Metode istraživanja HIV-a. Metode za dijagnosticiranje HIV infekcije

1. Serološke metode detekcija antitela (AT) na HIV je standard za dijagnostikovanje HIV infekcije (ELISA test sistemi bazirani na sintetičkim peptidima imaju skoro 100% osetljivost i specifičnost). ELISA vam omogućava da otkrijete HIV Ag, što može biti pokazatelj rane infekcije ili, obrnuto, kasnog - uznapredovalog razvoja HIV infekcije (p24 Ag)

2. Potvrdni testovi— imunobloting (IB), indirektna imunofluorescencija (IIF) i radioimunoprecipitacija (RIP).

a) SZO preporučuje da se serum koji sadrži antitela na dva proteina ovojnice i jedan od unutrašnjih proteina HIV-a smatra pozitivnim. Pacijente koji su pozitivni pomoću ELISA-e, ali imaju neodređene rezultate IB-om, treba klinički procijeniti i procijeniti na druge načine, medicinski pregled, imunološki i nakon 3 - 6 mjeseci, njihov krvni serum se mora testirati na antitijela na HIV.

b) metoda indirektne imunofluorescencije (IIF) – koristi se kao potvrdni test u mnogim laboratorijama ili kao skrining test.

c) radioimunoprecipitacija je visoko osjetljiva i specifična metoda zasnovana na upotrebi aminokiselina obilježenih radioaktivnim izotopima. Metoda je vrlo osjetljiva na detekciju antitijela na površinske proteine ​​i stoga je vrlo specifična, budući da su ove komponente virusa prisutne kod gotovo svih osoba zaraženih HIV-om nakon serokonverzije.

3. Molekularno biološke metode: metoda molekularne hibridizacije nukleinskih kiselina, PCR

1) kao alternativna i dodatna potvrdna metoda za otkrivanje prisustva virusa u organizmu u odnosu na serološke metode laboratorijska dijagnostika;

2) kao prvi metod specifične analize pri dijagnosticiranju rane HIV infekcije, kada specifična antivirusna antitijela još nisu dostupna;

3) za dijagnostikovanje HIV infekcije novorođenčadi od majki zaraženih HIV-om;

4) utvrđuje virusno opterećenje i propisuje specifičnu antiretrovirusnu terapiju i prati njeno sprovođenje;

5) kao metoda razjašnjavanja u slučaju nejasnih seroloških rezultata i u slučaju neslaganja između seroloških i kulturoloških testova;

6) prilikom proučavanja seksualnih partnera osoba zaraženih HIV-om;

7) kao metoda diferencijalne dijagnoze HIV-1 i HIV-2;

4. Virološka metoda.

1. Principi antiretrovirusne terapije: liječenje treba započeti prije razvoja značajne imunodeficijencije; početna terapija treba da uključuje kombinacije najmanje tri lijeka; modifikacija terapije treba da se sastoji od zamjene ili dodavanja najmanje dva nova lijeka; Izuzetno je važno mjeriti nivo CD4+ ćelija i virusno opterećenje; smanjenje virusnog opterećenja na nivo ispod granice detekcije osjetljivih metoda odražava optimalni učinak liječenja.

2. Postoje tri grupe savremenih antiretrovirusnih lekova:

a) nukleozidni inhibitori reverzne transkriptaze (NRTI): zidovudin (azidotimidin, retrovir); didanozin (ddI, Videx); zalcitabin (ddC, hivid); stavudin (zerit, d4T); lamivudin (3TC, epivir); abakavir; adefovir; combivir (zidovudin + abakavir); trizivir (zidovudin+lamivudin+abakavir); adefovir (inhibitori nukleotidne reverzne transkriptaze).

b) nenukleozidni inhibitori reverzne transkriptaze (NNRTI): delaverdin(rescriptor); nevirapin (viramun); efavirenz

c) inhibitori proteaze (PI): sakvinavir; ritonavir (norvir); indinavir (Crixivan); nelfinavir (Viracept); amprenavir (Agenerase); lopinavir (aluviran); Kaletra (lopinavir + ritonavir).

3. Monoterapija bilo kojim lijekom ne može obezbijediti dovoljno izraženu i dugotrajnu supresiju replikacije HIV-a. Štoviše, kod monoterapije postoji povećan rizik od pojave rezistentnih sojeva i razvoja unakrsne rezistencije na lijekove iste grupe. Jedini izuzetak je primjena zidovudina kao monoterapije za smanjenje rizika od perinatalnog prijenosa HIV-a.

4. Najvažniji kriterijum za efikasnost terapije je dinamika virusnog opterećenja, koju treba odrediti: bez lečenja - svakih 6-12 meseci, tokom lečenja - svakih 3-6 meseci, kao i 4-8 nedelja nakon početak antivirusne terapije.

Uz antiretrovirusnu terapiju neophodno je liječenje sekundarnih bolesti.

34.3 AIDS (kliničke varijante, oportunističke bolesti).

Oportunističke bolesti- teške, progresivne bolesti koje se razvijaju u pozadini sve veće imunosupresije i ne javljaju se kod osoba s normalno funkcionirajućim imunološkim sistemom (bolesti koje definiraju AIDS).

a) prva grupa- to su bolesti koje su karakteristične samo za tešku imunodeficijenciju (CD4+ nivo< 200 кл/мкл) и поэтому определяют клинический диагноз: 1. Кандидоз пищевода, трахеи, бронхов. 2. Внелегочный криптококкоз. 3. Криптоспоридиоз с диареей более 1 месяца. 4. Цитомегаловирусная инфекция с поражением различных органов, помимо печени, селезенки или лимфоузлов. 5. Инфекции, обусловленные вирусом простого герпеса, проявляющиеся язвами на коже и слизистых оболочках. 6. Саркома Капоши у лиц, моложе 60 лет. 7. Первичная лимфома мозга у лиц, моложе 60 лет. 8. Лимфоцитарная интерстициальная пневмония и/или легочная лимфоидная гиперплазия у детей в возрасте до 12 лет. 9. Диссеминированная инфекция, вызванная атипичными микобактериями с внелегочной локализацией. 10. Пневмоцистная пневмония. 11. Прогрессирующая многоочаговая лейкоэнцефалопатия. 12. Токсоплазмоз с поражением головного мозга, легких, глаз у больного старше 1 месяца.

b) druga grupa- bolesti koje se mogu razviti i na pozadini teške imunodeficijencije, a u nekim slučajevima i bez nje: 1. Bakterijske infekcije, kombinovane ili rekurentne kod djece mlađe od 13 godina (više od dva slučaja tokom 2 godine promatranja): septikemija, upala pluća , meningitis, lezije kostiju ili zglobova, apscesi uzrokovani Haemophilus influenzae, streptokoki. 2. Diseminirana kokcidioidomikoza (ekstrapulmonalna lokalizacija). 3. HIV encefalopatija 4. Histoplazmoza, diseminirana sa ekstrapulmonalnom lokalizacijom. 5. Izosporoza sa dijarejom koja traje duže od 1 mjeseca. 6. Kaposijev sarkom kod ljudi bilo koje dobi. 7. B-ćelijski limfomi (osim Hodgkinove bolesti) ili limfomi nepoznatog imunofenotipa. 8. Ekstrapulmonalna tuberkuloza. 9. Salmonela septikemija se ponavlja. 10. HIV distrofija.

Najčešći su pneumocistična pneumonija, kriptokokni meningoencefalitis, generalizirana infekcija citomegalovirusom (encefalitis, retinitis, ezofagitis, hepatitis, kolitis), sepsa mješovite etiologije, generalizirani oblik Kaposijevog sarkoma, plućna tuberkuloza.

Sve ove bolesti nastaju sa oštećenjem jednog ili više organa i sistema: mozga, pluća, jetre, gastrointestinalnog trakta i veoma su progresivne. Bolesti koje definiraju AIDS pojavljuju se u različitim kombinacijama, a čak ni adekvatna terapija ne donosi očekivani učinak.

Kliničke varijante AIDS-a: infektivna, neuro-, onkološka AIDS, ovisno o rasprostranjenosti različitih klinika.

HIV: dijagnoza i liječenje, prevencija

Sindrom stečene imunodeficijencije jedan je od ključnih problema modernog društva već više od četrdeset godina. Stoga dijagnoza HIV-a sada privlači veliku pažnju i resurse. Uostalom, što se prije otkrije virus koji uništava imunološki sistem tijela, veće su šanse da se izbjegne smrt.

Skraćenica HIV krije definiciju virusa ljudske imunodeficijencije - jednog od najopasnijih među trenutno postojećim. Pod njegovim uticajem, sva zaštitna svojstva tela su duboko potisnuta. To, pak, dovodi do pojave raznih malignih tumora i sekundarnih infekcija.

HIV infekcija može napredovati na različite načine. Ponekad bolest uništi osobu za 3-4 godine, ali u nekim slučajevima može trajati i više od 20 godina. Vrijedi znati da je ovaj virus nestabilan i brzo umire ako je izvan tijela domaćina.

HIV se može prenijeti umjetno, putem krvnog kontakta i putem biokontaktnog mehanizma.

Ako je postojao samo jedan kontakt s nosiocem virusa, tada će rizik od infekcije biti nizak, ali uz stalnu interakciju značajno se povećava. Dijagnoza HIV infekcije je nešto što se ne smije zanemariti, posebno pri mijenjanju seksualnih partnera

Vrijedi obratiti pažnju na parenteralni put infekcije. Može se javiti prilikom transfuzije krvi kontaminirane krvi, ubrizgavanja igalama koje su kontaminirane krvlju HIV inficiranih osoba, kao i prilikom nesterilnih medicinskih zahvata (tetovaže, pirsinga, stomatoloških zahvata korištenjem instrumenata koji nisu pravilno tretirani) .

