Teknik reaksi Coombs tidak langsung. Metode penentuan golongan darah

- penelitian yang membantu mengetahui kandungan antibodi anti-eritrosit yang tidak lengkap dalam darah. Tes antiglobulin ini memungkinkan Anda mendeteksi antibodi pada wanita hamil.

Selain itu, memungkinkan untuk mendiagnosis anemia hemolitik pada bayi baru lahir dengan konflik Rh pada tahap awal. Ini membantu mencegah kerusakan sel darah merah yang diperlukan untuk pembentukan darah normal. Tes ini dibuat pada tahun 1945 oleh Robert Coombs, itulah sebabnya tes ini mendapatkan namanya.

Tes Coombs adalah tes serbaguna yang memungkinkan diagnosis gangguan hematopoietik secara tepat waktu baik pada orang dewasa maupun anak-anak.

Ada beberapa jenis tes berikut:

1. Tes Coombs langsung– memungkinkan Anda menentukan antibodi yang terletak di permukaan sel darah merah. Biasanya, penelitian semacam itu diresepkan untuk dugaan hemolisis, anemia hemolitik autoimun, atau penyakit autoimun lainnya. Selain itu, dilakukan setelahnya terapi obat obat-obatan berbahan dasar kina, penisilin atau metildopa, atau setelah transfusi darah. Untuk mendapatkan hasil yang lebih akurat, Anda harus benar-benar berhenti minum obat setidaknya 1 minggu sebelum penelitian.
2. Tes Coombs tidak langsung– tes yang dapat digunakan untuk mendeteksi antibodi anti-eritrosit dalam plasma. Biasanya dilakukan selama kehamilan dan sebelum transfusi darah. Antibodi anti-eritrosit muncul dalam darah seseorang selama sistem kekebalan reaktif atau sebagai reaksi terhadap obat-obatan tertentu. Untuk penelitian yang lebih akurat dilakukan beberapa pengambilan sampel sekaligus dengan selang waktu 2 jam.

Indikasi untuk digunakan

Tes Coombs dilakukan hanya jika terdapat indikasi serius. Ini adalah studi yang mahal dan memakan waktu, yang merupakan tes khusus.

Biasanya, situasi berikut dianggap sebagai indikasi penerapannya:

1. Selama transfusi darah. Tes ini memungkinkan Anda untuk menentukan apakah darah penerima akan berakar di tubuh manusia, serta apakah donor dapat dilakukan. Dalam hal ini perlu dilakukan kajian terhadap materi baik dari pihak pemberi maupun penerima. Penting untuk menentukan sifat antibodi, karena jika antibodi tersebut tidak cocok di dalam tubuh karena konflik Rh, sistem kekebalan akan hancur. Hal ini mengarah pada pembangunan penyakit serius, dan dalam kasus yang jarang terjadi bahkan kematian.
2. Sebelum operasi bila ada risiko kehilangan darah. Hal ini dilakukan agar dokter dapat segera memasukkan darah yang cocok untuk memulihkan kondisi tubuh.
3. Untuk mendeteksi sensitisasi Rh. Rhesus merupakan antigen spesifik yang muncul di tubuh setiap wanita selama kehamilan. Jika ibu memiliki Rh positif dan ayah memiliki Rh negatif, atau sebaliknya, tidak ada ketergantungan pada anak - ia dapat mewarisi siapa pun. Jika anak menerima rhesus yang berlawanan dari ibunya, maka terdapat risiko tinggi terjadinya sensitisasi. Fenomena ini ditandai dengan bercampurnya darah ibu dan anak. Hal ini dapat terjadi baik selama kehamilan maupun saat melahirkan.

Jika konflik Rhesus terjadi pada tubuh ibu hamil, maka sistem kekebalan tubuh ibu mulai menganggap janinnya sebagai lembaga asing. Karena itu, ada risiko tinggi dia akan mulai menyerangnya.

Sebagai akibat dari tindakan tersebut, bayi dapat mengalami patologi yang serius. Paling sering, eritroblastosis terjadi - sebuah fenomena di mana tubuh anak tidak dapat memproduksi cukup sel darah merah.

Selain itu, akibat konflik Rh, kematian janin dapat terjadi di dalam rahim atau segera setelah lahir. Pada pendekatan yang tepat Konsekuensi serius seperti itu dapat dengan mudah dihindari dengan pengobatan.

Penyimpangan dari norma

Jika tes Coombs positif, dokter menyimpulkan ada antibodi terhadap sel darah merah di serum darah. Artinya, darah donor mungkin tidak cocok dengan darah pasien.

Jika terdiagnosis hasil positif pada tubuh ibu hamil dengan darah Rh-negatif, maka tubuhnya mengandung antibodi terhadap darah janin.

Hal ini menunjukkan adanya konflik Rh, yang memerlukan pendekatan yang sangat hati-hati dalam menangani kehamilan dari pihak dokter, serta kepatuhan terhadap semua instruksi dan rekomendasi dari wanita tersebut.

Jika antibodi ada dalam darah anak, maka hal itu didiagnosis penyakit hemolitik bayi baru lahir. Dalam hal ini dilakukan penelitian ulang untuk mengetahui apakah terjadi peningkatan kadar antibodi dalam darah ibu hamil atau tidak.

Kemungkinan komplikasi dari tes Coombs

Tes Coombs adalah tes yang cukup aman yang memungkinkan untuk mendiagnosis sejumlah penyakit penyakit autoimun. Biasanya jarang menyebabkan komplikasi konsekuensi negatif berhubungan dengan pengambilan sampel darah.

Mereka:

• Pendarahan atau pendarahan di bawah kulit
• Pusing dan pingsan
• Infeksi menular

7 295

– tes antiglobulin yang bertujuan untuk mengidentifikasi antibodi anti-eritrosit yang tidak lengkap dalam darah Rh-negatif terhadap faktor Rh - protein spesifik yang terletak di permukaan eritrosit darah Rh-positif. Ada dua jenis tes ini: langsung - deteksi antibodi pada permukaan sel darah merah, tidak langsung - deteksi antibodi dalam serum darah. Pengujian langsung dilakukan dalam diagnosis dan pemantauan pengobatan penyakit darah: anemia hemolitik, penyakit hemolitik pada bayi baru lahir dan lain-lain. Tes tidak langsung dilakukan untuk menilai kesesuaian darah donor dan penerima selama transfusi, serta untuk mengetahui adanya dan risiko konflik Rh saat merencanakan dan mengelola kehamilan. Bahan uji Coombs adalah darah vena, penelitian dilakukan dengan menggunakan metode berdasarkan reaksi aglutinasi. Biasanya, kedua tes memberikan hasil negatif. Analisis selesai dalam satu hari.

Tes Coombs – uji klinis Darah Rh-negatif, bertujuan untuk mendeteksi antibodi terhadap faktor Rh. Tes ini digunakan untuk mengidentifikasi risiko berkembangnya konflik Rh dan reaksi hemolitik. Pada setiap orang, permukaan sel darah merah mengandung seperangkat antigen atau aglutinogen tertentu - senyawa yang sifatnya berbeda, ada atau tidaknya digunakan untuk menentukan golongan darah dan faktor Rh. Antigen ada banyak jenisnya, diantaranya praktek medis Aglutinogen A dan B, yang menentukan golongan darah, dan aglutinogen D, faktor Rh, adalah yang paling penting secara praktis. Dengan faktor Rh positif, antigen D terdeteksi pada membran luar eritrosit, tetapi dengan faktor Rh negatif, antigen D tidak terdeteksi.

Tes Coombs, juga disebut tes antiglobulin, bertujuan untuk mendeteksi antibodi anti-eritrosit yang tidak lengkap terhadap sistem faktor Rh dalam darah. Antibodi terhadap faktor Rh adalah imunoglobulin spesifik yang diproduksi dalam darah Rh-negatif ketika sel darah merah dengan aglutinogen D masuk ke dalamnya.Hal ini dapat terjadi ketika darah janin dan wanita hamil tercampur, selama transfusi darah dilakukan tanpa darah sebelumnya. mengetik. Tes Coombs ada dalam dua versi - langsung dan tidak langsung. Saat melakukan tes Coombs langsung, antibodi yang menempel pada permukaan sel darah merah terdeteksi. Penelitian ini digunakan untuk mengetahui penyebab reaksi hemolitik. Tes Coombs tidak langsung bertujuan untuk mendeteksi antibodi anti-eritrosit dalam plasma darah. Hal ini diperlukan untuk menentukan kesesuaian darah antara donor dan penerima atau ibu dan janin, dan membantu mencegah berkembangnya konflik Rh dan hemolisis sel darah merah selanjutnya.

Darah untuk kedua versi tes Coombs diambil dari vena. Analisis dilakukan dengan aglutinasi menggunakan serum antiglobulin. Hasil penelitian digunakan dalam hematologi untuk mengidentifikasi penyebab reaksi hemolitik, dalam pembedahan dan resusitasi saat melakukan transfusi darah, dalam bidang kebidanan dan ginekologi saat memantau kehamilan pada wanita dengan darah Rh-negatif.

Indikasi

Tes Coombs langsung, yang mendeteksi antibodi yang menempel pada permukaan sel darah merah, diresepkan untuk reaksi hemolitik (penghancuran sel darah merah) dari berbagai asal. Penelitian ini diindikasikan untuk anemia hemolitik autoimun primer, anemia hemolitik pasca transfusi, penyakit hemolitik pada bayi baru lahir, hemolisis eritrosit yang disebabkan oleh autoimun, tumor atau penyakit menular, serta resepsi obat, misalnya quinidine, metildopa, procainamide. Tes Coombs tidak langsung, yang menentukan antibodi dalam plasma darah, digunakan untuk mencegah perkembangan konflik Rh. Ini diindikasikan untuk pasien dalam persiapan untuk transfusi darah, serta untuk wanita hamil dengan faktor Rh negatif, asalkan calon ayah dari anak tersebut memiliki faktor Rh positif.

Untuk menentukan kompatibilitas Rh, tes Coombs tidak diresepkan untuk pasien dengan darah Rh-positif. Dalam kasus ini, antigen sudah terdapat pada permukaan sel darah merah, produksi antibodi tidak dapat dipicu oleh transfusi darah atau masuknya darah janin ke dalam aliran darah ibu hamil. Selain itu, penelitian ini tidak diindikasikan untuk wanita hamil jika kedua orang tuanya memiliki faktor Rh negatif - sifat resesif yang diturunkan. Anak dari pasangan seperti itu selalu memiliki darah Rh-negatif, konflik imunologis dengan ibu tidak mungkin terjadi. Dalam patologi hemolitik, tes antiglobulin tidak digunakan untuk memantau keberhasilan terapi, karena hasilnya tidak mencerminkan aktivitas proses penghancuran sel darah merah.

Keterbatasan uji Coombs adalah rumitnya prosedur penelitian - untuk mendapatkan hasil yang dapat diandalkan, perlu mematuhi kondisi suhu dan waktu, aturan untuk persiapan reagen dan biomaterial. Kelebihan tes Coombs antara lain sensitivitasnya yang tinggi. Pada anemia hemolitik, hasil tes ini tetap positif, meskipun kadar hemoglobin, bilirubin, dan retikulosit sudah normal.

Persiapan analisis dan pengumpulan bahan

Bahan yang digunakan untuk melakukan tes Coombs adalah darah vena. Tidak ada persyaratan khusus untuk waktu prosedur pengambilan sampel darah dan persiapan pasien. Seperti halnya penelitian lainnya, dianjurkan untuk istirahat setelah makan setidaknya selama 4 jam, dan berhenti merokok dalam 30 menit terakhir. aktivitas fisik, hindari stres emosional. Sebaiknya diskusikan terlebih dahulu dengan dokter Anda tentang perlunya berhenti minum obat - beberapa obat dapat merusak hasil tes Coombs. Darah diambil dengan jarum suntik dari vena cubiti, lebih jarang dari vena seterusnya sisi belakang kuas Dalam beberapa jam, bahan tersebut dikirim ke laboratorium.

Saat melakukan tes Coombs langsung, serum antiglobulin ditambahkan ke serum darah pasien. Setelah beberapa waktu, campuran diperiksa untuk mengetahui adanya aglutinat - mereka terbentuk jika ada antibodi pada sel darah merah. Jika hasilnya positif, ditentukan titer aglutinasinya. Tes Coombs tidak langsung terdiri dari beberapa langkah. Pertama, antibodi yang ada dalam serum difiksasi pada sel darah merah yang disuntikkan selama inkubasi. Kemudian serum antiglobulin ditambahkan ke sampel, setelah beberapa waktu keberadaan dan titer aglutinat ditentukan. Periode analisis adalah 1 hari.

Hasil biasa

Biasanya hasil tes Coombs langsung negatif (-). Artinya, tidak ada antibodi yang terkait dengan sel darah merah di dalam darah, dan tidak dapat menyebabkan hemolisis. Hasil normal tes Coombs tidak langsung juga negatif (-), yaitu tidak terdapat antibodi terhadap faktor Rh dalam plasma darah. Saat mempersiapkan transfusi darah bagi penerima, ini berarti kesesuaian dengan darah donor, saat memantau kehamilan, ini berarti tidak adanya sensitisasi Rh pada ibu, risiko rendah terjadinya konflik imunologis. Faktor fisiologis, seperti kebiasaan makan atau aktivitas fisik, tidak dapat mempengaruhi hasil tes. Oleh karena itu, jika hasilnya positif, perlu berkonsultasi dengan dokter.

Nilai diagnostik dari analisis

Hasil tes Coombs yang positif dinyatakan secara kualitatif, dari (+) hingga (++++), atau secara kuantitatif, dengan titer dari 1:16 hingga 1:256. Penentuan konsentrasi antibodi pada sel darah merah dan serum darah dilakukan pada kedua jenis sampel. Jika tes Coombs langsung positif, antibodi terdeteksi pada membran luar sel darah merah, yang menyebabkan kerusakan sel darah tersebut. Penyebabnya bisa berupa transfusi darah tanpa pengecekan terlebih dahulu - reaksi hemolitik pasca transfusi, serta eritroblastosis pada bayi baru lahir, reaksi hemolitik akibat penggunaan obat-obatan, autoimun primer atau sekunder. anemia hemolitik. Kerusakan sekunder sel darah merah dapat disebabkan oleh lupus eritematosus sistemik, sindrom Evans, makroglobulinemia Waldenström, hemoglobinuria dingin paroksismal, leukemia limfositik kronis, limfoma, mononukleosis menular, sifilis, pneumonia mikoplasma.

Hasil positif dari tes Coombs tidak langsung menunjukkan adanya antibodi terhadap faktor Rh dalam plasma. Dalam prakteknya, ini berarti telah terjadi sensitisasi Rh, dan ada kemungkinan berkembangnya konflik Rh setelah infus darah donor selama kehamilan. Untuk mencegah komplikasi kehamilan, wanita dengan hasil tes Coombs positif dimasukkan ke dalam register khusus.

Pengobatan kelainan

Tes Coombs mengacu pada studi isoserologis. Hasilnya memungkinkan untuk mengidentifikasi reaksi hemolitik, serta menentukan kompatibilitas darah donor dan penerima, ibu dan janin, untuk mencegah berkembangnya konflik Rh. Jika hasil tesnya positif, maka Anda perlu mencari nasihat dari dokter Anda - dokter kandungan-ginekologi, ahli hematologi, ahli bedah.

Tes antiglobulin, yang dirancang untuk mendeteksi antibodi anti-eritrosit yang tidak lengkap, diusulkan oleh Coombs, Morant, Reis pada tahun 1945 dan kemudian disebut tes Coombs. Intinya metode ini adalah serum antiglobulin yang mengandung antibodi terhadap imunoglobulin manusia, ketika bereaksi dengan sel darah merah yang disensitisasi dengan antibodi yang tidak lengkap, menyebabkan aglutinasinya.

Tergantung pada apakah antibodi menempel pada permukaan sel darah merah atau berada di dalam negara bebas dalam plasma darah, langsung atau sampel tidak langsung sisir.

Tes Coombs langsung dilakukan jika ada alasan untuk berasumsi bahwa sel darah merah yang diperiksa sudah ada secara alami telah disensitisasi dengan antibodi yang sesuai, yaitu fase pertama reaksi - fiksasi antibodi pada permukaan sel darah merah - terjadi di dalam tubuh dan penambahan serum antiglobulin selanjutnya menyebabkan aglutinasi sel yang peka.

Dengan menggunakan uji Coombs tidak langsung, antibodi tidak lengkap yang terdapat dalam serum uji dapat dideteksi. DI DALAM pada kasus ini reaksi terjadi dalam dua tahap. Tahap pertama adalah inkubasi eritrosit uji dengan serum uji, dimana antibodi yang terkandung dalam sampel serum uji difiksasi pada permukaan eritrosit. Langkah kedua adalah penambahan serum antiglobulin.

Hingga saat ini, uji Coombs banyak digunakan dalam praktik laboratorium untuk mendiagnosis kondisi imunopatologi, khususnya pada anemia hemolitik autoimun, yang ditandai dengan rusaknya sel darah merah akibat pengikatan. membran sel dengan antibodi dan (atau) komponen sistem komplemen. Digunakan untuk mendeteksi keberadaan Ig G pada membran eritrosit (biasanya Ig G1 dan Ig G3), yang dapat mengaktifkan komplemen, dan terkadang komplemen (C3d). Namun, di periode akut penyakit yang disebabkan oleh penghancuran sel darah merah, di mana sejumlah besar antibodi tercatat, selama krisis hemolitik, serta jumlah antibodi yang tidak mencukupi selama perjalanan kronis penyakit, tes Coombs langsung negatif dapat diamati.

Harus ditekankan bahwa uji Coombs tidak langsung tetap ada metode terbaik pemilihan media transfusi secara individual, karena memungkinkan Anda menentukan kompatibilitas individu donor dan penerima dengan antigen eritrosit dengan paling akurat.

Tes antiglobulin langsung tambahan untuk mengetahui adanya autoantibodi direkomendasikan saat memeriksa semua penerima organ dan jaringan pada periode pratransplantasi dan penerima sel induk hematopoietik juga setelah transplantasi.

Selain imunohematologi dan transfusiologi, tes antiglobulin banyak digunakan dalam diagnosis sejumlah kondisi patologis: penyakit hematologi, termasuk penyakit limfoproliferatif, penyakit sistemik jaringan ikat, penyakit Sjogren, hepatitis aktif kronis, dll.

Tes Coombs secara aktif digunakan dalam genetika medis dan kedokteran forensik untuk menentukan antigen permukaan eritrosit.

Uji Coombs merupakan metode penelitian yang agak padat karya sehingga memerlukan kehati-hatian khusus dalam pelaksanaannya. Saat menggunakannya, ada beberapa kesulitan yang terkait, khususnya, dengan interpretasi reaksi positif lemah. Diketahui bahwa positif lemah palsu atau reaksi negatif saat melakukan tes Coombs, hal ini mungkin disebabkan oleh pencucian sel darah merah yang kurang efektif, netralisasi reagen antiglobulin dengan sisa serum, serta kontak dengan permukaan yang tidak berminyak tempat antiglobulin dapat difiksasi, sehingga kehilangan aktivitasnya. . Kerugian lain dari uji Coombs adalah ketidakstabilan reagen antiglobulin, yang persiapan dan penyimpanannya memiliki ciri-ciri tertentu, yang juga mempersulit pengukuran reaksi hemaglutinasi dengan serum antiglobulin.

Selain itu, penelitian yang dilakukan oleh A. Holburn, D. Voak et al. , menunjukkan bahwa penyebab hasil negatif palsu mungkin adalah guncangan yang berlebihan saat suspensi sel darah merah disuspensikan kembali. Hasil yang salah saat melakukan tes antiglobulin juga dapat disebabkan oleh adanya campuran antibodi anti-komplementer dalam reagen antiglobulin, khususnya komponen komplemen C3d-, C3c-, C4c- dan C4d-, yang teradsorpsi pada permukaan. menguji sel darah merah selama inkubasi dan menciptakan tampilan hasil positif.

Kerugian ini dapat dengan mudah dihilangkan dengan mencuci sampel uji secara menyeluruh dan memantau kondisi reaksi.

Dalam dekade terakhir, larutan garam isotonik berkekuatan ion rendah (LISS) telah digunakan untuk mengurangi waktu yang diperlukan untuk melakukan uji Coombs tidak langsung dan meningkatkan sensitivitasnya.

Keuntungan yang tidak dapat disangkal dari tes antiglobulin, menurut sejumlah penulis, adalah sensitivitasnya yang tinggi, yang secara signifikan melebihi resolusinya. metode alternatif tes yang digunakan untuk mendeteksi antibodi non-aglutinasi.

Kami membandingkan resolusi metode untuk mempelajari serum darah untuk mengetahui adanya antibodi yang tidak lengkap menggunakan poliglusin, gelatin, dan serum antiglobulin. Selama penelitian, titer antibodi anti-D yang tidak lengkap dipantau dalam 140 sampel serum darah dari donor isoimun menggunakan tes gelatin, poliglusin, dan antiglobulin tidak langsung. Perumusan metode ini dilakukan sesuai dengan metode yang diterima secara umum.

Ditemukan bahwa, dalam resolusinya, metode untuk mendeteksi sensitisasi eritrosit oleh antibodi anti-D disusun sebagai berikut: yang paling sensitif adalah uji Coombs tidak langsung, kemudian uji gelatin, dan yang paling tidak informatif adalah uji poliglusin. Hasil yang diperoleh dalam rangkaian percobaan ini sepenuhnya sesuai dengan data literatur, yang memungkinkan kita untuk menyimpulkan hal itu level tinggi sensitivitas tes Coombs, yang memungkinkan untuk mengidentifikasi dengan tingkat kepastian yang tinggi keberadaan antibodi anti-eritrosit dalam tubuh yang tidak menyebabkan aglutinasi sel darah merah.

Namun, ketika melakukan tes Coombs dalam praktiknya, ada kasus ketika antibodi yang tidak lengkap tidak terdeteksi, meskipun gambaran klinis penyakit atau imunisasi sebelumnya menunjukkan kemungkinan adanya antibodi tersebut. Dalam kasus seperti itu, dapat diasumsikan bahwa jumlah antibodi tidak mencukupi untuk diendapkan oleh antibodi serum antiglobulin.

Kesimpulan ini dikonfirmasi oleh percobaan kami sendiri, di mana, dengan menggunakan metode mikroelektroforesis sel analitik, keberadaan antibodi anti-D pada eritrosit uji, yang tidak terdeteksi pada uji Coombs tidak langsung, ditetapkan. Dalam rangkaian percobaan ini, serum antiglobulin ditambahkan ke eritrosit yang telah diinkubasi sebelumnya dengan serum yang diperoleh dari darah donor yang diimunisasi selama periode antibodiogenesis yang sedang berlangsung, yaitu. selama periode ketika antibodi tidak terdeteksi di dalamnya menggunakan metode yang diketahui, termasuk tes Coombs.

Studi yang dilakukan memberikan bukti statistik adanya antibodi yang tidak lengkap pada permukaan sel darah merah. perubahan drastis besarnya mobilitas elektroforesis sel darah merah yang tersensitisasi setelah penambahan serum antiglobulin. Perlu dicatat bahwa antibodi anti-D kemudian ditentukan pada semua donor yang diimunisasi dengan tes Coombs tidak langsung dalam serum darah.

Gillerand dkk. juga menunjukkan bahwa tes antiglobulin dicirikan oleh ambang sensitivitas tertentu: hasil positif hanya terlihat jika setidaknya 500 molekul Ig G tercatat pada permukaan satu sel darah merah.

Selain itu, literatur memberikan bukti bahwa kemungkinan hasil negatif dari tes Coombs mungkin disebabkan oleh rendahnya afinitas antibodi yang membuat sensitisasi sel darah merah, sehingga mudah terelusi dari permukaan sel darah merah selama proses pencucian. .

Mengingat hal di atas, kita dapat menyimpulkan bahwa dalam beberapa kasus, hasil tes Coombs yang negatif belum menjadi bukti tidak adanya antibodi yang menempel pada permukaan sel darah merah.

Diketahui bahwa reaksi Coombs sangat spesifik dan dapat mendeteksi sebagian besar jenis antibodi yang tidak lengkap. Namun, seperti yang ditunjukkan oleh beberapa data eksperimen, tes antiglobulin juga bisa positif pada kondisi non-imunologis. E.Muirhead dkk. pada hari kedua setelah pemberian fenilhidrazin pada anjing, tes Coombs positif diamati. Kemunculan reaksi positif yang begitu cepat bertentangan dengan sifat imunologisnya dan, lebih tepatnya, dikaitkan dengan adsorpsi protein nonspesifik pada permukaan eritrosit.

M.Williams dkk. menemukan bahwa asam klavulanat juga dapat menyebabkan reaksi positif, yang menurut penulis, berhubungan dengan adsorpsi protein plasma nonspesifik pada permukaan eritrosit. Efek serupa diamati selama pengobatan dengan antibiotik sefalosporin.

Para penulis penelitian di atas menekankan sifat non-imunologis dari hasil positif tes Coombs dan bersikeras bahwa zat ini mampu menyebabkan modifikasi membran sel darah merah, akibatnya sel darah merah dapat menyerap protein (khususnya, albumin) yang biasanya terdapat dalam plasma darah dan tidak memiliki sifat antibodi. Selain itu, xenobiotik yang teradsorpsi pada permukaan sel mungkin berfungsi sebagai penghubung antara membran sel dan protein plasma.

Untuk menginterpretasikan hasil tes antiglobulin dengan benar, rasio kuantitatif antara sel darah merah muda dan matang dalam darah tepi juga harus diperhitungkan. Ditemukan bahwa retikulosit yang diisolasi dari tubuh selama periode peningkatan regenerasi eritron dapat diaglutinasi oleh serum antiglobulin.

Hasil tes antiglobulin langsung positif Hal ini juga terjadi pada berbagai kondisi patologis yang disertai kelainan sistem imun, proses inflamasi, menyebabkan adsorpsi antibodi nonspesifik dengan spesifisitas berbeda pada membran eritrosit. Hal ini menunjukkan bahwa molekul Ig G tidak berinteraksi dengan antigen spesifik eritrosit, tetapi hanya menempel pada permukaan sel yang diteliti.

Perlu diingat bahwa ketika melakukan tes Coombs dalam kasus penyakit yang ditandai dengan perkembangan disproteinemia atau munculnya paraprotein, hasil positif disebabkan oleh adanya protein pada permukaan eritrosit yang tidak memiliki sifat tersebut. antibodi, yang juga menunjukkan kurangnya spesifisitas tes antiglobulin mengenai sifat protein yang dideteksi dengan bantuannya.

Jadi, seperti yang ditunjukkan oleh banyak penelitian, hasil positif tes antiglobulin langsung dan tidak langsung bukanlah bukti mutlak adanya antibodi, karena reaksi positif juga dapat diamati pada berbagai kondisi patologis yang tidak terkait dengan isosensitisasi atau autosensitisasi tubuh. Oleh karena itu, hanya perbandingan hasil beberapa metode imunoserologi dengan Gambaran klinis penyakit memungkinkan kita untuk menilai sepenuhnya proses patologis yang berkembang.

Tes antiglobulin tidak langsung positif dengan tes langsung negatif biasanya menunjukkan adanya aloantibodi bebas dalam serum tes, terkait dengan transfusi darah atau kehamilan sebelumnya.

Tes Coombs seringkali positif selama eksaserbasi hemoglobinuria nokturnal paroksismal; tes Coombs positif dengan anti-C3 dan anti-C3dg merupakan penanda penyakit aglutinin dingin.

Dalam kasus di mana terdapat risiko tinggi terkena penyakit hemolitik pada bayi baru lahir, sangat penting Untuk membuat diagnosis (paling sering selama kehamilan) dan, jika perlu, pemantauan dinamis terhadap penampilan dan perubahan titer antibodi, hasil tes antiglobulin langsung dan tidak langsung diperoleh. Paling sering, penyakit hemolitik pada bayi baru lahir dikaitkan dengan ketidakcocokan ibu dan janin untuk antigen D, lebih jarang untuk antigen sistem ABO, dan bahkan lebih jarang untuk antigen lain (C, c, K, dll.). Antibodi terbentuk selama proses ini La, sebagai suatu peraturan, merupakan antibodi tidak lengkap dari kelas Ig G, terdeteksi dengan jelas dalam tes antiglobulin tidak langsung. Pada penyakit ini, titer dan spesifisitas antibodi yang diidentifikasi dengan benar sangat penting, karena ada korelasi tertentu antara tingkat antibodi anti-eritrosit dalam darah wanita hamil dan prognosis yang mungkin tingkat keparahan penyakit hemolitik.

Tes Coombs tidak langsung juga diperlukan praktek klinis untuk memastikan terapi transfusi yang aman. Implementasinya merupakan komponen wajib dari studi imunohematologi donor dan berbagai kategori penerima, serta pemeriksaan rutin terhadap semua pasien di institusi medis yang mungkin memerlukan transfusi darah dan komponennya.

Tes antiglobulin tidak langsung digunakan dalam kasus berikut:

Untuk penentuan afiliasi Rh (antigen D) yang lebih akurat jika hasil penentuan faktor Rh dengan metode lain tidak jelas (poliglusin, gelatin, dll.);

Untuk mengidentifikasi antigen eritrosit yang lemah (sistem Kell, Duffy, Kidd, Lewis, dll.) dan antibodi terhadap antigen tersebut;

Untuk deteksi dan identifikasi antibodi anti-eritrosit aloimun, termasuk antibodi yang menyebabkan reaksi hemolitik pasca transfusi;

Untuk mengetahui adanya antibodi imun sistem AB0 pada komplikasi hemolitik transfusi;

Sebagai uji kesesuaian untuk pemilihan individu darah yang ditransfusikan dan komponennya.

Dengan demikian, tes Coombs merupakan tes diagnostik penting yang digunakan dalam berbagai bidang kedokteran (hematologi, kebidanan, reumatologi, transfusiologi, diagnostik klinis dan laboratorium, dll). Pengetahuan tentang kekhasan melakukan tes Coombs akan membantu meningkatkan keandalan hasil yang diperoleh dan akan berkontribusi pada interpretasi data laboratorium yang benar.

literatur

1. Antibodi. Metode / ed. D.Katie. - M.: Mir, 1991.

2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadzhiev A.B.. // Terapi transfusi anemia: buku teks. panduan untuk dokter. - M.: Praktis. Kedokteran, 2005. - Hal.105-106.

3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfusiologi. - 2006. - No.2. — Hal.39—62.

4. Donskov S.I.// Golongan darah sistem Rhesus: teori dan praktik. - M.: VINITI RAS, 2005. - Hal.180-186, 195.

5.Imunoserologi ( peraturan) / komp. A.G. Bashlay, S.I. Donskov. - M. : VINITI RAS, 1998.

6.Kajian sistem darah dalam praktek klinis / ed. G.I. Kozinets, V.A. Makarova. - M.: Triada-X, 1997.

7. Levin V.I. Tentang mekanisme eritrodieresis dan eritropoiesis pada periode anemia posthemorrhagic akut: abstrak. dis. ... cand. Sayang. Sains. - Minsk, 1968.

8. Ragimov A.A., Bayramalibeyli I.E.. // Dasar-dasar diagnosis, pencegahan dan pengobatan anemia. - M.: GOU VUNMC MH RF, 2002. - Hal.204-209.

9. Chumakova E.D.. // Masalah sebenarnya hematologi dan transfusiologi: prosiding Kongres VI Ahli Hematologi dan Transfusiologi Republik Belarus, Minsk, 24-25 Mei 2007 / ed. A.I. Svirnovsky, M.P. Potapneva. - Minsk: Pusat Ilmiah dan Praktis Republik untuk Hematologi dan Transfusiologi, 2007. - Hal.50.

10. Coombs R., Mourant A., Ras R. // Lancet. - 1945. - Jil. 2. - Hal.15.

11. Freedman J. // J.Klin. jalan. - 1979. - Jil. 32. - Hal.1014-1018.

12. Holburn SAYA.. Kontrol kualitas. Metode Hematologi/ed. I. Cavill. - Edinburgh: Churchill Livingstone, 1982. - Jil. 4. - Hal.34-50.

13. Khan S.// CMAJ. - 2006. - Jil. 175, N 8. - Hal.919.

14. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Jil. 63 (tambahan 7). - Hal.719-721.

15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Jil. 63 (tambahan 7). — Hal.716—718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// Bahasa Inggris Baru. J.Med. —1976. - Jil. 277. - Hal.123-125.

17. Muirhead E.E., hutanM., Brian S. // J.Lab. Klinik. medis. —1954. - Jil. 44. - Hal.902-903.

18. Rosse W.F.// Rumah Sakit. Praktek. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., MooreB. dkk. //Biotest Banteng. - 1986. - Jil. 1. - Hal.41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. dkk. Mesin Cuci Sel untuk tes antiglobulin. Pengujian replikasi — metode baru yang menunjukkan ketidakefisienan satu mesin yang banyak digunakan — Sorvall CW1-AF2: laporan ke Cabang Teknis DHSS, Februari 1991.

21. Williams M.E., Thomas D., Harman C.P.. dkk. //Agen Antimikroba dan Kemoterapi. —1985. - Hal.125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H.. // CMAJ. - 2006. - Jil. 174, N 3. - Hal.305-307.

Berita medis. - 2008. - Nomor 3. - hal.33-36.

Perhatian! Artikel ini ditujukan kepada spesialis medis. Mencetak ulang artikel ini atau bagiannya di Internet tanpa hyperlink ke sumbernya dianggap sebagai pelanggaran hak cipta.

Dari sekian banyak antigen yang ada dalam praktek kedokteran nilai tertinggi berfokus pada tiga jenis aglutinogen darah. Salah satunya adalah jenis yang bertanggung jawab atas manifestasi faktor Rh: jika ada pada membran eritrosit, golongan darah didiagnosis sebagai Rh+, jika tidak ada - Rh-. Jika eritrosit dengan aglutinogen Rh+ memasuki darah Rh-negatif, tubuh memicu respons imun dan mulai memproduksi antibodi terhadap antigen ini, yang menyebabkan kondisi patologis.

REFERENSI! Faktor Rh adalah sistem multikomponen kompleks yang terdiri dari beberapa lusin antigen. Yang paling umum adalah aglutinogen tipe D (85% kasus), serta E dan C.

Tes Coombs dilakukan hanya jika ada bukti langsung. Daftar umum alasan untuk meresepkan tes Coombs:

• perencanaan dan penatalaksanaan kehamilan (orang tua memiliki Rh berbeda);
• donasi dan persiapan transfusi darah (ketidakcocokan darah menurut Rh tidak kalah merusaknya dengan ketidakcocokan darah menurut sistem AB0);
• berencana intervensi bedah(dalam hal penggantian kehilangan darah dengan transfusi darah);
• diagnosis penyakit hemolitik.

Indikasi yang lebih spesifik bergantung pada jenis penelitian yang dilakukan.

Tes Coombs langsung

Tes langsung mendeteksi antibodi pada permukaan sel darah merah. Hal ini diperlukan untuk mendiagnosis yang sudah ada patologi hemolitik:

• autoimun (sel darah merah dan hemoglobin hancur akibat serangan antibodi tubuh sendiri);
• obat ( proses patologis memicu penggunaan obat-obatan tertentu seperti quinidine atau procainamide);
• pasca transfusi (bila golongan darah tidak cocok pada saat transfusi), serta berupa konflik Rh selama kehamilan (eritroblastosis pada bayi baru lahir).

REFERENSI! Anemia hemolitik adalah penyakit yang berhubungan dengan kerusakan dini sel darah merah akibat hemolisis, yang menyebabkan kurangnya saturasi oksigen dalam darah dan hipoksia otak dan/atau organ dalam.

Hemolisis unsur darah diamati pada penyakit onkologi, infeksi, dan rematik, oleh karena itu tes Coombs langsung dapat digunakan sebagai alat diagnostik tambahan. kondisi patologis. Perlu diingat: nilai tes negatif tidak mengecualikan kemungkinan hemolisis, tetapi merupakan alasan untuk pemeriksaan tambahan.

Tes Coombs tidak langsung

Pengujian tidak langsung lebih sering digunakan untuk mencegah situasi patologis. Ini membantu mendeteksi antibodi dalam plasma darah, yang diperlukan untuk menilai kompatibilitas transfusi dan mendiagnosis risiko konflik Rh selama kehamilan.

Lebih dari 80% orang memiliki faktor Rh positif (Rh+), dan hanya kurang dari 20% yang memiliki faktor Rh negatif. Jika seorang ibu dengan Rh- melahirkan anak dengan Rh+, tubuhnya mulai memproduksi antibodi yang menyerang sel darah merah janin, sehingga menyebabkan hemolisis.

Mengingat persentase perkawinan “beda rhesus” mencapai 12-15%, maka risiko penyakit hemolitik pada bayi baru lahir seharusnya tinggi, namun kenyataannya, hanya 1 dari 25 kasus seperti itu, perempuan mengalami fenomena sensitisasi. (untuk 200 kelahiran yang berhasil terdapat 1 contoh patologi hemolitik). Hal ini sebagian disebabkan oleh fakta bahwa anak pertama dengan Rh-positif biasanya tidak menimbulkan agresi terbuka dari tubuh ibu; Mayoritas kasus terjadi pada anak kedua dan selanjutnya. Prinsip yang sama berlaku seperti sensitisasi konvensional terhadap alergen tertentu.

Tidak ada reaksi pada kontak pertama. Tubuh baru saja mengenal antigen baru, memproduksi antibodi golongan IgM, yang bertanggung jawab atas respon imun yang cepat, namun jarang menembus sawar plasenta ke dalam darah anak. Semua reaksi patologis muncul pada “pertemuan” kedua, ketika tubuh mulai memproduksi antibodi kelas IgG yang dengan mudah menembus aliran darah janin, memulai proses hemolisis.

Tes Coombs tidak langsung selama kehamilan memungkinkan Anda mendeteksi keberadaan antibodi dalam tubuh ibu dan mengidentifikasi tahap awal sensitisasi secara tepat waktu. Jawaban positif memerlukan registrasi dengan tes titer antibodi bulanan dan wajib rawat inap 3-4 minggu sebelum kelahiran.

REFERENSI! Ketidakcocokan faktor Rh tidak mempengaruhi kondisi ibu dengan cara apapun, penyakit hemolitik hanya berkembang pada anak. Dalam kasus yang parah dan jika tidak ada respons yang tepat waktu, janin dapat meninggal dalam kandungan atau segera setelah lahir.

Persiapan prosedur dan pelaksanaannya

Darah vena digunakan untuk diagnosis. Tidak diperlukan persiapan khusus jangka panjang untuk tes Coombs. Cobalah untuk mengikuti serangkaian aturan standar sebelum mengambil darah dari vena untuk dianalisis:

• berhenti minum alkohol selama 3 hari, obat-obatan(jika memungkinkan);
• Rencanakan makan terakhir Anda lebih dari 8 jam sebelum pengambilan darah untuk analisis;
• berhenti merokok, stres fisik, mental dan emosional dalam waktu 1 jam;
• Sebelum prosedur, minumlah segelas air bersih.

Metode penelitian didasarkan pada reaksi hemaglutinasi.

Saat melakukan tes langsung sampel darah dikenai serum antiglobulin yang telah disiapkan sebelumnya dengan indikator yang diketahui, campuran disimpan selama beberapa waktu dan diperiksa apakah ada aglutinasi, yang terbentuk ketika antibodi terdapat pada sel darah merah. Tingkat aglutinasi didiagnosis menggunakan titer aglutinasi.

Sampel tidak langsung Coombs memiliki teknik serupa, tetapi urutan tindakannya lebih kompleks. Eritrosit antigenik (dengan faktor Rh) dimasukkan ke dalam serum darah yang dipisahkan, dan hanya setelah manipulasi ini serum antiglobulin ditambahkan untuk diagnosis dan titer aglutinasi.

Hasil penelitian

Biasanya lurus dan uji Coombs tidak langsung harus memberikan hasil negatif:

• tes langsung negatif menunjukkan bahwa antibodi spesifik terhadap faktor Rh yang terkait dengan sel darah merah tidak ada dalam darah dan tidak dapat menyebabkan hemolisis
• tes tidak langsung negatif menunjukkan bahwa tidak ada antibodi bebas terhadap faktor Rh dalam plasma darah; Fakta ini menunjukkan kesesuaian darah pendonor dengan darah penerima (atau darah ibu dan anak) menurut faktor Rh.

Tes Coombs yang positif menunjukkan fakta sensitisasi Rh pada tubuh alasan utama Konflik Rh selama transfusi darah atau saat mengandung anak dengan status Rh berbeda. Dalam hal ini, hasilnya tetap tidak berubah selama 3 bulan (masa hidup sel darah merah). Jika penyebabnya adalah anemia hemolitik autoimun, maka tes positif dapat terjadi pada pasien selama beberapa tahun (dalam beberapa kasus, sepanjang hidupnya).

REFERENSI! Tes antiglobulin berbeda sensitivitas tinggi, tetapi memiliki sedikit kandungan informasi. Itu tidak mencatat aktivitas proses hemolitik, tidak menentukan jenis antibodi dan tidak mampu mengidentifikasi penyebab patologi. Untuk mendapatkan gambaran yang lebih lengkap, dokter yang merawat harus meresepkannya penelitian tambahan(mikroskopi darah, umum dan analisis biokimia, tes reumatik, LED, kadar besi dan feritin).

Derajat sensitisasi dapat dinyatakan secara kualitatif (dari “+” hingga “++++”) atau secara kuantitatif dalam bentuk titer:

• 1:2 - nilai rendah, tidak menimbulkan bahaya;
• 1:4 - 1:8 - awal perkembangan reaksi imunologis; tidak menimbulkan bahaya, tetapi memerlukan pemantauan terus-menerus;
• 1:16 -1:1024 - bentuk sensitisasi yang kuat, tindakan segera harus diambil.

