1. Серологічні методивиявлення антитіл (АТ) до ВІЛ - стандарт при діагностиці ВІЛ-інфекції (тест-системи ІФА на основі синтетичних пептидів - мають практично 100% чутливість і специфічність). ІФА дозволяє виявляти АГ ВІЛ, які можуть бути показниками раннього інфікування або навпаки пізнього – просунутого розвитку ВІЛ-інфекції (р24 АГ)
2. Підтверджуючі тести- імуноблотинг (ІБ), непряма імунофлюоресценція (НІФ) та радіоімунопреципітація (РІП).
а) ВООЗ рекомендує вважати позитивною сироватку, що має в ІБ антитіла до двох оболонкових білків і одного з внутрішніх білків ВІЛ. Пацієнти, позитивні в ІФА, але мають невизначені результати в ІХ, повинні бути обстежені клінічно та оцінені іншими способами, медичним обстеженням, імунологічно та через 3 - 6 місяців їх сироватку крові необхідно тестувати на антитіла до ВІЛ.
б) метод непрямої імунофлюоресценції (НІФ) - застосовують як підтверджуючий тест у багатьох лабораторіях або як скринінговий тест.
в) радіоімунопреципітація - високочутливий та специфічний метод, заснований на використанні мічених радіоактивними ізотопами амінокислот. Метод високо чутливий для виявлення антитіл до поверхневих білків і тому є високоспецифічним, оскільки ці компоненти вірусу присутні практично у всіх ВІЛ-інфікованих після сероконверсії.
3. Молекулярно-біологічні методи: метод молекулярної гібридизації нуклеїнових кислот, ПЛР
1) як альтернативний та додатковий підтверджуючий метод детекції наявності вірусу в організмі по відношенню до серологічних методів лабораторної діагностики;
2) як перший метод специфічного аналізупри діагностиці раннього ВІЛ-інфікування, коли ще відсутні специфічні противірусні антитіла;
3) для діагностики ВІЛ-інфікованості новонароджених від ВІЛ-інфікованих матерів;
4) для визначення вірусного навантаження та призначення специфічної антиретровірусної терапії та контролю за її проведенням;
5) як уточнюючий метод при неясних серологічних результатах та при розбіжності серологічних та культуральних аналізів;
6) для дослідження сексуальних партнерів ВІЛ-інфікованих осіб;
7) як метод диференціальної діагностики ВІЛ-1 та ВІЛ-2;
4. Вірусологічний метод.
1. Принципи антиретровірусної терапії: лікування має починатися до розвитку суттєвого імунодефіциту; початкова терапія повинна включати комбінації не менше ніж із трьох препаратів; модифікація терапії повинна полягати у заміні або підключенні не менше двох нових препаратів; дуже важливо вимірювати рівень СД4+ клітин та вірусне навантаження; зниження вірусного навантаження рівня, що лежить нижче межі визначення чутливих методик, відбиває оптимальний ефект лікування.
2. Виділяють три групи сучасних антиретровірусних препаратів:
а) нуклеозидні інгібітори зворотної транскриптази (НДПТ):зидовудин (азидотімідин, ретровір); диданозин (ddI, відекс); зальцитабін (ddC, хівід); ставудин (зерит, d4Т); ламівудін (3ТС, епівір); абакавір; адефовір; комбівір (зидовудін + абакавір); тризивір (зидовудін + ламівудін + абакавір); адефовір (нуклеотидний інгібітори зворотної транскриптази).
б) ненуклеозидні інгібітори зворотної транскриптази (ННІОТ):справавердин (рескриптор); невірапін(вірамун); іфавіренц.
в) інгібітори протеази (ІП):саквінавір; ритонавір (норвір); індинавір (криксиван); нельфінавір (вірасепт); ампренавір (агенераза); лопінавір (алувіран); калетра (лопінавір + ритонавір).
3. Монотерапія будь-яким препаратом не може забезпечити достатньо вираженого та тривалого пригнічення реплікації ВІЛ. Більше того, при монотерапії підвищено ризик появи резистентних штамів та розвитку перехресної стійкості до препаратів тієї ж групи. Єдиним винятком є використання зидовудину як монотерапію для зниження ризику перинатальної передачі ВІЛ.
4. Найбільш важливим критерієм ефективності терапії є динаміка вірусного навантаження, яке слід визначати: без лікування – кожні 6-12 місяців, на фоні лікування – кожні 3-6 місяців, а також через 4-8 тижнів після початку противірусної терапії.
Крім антиретровірусної терапії необхідна терапія захворювань, що приєдналися вдруге.
34.3 СНІД (клінічні варіанти, опортуністичні захворювання).
Опутуністичні захворювання— тяжкі, прогресуючі хвороби, які розвиваються на тлі наростаючої імуносупресії і не зустрічаються у людини з імунною системою, що нормально функціонує (СНІД-індикаторні захворювання).
а) перша група— це захворювання, які властиві лише тяжкому імунодефіциту (рівень ЦД4+< 200 кл/мкл) и поэтому определяют клинический диагноз: 1. Кандидоз пищевода, трахеи, бронхов. 2. Внелегочный криптококкоз. 3. Криптоспоридиоз с диареей более 1 месяца. 4. Цитомегаловирусная инфекция с поражением различных органов, помимо печени, селезенки или лимфоузлов. 5. Инфекции, обусловленные вирусом простого герпеса, проявляющиеся язвами на коже и слизистых оболочках. 6. Саркома Капоши у лиц, моложе 60 лет. 7. Первичная лимфома мозга у лиц, моложе 60 лет. 8. Лимфоцитарная интерстициальная пневмония и/или легочная лимфоидная гиперплазия у детей в возрасте до 12 лет. 9. Диссеминированная инфекция, вызванная атипичными микобактериями с внелегочной локализацией. 10. Пневмоцистная пневмония. 11. Прогрессирующая многоочаговая лейкоэнцефалопатия. 12. Токсоплазмоз с поражением головного мозга, легких, глаз у больного старше 1 месяца.
б) друга група- захворювання, які можуть розвинутися як на тлі тяжкого імунодефіциту, так і в ряді випадків без нього: 1. Бактеріальні інфекції, поєднані або рецидивні у дітей до 13 років (більше двох випадків за 2 роки спостереження): септицемія, пневмонія, менінгіт, ураження кісток або суглобів, абсцеси, обумовлені гемофільною паличкою, стрептококами. 2. Кокцидіомікоз дисемінований (нелегкова локалізація). 3. ВІЛ-енцефалопатія 4. Гістоплазмоз, дисемінований із позалегеневою локалізацією. 5. Ізоспороз з діареєю, що персистує понад 1 місяць. 6. Саркома Капоші у людей будь-якого віку. 7. В-клітинні лімфоми (за винятком хвороби Ходжкіна) або лімфоми невідомого імунофенотипу. 8. Туберкульоз позалегеневий. 9. Сальмонельозна септицемія рецидивна. 10. ВІЛ-дистрофія.
Найчастіше зустрічаються пневмоцистна пневмонія, криптококовий менінгоенцефаліт, генералізована цитомегаловірусна інфекція (енцефаліт, ретиніт, езофагіт, гепатит, коліт), сепсис змішаної етіології, генералізована форма саркоми Капоші, туберкульоз.
Всі ці захворювання протікають з ураженням одного або декількох органів і систем: головного мозку, легенів, печінки, шлунково-кишкового тракту і мають важкий прогресуючий характер. СНІД-індикаторні хвороби з'являються в різних поєднаннях, і навіть адекватна терапія не дає очікуваного ефекту.
Клінічні варіанти СНІД: інфекто-, нейро-, онко-СНІД залежно від переважання різної клініки.
ВІЛ: діагностика та лікування, профілактика
Синдром набутого імунодефіциту вже понад сорок років є однією з ключових проблем сучасного суспільства. Тому ВІЛ-діагностика зараз привертає багато уваги та ресурсів. Адже чим раніше буде виявлено вірус, що руйнує імунну систему організму, тим більш високими виявляться шанси уникнути смерті.
Під абревіатурою ВІЛ ховається визначення вірусу імунодефіциту людини — одного з найнебезпечніших серед існуючих. Під його впливом відбувається глибоке гноблення всіх захисних властивостей організму. Це, у свою чергу, призводить до виникнення різних злоякісних утворень та вторинних інфекцій.
Протікати ВІЛ-інфекція може по-різному. Іноді захворювання знищує людину за 3-4 роки, в деяких випадках може тривати більше 20 років. Цей вірус є нестійким і швидко гине, якщо знаходиться поза організмом носія.
ВІЛ може передаватися штучно, гемоконтактним шляхом та за допомогою біоконтактного механізму.
