Tehnika indirektne Coombsove reakcije. Metoda za određivanje krvnih grupa

- studija koja pomaže u određivanju sadržaja nepotpunih anti-eritrocitnih antitijela u krvi. Ovaj antiglobulinski test vam omogućava da otkrijete antitela na kod trudnica.

Osim toga, omogućava dijagnosticiranje hemolitičke anemije kod novorođenčadi s Rh konfliktom u početnim fazama. Ovo pomaže u sprječavanju uništavanja crvenih krvnih stanica neophodnih za normalno stvaranje krvi. Ovaj test je 1945. godine kreirao Robert Coombs, zbog čega je i dobio ime.

Coombsov test je svestran test koji omogućava pravovremenu dijagnozu hematopoetskih poremećaja i kod odraslih i kod djece.

Postoje sljedeće vrste takvih testova:

1. Direktni Coombsov test– omogućava vam da odredite antitijela koja se nalaze na površini crvenih krvnih zrnaca. Obično se takva studija propisuje za sumnju na hemolizu, autoimunu hemolitičku anemiju ili druge autoimune bolesti. Osim toga, provodi se nakon terapija lijekovima lijekovi na bazi kinina, penicilina ili metildope, ili nakon transfuzije krvi. Da biste dobili preciznije rezultate, morate potpuno prestati uzimati lijekove najmanje 1 tjedan prije studije.
2. Indirektni Coombsov test– test koji se može koristiti za otkrivanje anti-eritrocitnih antitijela u plazmi. Obično se izvodi tokom trudnoće i prije transfuzije krvi. Anti-eritrocitna antitijela pojavljuju se u krvi osobe tokom reaktivnog imunološkog sistema ili kao reakcija na određene lijekove. Za precizniju studiju, nekoliko uzoraka se provodi odjednom u intervalu od 2 sata.

Indikacije za upotrebu

Coombsov test se izvodi samo ako postoje ozbiljne indikacije. Ovo je skupa i dugotrajna studija, koja je specifičan test.

Obično se sljedeće situacije smatraju indikacijama za njegovu primjenu:

1. Tokom transfuzije krvi. Test vam omogućava da utvrdite hoće li se krv primaoca ukorijeniti u ljudskom tijelu, kao i da li je moguće doniranje. U tom slučaju potrebno je pregledati materijal i donatora i primaoca. Važno je utvrditi prirodu antitijela, jer ako su nekompatibilna u tijelu u pozadini Rh konflikta, imunološki sistem je uništen. To dovodi do razvoja ozbiljne bolesti, au rijetkim slučajevima čak i smrt.
2. Prije operacije kada postoji opasnost od gubitka krvi. To se radi kako bi ljekar mogao odmah uvesti odgovarajuću krv za obnavljanje tijela.
3. Za otkrivanje Rh senzibilizacije. Rhesus je specifičan antigen koji se pojavljuje u tijelu svake žene tokom trudnoće. Ako majka ima pozitivan Rh, a otac negativan, ili obrnuto, za dijete nema zavisnosti – može naslijediti bilo koga. Ako dijete dobije suprotan rezus od majke, postoji visok rizik od senzibilizacije. Ovaj fenomen karakterizira miješanje krvi majke i djeteta. To se može dogoditi i tokom gestacije i tokom porođaja.

Ako se u tijelu trudnice javi rezus konflikt, tada imuni sistem majke počinje da doživljava njen fetus kao strano tijelo. Zbog toga postoji veliki rizik da će početi da ga napada.

Kao rezultat takvih radnji, beba može razviti ozbiljne patologije. Najčešće se javlja eritroblastoza - pojava u kojoj djetetov organizam ne može proizvesti dovoljno crvenih krvnih zrnaca.

Osim toga, zbog Rh konflikta, fetalna smrt može nastupiti u maternici ili odmah nakon rođenja. At pravi pristup Takve ozbiljne posljedice mogu se lako izbjeći liječenjem.

Odstupanja od norme

Ako je Coombsov test pozitivan, doktor zaključuje da u krvnom serumu postoje antitijela na crvena krvna zrnca. To znači da krv davaoca možda nije kompatibilna s krvlju pacijenta.

Ako se u tijelu trudnice s Rh negativnom krvlju dijagnosticira pozitivan rezultat, tada njeno tijelo sadrži antitijela na krv fetusa.

Ovo ukazuje na Rh konflikt, koji zahtijeva izuzetno pažljiv pristup liječenju trudnoće od strane ljekara, kao i poštovanje svih uputa i preporuka od strane žene.

Ako su u krvi djeteta prisutna antitijela, dijagnostikuje se hemolitička bolest novorođenčad. U tom slučaju se provodi ponovljena studija kako bi se utvrdilo dolazi li do povećanja razine antitijela u krvi buduće majke ili ne.

Moguće komplikacije iz Coombsovog testa

Coombsov test je prilično siguran test koji omogućava dijagnosticiranje niza autoimune bolesti. Obično rijetko uzrokuje komplikacije negativne posljedice povezano sa vađenjem krvi.

Oni su:

• Krvarenje ili krvarenja ispod kože
• Vrtoglavica i nesvjestica
• Infektivna infekcija

7 295

– antiglobulinski test za identifikaciju u Rh-negativnoj krvi nepotpunih antieritrocitnih antitijela na Rh faktor – specifični protein koji se nalazi na površini eritrocita Rh-pozitivne krvi. Postoje dvije vrste ovog testa: direktan – otkrivanje antitijela na površini crvenih krvnih zrnaca, indirektni – otkrivanje antitijela u krvnom serumu. Direktno testiranje se provodi u dijagnostici i praćenju liječenja bolesti krvi: hemolitičke anemije, hemolitičke bolesti novorođenčadi i drugih. Indirektni test se radi radi procene kompatibilnosti krvi davaoca i primaoca tokom transfuzije, kao i utvrđivanja prisustva i rizika od Rh konflikta prilikom planiranja i vođenja trudnoće. Materijal za Coombsov test je venska krv; Obično oba testa daju negativan rezultat. Analiza se završava u roku od jednog dana.

