Фібробласти. Функції фібробластів

Основний напрямок діяльності сучасної естетичної медицини- запобігання старінню за допомогою високих технологій. В результаті наукових дослідженьвиявлено закономірність, яка полягає в тому, що клітини мають здатність відроджуватися. Мають ці властивості і фібробласти, регенерація яких призводить до омолодження шкірних покривів та усунення видимих ​​дефектів на них.

Функції та природа фібробластів

Термін «фібробласти» складається з двох латинських слів, що перекладаються буквально як «росток» та «волокно». За своєю природою вони представляють клітини сполучної тканини, що синтезують позаклітинний матрикс (структуру тканини, яка забезпечує перенесення хімічних речовинта механічну підтримку клітин шкіри). Фібробласти виробляють речовини, які є попередникам колагенових та еластинових волокон, гіалуронову кислоту, фібрин.

Походять вони з мезенхіми – зародкової тканини, яка є у клітинах організму людей та тварин. В активному стані структура фібропластів має на увазі наявність ядра і відростків, вони мають збільшений розмір і містять велику кількість рибосом, у стані спокою вони зменшуються і набувають веретеноподібної форми.

Фібробласти шкіри мають широким спектромфункцій. Завдяки їх наявності в організмі відбуваються такі процеси:

• Активізація процесів синтезу колагену та еластину.
• Формування судин.
• Напрямок клітин імунної системи до бактерій та чужорідних частинок.
• Прискорення розростання тканин.
• Посилення зростання клітин.
• Загоєння пошкоджених ділянок шкіри.
• Вироблення ряду білків (протеоглікан, ламінін та інші).

Причини вікових змін

Молодість шкіри визначається циклічним процесом вироблення колагену та еластину, які згодом розщеплюються на складові частини, що використовуються фіброластами для їх повторного вироблення. Згодом останні знижують свою активність, перестаючи виробляти колагенові та еластинові волокна, що зрештою провокує старіння шкіри.

Вікові змінипочинають виявлятися вже з 28 - 30 років. Вони виражаються у втраті пружності та розвитку птозу, зміні кольору шкіри, підвищенні сухості, утворенні зморшок. І все це у зв'язку з тим, що кожне десятиліття фібробласти зменшуються на 10% первісного числа.

Поповнення кількості фібробластів

Отже, щоб уповільнити старіння і повернути молодість необхідно відновити фібробласти. Більшість сучасних косметологічних методик призводить лише до тимчасового прискорення синтезу колагенових волокон, але збільшують самі клітини. Довгий час було прийнято вважати, що це просто неможливо.

В даний час наука зробила крок далеко вперед, і відновлення фібробластів це вже не фантастика. Ця процедураотримала назву SPRS-терапія і широко практикується у Штатах, європейських країнах та з недавнього часу на території Росії.

SPRS-терапія: особливості та принцип проведення

Відновити фібробласти непросто, для цього потрібно пройти через найскладнішу ін'єкційну процедуру. Результатами її проведення є потовщення шкіри та підвищення рівня її еластичності, профілактика та зниження птозу. Також зменшуються зморшки, зникає пігментація та розгладжуються рубці.

Починається терапія із забору клітин пацієнта зі шкіри, розташованої за вушною раковиною. Отриманий зразок використовується для діагностики та вивчення, називається біоматеріалом. Він застосовується для розробки схеми лікування та штучного відтворення фібробластів, які згодом за допомогою уколів будуть введені назад у шкіру.

Клітини, вирощені з урахуванням біоматеріалів пацієнта, не відкидаються організмом. Після трансплантації вони зберігають свою активність протягом півтора року, протягом яких стан шкіри покращується.

Фібробласти не рекомендується впроваджувати за допомогою ін'єкцій під час загострення хронічних захворювань, при застуді, вірусних інфекціях, що супроводжуються підвищеною температуроютіла. Серед протипоказань числиться імунодефіцит, злоякісні утворення, інфекції та хронічне захворюванняв гострої стадії. Перед проведенням процедури обов'язкова попередня консультація з фахівцем виявлення індивідуальних протипоказань.

Процедура займає не більше години та проводиться курсом із 2 сеансів з перервою від 5 до 7 тижнів. Перед ін'єкціями обов'язковим є проведення місцевої анестезії.

Впровадити фібробласти – задоволення дороге. Повний спектрпослуг, що включає паркан, зберігання, дослідження та запровадження біоматеріалів оцінюється приблизно 400 000 рублів.

Відео: проведення SPRS терапії

Фібробласти - клітини сполучної тканини, що забезпечують вироблення колагену та еластину, отже, що підтримують молодість нашої шкіри. Згодом їхня кількість в організмі неухильно знижується, за рахунок чого і виявляються зовнішні ознаки вікових змін. Відновлення числа фібробластів проводиться за допомогою ін'єкційної методики на основі штучно вирощених клітин.

Фібробласти- провідні клітини пухкої сполучної тканини, які продукують компоненти міжклітинної речовини. Це відростчасті, веретеноподібні або розпластані клітини розміром близько 20 мкм. Вони добре розвинені органели внутрішнього метаболічного середовища. Ядро фібробласта овальної форми містить рівномірно розпорошений хроматин і 2-3 ядерця. Цитоплазма чітко поділяється на інтенсивно забарвлену ендоплазму та слабо забарвлену ектоплазму. Цитоплазма фібробластів (особливо молодих) базофільна. У ній виявляється добре розвинена ендоплазматична мережа з великою кількістю рибосом, прикріплених до мембран у вигляді ланцюжків по 10-30 гранул. Така ультраструктура гранулярної ендоплазматичної мережі характерна для клітин, які активно синтезують білок "на експорт". Є також численні вільні рибосоми, добре розвинений комплекс Гольджі. Мітохондрії – великі, кількість їх невелика. Цитохімічними методами показано наявність у цитоплазмі фібробластів ферментів гліколізу та гідролітичних ферментів лізосом (особливо – колагенази). Менш активні окисні ферменти мітохондрії.

Опорно-рухова система клітинизабезпечує їхню рухливість, зміну форми, прикріплення до субстрату, механічне натяг плівки, до якої клітина прикріплюється в культурі. На клітинній поверхні є багато мікроворсинок та пухирчастих виростів. Фібробласти у зваженому стані в рідкому середовищі мають кулясту форму. Розпластаним фібробласт стає після прилипання до твердої поверхні, якою він пересувається за рахунок псевдоподій.

Основна функція фібробластів- синтез та секреція білків і глікозаміногліканів, що йдуть на формування компонентів міжклітинної речовини сполучної тканини, а також вироблення та секреція колонієстимулюючих факторів (грану-лоцитів, макрофагів). Фібробласти довгий часзберігають здатність до проліферації. Фібробласти, які закінчили цикл розвитку, називаються фіброцитами. Це довгоживучі клітини. Цитоплазма клітин збіднюється органелами, клітина зменшується, проліферативний потенціал падає. Однак клітина не втрачає здатність брати участь у регуляції обмінних процесіву тканині.