U isto vrijeme, vrijedi znati da se ne treba bojati kontakta i prijenosa virusa u domaćinstvu. Ali činjenica ostaje: osoba je vrlo podložna HIV infekciji. A ako se ispitanik stariji od 35 godina zarazi, tada se razvoj AIDS-a događa znatno brže nego kod onih koji još nisu prešli tridesetogodišnju granicu.

Naravno, najbolji način da se identifikuje problem, ili nedostatak istog, je dijagnoza HIV-a. Ali koje razloge čovjek može imati za vođenje zdrav imidžživot, idi i provjeri se na infekciju? Naravno, takva inicijativa mora biti na neki način opravdana. Stoga je važno znati koji simptomi mogu ukazivati ​​na destruktivne procese koji potiskuju imuni sistem.

Malo je vjerojatno da će biti moguće identificirati fazu inkubacije virusa bez krvnog testa, jer tijelo u ovom trenutku još ni na koji način ne reagira na neprijateljske elemente.

Druga faza (primarne manifestacije) također može proći nezapaženo bez pomoći ljekara. Ali ponekad dolazi do aktivne replikacije virusa, a tijelo počinje reagirati na to - bilježe se groznica, različiti polimorfni osip, linearni sindrom i faringitis. U drugoj fazi moguće je dodati sekundarne bolesti kao što su herpes, gljivične infekcije, upala pluća itd.

Treću, latentnu fazu karakterizira postupno povećanje imunodeficijencije. Zbog činjenice da ćelije zaštitnog sistema umiru, dinamika njihove proizvodnje se povećava, a to omogućava kompenzaciju značajnih gubitaka. U ovoj fazi postoji nekoliko limfni čvorovi koji pripadaju različitim sistemima mogu se upaliti. Ali jaka bolne senzacije međutim, ne primećuju se. U prosjeku, latentni period traje od 6 do 7 godina, ali može trajati i do 20.

U stadijumu sekundarnih bolesti, koji je četvrti stadijum, javljaju se prateće infekcije gljivičnog, bakterijskog protozoalnog, virusnog porekla, kao i maligne formacije. Sve se to događa u pozadini teške imunodeficijencije.

Metode za dijagnosticiranje HIV infekcije

Govoreći o dubokoj represiji odbrambeni mehanizmi tijela zbog izloženosti virusu, vrijedi napomenuti da budućnost pacijenta u ovom slučaju direktno ovisi o pravovremenoj i točnoj dijagnozi.

U tu svrhu u moderne medicine Koriste se različiti test sistemi koji se zasnivaju na imunohemiluminiscentnim i enzimski vezanim imunosorbentnim testovima krvi. Ove tehnike omogućavaju određivanje prisutnosti antitijela koja pripadaju različitim klasama. Ovaj rezultat pomaže da se značajno poveća informativnost metoda analitičke, kliničke specifičnosti i osjetljivosti pri radu sa zaraznim bolestima.

Zanimljiva je i činjenica da je upravo metoda lančane reakcije polimerazom omogućila da se dijagnoza HIV-a podigne na fundamentalno novi nivo. Za istraživanje su pogodni različiti biološki materijali: krvna plazma, biopsija, struganje, serum, cerebrospinalna ili pleuralna tečnost.

Ako govorimo o laboratorijskim metodama istraživanja, one su prvenstveno usmjerene na identifikaciju nekoliko ključnih bolesti. Riječ je o HIV infekciji, tuberkulozi, svim polno prenosivim infekcijama i virusnom hepatitisu.

Za identifikaciju virusa imunodeficijencije koriste se i molekularni genetski i serološki testovi. U prvom slučaju se određuju RNA virusa i DNK provirusa, u drugom slučaju se analiziraju antitijela na HIV i detektuje se antigen P24.

U klinikama koje koriste, da tako kažem, klasične metode U dijagnostici se pretežno koristi standardni protokol serološkog testiranja.

Rana dijagnoza HIV-a

Ova vrsta utvrđivanja činjenice infekcije neophodna je kako bi se što ranije identifikovala opasnost od oštećenja imunološkog sistema. Ovo, prvo, omogućava vam da izbjegnete širenje infekcije, a drugo, utičete na bolest u početnoj fazi.

Ako uzmemo u obzir primjer Rusije, klinička klasifikacija HIV infekcije uvedena je u vojsci i mornarici Ruske Federacije. To je dalo pozitivne rezultate: proces rane kliničke dijagnoze postao je mnogo lakši.

Uobičajeni simptomi koji ukazuju na moguće oštećenje imunološkog sistema uključuju glavobolju, noćno znojenje i nemotivisani umor. Također je moguće razviti temperaturu praćenu znacima upale krajnika. To znači da temperatura raste do 38 stepeni ili više, a istovremeno se povećavaju krajnici i javlja se bol prilikom gutanja. Sve to upotpunjuje brzi gubitak težine. Štaviše, ovi simptomi su često složeni.

U nekim slučajevima, HIV infekcija ranim fazama može se manifestirati u obliku različitih promjena u stanju kože. Riječ je o pegama, rozeoli, pustulama, furunkulozi itd. Rana dijagnoza HIV-a uključuje i rad sa simptomima kao što su generalizirano ili ograničeno povećanje perifernih limfnih čvorova.

Ako postoji istovremeni rast više limfnih čvorova, u trajanju od tri mjeseca ili više, iu različitim grupama, osim područje prepona, odnosno postoje svi razlozi za sumnju na virus ljudskog imunog sistema.

O dijagnostici više kasni period, morate obratiti pažnju na manifestaciju sekundarna imunodeficijencija, koji se često javlja pod maskom različitih kliničkih simptoma. Riječ je o sljedećim manifestacijama:

• nemotivirana generalizirana periferna limfadenopatija;
• artralgija nepoznate etiologije, koja ima valovit tok;
• ARVI (ARI), upalne lezije pluća i respiratornog trakta, koji se prilično često osećaju;
• groznica nepoznatog porijekla i produžena niska temperatura;
• opća intoksikacija, koja se manifestuje kroz nemotivisanu slabost, umor, letargija itd.

Uključena dijagnoza HIV-a kasna faza uključuje pregled bolesti kao što je Kaposijev sarkom, koji se manifestuje pojavom višestrukih neoplazmi, često u gornjem dijelu tijela kod mladih osoba, praćene dinamičnim razvojem i metastazama.

Lančana reakcija polimeraze

Prilikom razmatranja različitih metoda za dijagnosticiranje HIV infekcije, na to vrijedi obratiti posebnu pažnju. Odmah treba napomenuti da ovaj test krvi može biti usmjeren na kvantitativne i kvalitativne karakteristike.

Sljedeći zadaci mogu se definirati kao svrha ove metode otkrivanja virusa:

• izvođenje rana dijagnoza HIV infekcija;
• razjašnjavanje prisustva upitnih rezultata kao rezultat imunobloting studije;
• identifikacija specifične faze bolesti;
• praćenje efikasnosti liječenja usmjerenog na suzbijanje virusa.

Ako govorimo o primarnoj infekciji, treba napomenuti da ova tehnika omogućava određivanje HIV RNK u krvi pacijenta nakon 14 dana od trenutka infekcije. Ovo je veoma dobar rezultat. U ovom slučaju, rezultat same studije imat će kvalitativni izraz: ili pozitivan (virus je prisutan) ili negativan.

Kvantitativna PCR ekspresija

Ova vrsta polimerazne lančane reakcije koristi se za određivanje vjerovatne stope progresije AIDS-a i za predviđanje životnog vijeka pacijenta.

Kvantitativno određivanje HIV RNK ćelija u krvi omogućava da se razume kada bolest ulazi u kliničku fazu.

Vrijedno je obratiti pažnju na činjenicu da laboratorijske dijagnostičke metode za HIV daju preciznije rezultate ako je biomaterijal potreban za analizu ispravno određen i njegovo prikupljanje se provodi kompetentno.

Za kvalitetno praćenje zaraženih osoba potrebno je (ako je moguće) koristiti Kompleksan pristup proučiti imunološki status pacijenta. Riječ je o kvantitativnom i funkcionalnom određenju svih dijelova odbrambenog sistema: ćelijskog, humoralnog imuniteta i nespecifične rezistencije kao takve.

Laboratorijska dijagnostika

U savremenim laboratorijskim uslovima sve više se koristi višestepena metoda za procenu stanja imunog sistema. Ova tehnika često uključuje određivanje subpopulacije imunoglobulina i limfocita u krvi. To znači da se u obzir uzima omjer CD4/CD8 ćelija. Ako rezultat pokazuje manji od 1,0, onda postoji razlog za sumnju na imunodeficijenciju.

Laboratorijska dijagnoza HIV infekcije mora uključiti ovaj test, jer ovaj virus karakterizira selektivno oštećenje CD4 limfocita, što dovodi do primjetnog kršenja gore navedenog omjera (manje od 1,0).

Za procjenu imunološkog statusa, ljekari mogu provesti test na prisustvo „grubih“ ili općih defekata u sistemu humoralnog i ćelijskog imuniteta. Govorimo o hipogamaglobulinemiji ili hipergamaglobulinemiji u terminalni stepen, kao i smanjenje proizvodnje citokina, povećanje koncentracije cirkulirajućih imunoloških kompleksa i slabljenje odgovora limfocita na mitogene i antigene.

