Técnica de reacción de Coombs indirecta. Método para determinar los grupos sanguíneos.

- un estudio que ayuda a determinar el contenido de anticuerpos antieritrocitos incompletos en la sangre. Esta prueba de antiglobulina le permite detectar anticuerpos en mujeres embarazadas.

Además, permite diagnosticar anemia hemolítica en recién nacidos con conflicto Rh en las etapas iniciales. Esto ayuda a prevenir la destrucción de los glóbulos rojos necesarios para la formación normal de sangre. Esta prueba fue creada en 1945 por Robert Coombs, de ahí su nombre.

La prueba de Coombs es una prueba versátil que permite el diagnóstico oportuno de trastornos hematopoyéticos tanto en adultos como en niños.

Existen los siguientes tipos de pruebas de este tipo:

1. Prueba de Coombs directa– le permite determinar los anticuerpos ubicados en la superficie de los glóbulos rojos. Por lo general, un estudio de este tipo se prescribe ante la sospecha de hemólisis, anemia hemolítica autoinmune u otras enfermedades autoinmunes. Además, se realiza después terapia de drogas medicamentos a base de quinina, penicilina o metildopa, o después de una transfusión de sangre. Para obtener resultados más precisos, es necesario dejar de tomar medicamentos por completo durante al menos 1 semana antes del estudio.
2. Prueba de Coombs indirecta– una prueba que se puede utilizar para detectar anticuerpos antieritrocitos en plasma. Suele realizarse durante el embarazo y antes de una transfusión de sangre. Los anticuerpos antieritrocitos aparecen en la sangre de una persona durante un sistema inmunológico reactivo o como reacción a ciertos medicamentos. Para un estudio más preciso se realizan varios muestreos a la vez con un intervalo de 2 horas.

Indicaciones para el uso

La prueba de Coombs se realiza sólo si existen indicaciones graves. Este es un estudio costoso y que requiere mucho tiempo, que es una prueba específica.

Normalmente, las siguientes situaciones se consideran indicaciones para su implementación:

1. Durante la transfusión de sangre. La prueba le permite determinar si la sangre del receptor echará raíces en el cuerpo humano y también si es posible la donación. En este caso, es necesario examinar el material tanto del donante como del receptor. Es importante determinar la naturaleza de los anticuerpos, porque si son incompatibles en el cuerpo en el contexto de un conflicto Rh, el sistema inmunológico se destruye. Esto lleva al desarrollo enfermedades graves y, en casos raros, incluso la muerte.
2. Antes de la cirugía cuando existe riesgo de pérdida de sangre.. Esto se hace para que el médico pueda inyectar inmediatamente sangre adecuada para restaurar el cuerpo.
3. Para detectar sensibilización al Rh. Rhesus es un antígeno específico que aparece en el cuerpo de toda mujer durante el embarazo. Si la madre tiene Rh positivo y el padre negativo, o viceversa, no hay dependencia para el niño: puede heredar a cualquiera. Si el niño recibe el rhesus opuesto de la madre, existe un alto riesgo de sensibilización. Este fenómeno se caracteriza por la mezcla de la sangre de la madre y el niño. Esto puede ocurrir tanto durante la gestación como durante el parto.

Si se produce un conflicto Rhesus en el cuerpo de una mujer embarazada, entonces el sistema inmunológico de la madre comienza a percibir a su feto como cuerpo extraño. Debido a esto, existe un alto riesgo de que comience a atacarlo.

Como resultado de tales acciones, el bebé puede desarrollar patologías graves. Muy a menudo se produce eritroblastosis, un fenómeno en el que el cuerpo del niño no puede producir suficientes glóbulos rojos.

Además, debido al conflicto Rh, la muerte fetal puede ocurrir en el útero o inmediatamente después del nacimiento. En el enfoque correcto Consecuencias tan graves pueden evitarse fácilmente mediante tratamiento.

Desviaciones de la norma

Si la prueba de Coombs es positiva, el médico concluye que hay anticuerpos contra los glóbulos rojos en el suero sanguíneo. Esto significa que es posible que la sangre del donante no sea compatible con la sangre del paciente.

Si se diagnostica un resultado positivo en el cuerpo de una mujer embarazada con sangre Rh negativa, entonces su cuerpo contiene anticuerpos contra la sangre del feto.

Esto indica un conflicto de Rh, que requiere un enfoque extremadamente cuidadoso en el manejo del embarazo por parte del médico, así como el cumplimiento de todas las instrucciones y recomendaciones de la mujer.

Si hay anticuerpos presentes en la sangre del niño, se diagnostica. enfermedad hemolítica recién nacidos. En este caso, se repite el estudio para determinar si se produce o no un aumento de los niveles de anticuerpos en la sangre de la futura madre.

Posibles complicaciones de la prueba de Coombs

La prueba de Coombs es una prueba bastante segura que permite diagnosticar una serie de Enfermedades autoinmunes. Rara vez causa complicaciones, generalmente consecuencias negativas asociado con la toma de muestras de sangre.

Ellos son:

• Sangrado o hemorragias debajo de la piel.
• Mareos y desmayos
• Infección infecciosa

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– una prueba de antiglobulina destinada a identificar en la sangre Rh negativa anticuerpos antieritrocitarios incompletos contra el factor Rh, una proteína específica que se encuentra en la superficie de los eritrocitos de la sangre Rh positiva. Hay dos tipos de esta prueba: directa: detección de anticuerpos en la superficie de los glóbulos rojos, indirecta: detección de anticuerpos en el suero sanguíneo. Las pruebas directas se realizan en el diagnóstico y seguimiento del tratamiento de enfermedades de la sangre: anemia hemolítica, enfermedad hemolítica del recién nacido y otras. Se realiza una prueba indirecta para evaluar la compatibilidad de la sangre del donante y del receptor durante la transfusión, así como para determinar la presencia y riesgo de conflicto Rh al planificar y gestionar el embarazo. El material para la prueba de Coombs es sangre venosa, el estudio se realiza mediante métodos basados ​​​​en la reacción de aglutinación. Normalmente ambas pruebas dan un resultado negativo. El análisis se completa en un día.

