উদ্ভাবন এর সাথে সম্পর্কিত জীনতত্ত্ব প্রকৌশলী, বায়োটেকনোলজি, মেডিসিন, ফার্মাকোলজি। একটি নতুন রিকম্বিন্যান্ট মাল্টিকপি প্লাজমিড ডিএনএ pSX50, মানব লিউকোসাইট আলফা-2b ইন্টারফেরনের সংশ্লেষণকে এনকোড করছে, যার অভিব্যক্তি ল্যাকটোজ এবং ট্রিপটোফ্যান প্রবর্তক এবং একটি ট্রান্সক্রিপশন টার্মিনেটরের নিয়ন্ত্রণে রয়েছে। রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড ডিএনএ pSX50 এর সাথে প্রাপক স্ট্রেন E. coli BL21 কোষের রূপান্তরের ফলে, স্ট্রেন E. coli SX50 প্রাপ্ত হয়েছিল - 0.9-1.0 গ্রাম পর্যন্ত উত্পাদনশীলতা সহ রিকম্বিন্যান্ট লিউকোসাইট হিউম্যান আলফা-2b ইন্টারফেরনের উত্পাদনকারী। 1 লিটার কালচার মিডিয়াম থেকে আলফা-2বি ইন্টারফেরন। রিকম্বিন্যান্ট আলফা-2বি ইন্টারফেরন উৎপাদনের পদ্ধতিটি ই. কোলি এসএক্স50-এর তৈরি রিকম্বিন্যান্ট স্ট্রেন ব্যবহারের উপর ভিত্তি করে তৈরি করা হয়েছে এবং এর সাথে একটি পুষ্টির মাধ্যমে গভীরভাবে চাষ করা জড়িত। হ্রাসকৃত বিষয়বস্তুজৈব সংশ্লেষণ প্রক্রিয়ায় পুষ্টির স্তরগুলির ক্রমাগত সংযোজন সহ ট্রিপটোফ্যান, অণুজীবের কোষগুলির যান্ত্রিক ধ্বংস উচ্চ্ রক্তচাপ, গুয়ানিডিন হাইড্রোক্লোরাইডের একটি ঘনীভূত দ্রবণে সমষ্টিগত প্রোটিনের দ্রবীভূতকরণ, তারপরে ক্যাওট্রপিক এজেন্টের উপস্থিতিতে শারীরবৃত্তীয় বাফার দ্রবণে ইন্টারফেরনের পুনর্নবীকরণ এবং চেলেটিং সেফারোস টাইপ ফাস্ট ফ্লো-তে ইন্টারফেরনের তিন-পর্যায়ের ক্রোমাটোগ্রাফিক পরিশোধন ব্যবহার করে এর পরিশোধন। +2 আয়ন, এসএম টাইপ আয়ন এক্সচেঞ্জ রেজিনগুলিতে আয়ন বিনিময় ক্রোমাটোগ্রাফি Sephsrose ফাস্ট ফ্লো এবং সুপারডেক্স 75 টাইপ রেজিনে জেল পরিস্রাবণ ক্রোমাটোগ্রাফি। পদ্ধতিটি ইলেক্ট্রোফোরেসিস অনুযায়ী 99% এর বেশি বিশুদ্ধতার ইন্টারফেরন পদার্থ প্রাপ্ত করা সম্ভব করে RF HPLC অনুসারে 98%-এর বেশি সিলভার দিয়ে জেল দাগ দেওয়ার সময় অবস্থা হ্রাস করা এবং 1 লিটার কালচার মিডিয়ামে কমপক্ষে 400-800 মিলিগ্রাম পরিমাণে পাইরোজেন (এলএএল টেস্ট) থাকে না। 3 n. এবং 3টি বেতনের পদ, 6 জন অসুস্থ।
RF পেটেন্ট 2242516 এর জন্য অঙ্কন
উদ্ভাবনটি জৈবপ্রযুক্তিগতভাবে প্রাপ্ত জেনেটিকালি ইঞ্জিনিয়ারড ওষুধের সাথে সম্পর্কিত, যেমন পদ্ধতির সাথে শিল্প উত্পাদনরিকম্বিন্যান্ট হিউম্যান লিউকোসাইট ইন্টারফেরন আলফা-২বি চিকিৎসা উদ্দেশ্যে(এরপরে ইন্টারফেরন হিসাবে উল্লেখ করা হয়েছে), সেইসাথে ইন্টারফেরনের সংশ্লেষণকে এনকোডিং করে Escherichia coli (E.coli) এবং প্লাজমিড ডিএনএ-এর রিকম্বিন্যান্ট উত্পাদনকারী স্ট্রেন।
ইন্টারফেরন হল প্রোটিন অণু যার আণবিক ওজন 15,000 থেকে 21,000 ডাল্টন হয় যা ভাইরাল সংক্রমণ বা অন্যান্য প্যাথোজেনের প্রতিক্রিয়া হিসাবে কোষ দ্বারা উত্পাদিত এবং নিঃসৃত হয়। ইন্টারফেরনের তিনটি প্রধান গ্রুপ রয়েছে: আলফা, বিটা এবং গামা। এই গোষ্ঠীগুলি নিজেরাই সমজাতীয় নয় এবং ইন্টারফেরনের বিভিন্ন আণবিক প্রজাতি থাকতে পারে। এইভাবে, ইন্টারফেরন আলফার 14 টিরও বেশি জেনেটিক জাত সনাক্ত করা হয়েছে, যা আগ্রহের এবং খুঁজে পাওয়া যায় ব্যাপক আবেদনওষুধে অ্যান্টিভাইরাল, অ্যান্টিপ্রোলিফারেটিভ এবং ইমিউনোমোডুলেটরি এজেন্ট হিসাবে।
ভাইরাস এবং অন্যান্য প্রবর্তক (SU1713591, RU 2066188, RU 2080873) দ্বারা প্ররোচিত মানব দাতার রক্তের লিউকোসাইট থেকে হিউম্যান লিউকোসাইট ইন্টারফেরন পাওয়ার জন্য পরিচিত পদ্ধতি রয়েছে।
ইন্টারফেরন উৎপাদনের জন্য এই পদ্ধতিগুলির প্রধান অসুবিধা হ'ল মানব ভাইরাসের সাথে চূড়ান্ত পণ্যের দূষণের সম্ভাবনা, যেমন হেপাটাইটিস বি এবং সি ভাইরাস, ইমিউনোডেফিসিয়েন্সি ভাইরাস ইত্যাদি।
বর্তমানে, মাইক্রোবায়োলজিক্যাল সংশ্লেষণের মাধ্যমে ইন্টারফেরন উৎপাদনের পদ্ধতিটি আরও প্রতিশ্রুতিশীল হিসাবে স্বীকৃত হয়েছে, যা তুলনামূলকভাবে সস্তা প্রারম্ভিক উপকরণ থেকে উল্লেখযোগ্যভাবে উচ্চ ফলন সহ লক্ষ্য পণ্য প্রাপ্ত করা সম্ভব করে তোলে। এখানে ব্যবহৃত পন্থাগুলি একটি কাঠামোগত জিনের রূপগুলি তৈরি করা সম্ভব করে যা ব্যাকটেরিয়ার অভিব্যক্তির জন্য সর্বোত্তম, সেইসাথে নিয়ন্ত্রক উপাদান যা এর অভিব্যক্তি নিয়ন্ত্রণ করে।
ব্যবহৃত শুরু অণুজীব হয় বিভিন্ন ডিজাইন Pichia pastoris, Pseudomonas putida এবং Escherichia coli এর স্ট্রেন।
ইন্টারফেরন প্রযোজক হিসাবে P. pastoris ব্যবহার করার অসুবিধা (J.N. Garcia, J.A. Aguiar et. al. //High level expression of human IFN-2b in Pichia pastoris.//Biotecnologia Aplicada, 12(3),152-155, 1995 ), এই ধরণের খামিরের গাঁজন অবস্থা অত্যন্ত কঠিন, জৈব সংশ্লেষণ প্রক্রিয়া চলাকালীন, বিশেষত মিথেনলের ঘনত্ব কঠোরভাবে বজায় রাখা প্রয়োজন। Ps ব্যবহার করার অসুবিধা পুটিডা (SU1364343, SU1640996, SU1591484, RU1616143, RU2142508) হল নিম্ন অভিব্যক্তি স্তরে গাঁজন প্রক্রিয়ার জটিলতা (1 লিটার সংস্কৃতি মাধ্যমের প্রতি 10 মিলিগ্রাম ইন্টারফেরন)। Escherichia coli স্ট্রেন (Semin. Oncol., 1997, Iun; 24 (3 Suppl. 9): S9-41-S9-51) ব্যবহারে আরও ফলপ্রসূ হয়।
প্রচুর সংখ্যক প্লাজমিড এবং ই. কোলাই স্ট্রেন তৈরি হয় যা তাদের ভিত্তিতে ইন্টারফেরন প্রকাশ করে: ই. কোলাই স্ট্রেন ATCC 31633 এবং 31644 প্লাজমিড Z-pBR322 (Psti) HclF-11-206 বা Z-pBR 322 (Pstl)/ HclN SN 35 -AHL6 (SU 1764515), E. coli স্ট্রেন pINF-AP2 (SU 1312961), E. coli স্ট্রেন pINF-F-Pa (AU 1312962), E. কোলি স্ট্রেন SG 20050 সঙ্গে প্লাজমিড p280/280. এবং অন্যান্য। জৈব জৈব রসায়ন, 1987, v. 13, নং. 9, পিপি. 1186-1193), প্লাজমিড পিনএফ১৪ (SU 1703691) সহ স্ট্রেন ই. কোলি এসজি 20050, প্লাজমিডের সাথে ই. কোলি এসজি 20050 (p6401RU51RU) এবং ইত্যাদি। এই স্ট্রেনগুলির ব্যবহারের উপর ভিত্তি করে প্রযুক্তির অসুবিধা হল তাদের অস্থিরতা, সেইসাথে ইন্টারফেরন এক্সপ্রেশনের অপর্যাপ্ত স্তর।
ব্যবহৃত স্ট্রেনের বৈশিষ্ট্যগুলির সাথে, প্রক্রিয়াটির কার্যকারিতা মূলত ইন্টারফেরনের বিচ্ছিন্নতা এবং পরিশোধনের জন্য ব্যবহৃত প্রযুক্তির উপর নির্ভর করে।
ইন্টারফেরন উৎপাদনের জন্য একটি পরিচিত পদ্ধতি রয়েছে, যার মধ্যে রয়েছে Ps কোষের সংস্কৃতি। পুটিডা, জৈববস্তুর ধ্বংস, পলিথিলেনাইমাইন দিয়ে চিকিত্সা, অ্যামোনিয়াম সালফেটের সাথে ভগ্নাংশ, ফেনাইলসিলোক্রোম সি-80-এর হাইড্রোফোবিক ক্রোমাটোগ্রাফি, লাইসেটের pH ভগ্নাংশ, এর ঘনত্ব এবং ডায়াফিল্ট্রেশন, সেলুলোজ ই-5-এডিয়েন্টে আয়ন এক্সচেঞ্জ ক্রোমাটোগ্রাফি, পিএইচ-2-এ-ডি-এডিয়েন্টের উপর আয়ন বিনিময়। সেলুলোজ SM-52-এ ফলস্বরূপ ইলুয়েন্টের বিনিময় ক্রোমাটোগ্রাফি, একটি ফিল্টার ক্যাসেট এবং সেফাডেক্স G-100 (SU 1640996) এ জেল পরিস্রাবণের মাধ্যমে ঘনত্ব। এই পদ্ধতির অসুবিধা, জটিল মাল্টি-স্টেজ গাঁজন ছাড়াও, চূড়ান্ত পণ্য প্রাপ্তিতে বহু-পর্যায়ের প্রক্রিয়া।
ইন্টারফেরন উৎপাদনের জন্য একটি পরিচিত পদ্ধতিও রয়েছে, যার মধ্যে রয়েছে থার্মোস্টেটেড শেকারে ফ্লাস্কে E. coli স্ট্রেন SG 20050/pIF16 চাষ করা, বায়োমাসকে কেন্দ্রীভূত করা, বাফার দ্রবণ দিয়ে ধুয়ে ফেলা এবং কোষ ধ্বংস করার জন্য অতিস্বনক চিকিৎসা। ফলস্বরূপ লাইসেটকে সেন্ট্রিফিউজ করা হয়, বাফারে 3M ইউরিয়া দ্রবণ দিয়ে ধুয়ে, বাফারে গুয়ানিডিন ক্লোরাইডের দ্রবণে দ্রবীভূত করা হয়, আল্ট্রাসাউন্ডের মাধ্যমে চিকিত্সা করা হয়, সেন্ট্রিফিউজ করা হয়, অক্সিডেটিভ সালফাইটোলাইসিস, 8 এম ইউরিয়ার বিরুদ্ধে ডায়ালাইসিস, পুনর্নবীকরণ এবং চূড়ান্ত টু-সিএম-অন-ম্যাটোগ্রাফি। 52 সেলুলোজ এবং Sephadex G-50 (RU 2054041)। এই পদ্ধতির অসুবিধা হল বিচ্ছিন্নতা এবং পরিশোধন প্রক্রিয়ার প্রধান পর্যায়ে তুলনামূলকভাবে কম উৎপাদনশীলতা। এটি বিশেষত পণ্যের অতিস্বনক চিকিত্সা, ডায়ালাইসিস এবং অক্সিডেটিভ সালফিটোলাইসিসের ক্ষেত্রে প্রযোজ্য, যা ইন্টারফেরনের মুক্তিতে অস্থিরতার দিকে পরিচালিত করে, সেইসাথে এই পদ্ধতিটি ব্যবহার করার অসম্ভবতা। শিল্প উত্পাদনইন্টারফেরন