Міжклітинна речовина. Складається з фібрилярного та основного (аморфного) компонентів. Методами гістоавторадіографії із введенням мічених амінокислот (3Н-пролін, 3Н-гліцин та ін.) встановлено, що в полісомах фібробластів відбувається синтез молекул білка. Фібробласти одночасно можуть синтезувати кілька типів специфічних білків та глікозаміноглікани. Для синтезу білка колагену має важливе значення наявність вітаміну С, при нестачі якого колагеногенез різко гальмується. Найінтенсивніше йде синтез міжклітинної речовини в умовах зниженої концентрації кисню. Одночасно із синтезом колагену фібробласт руйнує приблизно 2/3 цього білка за допомогою ферменту колагенази, що перешкоджає передчасному склерозуванню тканини.

Синтезовані молекули проколагенувиводяться на поверхню фібробластів шляхом екзоцитозу. При цьому здійснюється перехід білка з розчинної форми в нерозчинну - тропоколаген. Об'єднання молекул тропоколагену в надмолекулярні структури - колагенові фібрили - відбувається в безпосередній близькості від клітинної поверхні завдяки дії особливих речовин, що виділяються клітиною. Зокрема, на поверхні фібробластів виявлено білок - фібронектин, що виконує адгезивну та інші функції. Наступні етапи фібриллогенезу відбуваються шляхом полімеризації та агрегації тропоколагену на раніше утворених фібрил. При цьому дозрівання колагенових волокон може протікати без прямого зв'язку з фібробластами.
Глікозаміногліканиє регуляторами колагеноутворення та входять до складу основного (аморфного) компонента міжклітинної речовини.

Фібрилярний компонентміжклітинна речовина пухкої сполучної тканини включає три типи волокон - колагенові, еластичні та ретикулярні. Вони мають подібний механізм освіти, проте відрізняються один від одного по хімічного складу, ультраструктурі та фізичним властивостям. Білок колаген ідентифікується за амінокислотним складом та послідовністю розташування амінокислот у молекулі колагену. Залежно від варіації амінокислот у поліпептидному ланцюгу, імунних властивостях, молекулярної маси та ін. розрізняють 14 і більше різновидів колагенових білків, що входять до складу сполучної тканини органів. Всі вони складають 4 основні типи, або класи, колагени.

Колаген 1-го типузустрічається в сполучній та кістковій тканинах, а також у склері та рогівці ока; ІІ-го типу – у хрящових тканинах; ІІІ-го типу – у стінці кровоносних судин, у сполучній тканині шкіри плода; IV-ro типу – у базальних мембранах.

Фібробласти(фібробластоцити) (від лат. fibra - волокно, грец. blastos - паросток, зачаток) - клітини, що синтезують компоненти міжклітинної речовини: білки (наприклад, колаген, еластин), протеоглікани, глікопротеїни.

В ембріональному періоді ряд мезенхімних клітин зародка дають початок диферону фібробластів, До якого відносять:

· стовбурові клітини,

· Напівстволові клітини-попередники,

· Малоспеціалізовані фібробласти,

· диференційовані фібробласти (зрілі, що активно функціонують),

· Фіброцити (дефінітивні форми клітин),

· Міофібробласти та фіброкласти.

З головною функцієюфібробластів пов'язані утворення основної речовини та волокон (що яскраво проявляється, наприклад, при загоєнні ран, розвитку рубцевої тканини, утворенні сполучнотканинної капсули навколо стороннього тіла).

Малоспеціалізовані фібробласти - це маловідросткові клітини з округлим або овальним ядром і невеликим ядерцем, базофільною цитоплазмою, багатою на РНК. Розмір клітин не перевищує 20-25 мкм. У цитоплазмі цих клітин виявляється велика кількість вільних рибосом. Ендоплазматична мережа та мітохондрії розвинені слабо. Апарат Гольджі представлений скупченнями коротких трубочок та бульбашок.
На цій стадії цитогенезу фібробласти мають дуже низький рівень синтезу і секреції білка. Ці фібробласти здатні розмноження мітотичним шляхом.

Диференційовані зрілі фібробласти більші за розміром. Це клітини, що активно функціонують.

У зрілих фібробластах здійснюється інтенсивно біосинтез колагенових, еластинових білків, протеогліканів, які необхідні для формування основної речовини та волокон. Ці процеси посилюються за умов зниженої концентрації кисню. Стимулюючими факторами біосинтезу колагену є також іони заліза, міді, хрому, аскорбінова кислота. Один із гідролітичних ферментів - колагеназа- Розщеплює всередині клітин незрілий колаген, що регулює на клітинному рівні інтенсивність секреції колагену.

Фібробласти – це рухливі клітини. У їх цитоплазмі, особливо в периферичному шарі, розташовуються мікрофіламенти, що містять білки типу актину та міозину. Рух фібробластів стає можливим тільки після їхнього зв'язування з опорними фібрилярними структурами за допомогою фібронектину- глікопротеїну, що синтезується фібробластами та іншими клітинами, що забезпечує адгезію клітин та неклітинних структур. Під час руху фібробласт сплощується, яке поверхня може збільшитися вдесятеро.

Плазмолемма фібробластів є важливою рецепторною зоною, що опосередковує вплив різних регуляторних факторів. Активізація фібробластів зазвичай супроводжується накопиченням глікогену та підвищеною активністю гідролітичних ферментів. Енергія, що утворюється при метаболізмі глікогену, використовується для синтезу поліпептидів та інших компонентів, що секретуються клітиною.

За здатністю синтезувати фібрилярні білки до сімейства фібробластів можна віднести ретикулярні клітини ретикулярної сполучної тканини кровотворних органів, а також хондробласти та остеобласти скелетного різновиду сполучної тканини.

Фіброцити- Дефінітивні (кінцеві) форми розвитку фібробластів. Ці клітини веретеноподібні з крилоподібними відростками. [Вони містять невелику кількість органел, вакуолей, ліпідів та глікогену.] Синтез колагену та інших речовин у фіброцитах різко знижений.

Міофібробласти- клітини, подібні до фібробластів, що поєднують у собі здатність до синтезу не тільки колагенових, а й скорочувальних білків у значній кількості. Фібробласти можуть перетворюватися на міофібробласти, функціонально подібні до гладких. м'язовими клітинамиале на відміну від останніх мають добре розвинену ендоплазматичну мережу. Такі клітини спостерігаються в грануляційній тканині ран, що гояться, і в матці при розвитку вагітності.