Prueba de Coombs – ensayo clínico Sangre Rh negativa, destinada a detectar anticuerpos contra el factor Rh. La prueba se utiliza para identificar el riesgo de desarrollar conflicto Rh y reacciones hemolíticas. En cada persona, la superficie de los glóbulos rojos contiene un determinado conjunto de antígenos o aglutinógenos, compuestos de diversa naturaleza, cuya presencia o ausencia se utiliza para determinar el tipo de sangre y el factor Rh. Hay muchos tipos de antígenos, incluidos práctica médica Los de mayor importancia práctica son los aglutinógenos A y B, que determinan el grupo sanguíneo, y el aglutinógeno D, el factor Rh. Con un factor Rh positivo, los antígenos D se detectan en la membrana externa de los eritrocitos, pero con un factor negativo, no.

La prueba de Coombs, también llamada prueba de antiglobulina, tiene como objetivo detectar anticuerpos antieritrocitos incompletos contra el sistema del factor Rh en la sangre. Los anticuerpos contra el factor Rh son inmunoglobulinas específicas que se producen en la sangre Rh negativa cuando ingresan glóbulos rojos con aglutinógenos D. Esto puede suceder cuando se mezcla la sangre de un feto y una mujer embarazada, durante transfusiones de sangre realizadas sin sangre previa. mecanografía. La prueba de Coombs existe en dos versiones: directa e indirecta. Al realizar una prueba de Coombs directa, se detectan anticuerpos adheridos a la superficie de los glóbulos rojos. El estudio se utiliza para determinar la causa de la reacción hemolítica. La prueba de Coombs indirecta tiene como objetivo detectar anticuerpos antieritrocitos en el plasma sanguíneo. Es necesario determinar la compatibilidad de la sangre entre el donante y el receptor o entre la madre y el feto, y ayuda a prevenir el desarrollo del conflicto Rh y la posterior hemólisis de los glóbulos rojos.

La sangre para ambas versiones de la prueba de Coombs se extrae de una vena. El análisis se realiza mediante aglutinación con suero antiglobulina. Los resultados del estudio se utilizan en hematología para identificar las causas de reacciones hemolíticas, en cirugía y reanimación durante transfusiones de sangre, en obstetricia y ginecología durante el seguimiento de embarazos en mujeres con sangre Rh negativa.

Indicaciones

La prueba directa de Coombs, que detecta anticuerpos adheridos a la superficie de los glóbulos rojos, se prescribe para reacciones hemolíticas (destrucción de glóbulos rojos). de diversos orígenes. El estudio está indicado para anemia hemolítica autoinmune primaria, anemia hemolítica posttransfusión, enfermedad hemolítica del recién nacido, hemólisis de eritrocitos causada por enfermedades autoinmunes, tumorales o enfermedades infecciosas, así como recepción medicamentos, por ejemplo, quinidina, metildopa, procainamida. La prueba de Coombs indirecta, que determina los anticuerpos en el plasma sanguíneo, se utiliza para prevenir el desarrollo del conflicto Rh. Está indicado para pacientes en preparación para transfusiones de sangre, así como para mujeres embarazadas con factor Rh negativo, siempre que el futuro padre del niño tenga factor Rh positivo.

Para determinar la compatibilidad Rh, la prueba de Coombs no se prescribe a pacientes con sangre Rh positiva. En estos casos, ya existen antígenos en la superficie de los glóbulos rojos; la producción de anticuerpos no puede ser provocada por una transfusión de sangre o por la entrada de sangre fetal en el torrente sanguíneo de la mujer embarazada. Además, el estudio no está indicado para mujeres embarazadas si ambos padres tienen un factor Rh negativo, un rasgo hereditario recesivo. En estas parejas, el niño siempre tiene sangre Rh negativa, un conflicto inmunológico con la madre es imposible. En patologías hemolíticas, la prueba de antiglobulina no se utiliza para controlar el éxito de la terapia, ya que los resultados no reflejan la actividad del proceso de destrucción de los glóbulos rojos.

Una limitación de la prueba de Coombs es la complejidad del procedimiento de investigación: para obtener resultados confiables, es necesario cumplir con las condiciones de temperatura y tiempo, las reglas para la preparación de reactivos y el biomaterial. Las ventajas de la prueba de Coombs incluyen su alta sensibilidad. En la anemia hemolítica, los resultados de esta prueba siguen siendo positivos, incluso si los niveles de hemoglobina, bilirrubina y reticulocitos están normalizados.

Preparación para el análisis y recogida de material.

El material utilizado para realizar la prueba de Coombs es sangre venosa. No existen requisitos especiales en cuanto al momento del procedimiento de extracción de sangre ni para la preparación del paciente. Como ocurre con cualquier estudio, se recomienda hacer una pausa después de comer de al menos 4 horas, y dejar de fumar en los últimos 30 minutos. actividad física, evite el estrés emocional. También vale la pena hablar con su médico con anticipación sobre la necesidad de dejar de tomar medicamentos; algunos medicamentos pueden distorsionar los resultados de la prueba de Coombs. La sangre se extrae con una jeringa de la vena cubital, con menos frecuencia de la vena de parte trasera cepillos A las pocas horas, el material llega al laboratorio.