Coombsov test - kliničkim ispitivanjima Rh negativna krv, usmjerena na otkrivanje antitijela na Rh faktor. Test se koristi za identifikaciju rizika od razvoja Rh konflikta i hemolitičkih reakcija. U svakoj osobi, površina crvenih krvnih stanica sadrži određeni skup antigena ili aglutinogena - spojeva različite prirode, čije se prisustvo ili odsutnost koristi za određivanje krvne grupe i Rh faktora. Postoji mnogo vrsta antigena, uključujući medicinska praksa Najveći praktični značaj imaju aglutinogeni A i B, koji određuju krvnu grupu, i aglutinogen D, Rh faktor. S pozitivnim Rh faktorom, D antigeni se otkrivaju na vanjskoj membrani eritrocita, ali s negativnim faktorom nisu.

Coombsov test, koji se naziva i antiglobulinski test, ima za cilj otkrivanje nepotpunih anti-eritrocitnih antitijela na sistem Rh faktora u krvi. Antitijela na Rh faktor su specifični imunoglobulini koji se stvaraju u Rh-negativnoj krvi kada u nju uđu crvena krvna zrnca sa aglutinogenom D. To se može dogoditi kada se krv fetusa i trudnice pomiješa, tokom transfuzije krvi koja se obavlja bez prethodne krvi. kucanje. Coombsov test postoji u dvije verzije - direktnoj i indirektnoj. Prilikom izvođenja direktnog Coombsovog testa, otkrivaju se antitijela pričvršćena na površinu crvenih krvnih zrnaca. Studija se koristi za određivanje uzroka hemolitičke reakcije. Indirektni Coombsov test ima za cilj otkrivanje anti-eritrocitnih antitijela u krvnoj plazmi. Potrebno je utvrditi kompatibilnost krvi između davaoca i primaoca ili majke i fetusa, te pomaže u sprječavanju razvoja Rh konflikta i naknadne hemolize crvenih krvnih zrnaca.

Krv za obje verzije Coombsovog testa uzima se iz vene. Analiza se vrši aglutinacijom upotrebom antiglobulinskog seruma. Rezultati istraživanja koriste se u hematologiji za identifikaciju uzroka hemolitičkih reakcija, u hirurgiji i reanimaciji pri provođenju transfuzije krvi, u akušerstvu i ginekologiji pri praćenju trudnoće kod žena s Rh negativnom krvlju.

Indikacije

Direktni Coombsov test, koji otkriva antitijela pričvršćena na površinu crvenih krvnih zrnaca, propisan je za hemolitičke reakcije (razaranje crvenih krvnih stanica) različitog porekla. Studija je indicirana za primarnu autoimunu hemolitičku anemiju, posttransfuzijsku hemolitičku anemiju, hemolitičku bolest novorođenčeta, hemolizu eritrocita uzrokovanu autoimunim, tumorskim ili zarazne bolesti, kao i recepcija lijekovi, na primjer, kinidin, metildopa, prokainamid. Indirektni Coombsov test, koji određuje antitijela u krvnoj plazmi, koristi se za sprječavanje razvoja Rh konflikta. Indiciran je za pacijente koji se pripremaju za transfuziju krvi, kao i za trudnice sa negativnim Rh faktorom, pod uslovom da budući otac djeteta ima pozitivan Rh faktor.

Da bi se utvrdila Rh kompatibilnost, Coombsov test se ne propisuje pacijentima s Rh pozitivnom krvlju. U tim slučajevima već postoje antigeni na površini crvenih krvnih zrnaca, proizvodnja antitijela ne može biti izazvana transfuzijom krvi ili ulaskom krvi fetusa u krvotok trudnice. Također, studija nije indicirana za trudnice ako oba roditelja imaju negativan Rh faktor – nasljednu recesivnu osobinu. Dijete u takvim parovima uvijek ima Rh-negativnu krv, nemoguć je imunološki sukob s majkom. Kod hemolitičkih patologija, antiglobulinski test se ne koristi za praćenje uspješnosti terapije, jer rezultati ne odražavaju aktivnost procesa uništavanja crvenih krvnih stanica.

Ograničenje Coombsovog testa je mukotrpnost istraživačkog postupka - da bi se dobili pouzdani rezultati, potrebno je pridržavati se temperaturnih i vremenskih uvjeta, pravila za pripremu reagensa i biomaterijala. Prednosti Coombsovog testa uključuju njegovu visoku osjetljivost. Kod hemolitičke anemije, rezultati ovog testa ostaju pozitivni, čak i ako se normalizuju nivoi hemoglobina, bilirubina i retikulocita.

Priprema za analizu i prikupljanje materijala

Materijal koji se koristi za izvođenje Coombsovog testa je venska krv. Ne postoje posebni zahtjevi za vrijeme uzimanja uzorka krvi i za pripremu pacijenta. Kao i kod svake studije, preporučuje se da napravite pauzu nakon jela od najmanje 4 sata, a prestanete pušiti u posljednjih 30 minuta. fizička aktivnost, izbjegavajte emocionalni stres. Također je vrijedno unaprijed razgovarati sa svojim liječnikom o potrebi prestanka uzimanja lijekova - neki lijekovi mogu iskriviti rezultate Coombsovog testa. Krv se uzima štrcaljkom iz kubitalne vene, rjeđe iz vene dalje stražnja stranačetke U roku od nekoliko sati materijal se dostavlja u laboratoriju.

Prilikom izvođenja direktnog Coombsovog testa, serumu krvi pacijenta dodaje se antiglobulinski serum. Nakon nekog vremena, smjesa se ispituje na prisustvo aglutinata - oni nastaju ako postoje antitijela na crvenim krvnim zrncima. Ako je rezultat pozitivan, određuje se titar aglutinacije. Indirektni Coombsov test se sastoji od više koraka. Prvo, antitela prisutna u serumu se fiksiraju na ubrizganim crvenim krvnim zrncima tokom inkubacije. Zatim se uzorku dodaje antiglobulinski serum, nakon nekog vremena utvrđuje se prisustvo i titar aglutinata. Period analize je 1 dan.