Фіброкласти- клітини з високою фагоцитарною та гідролітичною активністю, беруть участь у «розсмоктуванні» міжклітинної речовини в період інволюції органів (наприклад, у матці після закінчення вагітності). Вони поєднують у собі структурні ознаки фібриллоутворюючих клітин (розвинену гранулярну ендоплазматичну мережу, апарат Гольджі, відносно великі, але нечисленні мітохондрії), а також лізосоми з характерними для них гідролітичними ферментами. Комплекс ферментів, що виділяється ними за межі клітини, розщеплює цементуючу субстанцію колагенових волокон, після чого відбуваються фагоцитоз і внутрішньоклітинне перетравлення колагену.

Наступні клітини волокнистої сполучної тканини вже не належать до диферону фібробластів.

Фібробласти шкіри складають основу сполучної тканини. Вони є виробниками гіалуронової кислоти, волокон колагену, еластину. Вікові зміни уповільнюють роботу фібробластів, внаслідок чого шкіра стає тонкою та в'ялою. Завдяки клітинній ін'єкційної технологіїорганізм самостійно запускає функцію омолодження структури дерми.

Сутність фібробластів

Фібробласти шкіри- це клітини сполучнотканинного шару дерми, попередниками яких були стовбурові клітини. Вони бувають у двох формах:

1. Активна – великі клітини, забезпечені плоским ядром у формі овалу, великою кількістю рибосом та відростками. Характеризуються інтенсивним розподілом, виробництвом колагену та інших компонентів матриксу.
2. Неактивна (фіброцити) - клітини трохи менше, мають веретеноподібну форму. Формуються з фібробластів, що не можуть ділитися. Беруть участь у синтезі волокон, регенерації ран.

У міру дорослішання організму кількість фібробластів знижується, падає їхня активність. Це призводить до погіршення синтезу міжклітинної речовини. На шкірі цей процес відбивається у вигляді її стоншення, сухості, в'ялості. Вона розтягується, утворюються зморшки.

Функції

Одна з головних функцій фібробластів – виробництво та регенерація міжклітинної речовини. Формуючи фактори росту, компоненти позаклітинного матриксу, ферменти, вони сприяють руйнуванню та новому синтезу колагену та гіалуронової кислоти. Завдяки безперервному процесу оновлюється міжклітинна речовина. Крім того, вони продукують фактори росту клітин:

• Основний – стимулюється зростання всіх клітин дерми, виробляється фібронектин для захисних реакцій;
• Трансформуючий – синтезуються волокна колагену, еластину, формуються судини, спрямовуються клітини імунної системи до чужорідних агентів, бактерій;
• Епідермальний – активізується розростання тканин, клітинне зростання, транспорт кератиноцитів;
• Зростання кератиноцитів – епітелізація, регенеруються ушкодження.

Фактори росту фібробластів представлені багатофункціональними білками, що є мітогенами, а також виконують ендокринну, регуляторну, структурну функцію. Завдяки фібробластам відбувається вироблення важливих для шкіри білків: протеогліканів, тинасцину, нідогену та ламініну.

Сутність методики

SPRS-терапія- це методика ін'єкційного омолодження шкіри за допомогою фібробластів, що усуває причину старіння шкіри. Патент на технологію внутрішньодермальної трансплантації автофібробластів належить FibrocellScience, американській компанії. Через клітинні технології стало можливим вирощувати фібробласти з частинки шкіри людини (біоптату). Власний біоматеріал виключає проблему сумісності тканин, небезпеки інфікування. Аутологічні клітини позитивно сприймаються імунною системоюта здатні повноцінно функціонувати.

Зразок беруть у будь-якому віці, але краще зробити це у молодості. Рекомендований вік – від 20 до 30 років. Можна зберегти шматочок шкіри за будь-якої операції і помістити виділені з нього клітини в кріосховищі на довгі роки. Температура -196 градусів дозволяє зберігати їх протягом усього життя, використовуючи при необхідності. Це дозволить провести ефективні косметологічні процедури у будь-який час.

Власні фібробласти, нарівні зі стовбуровими клітинами, мають властивість збереження потенціалу при старінні. Під місцевою анестезієюу пацієнта береться невеликий зразок шкіри із заушної зони, пупка або області передпліччя. Ці області найменше піддаються впливу ультрафіолетового випромінювання. Розмір його становить близько 4 мм. Виділені з нього фібробласти поміщають у спеціальні флакони.

При культивуванні їх у середовищі з ембріональною сироваткою у молодих клітин стимулюється здатність до проліферації, а старі – вимиваються. Відбувається омолодження культури. Через місяць чисельність клітин збільшується у кілька тисяч разів. Після реактивації культура клітин пересідає пацієнту, активно заповнює дерму. Через півтора місяці розмножені фібробласти ін'єкційно вводять пацієнтові у шкіру обличчя, зокрема навколо очей, і навіть у шию, зону декольте, руки.

Процедура

Курс складається з 3-5 сеансів, інтервали між якими становлять від 3 до 6 тижнів. Етапи проведення процедури:

• обстеження пацієнта виявлення наявних протипоказань;
• взяття матеріалу;
• культивування фібробластів;
• введення ін'єкцій клітинного матеріалу у шкіру двома методами: тунельним – у глибокі шкірні складки, папульною мезотерапією;
• захист шкіри від ультрафіолету за допомогою нанесення крему.

Пацієнти відзначають болючість процедури, тому використовується знеболюючий крем Емла. Кількість препарату - до 3-х мл за один сеанс. Відновлювальний термін триває протягом 2-3 днів. Після процедури забороняється наносити косметичні засоби. Протягом двох тижнів слід утриматися від відвідування сауни, лазні. Шкіру потрібно берегти від сонця, змащуючи кремом із високим ступенем захисту. Рекомендується повторювати процедуру щоразу. Результат - поліпшення стану шкіри обличчя, що відбувається протягом декількох місяців.

Ефективність та переваги методу

Омолодження фібробластами дає перші результати через 1,5 або 2 місяці. Повний ефектвід процедури проявляється через півроку та зберігається 2-3 роки. Починається посилене виробництво факторів зростання позаклітинного матриксу. Фібробласти проходять природні фази циклу: активуються, синтезують еластин, колаген та інші речовини, далі настає фаза деградації, заміна їх новими фібробластами.

Застосування їх поширене в медицині - проти опіків, для регенерації тканин при трофічних виразках, рани. Велике їх значення у косметології. Молодість шкіри формується числом фібробластів. Поміщені в дерму вирощені фібробласти вбудовуються в тканини, приступаючи до виробництва колагену та еластину. В результаті шкіра стає еластичною, набуваючи рівного кольору, зникають дрібні зморшки.

Але не варто очікувати від процедури ефекту підтяжки. Ця методика спрямована на покращення якісних характеристик шкіри. Основні переваги SPRS-терапії:

• робота препарату з генами, що унеможливлює порушення первинної структури шкіри;
• активізуються природні процеси омолодження;
• безпека, немає ризику відторгнення, алергічної реакції;
• довготривале збереження результату.