Al realizar una prueba de Coombs directa, se agrega suero antiglobulina al suero sanguíneo del paciente. Después de un tiempo, se examina la mezcla para detectar la presencia de aglutinados; se forman si hay anticuerpos en los glóbulos rojos. Si el resultado es positivo, se determina el título de aglutinante. La prueba de Coombs indirecta consta de más pasos. En primer lugar, los anticuerpos presentes en el suero se fijan en los glóbulos rojos inyectados durante la incubación. Luego se agrega suero antiglobulina a la muestra, después de un tiempo se determina la presencia y el título de aglutinados. El periodo de análisis es de 1 día.

Resultados normales

Normalmente, el resultado de la prueba de Coombs directa es negativo (-). Esto significa que no hay anticuerpos asociados con los glóbulos rojos en la sangre y no pueden causar hemólisis. El resultado normal de la prueba de Coombs indirecta también es negativo (-), es decir, no hay anticuerpos contra el factor Rh en el plasma sanguíneo. En la preparación para una transfusión de sangre del receptor, esto significa compatibilidad con la sangre del donante; en el seguimiento del embarazo, esto significa la ausencia de sensibilización al Rh de la madre, un bajo riesgo de desarrollar un conflicto inmunológico. Factores fisiológicos, como los hábitos alimentarios o actividad física, no puede afectar el resultado de la prueba. Por tanto, si el resultado es positivo, es necesaria una consulta médica.

Valor diagnóstico del análisis.

Un resultado positivo de la prueba de Coombs se expresa cualitativamente, de (+) a (++++), o cuantitativamente, mediante títulos de 1:16 a 1:256. La determinación de la concentración de anticuerpos en los glóbulos rojos y en el suero sanguíneo se realiza en ambos tipos de muestras. Si la prueba de Coombs directa es positiva, se detectan anticuerpos en la membrana externa de los glóbulos rojos, lo que provoca la destrucción de estos glóbulos. La causa puede ser una transfusión de sangre sin tipificación previa: reacción hemolítica post-transfusión, así como eritroblastosis del recién nacido, reacción hemolítica debido al uso de medicamentos, autoinmune primaria o secundaria. anemia hemolítica. La destrucción secundaria de los glóbulos rojos puede ser causada por lupus eritematoso sistémico, síndrome de Evans, macroglobulinemia de Waldenström, hemoglobinuria fría paroxística, leucemia linfocítica crónica, linfoma, mononucleosis infecciosa, sífilis, neumonía por micoplasma.

Un resultado positivo de la prueba de Coombs indirecta indica la presencia de anticuerpos contra el factor Rh en el plasma. En la práctica, esto significa que se ha producido una sensibilización al Rh y existe la posibilidad de desarrollar un conflicto Rh después de la infusión de sangre de un donante durante el embarazo. Para prevenir complicaciones en el embarazo, las mujeres con un resultado positivo en la prueba de Coombs son incluidas en un registro especial.

Tratamiento de anomalías

La prueba de Coombs se refiere a estudios isoserológicos. Sus resultados permiten identificar una reacción hemolítica, así como determinar la compatibilidad de la sangre del donante y del receptor, de la madre y del feto, para prevenir el desarrollo del conflicto Rh. Si el resultado de la prueba es positivo, debe consultar a su médico tratante: obstetra-ginecólogo, hematólogo o cirujano.

Coombs, Morant y Reis propusieron en 1945 una prueba de antiglobulina, diseñada para detectar anticuerpos antieritrocitos incompletos, que más tarde se denominó prueba de Coombs. La esencia este método es que el suero antiglobulina que contiene anticuerpos contra las inmunoglobulinas humanas, al reaccionar con glóbulos rojos sensibilizados con anticuerpos incompletos, provoca su aglutinación.

Dependiendo de si los anticuerpos están fijados en la superficie de los glóbulos rojos o están en Estado libre en el plasma sanguíneo, directa o muestra indirecta Coombs.

Se realiza una prueba de Coombs directa en los casos en los que hay motivos para suponer que los glóbulos rojos que se están estudiando ya están en vivo han sido sensibilizados con anticuerpos apropiados, es decir La primera fase de la reacción, la fijación de anticuerpos en la superficie de los glóbulos rojos, se produce en el cuerpo y la posterior adición de suero antiglobulina provoca la aglutinación de las células sensibilizadas.

Mediante la prueba de Coombs indirecta se detectan los anticuerpos incompletos presentes en el suero problema. EN en este caso la reacción se produce en dos etapas. La primera etapa es la incubación de los eritrocitos problema con el suero problema, durante la cual los anticuerpos contenidos en la muestra de suero problema se fijan en la superficie de los eritrocitos. El segundo paso es la adición de suero antiglobulina.

Hasta ahora, la prueba de Coombs se utiliza ampliamente en la práctica de laboratorio para el diagnóstico de afecciones inmunopatológicas, en particular en la anemia hemolítica autoinmune, caracterizada por la destrucción de los glóbulos rojos debido a la unión. membrana celular con anticuerpos y (o) componentes del sistema del complemento. Se utiliza para detectar la presencia de Ig G en la membrana de los eritrocitos (generalmente Ig G1 e Ig G3), que pueden activar el complemento y, a veces, el complemento (C3d). Sin embargo, en periodo agudo enfermedades debido a la destrucción de glóbulos rojos, en los que se registró una gran cantidad de anticuerpos, durante una crisis hemolítica, así como con una cantidad insuficiente de anticuerpos durante curso crónico enfermedad, se puede observar una prueba de Coombs directa negativa.

Cabe destacar que la prueba de Coombs indirecta sigue siendo mejor método selección individual de medios de transfusión, ya que le permite determinar con mayor precisión la compatibilidad individual del donante y el receptor mediante antígenos eritrocitarios.

Se recomienda una prueba de antiglobulina directa adicional para detectar la presencia de autoanticuerpos al examinar todos los receptores de órganos y tejidos en el período previo al trasplante y los receptores de células madre hematopoyéticas también después del trasplante.