নিকটতম অ্যানালগ (প্রোটোটাইপ) হিসাবে, মানুষের লিউকোসাইট ইন্টারফেরন পাওয়ার জন্য একটি পদ্ধতি নির্দেশ করা যেতে পারে, যার মধ্যে রয়েছে ই. কোলাই-এর রিকম্বিন্যান্ট স্ট্রেন চাষ করা, ফলস্বরূপ জৈববস্তুকে -70° সেন্টিগ্রেডের বেশি না তাপমাত্রায় হিমায়িত করা, গলানো, অণুজীবের কোষ ধ্বংস করা। লাইসোজাইমের সাহায্যে, ডিএনএসে লাইসেট প্রবর্তনের মাধ্যমে ডিএনএ এবং আরএনএ অপসারণ করা এবং ডিটারজেন্টের সাথে একটি বাফার দ্রবণ দিয়ে ধুয়ে ইন্টারফেরনের বিচ্ছিন্ন অদ্রবণীয় ফর্মের বিশুদ্ধকরণ, গুয়ানিডিন হাইড্রোক্লোরাইডের দ্রবণে ইন্টারফেরন অবক্ষেপকে দ্রবীভূত করা, পুনর্নবীকরণ এবং এক-পরিশোধিতকরণের মাধ্যমে। বিনিময় ক্রোমাটোগ্রাফি। রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড pSS5 ব্যবহার করে প্রাপ্ত E. coli SS5 স্ট্রেন তিনটি প্রোমোটার সমন্বিত: P lac, P t7 এবং P trp, এবং আলফা-ইন্টারফেরন জিন প্রবর্তিত নিউক্লিওটাইড প্রতিস্থাপন সহ একটি প্রযোজক হিসাবে ব্যবহৃত হয়।
এই প্লাজমিড ধারণকারী E. coli SS5 স্ট্রেন দ্বারা ইন্টারফেরনের অভিব্যক্তি তিনটি প্রবর্তক দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হয়: P lac, P t7 এবং P trp। ইন্টারফেরন এক্সপ্রেশনের মাত্রা প্রায় 800 মিলিগ্রাম প্রতি 1 লিটার সেল সাসপেনশন (RU 2165455)।
এই পদ্ধতির অসুবিধা হ'ল কোষের এনজাইমেটিক ধ্বংস, অণুজীবের ডিএনএ এবং আরএনএ এবং ইন্টারফেরনের এক-ধাপে ক্রোমাটোগ্রাফিক পরিশোধন ব্যবহার করার কম প্রযুক্তিগত দক্ষতা। এটি ইন্টারফেরন মুক্তির প্রক্রিয়ায় অস্থিরতা সৃষ্টি করে, এর গুণমান হ্রাসের দিকে পরিচালিত করে এবং ইন্টারফেরনের শিল্প উত্পাদনের জন্য উপরের স্কিমটি ব্যবহার করার সম্ভাবনাকে সীমিত করে। এই প্লাজমিডের অসুবিধা এবং এর উপর ভিত্তি করে স্ট্রেন হল E. coli স্ট্রেন BL21 (DE3) এ T7 ফেজের একটি শক্তিশালী অনিয়ন্ত্রিত প্রোমোটারের প্লাজমিডে ব্যবহার, যেখানে T7 RNA পলিমারেজ জিন প্রোমোটারের অধীনে অবস্থিত। lac operon এবং যা সবসময় “প্রবাহিত”। ফলস্বরূপ, কোষে ইন্টারফেরনের সংশ্লেষণ ক্রমাগত ঘটে, যা প্লাজমিডের বিচ্ছিন্নতা এবং স্ট্রেনের কোষগুলির কার্যক্ষমতা হ্রাসের দিকে পরিচালিত করে এবং ফলস্বরূপ, ইন্টারফেরনের ফলন হ্রাস পায়।
এই উদ্ভাবনের উদ্দেশ্য হল উচ্চ স্তরের ইন্টারফেরন জৈব সংশ্লেষণ সহ একটি নতুন রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড ডিএনএ ব্যবহার করে ই. কোলির একটি রিকম্বিন্যান্ট ইন্ডাস্ট্রিয়াল প্রযোজক স্ট্রেন তৈরি করা এবং চিকিৎসা ব্যবহারের জন্য একটি ইন্টারফেরন পদার্থ তৈরি করার জন্য একটি কার্যকর শিল্প প্রযুক্তির উন্নয়ন করা, যা গুণমানের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। ইন্টারফেরন আলফা-২বি পদার্থের জন্য "ইউরোপীয় ফার্মাকোপিয়া"-তে।
ফেডারেল স্টেট ইউনিটারি এন্টারপ্রাইজ স্টেট রিসার্চ ইনস্টিটিউট অফ জেনেটিক্সের অল-রাশিয়ান কালেকশন অফ ইন্ডাস্ট্রিয়াল স্ট্রেনে জমা, রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড ডিএনএ pSX50 এবং Escherichia coli স্ট্রেন SX50 তৈরি করে এই সমস্যার সমাধান করা হয়েছিল, VKPM B-8550 নম্বর,
সেইসাথে রিকম্বিন্যান্ট আলফা-২বি ইন্টারফেরন উৎপাদনের একটি পদ্ধতি, ই. কোলি এসএক্স৫০-এর রিকম্বিন্যান্ট স্ট্রেন ব্যবহারের উপর ভিত্তি করে এবং প্রক্রিয়ায় পুষ্টি উপাদানের ক্রমাগত সংযোজন সহ একটি কম ট্রিপটোফ্যান সামগ্রী সহ একটি পুষ্টির মাধ্যমে এর গভীর চাষ জড়িত। জৈবসংশ্লেষণ, উচ্চ চাপে অণুজীব কোষের যান্ত্রিক ধ্বংস, গুয়ানিডিন হাইড্রোক্লোরাইডের ঘনীভূত দ্রবণে সমষ্টিগত প্রোটিন দ্রবীভূত করা, তারপরে চ্যাওট্রপিক এজেন্টের উপস্থিতিতে শারীরবৃত্তীয় বাফার দ্রবণে ইন্টারফেরনের পুনর্গঠন এবং তিন-পর্যায়ের ক্রোম্যাটোগ্রাফিক বিশুদ্ধকরণের আন্তঃস্রোত। চেলেটিং সেফারোজ ফাস্ট ফ্লো হিসাবে, Cu +2 আয়নগুলির সাথে স্থির, আয়ন বিনিময় রেজিনের উপর আয়ন বিনিময় ক্রোমাটোগ্রাফি যেমন সিএম সেফারোজ ফাস্ট ফ্লো এবং সুপারডেক্স 75 এর মতো রেজিনের উপর জেল পরিস্রাবণ ক্রোমাটোগ্রাফি।
উদ্ভাবন অনুসারে, একটি নতুন রিকম্বিন্যান্ট মাল্টিকপি প্লাজমিড ডিএনএ pSX50 প্রস্তাব করা হয়েছে, যা মানুষের লিউকোসাইট আলফা-2বি ইন্টারফেরনের সংশ্লেষণকে এনকোড করে, যার অভিব্যক্তি ল্যাকটোজ এবং ট্রিপটোফ্যান প্রবর্তক এবং একটি ট্রান্সক্রিপশন টার্মিনেটরের নিয়ন্ত্রণে রয়েছে। প্লাজমিড pSX50 এর 3218 বেস পেয়ার (bp) রয়েছে এবং নিম্নলিখিত খণ্ডগুলির উপস্থিতি দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছে:
নিউক্লিওটাইড 1 থেকে নিউক্লিওটাইড (এনটি) 176 এর ক্রমটিতে একটি 176 bp ডিএনএ খণ্ড রয়েছে যাতে ট্রিপটোফ্যান প্রমোটার (P trp);
177 এনটি থেকে ক্রম। থেকে 194 n. অনুবাদের সূচনার জন্য দায়ী শাইন ডেলগার্নো সিকোয়েন্স ধারণকারী 18 bp-এর একটি সিন্থেটিক ডিএনএ খণ্ড অন্তর্ভুক্ত;
195 এনটি থেকে ক্রম। থেকে 695 n. নিম্নলিখিত নিউক্লিওটাইড প্রতিস্থাপন সহ ইন্টারফেরন জিনের ক্রম ধারণ করে 501 bp আকারের একটি DNA খণ্ড অন্তর্ভুক্ত: অবস্থান 37 এ, A থেকে C এর প্রতিস্থাপন, 39 অবস্থানে, G থেকে T এর প্রতিস্থাপন, 40 অবস্থানে, A থেকে প্রতিস্থাপন সি, অবস্থান 42-এ, জি-এর প্রতিস্থাপন, 67 নম্বরে, সি-এর সঙ্গে A-এর প্রতিস্থাপন, 69-এ, G-এর সঙ্গে T-এর বদলে, 70-এ, A-এর সঙ্গে C-এর বদলে, 72-এ, A-এর বদলে T, অবস্থান 96-এ, G-এর প্রতিস্থাপন A-এর সঙ্গে, 100-এ, A-এর সঙ্গে C-এর প্রতিস্থাপন, 102-এ, A-এর সঙ্গে T-এর প্রতিস্থাপন, 114-এ, A-এর সঙ্গে C-এর প্রতিস্থাপন, 120-এ, C-এর প্রতিস্থাপন। জি এর সাথে, অবস্থান 126-এ, জি-এর বদলে A-এর জায়গায়, 129 নম্বরে, G-এর বদলে A-এর জায়গায়, 330 নম্বরে, G-এর বদলে G-এর জায়গায়, 339 নম্বরে G-এর জায়গায় A-এর জায়গায়, 342 নম্বরে G-এর জায়গায় A-এর জায়গায়, অবস্থান 487-এ A-কে C-এর জায়গায়, 489-এ A-কে T-এর জায়গায়, 495-এ G-এর বদলে A-এর অবস্থান;
696 nt থেকে ক্রম। 713 n অনুযায়ী। একটি সিন্থেটিক পলিলিংকার ধারণকারী 18 bp একটি সিন্থেটিক ডিএনএ খণ্ড অন্তর্ভুক্ত;
714 nt থেকে ক্রম। থেকে 1138 n. 4129 nt সহ প্লাজমিড pKK223-3 এর একটি DNA খণ্ড অন্তর্ভুক্ত। থেকে 4553 n. 425 bp আকারে, কঠোর ট্রান্সক্রিপশন টার্মিনেটর rrnBT 1 T 2 এর ক্রম ধারণকারী;
1139 থেকে ক্রম খ. থেকে 1229 n. 2487 nt সহ প্লাজমিড pUC19 এর একটি DNA খণ্ড অন্তর্ভুক্ত। থেকে 2577 n. আকারে 91 bp, β-lactomase জিনের প্রবর্তক ধারণ করে (অ্যাম্পিসিলিন প্রতিরোধের জিন - Amp R);
1230 থেকে ক্রম খ. থেকে 2045 n. 720 nt সহ pUC4K প্লাজমিডের একটি DNA খণ্ড অন্তর্ভুক্ত। থেকে 1535 খ্রি 816 bp আকারে, কান জিনের কাঠামোগত অঞ্চল ধারণ করে;
2046 থেকে ক্রম খ. থেকে 3218 n. 1625 থেকে 453 nt পর্যন্ত প্লাজমিড pUC19 এর একটি DNA খণ্ড অন্তর্ভুক্ত। 1173 bp আকারে, প্লাজমিড রেপ্লিকেশন (ori) এবং লাখ প্রবর্তক (P lac) এর জন্য দায়ী ক্রম ধারণকারী।
চিত্র 1-5 ডিজাইন ডায়াগ্রাম এবং দেখায় শারীরিক মানচিত্র pSH50 প্লাজমিড।
চিত্র 6 প্লাজমিড pSX50 এর জন্য নির্ধারিত সম্পূর্ণ নিউক্লিওটাইড ক্রম দেখায়।
ঐতিহ্যগত ব্যবহার করে pSX50 প্লাজমিডের সাথে Escherichia coli BL21 কোষে রূপান্তর করে Escherichia coli স্ট্রেন SX50 প্রাপ্ত হয়েছিল জেনেটিক ইঞ্জিনিয়ারিং প্রযুক্তি. E.Coli SX50 স্ট্রেন নিম্নলিখিত বৈশিষ্ট্য দ্বারা চিহ্নিত করা হয়।
সাংস্কৃতিক এবং রূপগত বৈশিষ্ট্য
কোষগুলি ছোট, সোজা, পুরু রড-আকৃতির, গ্রাম-নেগেটিভ, অ-স্পোর-বিয়ারিং। কোষগুলি সাধারণ পুষ্টির মিডিয়াতে ভালভাবে বৃদ্ধি পায়। ডিফকো আগরে বেড়ে উঠার সময়, মসৃণ প্রান্তযুক্ত গোলাকার, মসৃণ, উত্তল, মেঘলা, চকচকে, ধূসর উপনিবেশ তৈরি হয়। যখন তরল মিডিয়া (গ্লুকোজ সহ ন্যূনতম মাঝারি বা এলবি ব্রোথে) বড় হয়, তখন একটি তীব্র, এমনকি ঘোলাটেতা তৈরি হয়।