Vrijedi obratiti pažnju na činjenicu da laboratorijska dijagnoza HIV-a ima dvije ključne faze:

1. Laboratorija za skrining. Ako se dobije pozitivan rezultat ELISA (enzimski imunosorbentni test), onda se ponavlja još dva puta u istom sistemu i bez promjene seruma. U slučaju da dva od tri pregleda dovedu do otkrivanja uticaja virusa, serum se šalje na dalje ispitivanje u referentnu laboratoriju.
2. Druga faza, koja uključuje laboratorijske dijagnostičke metode za HIV infekciju, je utvrđivanje stanja imunološkog sistema. Izvodi se u gore navedenoj referentnoj laboratoriji. Ovdje se pozitivni serum ponovo testira ELISA-om, ali pomoću drugačijeg test sistema, koji se od prethodnog razlikuje po sastavu antigena, antitijela ili formatu samih testova. Ako se utvrdi negativan rezultat, ponavlja se ispitivanje u trećem test sistemu. Ako utjecaj virusa na kraju nije otkriven, tada se evidentira odsustvo HIV infekcije. Ali ako je rezultat pozitivan, serum se ispituje linearnim ili imunoblotom.

U konačnici, takav algoritam dovodi do pozitivnih, neutralnih ili negativnih rezultata.

Svaki građanin treba da zna da mu je HIV dijagnostika dostupna. SIDA se može identifikovati u ustanovama privatnog, opštinskog ili državnog sistema zdravstvene zaštite.

Naravno, identifikacija virusa bi bila od male koristi u nedostatku različitih metoda utjecaja na infekciju. I iako u ovom trenutku još uvijek ne postoji cjepivo koje bi moglo potpuno neutralizirati virus, kompetentna dijagnoza, liječenje HIV-a i naknadna prevencija mogu značajno poboljšati stanje pacijenta i time mu produžiti život. Ovu tezu potvrđuje i podatak da je prosječan životni vijek muškaraca koji su započeli pravovremeno liječenje HIV-a 38 godina. Žene koje se počnu boriti protiv virusa imunodeficijencije žive u prosjeku 41 godinu.

Nakon postavljanja dijagnoze, liječenje HIV-a se svodi na korištenje nekoliko tehnika. Jedna od najčešćih je aktivna antiretrovirusna terapija, poznata i kao HAART. Ako se ova vrsta liječenja primjenjuje pravovremeno i pravilno, možete značajno usporiti razvoj AIDS-a ili ga potpuno zaustaviti.

Suština HAART-a je da se istovremeno koristi više lijekova, čija je svrha da utiču na različite mehanizme razvoja virusa imunodeficijencije.

Nakon što se različitim dijagnostičkim metodama HIV-a utvrdi činjenica infekcije, mogu se koristiti lijekovi koji imaju sljedeće efekte:

Imunološki. Stabiliziranje imuni sistem, povećava se nivo T-limfocita, obnavlja se zaštita od raznih infekcija.

Klinički. Sprečava se razvoj AIDS-a i bilo koje njegove manifestacije, produžava život oboljelima uz očuvanje svih tjelesnih funkcija.

Virološki. Umnožavanje virusa je blokirano, zbog čega se virusno opterećenje smanjuje i nakon toga se fiksira na niskom nivou.

Teško je precijeniti značaj takvih mjera za uticaj na bolest kao što su dijagnoza, liječenje i prevencija HIV infekcije. Stoga, najbolja stvar koja se može učiniti nakon pozitivnog rezultata testa na infekciju je odmah započeti borbu protiv bolesti. Druga metoda koja može pomoći u tome je virološki tretman.

U ovom slučaju govorimo o upotrebi lijekova koji ne dozvoljavaju virusu da se veže za T-limfocit i uđe u tijelo. Ovi lijekovi se nazivaju inhibitori penetracije. Konkretan primjer je Celsentry.

Inhibitori virusne proteaze mogu se koristiti za suzbijanje HIV-a. Svrha ove grupe lijekova je spriječiti inficiranje novih limfocita. To su lijekovi kao što su Viracept, Reyataz, Kaletra itd.

Treća grupa lokalnih lijekova su inhibitori reverzne transkriptaze. Potrebni su da blokiraju enzim koji omogućava RNA virusa da se umnožava u jezgri limfocita. Takve metode mogu imati značajan utjecaj na problem kao što je HIV infekcija. Dijagnoza, liječenje i prevencija AIDS-a je posao kvalifikovanih ljekara, tako da algoritam upotrebe lijekova treba da sastave oni.

Po potrebi se mogu koristiti i imunološke i kliničke intervencije.

Svjetska zdravstvena organizacija predlaže sledećim metodama borba protiv HIV infekcije:

Prevencija seksualnog prijenosa. To uključuje zaštićeni seks, distribuciju kondoma, tretman spolno prenosivih bolesti i obrazovne programe.

Za trudnice kod kojih je dijagnosticirana HIV infekcija - dijagnostika, prevencija korištenjem odgovarajućih hemikalije, kao i stručno savjetovanje i liječenje.

Organizacija prevencije putem krvnih pripravaka. U ovom slučaju govorimo o antivirusnoj obradi i skriningu donatora.

Društveni i zdravstvenu zaštitu pacijenata i njihovih porodica.

Kako biste bili sigurni da dijagnostika HIV-a ne otkrije prisustvo virusa, morate slijediti jednostavna pravila sigurnost:

ako krv zaražene osobe dospije na kožu, treba je odmah isprati sapunom i vodom, a zatim tretirati područje kontakta alkoholom;

ako je oštećenje uzrokovano predmetom koji sadrži elemente virusa, tada se rana mora komprimirati, krv istisnuti, područje tretirati vodikovim peroksidom, a rubovi kauterizirati jodom;

nikada ne koristite špriceve čija je sterilnost ugrožena;

Tokom seksualnog odnosa koristite kondom, a bolje je prvo provjeriti partnera na infekciju.

Zahvaljujući činjenici da dijagnoza HIV-a ne miruje, hiljade ljudi ima priliku da započne liječenje na vrijeme i značajno produži svoj životni vijek. Glavna stvar je ne zanemariti očigledne simptome i ne plašiti se ići kod doktora.

Laboratorijska dijagnostika HIV infekcije

Testiranju na HIV infekciju podliježu sljedeće:

2. Osobe sa sumnjom ili potvrđenom dijagnozom: bakterijske infekcije kod dece mlađe od 13 godina, višestruke i rekurentne; kandidijaza jednjaka, dušnika, bronha ili pluća; invazivni rak grlića materice; diseminirana ili ekstrapulmonalna kokcidioidomikoza; ekstrapulmonalna kriptokokoza; kriptosporidioza s proljevom od 1 mjeseca ili više; citomegalovirusna infekcija drugih organa, osim jetre, slezene, limfnih čvorova kod pacijenata starijih od 1 mjeseca; citomegalovirusni retinitis sa gubitkom vida; herpetična infekcija koja uzrokuje multifokalne čireve koji ne zacjeljuju u roku od 1 mjeseca, ili bronhitis, upalu pluća, ezofagitis; diseminirana ili ekstrapulmonalna histoplazmoza; izosporoza s dijarejom duže od 1 mjeseca; rasprostranjena ili ekstrapulmonalna tuberkuloza; plućna tuberkuloza kod odraslih ili adolescenata starijih od 13 godina; ekstrapulmonalna tuberkuloza; druga bolest uzrokovana mikobakterijama osim M. tuberculosis diseminirana ili vanplućna; pneumonija uzrokovana pneumocistisom; progresivna multifokalna leukoencefalopatija; Salmonella (osim Salmonella typhi) septikemija, ponavljajuća; toksojloza mozga kod djece starije od 1 mjeseca; Kaposijev sarkom; limfoidna intersticijska pneumonija kod djece mlađe od 13 godina; Burkittov limfom; imunoblastični limfom; primarni limfom mozga; sindrom gubitka, hepatitis B, prijenos HBsAg; infektivna mononukleoza; rekurentni herpes zoster kod osoba starijih od 60 godina; spolno prenosivih bolesti.

U visokospecijalizovanoj laboratoriji izvodi se sledeće:

a) određivanje antitela, antigena i imunoloških kompleksa koji cirkulišu u krvi; kultiviranje virusa, identificiranje njegovog genomskog materijala i enzima;

b) procjena funkcija ćelijskog dijela imunog sistema. Glavna uloga pripada serološkim dijagnostičkim metodama koje imaju za cilj određivanje antitijela, kao i antigena patogena u krvi i dr. biološke tečnosti tijelo.

Testiranje na HIV antitela vrši se na:

a) sigurnost transfuzije i transplantacije krvi;

b) nadzor, testiranje u cilju praćenja prevalencije HIV infekcije i proučavanja dinamike njene prevalencije u određenoj populaciji;

c) dijagnosticiranje HIV infekcije, odnosno dobrovoljno ispitivanje krvnog seruma praktično zdravih ljudi ili pacijenata sa različitim kliničkim znacima i simptomima sličnim HIV infekciji ili AIDS-u.

Sistem za laboratorijsku dijagnostiku HIV infekcije izgrađen je na principu od tri faze. Prva faza je skrining, namijenjen za obavljanje primarnih testova krvi na prisustvo antitijela na HIV proteine. Druga faza je referentna - dozvoljava, uz pomoć specijalne metodološke tehnike razjasniti (potvrditi) primarni pozitivan rezultat dobijen u fazi skrininga. Treća faza je ekspertna faza, namijenjena konačnoj provjeri prisustva i specifičnosti markera HIV infekcije identifikovanih u prethodnim fazama laboratorijske dijagnostike. Potreba za nekoliko faza laboratorijske dijagnostike je prvenstveno zbog ekonomskih razloga.