Además de la inmunohematología y la transfusiología, las pruebas de antiglobulina se utilizan ampliamente en el diagnóstico de una serie de condiciones patológicas: enfermedades hematológicas, incluidas las enfermedades linfoproliferativas, enfermedades sistémicas tejido conectivo, enfermedad de Sjogren, hepatitis crónica activa, etc.

Las pruebas de Coombs se utilizan activamente en genética médica y medicina forense para determinar los antígenos de la superficie de los eritrocitos.

La prueba de Coombs es un método de investigación bastante laborioso que requiere especial cuidado en su implementación. Al usarlo, surgen algunas dificultades asociadas, en particular, con la interpretación de reacciones débilmente positivas. Se sabe que los falsos positivos débiles o reacciones negativas al realizar las pruebas de Coombs, pueden ser consecuencia de un lavado insuficiente de los glóbulos rojos, de la neutralización del reactivo de antiglobulina con trazas de suero, así como del contacto con una superficie no engrasada sobre la que se puede fijar la antiglobulina, perdiendo así su actividad. . Otra desventaja de la prueba de Coombs es la inestabilidad del reactivo de antiglobulina, cuya preparación y almacenamiento tiene determinadas características, lo que también dificulta la cuantificación de la reacción de hemaglutinación con suero de antiglobulina.

Además, los estudios realizados por A. Holburn, D. Voak et al. , demostraron que la causa de los resultados falsos negativos puede ser una agitación excesiva al resuspender la suspensión de glóbulos rojos. Los resultados erróneos al realizar pruebas de antiglobulina también pueden deberse a la presencia en el reactivo de antiglobulina de una mezcla de anticuerpos anticomplementarios, en particular contra los componentes del complemento C3d, C3c, C4c y C4d, que se adsorben en la superficie de Pruebe los glóbulos rojos durante la incubación y cree la apariencia de un resultado positivo.

Estas desventajas se pueden eliminar fácilmente lavando bien las muestras en estudio y monitoreando las condiciones de reacción.

En la última década, la solución salina isotónica de baja fuerza iónica (LISS) se ha utilizado para reducir el tiempo necesario para realizar la prueba de Coombs indirecta y aumentar su sensibilidad.

La innegable ventaja de las pruebas de antiglobulina, según varios autores, es su alta sensibilidad, que supera significativamente su resolución. metodos alternativos Pruebas que se utilizan para detectar anticuerpos no aglutinantes.

Comparamos la resolución de los métodos para estudiar sueros sanguíneos para detectar la presencia de anticuerpos incompletos utilizando suero de poliglucina, gelatina y antiglobulina. Durante el estudio, se controlaron los títulos de anticuerpos anti-D incompletos en 140 muestras de suero sanguíneo de donantes isoinmunes mediante pruebas de gelatina, poliglucina y antiglobulina indirecta. La formulación de estos métodos se llevó a cabo de acuerdo con métodos generalmente aceptados.

Se encontró que, en cuanto a su resolución, los métodos para detectar la sensibilización de los eritrocitos por anticuerpos anti-D se organizan de la siguiente manera: el más sensible es la prueba de Coombs indirecta, luego la prueba de gelatina y la menos informativa es la prueba de poliglucina. Los resultados obtenidos en esta serie de experimentos corresponden plenamente a los datos de la literatura, lo que nos permite concluir que nivel alto la sensibilidad de las pruebas de Coombs, que permite identificar con un alto grado de certeza la presencia en el organismo de anticuerpos antieritrocitos que no provocan la aglutinación de los glóbulos rojos.

Sin embargo, al realizar las pruebas de Coombs en la práctica, hay casos en los que no se detectan anticuerpos incompletos, aunque el cuadro clínico de la enfermedad o la inmunización previa indican su posible presencia. En tales casos, se puede suponer que la cantidad de anticuerpos es insuficiente para que sean precipitados por los anticuerpos del suero antiglobulina.

Esta conclusión fue confirmada por nuestro propio experimento, en el que, utilizando el método de microelectroforesis celular analítica, se estableció la presencia de anticuerpos anti-D en los eritrocitos de prueba, que no se detectaron en la prueba de Coombs indirecta. En esta serie de experimentos, se añadió suero antiglobulina a eritrocitos preincubados con sueros obtenidos de la sangre de donantes inmunizados durante el período de anticuerpogénesis en curso, es decir. durante un período en el que no se detectaron anticuerpos en ellos mediante métodos conocidos, incluida la prueba de Coombs.

Los estudios realizados proporcionaron evidencia estadística de la presencia de anticuerpos incompletos en la superficie de los glóbulos rojos. cambio significativo la magnitud de la movilidad electroforética de los glóbulos rojos sensibilizados después de la adición de suero antiglobulina. Cabe señalar que posteriormente en todos los donantes inmunizados se determinaron anticuerpos anti-D mediante la prueba de Coombs indirecta en el suero sanguíneo.

Gillerand et al. También demostró que las pruebas de antiglobulina se caracterizan por un cierto umbral de sensibilidad: se observa un resultado positivo sólo cuando se registran al menos 500 moléculas de Ig G en la superficie de un glóbulo rojo.

Además, la literatura proporciona evidencia de que un posible resultado negativo de la prueba de Coombs puede estar asociado con la baja afinidad de los anticuerpos que sensibilizan los glóbulos rojos, por lo que se eluyen fácilmente de la superficie de los glóbulos rojos durante el proceso de lavado. .

Teniendo en cuenta lo anterior, podemos concluir que en algunos casos un resultado negativo de la prueba de Coombs aún no es evidencia de la ausencia de anticuerpos fijados en la superficie de los glóbulos rojos.

