Ang pagsusuri sa Ifa ay tumatagal ng ilang araw upang maghanda. Mga detalye tungkol sa pagsusuri ng dugo ng enzyme immunoassay, kung ano ito at interpretasyon nito

Mga pamamaraan ng diagnostic ginagawang posible ng modernong panahon na matukoy ang isang partikular na sakit sa isang laboratoryo gamit mga espesyal na pagsusuri. Isa sa mga ito ay isang enzyme-linked immunosorbent blood test, na maaaring kumpirmahin ang isang naunang ginawang diagnosis.

Ang Enzyme immunoassay ELISA ay isa sa pinaka-epektibo at makabagong pamamaraan nagbibigay-daan upang matukoy ang mga karamdamang nauugnay sa immune at hormonal imbalances, pati na rin ang mga proseso ng oncological. Sa panahon ng pagsusuri, ang mga antibodies na ginawa kapag may impeksyon sa katawan ay maaaring makita sa dugo. Isinasaalang-alang ang nuance na ito, ang sakit ay maaaring makita kahit na sa pinakamaagang yugto ng pag-unlad nito.

Ano ang batayan ng pamamaraan?

Ang mga resulta ng pagsusuri ng ELISA ay batay sa pagkuha mga reaksiyong kemikal sa mga enzyme na nagsisilbing mga espesyal na marka ng pagkakakilanlan para sa pagkilala ng mga antibodies. Dahil dito, sa panahon ng mga immunochemical reaction, ang mga antibodies ay nagsisimulang makipag-ugnayan sa ilang mga antigens. Ang lahat ng ito ay nagbibigay ng dahilan upang igiit iyon maling resulta kapag ang pag-donate ng dugo para sa ELISA ay minimal.

Ang pag-aaral ay nagpapahintulot sa amin na matukoy ang halaga immune cells, ang kanilang mga katangian, pati na rin ang pagkakaroon ng mga kinakailangang antibodies

Ang resulta ay itinuturing na positibo kapag nakita ang kulay ng solusyon. Ang kulay ay nagpapahiwatig na ang mga antigen ay nakikipag-ugnayan sa antibody. Kung walang nangyaring ganito, negative ang resulta.

(link sa ika-3 artikulo sa file na ito), na nagbibigay-daan sa iyo upang masuri ang kakayahan ng katawan na lumaban mga nakakahawang sakit at nagpapakita ng yugto ng sakit, ang enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) ay sumasakop sa isang mahalagang lugar. Ang pagsasagawa ng pag-aaral na ito ay nagpapahintulot sa iyo na komprehensibong masuri ang aktibidad ng proteksiyon na pag-andar ng dugo at kilalanin ang estado ng immunodeficiency sa mga nakakahawang pathologies, pati na rin ang mga sakit sa dugo, mga proseso ng autoimmune, at mga problema sa hormonal.

Paano posible na masakop ang napakaraming target sa isang pagsusuri, at ano ang mga indikasyon para sa pagpapatupad nito? Subukan nating malaman ito.

Ano ang ginagawang pagsusuri sa dugo gamit ang ELISA method?

Ito pagsubok sa laboratoryo, na nagbibigay-daan sa iyo upang matukoy ang pagkakaroon ng mga tiyak na antibodies (proteksiyon na mga kadahilanan ng dugo ng isang likas na protina) sa ilang mga antigens (pathogenic agent). Sa mga antibodies, ang mga immunoglobulin, na maaaring umiral sa anyo ng mga immunocomplex, ay ang pangunahing kahalagahan.

Ang mga immunoglobulin ay ginawa bilang isang resulta ng mga kumplikadong reaksyon ng neurohumoral ng tao na lumitaw bilang isang tugon sa pagpapakilala ng mga dayuhang antigens. Ang bawat uri ng pathogenic agent ay gumagawa ng sarili nitong mga tiyak na antibodies. Kumikilos sila sa pamamagitan ng "pagbubuklod" ng isang antigen o pathological microorganism, na bumubuo ng isang kumplikadong "antigen-antibody" na tambalan, na sinusundan ng neutralisasyon, enzymatic lysis, mga reaksyon ng phagocytosis at pagtanggal mula sa katawan.

Mangyaring tandaan:Ito ay sa pamamagitan ng pagkakaroon ng ilang mga complex na tinutukoy ng pamamaraang ELISA ang uri ng pathogen o nakakapinsalang sangkap na naroroon sa pasyente.

Para malaman pangunahing mga prinsipyo Maaari mong makita kung paano gumagana ang immune system ng tao sa pamamagitan ng pagtingin sa ang video na ito pagsusuri:

Ano ang mga immunoglobulin?

5 pangunahing klase ng immunoglobulins ang natuklasan at pinag-aralan - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. ang papel ng iba ay hindi pa ganap na nilinaw at nasa ilalim ng siyentipikong pananaliksik.

Mangyaring tandaan:pinakamahalaga sa praktikal na gamot Ang mga immunoglobulin ng mga klase A, M at G ay mahalaga Ang nilalaman ng impormasyon ng kahulugan ay batay sa iba't ibang yugto ng panahon ng kanilang hitsura, maximum at pagkawala.

Isaalang-alang natin ang isyung ito nang mas detalyado.

Pangunahing gawain immunoglobulin A (IgA) ay binubuo sa mga proteksiyon na pag-andar ng mga mucous membrane respiratory tract, gastrointestinal tract at sistema ng ihi. Sa talamak na pagsisimula ng sakit, imposibleng makilala ang mga ito. Ang mga proteksiyon na complex na ito ay lilitaw lamang mula sa ika-2 linggo ng pagsisimula ng sakit, minsan mamaya. Ang bulk ng immunoglobulin A ay puro sa mga mucous tissue. Humigit-kumulang 80%. Ang natitirang mga antibodies ay umiikot sa dugo. Ang pangunahing pag-andar ay ang neutralisasyon at pagkasira ng mga microorganism. Pagkatapos magsubsob talamak na pagpapakita sakit, ang halaga ng mga immunoglobulin na ito ay nagsisimulang bumaba at ganap na nawawala hanggang 8 linggo pagkatapos ng pagsisimula ng sakit. Kung ang IgA ay napansin sa ibang araw, ito ay nagpapahiwatig ng isang talamak na proseso.

Ang pangunahing at unang mga marker ng talamak na yugto pagbuo ng patolohiya ay immunoglobulins class M (IgM). Natutukoy ang mga ito sa ika-5 araw ng pagsisimula ng sakit. Ang kanilang presensya sa dugo ay maaaring matukoy sa loob ng mga 6 na linggo. Pagkatapos ay nagsisimula silang mabilis na mawala.

Ang natitirang tugon ng immune ay nailalarawan sa pagkakaroon ng dugo immunoglobulins class G (IgG). Ang hitsura ng mga salik na ito sa dugo ay napansin humigit-kumulang isang buwan pagkatapos ng pagsisimula ng sakit. Sa hinaharap, maaari silang matukoy sa loob ng maraming buwan, taon at kahit isang buhay, kasiya-siya proteksiyon na function mula sa pagbabalik (relapse) ng sakit, at sa ilang mga kaso na ginagawang imposible ang pangalawang pag-unlad ng patolohiya. Kung ang halaga ng immunoglobulin G ay nagsimulang tumaas muli, kung gayon ang isa ay maaaring maghinala muling impeksyon. Ang isang katulad na konklusyon ay maaaring makuha sa pamamagitan ng pagsasagawa ng dalawa o tatlong sample na kinuha sa pagitan ng 2 linggo.

Immunoglobulin D (IgD) na matatagpuan sa B-lymphocytes, na matatagpuan sa mababang konsentrasyon sa malusog na tao. Pagkatapos ng 10 taon ng buhay, naabot nito ang pinakamataas na halaga nito. Ang dami ng immunoglobulin D ay tumataas sa panahon ng pagbubuntis, sa mga pasyente mga sistematikong sakit nag-uugnay na tisyu, mga sakit na dulot ng immunodeficiency.

Mga indikasyon para sa pagrereseta ng enzyme immunoassay na pagsusuri ng dugo

Pagpapasiya ng antibodies sa presensya sa katawan pathogenic microbes, nagiging sanhi ng:

• trichomoniasis;
• ureaplasmosis at

Mayroong pagtaas sa dami ng mga immunoglobulin at may.

Isinasagawa ang mga diagnostic upang makita ang:

• mga sakit na herpetic;
• mga pangkat viral hepatitis;
• Epstein-Barr virus;
• cytomegoalovirus.

Gamit ang ELISA, matutukoy mo ang pagkakaroon ng mga antibodies sa 600 uri ng mga allergens, tuklasin ang estado ng immunodeficiency, pag-uugali. komprehensibong pagsusuri bago ang mga operasyon ng transplant, magsagawa ng komprehensibong pagsusuri upang matukoy ang pagiging epektibo ng paggamot.

Si ELISA ay karagdagang pamamaraan pagtuklas ng mga selula ng kanser.

Paano isinasagawa ang ELISA ng dugo?

Para sa enzyme immunoassay, sa karamihan ng mga kaso, ang dugo ng pasyente ay ginagamit, kung minsan ay kinokolekta ang tissue vitreous, spinal canal fluid, amniotic fluid.

Ang dugo ay iginuhit sa pamamagitan ng isang iniksyon na karayom ​​sa isang hiringgilya mula sa cubital vein. Ang pag-aaral ay isinasagawa sa isang walang laman na tiyan. Dapat tandaan na ang pagkuha ng ilan mga kagamitang medikal maaaring makaimpluwensya sa resulta ng pagsusuri. Bago mag-donate ng dugo, dapat mong iwasan ang paninigarilyo at pag-inom ng alak. Ang paggamit ng droga ay maaaring masira ang mga resulta.

Sa kaso ng mga negatibong halaga ng immunoglobulins IgM, IgG, IgA, maaari nating pag-usapan ang kawalan ng sakit o ang paunang yugto nito, posible rin ang negatibong resulta kung ganap na paggaling pagkatapos ng isang makabuluhang tagal ng panahon na lumipas.

Kung ang IgA at IgM ay hindi nakita, at ang IgG ay positibo, kung gayon sa lahat ng posibilidad ay pinag-uusapan natin ang nabuong kaligtasan sa sakit pagkatapos ng isang nakakahawang sakit, o pagkatapos ng pagbabakuna.

Kung sakali mataas na titer IgM na may mga negatibong halaga ng IgG, IgA, maaari nating tapusin na mayroong isang talamak na nakakahawang sakit.

Ang sabay-sabay na positibong mga halaga ng mga resulta ng immunoglobulin - IgA, IgM, IgG ay katangian ng talamak na yugto ng pagbabalik ng dati ng isang umiiral na malalang sakit.

Para sa talamak na impeksiyon, na nasa subsiding phase ng proseso (remission), ang ELISA ay nagpapakita ng mga negatibong halaga ng immunoglobulin M (IgM), habang ang resulta ng immunoglobulins G (IgG) at A (IgA) ay magiging positibo.

Mga kalamangan ng paraan ng pagsusuri ng dugo ng enzyme immunoassay

Ang pangunahing bentahe ng pamamaraang ELISA ay:

• mababang halaga ng pagsusuri;
• pagtitiyak ng diagnostic, katumpakan;
• dynamic na kontrol (pag-uulit ng pagsusuri upang matukoy ang pagiging epektibo ng paggamot at mga yugto ng sakit);
• ang posibilidad ng pagsasagawa ng mass examinations sa mga lugar ng impeksyon;
• bilis ng pagkuha ng mga resulta;
• relatibong pagiging simple ng pagsusuri;
• posibilidad ng paggamit teknolohiya ng impormasyon sa pagproseso;
• kaligtasan at kawalan ng sakit para sa pasyente.

Mayroon bang anumang disadvantages sa dugo ELISA?

Ang pangunahing negatibong aspeto ng pag-aaral ay ang posibilidad na makakuha ng maling negatibo at maling positibong data. Ang sanhi ng hindi pagkakaunawaan ay maaaring mga teknikal na pagkukulang o ang paggamit ng mga gamot, na maaaring masira ang larawan.

Ang ELISA ay ginagamit upang makita ang:

• (ascaris, pinworms);
• talamak at talamak na anyo opisthorchiasis;
• trichinosis;
• ang pagkakaroon ng Giardia (bilang karagdagang pagsusuri);
• mga anyo ng leishmaniasis;
• amoebiasis;
• nilalaman ng toxoplasma;

Sa konklusyon, dapat tandaan na ang modernong immunology ay patuloy na nasa yugto ng pag-unlad, na naghahanap ng mga bagong pamamaraan para sa pag-diagnose at pagpapagamot ng mga sakit.

Stepanenko Vladimir, surgeon

Paano isinasagawa ang pag-aaral ng ELISA?

Mekanismo ng reaksyon

Ang enzyme immunoassay ay batay sa immune reaksyon antigen na may antibody, at ang attachment ng isang enzyme tag sa mga antibodies ay ginagawang posible na isaalang-alang ang resulta ng reaksyon ng antigen-antibody sa pamamagitan ng paglitaw ng aktibidad ng enzymatic o sa pamamagitan ng pagbabago sa antas nito Ang mekanismo ng reaksyon ay maaaring ipakita tulad ng sumusunod:

	Ang unang reaksyon ay nangyayari sa pagitan ng nakitang Ig (Ab) at ang purified pathogen antigen (Ag), na naayos sa ibabaw ng mga balon ng immunological tablet
	Upang matukoy ang nabuong mga immune complex, ang pangalawang immunological na reaksyon ay isinasagawa, kung saan ang nakatali na tiyak na Ig ay kumikilos bilang isang antigen, at isang conjugate na kumakatawan sa isang Ig (Ab) sa kaukulang Ig ng tao, na may label na enzyme -peroxidase (K) , ay ginagamit bilang mga antibodies dito.
	Susunod, ang isang reaksyon ng enzymatic ay nangyayari, na na-catalyzed ng enzymatic na bahagi ng conjugate molecule Ang substrate para sa reaksyong ito ay isang walang kulay na sangkap - isang chromogen, na sa panahon ng reaksyon ay bumubuo ng isang kulay na sangkap. Ang intensity ng kulay sa balon ay depende sa isang tiyak na paraan sa dami ng mga immunoglobulin na nakapaloob sa sample.

Pagkalkula ng mga resulta

Nagdadala ng enzyme immunoassay

Para sa serodiagnosis, ginagamit ang 96-well polystyrene plates, sa mga dingding ng mga cell kung saan ang antigen ay pre-adsorbed. Ang test serum ay idinagdag sa cell ng tablet. Sa kasong ito, ang mga antibodies na homologous sa antigen ay nakakabit dito. Ang mga hindi nakakabit na antibodies ay tinanggal sa pamamagitan ng paghuhugas. Susunod, ang mga antibodies laban sa mga immunoglobulin ng tao (antibodies) na may label na enzyme ay idinagdag sa mga selula. Kung ang mga nakikitang antibodies ay naroroon sa test serum, sa yugtong ito sila ay kikilos bilang mga antigen kung saan ang mga may label na antibodies ay tutugon. Ang pagdaragdag ng isang chromogenic substance (dye) pagkatapos ng paghuhugas ay magbibigay-daan sa amin na isaalang-alang ang reaksyon ng pagbuo ng kulay sa mga selula. Ang intensity ng kulay ay proporsyonal sa dami ng enzyme, at samakatuwid ang dami ng antibodies Kapag sinusukat ang optical density (OD) ng isang likido sa isang cell at inihahambing ito sa isang control sample, ang konsentrasyon ng mga antibodies ay kinakalkula sa mga yunit. ng dami Ang pinaka-madalas na ginagamit ay upang kalkulahin ang mga resulta sa mga yunit ng optical density. resulta.

Anong mga impeksyon ang maaaring makita ng ELISA?

Pangunahin sa modernong venereology ito ay ginagamit para sa pagsusuri ng syphilis (kasama ang iba pang mga reaksyon), impeksyon sa HIV, viral hepatitis limitadong halaga para sa diagnosis ng chlamydial infection, cytomegalovirus infection at iba pang herpes infections Ang ELISA method ay ginagamit din upang matukoy ang mga antibodies para sa iba't ibang mga nakakahawang sakit, hormone level, autoantibodies at iba't ibang marker. mga sakit sa oncological.

Paano bigyang-kahulugan ang mga resulta ng ELISA

Pag-aaral ng presensya at antas ng mga antibodies iba't ibang klase sa ilang mga kaso ay tumutulong sa pagtukoy ng mga yugto nakakahawang proseso

Yugto ng sakit	IgM	IgA	IgG
Pangunahing yugto (2 linggo mula sa impeksyon)
Pangunahing yugto (2.5 - 3 linggo mula sa impeksyon)
Pangunahing yugto (3-4 na linggo mula sa impeksyon)
Exacerbation ng talamak na yugto (2 linggo mula sa simula ng exacerbation)
Talamak na yugto
Nakaraan (gumaling na impeksyon)
Pagbawi		pagbaba ng titer ng 2-4 beses pagkatapos matagumpay na paggamot	pagbaba ng titer ng 4-8 beses 1-1.5 na buwan pagkatapos ng matagumpay na paggamot
Negatibong resulta

Sa kasamaang palad, ito mahalagang kalamangan ELISA, paano quantification Ang mga antibodies ay hindi napakahalaga sa praktikal na gawain - i.e. hindi pinapayagan ang isang tumpak na diagnosis at hindi nakakaapekto sa dosis at timing ng reseta mga gamot.

Ano ang papel ng pamamaraan ng ELISA sa pagsusuri ng syphilis

Ang pamamaraan ng ELISA sa diagnosis ng syphilis ay unang ginamit noong 1975. Sa kasalukuyan, malawak itong ginagamit para sa serological diagnosis ng syphilis sa Russia at ginagamit bilang isang confirmatory test para sa syphilis Ang isang pag-aaral ay karaniwang isinasagawa na nagpapakilala sa tinatawag na kabuuang antibodies sa Treponema pallidum antigens (IgM at IgG), bagaman sa ilang mga kaso posible lamang na matukoy ang "maagang" antibodies ng M class na ELISA para sa syphilis ay nagiging positibo pagkatapos ng 3 linggo mula sa sandali ng impeksyon at nananatiling positibo para sa ilan oras mahabang panahon kahit na pagkatapos ng paggamot (minsan sa buong buhay, ang ELISA ay hindi ginagamit bilang isang pagsubok upang kumpirmahin ang lunas ng syphilis Sa karamihan ng mga kaso, ang isang husay na pagpapasiya ng ELISA ay isinasagawa - i.e. positibo o negatibong resulta lamang, bagama't posible rin ang quantitative determination.

(ELISA) ay isang paraan ng pagsusuri ng dugo sa laboratoryo, batay sa paghahanap para sa mga espesyal na selula - antibodies sa iba't ibang sakit. Ang pamamaraan ay nagbibigay-daan hindi lamang upang makilala ang pathogen, kundi pati na rin upang matukoy kung anong yugto ito proseso ng pathological. Ang huli ay napakahalaga para sa pagbabala at karagdagang paggamot pasyente.

Mga kalamangan at kawalan ng pamamaraan

Sa lahat makabagong pamamaraan diagnostic ELISA ay ang pinaka-makabagong at teknikal na tumpak. Ang pangunahing bentahe nito ay:

1. Ang kakayahang maghanap para sa lahat ng umiiral na antibodies sa mga nakakahawang sakit sa dugo ng pasyente.
2. Mataas na accessibility ng paraan ng pananaliksik. Ngayon, ang mga pagsusuri sa ELISA ay maaaring gawin ng anumang medium-sized na laboratoryo.
3. Halos 100% na pagtitiyak at pagiging sensitibo ng pamamaraan.
4. Ang kakayahang maghanap ng mga antibodies at antigens, pati na rin ang pagtatatag ng yugto ng proseso ng pathological at subaybayan ang dinamika nito, salamat sa paghahambing ng mga dami.

Ang bilang ng mga kalamangan sa iba pang mga pagsubok ay ganap na sumasalamin sa isa at tanging disbentaha ng pagsubok: ito ay nakakatuklas ng mga antibodies, ngunit hindi ang pathogen mismo.

Mga pangunahing termino para sa pagtatasa ng pagsusuri

Upang maunawaan kung ano ang pagsusuri ng ELISA, kung ano ito at kung paano ito isinasagawa, kailangan mong pamilyar sa mga pangunahing termino na ginagamit ng mga espesyalista.

1. Antibody- isang protina na ginawa ng mga selula ng immune system ng tao (type B lymphocytes). Sagot nila tiyak na reaksyon sa pagpasok ng isang dayuhang ahente o sangkap sa katawan. Ang isa pang pangalan para sa mga antibodies ay immunoglobulins, kabilang sila iba't ibang klase: A, E, M, G. Naiiba sila sa bawat isa sa masa, bilis ng reaksyon, kalahating buhay at maraming iba pang mga katangian. Karaniwan, ang dugo ng tao ay naglalaman ng pangunahing mga immunoglobulin ng class G.
2. Antigen- isang dayuhang ahente na mayroon organikong pinagmulan at mataas na molekular na timbang. Kadalasan ito ay kumakatawan sa mga pathogen o kanilang biologically active substances.
3. Ang antigen-antibody complex, o immune complex, ay ang direktang kumbinasyon ng isang dayuhang sangkap at immunoglobulin, na nagdudulot ng pagbuo ng isang immune reaction.

Ang kakanyahan at saklaw ng pamamaraan

Ang mga pasyente ay madalas na may tanong: pagsusuri sa ELISA, ano ito, paano ito isinasagawa at para saan ito? Maaari mong pag-usapan ang pamamaraan sa isang madaling paraan sa pamamagitan ng maikling paglalarawan ng mga yugto nito.

Yugto ng paghahanda. Gumagamit ang doktor ng laboratoryo ng isang espesyal na plato na may 96 na balon. Ang antigen ng isang tiyak na pathogen ay inilalapat sa ibabaw ng bawat balon.

Stage 1. Ang dugo ay iginuhit, na pagkatapos ay inilapat patak sa patak sa balon. Ang balon ay nagpapasimula ng reaksyon sa pagitan ng antigen at ng antibody sa dugo.

Stage 2. Ang reaksyon sa pagbuo ng mga immune complex ay puspusan sa butas. Bilang isang resulta, ang isang sangkap ng isang tiyak na kulay ay nabuo. Ang intensity ng kulay ay depende sa dami ng antibodies sa dugo ng pasyente sa bawat partikular na pathogen.

Stage 3. Pagsusuri ng resulta sa pamamagitan ng photometry. Para sa layuning ito, ginagamit ang isang espesyal na aparato na tinatawag na spectrophotometer. Ito ay ginagamit upang ihambing ang density ng materyal sa butas at ang control sample. Susunod, ang aparato sa pamamagitan ng pagsusuri sa matematika bumubuo ng resulta.

Pagsusuri ng mga resulta at layunin ng ELISA

Ang interpretasyon ng resulta ay nakasalalay sa maraming mahahalagang nuances:

1. Optical density ng balon.
2. Tagagawa ng plato na may mga balon (mga sistema ng pagsubok).
3. Laboratory kung saan isinagawa ang pag-aaral.

Dahil sa mga nuances na ito, hindi mo dapat ihambing ang dalawang resulta mula sa magkaibang mga sistema ng pagsubok o mula sa iba't ibang mga laboratoryo.

Ang isa pang mahalagang punto na nakakaapekto sa pagsusuri ng ELISA ay ang tinatawag na antibody avidity. Ang parameter na ito ay nagpapakilala sa dami ng antigen at ang lakas ng bono sa antigen-antibody complex. Ang kahulugan nito ay batay sa pagproseso ng immune complex na may urea upang malutas ang mga istruktura ng protina. Ito ay nagpapahintulot sa iyo na sirain ang mahinang mga bono sa pagitan ng antigen at antibody at mag-iwan lamang ng mga malalakas. Ang kahalagahan ng avidity study ay maaari itong magamit upang matukoy ang tagal ng impeksyon. Ang impormasyong ito ay lubhang mahalaga para sa paggawa ng diagnosis sa mga buntis na kababaihan.

Ang pagsusuri sa dugo gamit ang pamamaraang ELISA ay nagsisilbing:

1. Upang maghanap ng iba't ibang pathogen antigens.
2. Upang pag-aralan ang mga antas ng hormonal.
3. Para sa pagsusuri para sa pagkakaroon ng autoimmune pathology.
4. Upang makita ang mga marker ng kanser.

Mga uri ng ELISA

Ang pagsusuri sa ELISA ay may mga sumusunod na uri:

1. Hindi direkta.
2. Direkta.
3. Competitive.
4. Paraan ng pagharang.

Ngunit sa katunayan, ngayon ay isang paraan lamang na tinatawag na ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) ang ginagamit. Ito ay batay sa inilarawan sa itaas na reaksyon ng pagbuo ng isang antigen-antibody complex na may pagbabago sa kulay sa ibabaw ng balon.

Ang quantitative ELISA blood test mismo ay nararapat ng espesyal na atensyon. Ito ay hindi isang uri ng pagsusuri, ngunit isang paraan ng pagsusuri ng mga resulta. Salamat dito, ang bilang ng mga antibodies ay kinakalkula at ang kanilang mga klase ay tinutukoy. Ang resulta ay depende sa optical density ng sample, ang sistema ng pagsubok kung saan isinagawa ang pagsusuri ng ELISA, pati na rin sa laboratoryo.

Mga sakit na nakita ng ELISA

Ang ELISA ay isang pagsusuri sa dugo na nakakakita malaking halaga iba't-ibang mga nakakahawang sakit. Bukod dito, ang parehong mga impeksyon sa viral at viral ay nakita na may pantay na katumpakan. mga sakit na bacterial. Halimbawa, gamit ang pagbuo ng mga immune complex, mapapatunayan ng isa ang pagkakaroon ng mga antigens ng mga pathogen ng mga sumusunod na sakit:

Bilang karagdagan, pinapayagan ka ng ELISA na makita ang:

1. Mga marker ng cancer - TNF (tumor necrosis factor), PSA (prostate-specific antigen), CEA (carcinoembryonic antigen), CA-125 (ovarian tumor marker)
2. Ang hormone sa pagbubuntis ay hCG (human chorionic gonadotropin).
3. Mga paglabag reproductive system: mga hormone ng babae at lalaki na reproductive system.
4. Patolohiya ng thyroid gland.

Mahalagang banggitin na ang ELISA test para sa HIV ngayon ay ang pangunahing paraan upang masuri ang mapanganib na sakit na ito.

Materyal para sa ELISA at sampling technique

Upang maisagawa ang ELISA, kinukuha ang dugo mula sa pasyente nang walang laman ang tiyan. Susunod, ang serum ay nakuha mula sa dugo, na direktang ginagamit para sa pagsusuri. Bilang karagdagan, ang ELISA ay maaaring isagawa sa cerebrospinal fluid(cerebrospinal fluid), mucus ng cervical canal (cervix), amniotic fluid at kahit vitreous fluid (eyeball).

Bago mag-donate ng dugo, ang pasyente ay binabalaan na hindi siya dapat kumuha ng anuman mga gamot, at paggamot na may mga antibiotic at mga gamot na antiviral Inirerekomenda na tapusin ang hindi bababa sa dalawang linggo bago ang koleksyon ng dugo.

Mga deadline para sa pagtanggap at pag-decode ng mga resulta

Ang oras na kinakailangan upang makatanggap ng sagot mula sa laboratoryo ay hindi nakasalalay sa bilis ng trabaho nito, ngunit sa kung anong yugto ang sakit at kung anong mga antibodies ang lumitaw na sa dugo. Kaya, halimbawa: ang mga immunoglobulin M ay lumilitaw nang humigit-kumulang 2 linggo pagkatapos kumuha ng dugo para sa pagsusuri at nangangahulugan na ang proseso ay nasa yugto ng pangunahing impeksiyon o isang paglala ng talamak na impeksiyon ay naganap. Kasabay nito, lumilitaw ang mga antibodies ng mga klase M at G sa panahon ng pangunahing impeksiyon. Bukod dito, ang huli ay maaaring makita pagkatapos ng 4 na linggo.

Lumilitaw ang IgA pagkatapos ng 2-3 linggo alinman sa nag-iisa o kasama ng M, ibig sabihin talamak na impeksyon, o kasama ng G, na nagsasaad ng malalang proseso.

ganyan magkaibang termino ang paglitaw ng mga antibodies sa dugo ay pipilitin ang pasyente na maghintay ng mahabang panahon para sa resulta. Katanggap-tanggap na maghintay ng higit sa isang buwan pagkatapos maisagawa ang ELISA test. Ang pag-decipher at interpretasyon ng isang doktor ay tumatagal din ng isang tiyak na tagal ng panahon.

Ang listahan ng mga magagamit na pamamaraan ng diagnostic ay mabilis na lumalawak sa mga nakaraang dekada ay sinusubukan na pagsamahin ang mga pakinabang ng lahat ng mga nakaraang pagsubok sa mga bagong pamamaraan, na inaalis ang lahat ng kanilang mga nakaraang disadvantages.

SA kani-kanina lang lalong nasa listahan mga pamamaraan ng diagnostic may kasamang enzyme immunoassay - isang moderno at medyo bagong pagsubok, kung saan kakaunti ang nalalaman ng karaniwang tao na hindi nauugnay sa gamot. Gayunpaman, ang pamamaraan na ito ay mabilis na lumalaki sa mga tagasunod nito sa mga kwalipikadong medikal na tauhan. Maaari mong subukang malaman kung ano ito at sa anong mga kaso dapat itong gamitin sa pamamagitan ng pamilyar sa iyong sarili sa mga tampok at pangunahing katangian nito.

Ang enzyme immunoassay ay isang instrumental na pamamaraan sa laboratoryo batay sa molekular na "antigen-antibody" na reaksyon, na ginagawang posible na makakita ng mga partikular na protina sa biyolohikal na materyales(mga sample para sa pananaliksik). Ang ganitong mga protina ay maaaring mga enzyme, iba't ibang microorganism (mga virus, bakterya, fungi), protozoa, atbp.

Matapos matuklasan ang pamamaraan, binigyan ito ng pangalang ELISA test, na walang kinalaman sa pangalan ng mga natuklasan, ngunit ito ay isang pagdadaglat ng buong pangalan sa Ingles - enzyme-linked immunosorbent assay. Ginagamit ng mga doktor sa buong mundo ang pangalang ito; ang ilang mga doktor sa mga bansang nagsasalita ng Ruso ay tinatawag din sa ganitong paraan.

Ang pangunahing prinsipyo ng pamamaraan ay ang molekular na "antigen-antibody" na reaksyon.

Ang antigen ay anumang dayuhang molekula na pumapasok sa katawan ng tao bilang bahagi ng mikrobyo na nagdudulot ng sakit. Ang mga antigen ay karaniwang mga molekula ng protina. Bilang karagdagan sa mga microorganism, ang naturang "stranger" ay maaaring mga dayuhang selula ng dugo na hindi tumutugma sa grupo o Rh factor.

Bilang tugon sa pagpasok ng naturang antigen sa katawan, inilunsad ang isang immune reaction, na naglalayong protektahan laban sa anumang mga dayuhang molekula. Nangyayari ito dahil sa synthesis ng mga espesyal na ahente immune system- mga antibodies (immunoglobulins). Ang bawat antibody ay angkop lamang para sa isang tiyak na antigen at neutralisahin ang pathogenic na "stranger" sa pamamagitan ng pagbubuklod dito sa isang solong complex. Ito ay ang proseso ng naturang pagbubuklod na tinatawag na "antigen-antibody" na reaksyon.

Mga uri ng antibodies

Ang lahat ng antibodies (immunoglobulins) ay nahahati sa 5 uri depende sa kung anong yugto ng immune response ang lalabas ng mga ito:

Para sa mga diagnostic ng ELISA, ang mga antas ng immunoglobulin na IgG, IgM at IgA ay kadalasang mahalaga. Sa pamamagitan ng kanilang mga titer, malalaman mo kung ang isang tao ay nagkaroon ng sakit bago o nahawahan kamakailan, kung siya ay nakabuo ng kaligtasan sa sakit o kung ang kanyang katawan ay walang pagtatanggol laban sa patolohiya.

Mga kalamangan at kawalan ng enzyme immunoassay

Naka-on sa ngayon Ang ELISA ay isa sa mga pinakatumpak at sensitibong pamamaraan. Ito ay pinagtibay ng mga espesyalista sa iba't ibang larangan ng medisina at patuloy na pinapalawak ang saklaw ng aplikasyon nito.

Mga kalamangan ng pamamaraan

• Mataas na katumpakan ng nakuhang data.
• Sensitivity (nagbibigay-daan sa iyo na makita ang kinakailangang sangkap kahit na may kaunting presensya ng pathogen sa sample).
• Posibilidad ng diagnosis sa mga unang araw ng sakit o sa panahon ng pagpapapisa ng itlog.
• Bilis ng pagkuha ng data kumpara sa iba pang mga pamamaraan ng katulad na katumpakan.
• Mataas na automation ng proseso at minimal na partisipasyon ng tao, na binabawasan ang error ng tagapalabas.
• Pagkuha ng data sa yugto ng proseso ng pathological at ang pagiging epektibo ng napiling therapy.
• Walang sakit at minimally invasive kapag nangongolekta ng materyal.

Mga disadvantages ng pamamaraan

• Sa karamihan ng mga kaso, pinapayagan ka nitong matukoy ang tugon ng katawan sa isang pathogenic agent, at hindi ang pathogen mismo.
• Bago ang pagsusuri, ang pinaghihinalaang sakit ay dapat malaman nang eksakto, dahil ang pagsusuri ay lubos na tiyak.
• Ang posibilidad ng mga maling pagbabasa na dulot ng mga teknikal na isyu, pag-inom ng mga gamot, o ang sabay-sabay na presensya ng ilan malalang sakit o mga paglabag metabolic proseso sa katawan ng pasyente.
• Ang interpretasyon ng mga resulta ay dapat lamang gawin ng isang mataas na kwalipikadong espesyalista, dahil upang bigyang-kahulugan ang data na nakuha ay kinakailangan na magkaroon ng kaalaman. espesyal na pagsasanay at isang malaking stock ng medikal na kaalaman sa isang partikular na lugar.
• Ang ELISA ay isang medyo bihirang pagsubok, kaya hindi ito ginagawa sa lahat ng diagnostic laboratories.
• Ang pamamaraan ay medyo mahal, dahil bilang karagdagan sa mga reagents, ang laboratoryo ay dapat magkaroon ng maraming mamahaling kagamitan at mga sample ng antigens na ginawa sa mga espesyal na institusyon.

Sa anong mga kaso ginagamit ang enzyme immunoassay?

Napakalawak ng buong listahan ng mga indikasyon para sa enzyme immunoassay;

Kadalasan, ang ELISA ay ginagamit para sa mga sumusunod na layunin:

• pagtuklas ng mga nakakahawang sakit;
• diagnosis ng mga sakit na nakukuha sa pakikipagtalik;
• kahulugan katayuan ng immune o ilang mga autoimmune na sakit;
• pagkakakilanlan ng mga marker ng tumor;
• pagpapasiya ng mga hormone.

Sa kaso ng nakakahawa at mga sakit na viral Ang pamamaraan ay nagpapahintulot sa amin na makilala ang mga sumusunod na pathologies:

Bilang karagdagan, pinapayagan ka ng ELISA na mabilis at epektibong matukoy ang estado ng infarction, masuri ang potensyal ng reproduktibo ng katawan, kilalanin ang mga alerdyi, ang kanilang pinagmulan, atbp.

Enzyme immunoassay technique ay ginagamit upang isagawa mga klinikal na pagsubok sa panahon ng pagbuo ng mga bagong gamot at sa pagtatasa ng epekto nito sa katawan ng tao.

Mga uri ng mga sample at pamamaraan ng kanilang pagpili para sa pananaliksik

Kadalasan, ang test material para sa enzyme immunoassay ay dugo, na kinuha mula sa ulnar vein ng pasyente. Ang koleksyon ng sample ay isinasagawa sa isang walang laman na tiyan, pangunahin sa umaga. Pagkatapos ng sampling, ang mga nabuong cell na nakakasagabal sa pananaliksik ay pinaghihiwalay at inalis sa dugo, na nag-iiwan lamang ng serum.

Kapag nag-diagnose ng mga impeksyon sa genitourinary, ang materyal ay madalas na nagiging mga smear mula sa mauhog na tisyu ng mga genital organ, uhog mula sa urethra o cervix, mga sample mula sa tumbong, mga scrapings mula sa mga erosions o ulcers sa lugar ng singit at mula sa iba pang bahagi ng katawan. Ang mga pamunas ay maaari ding kunin mula sa oral cavity, pati na rin mula sa nasopharynx.

Minsan ginagamit ang enzyme immunoassay sa obstetric at gynecological practice sa panahon ng pagbubuntis upang matukoy ang estado ng amniotic fluid. Sa kasong ito, ang amniotic fluid ay nagiging sample. Upang gawin ito, kumuha ng kaunting likido sa pamamagitan ng pagtusok sa amniotic sac gamit ang mahabang karayom. Ang lahat ng mga manipulasyon ay isinasagawa gamit ang mga sterile na instrumento upang mabawasan ang mga posibleng panganib.

Kadalasan ang materyal ay nagiging cerebrospinal o serous fluid. Nangyayari ito kapag lokal na kawalan ng pakiramdam, na ibinibigay sa pamamagitan ng iniksyon.

Dapat linawin ng espesyalistang nagpapadala para sa pag-aaral kung anong uri ng mga materyales ang kailangan para sa enzyme immunoassay. Kadalasan ang mga sample ng ilang uri o mula sa iba't ibang lugar ay kinukuha nang sabay-sabay. Ang doktor na nag-isyu ng referral para sa ganitong uri ng pagsusuri ay dapat ding sabihin sa pasyente ang tungkol sa mga paghahanda para sa pagbibigay ng biomaterial.