За 6 місяців відбувається розгладження зморшок навколо очей на 90%. Декольте та шия молодшають на 95%, щоки – на 87%. Складки довкола рота зменшуються на 55%.

Протипоказання

Незважаючи на повну безпеку, процедура має деякі протипоказання:

• вагітність; період лактації;
• порушена згортання крові;
• злоякісні новоутворення;
• аутоімунні хвороби;
• схильність до формування рубців;
• ГРВІ;
• запалення на шкірі.

Протягом доби після сеансу може спостерігатись почервоніння на шкірі, мікрогематоми. Наступного дня симптоми минають.

Технологія трансплантації аутофібробластів має офіційний дозвіл Росздравнагляду. Її безпека підтверджується лабораторним контролем життєздатності клітин.

Власники патенту UA 2536992:

Винахід відноситься до галузі біотехнології, безпосередньо до клітинних технологій, і може бути використане в медицині. Спосіб включає масштабування диплоїдних клітин лінії М-20 із кріобанку ІПВЕ ім. М.П. Чумакова РАМН з ампули банку посівних клітин 7 пасажу з отриманням банку робочих клітин 16 пасажу. При цьому клітини 20-33 пасажів, придатні для використання в лікувальних та/або діагностичних цілях, отримують шляхом культивування в поживному середовищі, що містить 10% фібринолітично активної плазми (ФАП) людини, що містить тромбоцитарний фактор росту PDGF у концентрації від 15 мл. Винахід дозволяє підвищити проліферативну активність диплоїдних клітин фібробластів людини 1 з.п. ф-ли, 2 табл.

Винахід відноситься до біотехнології, імунології, медицини, зокрема способу підвищення проліферативних властивостей диплоїдних клітин фібробластів людини для використання таких клітин в лікувальних і діагностичних цілях, у тому числі для визначення антивірусної активності інтерферонів людини, для замісної клітинної терапії.

Лінії диплоїдних клітин людини (ЛДКЧ) мають незаперечні переваги перед усіма відомими видами клітинних культур своєю здатністю зберігати в пасажах стабільні біологічні та генетичні характеристики. Атестацію ЛДКЛ, призначених для виробництва вакцин, проводять відповідно до єдиних вимог, розроблених Всесвітньою організацією охорони здоров'я. Ці рекомендації взято за основу національних критеріїв атестації вакцинних ЛДКЛ, розроблених ДНДІБіК МІБП ім. Л.А. Тарасевича та МОЗ СРСР [ Методичні рекомендації«Атестація клітинних ліній, що перевиваються, - субстратів виробництва та контролю медичних імунобіологічних препаратів»РД-42-28-10-89. МОЗ СРСР. М., 1989. – С. 16]. Атестована лінія диплоїдних клітин людини має обмежений термін життя і має стабільні біологічні, культуральні та генетичні характеристики, вона вільна від контамінантів (бактерій, грибів, мікоплазм, вірусів) і не викликає утворення пухлин у імуносупресованих тварин. Лінія диплоїдних клітин повинна мати атестований банк посівних клітин на ранніх рівнях пасажів (до 10 пасажу), що складається не менше ніж з 200 кріопробірок. При пасируванні посівних клітин з однієї або декількох кріопробірок рівня 16 пасажу отримують робочий банк клітин, з якого можуть бути отримані необхідні культури-продуценти для виробництва або для дослідницької роботи. У Росії її і за кордоном існують лише кілька ліній диплоїдних клітин людини (Wi-38, MRC-5, М-22 та інших.), атестованих відповідно до переліченим вимогам. Атестовані ЛДКЛ використовують при виготовленні вакцин проти поліомієліту, кору, краснухи, сказу, респіраторної та цитомегаловірусної інфекцій, і навіть інтерферону [Т.К. Борисова, Л.Л. Миронова, О.І. Конюшка, В.Д. Попова, В.П. Грачов, Н.Р. Шухміна, В.В. Звєрєв. Вітчизняні штами диплоїдних клітин людини – субстрат для виробництва вакцин. Медична вірусологія Матеріали науково-практичній конференції « Актуальні проблемимедичної вірусології, присвяченої 100-річчю М.П. Чумакова». М. 2009. Том XXVI. С. 305-307; Л.Л. Миронова, В.Д. Попова, О.І. Конюшка. Досвід створення банку авторських ліній клітин, що перевиваються, та їх застосування у вірусологічній практиці. Біотехнологія. 2000, с. 41-47]. ЛДКЧ широко застосовуються in vitro для діагностики вірусних інфекцій, аналізу токсичності різних препаратівта виробів, для замісної терапії [Патент РФ №2373944, 23.06.2008. Спосіб лікування опікової рани. А.С. Єрмолов, С.В. Смирнов, В.Б. Хватов, Л.Л. Миронова; С.В. Смирнов, В.Б. Хватів. Інноваційні технологіїмісцевого лікування опіків у НДІ швидкої допомоги ім. Н.В. Скліфосовського. Нова економіка. Інноваційний портрет Росії. М., Центр стратегічного партнерства, 2009. С. 388-390].

В ІПВЕ ім. М.П. Чумакова РАМН у 80-х роках 20 століття було встановлено кілька ліній диплоїдних клітин зі шкіри та м'язів 8-10 тижневих ембріонів людини. Дана робота присвячена модифікації виробництва диплоїдних клітин людини для діагностичних цілей та замісної клітинної терапії, а саме одержання диплоїдних клітин фібробластів людини з підвищеними проліферативними властивостями.

Прототип. Патент РФ №1440029 від 22.03.93 р. [Миронова Л.Л., Преображенська Н.К., Соловйова М.М., Орлова Т.Г. Стобецький В.І., Крючкова Г.П., Кармишева В.Я., Кудінова С.І., Попова В.Д., Алпатова Г.А. ІПВЕ та НДІЕіМ ім. Н.Ф. Гамалеї. Штам диплоїдних клітин шкіри та м'язів ембріона людини, що використовується як тест-система для визначення антивірусної активності інтерферонів людини та розмноження вірусів].

Цей штам ЛДКЧ позначений М-21, проте культура фібробластів М-21 мала недостатню проліферативну активність, що знижувало час утворення моношару і підвищувало витрату клітин і матеріалів, і це, зрештою, призвело до повного виснаження її запасів. В результаті виникла необхідність у новій клітинній лінії, придатній для визначення антивірусної активності інтерферонів людини та інших медико-біологічних цілей, більш економічно вигідною, що відрізняється високою проліферативною активністю, що має банки посівних та робочих клітин. Ця лінія позначена М-20. На рівні 7 пасажу виготовлено банк посівних клітин. У 2012 році з ампули банку 7 пасажу виготовлено банк робочих клітин на рівні 16 пасажу. Банки посівних та робочих клітин на рівнях 7 та 16 пасажів зберігаються в ІПВЕ ім. М.П. Чумакова РАМН і дозволяють забезпечити як виробничі процеси, і наукові дослідження.

Відмінністю цього винаходу від найближчого аналога (прототипу) є підвищення проліферативної активності клітин лінії М-20 при використанні 10% фібринолітично активної плазми (ФАП).

Таким чином, об'єктом винаходу є спосіб підвищення проліферативних властивостей диплоїдних клітин фібробластів людини для медико-біологічних цілей за допомогою культивування клітин із кріобанку ІПВЕ ім. М.П. Чумакова РАМН, в якому використовують диплоїдні клітини охарактеризованої лінії М-20, які масштабують з ампули банку посівних клітин 7 пасажу та отримують банк робочих клітин 16 пасажу, при цьому клітини 20-33 пасажів, придатні для використання в лікувальних та/або діагностичних цілях, одержують шляхом культивування в живильному середовищі, що містить 10% фібринолітично активної плазми (ФАП) людини. При культивуванні клітин використовують переважно живильне середовище ДМЕМ з 10% ФАП.

Диплоїдні клітини людини охарактеризованої лінії М-20, одержувані вищевказаним способом, мають високу проліферативну активність і придатні для використання в лікувальних та/або діагностичних цілях.

Схема здійснення способу:

1. Використовується одна кріопробірка із банку посівних клітин 7 пасажу ІПВЕ ім. М.П. Чумакова РАМН

2. Приготування банку робочих клітин лише на рівні 16 пасажу ІПВЕ їм. М.П. Чумакова РАМН

3. Відновлення фібробластів лінії М-20 з банку робочих клітин 16 пасажу (ІПВЕ ім. М.П. Чумакова РАМН).

4. Отримання моношарової культури фібробластів лінії М-20, 17 пасаж.

5. Відновлення біологічних властивостей фібробластів лінії М-20 шляхом триразового пасування (до 20 пасажу включно) для репарації можливих пошкоджень ДНК у процесі кріоконсервування.

6. Отримання культур клітин для діагностичних цілей та замісної клітинної терапії тиражуванням фібробластів лінії М-20 з 20 по 33 пасаж з використанням живильного середовища, що містить 10% фібринолітично активної плазми (з вмістом PDGF від 155 до 342 пг/м.

Пропонований спосіб забезпечує отримання клітин, що володіють високою проліферативною активністю і придатних для використання в діагностичних та/або лікувальних цілях.

Даний технічний результат досягається культивуванням фібробластів людини лінії М-20 в живильному середовищі з додаванням 10% фібринолітично активної плазми (ФАП), що має ростстимулюючу дію і забезпечує посилення проліферативної активності культури клітин.

ФАП - клінічно використовується трансфузійне середовище, яке отримують з крові раптово померлих від інфаркту міокарда, гострої серцевої недостатності, крововиливу в головний мозок, у перші 6 годин після смерті [наказ МОЗ СРСР №482 від 14.06.1972 року установ та клінік трупними тканинами, кістковим мозкомі кров'ю»]. Посмертна кров є повноцінним трансфузійним середовищем, що має ряд біологічних властивостей – насамперед підвищений фібринолітичний потенціал. У зв'язку з цим посмертну кров запропоновано також називати фібринолізною. Основні показання до переливання посмертної крові: гостра крововтрата, шок, анемія різного походження, опікова травма, обмінне заміщення при екзогенних отруєннях, заповнення АІКу при використанні екстракорпорального кровообігу в хірургії [Е.Г. Цурінова. Переливання фібринолізної крові. М., 1960, 159; С.В. Рижків. Заготівля та можливості використання фібринолізної крові залежно від терміну взяття та причини смерті. Автореф. докт. дис. Л., 1968, 21 с.; Г.А. Пафомів. Біологічна характеристика крові раптово померлих та її використання у хірургічній практиці. Дис. докт. мед. наук. М., 1971, 355 с.; К.С. Симонян, К.П. Гутіонтова, Є.Г. Цурінова. Посмертна кров у аспекті трансфузіології. М., Медицина, 1975, 271 с.]. В даний час використовуються компоненти посмертної крові: фібринолітично активна плазма, еритроцитна маса, Лейкоцитна маса, тромбоцитна маса [Г.Я. Левін. Гемокоагуляційні властивості та клінічне застосуванняплазми та тромбоцитів кадаверної крові. Автореф. докт. дис. М., 1978, 31; В.Б. Хватів. Препарати фібринолітичної та антипротеназної дії з плазми крові раптово померлих людей. Дис. докт. медичних наук, 1984, 417 с.; V.B. Khvatov Plasmakinase - нова тромболітична preparation з postmortem plasma In: Thrombosis and Thrombolysis edd. E.I. Chazov, V.V. Смірнов). Consultants Bureau, N.Y., L, 1986, p. 283-310; В.Б. Хватів. Медико-біологічні аспекти посмертної крові. Вісник АМН СРСР, 1991, 9. С. 18-24; В.Б. Хватів. Трупна кров - історія та сучасний стан питання. Пробл. гематол. та перелив. крові, 1997, 1. З. 51-59]. Компоненти трупної крові, одержувані від донорів органів, також отримали клінічне застосування [загиблий індивід з серцем, що б'ється згідно з “Інструкцією з констатації смерті людини на підставі діагнозу смерті мозку” від 20.12.2001 р. №460, реєстрація Мін'юсту №3170 від 17 січня 2 . Трансплантація органів, тканин і клітин здійснюється згідно із Законом РФ «Про трансплантацію органів та (або) тканин людини» - в ред. Федеральних законіввід 20.06.2000 №91-Ф3; від 16.10.2006 №160-Ф3; В.Б. Хватов, С.В. Журавель, В.А. Гуляєв, Є.М. Кобзєва, М.С. Макарів. Біологічна повноцінність та функціональна активність клітинних компонентів крові донорів органів. Трансплантологія, 2011, 4, с. 13-19; Хубутія М.Ш., Хватов В.Б., Гуляєв В.А. та ін. Спосіб компенсації глобулярного об'єму крові та імуномодулюючого впливу при трансплантації. Патент РФ на винахід №2452519, опубл. 10.06.2012, бюл. №16].