Se sabe que las reacciones de Coombs son muy específicas y pueden detectar la mayoría de los tipos de anticuerpos incompletos. Sin embargo, como muestran algunos datos experimentales, las pruebas de antiglobulina también pueden ser positivas en condiciones no inmunológicas. E. Muirhead y col. el segundo día después de la administración de fenilhidrazina a perros, se observó una prueba de Coombs positiva. Una aparición tan rápida de una reacción positiva va en contra de su naturaleza inmunológica y, más bien, se asocia con una adsorción inespecífica de proteínas en la superficie de los eritrocitos.

M. Williams y col. descubrieron que el ácido clavulánico también puede provocar una reacción positiva que, según los autores, está asociada con una adsorción inespecífica de proteínas plasmáticas en la superficie de los eritrocitos. Se observó un efecto similar durante el tratamiento con antibióticos de cefalosporina.

Los autores de los estudios anteriores enfatizan el carácter no inmunológico de los resultados positivos de las pruebas de Coombs e insisten en que estas sustancias son capaces de modificar las membranas de los glóbulos rojos, como resultado de lo cual los glóbulos rojos pueden adsorber proteínas (en particular, albúmina) que normalmente están presentes en el plasma sanguíneo y no tienen propiedades de anticuerpos. Además, es posible que el xenobiótico, adsorbido en la superficie celular, sirva de enlace entre la membrana celular y las proteínas plasmáticas.

Para interpretar correctamente los resultados de las pruebas de antiglobulina, también se debe tener en cuenta la relación cuantitativa entre glóbulos rojos jóvenes y maduros en la sangre periférica. Se encontró que los reticulocitos aislados del cuerpo durante el período de mayor regeneración del eritrono pueden ser aglutinados por el suero antiglobulina.

Resultado positivo de la prueba de antiglobulina directa También ocurre en diversas condiciones patológicas acompañadas de trastornos. sistema inmunitario, procesos inflamatorios, lo que conduce a una adsorción inespecífica de anticuerpos de diferentes especificidades en las membranas de los eritrocitos. Esto sugiere que las moléculas de Ig G no interactúan con antígenos específicos de los eritrocitos, sino que solo se fijan en la superficie de las células en estudio.

Debe tenerse en cuenta que al realizar una prueba de Coombs en casos de enfermedades caracterizadas por el desarrollo de disproteinemia o la aparición de paraproteínas, un resultado positivo se debe a la presencia en la superficie de los eritrocitos de proteínas que no tienen las propiedades de anticuerpos, lo que también indica la falta de especificidad de las pruebas de antiglobulina con respecto a la naturaleza de la proteína detectada con su ayuda.

Así, como han demostrado numerosos estudios, resultados positivos Las pruebas de antiglobulina directa e indirecta no son una prueba absoluta de la presencia de anticuerpos, ya que reacciones positivas También se puede observar en diversas condiciones patológicas no asociadas con isosensibilización o autosensibilización del cuerpo. Por lo tanto, sólo la comparación de los resultados de varios métodos inmunoserológicos con cuadro clinico Las enfermedades nos permiten evaluar completamente el proceso patológico en desarrollo.

Una prueba de antiglobulina indirecta positiva con una prueba directa negativa generalmente indica la presencia de aloanticuerpos libres en el suero de prueba, asociados con transfusiones de sangre o embarazos previos.

La prueba de Coombs suele ser positiva durante la exacerbación de la hemoglobinuria paroxística nocturna; una prueba de Coombs positiva con anti-C3 y anti-C3dg es un marcador de enfermedad por aglutininas frías.

En los casos en que exista un alto riesgo de desarrollar enfermedad hemolítica del recién nacido, gran importancia Para hacer un diagnóstico (con mayor frecuencia durante el embarazo) y, si es necesario, un seguimiento dinámico de la aparición y el cambio en el título de anticuerpos, se utilizan los resultados de las pruebas de antiglobulina directas e indirectas. Muy a menudo, la enfermedad hemolítica de los recién nacidos se asocia con la incompatibilidad de la madre y el feto con el antígeno D, con menos frecuencia con los antígenos del sistema AB0 y aún menos con otros antígenos (C, c, K, etc.). Anticuerpos formados durante este proceso. Los La, que suelen ser anticuerpos incompletos de clase Ig G, se detectan claramente en la prueba de antiglobulina indirecta. Con esta enfermedad, el título y la especificidad correctamente establecidos de los anticuerpos identificados son de gran importancia, ya que existe una cierta correlación entre el nivel de anticuerpos antieritrocitos en la sangre de una mujer embarazada y posible pronóstico gravedad de la enfermedad hemolítica.

También es necesaria una prueba de Coombs indirecta en Práctica clinica para garantizar una terapia transfusional segura. Su implementación es un componente obligatorio de los estudios inmunohematológicos de los donantes y de diversas categorías de receptores, así como de los exámenes de rutina de todos los pacientes en instituciones médicas que puedan requerir transfusión de sangre y sus componentes.

La prueba de antiglobulina indirecta se utiliza en los siguientes casos:

Para una determinación más precisa de la afiliación Rh (antígeno D) en caso de resultados poco claros de la determinación del factor Rh por otros métodos (poliglucina, gelatina, etc.);

Identificar antígenos eritrocitarios débiles (sistemas Kell, Duffy, Kidd, Lewis, etc.) y anticuerpos contra estos antígenos;

Para la detección e identificación de anticuerpos antieritrocitos aloinmunes, incluidos los anticuerpos que provocan reacciones hemolíticas postransfusionales;

Determinar la presencia de anticuerpos inmunes del sistema AB0 durante las complicaciones hemolíticas de la transfusión;

Como prueba de compatibilidad para la selección individual de la sangre transfundida y sus componentes.

