ ծորակից ջուր 2 րոպե, լվանալ թորած ջրով և չորացնել օդում:

Մոնտաժող հեղուկի կաթիլը դրվում է չորացրած քսուքի վրա, քսուքը ծածկվում է ծածկոցով և մանրադիտակով կատարվում է լյումինեսցենտային մանրադիտակի կամ սովորական օպտիկական մանրադիտակի լյումինեսցենտային հավելվածի միջոցով: