Fibroblasty. Funkcje fibroblastów

Główną działalnością nowoczesności medycyna estetyczna- profilaktyka starzenia z wykorzystaniem zaawansowanych technologii. W rezultacie badania naukowe Zidentyfikowano wzór mówiący, że komórki mają zdolność regeneracji. Fibroblasty również posiadają te właściwości, których regeneracja prowadzi do odmłodzenia skóry i eliminacji widocznych na niej defektów.

Funkcje i natura fibroblastów

Termin „fibroblasty” składa się z dwóch łacińskich słów przetłumaczonych dosłownie jako „kiełek” i „włókno”. Z natury są to komórki tkanka łączna, syntetyzując macierz zewnątrzkomórkową (strukturę tkanki zapewniającą transfer substancje chemiczne i mechaniczne wsparcie komórek skóry). Fibroblasty wytwarzają substancje będące prekursorami włókien kolagenu i elastyny, kwasu hialuronowego, fibryny.

Pochodzą z mezenchymu – tkanki rozrodczej, która znajduje się w komórkach organizmu ludzi i zwierząt. W stanie aktywnym struktura fibroplastów implikuje obecność jądra i procesów, mają zwiększony rozmiar i zawierają dużą liczbę rybosomów, w stanie spoczynku zmniejszają się i uzyskują kształt wrzecionowaty.

Fibroblasty skóry mają szeroki zasięg Funkcje. Dzięki ich obecności w organizmie zachodzą następujące procesy:

• Aktywacja procesów syntezy kolagenu i elastyny.
• Tworzenie się naczyń krwionośnych.
• Kierowanie komórek układu odpornościowego w stronę bakterii i cząstek obcych.
• Przyspieszenie wzrostu tkanek.
• Zwiększony wzrost komórek.
• Gojenie uszkodzonych obszarów skóry.
• Produkcja szeregu białek (proteoglikanów, lamininy i innych).

Przyczyny zmian związanych z wiekiem

O młodości skóry decyduje cykliczny proces produkcji kolagenu i elastyny, które następnie rozkładane są na części składowe, które wykorzystywane są przez fibroblasty do ich ponownej produkcji. Z biegiem czasu te ostatnie zmniejszają swoją aktywność, przestając wytwarzać włókna kolagenu i elastyny, co ostatecznie powoduje starzenie się skóry.

Zmiany związane z wiekiem zaczynają pojawiać się w wieku od 28 do 30 lat. Wyrażają się one utratą elastyczności i rozwojem opadania powiek, zmianami kolorytu skóry, zwiększoną suchością i powstawaniem zmarszczek. A wszystko to dzięki temu, że co dekadę liczba fibroblastów zmniejsza się o 10% oryginalny numer.

Uzupełnianie fibroblastów

Aby więc spowolnić starzenie się i przywrócić młodość, konieczne jest przywrócenie fibroblastów. Większość nowoczesnych technik kosmetycznych prowadzi jedynie do chwilowego przyspieszenia syntezy włókien kolagenowych, ale nie powoduje wzrostu samych komórek. Przez długi czas panowało powszechne przekonanie, że jest to po prostu niemożliwe.

W dzisiejszych czasach nauka poczyniła ogromne postępy, a odbudowa fibroblastów nie jest już fantazją. Tej procedury zwana terapią SPRS i jest szeroko praktykowana w Stanach Zjednoczonych, krajach europejskich, a ostatnio w Rosji.

Terapia SPRS: cechy i zasada realizacji

Odbudowa fibroblastów nie jest łatwa, wymaga przejścia skomplikowanej procedury wstrzyknięcia. Efektami jego stosowania są pogrubienie skóry i wzrost jej elastyczności, zapobieganie i redukcja opadania powiek. Zmarszczki ulegają również redukcji, znikają przebarwienia, a blizny ulegają wygładzeniu.

Terapię rozpoczyna się od pobrania komórek pacjenta ze skóry znajdującej się za małżowiną uszną. Powstała próbka służy do diagnozy i badań, nazywana biomateriałem. Służy do opracowania schematu leczenia i sztucznego odtworzenia fibroblastów, które następnie zostaną ponownie wstrzyknięte w skórę za pomocą zastrzyków.

Komórki wyhodowane z biomateriałów pacjenta nie są odrzucane przez organizm. Po przeszczepieniu pozostają aktywne przez półtora roku, podczas których poprawia się stan skóry.

Nie zaleca się podawania fibroblastów drogą iniekcji w okresie zaostrzeń chorób przewlekłych, przeziębień, infekcji wirusowych z towarzyszącym podniesiona temperatura ciała. Przeciwwskazania obejmują niedobór odporności, złośliwe formacje, infekcje i choroby przewlekłe V ostry etap. Przed wykonaniem zabiegu wymagana jest wstępna konsultacja ze specjalistą w celu ustalenia indywidualnych przeciwwskazań.

Zabieg trwa nie dłużej niż godzinę i przeprowadzany jest w ciągu 2 sesji z przerwą od 5 do 7 tygodni. Przed wstrzyknięciami wymagane jest znieczulenie miejscowe.

Wprowadzenie fibroblastów to kosztowna przyjemność. Pełny zakres usługi, w tym zbieranie, przechowywanie, badania i administrowanie biomateriałami, szacuje się na około 400 000 rubli.

Wideo: prowadzenie terapii SPRS

Fibroblasty to komórki tkanki łącznej, które zapewniają produkcję kolagenu i elastyny, utrzymując w ten sposób młodość naszej skóry. Z biegiem czasu ich liczba w organizmie stale maleje, przez co pojawiają się zewnętrzne oznaki zmian związanych z wiekiem. Odbudowa liczby fibroblastów odbywa się za pomocą techniki iniekcji opartej na sztucznie hodowanych komórkach.

Fibroblasty- komórki wiodące luźnej tkanki łącznej, wytwarzające składniki substancji międzykomórkowej. Są to rozgałęzione, wrzecionowate lub rozsiane komórki o wielkości około 20 mikronów. Organelle wewnętrznego środowiska metabolicznego są w nich dobrze rozwinięte. Jądro fibroblastów ma kształt owalny, zawiera równomiernie rozproszoną chromatynę i 2-3 jąderka. Cytoplazma jest wyraźnie podzielona na intensywnie wybarwioną endoplazmę i słabo wybarwioną ektoplazmę. Cytoplazma fibroblastów (zwłaszcza młodych) jest zasadochłonna. Wykazuje dobrze rozwiniętą siateczkę endoplazmatyczną z dużą liczbą rybosomów przyczepionych do błon w postaci łańcuchów po 10-30 granulek. Ta ultrastruktura ziarnistej siateczki śródplazmatycznej jest charakterystyczna dla komórek, które aktywnie syntetyzują białko „na eksport”. Występują także liczne wolne rybosomy i dobrze rozwinięty kompleks Golgiego. Mitochondria są duże, ich liczba jest niewielka. Metody cytochemiczne wykazały obecność enzymów glikolitycznych i enzymów hydrolitycznych lizosomów (zwłaszcza kolagenazy) w cytoplazmie fibroblastów. Enzymy utleniające mitochondria są mniej aktywne.

Układ mięśniowo-szkieletowy komórki zapewnia ich mobilność, zmianę kształtu, przywiązanie do podłoża, mechaniczne napięcie błony, do której przyczepiona jest komórka w hodowli. Na powierzchni komórki znajduje się wiele mikrokosmków i wypustek pęcherzykowych. Fibroblasty zawieszone w ciekłym ośrodku mają kształt kulisty. Fibroblast ulega rozproszeniu po przylgnięciu do stałej powierzchni, po której porusza się dzięki pseudopodiom.

Główna funkcja fibroblastów- synteza i wydzielanie białek i glikozaminoglikanów wchodzących w skład substancji międzykomórkowej tkanki łącznej, a także wytwarzanie i wydzielanie czynników stymulujących kolonie (granulocyty, makrofagi). Fibroblasty przez długi czas zachowują zdolność do namnażania się. Fibroblasty, które zakończyły swój cykl rozwojowy, nazywane są fibrocytami. Są to komórki długowieczne. Cytoplazma komórkowa jest pozbawiona organelli, komórka ulega spłaszczeniu, a potencjał proliferacyjny maleje. Komórka nie traci jednak zdolności do uczestniczenia w regulacji procesy metaboliczne w tkaninie.