Якщо мав місце одиничний контакт із носієм вірусу, то ризик зараження буде низьким, але при постійній взаємодії він значно підвищується. Діагностика ВІЛ-інфекції - це те, чим не можна нехтувати, особливо при зміні статевого партнера
Звернути увагу варто і на парентеральний шлях зараження. Воно може статися під час гемотрансфузій зараженої крові, ін'єкцій з використанням голок, забруднених кров'ю ВІЛ-інфікованих, а також при нестерильних медичних маніпуляціях (татуювання, пірсинг, стоматологічні процедури з використанням інструментів, які не оброблені належним чином).
При цьому варто знати, що контактно-побутової передачі вірусу боятися не потрібно. Але факт залишається фактом: людина має високу сприйнятливість до ВІЛ-інфекції. І якщо заражається суб'єкт у віці за 35, то розвиток СНІДу відбувається значно швидше, ніж у тих, хто ще не подолав тридцятирічний рубіж.
Звісно, найкращий спосіб ідентифікувати проблему чи її відсутність – це діагностика ВІЛ-інфекції. Але які причини можуть бути у людини, яка веде здоровий образжиття, йти і перевіряти себе на факт зараження? Природно, що така ініціатива має бути чимось обґрунтованою. Тому важливо знати, які симптоми можуть свідчити про руйнівні процеси, що пригнічують імунну систему.
Стадію інкубації вірусу без аналізу крові виявити навряд чи вдасться, оскільки організм у цей час ще не реагує на ворожі елементи.
Друга стадія (первинні прояви) без допомоги лікаря може протікати непомітно. Але іноді відбувається активна реплікація вірусу, і організм на це починає реагувати – відзначається лихоманка, різні поліморфні висипи, лієнальний синдром та фарингіт. На другій стадії можливе приєднання таких вторинних захворювань, як герпес, грибкові інфекції, пневмонія та ін.
Для третьої, латентної стадії характерно поступове наростання імунодефіциту. Через те, що клітини захисної системи гинуть, динаміка їхнього виробництва підвищується, і це дозволяє компенсувати відчутні втрати. На цьому етапі кілька лімфатичних вузлів, Що належать різним системам, можуть запалитися. Але сильні хворобливі відчуттяпри цьому немає. У середньому латентний період триває від 6 до 7 років, але може затягтися на 20.
Під час стадії вторинних захворювань, яка є четвертою, з'являються супутні інфекції грибкового, бактеріального протозойного, вірусного генезу, а також злоякісні утворення. Усе це відбувається і натомість вираженого імунодефіциту.
Методи діагностики ВІЛ-інфекції
Говорячи про глибоке гноблення захисних механізміворганізму внаслідок дії вірусу, варто відзначити, що майбутнє пацієнта в цьому випадку безпосередньо залежить від своєчасної та точної діагностики.
Для цього в сучасної медицинивикористовуються різні тест-системи, в основі яких лежить імунохемілюмінесцентний, а також імуноферментний аналіз крові. Ці методики дозволяють визначити наявність антитіл, що належать різним класам. Такий результат допомагає відчутно збільшити інформативність методів аналітичної, клінічної специфічності та чутливості під час роботи з інфекційними захворюваннями.
Цікавим також є той факт, що саме метод полімеразної ланцюгової реакції дозволив вивести діагностику ВІЛ на новий рівень. Як матеріал для дослідження підходять різні біологічні матеріали: плазма крові, біоптат, зіскрібок, сироватка, спинномозкова або плевральна рідина.
Якщо говорити про методи лабораторних досліджень, вони передусім орієнтовані виявлення кількох ключових захворювань. Йдеться про ВІЛ-інфекцію, туберкульоз, всі інфекції, які передаються статевим шляхом, та вірусні гепатити.
Для ідентифікації вірусу імунодефіциту використовуються також молекулярно-генетичні та серологічні тести. У першому випадку визначається РНК вірусу та ДНК провірусу, у другому випадку проводиться аналіз антитіл до ВІЛ та виявляється антиген Р24.
У клініках, які застосовують, так би мовити, класичні способидіагностики, що використовується переважно стандартний протокол серологічного тестування.
Рання діагностика ВІЛ
Цей вид визначення факту зараження необхідний у тому, щоб виявити загрозу ураження імунної системи якомога раніше. Це, по-перше, дозволяє уникнути поширення інфекції, по-друге, вплинути захворювання на початковій стадії.
Якщо розглядати приклад Росії, то в армії та на флоті РФ було введено клінічну класифікацію ВІЛ-інфекції. Це дало свої позитивні результати: процес ранньої клінічної діагностики став значно легшим.
Як поширені симптоми, що свідчать про можливе ураження імунної системи, можна визначити головний біль, нічну пітливість і невмотивовану стомлюваність. Можливий також розвиток лихоманки, що супроводжується ознаками тонзиліту. Це означає, що підвищується температура до 38 градусів і вище, і при цьому збільшуються піднебінні мигдалики, а також біль під час ковтання. Все це доповнюється швидкою втратою ваги. При цьому ці симптоми часто мають комплексний характер.
У деяких випадках ВІЛ-інфекція на ранніх стадіяхможе виявлятися як різних змін стану шкіри. Йдеться про плями, розеоли, гнійнички, фурункульози та ін. Рання ВІЛ-діагностика також включає роботу з такими симптомами, як генералізоване або обмежене збільшення периферичних лімфатичних вузлів.
Якщо спостерігається одночасне зростання кількох лімфовузлів, що триває протягом трьох місяців і більше, причому у різних групах, крім пахвинної областітобто всі підстави підозрювати вірус імунної системи людини.
Говорячи про діагностику в більш пізній періодпотрібно звернути увагу на прояв вторинного імунодефіциту, що часто протікає під виглядом різних клінічних симптомів. Йдеться про такі прояви:
- невмотивована генералізована периферична лімфаденопатія;
- артралгія нез'ясованої етіології, яка має хвилеподібну течію;
- ГРВІ (ГРЗ), запальні ураження легень та дихальних шляхів, які дають себе знати досить часто;
- лихоманки неясного генезу та тривалий субфебрилітет;
- загальна інтоксикація, яка проявляється за допомогою невмотивованої слабкості, швидкої стомлюваності, млявості та ін.
- проведення ранньої діагностикиінфікування ВІЛ;
- внесення ясності за наявності сумнівних результатів у результаті иммуноблоттингового дослідження;
- ідентифікація конкретної стадії хвороби;
- контроль ефективності лікування, спрямованого придушення вірусу.
ВІЛ-діагностика на пізньому етапівключає обстеження при такому захворюванні, як саркома Капоші, що проявляється появою множинних новоутворень часто у верхній частині тіла у молодих людей з подальшим динамічним розвитком та метастазуванням.
Полімеразна ланцюгова реакція
Розглядаючи різні методи діагностики ВІЛ-інфекції, варто приділити окрему увагу. Відразу слід зазначити, що даний аналіз крові може бути спрямований на кількісну та якісну характеристику.
Як мета подібного способу виявлення вірусу можна визначити такі завдання:
Якщо говорити про первинне інфікування, слід зазначити, що подібна методика дозволяє визначити РНК ВІЛ у крові пацієнта після 14 днів з моменту зараження. Це дуже добрий результат. У цьому сам результат дослідження матиме якісне вираз: або позитивний (вірус присутній), або негативний.
Кількісний вираз ПЛР
Цей тип полімеразної ланцюгової реакції використовується для того, щоб визначити можливу швидкість розвитку СНІДу та скласти прогноз тривалості життя пацієнта.
Кількісне визначення клітин РНК ВІЛ у крові дає можливість зрозуміти, коли хвороба перейде у клінічну стадію.
Варто звернути увагу на той факт, що методи лабораторної діагностики ВІЛ дають точніший результат, якщо необхідний для аналізів біоматеріал визначається правильно, а його огорожа проводиться грамотно.
Для того, щоб здійснювати якісний моніторинг інфікованих, необхідно (за наявності такої можливості) використовувати комплексний підхіддля дослідження імунного статусу пацієнта. Йдеться про кількісне та функціональне визначення всіх ланок захисної системи: клітинний, гуморальний імунітет і неспецифічна резистентність як така.
Лабораторна діагностика
Все частіше у сучасних лабораторних умовах використовується багатоетапний метод оцінки стану імунної системи. Така методика нерідко має на увазі визначення субпопуляції імуноглобулінів, лімфоцитів у крові. Це означає, що в облік береться співвідношення клітин CD4/CD8. Якщо результат показує менше 1,0, то є підстави підозрювати імунодефіцит.
Лабораторна діагностика ВІЛ-інфекції повинна включати цей тест в обов'язковому порядку, оскільки для цього вірусу характерна вибіркова поразка CD4-лімфоцитів, що призводить до помітного порушення згаданого вище співвідношення (менше 1,0).
Для оцінки імунологічного статусу медики можуть проводити тест щодо наявності «грубих» чи загальних дефектів у системі гуморального і клітинного ланки імунітету. Йдеться про гіпогаммаглобулінемію або гіпергаммаглобулінемію в термінальної стадії, а також зниження продукції цитокінів, підвищення концентрації циркулюючих імунних комплексів, ослаблення відповіді з боку лімфоцитів на мітогени та антигени.
Варто звернути увагу і на той факт, що лабораторна діагностика ВІЛ має два ключові етапи:
- Скринінгова лабораторія. Якщо був отриманий позитивний результат в ІФА (імуноферментний аналіз), його повторюють ще два рази в тій же системі і без зміни сироватки. У тому випадку, коли два з трьох обстежень призвели до виявлення впливу вірусу, сироватку відправляють для подальшого дослідження референс-лабораторію.
- Другий етап, який включають методи лабораторної діагностики ВІЛ-інфекції, — це визначення стану імунної системи. Проводиться воно у згаданій вище референс-лабораторії. Тут позитивна сироватка знову досліджується в ІФА, але вже з використанням іншої тест-системи, яка відрізняється від колишнього складу антигенів, антитіл або формату самих тестів. При визначенні негативного результату проводиться повторне дослідження у третій тест-системі. Якщо вплив вірусу так і не було виявлено, то фіксується відсутність ВІЛ-інфекції. А ось при позитивному результаті сироватка досліджується у лінійному чи імунному блоті.
У кінцевому підсумку такий алгоритм призводить до отримання позитивних, нейтральних чи негативних результатів.
Кожен громадянин повинен знати, що йому доступна діагностика ВІЛ. СНІД можуть ідентифікувати в установах приватної, муніципальної чи державної охорони здоров'я.
Природно, ідентифікація вірусу була мало корисна за відсутності різних методів на інфекцію. І хоча на даний момент ще немає вакцини, яка могла б повністю нейтралізувати вірус, грамотна діагностика, лікування ВІЛ та подальша профілактика здатні відчутно покращити стан хворого, продовживши цим життя. Ця теза підтверджує той факт, що середня тривалість життя чоловіків, які розпочали своєчасне лікування ВІЛ, становить 38 років. Жінки, які розпочали боротьбу з вірусом імунодефіциту, живуть у середньому 41 рік.
Після того, як було проведено діагностику, лікування ВІЛ зводиться до застосування кількох методик. Як одна з найпоширеніших можна визначити активну антиретровірусну терапію, вона ж ВААРТ. Якщо вчасно і грамотно застосувати цей вид лікування, можна значно уповільнити розвиток СНІДу або зовсім зупинити його.
Суть ВААРТ зводиться до того, що одночасно використовується кілька фармпрепаратів, які мають на меті вплив на різні механізми розвитку вірусу імунодефіциту.
Після того, як різні методи діагностики ВІЛ визначили факт зараження, можуть використовуватися ліки, які надають такі види впливу:
Важко переоцінити важливість таких заходів на хворобу, як діагностика, лікування, профілактика ВІЛ-інфекції. Тому найкраще, що можна зробити після позитивного результату дослідження щодо зараження, — це відразу почати боротися із хворобою. Як ще один метод, який допоможе це зробити, можна визначити вірусологічне лікування.
У цьому випадку йдеться про використання препаратів, які не дозволяють вірусу прикріпитися до Т-лімфоциту та потрапити всередину організму. Називаються такі препарати інгібіторами проникнення. Як конкретний приклад можна навести «Целзентрі».
Для придушення ВІЛ можна використовувати інгібітори вірусної протеази. Метою цієї групи ліків є запобігання зараженню нових лімфоцитів. Це такі препарати, як "Вірасепт", "Реатаз", "Калетра" та ін.
Третя група актуальних ліків – це інгібітори зворотної транскриптази. Вони необхідні для блокування ферменту, що дозволяє розмножуватися РНК вірусу в ядрі лімфоциту. Такі методи дозволяють відчутно вплинути таку проблему, як ВІЛ-інфекція. Діагностика, лікування та профілактика СНІДу — це справа кваліфікованих лікарів, тому алгоритм використання препаратів мають складати саме вони.
При необхідності може використовуватися також імунологічний та клінічний вплив.
Всесвітня організація охорони здоров'я пропонує наступні методиборотьби з ВІЛ-інфекцією:
Для того, щоб ВІЛ-діагностика не виявила наявність вірусу, потрібно слідувати простим правиламбезпеки:
Завдяки тому факту, що ВІЛ-діагностика не стоїть на місці, тисячі людей отримують можливість вчасно розпочати лікування та значно збільшити тривалість життя. Головне, не ігнорувати очевидні симптоми та не боятися йти до лікаря.
Лабораторна діагностика ВІЛ-інфекції
Обстеженню на ВІЛ-інфекцію підлягають:
2. Особи з підозрою або підтвердженим діагнозом: бактеріальної інфекції у дітей віком до 13 років, множинної та рецидивуючої; кандидозу стравоходу, трахеї, бронхів чи легень; цервікального інвазивного раку; дисемінованого або позалегеневого кокцидіомікозу; криптококозу позалегеневого; криптоспоридіоз з діареєю протягом 1 міс і більше; цитомегаловірусного ураження інших органів, крім печінки, селезінки, лімфатичних вузлів у хворих старше 1 місяця; цитомегаловірусного ретиніту із втратою зору; герпетичної інфекції, що викликає багатовогнищеві виразки, які не виліковуються протягом 1 місяця, або бронхіт, пневмонію, езофагіт; гістоплазмозу дисемінованого або позалегеневого; ізоспороза з діареєю понад 1 міс; туберкульозу поширеного чи позалегеневого; туберкульозу легень у дорослих або підлітків віком від 13 років; туберкульозу позалегеневого; іншого захворювання, викликаного мікобактеріями, крім М. tuberculosis дисемінованого або позалегеневого; пневмонії, спричиненої пневмоцистами; прогресуючої багатофокусної лейкоенцефалопатії; сальмонельозної (крім Salmonella typhi) септицемії, що рецидивує; токсоілаз-моза мозку у дітей старше 1 міс; саркоми Капоші; лімфоїдної інтерстиціальної пневмонії у дітей віком до 13 років; лімфоми Беркітта; імунобласної лімфоми; первинної лімфоми мозку; синдрому виснаження, гепатиту В, носія HBsAg; інфекційного мононуклеозу; рецидивуючого оперізувального герпесу в осіб старше 60 років; хвороб, що передаються статевим шляхом.
У високоспеціалізованій лабораторії проводяться:
а) визначення циркулюючих у крові антитіл, антигенів та імунних комплексів; культивування вірусу, виявлення його геномного матеріалу та ферментів;
б) оцінка функцій клітинної ланки імунної системи. Основна роль належить методам серологічної діагностики, спрямованим на визначення антитіл, а також антигенів збудника в крові та інших біологічних рідинахорганізму.
Тестування на антитіла до ВІЛ здійснюють з метою:
а) безпеки гемотрансфузій та трансплантацій;
б) епіднагляду, тестування з метою моніторингу превалентності ВІЛ-інфекції та вивчення динаміки її поширеності у певній популяції;
в) діагностики ВІЛ-інфекції, тобто добровільне тестування сироватки крові практично здорових людей або хворих з різними клінічними ознаками та симптомами, подібними до ВІЛ-інфекції або СНІДу.
Система проведення лабораторної діагностики ВІЛ-інфекції побудована за триетапним принципом. Перший етап – скринінговий, призначений для виконання первинних досліджень крові на наявність антитіл до білків ВІЛ. Другий етап референтний - дозволяє за допомогою спеціальних методичних прийомівуточнити (підтвердити) первинний позитивний результат, отриманий на етапі скринінгу. Третій етан – експертний, призначений для остаточної перевірки наявності та специфічності маркерів ВІЛ-інфекції, виявлених на попередніх етапах лабораторної діагностики. Необхідність кількох етапів лабораторної діагностики обумовлена передусім економічними міркуваннями.
У практиці застосовується кілька тестів, що дозволяють з достатньою мірою достовірності виявляти ВІЛ-інфікованих:
ІФА (ELISA)-тест (твердофазний імуноферментний аналіз) виявлення першого рівня, характеризується великою чутливістю, хоча і меншою специфічністю перед нижченаведеними;
Імунний блот (Western-blot), вельми специфічний тест, що найбільше використовується, що дозволяє диференціювати ВІЛ-1 і ВІЛ - 2;
Антигенемія р25-тест, ефективний в початкових стадіяхзараження;
Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР).
У випадках масового скринінгу зразків крові рекомендується тестувати суміші сироваток від групи обстежуваних, складені з таким розрахунком, щоб кінцеве розведення кожного зразка не перевищувало 1:100. Якщо суміш сироваток виявляється позитивною, проводиться дослідження кожної сироватки позитивної суміші. Цей спосіб не веде до втрати чутливості як у ІФА, так і в імуноблоті, але знижує трудові витрати та вартість первинного обстеження на 60-80%.
При первинній серодіагностиці ВІЛ-інфекції проводиться визначення сумарних антитіл за допомогою скринінгових відбірних тестів – ІФА та аглютинаційних реакцій. На другому (арбітражному) етапі використовують складніший тест - імуноблот, що дозволяє не тільки підтвердити або відхилити початковий висновок, але й зробити це на рівні визначення антитіл до індивідуальних білків вірусу.
Імуноферментний аналіз(ІФА) є основним та найбільш широко застосовуваним методом визначення антитіл до ВІЛ. Але до недоліків застосування ІФА у серодіагностиці ВІЛ-інфекції слід віднести часті хибнопозитивні результати. У зв'язку з цим результат ІФА не є підставою для висновку про ВІЛ-серопозитивність обстежуваного. Це пов'язано з недостатнім очищенням імуносорбенту від баластних білків; спонтанним зв'язуванням антитіл сироватки з пластиком, якщо його ділянки, які не зайняті імуносорбентом, недостатньо блоковані або не блоковані зовсім спеціальним нейтральним білком; перехресною взаємодієюз ВІЛ-білками імуносорбенту різних протеїнів, присутніх у крові осіб з певними, найчастіше аутоімунними патологічними процесами типу розсіяного склерозу, ВКВ, туберкульозу; з частим донорством, інфекційними та онкозахворюваннями, опіками, вагітністю, повторними гемотрансфузіями, пересадкою органів, тканин, а також осіб, які перебувають на гемодіалізі; з присутністю в крові ревматоїдного фактора, що часто провокує ВІЛ-хибно-позитивні реакції; наявністю в крові обстежуваних людей антитіл до gag-білків ВІЛ і насамперед до білка р24 (очевидно, утворюються антитіла до екзо-або ендогенних ще не ідентифікованих ретровірусів). Оскільки анти-р24 синтезуються обов'язково на ранніх стадіях ВІЛ-сероконверсії, проводиться подальше імунологічне спостереження за особами з антитілами до gag-білків ВІЛ, а також усунення їх від донорства.
Чутливість та специфічність імуноферментного аналізу постійно підвищуються. У результаті ІФА четвертого покоління не поступаються своїм діагностичним можливостям імунного блотингу і можуть бути використані не тільки на скринінговому, але і на підтверджуючому етапі діагностики ВІЛ-інфекції [Смольська Т. Т., 1997].
Імуноблотингє кінцевим методом серологічної діагностики, що дозволяє зробити остаточний висновок про ВІЛ-позитивність або негативність обстежуваного.
Існує чітка кореляція між результатами дослідження сироваток в імуноблоті та ІФА - двічі позитивні в ІФА з різними тест-системами сироватки в 97-98% випадків виявляються потім ВІЛ-позитивними в імуноблотингу. Якщо сироватки виявилися позитивними в ІФА лише в одній з двох використаних тест-систем, в імуноблоті вони виявляються позитивними лише в 4% випадків. У 5% випадків під час проведення підтверджуючих досліджень в осіб із позитивними даними ІФА-імуноблот може давати «невизначені» результати, а серед них приблизно в 20% випадків «невизначені» результати викликають антитіла до gag-білків ВІЛ-1 (р55, р25, р18) ). Наявність антитіл тільки до gag-білків ВІЛ-1 є приводом для додаткового обстеженнясироватки крові на інфікування ВІЛ-2
Оцінка результатів імуноблотингу здійснюється строго відповідно до інструкції, що додається до тест-системи. У разі відсутності в інструкції вказівок щодо інтерпретації результатів слід використовувати критерії ВООЗ.
При отриманні позитивних результатів досліджень на референтному етапі лабораторної діагностики ВІЛ-інфекції та негативному результаті дослідження методом імунного блотингу проводиться обов'язкова повторна експертна діагностика через 6 місяців після першого обстеження.
Якщо результати імуноблотингу через 12 місяців після дослідження першої проби залишаються негативними або невизначеними, то за відсутності факторів ризику, клінічних симптомів або інших факторів, пов'язаних з ВІЛ-інфікуванням, знімають обстежуваного з диспансерного спостереження.
Серед серологічних методів у разі невизначених результатів імуноблоту використовується як експертна діагностика радіоімунопреципітація(РІП). В її основі лежить використання білків вірусу, мічених радіоактивним йодом, а преципітати виявляються за допомогою бета-лічильників. До недоліків методу належить дорожнеча апаратури, необхідність устаткування цих цілей спеціальних приміщень.
Особи, у яких діагностовано ВІЛ-інфекцію, підлягають постійному динамічному спостереженню з обов'язковим лабораторним обстеженням кожні 6 місяців.
Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) виявляє попередньо помножені нуклеотидні послідовності, специфічні для геному даного збудника. Ізольоване множення гена або його фрагмента, зване ампліфікацією, ПЛР дає можливість здійснювати пробірку за допомогою ферменту термостабільної ДНК-полімерази. За 2-3 години ПЛР дозволяє отримати мільйони копій специфічної ділянки вірусу. При ВІЛ-інфекції з клітинної РНК, що включає і РНК вірусу, якщо він репродукувався в клітині або був інтегрований в її геном, за допомогою зворотної транскрипції та гібридизації з міченими олігонуклеотидними «зондами» отримують достатню для аналізу кількість провірусної ДНК, яку виявляють і характеризують , як і щодо приналежності до геному ВІЛ, за радіоактивною або іншою міткою зонда встановлюючи гомологію ДНК та специфічних для вірусу амінокислотних послідовностей. Чутливість ПЛР – виявлення вірусних генів в одній із п'яти тисяч клітин.
ПЛР, у тому числі кількісна, може бути використана тільки з метою визначення вірусного навантаження на плазму для вирішення питання початку медикаментозного лікування хворого або зміни антиретровірусних лікарських препаратів. ПЛР не може бути рекомендована для встановлення діагнозу ВІЛ-інфекції, оскільки навіть найсучасніші методи її постановки та реактиви дозволяють визначити вірусне навантаження не нижче певного рівня - 50 копій/мл. А складність постановки ПЛР та її дорожнеча (близько 200 доларів) зводять нанівець її широкомасштабне використання як методу повсякденної лабораторної діагностики ВІЛ-інфекції. Таким чином, ПЛР залишається незамінною лише для оцінки вірусного навантаження на плазму у хворих із уже встановленим діагнозом ВІЛ-інфекції з метою вирішення питання терапії хворих.
Схематично етапи лабораторної діагностики ВІЛ-інфекції подано на рис. 1.
Мал. 1. Етапи лабораторної діагностики ВІЛ-інфекції
Протягом ВІЛ-інфекції існує період «темного лабораторного вікна», коли кількість антитіл проти ВІЛ недостатня для чутливості тест-систем. Цей період коливається від одного тижня до трьох місяців від моменту зараження ВІЛ залежно від рівня чутливості тест-системи. З урахуванням цього явища виникають складності під час обстеження донорської кровівід осіб, які перебувають у згаданому періоді ВІЛ-інфікування. Тому в більшості країн світу введено систему використання крові тільки після її зберігання протягом 3-6 місяців з метою здійснення обов'язкового повторного обстеження на ВІЛ-інфекцію донорів даних доз крові та її компонентів.
Стадія первинних проявівхарактеризується активністю реплікативного процесу. Вирімія, що виникають, і антигенемія викликають утворення специфічних антитіл класу IgM: анти-р24, анти-g41, анти-g120. Антиген р24 у частини інфікованих може бути виявлений у крові методом ІФА вже через 2 тижні після зараження і визначатися до 8-го тижня. Далі в клінічному перебігуВІЛ-інфекції відзначається другий підйом вмісту у крові білка р24, він посідає період формування стадії СНІД.
Поява повної сероконверсії, коли в периферичній крові реєструється високий рівень специфічних антитіл класу IgG до структурних білків ВІЛ gp41, р24, gpl20, суттєво полегшує діагностику ВІЛ-інфекції. Більшість комерційних наборів розраховано на індикацію таких антитіл.
Труднощі з виявленням антитіл у хворих на ВІЛ-інфекцію можуть виникнути в періоди масивної віремії та антигенемії, коли наявні специфічні антитіла в крові витрачені на зв'язування вірусних частинок, і реплікативний процес випереджає напрацювання нових противірусних антитіл.
У осіб із вихідно ослабленою імунною системою віремія та антигенемія з'являються раніше і зберігаються на високому рівні до результату захворювання. Водночас у таких хворих відзначається низький вміст вільних антитіл до ВІЛ, обумовлений двома причинами - недостатньою продукцією антитіл В-лімфоцитами та зв'язуванням антитілами віріонів та розчинних білків ВІЛ, тому для визначення інфікованості потрібні тест-системи з підвищеною чутливістюабо модифікації методів аналізу, що передбачають етап вивільнення антитіл із імунних комплексів.
Незважаючи на велику кількість специфічних маркерів ВІЛ-інфекції, найчастіше визначальним є наявність сумарних антитіл до білків ВІЛ. Термін «сумарний» має на увазі присутність двох класів антитіл (IgG та IgM) та широкий спектрантитіл до різних, насамперед до структурних, білків ВІЛ.
Визначення CD4-клітин. Основним клініко-лабораторним показником діагностики стадії ВІЛ-інфекції, ступеня руйнування імунної системи у хворих на повсякденному життістало визначення вмісту CD4+-лімфоцитів: зменшення рівня нижче 200 клітин/мм3 є основним критерієм встановлення діагнозу СНІД. Вважається, що всі ВІЛ-інфіковані особи з кількістю CD4+-лімфоцитів 200 клітин/мм3 і нижче потребують як противірусної терапії, так і профілактики пневмоцистної пневмонії. І хоча у 1/3 ВІЛ-інфікованих із кількістю С04+-лімфоцитів менше 200 клітин/мм3 відсутні клінічні проявиДосвід показав, що у них симптоми розвиваються в найближчі 2 місяці, тому вони всі розцінюються як хворі на стадії СНІДу.
Діагностика ВІЛ-інфекції
Як дізнатися, чи має людина ВІЛ? Найпоширеніший метод діагностики ВІЛ-інфекції – імуноферментний аналіз (ІФА). Імуноферментні тест-системи використовуються для виявлення у сироватці крові антитіл до ВІЛ.
ВІЛ-інфекція підтверджується двома різними тестами – скринінговим тестом та підтверджуючим тестом. Через високу чутливість скринінгові тести можуть давати хибнопозитивні результати. Тому, зазвичай при отриманні первинного позитивного результатубереться той же зразок крові і скринінговий тест дублюється вдруге, і якщо він знову позитивний, тільки тоді проводиться підтвердження тесту іншого типу. Підтверджуючі тести проводяться лише зразків крові, які неодноразово дають позитивні результати (є «реактивними»).
Найбільш поширений скринінговий тест – імуноферментний аналіз (ІФА). Зазвичай йому використовують як підтверджуючого тесту імунний блотинг. Комбінація з двох різних типів тестів гарантує, що отримані результати мають «високу точність».
Скринінгові тест-системи використовують штучно створені білки ВІЛ, які ловлять специфічні антитіла, вироблені організмом у відповідь на білки вірусу. Як тільки антитіла спіймані, вони можуть бути визначені реагентами, які застосовуються разом з індикатором, наприклад, ферментом, який призводить до зміни кольору. Зміни кольору зчитуються машиною, яка визначає результат. Імунний блотинг діє за схожою схемою, але для нього використовується електричне поле, яке розрізняє різні компоненти на основі їхньої молекулярної маси. Це дозволяє визначити антитіла до специфічних вірусних антигенів, які потім зображуються на папері як помітні «смужки». Сучасні тест-системи можуть визначити ВІЛ-інфекцію через 3-5 тижнів у більшості людей.
Якщо був ризик зараження на ВІЛ, коли можна зробити тест?
Імуноферментний аналіз (ІФА), який використовується для діагностики ВІЛ, може показати результат лише за кілька тижнів після інфікування. Цей тип аналізу визначає не сам вірус, а антитіла щодо нього. У деяких людей антитіла присутні у крові в достатній кількості вже через 2 тижні. Тим не менш, у більшості людей освіта антитіл (сероконверсія) займає більше часу. Щоб результат тесту був достовірним, необхідно, щоб пройшло близько 3 місяців після ризикованої ситуації. Іноді утворення антитіл займає більше часу – від 3 до 6 місяців.
Якщо результат тесту є негативним через 3 місяці, чи обов'язково робити повторний тест через 6 місяців?
У переважної більшості людей тест цілком достовірний через 3 місяці (у більшості антитіл з'являються ще раніше). Можна повністю виключити можливість зараження, здавши аналіз через 6 місяців.
Як довго потрібно чекати на результати тесту?
Це від особливостей лабораторії, у якій проводитися тестування. Тест ІФА можна зробити протягом цього дня, але в більшості лабораторій цей термін може становити від 1-2 днів до 2 тижнів. Враховуючи, що очікування на результати може бути дуже неприємним періодом, найкраще уточнити це питання заздалегідь, до здачі аналізу. Також можна дізнатися, чи не вплинуть на термін тесту вихідні дні та святкові дні.
Наскільки достовірним є позитивний результат тесту?
Іноді у ІФА бувають хибнопозитивні результати (приблизно в 1% випадків), причиною подібного результату може бути вагітність, різні вірусні інфекції, а також проста випадковість. Після отримання позитивного результату необхідний точний тест— імуноблот, за наслідками якого і ставиться діагноз. Позитивний результат імуноблоту після позитивного ІФА достовірний на 99,9% – це максимальна точність будь-якого медичного тесту. Якщо імуноблот негативний, значить, перший тест був хибнопозитивним, і насправді ВІЛ у людини немає.
Що таке невизначений (сумнівний) результат?
Якщо ІФА буває позитивним чи негативним, то імуноблот може бути позитивним, негативним чи невизначеним. Невизначений результат иммуноблота, тобто. наявність в імуноблоті хоча б одного білка до вірусу може спостерігатися, якщо зараження відбулося нещодавно і в крові ще мало антитіл до ВІЛ, в цьому випадку імуноблот стане позитивним через деякий час. Також невизначений результат може з'явитися за відсутності ВІЛ-інфекції при гепатиті, деяких хронічні захворюванняобмінного характеру, або за вагітності. У цьому випадку або імуноблот стане негативним, або буде виявлена причина невизначеного результату.
Чи потрібно при вступі на роботу складати тест на ВІЛ?
За законодавством РФ обов'язковим огляд на ВІЛ може лише для донорів крові, іноземних громадян, і осіб без громадянства, бажаючих в'їхати територію РФ терміном понад три місяці, а як і медичний персонал, що працює безпосередньо з кров'ю; особи, які перебувають у місцях позбавлення волі. Решта громадян здають тест на ВІЛ добровільно.
ВІЛ інфекція- Захворювання, що виникає в результаті зараження вірусом імунодефіциту людини (ВІЛ).
ВІЛ-це РНК-вірус, що відноситься до сімейства ретровірусів.
Загальною властивістю ретровірусів є наявність ферменту – зворотної транскриптази (ревертази), яка знімає з РНК генетично точну копію у вигляді ДНК. За морфологією, структурою геному та іншими ознаками ВІЛ належить до сімейства лентивірусів, тобто вірусів повільних інфекцій. До загальних рис захворювань, викликаних вірусами цього сімейства, можна віднести: тривалий період, що не має точних термінів, інкубації (від 1 міс. до 10 і більше років); непомітний, безсимптомний початок захворювання; повільно наростаючу клінічну картину; опосередкованість патогенезу через імунну систему та високу швидкістьгенетичної мінливості вірусу Все це значно ускладнює діагностику, лікування та профілактику ВІЛ-інфекції.
В даний час відомі два різновиди ВІЛ: ВІЛ-1 та ВІЛ-2. Захворювання, що викликається ВІЛ-2, характеризується уповільненою динамікою та більш тривалим перебігом.
Епідеміологія та шляхи передачі:
ВІЛ-інфекція – антропоноз, єдине джерело збудника для людини – вірусоносій та хворий на СНІД.
Вірусні частки (віріони) – присутні у всіх біологічних рідинах організму, але у різних концентраціях. Найбільш високий вміст вірусу – у крові та насіннєвій рідині.
Передача вірусу здійснюється трьома шляхами:
- від матері до плода/новонародженого.
ВІЛ не передається при звичайних побутових контактах та повітряно-краплинним шляхом. Не зареєстровані й випадки передачі ВІЛ через укуси комах.
Однак контагіозність ВІЛ не така висока, як у інших ІПСШ. Так, із понад 1600 обстежених статевих партнерів ВІЛ-інфікованих лише 15% заразилися цим вірусом.
Розвиток ВІЛ-інфекції визначається двома взаємодіючими факторами: основною патогенною властивістю ВІЛ – послаблювати імунну систему інфікованої людини та специфічною імунною відповіддю організму, що розвивається у процесі захворювання.
ВІЛ пантропен, але основними клітинами-мішенями для нього є Т-хелпери, що несуть на мембрані сотні молекул CD4+ рецептора. В організмі вірус трансформується від менш агресивного стану в більш агресивному, що виявляється у прогресивному зменшенні числа CD4+ лімфоцитів у крові аж до повного їх зникнення та призводить до обтяження клінічної картини.
Від моменту інфікування до появи специфічних противірусних антитіл відбувається зазвичай 6-8 тижнів. Період між інфікуванням та появою визначених антитіл до ВІЛ у сироватці крові називається періодом «вікна».
З одного боку, імунна система є мішенню для вірусу, з іншого – сама виробляє специфічні антитіла щодо нього. При цьому в імунній системі відбувається розвиток аутоімунних процесів, які посилюють процес руйнування клітин та тканин організму.
ВІЛ-інфекція характеризується відсутністю специфічної клінічної картини, та її діагноз, як правило, ставиться на підставі ретельно зібраного анамнезу у поєднанні з низкою ознак, підтверджених лабораторною діагностикою. 1983 року ВООЗ розробила певні критерії, за якими можна встановити наявність ВІЛ-інфекції у разі недоступності серологічної діагностики (критерії «Банги»). До них відносяться:
- Втрата маси тіла більше, ніж на 10% від вихідної;
— хронічна діареяпротягом більше одного місяця;
- Тривала лихоманка протягом одного місяця (постійна або інтермітує).
- Завзятий кашель більше одного місяця;
- Генералізований сверблячий дерматит;
- Herpes zoster в анамнезі;
- хронічна прогресуюча або дисемінована герпетична інфекція(Herpes simplex);
Діагноз ВІЛ-інфекції за цими критеріями може бути поставлений хворому, якщо у нього виявляється одночаснопринаймні дві «великі» ознаки та одна «мала». Достатньою основою для постановки діагнозу СНІД може бути виявлення у хворого генералізованої саркоми Капоші або криптококового менінгіту. Через низьку чутливість та специфічність даних критеріїв ВООЗ надалі вимагала серологічного підтвердження діагнозу.
Клінічна класифікація ВІЛ-інфекції:
Стадія первинних проявів:
А. гостра гарячкова фаза;
Б. безсимптомна фаза;
В. персистуюча генералізована лімфаденопатія.
Стадія вторинних захворювань:
А. Втрата ваги менше 10 кг, поверхневі бактеріальні, вірусні, грибкові поразкишкіри та слизових, оперізуючий лишай, повторні фарингіти, синусити.
Б. Прогресуюча втрата у вазі більше 10 кг, незрозуміла діарея, лихоманка більше 1 місяця, волохата лейкоплакія, туберкульоз легень, повторні або стійкі бактеріальні, грибкові, вірусні, протозойні ураження внутрішніх органів(без дисемінації) або глибокі ураження шкіри та слизових, повторний та дисемінований оперізувальний лишай, локалізована саркома Капоші.
Наявність антитіл до ВІЛ у залежності від стадії захворювання.
Антитіла до ВІЛ у крові
Результат тесту на ВІЛ
ІІ. Первинні прояви
Б. Безсимптомна фаза
ІІІ. Вторинні захворювання
Після влучення вірусу в організм відбувається його розмноження в крові. У 50% інфікованих осіб у цей період може розвиватися продромальний стан, що супроводжується підйомом температури тіла до 38,5-39,5°С та іншими мононуклеозоподібними симптомами та зберігається від трьох до 10 днів. Такий стан минає, нагадуючи період відновлення після грипозної інфекції.
Починаючи з 6-8 тижнів захворювання, відбувається збільшення рівня антитіл у крові, тобто сероконверсія. У цей період може розвиватися генералізована лімфаденопатія та незначний імунодефіцит, але у частини хворих клінічні прояви ВІЛ-інфекції мінімальні. При вираженому синдромі набутого імунодефіциту людини (СНІД) відбувається бурхливий розвиток опортуністичних інфекцій внутрішніх органів, уражається нервова система. На шкірі та слизових спостерігається активізація сапрофітної флори. Розвивається саркома Капоші та інші пухлини. Можуть активізуватись такі інфекції, як туберкульоз, сифіліс, глибокі мікози та ін. Характерним захворюванням для ВІЛ-інфікованих є пневмоцистна пневмонія. У частини хворих збільшується печінка та селезінка, що є несприятливою ознакою, що свідчить про швидке прогресування процесу. Зустрічаються церебральні форми ВІЛ-інфекції – такі як менінгіти, викликані дріжджовими грибками, токсоплазматичні абсцеси мозку, гострі та підгострі енцефаліти, ізольовані пухлини мозку (лімфоми). У хворих можуть виявлятися різні судинні ураження.
До методів неспецифічної діагностики належать такі: визначення вмісту в крові субпопуляцій Т-лімфоцитів, оцінка активності реактивності Т-лімфоцитів периферичної крові чи біопсійного матеріалу.
До специфічних методів діагностики належать:
- Виявлення ДНК провірусу або РНК вірусу ВІЛ у клітинах людини методом ПЛР;
- Виявлення зрілих інфекційних віріонів у біологічних рідинах і клітинах;
- Визначення розчинних білків вірусу (антигенів);
- Визначення антитіл до ВІЛ (ІФА, імуноблот, реакція аглютинації, радіоімунопреципітація).
Найпоширеніший скринінговий метод діагностики – ІФА. Отримання негативного результату може свідчити:
- Про відсутність інфікованості;
- Про проведення дослідження до настання сероконверсії (у період «вікна» або в інші періоди зникнення титру антитіл).
Позитивні результати бувають істинними та хибними. Хибнопозитивні можуть бути отримані при обстеженні хворих на хронічні інфекційні, аутоімунні або онкологічні захворювання, неінфікованих вагітних жінок, пацієнтів після гемотрансфузій та хворих на хронічний алкоголізм. Найбільш ранні терміни виявлення антитіл до ВІЛ-3-4 тижні від дня зараження.
Який підтверджує аналіз. Імуноблот.
Після проведення скринінгового тесту всі позитивні результати перевіряються в іншій імуноферментній системі, а потім – у більш чутливому тесті – імуноблоті. Сироватки, підтверджені за допомогою цього тесту, можна вважати позитивними.
Перед проведенням дослідження на ВІЛ пацієнт обов'язково повинен бути проконсультований (дотестове консультування) на предмет причин, з яких необхідно провести аналіз, а після отримання результату, відповідно, необхідно провести післятестове консультування з метою роз'яснення результату дослідження. На всіх етапах діагностики та подальшого лікування необхідно дотримуватися конфіденційності.
Відомі чотири основні підходи до лікування ВІЛ-інфекції: етіологічний, імуностимулюючий, імунозамісний та патогенетичний (проти вторинних інфекцій).
Здатність пригнічувати зворотну транскриптазу вірусу мають аналоги нуклеотидів або інгібітори інших класів. Першим препаратом для лікування хворих на СНІД був аналог нуклеотидів – азидотимідин. Препарат викликає побічна дія, Впливаючи насамперед на гемопоез, і в більшості хворих при тривалому прийомі (більше 6 міс.) Формується стійкість до нього. В даний час використовують понад 10 нових препаратів – інгібіторів протеаз та зворотної транскриптази. Значно ускладнює процес створення ефективних препаратівшвидка швидкість мутації ВІЛ в організмі, що супроводжується появою стійких до лікування штамів.
Тільки комбінований підхід може обмежити розмноження вірусу та запобігти розвитку лікарської стійкості. Стала стандартом потрійна антиретровірусна терапія (комбінація трьох лікарських препаратів, заснована на двох нуклеозидних аналогах та протеазоінгібіторах).
Виготовляється кількома різними методами. Здавалося б, нічого простішого, ніж виявити це захворювання за допомогою забору крові, немає. Але це зовсім так. Діагноз ВІЛ дійсно можна виявити в такий спосіб, але подальше дослідження проводиться різними методами. Від них багато в чому залежить, яке лікування буде прописано пацієнту, і які заходи будуть вжиті згодом. Серед найпоширеніших і найефективніших методів прийнято виділяти скринінговий аналіз та імунний блот. Кожен із них слід розглянути докладніше.
СНІД діагностика: скринінговий аналіз
Скринінговий аналіз чи метод дослідження ІФА застосовується на початковому етапі діагностики ВІЛ-інфекції. При створенні цього в лабораторних умовах штучно створювалися білки вірусу. Вони особливо реагують на антитіла. Останні виробляються в організмі з появою у ньому клітин, заражених страшною недугою. Лабораторна діагностика ВІЛ у разі виробляється з допомогою штучних ферментів. Вступаючи у взаємодію Космосу з антитілами, вони забарвлюються у певний колір. Смужка з індикатором після потрапляння на неї крові поміщається під спеціальний апарат, за допомогою якого вдається визначити, чи є у людини це захворювання чи ні. Сучасні методи діагностики ВІЛ, у тому числі ІФА дозволяють визначити факт зараження або його відсутності з високою точністю. Але, як і вся техніка, апарат для аналізу скринінгу має похибку. Саме тому за необхідності аналіз передається пацієнтом.
Важливо знати, що ІФА тест - один із ранніх методів визначення наявності в організмі вірусу імунодефіциту. ВІЛ-інфекція – діагноз, який можливо виявити лише через кілька тижнів після зараження. При попаданні інфікованих клітин у кров, імунна система організму починає активно чинити опір. Відбувається вироблення антитіл, які виявляються методом лабораторного дослідження через два чи три тижні. Рання діагностика ВІЛ-інфекції через ІФА тесту дозволяє виявити антитіла до вірусу імунодефіциту в крові людини. У цьому полягає її основна відмінність від інших сучасних методів.
Варто зазначити, що у деяких людей антитіла до даному захворюваннюпочинають вироблятися більш пізніх термінах. З моменту зараження на початок цього процесу може пройти від трьох до шести тижнів. Саме тому фахівці в галузі медицини рекомендують проходити скринінговий аналіз через чотири-п'ять тижнів після незахищеного статевого контакту або іншої причини, через яку можна підозрювати факт випадкового зараження.
Методи лабораторної діагностики ВІЛ-інфекції ІФА розроблялися протягом тривалого часу. На сьогоднішній день існує чотири покоління тестів. Найбільш точними та ефективними з них вважаються ті, що були розроблені останніми. Лабораторна діагностика ВІЛ-інфекції та СНІДу при використанні третього та четвертого покоління ІФА тестів здійснюється за допомогою рекомбінантних білків та пептидів. Чутливість цих тестів до антитіл, що виробляється організмом, становить 92 - 93%. Йдеться про російські методи дослідження. Європейці навчилися робити подібні тести із чутливістю від 99%.
Сучасні методи лабораторної діагностики ВІЛ-інфекції на основі ІФА використовуються не лише для того, щоб виявити наявність захворювання. За допомогою скринінгового аналізу можна проводити моніторинг поширення вірусу імунодефіциту, а також забір тестового матеріалу перед здійсненням взяття крові у донорів.
ІФА – стандартний метод діагностики ВІЛ інфекції: як здійснюється, чому дає хибний результат?
Діагностика ВІЛ та СНІД за допомогою ІФА – стандартна процедура. Забір крові у пацієнта виготовляється з вени. Для аналізу достатньо п'яти мілілітрів матеріалу. Клінічна 
діагностика ВІЛ 2 і 1 типу проводиться мінімум через вісім годин після їди. Лікарі рекомендують проводити її вранці натще. Результати повного дослідження бувають відомі через два чи три дні. Експрес скринінг проводиться за менший час. Як правило, на це йде лише кілька годин. Проте похибка у разі збільшується. Експрес постановка діагнозу ВІЛ необхідна в екстрених випадках, наприклад коли хворому потрібна термінова операція. Такий аналіз обов'язково проводиться перед позаплановими хірургічними втручаннями, адже за наявності у пацієнта вірусу імунодефіциту медики дотримуються підвищених заходів безпеки. Клінічна діагностика ВІЛ-інфекції в короткий проміжок часу необхідна і в тому випадку, коли забір донорської крові повинен бути зроблений швидко для порятунку іншого пацієнта.
Трапляються випадки, коли людині поставили діагноз СНІДу чи ВІЛ, а в результаті він не підтвердився чи навпаки. Чому так відбувається у випадку з ІФА тестом? Хибнонегативний результат може бути через те, що кров була підготовлена до дослідження неналежним чином. Іноді причиною цього стає неправильне виконання її огорожі. Помилково-негативний результат при верифікації діагностики ВІЛ-інфекції не підтверджується і в тому випадку, коли матеріали для дослідження були взяті зарано. Адже після зараження мало пройти не менше трьох тижнів. Існують випадки, коли результат виявлення вірусу імунодефіциту виявляється хибнопозитивним. Це пов'язано з загальним станомімунної та гормональної систем людського організму. У більшості випадків у пацієнта спостерігаються захворювання, які і є наслідком хибно-позитивного результату. Йдеться про алкогольний гепатит, при якому печінка виробляє особливі ферменти, що може спричинити неправильне формулювання діагнозу ВІЛ. Вагітність та деякі аутоімунні захворювання, поряд з множинною мієломою також можуть стати причиною хибно-позитивного результату. До цього переліку можна включити пацієнтів на діалізі та осіб, які незадовго до диференціальної діагностики ВІЛ проходили вакцинацію.
Говорячи про скринінговий аналіз, важливо відзначити, що цей метод дослідження потребує підтвердження. Лікарі перед тим, як ставлять діагноз ВІЛ на його підставі, обов'язково відправляють хворого на імунний блот.
Основні методи лабораторної діагностики ВІЛ-інфекції: імунний блот
СНІД, діагностика та лікування якого тісно взаємопов'язані, виявляється відразу декількома способами. Як говорилося вище, одного ІФА тесту буває недостатньо у тому, щоб остаточно визначитися з діагнозом. Диференціальна діагностика ВІЛ-інфекції у цьому випадку доповнюється імунним блотингом. У сучасній медицині його називають остаточним підтверджуючим методом встановлення діагнозу. Для дослідження у цьому випадку використовуються білки, що містяться у крові пацієнта. Вони поділяються на спеціальному гелі, після чого в працівників лабораторії з'являється можливість вивчити молекулярний склад крові.
Терміни діагностики ВІЛ за такого методу становить від одного до трьох днів. Для дослідження з вени випробуваного беруть кров, яку поміщають на тестер із гелем. Результат, який ставиться під сумнів, може виникнути при вагітності, онкологічних процесах, туберкульозі. Хибно-негативна реакція на тест може виникнути при неправильному проведенні дослідження і у випадку, якщо воно проводилося занадто рано. З моменту зараження має пройти щонайменше три тижні. Адже те, через який час діагностується ВІЛ, залежить від стану імунітету.
Інші методи діагностики СНІДу та ВІЛ
Методи променевої діагностики при СНІДі використовуються, як правило, у термінальній чи вторинній стадіях. З їхньою допомогою вдається встановити зміни, які відбуваються в організмі через вторинні захворювання або опортуністичні інфекції.
Біорезонансна діагностика ВІЛ, яку також називають нелінійним скануванням, виявлення вірусу імунодефіциту використовується в основному в приватних клініках. Офіційна медицина вважає такий метод недостатньо точним та ефективним. Можливо, удосконалення нелінійної діагностики у майбутньому дозволить виявляти цей страшний діагноз уже в інкубаційному періоді.
Діагностика ВІЛ-інфекції: серологічний метод та його особливості
Це порівняно нова методика, при якій лабораторні критерії діагностики ВІЛ-інфекції ґрунтуються на принципі антиген-антитіло У випадку вірусом імунодефіциту відбувається пошук антитіл до вірусу в організмі людини. Для цього використовується штучно виведений антиген, на який повинні відреагувати антитіла. Специфічні серологічні маркери ВІЛ-інфекції спричиняють специфічні зміни у складі крові. Варто зазначити, що даний метод дослідження найбільш ефективний у гострій стадії, яка закінчується сероконверсією. За нею слідує безсимптомний латентний період, під час якого знайти антиген буває не просто.
Референс-діагностика ВІЛ-інфекції: опис та особливості
ВІЛ-референсні значення вважаються найточнішими у виявленні діагнозу. Даний метод дослідження поєднує ІФА тест та імунний блот. Референс-лабораторія діагностики ВІЛ дозволяє здійснити забір аналізів та подальшу їх обробку відразу двома способами. Це дозволяє протягом доби одержати максимально точний результат. Перевірка аналізу, отриманого в референс-лабораторії необхідна лише в тому випадку, якщо дані ІФА тесту та імунного блоттингу суперечать один одному. Це досить рідкісне явище, яке найчастіше буває у людей із вищеописаними супутніми захворюваннями.
Своєчасна діагностика ВІЛ-інфекції стає вкрай важливим заходом, тому що раніше початок лікування може багато в чому визначити подальший розвиток захворювання та продовжити життя хворого. В останні роки спостерігається вагомий прогрес у галузі виявлення цієї страшної хвороби: на зміну старим тест-системам приходять досконаліші, методи обстеження стають доступнішими, і їхня точність значно підвищується.
У цій статті розповімо про сучасних методахдіагностики ВІЛ-інфекції, знати які корисно для своєчасного лікування цієї проблеми та підтримання нормальної якості життя хворого.
Методики діагностики ВІЛ
У Росії для діагностики ВІЛ-інфекції проводиться стандартна процедура, що включає два рівні:
- ІФА тест-система (скринінговий аналіз);
- імунний блот (ІБ).
Також для діагностики можуть застосовуватись інші методики:
- експрес-тести.
ІФА тест-системи
На першому етапі діагностики для виявлення ВІЛ-інфекції застосовується скринінговий тест (ІФА), який заснований на створених у лабораторіях білках ВІЛ, що уловлюють специфічні антитіла, що виробляються в організмі у відповідь на інфікування. Після їхньої взаємодії з реагентами (ферментами) тест-системи змінюється забарвлення індикатора. Далі ці зміни кольору обробляються на спеціальній апаратурі, яка визначає результат виконаного аналізу.
Такі ІФА-тести здатні показувати результат уже за кілька тижнів після впровадження ВІЛ-інфекції. Цей аналіз визначає не наявність вірусу, а виявляє вироблення антитіл щодо нього. Іноді, в організмі людини вироблення антитіл до ВІЛ починається через 2 тижні поле зараження, але у більшості людей вони виробляються на пізніших термінах, через 3-6 тижнів.
Існує чотири покоління ІФА-тестів із різною чутливістю. В останні роки частіше застосовуються тест-системи III і IV покоління, які створені на основі синтетичних пептидів або рекомбінантних білків і мають більшу специфічність і точність. Вони можуть використовуватися для діагностики ВІЛ-інфекції, моніторингу поширеності ВІЛ та забезпечення безпеки під час перевірки донорської крові. Точність ІФА-тест-систем III та IV покоління складає 93-99% (більш чутливі тести, що випускаються у країнах західної Європи – 99%).
Для виконання ІФА-тесту проводиться забір 5 мл крові із вени пацієнта. Між останнім прийомом їжі та аналізом має пройти не менше 8 годин (як правило, він виконується вранці натще). Такий тест рекомендується складати не раніше, ніж через 3 тижні після передбачуваного зараження (наприклад, після незахищеного статевого акту з новим статевим партнером).
Результати ІФА-тесту виходять через 2-10 днів:
- негативний результат: вказує на відсутність інфікування ВІЛ та не вимагає звернення до фахівця;
- помилковонегативний результат: може спостерігатися на ранніх термінахінфікування (до 3 тижнів), при пізніх стадіяхСНІДу при вираженому придушенні імунітету та при неправильно проведеній підготовці крові;
- помилково позитивний результат: може спостерігатися при деяких захворюваннях та при неправильно проведеній підготовці крові;
- позитивний результат: вказує на зараження ВІЛ інфекцією, вимагає проведення ІБ та звернення пацієнта до спеціаліста до центру СНІДу.
Чому ІФА-тест може давати хибно-позитивні результати?
Хибнопозитивні результати ІФА-тесту на ВІЛ можуть спостерігатися при неправильній обробці крові або у хворих з такими станами та захворюваннями:
- множинна мієлома;
- інфекційні захворювання, спровоковані вірусом Епштейна Барр;
- стан після;
- аутоімунні захворювання;
- на фоні вагітності;
- стан після вакцинації.
При вищеописаних причинах у крові можуть бути неспецифічні перехресно реагують антитіла, вироблення яких було спровоковано не ВІЛ-інфекцією.
В останні роки частота хибнопозитивних результатів суттєво знизилася завдяки застосуванню тест-систем III та IV покоління, які містять більш чутливі пептидні та рекомбінантні білки (вони синтезуються за допомогою генної інженерії in vitro). Після початку застосування таких ІФА-тестів частота хибнопозитивних результатів значно знизилася і становить близько 0,02-0,5%.
Виявлення хибнопозитивного результату не означає, що людина інфікована ВІЛ. У таких випадках ВООЗ рекомендує провести ще один ІФА-тест (обов'язково IV покоління).
Кров пацієнта відправляється в референс або арбітражну лабораторію з позначкою «повторити» та досліджується на ІФА тест-системі IV покоління. Якщо результат нового аналізу негативний, то перший результат визнається помилковим (хибнопозитивним) та ІБ не проводиться. При позитивному чи сумнівному результаті під час другого тесту хворому обов'язково призначається проведення ІБ через 4-6 тижнів на підтвердження чи спростування ВІЛ-інфікування.
Імунний блот
Остаточний діагноз інфікування ВІЛ може встановлюватись тільки після отримання позитивного результату імунного блотингу (ІХ). Для його проведення застосовується нітроцелюлозна смужка, на яку нанесені вірусні білки.
Забір крові для ІБ виконується з вени. Далі вона піддається спеціальної обробки і білки, що містяться в її сироватці, поділяють у спеціальному гелі за їх зарядом і молекулярною масою (маніпуляція проводиться на спеціальній апаратурі під впливом електричного поля). На гель із сироватки крові накладають нітроцелюлозну смужку та проводять блот («промокування») у спеціальній камері. Смужка обробляється і якщо в матеріалах є антитіла до ВІЛ, то вони зв'язуються з антигенними смугами на ІБ і виявляються у вигляді ліній.
ІБ вважається позитивним якщо:
- за критеріями American CDC – на смужці є дві або три лінії gp41, p24, gp120/gp160;
- за критеріями American FDA – на смужці є дві лінії р24, р31 та лінія gр41 або gр120/gр160.
У 99,9% випадків позитивний результат ІХ вказує на ВІЛ-інфікування.
За відсутності ліній – ІБ негативним.
При виявленні ліній з gр160, gр120 і gр41 ІБ є сумнівним. Такий результат може виявлятися при:
- онкологічні захворювання;
- вагітності;
- частих трансфузіях крові.
У разі рекомендується виконання повторного дослідження з допомогою набору інший фірми. Якщо ж після додаткового ІБ результат залишається сумнівним, необхідно спостереження протягом півроку (через кожні 3 місяці проводяться ІБ).
Полімеразна ланцюгова реакція
Тест на ПЛР може визначати РНК вірусу. Його чутливість досить висока і дозволяє виявляти ВІЛ-інфікування вже через 10 днів після зараження. У деяких випадках ПЛР може давати хибно-позитивні результати, тому що його висока чутливістьможе реагувати і антитіла до інших інфекцій.
Дана методика діагностики є дорогою, потребує спеціального обладнання та високої кваліфікації спеціалістів. Ці причини не дозволяють проводити її при масовому тестуванні населення.
ПЛР застосовується у таких випадках:
- для виявлення ВІЛ у новонароджених, які народилися від ВІЛ-інфікованих матерів;
- для виявлення ВІЛ у «періоді вікна» або за сумнівного ІБ;
- для контролю концентрації ВІЛ у крові;
- для дослідження донорської крові
Тільки за тестом ПЛР діагноз ВІЛ не ставиться, а проводиться як додаткового методудіагностики для вирішення спірних ситуацій
Експрес-методи
Однією з інновацій у діагностиці ВІЛ стали експрес-тести, результати яких можуть оцінюватися вже за 10-15 хвилин. Найбільш ефективні та точні результати виходять за допомогою імунохроматографічних тестів, заснованих на принципі капілярного потоку. Вони являють собою спеціальні смужки, на які наноситься кров або інші рідини, що досліджуються (слина, сеча). За наявності антитіл до ВІЛ через 10-15 хвилин на тесті з'являються кольорова та контрольна смужка – позитивний результат. При негативному результаті з'являється лише контрольна смужка.
Як і після тестів ІФА, результати експрес-тестів мають підтверджуватись аналізом ІБ. Тільки після цього може встановлюватися діагноз про ВІЛ-інфікування.
Існують експрес-набори для домашнього тестування. Тест OraSure Technologies1 (США) схвалений FDA, продається без рецепта та може застосовуватись для виявлення ВІЛ. Після проведення тесту, у разі позитивного результату, хворому рекомендується пройти обстеження у спеціалізованому центрі для підтвердження діагнозу.
Інші тести для домашнього використання ще не були схвалені FDA і їхній результат може бути дуже сумнівним.
Незважаючи на те, що експрес-тести за своєю точністю поступаються ІФА-тестам IV покоління, вони широко застосовуються для додаткового тестування населення.
Здати аналізи на виявлення ВІЛ-інфекції можна в будь-якій поліклініці, ЦРЛ або спеціалізованих СНІД-центрах. На території Росії вони проводяться абсолютно конфіденційно або анонімно. Кожен пацієнт може розраховувати отримання медичної чи психологічної консультації до чи після проведення аналізу. Платити за тести на ВІЛ доведеться лише у комерційних лікувальних закладах, а у державних поліклініках та лікарнях вони виконуються безкоштовно.
Про те, якими шляхами можна заразитися ВІЛ-інфекцією та які міфи існують про можливості заразитися, читайте у