Фібринолітично активну плазму одержують із крові раптово померлих людей, заготовленої на консерванті Глюгіцір (співвідношення кров: консервант 4:1) для збереження її фібринолітично активних властивостей. Відділення плазми від клітинних елементів крові виробляють у стерильному боксі з дотриманням усіх правил асептики та антисептики та аналогічно отриманню донорської плазми з консервованої донорської крові. Клінічне використання ФАП у хірургії та травматології виявило ефект стимуляції загоєння ран [І.Ю. Клюквін, М.В. Звездіна, В.Б. Хватов, Ф.А. Бурдига. Спосіб лікування укушених ран. Патент на винахід РФ №2372927, опубл., 20.11.2009, бюлл. №32]. Цей ефект ми пов'язували з присутністю ростстимулюючих факторів ФАП, що виділяються активованими тромбоцитами. Надалі у ФАП нами ідентифіковано тромбоцитарний фактор зростання (PDGF). Ростстимулюючу дію ФАП у культурі клітин людини показано у спеціальних дослідженнях. У клітинну суспензію фібробластів людини лінії М-20, що містить відому кількість клітин, додавали досліджувані зразки ФАП в 10% концентрації і по 10 мл отриманої суміші поміщали культуральні флакони з площею ростової поверхні 25 см 2 . Клітини вирощували протягом 3-4 діб при вмісті в атмосфері 5% CO 2 і 37°C. Після 3-кратного пасування проводили підрахунок вирослих клітин у камері Фукс-Розенталя і визначали відношення числа вирослих клітин до посаджених - індекс проліферації (у таблиці 1).

З проведених дослідів випливає, що ростові властивості ФАП забезпечують високу проліферативну активність і не відрізняються від такої ембріональної сироватки великої рогатої худоби. У цьому ФАП містить ростові чинники тромбоцитів людини, тобто. аллогенного типу, на відміну від ембріональної сироватки великої рогатої худоби - ксеногенного типу. Цей факт є визначальним при трансплантації клітин при замісній терапії. Зазначимо, що ростстимулююча дія на культуру клітин лінії М-20 зумовлена, зокрема, наявністю у ФАП PDGF у концентрації від 155 до 342 пг/мл. Ці дані отримані за допомогою набору реагентів "Qantikine, Human PDGF-BB Immunoassay" фірми "R&D Systems" та системи "Multiskan ascent" фірми "Thermo". Концентрація PDGF-BB у ФАП подібна до його вмісту в сироватці крові. Так, у сироватці донорів крові та обстежених пацієнтів вміст PDGF становив від 110 до 880 пг/л, в середньому 244 пг/мл, тоді як у плазмі вміст PDGF варіював від 0-2 пг/мл.

Для кращого розуміння пропонованого технічного рішення "виробництво диплоїдних клітин людини лінії М-20 для медико-біологічних цілей" наводимо наступний приклад.

Клітини лінії М-20 16 пасажу відновлюють із робочого банку. Для цього кріопробірку з клітинами вилучають з рідкого азоту і поміщають у водяну банюпри температурі 38°C і після відтавання вміст переносять у культуральну судину з живильним середовищем ДМЕМ, що містить 10% ФАП (з вмістом PDGF від 155 до 342 пг/мл), додають антибіотик гентаміцин з розрахунку 1 мл 4% розчину на 1 л . Для формування моношару клітини культивують протягом 4-5 діб при 37°C та вміст CO 2 в атмосфері 5%. Після формування моношару клітин проводять 3 послідовні пасажі, необхідні репарації ДНК після кріоконсервування. Потім проводять тиражування клітин з 20 до 33 пасаж. Клітини цих пасажів призначені для медико-біологічних цілей. Отримана лінія клітин докладно охарактеризована відповідно до вимог ВООЗ та ДНДІСіК МІБП ім. Л.А. Тарасевича, включаючи HLA-типування клітин лінії М-20, а також проведено вивчення її цитокінового спектру. Наводимо порівняльну характеристику властивостей лінії М-20 та лінії М-22 (таблиця 2). Лінія М 22 (диплоїдні фібробласти людини) ліцензована як вакцинний субстрат і дозволена для виробництва будь-яких видів медичних вірусних вакцин, а також застосована для лікування опікових ран II-IIIA ступеня [Патент РФ на винахід №2373944, 23.06.2008. Спосіб лікування опікової рани. А.С. Єрмолов, С.В. Смирнов, В.Б. Хватов, Л.Л. Миронова, О.І. Клнюшко, Є.А. Жиркова, В.С. Бочарова].

Лінію М-20 встановлено в ІПВЕ ім. М.П. Чумакова РАМН у 1986 році зі шкіри та м'язів 10-тижневого ембріона людини, отриманого в результаті аборту від здорової жінки. Онкологічних, венеричних захворювань, гепатиту, туберкульозу в анамнезі не виявлено; генетичних та уроджених захворюваньу сім'ї не спостерігалося. Середовище культивування клітин ДМЕМ із додаванням 10% ФАП. Коефіцієнт розсіву 1:3-1:4 двічі на тиждень при посівній дозі клітин 7×104кл/мл. Клітинний моношар складається з орієнтованих однорідних веретеноподібних клітин з овальними ядрами, що містять 1-3 ядерця і дрібні брилки хроматину. У життєвому циклілінії можна виділити 3 фази розвитку: становлення 1-3 пасажі, активне зростання 4-40 і старіння 41-52, потім наставала загибель. Клітини лінії мають каріотип людини 2т = 46 ХУ. Лінія характеризується високою генетичною стабільністю: 93,3-96,9% клітин мають диплоїдний набір хромосом, клітин із поліплоїдним набором не більше 1,6%. Прогалин і розривів, а також кільцевих хромосом не спостерігали. Кількість смуг ізоензимів Г-6ФДЕ та ЛДЕ та їх електрофоретична рухливість збігаються з такими для еритроцитів людини. Г-6ФДГ повільного типу. При сівбі на селективні живильні середовища контамінації бактеріями, грибами, мікоплазмами не виявлено. Крім цього, контамінації мікоплазмами не виявлено при фарбуванні ДНК-флуорохромами Hochst 33258 і оливоміцином, а також методом ПЛР. Контамінації вірусами у дослідах на сосунках та дорослих білих мишах, морських свинках, кроликах та курячих ембріонах, а також на гомологічних та гетерологічних культурах клітин не виявлено. Контроль туморогенності. При введенні клітин лінії імунодепресованих тварин пухлини не утворювалися. Зворотної транскриптази не виявлено. HLA-маркери: Клас I: A*(02.03)/B*(07.40)/CW*(03.07). Клас II: DRB1 * (15.16) / DQB1 * (05.06). Клітини лінії М-20 на рівні 20 пасажу продукують мРНК α-інтерферону (ІФНα) та інтерлейкінів: ІЛ1β, 2, 4, 6, 8, 10, 18.

Таким чином, пропонована лінія є диплоїдною - має обмежений термін життя, зберігає каріотип нормальних клітин людини протягом усього життя, вільна від контамінантів і не має онкогенних потенцій. Вона охарактеризована на безпеку відповідно до рекомендацій ВООЗ та вимог ГНДІСіК МІБП ім. Л.А. Тарасевіча. В ІПВЕ ім. М.П. Чумакова РАМН є банки посівних та робочих клітин, здатні забезпечити всі потреби виробництва та наукових досліджень. Клітини лінії М-20 чутливі до зараження різними вірусами. Додатково вивчено цитокіновий спектр лінії М-20. Знання цитокінового спектру клітин дозволяє більш точно оцінювати результати щодо інтерферонового статусу хворих і давати обґрунтовані рекомендації щодо застосування лікувально-профілактичних препаратів.