U praksi se koristi nekoliko testova koji omogućavaju identifikaciju osoba zaraženih HIV-om s dovoljnim stepenom pouzdanosti:

ELISA test (enzimski imunosorbentni test) za detekciju prvog nivoa, odlikuje se visokom osetljivošću, iako manje specifičnosti od sledećeg;

Imuni blot (Western-blot), vrlo specifičan i najčešće korišten test koji vam omogućava da razlikujete HIV-1 i HIV-2;

Test antigenemije p25, efikasan u početnim fazama infekcija;

Lančana reakcija polimeraze (PCR).

U slučajevima masovnog skrininga uzoraka krvi, preporučuje se testiranje mješavina seruma iz grupe ispitanika, sastavljenih na način da konačno razrjeđenje svakog uzorka ne prelazi 1:100. Ako je smjesa serum-struja pozitivna, testira se svaki serum u pozitivnoj smjesi. Ova metoda ne dovodi do gubitka osjetljivosti i kod ELISA i imunoblota, ali smanjuje troškove rada i troškove inicijalnog pregleda za 60-80%.

Tokom primarne serodijagnostike HIV infekcije, ukupna antitijela se određuju skrining testovima - ELISA i reakcijama aglutinacije. U drugoj (arbitražnoj) fazi koristi se složeniji test - imunoblot, koji omogućava ne samo da se potvrdi ili odbije početni zaključak, već i da se to učini na razini određivanja antitijela na pojedinačne proteine ​​virusa.

Vezani imunosorbentni test(ELISA) je glavna i najčešće korištena metoda za određivanje antitijela na HIV. Ali nedostaci upotrebe ELISA u serodijagnostici HIV infekcije uključuju česte lažno pozitivni. S tim u vezi, rezultat u ELISA testu nije osnova za zaključak o HIV seropozitivnosti ispitanika. To je zbog nedovoljnog pročišćavanja imunosorbenta od balastnih proteina; spontano vezivanje serumskih antitijela za plastiku, ako su njegova područja koja nisu zauzeta imunosorbentom nedovoljno blokirana ili uopće nisu blokirana posebnim neutralnim proteinom; unakrsna interakcija sa HIV imunosorbentnim proteinima različitih proteina prisutnih u krvi osoba sa određenim, često autoimunim, patološkim procesima kao što su multipla skleroza, SLE, tuberkuloza; kod čestih davanja, infektivnih i onkoloških bolesti, opekotina, trudnoće, ponovljenih transfuzija krvi, transplantacija organa i tkiva, kao i kod osoba na hemodijalizi; s prisustvom reumatoidnog faktora u krvi, što često izaziva lažno pozitivne reakcije na HIV; prisustvo u krvi osoba koje se ispituju antitijela na HIV gag proteine ​​i, prije svega, na protein p24 (očigledno se stvaraju antitijela na egzo- ili endogene retroviruse koji još nisu identificirani). Budući da se anti-p24 sintetiše bez greške u ranim fazama HIV serokonverzije, sprovodi se dalje imunološko praćenje osoba sa antitijelima na HIV gag proteine, kao i njihovo isključenje iz donacije.

Osjetljivost i specifičnost enzimskih imunotestova se stalno povećavaju. Kao rezultat toga, ELISA četvrte generacije nije inferiorna u svojim dijagnostičkim sposobnostima u odnosu na imunoblotiranje i može se koristiti ne samo u skriningu, već iu fazi potvrde dijagnoze HIV infekcije [Smolskaya T. T., 1997.].

Imunobloting je konačna metoda serološke dijagnoze, koja omogućava donošenje konačnog zaključka o HIV pozitivnosti ili negativnosti ispitanika.

Postoji jasna korelacija između rezultata proučavanja seruma u imunoblotingu i ELISA-i - dvostruko pozitivni serumi u ELISA-i sa različitim test sistemima u 97-98% slučajeva onda se ispostavi da su HIV pozitivni u imunoblotingu. Ako se serumi u ELISA testu ispostavi da su pozitivni samo u jednom od dva korišćena test sistema, u imunoblotu su pozitivni samo u 4% slučajeva. U 5% slučajeva, kada se provode potvrdne studije kod osoba sa pozitivnim podacima, ELISA imunoblot može dati “neizvjesne” rezultate, a među njima, u otprilike 20% slučajeva, “neizvjesni” rezultati su uzrokovani antitijelima na HIV-1 gag proteine (str. 55, str. 25, str. 18). Prisustvo antitijela samo na HIV-1 gag proteine ​​je razlog za dodatni pregled krvni serum za HIV-2 infekciju.

Evaluacija rezultata imunoblotinga se vrši striktno u skladu sa uputstvima koja se isporučuju uz sistem za testiranje. Ako uputstva ne daju smjernice o tome kako tumačiti rezultate, treba koristiti kriterije SZO.

Ako se u referentnoj fazi laboratorijske dijagnoze HIV infekcije dobiju pozitivni rezultati istraživanja i negativan rezultat imunobloting testa, obavezna ponovljena stručna dijagnoza provodi se 6 mjeseci nakon prvog pregleda.

Ako rezultati imunoblotinga 12 mjeseci nakon proučavanja prvog uzorka ostanu negativni ili neodređeni, tada se, u nedostatku faktora rizika, kliničkih simptoma ili drugih faktora povezanih s HIV infekcijom, subjekt uklanja sa dispanzerskog nadzora.

Od seroloških metoda, u slučaju neodređenih rezultata, imunoblot se koristi kao stručna dijagnoza radioimunoprecipitacija(POČIVAJ U MIRU). Zasniva se na korištenju virusnih proteina obilježenih radioaktivnim jodom, a precipitati se detektuju pomoću beta brojača. Nedostaci metode uključuju visoku cijenu opreme i potrebu za opremanjem posebnih prostorija za te svrhe.

Osobe kod kojih je dijagnosticirana HIV infekcija podliježu stalnom dinamičkom praćenju uz obavezni laboratorijski pregled svakih 6 mjeseci.

Lančana reakcija polimeraze (PCR) otkriva prethodno umnožene nukleotidne sekvence specifične za genom datog patogena. Izolovana multiplikacija gena ili njegovog fragmenta, nazvana amplifikacija, PCR omogućava izvođenje in vitro pomoću enzima termostabilne DNK polimeraze. Za 2-3 sata, PCR vam omogućava da dobijete milione kopija određene regije virusa. Tokom infekcije HIV-om, iz ćelijske RNK, uključujući RNK virusa, ako je reprodukovana u ćeliji ili je integrisana u njen genom, korišćenjem reverzne transkripcije i hibridizacije sa označenim oligonukleotidnim „sondama“, dobija se dovoljna količina provirusne DNK za analiza, koja je identifikovana i kvantitativno okarakterisana, u odnosu na pripadnost HIV genomu, korišćenjem radioaktivne ili druge oznake sonde, kojom se utvrđuje homologija DNK i aminokiselinskih sekvenci specifičnih za virus. Osetljivost PCR-a je detekcija virusnih gena u jednoj od pet hiljada ćelija.

PCR, uključujući kvantitativni, može se koristiti samo za određivanje virusnog opterećenja u plazmi kako bi se odlučilo da li započeti liječenje lijekom za pacijenta ili promijeniti antiretrovirusne lijekove. PCR se ne može preporučiti za dijagnosticiranje HIV infekcije, jer čak i najsavremenije metode i reagensi mogu odrediti virusno opterećenje koje nije niže od određenog nivoa - 50 kopija/ml. A složenost PCR testiranja i njegova visoka cijena (oko 200 dolara) negiraju njegovu široku upotrebu kao metode rutinske laboratorijske dijagnoze HIV infekcije. Dakle, PCR ostaje nezamjenjiv samo za procjenu virusnog opterećenja u plazmi kod pacijenata s već utvrđenom dijagnozom HIV infekcije kako bi se riješilo pitanje terapije bolesnika.

Faze laboratorijske dijagnoze HIV infekcije prikazane su šematski na Sl. 1.

Rice. 1. Faze laboratorijske dijagnostike HIV infekcije

Tokom HIV infekcije postoji period „tamnog laboratorijskog prozora“ kada je količina antitela protiv HIV-a nedovoljna za osetljivost test sistema. Ovaj period se kreće od jedne sedmice do tri mjeseca od trenutka infekcije HIV-om, u zavisnosti od nivoa osjetljivosti test sistema. S obzirom na ovu pojavu, poteškoće se javljaju tokom pregleda darovana krv od osoba koje borave u navedenom periodu HIV infekcije. Stoga je u većini zemalja svijeta uveden sistem korištenja krvi tek nakon što se ona čuva 3-6 mjeseci kako bi se izvršio obavezni ponovni pregled na HIV infekciju davalaca ovih doza krvi i njenih komponenti. .

Stage primarne manifestacije karakterizira aktivnost replikacijskog procesa. Nastala viremija i antigenemija uzrokuju stvaranje specifičnih antitijela IgM klase: anti-p24, anti-gp41, anti-gp120. Antigen p24 kod nekih zaraženih osoba može se otkriti u krvi ELISA-om već 2 sedmice nakon infekcije i može se otkriti do 8. sedmice. Sljedeći u klinički tok HIV infekciju karakteriše drugo povećanje nivoa p24 proteina u krvi, javlja se tokom formiranja stadijuma AIDS-a.

Pojava potpune serokonverzije, kada se u perifernoj krvi registruje visok nivo specifičnih IgG antitela na strukturne proteine ​​HIV gp41, p24, gpl20, značajno olakšava dijagnozu HIV infekcije. Većina komercijalnih kompleta dizajnirana je da indicira upravo takva antitijela.

Poteškoće u otkrivanju antitijela kod pacijenata sa HIV infekcijom mogu nastati u periodima masivne viremije i antigenemije, kada se postojeća specifična antitijela u krvi potroše za vezanje virusnih čestica, a proces replikacije je ispred proizvodnje novih antivirusnih antitijela.

Kod osoba sa inicijalno oslabljenim imunološkim sistemom viremija i antigenemija se javljaju ranije i ostaju na visokom nivou do ishoda bolesti. Istovremeno, takvi pacijenti imaju nizak sadržaj slobodnih antitela na HIV, zbog dva razloga - nedovoljne proizvodnje antitela od strane B limfocita i vezivanja HIV viriona i rastvorljivih proteina antitelima, pa se test sistemi sa preosjetljivost ili modifikacije metoda ispitivanja koje uključuju korak oslobađanja antitijela iz imunoloških kompleksa.

Uprkos obilju specifičnih markera HIV infekcije, najčešće se utvrđuje prisustvo ukupnih antitela na HIV proteine. Termin "ukupno" podrazumeva prisustvo dve klase antitela (IgG i IgM) i širok raspon antitela na različite, prvenstveno na strukturne, proteine ​​HIV-a.

Određivanje CD4 ćelija. Glavni klinički i laboratorijski pokazatelj za dijagnosticiranje stadijuma HIV infekcije, stepen uništenja imunog sistema kod pacijenata u Svakodnevni život Određivanje sadržaja CD4+ limfocita postalo je: smanjenje nivoa ispod 200 ćelija/mm3 je glavni kriterijum za dijagnostikovanje AIDS-a. Smatra se da sve osobe zaražene HIV-om s brojem CD4+ limfocita od 200 ćelija/mm3 ili manje zahtijevaju i antivirusnu terapiju i profilaksu protiv Pneumocistis pneumonije. I iako 1/3 HIV-om zaraženih osoba sa brojem CO4+ limfocita manjim od 200 ćelija/mm3 nema kliničke manifestacije, iskustvo je pokazalo da se njihovi simptomi razvijaju u naredna 2 mjeseca, pa se svi smatraju pacijentima u fazi AIDS-a.

Dijagnoza HIV infekcije

Kako saznati da li osoba ima HIV? Najčešća metoda za dijagnosticiranje HIV infekcije je enzimski imunosorbentni test (ELISA). Za otkrivanje antitijela na HIV u krvnom serumu koriste se imunoenzimski test sistemi.

HIV infekciju potvrđuju dva različita testa – skrining test i potvrdni test. Zbog svoje visoke osjetljivosti, skrining testovi mogu dati lažno pozitivne rezultate. Stoga, obično prilikom primanja primarnog pozitivan rezultat uzima se isti uzorak krvi i drugi put se ponavlja skrining test, a ako je opet pozitivan, tek tada se radi potvrdni test druge vrste. Potvrdni testovi se izvode samo na uzorcima krvi koji su više puta pozitivni („reaktivni“).

Najčešći skrining test je enzimski imunosorbentni test (ELISA). Obično se imunoblotiranje koristi kao potvrdni test. Kombinacija dvije različite vrste testova osigurava da su dobijeni rezultati “visoko tačni”.

Sistemi za skrining test koriste veštački stvorene HIV proteine ​​koji "hvataju" specifična antitela koja telo proizvodi kao odgovor na virusne proteine. Jednom kada su antitijela uhvaćena, "mogu se otkriti reagensima koji se koriste zajedno s indikatorom, kao što je enzim, koji uzrokuje promjenu boje." Promjene boje očitava mašina, koja određuje rezultat. Imunobloting radi na sličan način, ali koristi električno polje za razlikovanje različitih komponenti na osnovu njihove molekularne težine. Ovo omogućava otkrivanje antitijela na specifične virusne antigene, koja se zatim prikazuju na papiru kao prepoznatljive „pruge“. Moderni sistemi za testiranje mogu otkriti HIV infekciju za 3-5 sedmica kod većine ljudi.

Ako je postojao rizik od infekcije HIV-om, kada se možete testirati?

Enzimski imunosorbentni test (ELISA), koji se koristi za dijagnosticiranje HIV-a, može pokazati rezultate tek nekoliko sedmica nakon infekcije. Ova vrsta analize ne određuje sam virus, već antitijela na njega. Kod nekih ljudi, antitijela su prisutna u dovoljnim količinama u krvi nakon 2 sedmice. Međutim, kod većine ljudi potrebno je više vremena za stvaranje antitijela (serokonverzija). Da bi rezultat testa bio dovoljno pouzdan, potrebno je da prođe oko 3 mjeseca od rizične situacije. Ponekad formiranje antitijela traje duže - od 3 do 6 mjeseci.

Ako je rezultat testa negativan nakon 3 mjeseca, da li je potrebno ponovno testiranje nakon 6 mjeseci?

Za veliku većinu ljudi test je prilično pouzdan nakon 3 mjeseca (kod većine ljudi se antitijela pojavljuju i ranije). Mogućnost infekcije možete potpuno isključiti testiranjem nakon 6 mjeseci.

Koliko dugo trebam čekati rezultate testa?

Ovo zavisi od karakteristika laboratorije u kojoj se vrši ispitivanje. ELISA test se može uraditi u toku istog dana, ali u većini laboratorija ovaj period može biti od 1-2 dana do 2 nedelje. S obzirom na to da čekanje na rezultate može biti vrlo neugodan period, najbolje je da ovo pitanje razjasnite unaprijed, prije polaganja testa. Također možete saznati da li će vikendi i praznici utjecati na vrijeme testiranja.

Koliko je pouzdan rezultat testa?

Ponekad ELISA ima lažno pozitivne rezultate (u oko 1% slučajeva), uzrok takvog rezultata može biti trudnoća, razne virusne infekcije ili obična nezgoda. Nakon što dobijete pozitivan rezultat, više tačan test- imunoblot, na osnovu čijih rezultata se postavlja dijagnoza. Pozitivan rezultat imunoblota nakon pozitivnog ELISA testa je 99,9% pouzdan - ovo je maksimalna preciznost za bilo koji medicinski test. Ako je imunoblot negativan, to znači da je prvi test bio lažno pozitivan, a zapravo osoba nema HIV.

Šta je neizvjestan (sumnjiv) rezultat?

Ako je ELISA pozitivna ili negativna, tada imunoblot može biti pozitivan, negativan ili neodređen. Neodređeni rezultat imunoblota, tj. prisustvo najmanje jednog proteina virusa u imunoblotu može se uočiti ako se infekcija dogodila nedavno i još uvijek ima malo antitijela na HIV u krvi, u kom slučaju će imunoblot postati pozitivan nakon nekog vremena. Također, može se pojaviti neizvjestan rezultat u odsustvu HIV infekcije sa hepatitisom, nekima hronične bolesti metaboličke prirode ili tokom trudnoće. U tom slučaju ili će imunoblot postati negativan ili će se pronaći uzrok neodređenog rezultata.

Da li je potrebno da se testiram na HIV kada se prijavljujem za posao?

Prema zakonodavstvu Ruske Federacije, testiranje na HIV može biti obavezno samo za davaoce krvi, strane državljane i osobe bez državljanstva koje žele ući na teritoriju Ruske Federacije na period duži od tri mjeseca, kao i medicinsko osoblje koje direktno radi sa krv; lica u zatvoru. Svi ostali građani dobrovoljno se testiraju na HIV.

HIV infekcija– bolest koja je rezultat infekcije virusom humane imunodeficijencije (HIV).

HIV je RNA virus koji pripada porodici retrovirusa.

Zajedničko svojstvo retrovirusa je prisustvo enzima - reverzne transkriptaze (revertaze), koja "uklanja" genetski tačnu kopiju u obliku DNK iz RNK. Na osnovu morfologije, strukture genoma i drugih karakteristika, HIV pripada porodici lentivirusa, odnosno virusa sporih infekcija. Opšte karakteristike bolesti uzrokovanih virusima ove porodice su: dug period inkubacije koji nema tačne datume (od 1 mjeseca do 10 godina ili više); neprimjetan, asimptomatski početak bolesti; polako rastuća klinička slika; patogeneza je posredovana imunološkim sistemom i velika brzina genetska varijabilnost virusa. Sve to uvelike otežava dijagnostiku, liječenje i prevenciju HIV infekcije.

Trenutno su poznata dva tipa HIV-a: HIV-1 i HIV-2. Bolest uzrokovana HIV-2 karakteriše spora dinamika i duži tok.

Epidemiologija i putevi prijenosa:

HIV infekcija je antroponoza, jedini izvor patogena za osobu je nosilac virusa i oboljeli od AIDS-a.

Virusne čestice (virioni) prisutne su u svim biološkim tekućinama u tijelu, ali u različitim koncentracijama. Najviši nivoi virusa su u krvi i sjemenoj tekućini.

Virus se prenosi na tri načina:

- od majke do fetusa/novorođenčeta.

HIV se ne prenosi običnim kontaktom u domaćinstvu ili vazdušnim kapljicama. Nisu zabilježeni slučajevi prenošenja HIV-a putem ujeda insekata koji sišu krv.

Međutim, HIV nije toliko zarazan kao druge SPI. Tako se od više od 1.600 pregledanih seksualnih partnera HIV-inficiranih osoba samo 15% zarazilo ovim virusom.

Razvoj HIV infekcije određuju dva faktora u interakciji: glavno patogeno svojstvo HIV-a, a to je da oslabi imuni sistem zaražene osobe, i specifični imuni odgovor organizma koji se razvija tokom bolesti.

HIV je pantropski, ali njegove glavne ciljne ćelije su T-pomoćne ćelije, koje nose stotine molekula CD4+ receptora na svojoj membrani. U organizmu virus prelazi iz manje agresivnog stanja u agresivnije, što se izražava u progresivnom smanjenju broja CD4+ limfocita u krvi do njihovog potpunog nestanka i dovodi do pogoršanja stanja. kliničku sliku.

Od trenutka infekcije do pojave specifičnih antivirusnih antitela obično prođe 6-8 nedelja. Period između infekcije i pojave detektabilnih antitela na HIV u krvnom serumu naziva se period „prozora“.

S jedne strane, imuni sistem je meta virusa, s druge strane, on sam proizvodi specifična antitijela na njega. Istovremeno, u imunološkom sistemu dolazi do razvoja autoimunih procesa, koji pogoršavaju proces uništavanja ćelija i tkiva tijela.

HIV infekciju karakteriše odsustvo specifične kliničke slike, a njena dijagnoza se obično postavlja na osnovu pažljivo prikupljene istorije bolesti u kombinaciji sa nizom znakova potvrđenih laboratorijskom dijagnostikom. SZO je 1983. godine razvila određene kriterijume po kojima se može utvrditi prisustvo HIV infekcije ako je serološka dijagnostika nedostupna (Bangui kriterijumi). To uključuje:

- gubitak tjelesne težine za više od 10% od prvobitne;

— hronična dijareja duže od mjesec dana;

- produžena groznica tokom jednog mjeseca (konstantna ili povremena).

- uporni kašalj duže od mjesec dana;

- generalizovani svrbežni dermatitis;

- istorija herpes zoster;

- hronična progresivna ili diseminirana herpetična infekcija(herpes simplex);

Dijagnoza HIV infekcije prema ovim kriterijima može se postaviti pacijentu ako se utvrdi da ima istovremeno najmanje dva "velika" znaka i jedan "mali" znak. Dovoljna osnova za postavljanje dijagnoze AIDS-a može biti otkriće generaliziranog Kaposijevog sarkoma ili kriptokoknog meningitisa kod pacijenta. Zbog niske osjetljivosti i specifičnosti ovih kriterija, SZO je naknadno zahtijevala serološku potvrdu dijagnoze.

Klinička klasifikacija HIV infekcije:

Faza primarnih manifestacija:

A. akutna febrilna faza;

B. asimptomatska faza;

B. perzistentna generalizirana limfadenopatija.

Stadij sekundarne bolesti:

A. Gubitak težine manji od 10 kg, površinski bakterijski, virusni, gljivične infekcije kože i sluzokože, herpes zoster, ponovljeni faringitis, sinusitis.

B. Progresivni gubitak težine više od 10 kg, neobjašnjiva dijareja, groznica duže od 1 mjeseca, dlakava leukoplakija, plućna tuberkuloza, ponovljene ili perzistentne bakterijske, gljivične, virusne, protozoalne lezije unutrašnje organe(bez diseminacije) ili duboke lezije kože i sluzokože, ponovljeni i diseminirani herpes zoster, lokalizirani Kaposijev sarkom.

Prisustvo antitela na HIV u zavisnosti od stadijuma bolesti.

Antitela na HIV u krvi

Rezultat HIV testa

II. Primarne manifestacije

B. Asimptomatska faza

III. Sekundarne bolesti

Nakon što virus uđe u tijelo, razmnožava se u krvi. Kod 50% inficiranih osoba u tom periodu može se razviti prodromalno stanje, praćeno porastom tjelesne temperature na 38,5-39,5°C i drugim simptomima sličnim mononukleozi i koje traje od tri do 10 dana. Ovo stanje prolazi, podsjećajući na period oporavka nakon infekcije gripom.

Počevši od 6-8 nedelje bolesti dolazi do povećanja nivoa antitela u krvi, odnosno serokonverzije. Tokom ovog perioda može se razviti generalizovana limfadenopatija i manja imunodeficijencija, ali su kod nekih pacijenata kliničke manifestacije HIV infekcije minimalne. Kod teškog sindroma stečene humane imunodeficijencije (AIDS), brzo se razvijaju oportunističke infekcije unutrašnjih organa koje zahvaćaju nervni sistem. Uočava se aktivacija saprofitne flore na koži i sluznicama. Razvijaju se Kaposijev sarkom i drugi tumori. Mogu se aktivirati infekcije kao što su tuberkuloza, sifilis, duboke mikoze itd. Karakteristična bolest za osobe zaražene HIV-om je Pneumocistis pneumonia. Kod nekih pacijenata jetra i slezena su uvećane, što je nepovoljan znak koji ukazuje na brzo napredovanje procesa. Postoje cerebralni oblici HIV infekcije - kao što su meningitis uzrokovan gljivicama kvasca, toksoplazmatski moždani apscesi, akutni i subakutni encefalitis, izolirani tumori mozga (limfomi). Pacijenti mogu imati različite vaskularne lezije.

Nespecifične dijagnostičke metode uključuju sljedeće: određivanje sadržaja subpopulacija T-limfocita u krvi, procjenu aktivnosti reaktivnosti T-limfocita periferne krvi ili biopsijskog materijala.

Specifične dijagnostičke metode uključuju:

— otkrivanje provirusne DNK ili RNK virusa HIV-a u ljudskim ćelijama pomoću PCR-a;

— otkrivanje zrelih infektivnih viriona u biološkim tečnostima i ćelijama;

— određivanje rastvorljivih virusnih proteina (antigena);

— određivanje antitijela na HIV (ELISA, imunoblot, reakcija aglutinacije, radioimunoprecipitacija).

Najčešća dijagnostička metoda skrininga je ELISA. Negativan rezultat može ukazivati ​​na:

— o odsustvu infekcije;

— o provođenju studije prije početka serokonverzije (tokom perioda „prozora“ ili tokom drugih perioda nestanka titra antitijela).

Pozitivni rezultati mogu biti tačni ili lažni. Lažno pozitivni rezultati se mogu dobiti pri pregledu pacijenata sa hroničnim infektivnim, autoimunim ili onkološkim bolestima, neinficiranih trudnica, pacijenata nakon transfuzije krvi i pacijenata sa hroničnim alkoholizmom. Najranije vrijeme za otkrivanje antitijela na HIV je 3-4 sedmice od datuma infekcije.

Potvrdna analiza. Imunoblot.

Nakon skrining testa, svi pozitivni rezultati se provjeravaju u drugom sistemu enzimskog imunoeseja, a zatim u osjetljivijem testu - imunoblot. Serumi potvrđeni ovim testom mogu se smatrati istinski pozitivnim.

Prije provođenja testa na HIV, pacijent se mora savjetovati (predtestno savjetovanje) o razlozima zbog kojih je test neophodan, a nakon dobijanja rezultata, shodno tome, mora se provesti posttestno savjetovanje kako bi se objasnio rezultat. studije. Povjerljivost se mora održavati u svim fazama dijagnoze i naknadnog liječenja.

Postoje četiri glavna pristupa liječenju HIV infekcije: etiološki, imunostimulirajući, imunoreplacementni i patogenetski (protiv sekundarnih infekcija).

Nukleotidni analozi ili inhibitori drugih klasa imaju sposobnost supresije virusne reverzne transkriptaze. Prvi lijek za liječenje pacijenata sa AIDS-om bio je nukleotidni analog, azidotimidin. Lijek uzrokuje nuspojave, utiče prvenstveno na hematopoezu, a kod većine pacijenata, dugotrajnom upotrebom (više od 6 mjeseci), razvija se rezistencija na njega. Trenutno se koristi preko 10 novih lijekova - inhibitora proteaze i reverzne transkriptaze. Značajno komplicira proces stvaranja efikasni lekovi brza stopa mutacije HIV-a u tijelu, praćena pojavom sojeva otpornih na liječenje.

Samo kombinovani pristup može ograničiti replikaciju virusa i sprečiti razvoj rezistencije na lekove. Trostruka antiretrovirusna terapija (kombinacija tri lijeka na bazi dva analoga nukleozida i inhibitora proteaze) postala je standard.

Proizvedeno na nekoliko različitih metoda. Čini se da nema ničeg lakšeg nego identificirati ovu bolest kroz vađenje krvi. Ali nije tako. Dijagnoza HIV-a se zaista može otkriti na ovaj način, ali se daljnja istraživanja provode različitim metodama. Oni u velikoj mjeri određuju kakav će tretman biti propisan pacijentu i koje će se mjere naknadno poduzeti. Među najčešćim i vrlo efikasnim metodama su skrining analiza i imunobloting. Svaki od njih treba detaljnije razmotriti.

Dijagnoza AIDS-a: skrining analiza

U početnoj fazi dijagnostikovanja HIV infekcije koristi se skrining test ili ELISA metoda. Prilikom razvoja ove metode, virusni proteini su umjetno stvoreni u laboratoriju. Na antitela reaguju na poseban način. Potonji se proizvode u tijelu kada se u njemu pojave stanice zaražene strašnom bolešću. Laboratorijska dijagnoza HIV-a u ovom slučaju se vrši korištenjem umjetnih enzima. Kada stupe u interakciju s antitijelima, dobijaju određenu boju. Traka s indikatorom, nakon što krv dospije na nju, stavlja se ispod posebnog uređaja, uz pomoć kojeg se može utvrditi ima li osoba ovu bolest ili ne. Savremene metode dijagnosticiranja HIV-a, uključujući ELISA, omogućavaju utvrđivanje činjenice infekcije ili njenog odsustva s velikom preciznošću. Ali, kao i sva oprema, aparat za analizu skrininga ima grešku. Zbog toga, ukoliko je potrebno, pacijent ponovo polaže test.

Važno je znati da je ELISA test jedna od najranijih metoda za utvrđivanje prisustva virusa imunodeficijencije u organizmu. HIV infekcija je dijagnoza koja se može otkriti tek nekoliko sedmica nakon infekcije. Kada zaražene ćelije uđu u krvotok, imunološki sistem tijela počinje aktivno da se opire. Stvaraju se antitijela, koja se laboratorijskim ispitivanjem otkrivaju nakon dvije ili tri sedmice. Rana dijagnoza HIV infekcije pomoću ELISA testa omogućava otkrivanje antitijela na virus imunodeficijencije u krvi osobe. To je njegova glavna razlika od ostalih modernih metoda.

Vrijedi napomenuti da neki ljudi imaju antitijela na ovu bolest početi proizvoditi kasnije. Od trenutka infekcije do početka ovog procesa može proći tri do šest sedmica. Zbog toga medicinski stručnjaci preporučuju podvrgavanje skrining testu četiri do pet sedmica nakon nezaštićenog seksualnog odnosa ili drugog razloga za sumnju na slučajnu infekciju.

Metode za laboratorijsku dijagnostiku HIV infekcije pomoću ELISA-e razvijane su tokom dugog vremenskog perioda. Do danas postoje četiri generacije testova. Najprecizniji i najefikasniji od njih su oni koji su nedavno razvijeni. Laboratorijska dijagnoza HIV infekcije i AIDS-a pomoću treće i četvrte generacije ELISA testova provodi se pomoću rekombinantnih proteina i peptida. Osetljivost ovih testova na antitela koja proizvodi organizam je 92 - 93%. Govorimo o ruskim istraživačkim metodama. Evropljani su naučili da rade slične testove sa osjetljivošću od 99%.

Savremene metode laboratorijske dijagnostike HIV infekcije zasnovane na ELISA testu koriste se ne samo za otkrivanje prisustva bolesti. Pomoću skrining analize moguće je pratiti širenje virusa imunodeficijencije, kao i prikupljati testni materijal prije uzimanja krvi od davaoca.

ELISA je standardna metoda za dijagnosticiranje HIV infekcije: kako se radi, zašto daje lažan rezultat?

Dijagnoza HIV-a i AIDS-a pomoću ELISA-e je standardna procedura. Krv pacijenta se uzima iz vene. Za analizu je dovoljno pet mililitara materijala. Klinički HIV tipovi 2 i 1 dijagnostikuju se najmanje osam sati nakon ingestije. Lekari preporučuju da se to radi ujutro na prazan želudac. Rezultati kompletne studije poznati su za dva-tri dana. Ekspresni skrining se obavlja za kraće vreme. To po pravilu traje samo nekoliko sati. Međutim, greška se u ovom slučaju povećava. Ekspresna dijagnoza HIV-a neophodna je u hitnim slučajevima, na primjer, kada je pacijentu potrebna hitna operacija. Takva analiza se mora obaviti prije neplaniranih hirurških intervencija, jer ako pacijent ima virus imunodeficijencije, liječnici primjenjuju povećane sigurnosne mjere. Klinička dijagnoza HIV infekcije u kratkom vremenskom periodu neophodna je i u slučajevima kada se darovana krv mora brzo prikupiti da bi se spasio drugi pacijent.

Postoje slučajevi kada je nekoj osobi dijagnosticirana AIDS ili HIV, ali kao rezultat nije potvrđena, ili obrnuto. Zašto se to dešava u slučaju ELISA testa? Lažno negativan rezultat može biti posljedica činjenice da krv nije pravilno pripremljena za test. Ponekad je razlog tome nepravilno izvršenje njegovog prikupljanja. Lažno negativan rezultat prilikom verifikacije dijagnoze HIV infekcije nije potvrđen čak i ako su materijali za studiju uzeti prerano. Na kraju krajeva, mora da je prošlo najmanje tri nedelje nakon infekcije. Postoje slučajevi kada je rezultat detekcije virusa imunodeficijencije lažno pozitivan. To je povezano sa opšte stanje imunološki i hormonalni sistem ljudskog tijela. U većini slučajeva pacijent ima bolesti koje su rezultat lažno pozitivnog rezultata. Riječ je o alkoholnom hepatitisu, kod kojeg jetra proizvodi posebne enzime, koji mogu uzrokovati pogrešnu dijagnozu HIV-a. Trudnoća i neke autoimune bolesti, uz multipli mijelom također može uzrokovati lažno pozitivan rezultat. Ova lista može uključiti pacijente na dijalizi i osobe koje su vakcinisane neposredno prije diferencijalne dijagnoze HIV-a.

Govoreći o skrining analizi, važno je napomenuti da ova metoda istraživanja zahtijeva potvrdu. Doktori, prije postavljanja dijagnoze HIV-a na osnovu toga, uvijek pošalju pacijenta na imunoblotiranje.

Osnovne metode laboratorijske dijagnostike HIV infekcije: imunobloting

AIDS, čija su dijagnoza i liječenje usko povezani, otkriva se na nekoliko načina. Kao što je već spomenuto, jedan ELISA test nije dovoljan da se konačno utvrdi dijagnoza. Diferencijalna dijagnoza HIV infekcije u ovom slučaju je dopunjena imunoblotingom. U modernoj medicini naziva se konačna potvrdna metoda dijagnoze. U ovom slučaju, za istraživanje se koriste proteini sadržani u krvi pacijenta. Odvajaju se u posebnom gelu, nakon čega laboratorijski radnici imaju priliku proučavati molekularni sastav krvi.

Vrijeme potrebno za dijagnosticiranje HIV-a ovom metodom kreće se od jednog do tri dana. Za ispitivanje se uzima krv iz vene subjekta i stavlja na tester s gelom. Rezultat, koji se dovodi u pitanje, može nastati tokom trudnoće, prisustva onkoloških procesa ili tuberkuloze. Lažno negativna reakcija na test može se javiti ako se test izvrši nepravilno ili ako se izvrši prerano. Od trenutka infekcije moraju proći najmanje tri sedmice. Na kraju krajeva, vrijeme nakon kojeg se HIV dijagnosticira direktno ovisi o stanju imunološkog sistema.

Druge metode za dijagnosticiranje AIDS-a i HIV-a

Metode radijacijske dijagnostike za AIDS se u pravilu koriste u terminalnoj ili sekundarnoj fazi. Uz njihovu pomoć moguće je identificirati promjene koje se javljaju u tijelu zbog sekundarnih bolesti ili oportunističkih infekcija.

Biorezonantna dijagnostika HIV-a, koja se naziva i nelinearno skeniranje, koristi se uglavnom u privatnim klinikama za otkrivanje virusa imunodeficijencije. Službena medicina ovu metodu smatra nedovoljno preciznom i efikasnom. Možda će unapređenje nelinearne dijagnostike u budućnosti omogućiti da se ova strašna dijagnoza identificira već u periodu inkubacije.

Dijagnoza HIV infekcije: serološka metoda i njene karakteristike

To je komparativno nova tehnika, u kojem se laboratorijski kriteriji za dijagnosticiranje HIV infekcije zasnivaju na principu antigen-antitijelo. U slučaju virusa imunodeficijencije, u ljudskom tijelu dolazi do traženja antitijela na virus. Da bi se to postiglo, koristi se umjetno dobiven antigen na koji antitijela moraju reagirati. Specifični serološki markeri HIV infekcije uzrokuju specifične promjene u sastavu krvi. Vrijedi napomenuti da je ova metoda istraživanja najefikasnija u akutnoj fazi, koja se završava serokonverzijom. Nakon toga slijedi asimptomatski latentni period, tokom kojeg nije lako pronaći antigen.

Referentna dijagnostika HIV infekcije: opis i karakteristike

Referentne vrijednosti HIV-a smatraju se najtačnijim u identifikaciji dijagnoze. Ova metoda istraživanja kombinuje ELISA test i imunobloting. Referentna laboratorija za dijagnostiku HIV-a omogućava prikupljanje uzoraka i naknadnu obradu na dva načina. Ovo vam omogućava da dobijete najprecizniji rezultat u roku od 24 sata. Ponovna provjera analize dobivene u referentnoj laboratoriji neophodna je samo ako su podaci ELISA testa i imunoblotinga u suprotnosti. Ovo je dovoljno rijedak događaj, koji se najčešće javlja kod osoba sa gore opisanim pratećim oboljenjima.

Pravovremena dijagnoza HIV infekcije postaje izuzetno važna mjera, jer rano započinjanje liječenja u velikoj mjeri može odrediti daljnji razvoj bolesti i produžiti život pacijenta. Posljednjih godina zabilježen je značajan napredak u identifikaciji ove strašne bolesti: stariji sistemi za testiranje zamjenjuju se naprednijim, metode ispitivanja postaju pristupačnije, a njihova preciznost se značajno povećava.

U ovom članku ćemo govoriti o savremenim metodama dijagnostiku HIV infekcije, čije je poznavanje korisno za pravovremeno liječenje ovog problema i održavanje normalnog kvaliteta života pacijenta.

Metode dijagnostike HIV-a

U Rusiji se provodi standardna procedura za dijagnosticiranje HIV infekcije, koja uključuje dva nivoa:

• ELISA test sistem (skrining analiza);
• imunobloting (IB).

Za dijagnozu se mogu koristiti i druge metode:

• brzi testovi.

ELISA test sistemi

U prvoj fazi dijagnoze koristi se skrining test (ELISA) za otkrivanje HIV infekcije, koji se zasniva na HIV proteinima stvorenim u laboratorijama koji hvataju specifična antitijela proizvedena u tijelu kao odgovor na infekciju. Nakon njihove interakcije sa reagensima (enzimima) test sistema, boja indikatora se menja. Zatim se ove promjene boje obrađuju pomoću posebne opreme, koja određuje rezultat izvršene analize.

Takvi ELISA testovi mogu pokazati rezultate u roku od nekoliko sedmica nakon uvođenja HIV infekcije. Ovaj test ne utvrđuje prisustvo virusa, već otkriva proizvodnju antitijela na njega. Ponekad u ljudskom tijelu proizvodnja antitijela na HIV počinje nakon 2 sedmice nakon infekcije, ali kod većine ljudi se stvaraju kasnije, nakon 3-6 sedmica.

Postoje četiri generacije ELISA testova različite osjetljivosti. Poslednjih godina sve se više koriste test sistemi treće i četvrte generacije koji se baziraju na sintetičkim peptidima ili rekombinantnim proteinima i imaju veću specifičnost i tačnost. Mogu se koristiti za dijagnosticiranje HIV infekcije, praćenje prevalencije HIV-a i osiguranje sigurnosti prilikom testiranja darovane krvi. Preciznost ELISA test sistema III i IV generacije je 93-99% (testovi proizvedeni u zapadnoj Evropi su osetljiviji - 99%).

Za izvođenje ELISA testa uzima se 5 ml krvi iz vene pacijenta. Između posljednjeg obroka i analize mora proći najmanje 8 sati (obično se radi ujutro na prazan želudac). Preporučuje se da se takav test uradi najkasnije 3 sedmice nakon sumnje na infekciju (na primjer, nakon nezaštićenog spolnog odnosa sa novim seksualnim partnerom).

Rezultati ELISA testa se dobijaju za 2-10 dana:

• negativan rezultat: ukazuje na odsustvo HIV infekcije i ne zahtijeva kontaktiranje specijaliste;
• lažno negativan rezultat: može se uočiti na ranim fazama infekcija (do 3 sedmice), sa kasne faze SIDA sa teškom imunosupresijom i nepravilnom pripremom krvi;
• lažno pozitivan rezultat: može se uočiti kod nekih bolesti i u slučaju nepravilne pripreme krvi;
• pozitivan rezultat: ukazuje na infekciju HIV-om, potrebno je uraditi IB i javiti se pacijentu specijalistu u centru za AIDS.

Zašto ELISA test može dati lažno pozitivne rezultate?

Lažno pozitivni rezultati HIV ELISA testa mogu se javiti zbog nepravilne obrade krvi ili kod pacijenata sa sljedećim stanjima i bolestima:

• multipli mijelom;
• zarazne bolesti uzrokovane Epstein-Barr virusom;
• stanje nakon ;
• autoimune bolesti;
• na pozadini trudnoće;
• stanje nakon vakcinacije.

Iz gore opisanih razloga, u krvi mogu biti prisutna nespecifična unakrsna antitijela, čija proizvodnja nije izazvana HIV infekcijom.

Posljednjih godina učestalost lažno pozitivnih rezultata značajno se smanjila zbog upotrebe test sistema generacije III i IV, koji sadrže osjetljivije peptidne i rekombinantne proteine ​​(sintetiziraju se pomoću genetski inženjering in vitro). Nakon uvođenja ovakvih ELISA testova, učestalost lažno pozitivnih rezultata značajno se smanjila i iznosi oko 0,02-0,5%.

Lažno pozitivan rezultat ne znači da je osoba zaražena HIV-om. U takvim slučajevima, SZO preporučuje provođenje još jednog ELISA testa (obavezno IV generacije).

Krv pacijenta se šalje u referentnu ili arbitražnu laboratoriju sa oznakom "ponoviti" i testira se pomoću ELISA test sistema IV generacije. Ako je rezultat nove analize negativan, tada se prvi rezultat smatra pogrešnim (lažno pozitivnim) i IS se ne provodi. Ako je rezultat pozitivan ili upitan tokom drugog testa, pacijent mora da se podvrgne IB nakon 4-6 sedmica da potvrdi ili opovrgne HIV infekciju.

Imuno blotting

Konačna dijagnoza HIV infekcije može se postaviti samo nakon dobijanja pozitivnog rezultata imunoblotinga (IB). Za njegovo izvođenje koristi se nitrocelulozna traka na koju se nanose virusni proteini.

Uzimanje krvi za IB se vrši iz vene. Zatim se podvrgava posebnoj obradi i proteini sadržani u njegovom serumu se odvajaju u poseban gel prema njihovom naboju i molekularnoj težini (manipulacija se vrši pomoću posebne opreme pod utjecajem električnog polja). Nitrocelulozna traka se nanosi na gel krvnog seruma, a upijanje („blotting“) se provodi u posebnoj komori. Traka se obrađuje i ako upotrijebljeni materijali sadrže antitijela na HIV, vezuju se za antigenske trake na IB i pojavljuju se kao linije.

IB se smatra pozitivnim ako:

• prema američkim kriterijima CDC-a - postoje dvije ili tri linije gp41, p24, gp120/gp160 na traci;
• prema američkom FDA kriteriju, traka ima dvije linije p24, p31 i liniju gp41 ili gp120/gp160.

U 99,9% slučajeva pozitivan IB nalaz ukazuje na HIV infekciju.

Ako nema linija, IB je negativan.

Kada se identifikuju linije sa gr160, gr120 i gr41, IB je sumnjiv. Ovaj rezultat se može pojaviti kada:

• onkološke bolesti;
• trudnoća;
• česte transfuzije krvi.

U takvim slučajevima preporučuje se ponavljanje studije uz pomoć kompleta druge kompanije. Ako nakon dodatnog IB rezultat ostane sumnjiv, tada je potrebno promatranje šest mjeseci (IB se provodi svaka 3 mjeseca).

Lančana reakcija polimeraze

PCR test može otkriti RNK virusa. Njegova osjetljivost je prilično visoka i omogućava otkrivanje HIV infekcije u roku od 10 dana nakon infekcije. U nekim slučajevima, PCR može dati lažno pozitivne rezultate, jer je visoka osjetljivost također može reagirati na antitijela na druge infekcije.

Ova dijagnostička tehnika je skupa i zahtijeva posebnu opremu i visoko kvalificirane stručnjake. Ovi razlozi ne omogućavaju masovno testiranje populacije.

PCR se koristi u sljedećim slučajevima:

• otkrivanje HIV-a kod novorođenčadi rođenih od majki zaraženih HIV-om;
• za otkrivanje HIV-a u „prozorskom periodu“ ili u slučaju sumnjive IB;
• za kontrolu koncentracije HIV-a u krvi;
• za proučavanje krvi donora.

PCR test sam po sebi ne postavlja dijagnozu HIV-a, već se provodi kao a dodatna metoda dijagnostika za rješavanje kontroverznih situacija.

Ekspresne metode

Jedna od inovacija u dijagnostici HIV-a su brzi testovi, čiji se rezultati mogu procijeniti u roku od 10-15 minuta. Najefikasniji i najprecizniji rezultati se dobijaju imunohromatografskim testovima na principu kapilarnog toka. To su posebne trake na koje se nanosi krv ili druge testne tekućine (slina, urin). Ako su prisutna antitijela na HIV, nakon 10-15 minuta na testu se pojavljuje obojena i kontrolna traka - pozitivan rezultat. Ako je rezultat negativan, pojavljuje se samo kontrolna traka.

Kao i kod ELISA testova, rezultati brzih testova moraju biti potvrđeni IB analizom. Tek nakon toga može se postaviti dijagnoza HIV infekcije.

Dostupni su kompleti za brzo kućno testiranje. Test OraSure Technologies1 (SAD) je odobren od strane FDA, dostupan je u slobodnoj prodaji i može se koristiti za otkrivanje HIV-a. Nakon testa, ako je rezultat pozitivan, pacijentu se preporučuje pregled u specijaliziranom centru kako bi se potvrdila dijagnoza.

Ostale testove za kućnu upotrebu još nije odobrila FDA i njihovi rezultati mogu biti vrlo upitni.

Unatoč činjenici da su brzi testovi inferiorni u preciznosti od IV generacije ELISA testova, oni se široko koriste za dodatno testiranje populacije.

Testove za otkrivanje HIV infekcije možete napraviti u bilo kojoj klinici, centralnoj okružnoj bolnici ili specijalizovanim centrima za AIDS. Na teritoriji Rusije provode se potpuno povjerljivo, ili anonimno. Svaki pacijent može očekivati ​​medicinsku ili psihološku konsultaciju prije ili nakon testa. Morat ćete platiti samo testove na HIV u reklamama medicinske ustanove, a u javnim klinikama i bolnicama obavljaju se besplatno.

Pročitajte o načinima na koje se možete zaraziti HIV-om i koji mitovi postoje o mogućnostima zaraze.