Por tanto, la prueba de Coombs es una importante prueba diagnóstica utilizada en diversos campos de la medicina (hematología, obstetricia, reumatología, transfusiología, diagnóstico clínico y de laboratorio, etc.). El conocimiento de las peculiaridades de la realización de la prueba de Coombs ayudará a aumentar la fiabilidad de los resultados obtenidos y contribuirá a la correcta interpretación de los datos de laboratorio.

Literatura

1. Anticuerpos. Métodos / ed. D. Katie. - M.: Mir, 1991.

2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadzhiev A.B.. // Terapia transfusional de la anemia: libro de texto. manual para medicos. - M.: Prakt. Medicina, 2005. - P. 105-106.

3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfusiología. - 2006. - No. 2. — pág. 39—62.

4. Donskov S.I.// Grupos sanguíneos del sistema Rhesus: teoría y práctica. - M.: VINITI RAS, 2005. - P. 180-186, 195.

5.Inmunoserología ( regulaciones) / comp. A.G. Bashlay, S.I. Donskov. - M.: VINITI RAS, 1998.

6.Estudio del sistema sanguíneo en la práctica clínica / ed. SOLDADO AMERICANO. Kozinets, V.A. Makarova. - M.: Triada-X, 1997.

7. Levin VI. Sobre el mecanismo de eritrodiéresis y eritropoyesis durante el período de anemia poshemorrágica aguda: resumen. dis. ...candó. Miel. Ciencia. - Minsk, 1968.

8. Ragimov A.A., Bayramalibeyli I.E.. // Fundamentos del diagnóstico, prevención y tratamiento de la anemia. - M.: GOU VUNMC MH RF, 2002. - P. 204-209.

9. Chumakova E.D.. // Problemas reales Hematología y transfusiología: actas del VI Congreso de Hematólogos y Transfusiólogos de la República de Bielorrusia, Minsk, 24 y 25 de mayo de 2007 / ed. AI. Svirnovsky, M.P. Potapnev. - Minsk: Centro Republicano Científico y Práctico de Hematología y Transfusiología, 2007. - P. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Raza R.. // Lanceta. - 1945. - Vol. 2. - pág.15.

11. Freeman J.. // J. Clin. Patol. - 1979. - Vol. 32. - págs. 1014-1018.

12. Holburn A.M.. Control de calidad. Métodos en hematología/ed. I. Cavil. - Edimburgo: Churchill Livingstone, 1982. - Vol. 4. - págs. 34-50.

13. Khan S.// CMAJ. - 2006. - Vol. 175, n. 8. - pág. 919.

14. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (suplemento 7). - págs. 719-721.

15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (suplemento 7). — págs. 716—718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// Nuevo inglés. J. Med. —1976. - Vol. 277. - págs. 123-125.

17. Muirhead E.E., ArboledasM., Brian S.. // J. laboratorio. Clínico. Medicina. —1954. - Vol. 44. - págs. 902-903.

18. Rosse W.F.//Hosp. Practica. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., mooreB. et al. //Biotests Bull. - 1986. - Vol. 1. - págs. 41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. et al. Lavadoras de células para pruebas de antiglobulina. Pruebas replicadas: un nuevo método que demuestra la ineficiencia de una máquina ampliamente utilizada: la Sorvall CW1-AF2: informe a la rama técnica del DHSS, febrero de 1991.

21. Williams M.E., Thomas D., Harman C.P.. et al. //Agentes antimicrobianos y quimioterapia. —1985. - págs. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H.. // CMAJ. - 2006. - Vol. 174, n 3. - págs. 305-307.

Noticias médicas. - 2008. - No. 3. - págs. 33-36.

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De los muchos antígenos existentes en la práctica médica. valor más alto se centra en tres tipos de aglutinógenos sanguíneos. Uno de ellos es el tipo responsable de la manifestación del factor Rh: si está presente en la membrana de los eritrocitos, el grupo sanguíneo se diagnostica como Rh+, si está ausente, Rh-. Si los eritrocitos con aglutinógenos Rh+ ingresan a la sangre Rh negativo, el cuerpo desencadena una respuesta inmune y comienza a producir anticuerpos contra este antígeno, lo que causa condiciones patológicas.

¡REFERENCIA! El factor Rh es un complejo sistema multicomponente de varias docenas de antígenos. Los más comunes son los aglutinógenos tipo D (85% de los casos), así como E y C.

La prueba de Coombs se realiza sólo si hay evidencia directa. Lista general de motivos para prescribir la prueba de Coombs:

• planificación y manejo del embarazo (los padres tienen Rh diferente);
• donación y preparación para transfusión de sangre (la falta de coincidencia de sangre según Rh no es menos destructiva que la falta de coincidencia según el sistema AB0);
• planificado Intervención quirúrgica(en caso de reposición de la pérdida de sangre mediante transfusión de sangre);
• diagnóstico de enfermedades hemolíticas.

Indicaciones más específicas dependen del tipo de estudio que se realice.

Prueba de Coombs directa

La prueba directa detecta anticuerpos en la superficie de los glóbulos rojos. Esto es necesario para diagnosticar patologías hemolíticas:

• autoinmune (los glóbulos rojos y la hemoglobina se destruyen como resultado de un ataque de los propios anticuerpos del cuerpo);
• medicinal ( proceso patologico desencadena el uso de ciertos medicamentos como quinidina o procainamida);
• post-transfusión (si el tipo de sangre no coincide durante la transfusión), así como en forma de conflicto Rh durante el embarazo (eritroblastosis del recién nacido).

¡REFERENCIA! La anemia hemolítica es una enfermedad asociada con la destrucción prematura de los glóbulos rojos como resultado de la hemólisis, lo que conduce a una saturación insuficiente de oxígeno en la sangre e hipoxia del cerebro y/o de los órganos internos.

La hemólisis de los elementos sanguíneos se observa en enfermedades oncológicas, infecciosas y reumáticas, por lo que la prueba directa de Coombs puede utilizarse como herramienta de diagnóstico adicional. condición patológica. Vale la pena recordar: un valor negativo de la prueba no excluye la posibilidad de hemólisis, pero es motivo de un examen adicional.

Prueba de Coombs indirecta

Las pruebas indirectas se utilizan con mayor frecuencia para prevenir situaciones patológicas. Ayuda a detectar anticuerpos en el plasma sanguíneo, lo cual es necesario para evaluar la compatibilidad de las transfusiones y diagnosticar los riesgos de conflicto Rh durante el embarazo.

Más del 80% de las personas tienen un factor Rh positivo (Rh+), respectivamente, poco menos del 20% son Rh negativos. Si una madre Rh- desarrolla un hijo Rh+, su cuerpo comienza a producir anticuerpos que atacan los glóbulos rojos del feto, provocando hemólisis.

Teniendo en cuenta que el porcentaje de matrimonios "diferentes rhesus" alcanza el 12-15%, el riesgo de enfermedad hemolítica en los recién nacidos debería ser alto, pero en realidad, sólo en 1 de cada 25 casos las mujeres experimentan el fenómeno de sensibilización. (por cada 200 nacimientos exitosos hay 1 ejemplo de patología hemolítica). Esto se debe en parte al hecho de que el primer hijo Rh positivo generalmente no provoca una agresión abierta por parte del cuerpo de la madre; La inmensa mayoría de los casos ocurren en el segundo hijo y en los siguientes. Se aplica el mismo principio que con la sensibilización convencional a un alérgeno particular.

No hay reacción al primer contacto. El cuerpo recién se está familiarizando con un nuevo antígeno, que produce anticuerpos de clase IgM, que son responsables de una respuesta inmune rápida, pero que rara vez atraviesan la barrera placentaria hacia la sangre del niño. Todas las reacciones patológicas se manifiestan en el segundo "encuentro", cuando el cuerpo comienza a producir anticuerpos de clase IgG, que penetran fácilmente en el torrente sanguíneo del feto, iniciando el proceso de hemólisis.

Prueba de Coombs indirecta durante el embarazo le permite detectar la presencia de anticuerpos en el cuerpo de la madre e identificar oportunamente la etapa inicial de sensibilización. Una respuesta positiva requiere registrarse con una prueba de título de anticuerpos mensual y hospitalización obligatoria 3-4 semanas antes del nacimiento.

¡REFERENCIA! La incompatibilidad del factor Rh no afecta de ninguna manera la condición de la madre, la enfermedad hemolítica se desarrolla solo en el niño. En casos graves y en ausencia de una respuesta oportuna, el feto puede morir en el útero o inmediatamente después del nacimiento.

Preparación para el procedimiento y su implementación.

La sangre venosa se utiliza para el diagnóstico. No se requiere ninguna preparación especial a largo plazo para la prueba de Coombs. Intente seguir un conjunto estándar de reglas antes de extraer sangre de una vena para analizarla:

• dejar el alcohol durante 3 días, medicamentos(si es posible);
• Planifique su última comida más tarde de 8 horas antes de la extracción de sangre para análisis;
• dejar de fumar y del estrés físico, mental y emocional en 1 hora;
• Antes del procedimiento, beba un vaso de agua limpia sin gas.

El método de investigación se basa en la reacción de hemaglutinación.

Al realizar una prueba directa Se expone una muestra de sangre a suero antiglobulina preparado previamente con indicadores conocidos, la mezcla se mantiene durante algún tiempo y se controla en busca de aglutinados, que se forman cuando los anticuerpos están presentes en los glóbulos rojos. El nivel de aglutinados se diagnostica mediante el título de aglutinantes.

muestra indirecta Coombs tiene una técnica similar, pero una secuencia de acciones más compleja. Los eritrocitos antigénicos (con factor Rh) se introducen en el suero sanguíneo separado y solo después de estas manipulaciones se agrega suero antiglobulina para el diagnóstico y el título de aglutinación.

Resultados de la investigacion

Normalmente tanto recto como prueba de Coombs indirecta debería dar un resultado negativo:

• una prueba directa negativa indica que los anticuerpos específicos contra el factor Rh asociado con los glóbulos rojos están ausentes en la sangre y no pueden causar hemólisis
• una prueba indirecta negativa muestra que tampoco hay anticuerpos libres contra el factor Rh en el plasma sanguíneo; este hecho indica la compatibilidad de la sangre del donante con la sangre del receptor (o la sangre de la madre y el niño) según el factor Rh.

Una prueba de Coombs positiva indica el hecho de la sensibilización al Rh del cuerpo, que es razón principal Conflicto de Rh en caso de transfusión de sangre o al tener un niño con un estado de Rh diferente. En este caso, los resultados permanecen sin cambios durante 3 meses (la vida útil de los glóbulos rojos). Si la causa es la anemia hemolítica autoinmune, una prueba positiva puede seguir al paciente durante varios años (en algunos casos, durante toda su vida).

¡REFERENCIA! La prueba de antiglobulina es diferente. alta sensibilidad, pero tiene poco contenido informativo. No registra la actividad del proceso hemolítico, no determina el tipo de anticuerpo y no puede identificar la causa de la patología. Para obtener una imagen más completa, el médico tratante debe prescribir investigación adicional(microscopía de sangre, general y análisis bioquímico, pruebas reumáticas, VSG, niveles de hierro y ferritina).

El grado de sensibilización se puede expresar cualitativamente (de “+” a “++++”) o cuantitativamente en forma de título:

• 1:2 - bajo valor, no supone ningún peligro;
• 1:4 - 1:8 - el comienzo del desarrollo de una reacción inmunológica; no representa un peligro, pero requiere un seguimiento constante;
• 1:16 -1:1024 - una forma fuerte de sensibilización, se deben tomar medidas inmediatas.

Razón prueba positiva Yo puedo ser:

• transfusión de sangre no tipificada (o con un error tipográfico), cuando el factor Rh del donante y el receptor no coinciden;
• Conflicto Rh durante el embarazo (si la composición de los antígenos sanguíneos del padre y de la madre no coincide);
• anemia hemolítica autoinmune, tanto congénita (primaria) como secundaria, que es consecuencia de ciertas enfermedades (síndrome de Evans, neumonía infecciosa, sífilis, hemoglobinuria fría, linfoma);
• reacción hemolítica del fármaco.

Ninguno de los problemas anteriores puede ser resuelto por el paciente sin atención médica. En todos los casos será necesaria consulta urgente, registro u hospitalización de urgencia.

¡ATENCIÓN! En casos raros, es posible una prueba de Coombs falsamente positiva. La razón de esto pueden ser las frecuentes transfusiones de sangre, así como una serie de enfermedades: artritis reumatoide, lupus eritematoso, sarcoidosis. Este fenómeno también se puede observar después de la extracción del bazo, así como cuando se altera la reacción (sacudidas frecuentes del contenido, presencia de contaminantes).

La prueba de Coombs es un método investigación de laboratorio, elaborado al influir en la hemaglutinación. Se basa en la susceptibilidad de los anticuerpos a las inmunoglobulinas y elementos enzimáticos, así como en su capacidad para aglutinar eritrocitos recubiertos con C3 o Lg.

Diagnóstico directo de Coombs

Se utiliza para detectar anticuerpos o componentes del complemento instalados en el exterior de las células. La prueba de Coombs directa se realiza de la siguiente manera.

El uso de tal muestra.

El diagnóstico directo de Coombs se utiliza en determinados casos, como por ejemplo:

• efectos de la transfusión;
• hemólisis autoinmune;
• Anemia hemolítica inducida por fármacos.

Prueba de Coombs indirecta

Este diagnóstico permite detectar anticuerpos contra las células en el suero, que generalmente se incuba con glóbulos rojos de donante tipo 0, y luego se realiza una prueba directa. Aplicar diagnóstico indirecto Coombs en los siguientes casos:

Cómo prepararse para el análisis

Existen algunas reglas para prepararse para el examen.

1. Si el paciente es un recién nacido, los padres deben saber que la prueba ayudará a diagnosticar la enfermedad hemolítica del recién nacido.
2. Si el paciente tiene sospechas de anemia hemolítica, se le debe explicar que el análisis le permitirá saber si es causada por trastornos protectores, medicamentos u otros factores.
3. La prueba de Coombs, directa e indirecta, no impone ninguna restricción en cuanto a nutrición o dieta.
4. Es necesario notificar al paciente que el examen requerirá extraer sangre de una vena y también decirle exactamente cuándo se realizará la punción venosa.
5. También se le debe advertir sobre la posibilidad malestar durante el período de aplicación del vendaje en el brazo y el procedimiento en sí.
6. Se deben suspender los medicamentos que puedan afectar el resultado de la muestra.

Estos medicamentos incluyen:

• "Estreptomicina";
• "Metildopa";
• "Procainamida";
• sulfonamidas;
• "Melfalán";
• "Quinidina";
• "Rifampicina";
• "Isoniazida";
• cefalosporinas;
• "Hidralazina";
• "Clorpromazina";
• "Levodopa";
• "Tetraciclina";
• "Difenilhidantoína";
• "Etosuximida";
• "Penicilina";
• Ácido mefenámico.

La muestra de sangre se realiza por la mañana con el estómago vacío.

Cómo se lleva a cabo el evento

El test de Coombs se realiza en el siguiente orden:

1. Al realizar diagnósticos en un paciente adulto, después de la punción venosa, la sangre se extrae en tubos con EDTA (etilendiaminotetraacetato).
2. La sangre del recién nacido se extrae del cordón umbilical y se deposita en un vaso que contiene EDTA.
3. El área de punción se presiona con un hisopo de algodón hasta que se detiene el sangrado.
4. Si aparece un hematoma en el lugar de la venopunción, se prescriben compresas tibias.
5. Después de la extracción de sangre, se permite al paciente volver a tomar medicamentos.
6. Es necesario informar a los padres del recién nacido que es posible que se requiera un análisis secundario para controlar la dinámica de la anemia.

Ventajas de la prueba de Coombs

Esta investigación tiene algunas ventajas, a saber:

Desventajas del análisis

La prueba de Coombs positiva es un método de examen bastante laborioso, que requiere una precisión de ejecución característica. Al usarlo, pueden surgir ciertas dificultades, especialmente relacionadas con la interpretación de los efectos débilmente positivos.

Se ha establecido que las reacciones erróneas negativas o débilmente positivas durante la realización de las pruebas de Coombs pueden ser consecuencia de un lavado celular insatisfactorio, un debilitamiento del reactivo de antiglobulina por los residuos séricos, así como conexiones con superficies no grasas en las que se puede aplicar la antiglobulina. ser reparado, perdiendo así su eficacia.

La prueba de Coombs tiene otro inconveniente: la baja estabilidad del reactivo de antiglobulina, cuya adquisición y almacenamiento características individuales, lo que también dificulta la evaluación numérica del efecto del suero de antiglobulina sobre la hemaglutinación.

Enfermedades que se pueden detectar durante el examen.

El diagnóstico de Coombs permite detectar ciertos tipos de enfermedades, como:

• malestar hemolítico del recién nacido;
• diversas reacciones transfusionales;
• hemólisis autoinmune;
• Anemia hemolítica inducida por fármacos.

Hoy en día, la prueba de Coombs se considera un sistema de análisis de sangre bastante popular tanto para adultos como para recién nacidos. Permite identificar muchas enfermedades diferentes.