Normalni rezultati

Obično je rezultat direktnog Coombsovog testa negativan (-). To znači da u krvi ne postoje antitijela povezana s crvenim krvnim zrncima i ne mogu izazvati hemolizu. Normalan rezultat indirektnog Coombs testa je također negativan (-), odnosno nema antitijela na Rh faktor u krvnoj plazmi. Prilikom pripreme za transfuziju krvi za primaoca, to znači kompatibilnost sa krvlju davaoca pri praćenju trudnoće, to znači odsustvo Rh senzibilizacije majke, nizak rizik od razvoja imunološkog konflikta. Fiziološki faktori, kao što su prehrambene navike ili fizička aktivnost, ne može uticati na rezultat testa. Stoga, ako je rezultat pozitivan, potrebna je konsultacija s liječnikom.

Dijagnostička vrijednost analize

Pozitivan rezultat Coombs testa izražava se kvalitativno, od (+) do (++++), ili kvantitativno, titrima od 1:16 do 1:256. Određivanje koncentracije antitijela na eritrocitima iu krvnom serumu vrši se u oba tipa uzoraka. Ako je direktni Coombsov test pozitivan, na vanjskoj membrani crvenih krvnih zrnaca otkrivaju se antitijela koja dovode do uništenja ovih krvnih stanica. Uzrok može biti transfuzija krvi bez prethodne tipizacije - posttransfuzijska hemolitička reakcija, kao i eritroblastoza novorođenčeta, hemolitička reakcija zbog upotrebe lijekova, primarna ili sekundarna autoimuna hemolitička anemija. Sekundarna destrukcija crvenih krvnih zrnaca može biti uzrokovana sistemskim eritematoznim lupusom, Evansovim sindromom, Waldenstromovom makroglobulinemijom, paroksizmalnom hladnom hemoglobinurijom, hroničnom limfocitnom leukemijom, limfomom, infektivnom mononukleozom, sifilisom, mikoplazma pneumoplazmama.

Pozitivan rezultat indirektnog Coombs testa ukazuje na prisustvo antitijela na Rh faktor u plazmi. U praksi to znači da je došlo do Rh senzibilizacije, te postoji mogućnost razvoja Rh konflikta nakon infuzije donorske krvi tokom trudnoće. Kako bi se spriječile komplikacije trudnoće, žene s pozitivnim rezultatom Coombs testa stavljaju se u poseban registar.

Liječenje abnormalnosti

Coombsov test se odnosi na izoserološke studije. Njegovi rezultati omogućavaju identifikaciju hemolitičke reakcije, kao i utvrđivanje kompatibilnosti krvi davaoca i primaoca, majke i fetusa, kako bi se spriječio razvoj Rh konflikta. Ako je rezultat testa pozitivan, tada trebate potražiti savjet od svog liječnika - akušera-ginekologa, hematologa, kirurga.

Antiglobulinski test, dizajniran za otkrivanje nepotpunih anti-eritrocitnih antitijela, predložili su Coombs, Morant, Reis 1945. godine, a kasnije je nazvan Coombsov test. Suština ovu metodu je da antiglobulinski serum koji sadrži antitijela na humane imunoglobuline, kada reagira sa crvenim krvnim stanicama senzibiliziranim nepotpunim antitijelima, dovodi do njihove aglutinacije.

Ovisno o tome da li su antitijela fiksirana na površini crvenih krvnih stanica ili su unutra slobodna država u krvnoj plazmi, direktno ili indirektni uzorak Coombs.

Direktan Coombsov test se izvodi u slučajevima kada postoji razlog za pretpostavku da su crvena krvna zrnca koja se proučavaju već in vivo su senzibilizirani odgovarajućim antitelima, tj. Prva faza reakcije - fiksacija antitijela na površini crvenih krvnih zrnaca - nastupila je u tijelu, a naknadno dodavanje antiglobulinskog seruma uzrokuje aglutinaciju senzibiliziranih stanica.

Koristeći indirektni Coombs test, otkrivaju se nepotpuna antitijela prisutna u test serumu. IN u ovom slučaju reakcija se odvija u dvije faze. Prva faza je inkubacija test eritrocita sa test serumom, tokom koje se antitela sadržana u uzorku test seruma fiksiraju na površinu eritrocita. Drugi korak je dodavanje antiglobulinskog seruma.

Do sada se Coombsov test široko koristi u laboratorijskoj praksi za dijagnozu imunopatoloških stanja, posebno kod autoimune hemolitičke anemije, koju karakterizira uništavanje crvenih krvnih stanica zbog vezivanja stanične membrane sa antitelima i (ili) komponentama sistema komplementa. Koristi se za otkrivanje prisustva Ig G na membrani eritrocita (obično Ig G1 i Ig G3), koji može aktivirati komplement, a ponekad i komplement (C3d). Međutim, u akutni period bolesti usled uništavanja crvenih krvnih zrnaca, na kojima je zabeležen veliki broj antitela, tokom hemolitičke krize, kao i kod nedovoljnog broja antitela tokom hronični tok bolesti, može se uočiti negativan direktni Coombsov test.

Mora se naglasiti da ostaje indirektni Coombsov test najbolja metoda individualni odabir transfuzijskih medija, jer vam omogućava da najtočnije odredite individualnu kompatibilnost donora i primatelja prema antigenima eritrocita.

Dodatni direktni antiglobulinski test na prisustvo autoantitijela preporučuje se kada se pregledaju svi primaoci organa i tkiva u pretransplantacijskom periodu i primaoci hematopoetskih matičnih ćelija također nakon transplantacije.