শারীরিক এবং জৈবিক বৈশিষ্ট্য
অ্যারোব। 6.5-7.5 এর সর্বোত্তম পিএইচ সহ বৃদ্ধির জন্য তাপমাত্রা 4-42°C।
নাইট্রোজেনের উত্স হিসাবে, অ্যামোনিয়াম এবং নাইট্রেট আকারে উভয় খনিজ লবণ ব্যবহার করা হয়, পাশাপাশি অরগানিক কম্পাউন্ডঅ্যামিনো অ্যাসিড, পেপটোন, ট্রিপটোন, খামির নির্যাস ইত্যাদি আকারে।
অ্যামিনো অ্যাসিড, গ্লিসারল এবং কার্বোহাইড্রেটগুলি কার্বন উত্স হিসাবে ব্যবহৃত হয়। এন্টিবায়োটিক প্রতিরোধের. কোষগুলি কানামাইসিনের প্রতিরোধ প্রদর্শন করে (100 μg/ml পর্যন্ত)।
Escherichia coli স্ট্রেন 8X50 একটি ইন্টারফেরন উৎপাদনকারী।
স্ট্রেন স্টোরেজ মিডিয়ামের পদ্ধতি, শর্ত এবং গঠন
তেলের নিচে 20 mcg/ml ঘনত্বে কানামাইসিন যোগ করার সাথে এল-আরেপে, 15% গ্লিসারলযুক্ত এল-ব্রোথে এবং মাইনাস 70 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় অ্যাম্পুলে উপযুক্ত অ্যান্টিবায়োটিক, অ্যাম্পুলে লাইওফিলাইজড অবস্থায় প্লাস 4 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রা।
Escherichia coli স্ট্রেন SX50 Escherichia coli প্রজাতির একটি স্ট্রেন হিসাবে Bergey's Guide (1974) অনুসারে চিহ্নিত করা হয়েছিল।
আলফা-2বি ইন্টারফেরনের শিল্প উৎপাদনের পদ্ধতি
প্রস্তাবিত পদ্ধতির একটি বৈশিষ্ট্য হ'ল প্রযুক্তির বিকাশ যা গাঁজন করার সময় জমে থাকা অদ্রবণীয় ফর্ম থেকে ইন্টারফেরনকে বিচ্ছিন্ন করা সম্ভব করে, যা উল্লেখযোগ্যভাবে সহজ করা সম্ভব করে। প্রযুক্তিগত স্কিমবিচ্ছিন্নকরণ প্রক্রিয়া এবং লক্ষ্য পণ্যের ফলন বৃদ্ধি।
পদ্ধতির মধ্যে রয়েছে পুষ্টির মাধ্যমে Escherichia coli স্ট্রেন SH50 চাষ করা, পুষ্টির স্তরের অবিচ্ছিন্ন সংযোজন, বিশেষত গ্লুকোজ এবং ইস্টের নির্যাস, জৈব সংশ্লেষণ প্রক্রিয়ায়, বিশেষত কম ট্রিপটোফান উপাদান সহ, উচ্চ চাপে অণুজীবের কোষগুলির যান্ত্রিক ধ্বংস। 700-900 বার, একটি বাফার গুয়ানিডিন হাইড্রোক্লোরাইড দ্রবণে ইন্টারফেরনের দ্রবীভূতকরণ, ক্যাওট্রপিক এজেন্টের উপস্থিতিতে শারীরবৃত্তীয় বাফার দ্রবণে ইন্টারফেরনের পুনর্নবীকরণ, তারপরে চেলেটিং সেফারেস কিউমোবিলাইজড টাইপ + ইমমোবাইলাইজড টাইপ সহ ইন্টারফেরনের তিন-পর্যায়ের ক্রোমাটোগ্রাফিক পরিশোধন। আয়ন, সিএম সেফারোজ ফাস্ট ফ্লো টাইপ আয়ন এক্সচেঞ্জ রেজিনের উপর আয়ন এক্সচেঞ্জ ক্রোমাটোগ্রাফি এবং সুপারডেক্স 75 এর মতো রেজিনগুলিতে জেল পরিস্রাবণ ক্রোমাটোগ্রাফি।
ইন্টারফেরন উত্পাদনের স্বতন্ত্র পর্যায়গুলি সম্পাদনের জন্য সর্বোত্তম শর্তগুলি নিম্নরূপ:
গাঁজন সম্পূর্ণ প্রক্রিয়া জুড়ে substrates ক্রমাগত যোগ সঙ্গে বাহিত হয়, যা নির্ধারণ করে উচ্চস্তরইন্টারফেরন অভিব্যক্তি;
কোষ ধ্বংস 900 বার চাপে একটি Gaulin ধরনের disintegrator মধ্যে বাহিত হয়;
দ্রবণীয় সেলুলার উপাদান (ডিএনএ, আরএনএ, প্রোটিন, লাইপোপলিস্যাকারাইড ইত্যাদি) অপসারণ করা হয় ইন্টারফেরনের অদ্রবণীয় ফর্মটিকে ডিটারজেন্ট (ট্রাইটন XI00, ইউরিয়া, ইত্যাদি) ধারণকারী বাফার দ্রবণ দিয়ে ধুয়ে ফেলার মাধ্যমে;
ইন্টারফেরন ধারণকারী ফলস্বরূপ অবক্ষেপ 6 এম গুয়ানিডিন হাইড্রোক্লোরাইডের একটি বাফার দ্রবণে দ্রবীভূত হয়;
ইন্টারফেরন পুনর্নবীকরণ একটি শারীরবৃত্তীয় বাফার দ্রবণে চাওট্রপিক এজেন্ট ধারণকারী বাহিত হয়;
ইন্টারফেরনের তিন-পর্যায়ের ক্রোমাটোগ্রাফিক পরিশোধন করা হয় চেলেটিং সেফারোজ ফাস্ট ফ্লোতে, Cu +2 আয়ন দিয়ে স্থির, ক্যাটেশন এক্সচেঞ্জ রেজিনে এসএম সেফারোজ ফাস্ট ফ্লো এবং সুপারডেক্স 75 ধরনের রেজিনে জেল পরিস্রাবণ ক্রোমাটোগ্রাফি;
প্রতিটি ক্রোমাটোগ্রাফিক বিশুদ্ধকরণের পরে, 0.22 মাইক্রন ছিদ্রযুক্ত পাইরোজেন-মুক্ত ফিল্টারের মাধ্যমে নির্বীজন পরিস্রাবণ করা হয়।
বর্ণিত পদ্ধতি ব্যবহারের ফলে ইন্টারফেরনের ফলন প্রতি 1 লিটার সংস্কৃতি মাধ্যমে প্রায় 400-800 মিলিগ্রাম ইন্টারফেরন। ফলস্বরূপ পণ্যের গুণমান আলফা-2বি ইন্টারফেরন পদার্থের জন্য "ইউরোপীয় ফার্মাকোপিয়া" এর মান এবং প্রয়োজনীয়তা মেনে চলে।
প্রস্তাবিত পদ্ধতি এবং প্রোটোটাইপের মধ্যে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য হল:
উচ্চ উত্পাদনশীলতা সহ একটি স্ট্রেন ডিজাইনের ব্যবহার, যা জৈব সংশ্লেষণের সময় 1 লিটার সংস্কৃতি মাধ্যম থেকে একটি বড় পরিমাণ ইন্টারফেরন প্রাপ্ত করা সম্ভব করে তোলে;
সেলুলার বায়োমাসের কার্যকর যান্ত্রিক ধ্বংসের ব্যবহার, যা ইন্টারফেরনের অদ্রবণীয় ফর্মের আরও বিশুদ্ধ নির্যাস পাওয়া সম্ভব করে তোলে। একটি ছোট সময়, কম লোকসান সহ;
ক্যাওট্রপিক এজেন্টগুলির উপস্থিতিতে পুনর্নবীকরণের সময় শারীরবৃত্তীয় বাফার সমাধানগুলির ব্যবহার ইন্টারফেরনের সঠিকভাবে পুনরুদ্ধারকৃত ফর্মের ফলন বৃদ্ধি করা সম্ভব করে তোলে;
ইন্টারফেরনের তিন-পর্যায়ের ক্রোমাটোগ্রাফিক বিশুদ্ধকরণ ইলেক্ট্রোফোরসিস অনুযায়ী 99% এর বেশি বিশুদ্ধতার ইন্টারফেরন পদার্থ প্রাপ্ত করা সম্ভব করে যখন জেলগুলিকে রূপালী দিয়ে দাগ দেওয়া হয় এবং 98% এর বেশি RF HPLC অনুসারে এবং কার্যত পাইরোজেন মুক্ত। (লাল পরীক্ষা)।
দাবিকৃত গোষ্ঠীর উদ্ভাবনের সারমর্ম এবং সুবিধাগুলি নিম্নলিখিত উদাহরণগুলি দ্বারা চিত্রিত করা হয়েছে।
উদাহরণ 1. রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড pSH50 নির্মাণ
pSX50 প্লাজমিড নির্মাণের পদ্ধতিতে নিম্নলিখিত পদক্ষেপগুলি অন্তর্ভুক্ত রয়েছে:
ভেক্টর প্লাজমিড pSX10 নির্মাণ;
1. প্লাজমিড pSX3 নির্মাণ (2641 bp)
2. ভেক্টর প্লাজমিড pSX10 নির্মাণ (2553 bp)
রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড pSX41 নির্মাণ (3218 bp);
রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড pSX43 (3218 bp);
রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড pSX45 (3218 bp) নির্মাণ;
রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড pSX50 (3218 bp) নির্মাণ।
ভেক্টর প্লাজমিড pSX10 নির্মাণ
ভেক্টর প্লাজমিড pSX10 হল একটি pUC19 ভেক্টর যেখানে বিটা ল্যাকটোমেজ জিনের কোডিং সিকোয়েন্স, যা অ্যামপিসিলিনের প্রতিরোধ প্রদান করে, কান জিনের কোডিং সিকোয়েন্স দ্বারা প্রতিস্থাপিত হয় এবং pKK223-3 প্লাজমিড থেকে ট্রান্সক্রিপশন টার্মিনেটর ধারণ করে।
ভেক্টর প্লাজমিড pSS10 নির্মাণ দুটি পর্যায়ে বাহিত হয়:
প্লাজমিড pSX3 (2641 bp) এর প্রস্তুতি, যা প্লাজমিড pUC19, যেখানে amp জিনের কোডিং অঞ্চল কান জিনের কোডিং অঞ্চল দ্বারা প্রতিস্থাপিত হয়;
ভেক্টর প্লাজমিড pSX10 (2553 bp), যা একটি প্লাজমিড pSX3 যার মধ্যে ট্রান্সক্রিপশন টার্মিনেটর rBT 1 T 2 এনকোডিং একটি DNA খণ্ড BamHI সাইটের পিছনে ঢোকানো হয়।
pSX3 প্লাজমিড পেতে ডিএনএ পরিবর্ধনের পাঁচ রাউন্ড সঞ্চালিত হয়। পিসিআর পদ্ধতি(পলিমারেজ চেইন বিক্রিয়া)। প্রথম রাউন্ডে, pUC19 প্লাজমিড ডিএনএকে একটি টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহার করে, 1828 bp আকারের একটি DNA খণ্ডকে প্রশস্ত করা হয়। (টুকরা PU1-PU2) প্রাইমার ব্যবহার করে:
এই এবং পরবর্তী পিসিআর প্রতিক্রিয়া নিম্নলিখিত অবস্থার অধীনে বাহিত হয়: 20 mM Tis-HCl, pH 8.8, 10 mM (NH 4) 2 SO 4, 10 mM KCl, 2 tM MgCl 2, 0.1% Triton X100, 0.1 mg/ml BSA, প্রতিটি dNTP এর 0.2 mM, 1.25 ইউনিট। Pfu DNA পলিমারেজ, 100 ng DNA। পরিবর্ধন প্রক্রিয়া নিম্নলিখিত ধাপগুলি নিয়ে গঠিত: 5 মিনিটের জন্য 95 ডিগ্রি সেলসিয়াসে গরম করা, 35 পিসিআর চক্র (30 সেকেন্ড 95 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেড, 30 সেকেন্ড 56 ডিগ্রি সেলসিয়াস, 2 মিনিট 72 ডিগ্রি সেলসিয়াস) এবং 72 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 10 মিনিটের জন্য ইনকিউবেশন। পরিবর্ধনের পরে (এবং পরবর্তী পরিবর্ধনের পরে), ডিএনএ খণ্ডটি 1% অ্যাগারোজ জেলে ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা বিশুদ্ধ হয়। দ্বিতীয় এবং তৃতীয় রাউন্ডের সময়, একটি টেমপ্লেট হিসাবে pUC4K প্লাজমিড ডিএনএ ব্যবহার করে, একটি 555 bp ডিএনএ খণ্ডকে প্রশস্ত করা হয়। (খণ্ড KM1-KM2) প্রাইমার ব্যবহার করে:
এবং 258 bp একটি DNA খণ্ডের পরিবর্ধন। (KMZ-KM4) প্রাইমার থেকে
PCR-এর পঞ্চম রাউন্ডে, খণ্ডগুলি (PU1-PU2) এবং (KM1-KM4) নিম্নলিখিত শর্তে একত্রিত হয়: 5 মিনিটের জন্য 95°C তাপমাত্রায় গরম করা, 5 PCR চক্র (30 সেকেন্ড 95°C, 30 সেকেন্ড 56°C) , 10 মিনিট 72°C) এবং 72°C এ 10 মিনিটের জন্য ইনকিউবেশন। শেষ পিসিআর-এর পরে প্রাপ্ত ডিএনএ সরাসরি ই. কোলাই স্ট্রেন DH5 কোষে রূপান্তরিত হয় এবং 20 μg/ml কানামাইসিন ধারণকারী LA মিডিয়ামে প্রলেপ দেওয়া হয়। 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 12 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে, ক্লোনগুলি নির্মূল করা হয়, প্লাজমিড ডিএনএ বিচ্ছিন্ন করা হয় এবং সীমাবদ্ধতা বিশ্লেষণ করা হয়। ফলস্বরূপ, 2641 bp আকারের প্লাজমিড pSX3 প্রাপ্ত হয়।
ভেক্টর প্লাজমিড pSX10 পেতে, পিসিআর ব্যবহার করে ডিএনএ পরিবর্ধনের তিনটি রাউন্ড সঞ্চালিত হয়। প্রথম রাউন্ডে, একটি টেমপ্লেট হিসাবে pSX3 প্লাজমিড ডিএনএ ব্যবহার করে, একটি 2025 bp ডিএনএ খণ্ডটি প্রশস্ত করা হয়। (খণ্ড 10.1-10.2) প্রাইমার ব্যবহার করে:
দ্বিতীয় রাউন্ডের সময়, প্লাজমিড pKK223-3-এর ডিএনএকে একটি টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহার করে, 528 bp আকারের একটি DNA খণ্ডকে প্রশস্ত করা হয়। (KK1-KK2 খণ্ড) প্রাইমার ব্যবহার করে:
PCR-এর তৃতীয় রাউন্ডে, খণ্ডগুলি (10.1-10.2) এবং (KK1-KK2) নিম্নলিখিত শর্তে একত্রিত করা হয়: 5 মিনিটের জন্য 95°C তাপমাত্রায় গরম করা, 5 PCR চক্র (30 সেকেন্ড 95°C, 30 সেকেন্ড 56°C) , 10 মিনিট 72°C) এবং 72°C এ 10 মিনিটের জন্য ইনকিউবেশন। শেষ পিসিআর-এর পরে প্রাপ্ত ডিএনএ সরাসরি ই. কোলাই স্ট্রেন DH5 কোষে রূপান্তরিত হয় এবং 20 μg/ml কানামাইসিন ধারণকারী LA মিডিয়ামে প্রলেপ দেওয়া হয়। 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 12 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে, ক্লোনগুলি নির্মূল করা হয়, প্লাজমিড ডিএনএ বিচ্ছিন্ন করা হয় এবং সীমাবদ্ধতা বিশ্লেষণ করা হয়। ফলস্বরূপ, 2553 bp আকারের প্লাজমিড pSX10 প্রাপ্ত হয়।
রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড pSX41 নির্মাণ
রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড pSX41 হল একটি হিন্দ III - BamHI DNA ভেক্টর প্লাজমিড pSX3 (2529 bp), Hind III - 168 bp এর EcoRI DNA খণ্ড, E. coli tryptophan operon (P trp), EcoRI-XbaI-এর প্রবর্তক এনকোডিং 20 bp-এর DNA খণ্ড যা SD সিকোয়েন্স (Shine-Delgarno) এনকোড করছে এবং 501 bp-এর একটি XbaI-BamHI DNA খণ্ড মানব ইন্টারফেরন আলফা 2b জিনকে এনকোড করছে।
হিন্দ III পাওয়ার জন্য - ভেক্টর প্লাজমিড pSX3 (2529 bp) এর BamHI DNA খণ্ড, প্লাজমিড pSX3-এর DNA কে সীমাবদ্ধ এনজাইম HindIII এবং BamHI দিয়ে চিকিত্সা করা হয়, তারপরে 1% অ্যাগারোজ জেলে ইলেক্ট্রোফোরেটিক পরিশোধন করা হয়। Hind III ইকোআরআই ডিএনএ ফ্র্যাগমেন্ট 168 bp ট্রিপটোফ্যান অপারন (P trp) এর প্রবর্তককে এনকোডিং করে PCR দ্বারা মোট E. coli DNA ব্যবহার করে একটি টেমপ্লেট এবং প্রাইমার TRP1 এবং PRP2 ব্যবহার করে, তারপরে Hindll এবং EcoRI সীমাবদ্ধতার সাথে পরিবর্ধিত খণ্ডের চিকিত্সা করা হয়। এনজাইম:
EcoRI-Xbal 20 bp এর একটি সিন্থেটিক ডিএনএ খণ্ড পেতে SD সিকোয়েন্স (Shine-Delgarno) এনকোডিং করে, নিম্নলিখিত পরিপূরক অলিগোনিউক্লিওটাইডগুলি সংশ্লেষিত হয়:
501 bp আকারের XbaI-BamIII ডিএনএ খণ্ডটি, মানব আলফা 2b ইন্টারফেরন জিনকে এনকোড করে, পিসিআর দ্বারা টেমপ্লেট হিসাবে মোট মানব ডিএনএ এবং প্রাইমার IFN1 এবং IFN2 ব্যবহার করে প্রাপ্ত করা হয়, তারপরে Xbal এবং BamIII সীমাবদ্ধতা এনজাইমগুলির সাথে পরিবর্ধিত টুকরো প্রক্রিয়াকরণ করা হয়:
এরপরে, ইলেক্ট্রোফোরেটিক্যালি বিশুদ্ধ টুকরোগুলিকে একত্রিত করা হয়, T4 ফেজ লিগেজ এনজাইমের সাথে বন্ধন করা হয়, ডিএনএ E. কোলি DH5 স্ট্রেনের কোষে রূপান্তরিত হয় এবং 20 μg/ml কানামাইসিন ধারণকারী LA মিডিয়ামে প্রলেপ দেওয়া হয়। 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 12 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে, ক্লোনগুলি নির্মূল করা হয়, প্লাজমিড ডিএনএ বিচ্ছিন্ন করা হয়, সীমাবদ্ধতা বিশ্লেষণ করা হয় এবং প্রাথমিক ডিএনএ গঠন নির্ধারণ করা হয়। ফলস্বরূপ, 3218 bp আকারের প্লাজমিড pSX41 প্রাপ্ত হয়। এরপরে, টার্গেট পণ্যের প্রকাশের মাত্রা বাড়ানোর জন্য ইন্টারফেরন জিনের ধাপে ধাপে মিউটেজেনেসিস করা হয়। ইন্টারফেরন জিনের মিউটাজেনেসিস ট্রিপলেটগুলিকে প্রতিস্থাপন করে যা ই. কোলাইতে খুব কমই পাওয়া যায়, সংশ্লিষ্ট অ্যামিনো অ্যাসিডগুলিকে এনকোডিং করে, ট্রিপলেটগুলি যা প্রায়শই ই. কোলাইতে পাওয়া যায়, একই অ্যামিনো অ্যাসিডগুলিকে এনকোড করে৷ ইন্টারফেরন জিনের ডিএনএ মিউটাজেনেসিস পিসিআর পদ্ধতি ব্যবহার করে সঞ্চালিত হয়।
রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড pSX43 নির্মাণ
রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড pSX43 পাওয়ার জন্য, PCR দ্বারা প্লাজমিড pSX41-এর DNA ব্যবহার করে টেমপ্লেট এবং প্রাইমার IFN3 এবং IFN4 ব্যবহার করে এক রাউন্ড ডিএনএ পরিবর্ধন করা হয়:
পিসিআর নিম্নলিখিত অবস্থার অধীনে পরিচালিত হয়: 5 মিনিটের জন্য 95 ডিগ্রি সেলসিয়াসে গরম করা, 20টি পিসিআর চক্র (30 সেকেন্ড 95 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেড, 30 সেকেন্ড 56 ডিগ্রি সেলসিয়াস, 10 মিনিট 72 ডিগ্রি সেলসিয়াস) এবং 20 মিনিটের জন্য 72 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ইনকিউবেশন। PCR এর পরে প্রাপ্ত DNA সরাসরি E. coli স্ট্রেন DH5 এর কোষে রূপান্তরিত হয় এবং 20 μg/ml কানামাইসিন ধারণকারী LA মিডিয়ামে প্রলেপ দেওয়া হয়। 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 12 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে, ক্লোনগুলি নির্মূল করা হয়, প্লাজমিড ডিএনএ বিচ্ছিন্ন করা হয়, সীমাবদ্ধতা বিশ্লেষণ করা হয় এবং প্রাথমিক ডিএনএ গঠন নির্ধারণ করা হয়। ফলস্বরূপ, 3218 bp আকারের প্লাজমিড pSX43 প্রাপ্ত হয়।
রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড pSX45 নির্মাণ
রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড pSX45 প্রাপ্ত করার জন্য, PCR দ্বারা প্লাজমিড pSX43-এর DNA টেমপ্লেট এবং প্রাইমার IFN5 এবং IFN6 ব্যবহার করে এক রাউন্ড ডিএনএ পরিবর্ধন করা হয়:
পিসিআর নিম্নলিখিত অবস্থার অধীনে পরিচালিত হয়: 5 মিনিটের জন্য 95 ডিগ্রি সেলসিয়াসে গরম করা, 20টি পিসিআর চক্র (30 সেকেন্ড 95 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেড, 30 সেকেন্ড 56 ডিগ্রি সেলসিয়াস, 10 মিনিট 72 ডিগ্রি সেলসিয়াস) এবং 20 মিনিটের জন্য 72 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ইনকিউবেশন। PCR এর পরে প্রাপ্ত DNA সরাসরি E. coli স্ট্রেন DH5 এর কোষে রূপান্তরিত হয় এবং 20 μg/ml কানামাইসিন ধারণকারী LA মিডিয়ামে প্রলেপ দেওয়া হয়। 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 12 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে, ক্লোনগুলি নির্মূল করা হয়, প্লাজমিড ডিএনএ বিচ্ছিন্ন করা হয়, সীমাবদ্ধতা বিশ্লেষণ করা হয় এবং প্রাথমিক ডিএনএ গঠন নির্ধারণ করা হয়। ফলস্বরূপ, 3218 bp আকারের প্লাজমিড pSX45 প্রাপ্ত হয়।
রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড pSX50 নির্মাণ।
রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড pSX50 পাওয়ার জন্য, PCR দ্বারা প্লাজমিড pSX45-এর DNA ব্যবহার করে টেমপ্লেট এবং প্রাইমার IFN7 এবং IFN8 ব্যবহার করে এক রাউন্ড ডিএনএ পরিবর্ধন করা হয়:
পিসিআর নিম্নলিখিত অবস্থার অধীনে পরিচালিত হয়: 5 মিনিটের জন্য 95 ডিগ্রি সেলসিয়াসে গরম করা, 20টি পিসিআর চক্র (30 সেকেন্ড 95 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেড, 30 সেকেন্ড 56 ডিগ্রি সেলসিয়াস, 10 মিনিট 72 ডিগ্রি সেলসিয়াস) এবং 20 মিনিটের জন্য 72 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ইনকিউবেশন। PCR এর পরে প্রাপ্ত DNA সরাসরি E. coli স্ট্রেন DH5 এর কোষে রূপান্তরিত হয় এবং 20 μg/ml কানামাইসিন ধারণকারী LA মিডিয়ামে প্রলেপ দেওয়া হয়। 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 12 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে, ক্লোনগুলি নির্মূল করা হয়, প্লাজমিড ডিএনএ বিচ্ছিন্ন করা হয়, সীমাবদ্ধতা বিশ্লেষণ করা হয় এবং প্রাথমিক ডিএনএ গঠন নির্ধারণ করা হয়। ফলস্বরূপ, 3218 bp আকারের প্লাজমিড pSX50 প্রাপ্ত হয়।
উদাহরণ 2. E. coli SX50 স্ট্রেনের প্রস্তুতি - ইন্টারফেরন উৎপাদক
ইন্টারফেরন-উৎপাদনকারী স্ট্রেন E. coli SX50 প্রাপ্ত হয় E. coli স্ট্রেন BL21-এর কোষকে রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড pSX50 এর সাথে রূপান্তর করে। ইন্টারফেরন উৎপাদনকারী স্ট্রেন একটি 30 লিটার ফার্মেন্টারে 25.0-30.0 p.u এর অপটিক্যাল ঘনত্বে জন্মায়। M9 মিডিয়ামে 1% কেসিন অ্যাসিড হাইড্রোলাইজেট (ডিফকো), 1% গ্লুকোজ, 40 μg/ml কানামাইসিন, 38-39°C তাপমাত্রায়। গাঁজন প্রক্রিয়া চলাকালীন, একটি গ্র্যাভিমেট্রিক নিয়ামক ব্যবহার করে পুষ্টির স্তরের একটি অবিচ্ছিন্ন সংযোজন করা হয়।
উদাহরণ 3. ই. কোলাই স্ট্রেন SX50 থেকে ইন্টারফেরন বিচ্ছিন্ন করার পদ্ধতি
ইন্টারফেরন 4টি পর্যায়ে প্রাপ্ত হয়েছিল:
ধাপ 1. ই. কোলাই স্ট্রেন SX50 চাষ।
ধাপ ২. ইন্টারফেরনের অদ্রবণীয় ফর্মের বিচ্ছিন্নতা এবং পরিশোধন।
পর্যায় 3. ইন্টারফেরনের দ্রবীভূতকরণ এবং পুনর্গঠন।
পর্যায় 4। ইন্টারফেরনের ক্রোমাটোগ্রাফিক পরিশোধন।
ধাপ 1. ই. কোলাই স্ট্রেন SX50 চাষ
26°C তাপমাত্রায় 12 ঘন্টার জন্য 3 লিটার সমৃদ্ধ LB মাধ্যমের আয়তনে E. coli স্ট্রেন SX50-এর গ্রোইন ইনোকুলামকে 27 লিটার জীবাণুমুক্ত মাধ্যম সম্বলিত একটি ফার্মেন্টারে প্রবেশ করানো হয় যাতে M9, 1% কেসিন অ্যাসিড হাইড্রোলাইজেট, 1% গ্লুকোজ, 1 mM MgCl 2, 0.1 mM CaCl 2, 40 mg/ml কানামাইসিন। 40% সোডিয়াম হাইড্রোক্সাইড দ্রবণ সহ স্বয়ংক্রিয় টাইট্রেশনের মাধ্যমে 7±0.15 এর pH বজায় রেখে 38-39°C তাপমাত্রায় ফার্মেন্টারে চাষ করা হয়। দ্রবীভূত অক্সিজেনের ঘনত্ব (50±10)% সম্পৃক্ততার পরিসরে 100 থেকে 800 rpm এবং বায়ু সরবরাহ 1 থেকে 15 লি/মিনিট পর্যন্ত পরিবর্তন করে রক্ষণাবেক্ষণ করা হয়। সাবস্ট্রেটের ঘনত্ব, বিশেষ করে গ্লুকোজ এবং ইস্টের নির্যাস, গাঁজন করার সময় পরিমাপ করা হয় এবং একটি গ্র্যাভিমেট্রিক কন্ট্রোলার ব্যবহার করে পেরিস্টালটিক পাম্পের মাধ্যমে ঘনীভূত দ্রবণ সরবরাহের হার পরিবর্তন করে তাদের ঘনত্ব বজায় রাখা হয়।
অদ্রবণীয় আকারে ইন্টারফেরনের জমে ফেজ কন্ট্রাস্ট মাইক্রোস্কোপি, 15% পলিঅ্যাক্রিলামাইড জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস (SDS-PAAG) এবং রিভার্স ফেজ হাই পারফরম্যান্স ক্রোমাটোগ্রাফি (RF HPLC) ব্যবহার করে পর্যবেক্ষণ করা হয়। সর্বাধিক আলোকীয় ঘনত্ব (~ 25-30 p.u.) এ পৌঁছালে এবং ইন্টারফেরন সংশ্লেষণ বন্ধ হয়ে গেলে গাঁজন বন্ধ হয়ে যায়। গাঁজন শেষে, সাংস্কৃতিক তরলটি 5000-10000 rpm এর ঘূর্ণন গতিতে একটি ফ্লো রটারে সেন্ট্রিফিউগেশন দ্বারা পৃথক করা হয়। বায়োমাস প্যাকেজ করা হয় প্লাস্টিকের ব্যাগএবং মাইনাস 70 ডিগ্রি সেলসিয়াসে হিমায়িত।
ধাপ ২. ইন্টারফেরনের অদ্রবণীয় ফর্মের বিচ্ছিন্নতা এবং পরিশোধন
E. coli স্ট্রেন SX50 এর 3000 মিলি বাফার 1 (20 মিমি ট্রিস-এইচসিএল, পিএইচ 8.0, 10 মিমি ইডিটিএ, 0.1% ট্রাইটন এক্স100) এর হিমায়িত বায়োমাস 300-400 গ্রাম স্থগিত করা হয়। সাসপেনশন একটি Gaulin-টাইপ ফ্লো হোমোজেনাইজারের মাধ্যমে পাস করা হয়, 900 বারের চাপে রক্ষণাবেক্ষণ করা হয় এবং 15,000 rpm এ একটি ফ্লো রটারে সেন্ট্রিফিউজ করা হয়। ফলস্বরূপ অবক্ষেপণটি অনুরূপ অবস্থায় পর্যায়ক্রমে বাফার 2 (20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 mM EDTA, 3 M ইউরিয়া) এবং বাফার 3 (20 mM Tris-HCl pH 8.0, 1 mM EDTA) দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয় এবং অবশেষে ইন্টারফেরন। বাফার 3 এর 200 মিলিলিটারে অবক্ষেপণ স্থগিত করা হয়। এই ক্ষেত্রে, ইন্টারফেরনের অদ্রবণীয় ফর্মের বিচ্ছিন্নতা এবং পরিশোধনের সময় 5 ঘন্টার বেশি নয়।
পর্যায় 3. ইন্টারফেরনের দ্রবীভূতকরণ এবং পুনর্গঠন
পূর্ববর্তী পর্যায়ে প্রাপ্ত ইন্টারফেরনের অদ্রবণীয় ফর্মের সাসপেনশনের জন্য, 6 এম ঘনত্বে শুষ্ক গুয়ানিডিন হাইড্রোক্লোরাইড যোগ করুন, 50 মিমি ঘনত্বে ডিথিওথ্রিটল যোগ করুন, 50 মিমি ঘনত্বে ট্রিস-এইচসিএল পিএইচ 8.0, 50 এমএম ঘনত্বে ট্রিস-এইচসিএল পিএইচ 8.0 যোগ করুন। 150 মিমি এবং ট্রাইটন X100 এর ঘনত্ব 0.1% এর ঘনত্ব, ঘরের তাপমাত্রায় 2 ঘন্টা সেঁকুন। 0.22 মাইক্রনের ছিদ্র ব্যাস সহ ঝিল্লির মাধ্যমে নির্বীজন পরিস্রাবণ দ্বারা দ্রবীভূত উপাদান পৃথক করা হয়।
বাফার 4 (20 mM Tris-HCl pH 8.0, 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA) দিয়ে 100-200 বার ফলের দ্রবণকে ধীরে ধীরে পাতলা করে ইন্টারফেরনের পুনর্গঠন করা হয়। তারপরে পুনর্নবীকরণ মিশ্রণটি 4-8 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় 12-15 ঘন্টা ধরে অবিরাম নাড়তে থাকে। তারপর ম্যাগনেসিয়াম সালফেট 1 মিমি ঘনত্বে যোগ করা হয় এবং 0.22 মাইক্রন ব্যাসের ছিদ্রযুক্ত একটি ঝিল্লি ফিল্টারের মাধ্যমে জীবাণুমুক্ত পরিস্রাবণের মাধ্যমে একত্রিত উপাদান অপসারণ করা হয়।
পর্যায় 4। ইন্টারফেরনের ক্রোমাটোগ্রাফিক পরিশোধন
ইন্টারফেরনের ক্রোমাটোগ্রাফিক পরিশোধন তিনটি পর্যায়ে সঞ্চালিত হয়।
1. ফলস্বরূপ পুনরুদ্ধার করা ইন্টারফেরন প্রথমে কিউ +2 আয়নগুলির সাথে স্থির একটি চেলেটিং সেফারোজ ফাস্ট ফ্লো রেজিন (আমেরশাম বায়োসায়েন্সেস) এর অ্যাফিনিটি ক্রোমাটোগ্রাফি ব্যবহার করে বিশুদ্ধ করা হয়। এটি করার জন্য, ইন্টারফেরন দ্রবণটি Cu +2 চেলেটিং সেফারোজ ফাস্ট ফ্লো সহ একটি কলামে প্রয়োগ করা হয় এবং ইন্টারফেরন 0.1 M বাফার দিয়ে বিলুপ্ত করা হয়। সাইট্রিক অ্যাসিড pH 2.2।
2. ক্রোমাটোগ্রাফিক বিশুদ্ধকরণের দ্বিতীয় পর্যায়ে, ইন্টারফেরন দ্রবণটি একটি সিএম সেফারোজ ফাস্ট ফ্লো টাইপের ক্যাটেশন এক্সচেঞ্জ রেজিনে (আমেরশাম বায়োসায়েন্সেস) প্রয়োগ করা হয় এবং ইন্টারফেরনকে 50 মিলিমিটারে দ্রবণের গ্রেডিয়েন্ট (0.0-0.5 M NaCl) দিয়ে নির্গত করা হয়। Na(CH 3 COO) বাফার, pH 5.5।
3. ইন্টারফেরনের পলিমেরিক ফর্মের অবশিষ্টাংশ থেকে ইন্টারফেরনের মনোমেরিক ফর্মের পরিশোধন সুপারডেক্স 75 রেজিনে (আমেরশাম বায়োসায়েন্সেস) জেল পরিস্রাবণের মাধ্যমে ইন্টারফেরন পরিশোধনের তৃতীয় পর্যায়ে বাহিত হয়। ক্রোমাটোগ্রাফি 50 মিমি Na(CH 3 COO), pH 5.0 এর একটি বাফারে করা হয়, যার মধ্যে 0.15 M NaCl রয়েছে।
ইন্টারফেরনকে বিচ্ছিন্ন এবং বিশুদ্ধ করার জন্য বর্ণিত পদ্ধতিটি 10 লিটার কালচার মিডিয়াম থেকে প্রাপ্ত জৈববস্তু থেকে 7-10 দিনের মধ্যে একটি বিচ্ছিন্নতা চক্রে 4-8 গ্রাম উচ্চ পরিশোধিত ইন্টারফেরন প্রাপ্ত করা সম্ভব করে। ফলস্বরূপ ইন্টারফেরনের গুণমান ইন্টারফেরন আলফা-2বি পদার্থের জন্য "ইউরোপীয় ফার্মাকোপিয়া" এর প্রয়োজনীয়তাগুলিকে সম্পূর্ণরূপে মেনে চলে, যথা:
ইন্টারফেরনের ঘনত্ব 2×10 8 IU/ml এর কম নয়;
ইন্টারফেরনের নির্দিষ্ট কার্যকলাপ 2.0×10 8 IU/mg এর কম নয়;
ওষুধের ইলেক্ট্রোফোরেটিক বিশুদ্ধতা কমপক্ষে 99% হ্রাসকারী এবং অ-হ্রাসকারী অবস্থার অধীনে যখন সিলভার দিয়ে জেলগুলিকে দাগ দেওয়া হয়;