Paghahanda para sa enzyme immunoassay

Upang madagdagan ang katumpakan ng data na nakuha pagkatapos ng immunoassay ng enzyme, ang paghahanda para sa pagpili ng materyal ay dapat na ang mga sumusunod:

• 10 araw bago ang pag-aaral, ibukod ang mga antibiotic, antiviral at antimycotic na gamot;
• para sa isang araw kinakailangan na ibukod ang alkohol, paninigarilyo at pagkuha ng mga narkotikong sangkap;
• sa parehong panahon, kinakailangan upang maiwasan ang pisikal na labis na pagsisikap;
• Babalaan ang nagrereseta tungkol sa lahat ng mga gamot na iniinom ng pasyente;
• Ipaalam sa iyong doktor kung ikaw ay buntis o pinaghihinalaan na ikaw ay buntis.

Pinakamainam kung ang mga materyales sa pagsubok ay kinokolekta sa umaga nang walang laman ang tiyan.

Kung ang diagnosis ay naglalayong matukoy ang estado ng mga antas ng hormonal, kung gayon mahalaga na matiyak kalmadong estado ang araw bago at iwasan nerbiyos na pag-igting. Para sa mga kababaihan, ang pagbibigay ng dugo para sa mga hormone ay malinaw na tinutukoy ng panahon buwanang cycle, na tatalakayin ng doktor sa oras ng appointment.

2-3 araw bago ang pag-sample, kailangan mong ibukod ang mga pritong at mataba na pagkain mula sa menu, at bago ang pagsubok para sa hepatitis, huwag kumain ng mga citrus na prutas o anumang iba pang orange o dilaw na prutas at gulay.

Interpretasyon ng mga resulta ng enzyme immunoassay

Ang resulta ng isang kwalitatibong pag-aaral ay karaniwang ipinahihiwatig ng mga palatandaang “+” (natukoy) o “-” (hindi nahanap).

Batay sa pagkakaroon o kawalan ng ilang mga grupo ng mga immunoglobulin, ang mga sumusunod na konklusyon ay maaaring iguguhit:

• JgM (-), JgG (-), JgA (-) - ang kaligtasan sa sakit ay ganap na wala (ang katawan ay hindi pa nakatagpo ng ganitong uri ng antigen);
• JgM (-), JgG (+), JgA (-) - nagkaroon ng nakaraang banggaan sa antigen na ito o sa bakuna;
• JgM (+), JgG (-/+), JgA (-/+) - talamak na proseso ng pathological (malamang na pangunahin);
• JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) - talamak na proseso;
• JgM (+), JgG (+), JgA (+) - relapse;
• JgM (-) - yugto ng pagbawi.

Ang dami ng mga halaga ay nagdadala ng malaking pag-load ng impormasyon, ngunit ang dumadating na manggagamot lamang ang makakapagbigay-kahulugan sa kanila, batay sa mga naunang indikasyon, edad ng pasyente, at mga pamantayan para sa bawat partikular na sakit. Ito ay para sa kadahilanang ito na hindi mo maaaring suriin ang mga resulta sa iyong sarili.

Gaano katagal kailangan mong maghintay para sa mga resulta?

Ang pamamaraan na ito ay may maraming mga varieties, depende sa kung saan ang panahon para sa pagkuha ng data sa kamay ay tinutukoy. Average na tagal Ang mga diagnostic ng ELISA ay tumatagal ng 4-6 na oras, na nagbibigay-daan sa iyong magbigay ng mga resulta sa susunod na araw.

Ang pinakamahabang pamamaraan ay tumatagal ng hanggang 10 araw, halimbawa, sa kaso ng impeksyon sa HIV.

Sa kagyat na pangangailangan Posibleng gumamit ng mga paraan ng pagpapahayag, kung saan nakuha ang sagot sa loob ng 1-2 oras.

Saan ako makakakuha ng pagsusuri sa ELISA?

Dahil ang mga kagamitan para sa ganitong uri ng mga diagnostic ay medyo mahal, hindi lahat ng mga laboratoryo ay maaaring bumili nito. Bilang karagdagan, ang mga pagsubok na naglalaman ng mga partikular na antigen ay may limitadong buhay ng istante (karaniwan ay mga 1 taon) at samakatuwid ay kailangang patuloy na i-update.

Para sa mga kadahilanang ito, ang gobyerno mga institusyong medikal Ang mga laboratoryo ng ELISA ay hindi palaging magagamit. Kadalasan kinakailangan na makipag-ugnayan sa malalaking pribadong medikal o malalaking diagnostic center.

Upang magsagawa ng pagsusulit sa ELISA, ang laboratoryo ay dapat magkaroon ng isang espesyal na lisensya, at ang mga kawani at mga katulong sa laboratoryo ay dapat sumailalim sa espesyal na pagsasanay.

Kadalasan ay tiyak diagnostic center o ang laboratoryo ay inirerekomenda ng doktor na nagre-refer sa pasyente para sa pagsusuri.

Halaga ng enzyme immunoassay

Presyo para sa pag-aaral na ito depende sa rehiyon ng bansa at sa antas ng klinika na nagbibigay ng serbisyo. Sa Moscow pinakamababang presyo para sa pagtukoy ng isang antigen ay nagsisimula mula sa 700 rubles. Kung kinakailangan upang matukoy ang ilang mga immunoglobulin nang sabay-sabay, ang presyo ay idaragdag.

Kung sakali kagyat na pagsusuri ang gastos ay tumataas ng 150-200 rubles. para sa bawat antigen.

Sa kabila ng medyo mataas na gastos, ginagawang posible ng enzyme immunoassay na gawin ang pagsusuri sa pasyente bilang nagbibigay-kaalaman at mabilis hangga't maaari, na binabawasan ang oras bago magsimula ang paggamot at nagbibigay-daan para sa mas mabilis na pag-stabilize ng kondisyon ng tao.

Ang video na ito ay nagpapakita ng pelikulang "Mga Pangunahing Kaalaman ng enzyme immunoassay".