Pored imunohematologije i transfuziologije, antiglobulinski testovi se široko koriste u dijagnostici niza patoloških stanja: hematoloških bolesti, uključujući limfoproliferativne bolesti, sistemske bolesti vezivno tkivo, Sjogrenova bolest, hronični aktivni hepatitis itd.

Coombsovi testovi se aktivno koriste u medicinskoj genetici i sudskoj medicini za određivanje površinskih antigena eritrocita.

Coombsov test je prilično radno intenzivna istraživačka metoda koja zahtijeva posebnu pažnju u svojoj provedbi. Kada se koristi, postoje neke poteškoće povezane, posebno s tumačenjem slabo pozitivnih reakcija. Poznato je da su lažni slabi pozitivni ili negativne reakcije pri izvođenju Coombsovih testova mogu biti posljedica nedovoljno efikasnog ispiranja crvenih krvnih zrnaca, neutralizacije antiglobulinskog reagensa tragovima seruma, kao i kontakta sa nemasnom površinom na kojoj se antiglobulin može fiksirati, čime se gubi aktivnost . Još jedan nedostatak Coombsovog testa je nestabilnost antiglobulinskog reagensa, čija priprema i skladištenje ima određene karakteristike, što takođe otežava kvantifikaciju reakcije hemaglutinacije sa antiglobulinskim serumom.

Osim toga, studije koje su sproveli A. Holburn, D. Voak i dr. , pokazalo je da uzrok lažno negativnih rezultata može biti pretjerano drhtanje pri resuspendiranju suspenzije crvenih krvnih zrnaca. Pogrešni rezultati pri izvođenju antiglobulinskih testova mogu biti uzrokovani i prisustvom u antiglobulinskom reagensu mješavine antikomplementarnih antitijela, posebno komponenti C3d-, C3c-, C4c- i C4d- komplementa, koje se adsorbiraju na površini testirati crvena krvna zrnca tokom inkubacije i stvoriti izgled pozitivnog rezultata.

Ovi nedostaci se mogu lako eliminisati temeljnim pranjem ispitivanih uzoraka i praćenjem reakcionih uslova.

U posljednjoj deceniji, izotonični fiziološki rastvor niske jonske snage (LISS) korišten je za smanjenje vremena potrebnog za izvođenje indirektnog Coombsovog testa i povećanje njegove osjetljivosti.

Neosporna prednost antiglobulinskih testova, prema brojnim autorima, je njihova visoka osjetljivost, koja znatno premašuje njihovu rezoluciju. alternativne metode testovi koji se koriste za otkrivanje neaglutinirajućih antitijela.

Usporedili smo rezoluciju metoda za proučavanje krvnih seruma na prisustvo nekompletnih antitijela korištenjem poliglucinskog, želatinskog i antiglobulinskog seruma. Tokom studije, titri nepotpunih anti-D antitijela su praćeni u 140 uzoraka seruma krvi od izoimunih davalaca pomoću želatinskih, poliglukinskih i indirektnih antiglobulinskih testova. Formulacija ovih metoda je izvršena u skladu sa opšteprihvaćene metode.

Utvrđeno je da su metode za otkrivanje senzibilizacije eritrocita anti-D antitijelima, u smislu rezolucije, raspoređene na sljedeći način: najosjetljiviji je indirektni Coombsov test, zatim želatinozni test, a najmanje informativan poliglucinski test. Rezultati dobijeni u ovoj seriji eksperimenata u potpunosti odgovaraju podacima iz literature, što nam omogućava da zaključimo visoki nivo osjetljivost Coombsovih testova, što omogućava da se sa visokim stupnjem sigurnosti identificira prisustvo u tijelu anti-eritrocitnih antitijela koja ne izazivaju aglutinaciju crvenih krvnih zrnaca.

Međutim, kada se u praksi izvode Coombs testovi, postoje slučajevi kada se ne otkriju nekompletna antitijela, iako klinička slika bolesti ili prethodna imunizacija ukazuje na njihovo moguće prisustvo. U takvim slučajevima može se pretpostaviti da je količina antitijela nedovoljna da bi se istaložila antitijelima antiglobulinskog seruma.

Ovaj zaključak je potvrđen i vlastitim eksperimentom, u kojem je metodom analitičke mikroelektroforeze ćelija utvrđeno prisustvo anti-D antitijela na test eritrocitima, koja nisu otkrivena indirektnim Coombsovim testom. U ovoj seriji eksperimenata, antiglobulinski serum je dodat eritrocitima prethodno inkubiranim sa serumima dobijenim iz krvi imuniziranih donora tokom perioda antitjeloogeneze u toku, tj. tokom perioda kada u njima nisu otkrivena antitijela poznatim metodama, uključujući Coombsov test.

U sprovedenim studijama, statistički dokazi o prisustvu nekompletnih antitela na površini eritrocita su značajna promjena veličina elektroforetske pokretljivosti senzibiliziranih crvenih krvnih zrnaca nakon dodavanja antiglobulinskog seruma. Treba napomenuti da su anti-D antitijela naknadno određena kod svih imuniziranih donora indirektnim Coombsovim testom u krvnom serumu.

Gillerand et al. također su pokazali da antiglobulinske testove karakterizira određeni prag osjetljivosti: pozitivan rezultat se bilježi samo kada se na površini jednog crvenog krvnog zrnca zabilježi najmanje 500 Ig G molekula.

Osim toga, literatura pruža dokaze da mogući negativni rezultat Coombsovog testa može biti povezan s niskim afinitetom antitijela koja senzibiliziraju crvena krvna zrnca, zbog čega lako eluiraju s površine crvenih krvnih zrnaca tokom procesa pranja. .

Uzimajući u obzir gore navedeno, možemo zaključiti da u nekim slučajevima negativan rezultat Coombsovog testa još nije dokaz odsustva antitijela fiksiranih na površini crvenih krvnih zrnaca.