বিচ্ছিন্ন ইন্টারফেরনের আইসোইলেক্ট্রিক পয়েন্টটি পিএইচ 5.8-6.3 অঞ্চলে রয়েছে;
বিচ্ছিন্ন ইন্টারফেরনের পেপটাইড মানচিত্র ইউরোপীয় স্ট্যান্ডার্ড ইন্টারফেরন আলফা 2b CRS-এর পেপটাইড মানচিত্র থেকে মৌলিকভাবে আলাদা নয়;
প্রদত্ত উদাহরণগুলি থেকে অনুসরণ করা হয়েছে, দাবিকৃত গোষ্ঠীর আবিষ্কারগুলি তুলনামূলকভাবে সহজ এবং নির্ভরযোগ্য প্রযুক্তি ব্যবহার করে উচ্চ ফলন সহ ইন্টারফেরন আলফা-2b প্রাপ্ত করা সম্ভব করে তোলে।
দাবি
1. রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড ডিএনএ pSX50, রিকম্বিন্যান্ট হিউম্যান আলফা-2b ইন্টারফেরনের সংশ্লেষণকে এনকোডিং করে, এর বৈশিষ্ট্য হল যে এটির আকার 3218 বেস পেয়ার (bp) এবং নিম্নলিখিত খণ্ডগুলি নিয়ে গঠিত: 1 থেকে 176 নিউক্লিওটাইড (bp) এর ক্রম অন্তর্ভুক্ত ট্রাইপটোফ্যান প্রমোটার (P trp), 177 থেকে 194 nt পর্যন্ত ক্রম ধারণকারী 176 bp-এর একটি খণ্ড ডিএনএ। শাইন ডেলগার্নো সিকোয়েন্স ধারণ করে 18 bp আকারের একটি সিন্থেটিক ডিএনএ খণ্ড অন্তর্ভুক্ত, যা অনুবাদ শুরু করার জন্য দায়ী, 195 থেকে 695 nt পর্যন্ত ক্রম। নিউক্লিওটাইড প্রতিস্থাপন সহ ইন্টারফেরন আলফা-2b জিন ধারণকারী 501 bp-এর একটি DNA খণ্ড অন্তর্ভুক্ত: 37 (A>C), 39 (G>T), 40 (A>C), 42 (G>T), 67 (A> C), 69 (G>T), 70 (A>C), 72 (A>T), 96 (G>A), 100 (A>C), 102 (A>T), 114 (A>С) , 120 (C>G), 126 (G>A), 129 (G>A), 330 (C>G), 339 (G>A), 342 (G>A), 487 (A> C) , 489 (A>T), 495 (G>A), 696 থেকে 713 nt পর্যন্ত ক্রম। 18 bp এর একটি সিন্থেটিক ডিএনএ ফ্র্যাগমেন্ট রয়েছে যার মধ্যে একটি সিন্থেটিক পলিলিংকার রয়েছে, 714 থেকে 1138 nt পর্যন্ত ক্রম। 4129 থেকে 4553 nt পর্যন্ত প্লাজমিড pKK223-3 এর একটি DNA খণ্ড অন্তর্ভুক্ত। 425 bp আকারে, কঠোর ট্রান্সক্রিপশন টার্মিনেটর rrnBT 1 T 2 এর ক্রম ধারণ করে, 1139 থেকে 1229 nt পর্যন্ত ক্রম। 2487 থেকে 2577 nt পর্যন্ত প্লাজমিড pUC19 এর একটি DNA খণ্ড অন্তর্ভুক্ত। 91 bp আকারে, -ল্যাক্টোমেজ জিনের প্রবর্তক (অ্যাম্পিসিলিন রেজিস্ট্যান্স জিন -Amp R), 1230 থেকে 2045 nt পর্যন্ত ক্রম। 720 nt সহ pUC4K প্লাজমিডের একটি DNA খণ্ড অন্তর্ভুক্ত। থেকে 1535 খ্রি 816 bp আকারে, কান জিনের কাঠামোগত অঞ্চল ধারণ করে, 2046 bp সহ ক্রম। থেকে 3218 n. 1625 থেকে 453 nt পর্যন্ত প্লাজমিড pUC19 এর একটি DNA খণ্ড অন্তর্ভুক্ত। 1173 bp আকারে, প্লাজমিড রেপ্লিকেশন (ori) এবং লাখ প্রবর্তক (P lac) এর জন্য দায়ী ক্রম ধারণকারী।
2. দাবি 1 অনুসারে রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিডের সাথে রূপান্তরিত ব্যাকটেরিয়া স্ট্রেন Eschcerichia coli SX50 হল রিকম্বিন্যান্ট হিউম্যান লিউকোসাইট ইন্টারফেরন আলফা-2b এর উৎপাদক।
3. জৈবসংশ্লেষণ প্রক্রিয়া চলাকালীন পুষ্টির স্তরগুলির অবিচ্ছিন্ন যোগ সহ একটি পুষ্টির মাধ্যমে দাবি 2 অনুসারে এসচেরিচিয়া কোলাই এসএক্স5 স্ট্রেন চাষ সহ মানব ইন্টারফেরন আলফা-2বি উত্পাদন করার একটি পদ্ধতি, 700-এর চাপে অণুজীব কোষগুলির যান্ত্রিক ধ্বংস। 900 বার, গুয়ানিডিন হাইড্রোক্লোরাইডের একটি বাফার দ্রবণে ইন্টারফেরন দ্রবীভূত করা, ক্যাওট্রপিক এজেন্টের উপস্থিতিতে শারীরবৃত্তীয় বাফার দ্রবণে ইন্টারফেরনের পুনর্বিন্যাস, চেলেটিং সেফারোজ ফাস্ট ফ্লো টাইপ রেজিন + কিউট্রপিক এক্সচেঞ্জের সাথে ইন্টারফেরনের তিন-পর্যায়ের ক্রোমাটোগ্রাফিক পরিশোধন, CM Sepharose ফাস্ট ফ্লো টাইপ আয়ন এক্সচেঞ্জ রেজিনে ক্রোমাটোগ্রাফি এবং Superdex 75 টাইপ রেজিনে জেল পরিস্রাবণ ক্রোমাটোগ্রাফি।
4. দাবি 3 অনুসারে পদ্ধতি, যাতে একটি পুষ্টির মাধ্যমে চাষ করা হয় যাতে ট্রিপটোফ্যানের পরিমাণ হ্রাস করা হয় এবং পুষ্টির স্তরগুলি, বিশেষত গ্লুকোজ এবং খামিরের নির্যাস ক্রমাগত যোগ করা হয়।
5. দাবি 3 অনুসারে পদ্ধতি, যাতে ইন্টারফেরন দ্রবীভূত করার আগে, ডিএনএ, আরএনএ, প্রোটিন, লাইপোপলিস্যাকারাইড সহ দ্রবণীয় সেলুলার উপাদানগুলি অপসারণ করে, ট্রাইটন XI 00, ইউরিয়ার মতো ডিটারজেন্টযুক্ত বাফার দ্রবণ দিয়ে ধুয়ে বিশুদ্ধ করা হয়।
6. দাবি 3 অনুসারে পদ্ধতি, যেখানে প্রতিটি ক্রোমাটোগ্রাফিক পরিশোধনের পরে, 0.22 মাইক্রনের ছিদ্রযুক্ত ফিল্টারগুলির মাধ্যমে নির্বীজন পরিস্রাবণ করা হয়।
সঙ্গে পরিচালিত ক্লিনিকাল গবেষণায় প্রশস্ত পরিসরইঙ্গিত এবং ডোজগুলির বিস্তৃত পরিসরের সাথে (প্রতি সপ্তাহে 6 মিলিয়ন IU/m2 থেকে - লোমশ কোষের লিউকেমিয়ার জন্য; প্রতি সপ্তাহে 100 মিলিয়ন IU/m2 পর্যন্ত - মেলানোমার জন্য), সবচেয়ে সাধারণ প্রতিকূল ঘটনাগুলি ছিল জ্বর, ক্লান্তি, মাথাব্যথা, মায়ালজিয়া। ওষুধটি বন্ধ করার 72 ঘন্টা পরে জ্বর এবং ক্লান্তি দূর হয়। যদিও জ্বর ইনফ্লুয়েঞ্জা-সদৃশ সিন্ড্রোমের একটি উপসর্গ হতে পারে যা প্রায়শই ইন্টারফেরন চিকিত্সার সম্মুখীন হয়, অন্যদের বাদ দেওয়ার জন্য মূল্যায়ন করা উচিত। সম্ভাব্য কারণঅবিরাম জ্বর।
নিম্নলিখিত নিরাপত্তা প্রোফাইল 4 থেকে প্রাপ্ত করা হয়েছে ক্লিনিকাল ট্রায়ালদীর্ঘস্থায়ী হেপাটাইটিস সি-এর রোগীদের মধ্যে যারা ইন্ট্রন এ একত্রে বা 1 বছরের জন্য রিবাভাইরিনের সংমিশ্রণে পেয়েছেন। সমস্ত রোগী সপ্তাহে 3 বার Intron A এর 3 মিলিয়ন IU পেয়েছে।
সারণী 2 1 বছরের জন্য পূর্বে চিকিত্সা না করা রোগীদের মধ্যে 10% এর বেশি বা সমান ফ্রিকোয়েন্সিতে ঘটে যাওয়া প্রতিকূল ঘটনাগুলি দেখায় যা 1 বছর ধরে ইন্ট্রন এ (বা রিবাভিরিনের সংমিশ্রণে ইন্ট্রন এ) গ্রহণ করে। সাধারণভাবে, পরিলক্ষিত প্রতিকূল ঘটনাগুলি হালকা বা মাঝারি ছিল।
টেবিল ২.
| প্রতিকূল ঘটনা | ইন্ট্রোন A (n=806) | ইন্ট্রন এ + রিবাভিরিন (n=1010) |
| স্থানীয় প্রতিক্রিয়া | ||
| প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়াইনজেকশন সাইটে | 9–16% | 6–17% |
| অন্যান্য ইনজেকশন সাইট প্রতিক্রিয়া | 5–8% | 3–36% |
| সাধারণ প্রতিক্রিয়া | ||
| মাথাব্যথা | 51–64% | 48–64% |
| ক্লান্তি | 42–79% | 43–68% |
| ঠাণ্ডা | 15–39% | 19–41% |
| জ্বর | 29–39% | 29–41% |
| ফ্লু-জাতীয় সিন্ড্রোম | 19–37% | 18–29% |
| অ্যাসথেনিয়া | 9–30% | 9–30% |
| ওজন কমানো | 6–11% | 9–19% |
| গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল ট্র্যাক্ট থেকে প্রতিক্রিয়া | ||
| বমি বমি ভাব | 18–31% | 25–44% |
| অ্যানোরেক্সিয়া | 14–19% | 19–26% |
| ডায়রিয়া | 12–22% | 13–18% |
| পেট ব্যথা | 9–17% | 9–14% |
| বমি | 3–10% | 6–10% |
| Musculoskeletal সিস্টেম থেকে প্রতিক্রিয়া | ||
| মায়ালজিয়া | 41–61% | 30–62% |
| আর্থ্রালজিয়া | 25–31% | 21–29% |
| হাড় এবং পেশীতে ব্যথা | 15–20% | 11–20% |
| কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্র থেকে প্রতিক্রিয়া | ||
| বিষণ্ণতা | 16–36% | 25–34% |
| বিরক্তি | 13–27% | 18–34% |
| অনিদ্রা | 21–28% | 33–41% |
| দুশ্চিন্তা | 8–12% | 8–16% |
| প্রতিবন্ধী মনোনিবেশ করার ক্ষমতা | 8–14% | 9–21% |
| মানসিক শ্রম | 8–14% | 5–11% |
| ত্বকের প্রতিক্রিয়া | ||
| অ্যালোপেসিয়া | 22–31% | 26–32% |
| চুলকানি | 6–9% | 18–37% |
| শুষ্ক ত্বক | 5–8% | 5–7% |
| ফুসকুড়ি | 10–21% | 15–24% |
| বাইরে থেকে প্রতিক্রিয়া শ্বসনতন্ত্র | ||
| ফ্যারিঞ্জাইটিস | 3–7% | 7–13% |
| কাশি | 3–7% | 8–11% |
| শ্বাসকষ্ট | 2–9% | 10–22% |
| অন্যান্য | ||
| মাথা ঘোরা | 8–18% | 10–22% |
| ভাইরাস ঘটিত সংক্রমণ | 0–7% | 3–10% |
সঙ্গে রোগীদের মধ্যে প্রতিকূল ঘটনা পরিলক্ষিত যকৃতের বিষাক্ত প্রদাহসি, বিকাশের ফ্রিকোয়েন্সি কিছু ডোজ-নির্ভর বৃদ্ধি সহ অন্যান্য ইঙ্গিতগুলির জন্য ইন্ট্রন এ ব্যবহার করার সময় যেগুলি লক্ষ করা হয়েছিল তার সাথে মিলে যায়।
অন্যান্য ইঙ্গিতগুলির জন্য ইন্ট্রন এ ব্যবহার করার সময় (ক্লিনিকাল এবং নন-ক্লিনিকাল গবেষণায়) খুব কমই (|1/10000,< 1/1000) или очень редко (.
পুরো শরীর থেকে।খুব কমই - মুখ ফুলে যাওয়া।
অ্যাস্থেনিক অবস্থা (অ্যাস্থেনিয়া, অস্থিরতা এবং ক্লান্তি), ডিহাইড্রেশন, ধড়ফড়, সোরিয়াসিস, ছত্রাক সংক্রমণ এবং ব্যাকটেরিয়া সংক্রমণ(সেপসিস সহ)।
ইমিউন সিস্টেম থেকে।খুব কমই - সারকোয়েডোসিস বা এর তীব্রতা।
ইডিওপ্যাথিক বা থ্রম্বোটিক থ্রম্বোসাইটোপেনিক পুরপুরা, রিউমাটয়েড আর্থ্রাইটিস, সিস্টেমিক লুপাস এরিথেমাটোসাস, ভাস্কুলাইটিস এবং ভোগ-কয়নাগি-হারাডা সিন্ড্রোম সহ আলফা ইন্টারফেরন ব্যবহারের সাথে বিভিন্ন অটোইমিউন এবং ইমিউন সিস্টেম-মধ্যস্থতাজনিত ব্যাধিগুলি রিপোর্ট করা হয়েছে।
মামলা রিপোর্ট করা হয়েছে তীব্র প্রতিক্রিয়াছত্রাক, এনজিওডিমা এবং অ্যানাফিল্যাক্সিস সহ অতি সংবেদনশীলতা।
বাইরে থেকে কার্ডিও-ভাস্কুলার সিস্টেমের: কদাচিৎ - অ্যারিথমিয়া (সাধারণত কার্ডিওভাসকুলার সিস্টেমের পূর্ববর্তী রোগের ইতিহাস বা পূর্ববর্তী কার্ডিওটক্সিক থেরাপি সহ রোগীদের মধ্যে ঘটে), ক্ষণস্থায়ী বিপরীতমুখী কার্ডিওমায়োপ্যাথি (কার্ডিওভাসকুলার সিস্টেমের বোঝা ইতিহাস ছাড়া রোগীদের মধ্যে উল্লেখ করা হয়); খুব কমই - ধমনী হাইপোটেনশন, মায়োকার্ডিয়াল ইস্কেমিয়া এবং মায়োকার্ডিয়াল ইনফার্কশন।
কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্র এবং পেরিফেরাল থেকে স্নায়ুতন্ত্র. কদাচিৎ - আত্মহত্যার প্রবণতা; খুবই কদাচিৎ - আক্রমণাত্মক আচরণ, অন্যান্য ব্যক্তিদের দিকে পরিচালিত সহ, আত্মহত্যার প্রচেষ্টা, আত্মহত্যা, সাইকোসিস (হ্যালুসিনেশন সহ), প্রতিবন্ধী চেতনা, নিউরোপ্যাথি, পলিনিউরোপ্যাথি, এনসেফালোপ্যাথি, সেরিব্রোভাসকুলার ইস্কেমিয়া, সেরিব্রোভাসকুলার হেমোরেজ, পেরিফেরাল নিউরোপ্যাথি, খিঁচুনি।
শ্রবণ অঙ্গের দিক থেকে।খুব কমই - শ্রবণশক্তি হ্রাস।
এন্ডোক্রাইন সিস্টেম থেকে।খুব কমই - ডায়াবেটিস মেলিটাস, বিদ্যমান অবস্থার অবনতি ডায়াবেটিস মেলিটাস.
গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল ট্র্যাক্ট থেকে।খুব কমই - প্যানক্রিয়াটাইটিস, ক্ষুধা বৃদ্ধি, মাড়ি থেকে রক্তপাত, কোলাইটিস।
যকৃত এবং পিত্ত নালী থেকে।খুব কমই - হেপাটোটক্সিসিটি (সহ মারাত্মক).
দাঁত এবং পেরিওডোনটিয়ামের পরিবর্তন। নাইট্রন এ এবং রিবাভিরিনের সাথে সংমিশ্রণ থেরাপি গ্রহণকারী রোগীদের মধ্যে ছিল রোগগত পরিবর্তনদাঁত এবং পেরিওডোনটিয়াম থেকে। অনেকক্ষণ মুখ শুকিয়ে যাওয়া সংমিশ্রণ থেরাপি ribavirin এবং Intron A দাঁত এবং ওরাল মিউকোসার ক্ষতিতে অবদান রাখতে পারে। রোগীদের দিনে দুবার দাঁত ব্রাশ করা উচিত এবং নিয়মিত ডেন্টাল চেকআপ করা উচিত। উপরন্তু, কিছু রোগী বমি অনুভব করতে পারে।
বিপাকের দিক থেকে।কদাচিৎ - হাইপারগ্লাইসেমিয়া, হাইপারট্রিগ্লিসারাইডেমিয়া।
musculoskeletal সিস্টেম থেকে।কদাচিৎ - র্যাবডোমায়োলাইসিস (কখনও কখনও গুরুতর), পায়ে ক্র্যাম্প, পিঠে ব্যথা, মায়োসাইটিস।
ত্বকের দিক থেকে।খুব কমই - এরিথেমা মাল্টিফর্ম, স্টিভেনস-জনসন সিন্ড্রোম, বিষাক্ত এপিডার্মাল নেক্রোলাইসিস, ইনজেকশন সাইটে নেক্রোসিস।
শ্বাসযন্ত্রের সিস্টেম থেকে।কদাচিৎ - নিউমোনিয়া; খুব কমই - পালমোনারি অনুপ্রবেশ, নিউমোনাইটিস।
মূত্রতন্ত্র থেকে।খুবই কদাচিৎ - nephrotic সিন্ড্রোমকিডনি কার্যকারিতা, রেচনজনিত ব্যর্থতা.
হেমাটোপয়েটিক সিস্টেম থেকে।খুব কমই, যখন ইন্ট্রন এ মনোথেরাপি হিসাবে বা রিবাভাইরিনের সংমিশ্রণে ব্যবহার করা হয়, তখন অ্যাপ্লাস্টিক অ্যানিমিয়া এবং সম্পূর্ণ লাল অ্যাপ্লাসিয়া পরিলক্ষিত হয়। অস্থি মজ্জা.
দৃষ্টি অঙ্গের দিক থেকে।কদাচিৎ - রেটিনা রক্তক্ষরণ, ফান্ডাসের ফোকাল পরিবর্তন, রেটিনাল ধমনী এবং শিরাগুলির থ্রম্বোসিস, চাক্ষুষ তীক্ষ্ণতা হ্রাস, চাক্ষুষ ক্ষেত্র হ্রাস, নিউরাইটিস অপটিক নার্ভ, প্যাপিলেডেমা।
ক্লিনিক্যালি গুরুত্বপূর্ণ পরিবর্তনপরীক্ষাগার পরামিতি।(যখন প্রায়ই 10 মিলিয়ন আইইউ/দিনের বেশি মাত্রায় ওষুধটি নির্ধারিত হয় তখন দেখা যায়) - গ্রানুলোসাইট এবং লিউকোসাইটের সংখ্যা হ্রাস, হিমোগ্লোবিনের মাত্রা এবং প্লেটলেটের সংখ্যা হ্রাস, ক্ষারীয় ফসফেটেসের কার্যকলাপ বৃদ্ধি, এলডিএইচ , ক্রিয়েটিনিন এবং সিরাম ইউরিয়া নাইট্রোজেনের মাত্রা। রক্তের প্লাজমাতে ALT এবং AST-এর ক্রিয়াকলাপের বৃদ্ধিকে প্যাথলজিকাল হিসাবে উল্লেখ করা হয় যখন হেপাটাইটিস ব্যতীত সমস্ত ইঙ্গিতের জন্য ব্যবহৃত হয়, সেইসাথে এইচবিভি ডিএনএর অনুপস্থিতিতে দীর্ঘস্থায়ী হেপাটাইটিস বি আক্রান্ত কিছু রোগীদের ক্ষেত্রে।
যদি কোনো ইঙ্গিতের জন্য Intron A ব্যবহার করার সময় প্রতিকূল ঘটনা ঘটে, তাহলে ডোজ কমাতে হবে বা প্রতিকূল ঘটনাগুলি দূর না হওয়া পর্যন্ত চিকিত্সা সাময়িকভাবে বাধা দেওয়া উচিত। যদি পর্যাপ্ত ডোজ পদ্ধতিতে ক্রমাগত বা বারবার অসহিষ্ণুতা বিকশিত হয় বা রোগের অগ্রগতি হয়, তাহলে ইন্ট্রোন এ থেরাপি বন্ধ করা উচিত। ওষুধের প্যারেন্টেরাল অ্যাডমিনিস্ট্রেশনের সাথে, ঠান্ডা লাগা, জ্বর, ক্লান্তি, মাথাব্যথা, অস্বস্তি এবং ফ্লু-জাতীয় সিন্ড্রোম সম্ভব। প্যারাসিটামল বা ইন্ডোমেথাসিন দ্বারা এই পার্শ্বপ্রতিক্রিয়াগুলি আংশিকভাবে উপশম হয়।
এ স্থানীয় আবেদনচোখের শ্লেষ্মা ঝিল্লিতে ওষুধের, কনজেক্টিভাল ইনফেকশন, চোখের শ্লেষ্মা ঝিল্লির হাইপ্রেমিয়া, একক ফলিকল, নিম্ন ফরনিক্সের কনজেক্টিভা ফুলে যাওয়া সম্ভব।
ওষুধ ব্যবহার করার সময়, সাধারণ পরীক্ষাগারের পরামিতিগুলি থেকে বিচ্যুতি সম্ভব, লিউকোপেনিয়া, লিম্ফোপেনিয়া, থ্রম্বোসাইটোপেনিয়া, অ্যালানাইন অ্যামিনোট্রান্সফেরেজ, ক্ষারীয় ফসফেটেসের বর্ধিত মাত্রা দ্বারা উদ্ভাসিত। থেরাপির সময় এই বিচ্যুতিগুলির সময়মত সনাক্তকরণের জন্য, সাধারণ ক্লিনিকাল পরীক্ষারক্ত পরীক্ষা অবশ্যই প্রতি 2 সপ্তাহে পুনরাবৃত্তি করতে হবে, এবং জৈব রাসায়নিক পরীক্ষা প্রতি 4 সপ্তাহে। সাধারণভাবে, এই পরিবর্তনগুলি সাধারণত ছোট, উপসর্গবিহীন এবং বিপরীত হয়।
ইন্টারফেরন বিটা এর পার্শ্বপ্রতিক্রিয়া।
লিউকোপেনিয়া। থ্রম্বোসাইটোপেনিয়া। রক্তশূন্যতা। অটোইমিউন হেমোলাইসিস। অ্যানোরেক্সিয়া। ডায়রিয়া। ট্রান্সমিনেজের মাত্রা বৃদ্ধি পায়। হাইপোটেনশন। টাকাইকার্ডিয়া। শ্বাসকষ্ট। মাথা ঘোরা। ঘুমের সমস্যা. হাড় ও জয়েন্টে ব্যথা। জ্বর. দুর্বলতা. মায়ালজিয়া। মাথাব্যথা। বমি বমি ভাব। বমি; দীর্ঘমেয়াদী ব্যবহারের সাথে - চুল পড়া।এই অধ্যায় উপস্থাপন ইন্টারফেরন আলফা 2 বি এবং আলফা 2 এ ব্যবহারের জন্য নির্দেশাবলীপ্রথম প্রজন্ম, যাকে রৈখিক, সরল বা স্বল্পস্থায়ীও বলা হয়। এই প্রস্তুতির একমাত্র সুবিধা হল তাদের অপেক্ষাকৃত কম দাম।
1943 সালে, V. এবং J. Heile তথাকথিত হস্তক্ষেপের ঘটনাটি আবিষ্কার করেন। ইন্টারফেরনের প্রাথমিক ধারণা ছিল এই: একটি ফ্যাক্টর যা ভাইরাসের প্রজননকে বাধা দেয়। 1957 সালে, ইংরেজ বিজ্ঞানী অ্যালিক আইজ্যাকস এবং সুইস গবেষক জিন লিন্ডেনম্যান এই ফ্যাক্টরটিকে বিচ্ছিন্ন করেছিলেন, স্পষ্টভাবে এটি বর্ণনা করেছিলেন এবং এটিকে ইন্টারফেরন নামে অভিহিত করেছিলেন।
ইন্টারফেরন (IFN) একটি প্রোটিন অণু যা মানবদেহে উত্পাদিত হয়। মানব জেনেটিক যন্ত্রপাতি তার সংশ্লেষণের জন্য একটি "রেসিপি" এনকোড করে (ইন্টারফেরন জিন)। ইন্টারফেরন হল সাইটোকাইনগুলির মধ্যে একটি, সংকেতকারী অণুগুলি যা খেলে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকাইমিউন সিস্টেমের কার্যকারিতায়।
IFN আবিষ্কারের পর থেকে অর্ধ শতাব্দী ধরে, এই প্রোটিনের কয়েক ডজন বৈশিষ্ট্য অধ্যয়ন করা হয়েছে। চিকিৎসা দৃষ্টিকোণ থেকে, প্রধানগুলি হল অ্যান্টিভাইরাল এবং অ্যান্টিটিউমার ফাংশন।
মানবদেহ প্রায় 20 ধরনের উত্পাদন করে - একটি সম্পূর্ণ পরিবার - ইন্টারফেরন। IFN দুটি প্রকারে বিভক্ত: I এবং II।
টাইপ I IFN - আলফা, বিটা, ওমেগা, থিটা - ভাইরাস এবং অন্যান্য কিছু এজেন্টের প্রতিক্রিয়ায় শরীরের বেশিরভাগ কোষ দ্বারা উত্পাদিত এবং নিঃসৃত হয়। টাইপ II IFN ইন্টারফেরন গামা অন্তর্ভুক্ত করে, যা বিদেশী এজেন্টদের ক্রিয়াকলাপের প্রতিক্রিয়ায় ইমিউন সিস্টেমের কোষ দ্বারা উত্পাদিত হয়।
প্রাথমিকভাবে, ইন্টারফেরন প্রস্তুতি শুধুমাত্র দাতা রক্তকণিকা থেকে প্রাপ্ত করা হয়েছিল; তাদের বলা হত: লিউকোসাইট ইন্টারফেরন। 1980 সালে, রিকম্বিন্যান্ট বা জেনেটিক্যালি ইঞ্জিনিয়ারড ইন্টারফেরনের যুগ শুরু হয়। মানব দাতার রক্ত বা অন্যান্য জৈবিক কাঁচামাল থেকে অনুরূপ ওষুধ উৎপাদনের তুলনায় রিকম্বিন্যান্ট ওষুধের উৎপাদন উল্লেখযোগ্যভাবে সস্তা হয়েছে; তাদের উৎপাদনে ব্যবহৃত হয় না দাতা রক্তযা সংক্রমণের উৎস হিসেবে কাজ করতে পারে। রিকম্বিন্যান্ট ওষুধবিদেশী অমেধ্য ধারণ না এবং তাই কম আছে ক্ষতিকর দিক. তাদের নিরাময় ক্ষমতা অনুরূপ প্রাকৃতিক ওষুধের চেয়ে বেশি।
ভাইরাল রোগের চিকিৎসার জন্য, বিশেষ করে হেপাটাইটিস সি, ইন্টারফেরন আলফা (IFN-α) প্রধানত ব্যবহৃত হয়। "সরল" ("স্বল্পস্থায়ী") ইন্টারফেরন আলফা 2b এবং আলফা 2a এবং পেজিলেটেড (পেগিন্টারফেরন আলফা-2a এবং পেগিন্টারফেরন আলফা-2b) রয়েছে। "সহজ" ইন্টারফেরনগুলি কার্যত ইইউ এবং মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রে ব্যবহৃত হয় না, তবে আমাদের দেশে, তুলনামূলক সস্তাতার কারণে, এগুলি প্রায়শই ব্যবহৃত হয়। হেপাটাইটিস সি-এর চিকিৎসায়, "সংক্ষিপ্ত" IFN-α উভয় প্রকার ব্যবহার করা হয়: ইন্টারফেরন আলফা-২এ এবং ইন্টারফেরন আলফা-২বি (একটি অ্যামিনো অ্যাসিডে ভিন্ন)। সাধারণ ইন্টারফেরন সহ ইনজেকশনগুলি সাধারণত প্রতি অন্য দিনে করা হয় (পেগিন্টারফেরনের সাথে - সপ্তাহে একবার)। স্বল্পস্থায়ী IFN-এর সাথে চিকিত্সার কার্যকারিতা যখন প্রতি অন্য দিনে দেওয়া হয় তখন পেগিন্টারফেরনের তুলনায় কম। কিছু বিশেষজ্ঞ "সহজ" IFN এর দৈনিক ইনজেকশন দেওয়ার পরামর্শ দেন, যেহেতু AVT-এর কার্যকারিতা কিছুটা বেশি।
"সংক্ষিপ্ত" IFN-এর পরিসর বেশ বিস্তৃত। তাদের মুক্তি দেওয়া হয় বিভিন্ন নির্মাতাদের দ্বারাঅধীন বিভিন্ন নাম: Roferon-A, Intron A, Laferon, Reaferon-EC, Realdiron, Eberon, Interal, Altevir, Alfarona এবং অন্যান্য।
সবচেয়ে অধ্যয়ন করা (এবং তাই ব্যয়বহুল) হল Roferon-A এবং Intron-A। ভাইরাসের জিনোটাইপ এবং অন্যান্য কারণের উপর নির্ভর করে রিবাভাইরিনের সংমিশ্রণে এই IFNগুলির সাথে চিকিত্সার কার্যকারিতা 30% থেকে 60% পর্যন্ত। প্রধান তালিকা ব্র্যান্ডসাধারণ ইন্টারফেরনের নির্মাতারা এবং তাদের বিবরণ টেবিলে দেওয়া হয়েছে।
সমস্ত ইন্টারফেরন ফ্রিজে সংরক্ষণ করা উচিত (+2 থেকে +8 ডিগ্রি সেলসিয়াস পর্যন্ত)। এগুলিকে উত্তপ্ত বা হিমায়িত করা উচিত নয়। সরাসরি ড্রাগ ঝাঁকান বা প্রকাশ করবেন না সূর্যরশ্মি. বিশেষ পাত্রে ওষুধ পরিবহন করা প্রয়োজন।
পদার্থ-সমাধান: প্যাকরেজি. নম্বর: LSR-007009/08
ক্লিনিকাল এবং ফার্মাকোলজিকাল গ্রুপ:
রিলিজ ফর্ম, রচনা এবং প্যাকেজিং
পদার্থ -সমাধান।
বোতল (1) - পিচবোর্ড প্যাক।
ড্রাগের সক্রিয় উপাদানগুলির বর্ণনা " ইন্টারফেরন আলফা -2 বি»
ফার্মাকোলজিক প্রভাব
ইন্টারফেরন। এটি 19,300 ডাল্টনের আণবিক ওজন সহ একটি অত্যন্ত বিশুদ্ধ রিকম্বিনেন্ট প্রোটিন। ইন্টারফেরনের সংশ্লেষণের এনকোডিং মানব লিউকোসাইট জিনের সাথে ব্যাকটেরিয়া প্লাজমিডকে হাইব্রিডাইজ করে একটি Escherichia coli ক্লোন থেকে প্রাপ্ত। ইন্টারফেরনের বিপরীতে, আলফা-2a এর অবস্থান 23 এ আরজিনিন রয়েছে।
এটির একটি অ্যান্টিভাইরাল প্রভাব রয়েছে, যা নির্দিষ্ট ঝিল্লি রিসেপ্টরগুলির সাথে মিথস্ক্রিয়া এবং আরএনএ সংশ্লেষণ এবং শেষ পর্যন্ত প্রোটিনের আবেশের কারণে হয়। পরেরটি, ঘুরে, ভাইরাসের স্বাভাবিক প্রজনন বা এর প্রকাশকে বাধা দেয়।
এটিতে ইমিউনোমোডুলেটরি ক্রিয়াকলাপ রয়েছে, যা ফ্যাগোসাইটোসিস সক্রিয়করণ, অ্যান্টিবডি এবং লিম্ফোকাইনগুলির গঠনের উদ্দীপনার সাথে সম্পর্কিত।
টিউমার কোষের উপর একটি antiproliferative প্রভাব আছে।
ইঙ্গিত
তীব্র হেপাটাইটিস বি, দীর্ঘস্থায়ী হেপাটাইটিসবি, ক্রনিক হেপাটাইটিস সি।
হেয়ারি সেল লিউকেমিয়া, ক্রনিক মাইলয়েড লিউকেমিয়া, রেনাল সেল কার্সিনোমা, এইডসের কারণে কাপোসির সারকোমা, ত্বকের টি-সেল লিম্ফোমা (মাইকোসিস ফাঙ্গোয়েডস এবং সেজারি সিন্ড্রোম), ম্যালিগন্যান্ট মেলানোমা।
ডোজ পদ্ধতি
শিরাপথে বা ত্বকের নিচের দিকে পরিচালিত হয়। ইঙ্গিতগুলির উপর নির্ভর করে ডোজ এবং চিকিত্সার পদ্ধতি পৃথকভাবে সেট করা হয়।
পার্শ্ব প্রতিক্রিয়া
ফ্লু মতো উপসর্গ: প্রায়শই - জ্বর, সর্দি, হাড়, জয়েন্ট, চোখ, মায়ালজিয়া, মাথাব্যথা, ঘাম বৃদ্ধি, মাথা ঘোরা।
বাইরে থেকে পাচনতন্ত্র: সম্ভাব্য ক্ষুধা হ্রাস, বমি বমি ভাব, বমি, ডায়রিয়া, কোষ্ঠকাঠিন্য, ব্যাঘাত স্বাদ সংবেদন, শুষ্ক মুখ, ওজন হ্রাস, হালকা পেটে ব্যথা, লিভার ফাংশন পরীক্ষায় সামান্য পরিবর্তন (সাধারণত চিকিত্সার পরে স্বাভাবিক হয়)।
কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্র এবং পেরিফেরাল স্নায়ুতন্ত্র থেকে:কদাচিৎ - মাথা ঘোরা, মানসিক কার্যকলাপের অবনতি, ঘুমের ব্যাঘাত, স্মৃতিশক্তি দুর্বলতা, উদ্বেগ, নার্ভাসনেস, আক্রমনাত্মকতা, উচ্ছ্বাস, বিষণ্নতা (পরে দীর্ঘমেয়াদী চিকিত্সা), paresthesia, নিউরোপ্যাথি, কম্পন; কিছু ক্ষেত্রে - আত্মহত্যার প্রবণতা, তন্দ্রা।
কার্ডিওভাসকুলার সিস্টেম থেকে:সম্ভব - টাকাইকার্ডিয়া (জ্বর সহ), ধমনী হাইপোটেনশন বা উচ্চ রক্তচাপ, অ্যারিথমিয়া; কিছু ক্ষেত্রে - কার্ডিওভাসকুলার সিস্টেমের ব্যাধি, করোনারি ধমনী রোগ, মায়োকার্ডিয়াল ইনফার্কশন।
শ্বাসযন্ত্রের সিস্টেম থেকে:কদাচিৎ - বুকে ব্যথা, কাশি, সামান্য শ্বাসকষ্ট; কিছু ক্ষেত্রে - নিউমোনিয়া, পালমোনারি শোথ।
হেমাটোপয়েটিক সিস্টেম থেকে:সম্ভাব্য সামান্য লিউকোপেনিয়া, থ্রম্বোসাইটোপেনিয়া, গ্রানুলোসাইটোপেনিয়া।
চর্মরোগ সংক্রান্ত প্রতিক্রিয়া:সম্ভাব্য চুলকানি, বিপরীতমুখী অ্যালোপেসিয়া।
অন্যান্য:খুব কমই - পেশী শক্ত হওয়া; বিচ্ছিন্ন ক্ষেত্রে - প্রাকৃতিক বা রিকম্বিন্যান্ট ইন্টারফেরনের অ্যান্টিবডি।
বিপরীত
ভারী কার্ডিওভাসকুলার রোগ, পচনশীল লিভার সিরোসিস, গুরুতর বিষণ্নতা, সাইকোসিস, অ্যালকোহল বা মাদকাসক্তি, বর্ধিত সংবেদনশীলতাইন্টারফেরন আলফা-২বি থেকে।
গর্ভাবস্থা এবং স্তন্যদান
গর্ভাবস্থায় ব্যবহার শুধুমাত্র তখনই সম্ভব যদি মায়ের জন্য থেরাপির প্রত্যাশিত সুবিধা ভ্রূণের সম্ভাব্য ঝুঁকির চেয়ে বেশি হয়।
ইন্টারফেরন আলফা-২বি থেকে নিঃসৃত হয় কিনা তা অজানা স্তন দুধ. স্তন্যপান করানোর সময় এটি ব্যবহার করার প্রয়োজন হলে, বুকের দুধ খাওয়ানো বন্ধ করার বিষয়ে সিদ্ধান্ত নেওয়া উচিত।
প্রসবকালীন বয়সের মহিলাদের চিকিত্সার সময় নির্ভরযোগ্য গর্ভনিরোধক ব্যবহার করা উচিত।
যকৃতের কর্মহীনতার জন্য ব্যবহার করুন
decompensated লিভার সিরোসিস contraindicated. প্রতিবন্ধী লিভার ফাংশন সহ রোগীদের সতর্কতার সাথে ব্যবহার করুন।
রেনাল বৈকল্য জন্য ব্যবহার করুন
প্রতিবন্ধী রেনাল ফাংশন সহ রোগীদের সতর্কতার সাথে ব্যবহার করুন।
বিশেষ নির্দেশনা
প্রতিবন্ধী রেনাল, লিভার, অস্থি মজ্জা হেমাটোপয়েসিস বা আত্মহত্যার প্রবণতা সহ রোগীদের সতর্কতার সাথে ব্যবহার করুন।
কার্ডিওভাসকুলার সিস্টেমের রোগের রোগীদের মধ্যে, অ্যারিথমিয়া সম্ভব। যদি অ্যারিথমিয়া না কমে বা বাড়ে তবে ডোজ 2 গুণ কমাতে হবে বা চিকিত্সা বন্ধ করতে হবে।
চিকিত্সার সময়কালে, স্নায়বিক এবং মানসিক অবস্থা পর্যবেক্ষণ করা প্রয়োজন।
অস্থি মজ্জার হেমাটোপয়েসিসের গুরুতর দমনের ক্ষেত্রে, পেরিফেরাল রক্তের গঠনের নিয়মিত পরীক্ষা করা প্রয়োজন।
ইন্টারফেরন আলফা-২বি ইমিউন সিস্টেমে একটি উদ্দীপক প্রভাব ফেলে এবং অটোইমিউন প্রতিক্রিয়ার ঝুঁকির কারণে অটোইমিউন রোগে আক্রান্ত রোগীদের সতর্কতার সাথে ব্যবহার করা উচিত।
ওষুধের মিথস্ক্রিয়া
ওষুধের মিথস্ক্রিয়া
ইন্টারফেরন আলফা-২বি থিওফাইলিনের বিপাককে বাধা দেয় এবং এর ক্লিয়ারেন্স কমিয়ে দেয়।