Диплоїдні клітини людини - фібробласти штаму М-20 з підвищеною проліферативною активністю, одержувані пропонованим способом, можуть бути використані для діагностичних цілей, зокрема для визначення активності інтерферону (ІФН) у сироватці крові людини, а також з лікувальною метою, наприклад для місцевого лікування пролежнів , укушених ран, які довго не гояться і опікових ран.

1. Спосіб підвищення проліферативних властивостей диплоїдних клітин фібробластів людини, який відрізняється тим, що диплоїдні клітини охарактеризованої лінії М-20 з кріобанку ІПВЕ ім. М.П. Чумакова РАМН масштабують з ампули банку посівних клітин 7 пасажу і отримують банк робочих клітин 16 пасажу, при цьому клітини 20-33 пасажів, придатні для використання в лікувальних та/або діагностичних цілях, отримують шляхом культивування в живильному середовищі, що містить 10% фібриноліт (ФАП) людини, що містить тромбоцитарний фактор росту PDGF у концентрації від 155 до 342 пг/мл.

2. Спосіб за п.1, в якому при культивуванні клітин використовують живильне середовище ДМЕМ з 10% ФАП.

Схожі патенти:

Винахід відноситься до фармацевтичної промисловості, а саме до застосування клітин плацентарного перфузату людини в отриманні лікарського засобудля пригнічення проліферації пухлинних клітин індивіда.

Група винаходів відноситься до галузі біотехнології та онкології. Спосіб передбачає: а) виділення постнатальних тканеспецифічних мультипотентних аутологічних стовбурових клітин (АСК) та/або аутологічних прогеніторних клітин (АПК) для їх подальшого протеомного та повнотранскриптомного аналізів; б) виділення АСК та/або АПК та/або мультипотентних алогенних HLA-гаплоідентичних стовбурових клітин (HLA-CK) для подальшого ремоделювання їх протеомного профілю; в) виділення РЗК з пухлини пацієнта; г) протеомний аналіз АСК та/або АПК та РСК; д) повнотранскриптомний аналіз АСК та/або АПК та РСК; е) визначення набору білків, кожен з яких міститься в протеомних профілях як АСК та/або АПК, так і РСК; ж) аналіз раніше визначеного набору білків для ідентифікації РСК внутрішньоклітинних сигнальних шляхів, що не зазнали неопластической трансформації в результаті канцерогенезу, і визначення білків-мішеней, що є мембранними акцепторами ідентифікованих сигнальних шляхів; з) аналіз повнотранскриптомного профілю експресії генів РСК та підтвердження безпеки та функціональної значущості структурних компонентів ідентифікованих сигнальних шляхів у РСК; і) визначення білків-лігандів, здатних активувати білки-мішені; к) порівняльний аналізповнотранскриптомних профілів АСК та/або АПК з транскриптомними профілями, що містяться у відомих базах даних транскриптомів, для визначення пертурбогенів, здатних модифікувати профіль експресії генів АСК та/або АПК та/або HLA-CK, виділених для ремоделювання їх протеомного профілю, у напрямку секре певних білків-лігандів; л) ремоделювання протеомного профілю АСК та/або АПК та/або HLA-CK пертурбогенами з отриманням модифікованого транскриптомного профілю різних клітинних систем, здатних надавати регуляторний вплив на РЗК пацієнта

Винахід відноситься до галузі біотехнології, безпосередньо до клітинних технологій, і може бути використане в медицині. Популяцію мононуклеарних клітин або неембріональних стовбурових клітин, збагачену клітинами моноцитарної лінії диференціювання, що містить промоноцити, застосовують для лікування ішемії суб'єкта.

Винахід відноситься до галузі біотехнології та клітинної технології. Заявлений винахід спрямовано на створення плюрипотентних, мультипотентних та/або самооновлюваних клітин, які здатні почати диференціюватися в культурі різні типиклітин та здатні до подальшого диференціювання in vivo.

Винахід відноситься до галузі медицини і може бути використане для відбору сперматозоїдів методами допоміжних репродуктивних технологій. Спосіб передбачає розміщення в чашці Петрі краплі сперми і краплі культурального середовища на відстані один від одного не більше 5 см, з'єднання крапель смугою з в'язкого середовища з параметрами в'язкості 1-4 Па·с, потім інкубують чашку з вмістом протягом 30-90 хв умовах, що моделюють природне середовище цервікального каналужіночий репродуктивний тракт.

Винахід відноситься до галузі медицини, біотехнології та клітинних технологій. Спосіб диференціювання плюрипотентних стовбурових клітин, що представляють собою лінію клітин людини, клітини, що експресують маркери, характерні для лінії сформованої ендодерми, включає обробку плюрипотентних стовбурових клітин середовищем, що відрізняється тим, що вона не містить активін А і містить GDF-8, протягом періоду часу , достатнього для того, щоб плюрипотентні стовбурові клітини диференціювалися в клітини, що експресують маркери, характерні для сформованої лінії ендодерми.

Даний винахід відноситься до галузі імунології. Запропоновано варіанти олігопептиду, виділені з білка RAB6KIFL (KIFL20A), які здатні індукувати цитотоксичні Т-лімфоцити (CTL) у складі комплексу з молекулою HLA-A*0201.

Винахід відноситься до галузі харчової промисловості і являє собою спосіб пивоваріння, що включає додавання до суслу термостабільної протеази після фільтрації сусла, але перед варінням сусла, причому термостабільність протеази означає, що активність цієї протеази становить щонайменше 70% її активності, виміряної згідно наступного методу: протеазу розводять до концентрації 1 мг/мл в аналітичному буфері, що містить 100 ммоль сукцинової кислоти, 100 ммоль HEPES, 100 ммоль CHES, 100 ммоль CABS, 1 ммоль СаСl2, 150 ммоль КСl, 0,10% Тритон рН, доведеним до 5,5 за допомогою NaOH; потім протеазу преинкубируют i) у льоду і ii) 10 хв при 70°С; субстрат, до якого протеаза проявляє активність, суспендують у 0,01% Тритоні Х-100: для початку реакції в пробірку додають 20 мкл протеази та інкубують у термоміксері Еппендорфа при 70°С, 1400 об/хв протягом 15 хвилин; реакцію зупиняють приміщенням пробірок у кригу; зразки центрифугують холодними при 14000 g протягом 3 хвилин та вимірюють оптичну щільність OD590 супернатанту; отримане значення OD590 зразків без протеази віднімають з отриманого значення OD590 зразків, оброблених протеазою; визначають термостабільність протеази за допомогою розрахунку процентної активності протеази у зразках, преінкубованих при 70°С, щодо активності протеази у зразках, інкубованих у льоду, як 100%-ної активності.