Poznato je da su Coombsove reakcije vrlo specifične i mogu otkriti većinu vrsta nepotpunih antitijela. Međutim, kako pokazuju neki eksperimentalni podaci, antiglobulinski testovi mogu biti pozitivni i u neimunološkim stanjima. E. Muirhead et al. drugog dana nakon primjene fenilhidrazina psima, uočen je pozitivan Coombsov test. Ovako brza pojava pozitivne reakcije je u suprotnosti sa njenom imunološkom prirodom i, prije, povezana je s nespecifičnom adsorpcijom proteina na površini eritrocita.

M. Williams et al. utvrdili da klavulanska kiselina može izazvati i pozitivnu reakciju, koja je, prema autorima, povezana s nespecifičnom adsorpcijom proteina plazme na površini eritrocita. Sličan efekat je uočen i tokom lečenja cefalosporinskim antibioticima.

Autori navedenih studija naglašavaju neimunološku prirodu pozitivnih rezultata Coombsovih testova i insistiraju na tome da su ove supstance sposobne da izazovu modifikaciju membrana crvenih krvnih zrnaca, usled čega crvena krvna zrnca mogu da adsorbuju proteine ​​(u posebno albumin) koji su normalno prisutni u krvnoj plazmi i nemaju svojstva antitijela. Osim toga, moguće je da ksenobiotik, adsorbiran na površini stanice, služi kao veza između stanične membrane i proteina plazme.

Za pravilno tumačenje rezultata antiglobulinskih testova treba uzeti u obzir i kvantitativni odnos mladih i zrelih crvenih krvnih zrnaca u perifernoj krvi. Utvrđeno je da se retikulociti izolovani iz organizma tokom perioda pojačane regeneracije eritrona mogu aglutinirati antiglobulinskim serumom.

Pozitivan rezultat direktnog antiglobulinskog testa Javlja se i kod raznih patoloških stanja praćenih poremećajima imunološki sistem, upalnih procesa, što dovodi do nespecifične adsorpcije antitijela različitih specifičnosti na membranama eritrocita. Ovo sugerira da molekuli Ig G ne stupaju u interakciju sa specifičnim antigenima eritrocita, već su samo fiksirani na površini stanica koje se proučavaju.

Treba uzeti u obzir da pri izvođenju Coombsovog testa u slučajevima bolesti koje karakterizira razvoj disproteinemije ili pojava paraproteina, pozitivan rezultat je zbog prisustva na površini eritrocita proteina koji nemaju svojstva antitela, što takođe ukazuje na nedostatak specifičnosti antiglobulinskih testova u pogledu prirode proteina otkrivenog uz njihovu pomoć.

Dakle, kako su pokazala brojna istraživanja, pozitivni rezultati direktni i indirektni antiglobulinski testovi nisu apsolutni dokaz prisustva antitela, jer pozitivne reakcije također se može primijetiti u različitim patološkim stanjima koja nisu povezana s izosenzibilizacijom ili autosenzibilizacijom tijela. Stoga, samo poređenje rezultata nekoliko imunoseroloških metoda sa kliničku sliku bolesti nam omogućava da u potpunosti procijenimo patološki proces u razvoju.

Pozitivan indirektni antiglobulinski test sa negativnim direktnim testom obično ukazuje na prisustvo slobodnih aloantitijela u test serumu, povezanih s prethodnim transfuzijama krvi ili trudnoćama.

Coombsov test je često pozitivan tokom egzacerbacije paroksizmalne noćne hemoglobinurije; pozitivan Coombsov test sa anti-C3 i anti-C3dg je marker bolesti hladnog aglutinina.

U slučajevima kada postoji visok rizik od razvoja hemolitičke bolesti novorođenčeta, veliki značaj Za postavljanje dijagnoze (najčešće u trudnoći) i, po potrebi, dinamičko praćenje pojave i promjene titra antitijela, imaju se rezultati direktnih i indirektnih antiglobulinskih testova. Hemolitička bolest novorođenčadi najčešće je povezana sa nekompatibilnošću majke i fetusa sa antigenom D, ređe sa antigenima AB0 sistema, a još ređe sa drugim antigenima (C, c, K itd.). Antitela nastaju tokom ovog procesa La, kao po pravilu nepotpuna antitijela Ig G klase, jasno se otkrivaju u indirektnom antiglobulinskom testu. Kod ove bolesti od velikog je značaja tačno utvrđen titar i specifičnost identifikovanih antitela, jer postoji određena korelacija između nivoa antieritrocitnih antitela u krvi trudnice i moguća prognoza ozbiljnosti hemolitičke bolesti.

Indirektni Coombsov test je također neophodan u kliničku praksu kako bi se osigurala sigurna transfuzijska terapija. Njegova implementacija je obavezna komponenta imunohematoloških studija davalaca i različitih kategorija primatelja, kao i rutinskih pregleda svih pacijenata u zdravstvenim ustanovama kod kojih može biti potrebna transfuzija krvi i njenih komponenti.

Indirektni antiglobulinski test koristi se u sljedećim slučajevima:

Za preciznije određivanje Rh pripadnosti (antigen D) u slučaju nejasnih rezultata određivanja Rh faktora drugim metodama (poliglucin, želatin, itd.);

Identifikovati slabe antigene eritrocita (Kell, Duffy, Kidd, Lewis, itd. sistemi) i antitela na ove antigene;

Za detekciju i identifikaciju aloimunih antieritrocitnih antitijela, uključujući antitijela koja uzrokuju hemolitičke posttransfuzijske reakcije;

Odrediti prisustvo imunoloških antitela AB0 sistema tokom transfuzijskih hemolitičkih komplikacija;

Kao test kompatibilnosti za individualnu selekciju transfuzirane krvi i njenih komponenti.

Stoga je Coombsov test važan dijagnostički test koji se koristi u različitim oblastima medicine (hematologija, akušerstvo, reumatologija, transfuziologija, klinička i laboratorijska dijagnostika itd.). Poznavanje posebnosti izvođenja Coombsovog testa pomoći će povećanju pouzdanosti dobijenih rezultata i doprinijet će ispravnoj interpretaciji laboratorijskih podataka.

