Teknik diagnostik zaman moden memungkinkan untuk mengenal pasti penyakit tertentu dalam makmal menggunakan analisis khas. Salah satunya ialah ujian darah imunosorben berkaitan enzim, yang boleh mengesahkan diagnosis yang dibuat sebelum ini.
Enzim immunoassay ELISA adalah salah satu yang paling berkesan dan kaedah moden membenarkan untuk mengenal pasti gangguan yang berkaitan dengan imun dan ketidakseimbangan hormon, serta proses onkologi. Semasa ujian, antibodi yang dihasilkan apabila terdapat jangkitan dalam badan dapat dikesan dalam darah. Mengambil kira nuansa ini, penyakit ini dapat dikesan walaupun pada peringkat paling awal perkembangannya.
Apakah asas teknik tersebut?
Keputusan analisis ELISA adalah berdasarkan mendapatkan tindak balas kimia pada enzim yang berfungsi sebagai tanda pengenalan khas untuk mengenali antibodi. Akibatnya, semasa tindak balas imunokimia, antibodi mula berinteraksi dengan antigen tertentu. Semua ini memberikan alasan untuk menegaskan bahawa keputusan palsu apabila menderma darah untuk ELISA adalah minimum.
Kajian itu membolehkan kita menentukan jumlahnya sel imun, sifatnya, serta kehadiran antibodi yang diperlukan
Hasilnya dianggap positif apabila pewarnaan larutan dikesan. Warna menunjukkan bahawa antigen berinteraksi dengan antibodi. Jika tiada perkara seperti ini berlaku, hasilnya negatif.
(pautan ke artikel ke-3 dalam fail ini), membolehkan anda menilai keupayaan tubuh untuk melawan penyakit berjangkit dan menunjukkan fasa penyakit, ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA) menduduki tempat yang penting. Menjalankan kajian ini membolehkan anda menilai secara komprehensif aktiviti fungsi perlindungan darah dan mengenal pasti keadaan kekurangan imun dalam patologi berjangkit, serta penyakit darah, proses autoimun, dan masalah hormon.
Bagaimanakah mungkin untuk menampung begitu banyak sasaran dalam satu analisis, dan apakah petunjuk yang ada untuk pelaksanaannya? Mari cuba fikirkan.
Apakah ujian darah yang dilakukan menggunakan kaedah ELISA?
ini ujian makmal, yang membolehkan anda menentukan kehadiran antibodi tertentu (faktor darah pelindung sifat protein) kepada antigen tertentu (agen patogen). Antara antibodi, imunoglobulin, yang boleh wujud dalam bentuk imunokompleks, adalah kepentingan utama.
Imunoglobulin dihasilkan akibat tindak balas neurohumoral manusia yang kompleks yang berlaku sebagai tindak balas terhadap pengenalan antigen asing. Setiap jenis agen patogen menghasilkan antibodi spesifiknya sendiri. Mereka bertindak dengan "mengikat" antigen atau mikroorganisma patologi, membentuk sebatian "antigen-antibodi" yang kompleks, diikuti dengan peneutralan, lisis enzimatik, tindak balas fagositosis dan penyingkiran dari badan.
Catatan:Ia adalah dengan kehadiran kompleks tertentu kaedah ELISA menentukan jenis patogen atau bahan berbahaya yang terdapat pada pesakit.
Untuk tahu prinsip asas Anda boleh melihat bagaimana sistem imun manusia berfungsi dengan melihat video ini ulasan:
Apakah imunoglobulin?
5 kelas utama imunoglobulin telah ditemui dan dikaji - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. peranan selebihnya masih belum dijelaskan sepenuhnya dan berada di bawah penyelidikan saintifik.
Catatan:paling penting dalam perubatan praktikal Imunoglobulin kelas A, M dan G adalah penting Kandungan maklumat definisi adalah berdasarkan selang masa yang berbeza dari penampilan, maksimum dan hilangnya.
Mari kita pertimbangkan isu ini dengan lebih terperinci.
Tugas utama imunoglobulin A (IgA) terdiri daripada fungsi perlindungan membran mukus saluran pernafasan, saluran gastrousus dan sistem kencing. Dalam permulaan penyakit akut, adalah mustahil untuk mengenal pasti mereka. Kompleks pelindung ini hanya muncul dari minggu ke-2 permulaan penyakit, kadang-kadang kemudian. Sebahagian besar imunoglobulin A tertumpu pada tisu mukus. Kira-kira kira-kira 80%. Antibodi yang tinggal beredar dalam darah. Fungsi utama ialah peneutralan dan pemusnahan mikroorganisma. Selepas reda manifestasi akut penyakit, jumlah imunoglobulin ini mula berkurangan dan hilang sepenuhnya sehingga 8 minggu selepas permulaan penyakit. Jika IgA dikesan kemudian, ini menunjukkan proses kronik.
Penanda utama dan pertama fasa akut membangunkan patologi adalah immunoglobulin kelas M (IgM). Mereka dikesan pada hari ke-5 permulaan penyakit. Kehadiran mereka dalam darah boleh ditentukan dalam masa kira-kira 6 minggu. Kemudian mereka mula hilang dengan cepat.
Tindak balas imun sisa dicirikan oleh kehadiran dalam darah immunoglobulin kelas G (IgG). Kemunculan faktor-faktor ini dalam darah dikesan kira-kira sebulan selepas permulaan penyakit. Pada masa hadapan, mereka boleh ditentukan selama beberapa bulan, tahun dan juga seumur hidup, memuaskan fungsi pelindung dari kembalinya (kambuh) penyakit, dan dalam beberapa kes menjadikan perkembangan sekunder patologi mustahil. Jika jumlah imunoglobulin G mula meningkat semula, maka seseorang boleh mengesyaki jangkitan semula. Kesimpulan yang sama boleh dibuat dengan menjalankan dua atau tiga sampel yang diambil pada selang 2 minggu.
Imunoglobulin D (IgD) terletak pada B-limfosit, didapati dalam kepekatan rendah dalam orang yang sihat. Selepas 10 tahun hidup ia mencapai nilai maksimumnya. Jumlah imunoglobulin D meningkat semasa kehamilan, pada pesakit penyakit sistemik tisu penghubung, penyakit yang disebabkan oleh kekurangan imun.
Petunjuk untuk menetapkan ujian darah immunoassay enzim
Penentuan antibodi terhadap kehadiran dalam badan mikrob patogenik, menyebabkan:
- trikomoniasis;
- ureaplasmosis dan
Terdapat peningkatan dalam jumlah imunoglobulin dan dengan.
Diagnostik dijalankan untuk mengesan:
- penyakit herpetik;
- kumpulan hepatitis virus;
- virus Epstein-Barr;
- sitomegoalovirus.
Menggunakan ELISA, anda boleh menentukan kehadiran antibodi kepada 600 jenis alergen, mengesan keadaan kekurangan imun, menjalankan peperiksaan menyeluruh sebelum operasi pemindahan, jalankan analisis komprehensif untuk menentukan keberkesanan rawatan.
ELISA ialah kaedah tambahan pengesanan sel kanser.
Bagaimanakah ELISA darah dilakukan?
Untuk immunoassay enzim, dalam kebanyakan kes, darah pesakit digunakan, kadangkala tisu dikumpulkan vitreous, cecair saluran tulang belakang, cecair amniotik.
Darah diambil melalui jarum suntikan ke dalam picagari dari vena cubital. Kajian dijalankan semasa perut kosong. Perlu diingat bahawa mengambil beberapa bekalan perubatan boleh mempengaruhi keputusan analisis. Sebelum menderma darah, anda mesti menahan diri daripada merokok dan minum alkohol. Penggunaan dadah boleh memesongkan keputusan.
Dalam kes nilai negatif imunoglobulin IgM, IgG, IgA, kita boleh bercakap tentang ketiadaan penyakit atau fasa awalnya, juga hasil dengan tolak adalah mungkin apabila pemulihan penuh setelah masa yang lama berlalu.
Sekiranya IgA dan IgM tidak dikesan, dan IgG adalah positif, maka kemungkinan besar kita bercakap tentang imuniti yang terbentuk selepas penyakit berjangkit, atau selepas vaksinasi.
Bila titer tinggi IgM dengan nilai negatif IgG, IgA, kita boleh membuat kesimpulan bahawa terdapat penyakit berjangkit akut.
Nilai positif serentak hasil imunoglobulin - IgA, IgM, IgG adalah ciri fasa akut kambuh penyakit kronik yang sedia ada.
Untuk jangkitan kronik, iaitu dalam fasa mereda proses (remisi), ELISA menunjukkan nilai negatif immunoglobulin M (IgM), manakala hasil imunoglobulin G (IgG) dan A (IgA) akan positif.
Kelebihan kaedah ujian darah immunoassay enzim
Kelebihan utama kaedah ELISA ialah:
- kos analisis yang rendah;
- kekhususan diagnostik, ketepatan;
- kawalan dinamik (mengulangi analisis untuk menentukan keberkesanan rawatan dan peringkat penyakit);
- kemungkinan menjalankan pemeriksaan besar-besaran di kawasan jangkitan;
- kelajuan mendapatkan hasil;
- kesederhanaan relatif analisis;
- kemungkinan penggunaan teknologi maklumat dalam proses;
- keselamatan dan tidak menyakitkan bagi pesakit.
Adakah terdapat keburukan ELISA darah?
Aspek negatif utama kajian adalah kemungkinan mendapatkan data negatif palsu dan positif palsu. Punca salah faham mungkin kekurangan teknikal atau penggunaan ubat-ubatan, yang mungkin memesongkan gambar.
ELISA digunakan untuk mengesan:
- (ascaris, pinworms);
- akut dan bentuk kronik opisthorchiasis;
- trikinosis;
- kehadiran Giardia (sebagai analisis tambahan);
- bentuk leishmaniasis;
- amoebiasis;
- kandungan toksoplasma;
Sebagai kesimpulan, perlu diperhatikan bahawa imunologi moden sentiasa berada di peringkat pembangunan, mencari kaedah baru untuk mendiagnosis dan merawat penyakit.
Stepanenko Vladimir, pakar bedah
Bagaimanakah kajian ELISA dijalankan?
Mekanisme tindak balas
Enzim immunoassay adalah berdasarkan tindak balas imun antigen dengan antibodi, dan perlekatan tag enzim pada antibodi memungkinkan untuk mengambil kira hasil tindak balas antigen-antibodi dengan penampilan aktiviti enzimatik atau dengan perubahan dalam bentuk yang dipermudahkan mekanisme tindak balas boleh diwakili seperti berikut:
|
Tindak balas pertama berlaku antara Ig (Ab) yang dikesan dan antigen patogen yang telah dimurnikan (Ag), dilekatkan pada permukaan telaga tablet imunologi. |
|
|
|
Untuk mengenal pasti kompleks imun yang terbentuk, tindak balas imunologi kedua dijalankan, di mana Ig spesifik terikat bertindak sebagai antigen, dan konjugat mewakili Ig (Ab) kepada Ig manusia yang sepadan, dilabelkan dengan enzim -peroksidase (K) , digunakan sebagai antibodi terhadapnya. |
|
|
Seterusnya, tindak balas enzimatik berlaku, dimangkinkan oleh bahagian enzimatik molekul konjugat Substrat untuk tindak balas ini adalah bahan tidak berwarna - kromogen, yang semasa tindak balas membentuk bahan berwarna. Keamatan warna dalam telaga bergantung dengan cara tertentu pada jumlah imunoglobulin yang terkandung dalam sampel. |
Pengiraan keputusan
Menjalankan immunoassay enzim
Untuk serodiagnosis, plat polistirena 96-telaga digunakan, pada dinding sel yang antigennya pra-terjerap. Serum ujian ditambah ke dalam sel tablet. Dalam kes ini, antibodi homolog dengan antigen melekat padanya. Antibodi yang tidak terikat dikeluarkan dengan mencuci. Seterusnya, antibodi terhadap imunoglobulin manusia (antibodi) yang dilabelkan dengan enzim ditambah ke dalam sel. Jika antibodi yang dapat dikesan terdapat dalam serum ujian, maka pada peringkat ini ia akan bertindak sebagai antigen yang dengannya antibodi yang berlabel akan bertindak balas. Penambahan bahan kromogenik (pewarna) selepas mencuci akan membolehkan kita mengambil kira tindak balas warna yang berkembang dalam sel. Keamatan warna adalah berkadar dengan jumlah enzim, dan oleh itu jumlah antibodi Apabila mengukur ketumpatan optik (OD) cecair dalam sel dan membandingkannya dengan sampel kawalan, kepekatan antibodi dikira dalam unit. Jumlah yang paling kerap digunakan adalah untuk mengira keputusan dalam unit ketumpatan optik Ia mesti diambil kira bahawa Setiap sistem ujian mempunyai penunjuk sendiri untuk merekodkan keputusan dan penunjuk kenormalan dan patologi yang harus dipandu oleh semasa mentafsir. keputusan.
Apakah jangkitan yang boleh dikesan oleh ELISA?
Terutamanya dalam venereologi moden ia digunakan untuk diagnosis sifilis (dalam kombinasi dengan tindak balas lain), jangkitan HIV, hepatitis virus Has nilai terhad untuk diagnosis jangkitan klamid, jangkitan sitomegalovirus dan jangkitan herpes lain Kaedah ELISA juga digunakan untuk menentukan antibodi untuk pelbagai penyakit berjangkit, tahap hormon, autoantibodi dan pelbagai penanda. penyakit onkologi.
Bagaimana untuk mentafsir keputusan ELISA
Kajian kehadiran dan tahap antibodi pelbagai kelas dalam beberapa kes membantu menentukan peringkat proses berjangkit
|
Tahap penyakit |
IgM |
IgA |
IgG |
|
Fasa utama |
|||
|
Fasa utama |
|||
|
Fasa utama |
|||
|
Keterukan fasa kronik |
|||
|
Fasa kronik |
|||
|
Masa lalu (jangkitan sembuh) |
|||
|
Pemulihan |
penurunan titer sebanyak 2-4 kali selepas itu rawatan yang berjaya |
penurunan titer sebanyak 4-8 kali 1-1.5 bulan selepas rawatan yang berjaya |
|
|
Keputusan negatif |
Malangnya, ini kelebihan penting ELISA, bagaimana kuantiti antibodi tidak begitu penting dalam kerja amali - i.e. tidak membenarkan diagnosis yang tepat dan tidak menjejaskan dos dan masa preskripsi ubat-ubatan.
Apakah peranan kaedah ELISA dalam diagnosis sifilis
Kaedah ELISA dalam diagnosis sifilis pertama kali digunakan pada tahun 1975. Pada masa ini, ia digunakan secara meluas untuk diagnosis serologi sifilis di Rusia dan digunakan sebagai ujian pengesahan untuk sifilis Satu kajian biasanya dijalankan yang mengenal pasti apa yang dipanggil jumlah antibodi kepada antigen Treponema pallidum (IgM dan IgG), walaupun dalam beberapa kes adalah mungkin untuk menentukan hanya antibodi "awal" kelas M ELISA untuk sifilis menjadi positif selepas 3 minggu dari saat jangkitan dan kekal positif untuk beberapa masa masa yang lama walaupun selepas rawatan (kadang-kadang sepanjang hayat). hanya hasil positif atau negatif, walaupun penentuan kuantitatif juga mungkin.
(ELISA) ialah kaedah ujian darah di makmal, berdasarkan pencarian sel khas - antibodi kepada pelbagai penyakit. Kaedah ini membolehkan bukan sahaja untuk mengenal pasti patogen, tetapi juga untuk menentukan pada tahap apa itu proses patologi. Yang terakhir ini sangat penting untuk prognosis dan rawatan lanjut sabar.
Kebaikan dan keburukan kaedah
Antara semua kaedah moden diagnostik ELISA adalah yang paling inovatif dan tepat dari segi teknikal. Kelebihan utamanya ialah:
- Keupayaan untuk mencari semua antibodi yang ada kepada penyakit berjangkit dalam darah pesakit.
- Kebolehcapaian tinggi kaedah penyelidikan. Hari ini, ujian ELISA boleh dilakukan oleh mana-mana makmal bersaiz sederhana.
- Hampir 100% kekhususan dan sensitiviti kaedah.
- Keupayaan untuk mencari antibodi dan antigen, serta menubuhkan peringkat proses patologi dan menjejaki dinamiknya, terima kasih kepada perbandingan kuantiti.
Jumlah kelebihan ini berbanding ujian lain sepenuhnya membayangi satu-satunya kelemahan ujian: ia dapat mengesan antibodi, tetapi bukan patogen itu sendiri.
Istilah utama untuk menilai analisis
Untuk memahami apa itu analisis ELISA, apakah itu dan bagaimana ia dilakukan, anda perlu membiasakan diri dengan istilah asas yang digunakan oleh pakar.
- Antibodi- protein yang dihasilkan oleh sel sistem imun manusia (limfosit jenis B). Mereka menjawab tindak balas tertentu kepada kemasukan agen atau bahan asing ke dalam badan. Nama lain untuk antibodi ialah imunoglobulin, mereka milik kelas yang berbeza: A, E, M, G. Mereka berbeza antara satu sama lain dalam jisim, kelajuan tindak balas, separuh hayat dan beberapa ciri lain. Biasanya, darah manusia mengandungi terutamanya imunoglobulin kelas G Jika berlaku sebarang jangkitan, jumlah imunoglobulin A dan M meningkat secara mendadak dalam tindak balas alahan.
- Antigen- ejen asing yang mempunyai asal organik dan berat molekul yang tinggi. Selalunya ia mewakili patogen atau bahan aktif biologinya.
- Kompleks antigen-antibodi, atau kompleks imun, adalah gabungan langsung bahan asing dan imunoglobulin, yang menimbulkan perkembangan tindak balas imun.
Intipati dan skop kaedah
Pesakit sering mempunyai soalan: analisis ELISA, apakah itu, bagaimana ia dilakukan dan untuk apa? Anda boleh bercakap tentang kaedah dengan cara yang boleh diakses dengan menerangkan secara ringkas peringkatnya.
Peringkat persediaan. Doktor makmal menggunakan plat khas dengan 96 telaga. Antigen patogen tertentu digunakan pada permukaan setiap telaga.
Peringkat 1. Darah diambil, yang kemudiannya disapu setitik demi setitik ke dalam perigi. Perigi memulakan tindak balas antara antigen dan antibodi dalam darah.
Peringkat 2. Tindak balas dengan pembentukan kompleks imun sedang giat dijalankan di dalam lubang. Akibatnya, bahan dengan warna tertentu terbentuk. Keamatan warna bergantung pada jumlah antibodi dalam darah pesakit kepada setiap patogen tertentu.
Peringkat 3. Penilaian keputusan dengan fotometri. Untuk tujuan ini, peranti khas yang dipanggil spektrofotometer digunakan. Ia digunakan untuk membandingkan ketumpatan bahan dalam lubang dan sampel kawalan. Seterusnya, peranti oleh analisis matematik menjana hasil.
Penilaian keputusan dan tujuan ELISA
Tafsiran hasilnya bergantung pada beberapa nuansa penting:
- Ketumpatan optik telaga.
- Pengilang plat dengan telaga (sistem ujian).
- Makmal tempat kajian dijalankan.
Memandangkan nuansa ini, anda tidak boleh membandingkan dua keputusan daripada sistem ujian yang berbeza atau dari makmal yang berbeza.
Satu lagi perkara penting yang mempengaruhi analisis ELISA ialah aviditi antibodi yang dipanggil. Parameter ini mencirikan jumlah antigen dan kekuatan ikatan dalam kompleks antigen-antibodi. Definisinya adalah berdasarkan rawatan kompleks imun dengan urea untuk menyelesaikan struktur protein. Ini membolehkan anda memusnahkan ikatan lemah antara antigen dan antibodi dan meninggalkan hanya yang kuat. Kepentingan kajian aviditi ialah ia boleh digunakan untuk menentukan tempoh jangkitan. Maklumat ini amat penting untuk membuat diagnosis pada wanita hamil.
Ujian darah menggunakan kaedah ELISA berfungsi:
- Untuk mencari pelbagai antigen patogen.
- Untuk mengkaji tahap hormon.
- Untuk pemeriksaan untuk kehadiran patologi autoimun.
- Untuk mengesan penanda kanser.
Varieti ELISA
Analisis ELISA mempunyai jenis berikut:
- Tidak langsung.
- Lurus.
- Berdaya saing.
- Kaedah menyekat.
Tetapi sebenarnya, hari ini hanya kaedah yang dipanggil ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) digunakan. Ia berdasarkan reaksi yang diterangkan di atas pembentukan kompleks antigen-antibodi dengan perubahan warna pada permukaan telaga.
Ujian darah ELISA kuantitatif itu sendiri patut diberi perhatian khusus. Ini bukan jenis analisis, tetapi cara menilai keputusan. Terima kasih kepadanya, bilangan antibodi dikira dan kelas mereka ditentukan. Hasilnya bergantung pada ketumpatan optik sampel, sistem ujian di mana analisis ELISA dilakukan, serta di makmal.
Penyakit yang dikesan oleh ELISA
ELISA adalah ujian darah yang mengesan jumlah yang besar pelbagai penyakit berjangkit. Selain itu, kedua-dua jangkitan virus dan virus dikesan dengan ketepatan yang sama. penyakit bakteria. Sebagai contoh, dengan menggunakan pembentukan kompleks imun, seseorang boleh membuktikan kehadiran antigen patogen penyakit berikut:
Di samping itu, ELISA membolehkan anda mengesan:
- Penanda kanser - TNF (faktor nekrosis tumor), PSA (antigen khusus prostat), CEA (antigen karsinoembrionik), CA-125 (penanda tumor ovari)
- Hormon kehamilan ialah hCG (human chorionic gonadotropin).
- Pelanggaran sistem pembiakan: hormon sistem pembiakan wanita dan lelaki.
- Patologi kelenjar tiroid.
Adalah penting untuk menyebut bahawa ujian ELISA untuk HIV hari ini adalah cara utama untuk mendiagnosis penyakit berbahaya ini.
Bahan untuk ELISA dan teknik persampelan
Untuk melakukan ELISA, darah diambil dari pesakit semasa perut kosong. Seterusnya, serum diperoleh daripada darah, yang digunakan secara langsung untuk analisis. Selain itu, ELISA boleh dilakukan pada cecair serebrospinal(cecair serebrospinal), lendir saluran serviks (serviks), cecair amniotik dan juga cecair vitreous (bola mata).
Sebelum menderma darah, pesakit diberi amaran bahawa dia tidak boleh mengambil apa-apa ubat-ubatan, dan rawatan dengan antibiotik dan ubat antivirus Adalah disyorkan untuk menyelesaikan sekurang-kurangnya dua minggu sebelum pengumpulan darah.
Tarikh akhir untuk menerima dan menyahkod keputusan
Masa yang diperlukan untuk menerima jawapan daripada makmal tidak bergantung pada kelajuan kerjanya, tetapi pada tahap mana penyakit itu dan antibodi apa yang telah muncul dalam darah. Jadi, sebagai contoh: imunoglobulin M muncul kira-kira 2 minggu selepas mengambil darah untuk analisis dan bermakna proses itu berada di peringkat jangkitan primer atau keterukan jangkitan kronik telah berlaku. Pada masa yang sama, antibodi kelas M dan G muncul semasa jangkitan primer. Lebih-lebih lagi, yang terakhir boleh dikesan selepas 4 minggu.
IgA muncul selepas 2-3 minggu sama ada bersendirian atau bersama-sama dengan M, bermakna jangkitan akut, atau bersama-sama dengan G, menunjukkan proses kronik.
begitu istilah yang berbeza Kemunculan antibodi dalam darah akan memaksa pesakit menunggu lama untuk keputusannya. Ia boleh diterima untuk menunggu lebih daripada sebulan selepas ujian ELISA dilakukan. Pentafsiran dan tafsiran oleh doktor juga mengambil tempoh masa tertentu.
Senarai kaedah diagnostik yang tersedia telah berkembang pesat dalam beberapa dekad kebelakangan ini, pakar diagnostik cuba menggabungkan kelebihan semua analisis sebelumnya dalam kaedah baharu, menyingkirkan semua kelemahan mereka yang terdahulu.
DALAM Kebelakangan ini semakin dalam senarai prosedur diagnostik termasuk enzim immunoassay - ujian moden dan agak baru, yang sedikit diketahui oleh orang biasa yang tidak berkaitan dengan perubatan. Namun begitu, teknik ini berkembang pesat di kalangan penganutnya di kalangan kakitangan perubatan yang berkelayakan. Anda boleh cuba mencari tahu apa itu dan dalam kes apa ia harus digunakan dengan membiasakan diri dengan ciri dan ciri utamanya.
Enzim immunoassay ialah teknik makmal instrumental berdasarkan tindak balas "antigen-antibodi" molekul, yang memungkinkan untuk mengesan protein tertentu dalam bahan biologi(sampel untuk penyelidikan). Protein sedemikian boleh menjadi enzim, pelbagai mikroorganisma (virus, bakteria, kulat), protozoa, dll.
Selepas penemuan kaedah itu, ia diberi nama ujian ELISA, yang tiada kaitan dengan nama penemu, tetapi merupakan singkatan nama penuh dalam bahasa Inggeris - ujian imunosorben berkaitan enzim. Doktor di seluruh dunia menggunakan nama ini; sesetengah doktor di negara berbahasa Rusia juga memanggil jenis penyelidikan ini dengan cara ini.
Prinsip utama kaedah ini ialah tindak balas molekul "antigen-antibodi".
Antigen ialah sebarang molekul asing yang memasuki badan manusia sebagai sebahagian daripada mikrob yang menyebabkan penyakit. Antigen biasanya molekul protein. Sebagai tambahan kepada mikroorganisma, "orang asing" sedemikian boleh menjadi sel darah asing yang tidak sepadan dengan kumpulan atau faktor Rh.
Sebagai tindak balas kepada kemasukan antigen sedemikian ke dalam badan, tindak balas imun dilancarkan, yang bertujuan untuk melindungi daripada sebarang molekul asing. Ini berlaku kerana sintesis agen khas sistem imun- antibodi (imunoglobulin). Setiap antibodi hanya sesuai untuk antigen tertentu dan meneutralkan "orang asing" patogen dengan mengikatnya menjadi satu kompleks. Ia adalah proses pengikatan sedemikian yang dipanggil tindak balas "antigen-antibodi".
Jenis-jenis antibodi
Semua antibodi (imunoglobulin) dibahagikan kepada 5 jenis bergantung pada tahap tindak balas imun yang muncul:
Untuk diagnostik ELISA, tahap imunoglobulin IgG, IgM dan IgA paling kerap penting. Dengan titer mereka, anda boleh mengetahui sama ada seseorang pernah menghidap penyakit itu sebelum ini atau dijangkiti baru-baru ini, sama ada dia telah mengembangkan imuniti atau sama ada tubuhnya tidak berdaya melawan patologi.
Kebaikan dan keburukan enzim immunoassay
hidup masa ini ELISA adalah salah satu kaedah yang paling tepat dan sensitif. Ia telah diterima pakai oleh pakar dalam pelbagai bidang perubatan dan terus meluaskan skop penggunaannya.
Kelebihan kaedah
- Ketepatan tinggi data yang diperolehi.
- Sensitiviti (membolehkan anda mengesan bahan yang diperlukan walaupun dengan kehadiran minimum patogen dalam sampel).
- Kemungkinan diagnosis pada hari pertama penyakit atau dalam tempoh inkubasi.
- Kelajuan pemerolehan data berbanding kaedah lain yang mempunyai ketepatan yang sama.
- Automasi tinggi proses dan penyertaan manusia yang minimum, yang mengurangkan ralat pelaku.
- Mendapatkan data mengenai peringkat proses patologi dan keberkesanan terapi yang dipilih.
- Tidak menyakitkan dan invasif minimum apabila mengumpul bahan.
Kelemahan kaedah
- Dalam kebanyakan kes, ia membolehkan anda menentukan tindak balas badan kepada agen patogen, dan bukan patogen itu sendiri.
- Sebelum ujian, penyakit yang disyaki mesti diketahui dengan tepat, kerana ujian itu sangat spesifik.
- Kemungkinan bacaan palsu disebabkan oleh isu teknikal, mengambil ubat, atau kehadiran serentak beberapa ubat penyakit kronik atau pelanggaran proses metabolik dalam badan pesakit.
- Tafsiran keputusan hanya boleh dilakukan oleh pakar yang berkelayakan tinggi, kerana untuk mentafsir data yang diperolehi perlu mempunyai pengetahuan latihan khas dan stok besar pengetahuan perubatan di kawasan tertentu.
- ELISA adalah ujian yang agak jarang berlaku, jadi ia tidak dilakukan di semua makmal diagnostik.
- Kaedah ini agak mahal, kerana sebagai tambahan kepada reagen, makmal mesti mempunyai banyak peralatan mahal dan sampel antigen yang dihasilkan di institut khas.
Dalam kes apakah enzim immunoassay digunakan?
Senarai penuh petunjuk untuk immunoassay enzim adalah sangat luas ia merangkumi hampir semua cabang perubatan.
Selalunya, ELISA digunakan untuk tujuan berikut:
- pengesanan penyakit berjangkit;
- diagnosis penyakit kelamin;
- takrifan status imun atau penyakit autoimun tertentu;
- pengenalpastian penanda tumor;
- penentuan hormon.
Dalam kes berjangkit dan penyakit virus Teknik ini membolehkan kita mengenal pasti patologi berikut:
Di samping itu, ELISA membolehkan anda dengan cepat dan berkesan menentukan keadaan infarksi, menilai potensi pembiakan badan, mengenal pasti alahan, sumbernya, dll.
Teknik immunoassay enzim digunakan untuk menjalankan ujian klinikal semasa pembangunan ubat baru dan dalam menilai kesannya terhadap tubuh manusia.
Jenis sampel dan kaedah pemilihan mereka untuk penyelidikan
Selalunya, bahan ujian untuk immunoassay enzim adalah darah, yang diambil dari vena antekubital pesakit. Pengumpulan sampel dijalankan pada perut kosong, terutamanya pada waktu pagi. Selepas pensampelan, sel-sel yang terbentuk yang mengganggu penyelidikan dipisahkan dan dikeluarkan daripada darah, hanya meninggalkan serum.
Apabila mendiagnosis jangkitan genitouriner, bahan sering menjadi sapuan dari tisu mukus organ kemaluan, lendir dari uretra atau serviks, sampel dari rektum, pengikisan daripada hakisan atau ulser di kawasan pangkal paha dan dari bahagian lain badan. Sapuan juga boleh diambil dari kaviti oral, serta dari nasofaring.
Kadangkala enzim immunoassay digunakan dalam amalan obstetrik dan ginekologi semasa kehamilan untuk menentukan keadaan cecair amniotik. Dalam kes ini, cecair amniotik menjadi sampel. Untuk melakukan ini, sedikit cecair diambil dengan menusuk kantung amniotik dengan jarum panjang. Semua manipulasi dijalankan dengan instrumen steril untuk meminimumkan kemungkinan risiko.
Selalunya bahan menjadi cecair serebrospinal atau serous. Ini berlaku apabila anestesia tempatan, yang ditadbir melalui suntikan.
Pakar yang menghantar untuk kajian itu harus menjelaskan jenis bahan yang diperlukan untuk immunoassay enzim. Selalunya sampel beberapa jenis atau dari tempat yang berbeza diambil sekaligus. Doktor yang mengeluarkan rujukan untuk pemeriksaan jenis ini juga harus memberitahu pesakit tentang persediaan untuk menderma biomaterial.
Persediaan untuk immunoassay enzim
Untuk meningkatkan ketepatan data yang diperoleh selepas immunoassay enzim, penyediaan untuk pemilihan bahan hendaklah seperti berikut:
- 10 hari sebelum kajian, tidak termasuk antibiotik, ubat antivirus dan antimikotik;
- selama sehari adalah perlu untuk mengecualikan alkohol, merokok dan mengambil bahan narkotik;
- dalam tempoh yang sama, adalah perlu untuk mengelakkan keletihan fizikal;
- Beri amaran kepada prescriber tentang semua ubat yang diambil oleh pesakit;
- Beritahu doktor anda jika anda hamil atau mengesyaki anda hamil.
Adalah lebih baik jika bahan ujian dikumpulkan pada waktu pagi semasa perut kosong.
Jika diagnosis bertujuan untuk menentukan keadaan tahap hormon, maka penting untuk memastikan keadaan tenang sehari sebelumnya dan elakkan ketegangan saraf. Bagi wanita, menderma darah untuk hormon ditentukan dengan jelas mengikut tempoh kitaran bulanan, yang akan dibincangkan oleh doktor pada masa temujanji.
2-3 hari sebelum pensampelan, anda perlu mengecualikan makanan goreng dan berlemak dari menu, dan sebelum ujian hepatitis, jangan makan buah sitrus atau buah dan sayur oren atau kuning lain.
Tafsiran keputusan immunoassay enzim
Hasil kajian kualitatif biasanya ditunjukkan oleh tanda "+" (dikesan) atau "-" (tidak dijumpai).
Berdasarkan kehadiran atau ketiadaan kumpulan imunoglobulin tertentu, kesimpulan berikut boleh dibuat:
- JgM (-), JgG (-), JgA (-) - imuniti terhadap penyakit tidak hadir sepenuhnya (badan belum pernah menemui antigen jenis ini);
- JgM (-), JgG (+), JgA (-) - terdapat perlanggaran sebelumnya dengan antigen atau vaksin ini;
- JgM (+), JgG (-/+), JgA (-/+) - proses patologi akut (kemungkinan utama);
- JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) - proses kronik;
- JgM (+), JgG (+), JgA (+) - berulang;
- JgM (-) - peringkat pemulihan.
Nilai kuantitatif membawa beban maklumat yang besar, tetapi hanya doktor yang hadir boleh mentafsirnya, berdasarkan petunjuk sebelumnya, umur pesakit, dan norma untuk setiap penyakit tertentu. Atas sebab ini anda tidak boleh menilai sendiri hasilnya.
Berapa lama anda perlu menunggu keputusan?
Teknik ini mempunyai banyak jenis, bergantung pada tempoh untuk mendapatkan data di tangan ditentukan. Tempoh purata Diagnostik ELISA mengambil masa 4-6 jam, yang membolehkan anda memberikan hasil pada hari berikutnya.
Kaedah paling lama mengambil masa sehingga 10 hari, sebagai contoh, dalam kes jangkitan HIV.
Pada keperluan segera Ia adalah mungkin untuk menggunakan kaedah ekspres, di mana jawapannya diperolehi dalam masa 1-2 jam.
Di manakah saya boleh mendapatkan ujian ELISA?
Memandangkan peralatan untuk jenis diagnostik ini agak mahal, tidak semua makmal boleh membelinya. Di samping itu, ujian yang mengandungi antigen tertentu mempunyai jangka hayat terhad (biasanya kira-kira 1 tahun) dan oleh itu perlu sentiasa dikemas kini.
Atas sebab-sebab ini, kerajaan institusi perubatan Makmal ELISA tidak selalu tersedia. Selalunya adalah perlu untuk menghubungi pusat perubatan swasta atau pusat diagnostik yang besar.
Untuk menjalankan ujian ELISA, makmal mesti mempunyai lesen khas, dan kakitangan dan pembantu makmal mesti menjalani latihan khas.
Selalunya khusus pusat diagnostik atau makmal disyorkan oleh doktor merujuk pesakit untuk pemeriksaan.
Kos enzim immunoassay
Harga untuk kajian ini bergantung pada wilayah negara dan pada tahap klinik yang menyediakan perkhidmatan. Di Moscow harga minimum untuk menentukan satu antigen bermula dari 700 rubel. Jika perlu untuk mengenal pasti beberapa imunoglobulin sekaligus, harga akan ditambah.
Bila analisis segera kos meningkat sebanyak 150-200 rubel. bagi setiap antigen.
Walaupun kos yang agak tinggi, immunoassay enzim memungkinkan untuk membuat pemeriksaan pesakit sebagai bermaklumat dan secepat mungkin, yang mengurangkan masa sebelum permulaan rawatan dan membolehkan penstabilan keadaan seseorang yang lebih cepat.
Video ini membentangkan filem "Asas immunoassay enzim".