Винахід відноситься до галузі клітинної біології, клітинної трансплантології та тканинної інженерії. Спосіб підвищення ангіогенної активності стромальних клітин жирової тканини в тканинах і органах включає виділення стромальних клітин жирової тканини, культивування виділених клітин у присутності фактора некрозу пухлин-альфа в кількостях 5 або 100 нг/мл протягом 24-72 годин з подальшим трансплантуванням у тканині .

Винахід відноситься до галузі біотехнології, клітинних технологій і тканинної хірургії. Спосіб отримання культури гладком'язових клітин полягає в тому, що вирізують фрагмент кровоносної судини, подрібнюють його на шматочки до розмірів не більше 2 мм в будь-якому вимірі і інкубують шматочки в культуральному флаконі з попередньо нанесеними на дно флакона подряпинами, що містить середовище для культивування, що містить 1 ембріональної фетальної сироватки, щонайменше 10 днів, але не більше 24 днів, при температурі 37°С в умовах СО2-інкубатора, який відрізняється тим, що згаданим фрагментом кровоносної судини є фрагмент висхідного відділу грудної аорти, що вирізується в ході процедури аортокоронарного шунтування, а згадані шматочки фрагмента висхідного відділу грудної аорти перед інкубуванням витримують у середовищі для культивування, що містить 0,1% колагенази, протягом щонайменше 30 хвилин, але не більше 60 хвилин, при температур , після чого промивають середовищем для культивування клітин.

Спосіб отримання мезенхімальних стовбурових клітин з плюрипотентних стовбурових клітин людини та мезенхімальні стовбурові клітини, отримані цим способом // 2528250

Винахід відноситься до галузі генетичної інженерії, тканинних технологій та медицини. Спосіб отримання мезенхімальних стовбурових клітин з плюрипотентних ліній стовбурових клітин людини включає отримання ембріоїдних тілець. стовбурових клітин при збереженні ідентичності мезенхімальних стовбурових клітин , де індукція спонтанної диференціювання стадії відбувається шляхом формування петель аутологічного цитокіну без додавання зовнішнього цитокіну, також відповідні клітини, їх застосування, набір і спосіб культивування.

Винахід відноситься до галузі молекулярної біології, біохімії та медицини. Запропоновано композицію для індукції міграції стовбурових клітин жирової тканини дорослих, яка містить як активний інгредієнт людські мезенхімальні стовбурові клітини з жирової тканини дорослих у кількості від 1х107 до 1х1010, які експресують на клітинній поверхні рецептор хемокіну або фактора росту, включає рецептор хемокіну або фактор росту; де секретований продукт стовбурових клітин жирової тканини дорослих є адипонектин; і де людські стовбурові клітини жирової тканини дорослих піддаються первинному впливу сумішшю, що містить хемокін або фактор росту.

Винахід відноситься до біотехнології та медицини. Запропоновано спосіб експансії мононуклеарних клітин пуповинної крові (пкМНК) ex vivo у присутності мультипатентних мезенхімальних клітин (ММСК), що включає культивування ММСК із стромально-васкулярної фракції жирової тканини до досягнення моношару при концентрації O2 в середовищі 5%, додавання суспензи протягом 72 годин при концентрації O2 в середовищі 5%, відбір неприкріплених пкМНК і заміну середовища, продовження культивування ММСК з пкМНК, що до них прикріпилися, протягом 7 днів при концентрації O2 в середовищі 5%.

Винахід відноситься до галузі біотехнології та медицини. Запропоновано композицію, що містить стовбурові клітини з амніотичної рідини людини з фенотипом CD73+/CD90+/CD105+/CK19+, живильне середовище, еритропоетин, епідермальний фактор росту та колаген, взяті в ефективній кількості.

Винахід відноситься до галузі медицини та клітинних технологій. Запропоновано клітинний продукт, що містить популяцію протокових стовбурових клітин підщелепної слинної залози, що характеризуються фенотипом CD49f+/EpCAM+ і після обробки вальпроєвою кислотою в концентрації 0,1-40 мМ і культивування в колагеновому гелі змінюють профіль експресії на 1AAT+/PEPCK+/G6P+/TDO+/CYP Р4503А13+, а також придбання.

Винахід відноситься до галузі біотехнології, клітинної та тканинної інженерії. Описаний спосіб отримання резидентних стовбурових клітин серця ссавця, що експресують поверхневі маркери c-kit, та/або sca-1, та/або MDR1, в ході якого виділяють зразки тканини міокарда, подрібнюють їх, обробляють колагеназою та трипсином, проводять культивування на культуральній чашці з покриттям з фібронектину методом експлантної культури подрібнених зразків з подальшою імуноселекцією.

Винахід відноситься до галузі біохімії, біотехнології та медицини. Запропоновано N-кінцевий фрагмент розчинного супресора імунної відповіді довжиною 21 амінокислоту, що має послідовність амінокислот по Seq ID NО: 1, що дозволяє стимулювати утворення регуляторних Т-лімфоцитів, а також спосіб стимуляції утворення регуляторних Т-лімфоцитів N-кінцевим фрагментом розчинного супресора Seq ID NО: 1 при введенні його в концентрації 0,1-50 мкг/мл.

Винахід відноситься до фармацевтичної промисловості і являє собою дерматологічний крем, призначений для місцевого лікування бактеріальних інфекцій шкіри і для загоєння пов'язаних з ними ран, що містить сульфат фраміцетину і біополімер, включені в кремову основу, яка містить принаймні одну речовину з кожної наступної групи: консервант ; первинний та вторинний емульгатор, вибрані з групи, що містить кетостеариловий спирт, кетомакрогол 1000, полісорбат-80 та Span-80; парафін як воскоподібний продукт; спільний розчинник, вибраний з групи, що включає пропіленгліколь, гексиленгліколь і поліетиленгліколь-400; азотну кислоту або молочну кислоту та воду, а зазначений біополімер переважно є хітозаном.

Винахід відноситься до галузі біотехнології, безпосередньо до клітинних технологій, і може бути використане в медицині. Спосіб включає масштабування диплоїдних клітин лінії М-20 із кріобанку ІПВЕ ім. М.П. Чумакова РАМН з ампули банку посівних клітин 7 пасажу з отриманням банку робочих клітин 16 пасажу. При цьому клітини 20-33 пасажів, придатні для використання в лікувальних або діагностичних цілях, отримують шляхом культивування в поживному середовищі, що містить 10 фібринолітично активної плазми людини, що містить тромбоцитарний фактор росту PDGF в концентрації від 155 до 342 п. Винахід дозволяє підвищити проліферативну активність диплоїдних клітин фібробластів людини 1 з.п. ф-ли, 2 табл.