Književnost

1. Antitela. Metode / ur. D. Katie. - M.: Mir, 1991.

2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadzhiev A.B.. // Transfuzijska terapija anemije: udžbenik. priručnik za ljekare. — M.: Prakt. Medicina, 2005. - S. 105-106.

3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfuziologija. - 2006. - br. 2. - str. 39-62.

4. Donskov S.I.// Krvne grupe rezus sistema: teorija i praksa. - M.: VINITI RAS, 2005. - P. 180-186, 195.

5.imunoserologija ( pravila) / komp. A.G. Bashlay, S.I. Donskov. - M.: VINITI RAS, 1998.

6.Proučavanje krvnog sistema u kliničkoj praksi / ur. G.I. Kozinets, V.A. Makarova. - M.: Trijada-X, 1997.

7. Levin V.I.. O mehanizmu eritrodiereze i eritropoeze u periodu akutne posthemoragijske anemije: sažetak. dis. ...cand. med. Sci. - Minsk, 1968.

8. Ragimov A.A., Bayramalibeyli I.E.. // Osnove dijagnoze, prevencije i liječenja anemije. - M.: GOU VUNMC Ministarstvo zdravlja Ruske Federacije, 2002. - P. 204-209.

9. Čumakova E.D.. // Stvarni problemi hematologija i transfuziologija: zbornik radova VI Kongresa hematologa i transfuziologa Republike Belorusije, Minsk, 24-25. maja 2007. / ur. A.I. Svirnovsky, M.P. Potapneva. - Minsk: Republički naučno-praktični centar za hematologiju i transfuziologiju, 2007. - S. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lancet. - 1945. - Vol. 2. - str. 15.

11. Freedman J. // J. Clin. Pathol. - 1979. - Vol. 32. - P. 1014-1018.

12. Holburn A.M.. Kontrola kvaliteta. Metode u hematologiji/ur. I. Cavill. - Edinburgh: Churchill Livingstone, 1982. - Vol. 4. - P. 34-50.

13. Khan S.// CMAJ. - 2006. - Vol. 175, N 8. - Str. 919.

14. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (dodatak 7). - P. 719-721.

15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (dodatak 7). - P. 716-718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// New Engl. J. Med. —1976. - Vol. 277. - P. 123-125.

17. Muirhead E.E., GrovesM., Brian S. // J. Lab. Clin. Med. —1954. - Vol. 44. - P. 902-903.

18. Rosse W.F.//Hosp. Prac. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., MooreB. et al. //Biotests Bull. - 1986. - Vol. 1. - P. 41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. et al. Mašine za pranje ćelija za antiglobulinske testove. Ponovljeno testiranje - nova metoda koja pokazuje neefikasnost jedne široko korišćene mašine - Sorvall CW1-AF2: izveštaj tehničkom ogranku DHSS, februar 1991.

21. Williams M.E., Thomas D., Harman C.P.. et al. //Antimikrobna sredstva i kemoterapija. —1985. - P. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H.. // CMAJ. - 2006. - Vol. 174, N 3. - P. 305-307.

Medicinske vijesti. - 2008. - br. 3. - str. 33-36.

Pažnja! Članak je namijenjen medicinskim specijalistima. Ponovno štampanje ovog članka ili njegovih fragmenata na Internetu bez hiperveze na izvor smatra se kršenjem autorskih prava.

Od mnogih postojećih antigena u medicinskoj praksi najveća vrijednost fokusira se na tri vrste aglutinogena u krvi. Jedan od njih je tip odgovoran za ispoljavanje Rh faktora: ako je prisutan na membrani eritrocita, krvna grupa se dijagnosticira kao Rh+, ako je odsutna - Rh-. Ako eritrociti s Rh+ aglutinogeni uđu u Rh negativnu krv, tijelo pokreće imunološki odgovor i počinje proizvoditi antitijela na ovaj antigen, što uzrokuje patološka stanja.

REFERENCA! Rh faktor je složen višekomponentni sistem od nekoliko desetina antigena. Najčešći od njih su aglutinogeni tipa D (85% slučajeva), kao i E i C.

Coombsov test se izvodi samo ako postoje direktni dokazi. Opća lista razloga za propisivanje Coombsovog testa:

• planiranje i vođenje trudnoće (roditelji imaju različit Rh);
• darivanje i priprema za transfuziju krvi (neusklađenost krvi prema Rh nije ništa manje destruktivna od nepodudaranja po sistemu AB0);
• planirano hirurška intervencija(u slučaju nadoknade gubitka krvi transfuzijom krvi);
• dijagnoza hemolitičkih bolesti.

Specifičnije indikacije zavise od vrste studije koja se izvodi.

Direktni Coombsov test

Direktan test otkriva antitijela na površini crvenih krvnih stanica. Ovo je neophodno za dijagnosticiranje postojećeg hemolitičke patologije:

• autoimune (crvena krvna zrnca i hemoglobin su uništeni kao rezultat napada vlastitih antitijela);
• ljekovito ( patološki proces izaziva upotrebu određenih lijekova kao što su kinidin ili prokainamid);
• nakon transfuzije (ako se krvna grupa ne poklapa tokom transfuzije), kao i u obliku Rh konflikta tokom trudnoće (eritroblastoza novorođenčadi).

REFERENCA! Hemolitička anemija je bolest povezana s preranim uništavanjem crvenih krvnih stanica kao rezultatom hemolize, što dovodi do nedovoljne zasićenosti krvi kisikom i hipoksije mozga i/ili unutarnjih organa.

Hemoliza krvnih elemenata uočava se kod onkoloških, infektivnih i reumatskih bolesti, pa se direktni Coombsov test može koristiti kao dodatni dijagnostički alat patološko stanje. Vrijedi zapamtiti: negativna vrijednost testa ne isključuje mogućnost hemolize, ali je razlog za dodatni pregled.