Alasan tes positif Saya bisa menjadi:

• transfusi darah yang tidak diketik (atau dengan kesalahan pengetikan), bila faktor Rh pendonor dan penerima tidak cocok;
• Konflik Rh selama kehamilan (jika komposisi antigen darah ayah dan ibu tidak cocok);
• anemia hemolitik autoimun - baik bawaan (primer) dan sekunder, yang merupakan akibat dari penyakit tertentu (sindrom Evans, pneumonia menular, sifilis, hemoglobinuria dingin, limfoma);
• reaksi hemolitik obat.

Tak satu pun dari masalah di atas dapat diselesaikan oleh pasien tanpanya perawatan medis. Dalam semua kasus, konsultasi mendesak, registrasi atau rawat inap darurat akan diperlukan.

PERHATIAN! Dalam kasus yang jarang terjadi, tes Coombs positif palsu mungkin terjadi. Alasannya bisa jadi karena seringnya transfusi darah, serta sejumlah penyakit: artritis reumatoid, lupus eritematosus, sarkoidosis. Fenomena ini juga dapat diamati setelah limpa diangkat, serta ketika reaksinya terganggu (sering isinya terguncang, adanya kontaminan).

Tes Coombs adalah sebuah metode penelitian laboratorium, dibuat dengan mempengaruhi hemaglutinasi. Hal ini didasarkan pada kerentanan antibodi terhadap imunoglobulin dan elemen enzim, serta kemampuannya untuk mengaglutinasi eritrosit yang dilapisi C3 atau Lg.

Diagnosis Coombs langsung

Digunakan untuk mendeteksi antibodi atau komponen pelengkap yang dipasang di bagian luar sel. Tes Coombs langsung dilakukan sebagai berikut.

Penggunaan sampel seperti itu

Diagnosis Coombs langsung digunakan pada kasus tertentu, seperti:

• efek transfusi;
• hemolisis autoimun;
• anemia hemolitik akibat obat.

Tes Coombs tidak langsung

Diagnosis ini memungkinkan untuk mendeteksi antibodi terhadap sel dalam serum, yang biasanya diinkubasi dengan sel darah merah donor tipe 0, dan kemudian tes langsung dilakukan. Menerapkan diagnosis tidak langsung Coombs dalam kasus berikut:

Bagaimana mempersiapkan analisis

Ada beberapa aturan untuk mempersiapkan ujian.

1. Jika pasiennya adalah bayi baru lahir, orang tua perlu menyadari bahwa tes ini akan membantu mendiagnosis penyakit hemolitik pada bayi baru lahir.
2. Jika pasien dicurigai menderita anemia hemolitik, ia harus dijelaskan bahwa analisis tersebut akan memungkinkannya mengetahui apakah hal itu disebabkan oleh gangguan pelindung, obat-obatan, atau faktor lain.
3. Tes Coombs, langsung dan tidak langsung, tidak membatasi nutrisi atau pola makan.
4. Penting untuk memberi tahu pasien bahwa pemeriksaan akan memerlukan pengambilan darah dari vena, dan juga memberi tahu dia kapan tepatnya pungsi vena akan dilakukan.
5. Anda juga harus diperingatkan tentang kemungkinan tersebut tidak nyaman selama periode penerapan perban pada lengan dan prosedur itu sendiri.
6. Obat-obatan yang dapat mempengaruhi hasil sampel harus dihentikan.

Obat-obatan ini meliputi:

• "Streptomisin";
• "Metildopa";
• "Prokainamid";
• sulfonamid;
• "Melphalan";
• "quinidin";
• "Rifampisin";
• Isoniazid;
• sefalosporin;
• "Hidralazin";
• "Klorpromazin";
• "Levodopa";
• "Tetrasiklin";
• "Difenilhidantoin";
• "Etosuximid";
• "Penisilin";
• asam mefenamat.

Pengambilan sampel darah dilakukan pada pagi hari dalam keadaan perut kosong.

Bagaimana acara tersebut diadakan

Tes Coombs dilakukan dengan urutan sebagai berikut:

1. Saat melakukan diagnosis pada pasien dewasa, setelah pungsi vena, darah dimasukkan ke dalam tabung reaksi dengan EDTA (ethylenediaminetetraacetate).
2. Darah bayi baru lahir diambil dari tali pusat ke dalam gelas kimia berisi EDTA.
3. Daerah tusukan ditekan dengan kapas sampai pendarahan berhenti.
4. Jika memar muncul di lokasi tusukan vena, kompres hangat akan diberikan.
5. Setelah pengambilan darah, pasien diperbolehkan kembali minum obat.
6. Orang tua bayi baru lahir perlu diberitahukan bahwa analisis sekunder mungkin diperlukan untuk memantau dinamika anemia.

Keuntungan dari tes Coombs

Penelitian tersebut mempunyai beberapa keunggulan, yaitu:

Kekurangan analisis

Tes Coombs positif adalah metode pemeriksaan yang agak memakan waktu dan memerlukan akurasi pelaksanaan yang khas. Saat menggunakannya, Anda mungkin mengalami kesulitan tertentu, terutama terkait dengan interpretasi efek positif lemah.

Telah ditetapkan bahwa reaksi negatif atau positif lemah yang salah selama produksi tes Coombs dapat disebabkan oleh pencucian sel aktif yang tidak memuaskan, melemahnya reagen antiglobulin oleh residu serum, serta hubungan dengan permukaan non-lemak di mana antiglobulin dapat. diperbaiki, sehingga kehilangan efektivitasnya.

Tes Coombs memiliki kelemahan lain - rendahnya stabilitas reagen antiglobulin, perolehan dan penyimpanannya karakteristik individu, yang juga mempersulit penilaian numerik efek serum antiglobulin terhadap hemaglutinasi.

Penyakit yang dapat dideteksi selama penelitian

Diagnostik Coombs memungkinkan untuk mendeteksi jenis penyakit tertentu, seperti:

• malaise hemolitik pada bayi baru lahir;
• berbagai reaksi transfusi;
• hemolisis autoimun;
• anemia hemolitik akibat obat.

Saat ini, tes Coombs dianggap sebagai sistem tes darah yang cukup populer baik untuk orang dewasa maupun bayi baru lahir. Itu memungkinkan untuk mengidentifikasi banyak penyakit berbeda.