Indirektni Coombsov test

Indirektno testiranje se češće koristi za prevenciju patoloških situacija. Pomaže u otkrivanju antitijela u krvnoj plazmi, što je neophodno za procjenu transfuzijske kompatibilnosti i dijagnosticiranje rizika od Rh konflikta tokom trudnoće.

Više od 80% ljudi ima pozitivan Rh faktor (Rh+), respektivno, nešto manje od 20% je Rh negativno. Ako Rh- majka razvije Rh+ dijete, njeno tijelo počinje proizvoditi antitijela koja napadaju crvena krvna zrnca fetusa, uzrokujući hemolizu.

Uzimajući u obzir činjenicu da postotak "različitih rezus" brakova dostiže 12-15%, rizik od hemolitičke bolesti novorođenčadi trebao bi biti visok, ali u stvarnosti samo u 1 od 25 takvih slučajeva žene doživljavaju fenomen senzibilizacije. (za 200 uspješnih porođaja postoji 1 primjer hemolitičke patologije). To je dijelom zbog činjenice da prvo Rh-pozitivno dijete obično ne izaziva otvorenu agresiju iz majčinog tijela; Velika većina slučajeva javlja se kod druge i sljedeće djece. Primjenjuje se isti princip kao i kod konvencionalne senzibilizacije na određeni alergen.

Pri prvom kontaktu nema reakcije. Tijelo se tek upoznaje sa novim antigenom, koji proizvodi antitijela klase IgM, koja su odgovorna za brzi imunološki odgovor, ali rijetko prodiru kroz placentnu barijeru u krv djeteta. Sve patološke reakcije se manifestiraju na drugom „sastanku“, kada tijelo počinje proizvoditi antitijela klase IgG koja lako prodiru u fetalni krvotok, započinjući proces hemolize.

Indirektni Coombs test tokom trudnoće omogućava vam da otkrijete prisustvo antitijela u majčinom tijelu i pravovremeno identificirate početnu fazu senzibilizacije. Za pozitivan odgovor potrebna je registracija uz mjesečni test titra antitijela i obavezna hospitalizacija 3-4 sedmice prije rođenja.

REFERENCA! Inkompatibilnost Rh faktora ni na koji način ne utiče na stanje majke; U teškim slučajevima i u nedostatku pravovremene reakcije, fetus može umrijeti u maternici ili odmah nakon rođenja.

Priprema za postupak i njegovo sprovođenje

Za dijagnozu se koristi venska krv. Za Coombsov test nije potrebna posebna dugoročna priprema. Pokušajte slijediti standardni skup pravila prije uzimanja krvi iz vene za analizu:

• odustati od alkohola 3 dana, lijekovi(ako je moguće);
• Planirajte svoj posljednji obrok kasnije od 8 sati prije uzimanja krvi na analizu;
• u roku od 1 sata prestati pušiti, fizički, mentalni i emocionalni stres;
• Prije zahvata popijte čašu čiste negazirane vode.

Metoda istraživanja zasniva se na reakciji hemaglutinacije.

Prilikom izvođenja direktnog testa uzorak krvi se izlaže prethodno pripremljenom antiglobulinskom serumu sa poznatim indikatorima, smjesa se drži neko vrijeme i provjerava da li ima aglutinata, koji nastaju kada su antitijela prisutna na crvenim krvnim zrncima. Nivo aglutinata se dijagnosticira pomoću aglutinirajućeg titra.

Indirektni uzorak Coombs ima sličnu tehniku, ali složeniji slijed radnji. U izdvojeni krvni serum unose se antigeni eritrociti (sa Rh faktorom), a tek nakon ovih manipulacija se dodaje antiglobulinski serum za dijagnostiku i aglutinacijski titar.

Rezultati istraživanja

Normalno i ravno i indirektni Coombsov test treba dati negativan rezultat:

• negativan direktni test ukazuje na to da su u krvi odsutna specifična antitijela na Rh faktor povezan s crvenim krvnim zrncima i ne mogu uzrokovati hemolizu
• negativan indirektni test pokazuje da u krvnoj plazmi nema slobodnih antitijela na Rh faktor; ova činjenica ukazuje na kompatibilnost krvi davaoca sa krvlju primaoca (ili krvlju majke i djeteta) prema Rh faktoru.

Pozitivan Coombsov test ukazuje na činjenicu Rh senzibilizacije tijela, tj glavni razlog Rh konflikt u slučaju transfuzije krvi ili kada nosite dijete s drugačijim Rh statusom. U tom slučaju rezultati ostaju nepromijenjeni 3 mjeseca (životni vijek crvenih krvnih zrnaca). Ako je uzrok autoimuna hemolitička anemija, onda pozitivan test može pratiti pacijenta nekoliko godina (u nekim slučajevima i cijeli život).

REFERENCA! Antiglobulinski test je drugačiji visoka osjetljivost, ali ima malo informativnog sadržaja. Ne bilježi aktivnost hemolitičkog procesa, ne određuje vrstu antitijela i nije u stanju identificirati uzrok patologije. Da biste dobili potpuniju sliku, ljekar koji prisustvuje mora propisati dodatna istraživanja(mikroskopija krvi, opšta i biohemijske analize, reumatske testove, ESR, nivoe gvožđa i feritina).

Stepen senzibilizacije može se izraziti kvalitativno (od “+” do “++++”) ili kvantitativno u obliku titra:

• 1:2 - niska vrijednost, ne predstavlja opasnost;
• 1:4 - 1:8 - početak razvoja imunološke reakcije; ne predstavlja opasnost, ali zahtijeva stalno praćenje;
• 1:16 -1:1024 - jak oblik senzibilizacije, treba odmah preduzeti akciju.

Razlog pozitivan test Ja mogu biti:

• transfuzija netipizirane krvi (ili sa greškom u tipkanju), kada se Rh faktor donora i primaoca ne poklapa;
• Rh konflikt tokom trudnoće (ako se sastav krvnih antigena kod oca i majke ne poklapa);
• autoimuna hemolitička anemija – i kongenitalna (primarna) i sekundarna, koja je posljedica određenih bolesti (Evansov sindrom, infektivna pneumonija, sifilis, hladna hemoglobinurija, limfom);
• hemolitička reakcija na lijek.

Nijedan od gore navedenih problema pacijent ne može riješiti bez medicinsku njegu. U svim slučajevima bit će potrebna hitna konsultacija, registracija ili hitna hospitalizacija.

PAŽNJA! U rijetkim slučajevima moguć je lažno pozitivan Coombsov test. Razlog tome mogu biti česte transfuzije krvi, kao i niz bolesti: reumatoidni artritis, eritematozni lupus, sarkoidoza. Ova pojava se može uočiti i nakon uklanjanja slezine, kao i kada je reakcija poremećena (često mućkanje sadržaja, prisustvo kontaminanata).

Coombsov test je metoda laboratorijska istraživanja, napravljen utjecanjem na hemaglutinaciju. Zasniva se na osjetljivosti antitijela na imunoglobuline i enzimske elemente, kao i na njihovoj sposobnosti da aglutiniraju eritrocite obložene C3 ili Lg.

Direktna Coombsova dijagnoza

Koristi se za otkrivanje antitijela ili komponenti komplementa instaliranih na vanjskoj strani ćelija. Direktni Coombsov test se izvodi na sljedeći način.

Upotreba takvog uzorka

Direktna Coombsova dijagnoza se koristi u određenim slučajevima, kao što su:

• efekti transfuzije;
• autoimuna hemoliza;
• hemolitička anemija uzrokovana lijekovima.

Indirektni Coombsov test

Ova dijagnoza omogućava otkrivanje antitijela na stanice u serumu, koji se u pravilu inkubira s donorskim crvenim krvnim zrncima tipa 0, a zatim se provodi direktan test. Prijavite se indirektna dijagnozaČetalj u sljedećim slučajevima:

Kako se pripremiti za analizu

Postoje neka pravila za pripremu ispita.

1. Ako je pacijent novorođenče, roditelji moraju biti svjesni da će test pomoći u dijagnosticiranju hemolitičke bolesti novorođenčeta.
2. Ukoliko pacijent sumnja na hemolitičku anemiju, treba mu objasniti da će mu analiza omogućiti da se utvrdi da li je uzrokovana zaštitnim poremećajima, lijekovima ili drugim faktorima.
3. Coombsov test, direktan i indirektan, ne postavlja nikakva ograničenja u ishrani ili prehrani.
4. Potrebno je obavijestiti pacijenta da će pregled zahtijevati vađenje krvi iz vene, te mu reći kada će se tačno izvršiti venepunkcija.
5. Također biste trebali biti upozoreni na mogućnost nelagodnost tokom perioda stavljanja zavoja na ruku i samog zahvata.
6. Lijekove koji mogu utjecati na rezultate uzorka treba prekinuti.

Ovi lijekovi uključuju:

• "Streptomicin";
• "Metildopa";
• "Prokainamid";
• sulfonamidi;
• "Melphalan";
• "Kinidin";
• "Rifampin";
• "Izoniazid";
• cefalosporini;
• "Hydralazine";
• "Klorpromazin";
• "Levodopa";
• "Tetraciklin";
• "Difenilhidantoin";
• "Etosuksimid";
• "Penicilin";
• mefenaminska kiselina.

Uzimanje krvi se radi ujutro na prazan želudac.

Kako se događaj održava

Coombsov test se provodi sljedećim redoslijedom:

1. Prilikom dijagnostike kod odraslog pacijenta, nakon punkcije vene, krv se uzima u epruvete sa EDTA (etilendiamintetraacetat).
2. Krv novorođenčeta se vadi iz pupčane vrpce u čašu koja sadrži EDTA.
3. Područje uboda se pritisne pamučnim štapićem dok krvarenje ne prestane.
4. Ako se na mjestu uboda vene pojavi modrica, propisuju se topli oblozi.
5. Nakon uzimanja krvi, pacijentu je dozvoljeno da se vrati uzimanju lijekova.
6. Potrebno je obavijestiti roditelje novorođenčeta da može biti potrebna sekundarna analiza za praćenje dinamike anemije.

Prednosti Coombsovog testa

Takvo istraživanje ima neke prednosti, a to su:

Nedostaci analize

Pozitivan Coombsov test je prilično radno intenzivna metoda ispitivanja, koja zahtijeva karakterističnu točnost izvođenja. Prilikom njegove upotrebe možete naići na određene poteškoće, posebno vezane za interpretaciju slabo pozitivnih efekata.

Utvrđeno je da pogrešne negativne ili slabo pozitivne reakcije pri izradi Coombsovih testova mogu biti posljedica nezadovoljavajuće aktivnog ispiranja ćelija, slabljenja antiglobulinskog reagensa serumskim ostacima, kao i veze sa nemasnim površinama, na kojima antiglobulin može. pričvrstiti, čime gubi svoju efikasnost.

Coombsov test ima još jedan nedostatak - nisku stabilnost antiglobulinskog reagensa, čije stjecanje i skladištenje individualne karakteristike, što na sličan način otežava numeričku procjenu učinka antiglobulinskog seruma na hemaglutinaciju.

Bolesti koje se mogu otkriti tokom istraživanja

Coombsova dijagnostika omogućava otkrivanje određenih vrsta bolesti, kao što su:

• hemolitička slabost novorođenčeta;
• razne transfuzijske reakcije;
• autoimuna hemoliza;
• hemolitička anemija uzrokovana lijekovima.

Danas se Coombsov test smatra prilično popularnim sistemom za testiranje krvi i za odrasle i za novorođenčad. Omogućava prepoznavanje mnogih različitih bolesti.