Substancja międzykomórkowa. Składa się z elementów włóknistych i zasadowych (amorficznych). Stosując metody histoautoradiograficzne z wprowadzeniem znakowanych aminokwasów (3H-proliny, 3H-glicyny itp.) ustalono, że cząsteczki białek syntetyzowane są w polisomach fibroblastów. Fibroblasty mogą jednocześnie syntetyzować kilka rodzajów specyficznych białek i glikozaminoglikanów. Do syntezy białka kolagenowego niezbędna jest obecność witaminy C, której niedobór gwałtownie hamuje kolagenogenezę. Synteza substancji międzykomórkowych zachodzi intensywniej w warunkach obniżonego stężenia tlenu. Równolegle z syntezą kolagenu fibroblast niszczy około 2/3 tego białka przy pomocy enzymu kolagenazy, co zapobiega przedwczesnemu stwardnieniu tkanek.

Syntetyzowane cząsteczki prokolagenu wydostają się na powierzchnię fibroblastów w wyniku egzocytozy. W tym przypadku białko przechodzi z formy rozpuszczalnej do nierozpuszczalnej – tropokolagenu. Łączenie cząsteczek tropokolagenu w struktury supramolekularne – włókienka kolagenowe – następuje w bezpośrednim sąsiedztwie powierzchni komórki na skutek działania specjalnych substancji wydzielanych przez komórkę. W szczególności na powierzchni fibroblastów znaleziono białko - fibronektynę, która pełni funkcje klejące i inne. Kolejne etapy fibrylogenezy zachodzą poprzez polimeryzację i agregację tropokolagenu na wcześniej utworzonych włókienkach. W tym przypadku dojrzewanie włókien kolagenowych może nastąpić bez bezpośredniego połączenia z fibroblastami.
Glikozaminoglikany są regulatorami tworzenia kolagenu i wchodzą w skład głównego (amorficznego) składnika substancji międzykomórkowej.

Składnik włóknisty Substancja międzykomórkowa luźnej tkanki łącznej obejmuje trzy rodzaje włókien - kolagenowe, elastyczne i siatkowe. Mają podobny mechanizm powstawania, ale różnią się między sobą skład chemiczny, ultrastruktura i właściwości fizyczne. Białko kolagenowe identyfikuje się na podstawie składu aminokwasów i sekwencji aminokwasów w cząsteczce kolagenu. W zależności od zmienności aminokwasów w łańcuchu polipeptydowym, właściwości immunologicznych, masy cząsteczkowej itp. Wyróżnia się 14 lub więcej odmian białek kolagenowych, które są częścią tkanki łącznej narządów. Wszystkie tworzą 4 główne typy lub klasy kolagenu.

Kolagen typu 1 znalezione w łączniku i tkanka kostna, a także w twardówce i rogówce oka; Typ II - w tkankach chrzęstnych; Typ III - w ścianie naczyń krwionośnych, w tkance łącznej skóry płodu; Typ IV-ro - w błonach podstawnych.

Fibroblasty(fibroblastocyty) (od łacińskiego fibra - włókno, greckie blastos - kiełki, zarodki) - komórki syntetyzujące składniki substancji międzykomórkowej: białka (na przykład kolagen, elastyna), proteoglikany, glikoproteiny.

W okresie embrionalnym powstaje wiele komórek mezenchymalnych zarodka różnicowanie fibroblastów, co zawiera:

· komórki macierzyste,

komórki progenitorowe półmacierzyste,

· niewyspecjalizowane fibroblasty,

zróżnicowane fibroblasty (dojrzałe, aktywnie funkcjonujące),

fibrocyty (ostatecznie kształty komórek),

miofibroblasty i fibroklasty.

Z główna funkcja fibroblasty są związane z tworzeniem się substancji głównej i włókien (co wyraźnie objawia się na przykład podczas gojenia się ran, rozwoju tkanki bliznowatej, tworzenia torebki tkanki łącznej wokół ciała obcego).

Nisko wyspecjalizowane fibroblasty to mało przetworzone komórki z okrągłym lub owalnym jądrem i małym jąderkiem, zasadochłonną cytoplazmą, bogatą w RNA. Rozmiar komórek nie przekracza 20-25 mikronów. W cytoplazmie tych komórek znajduje się duża liczba wolnych rybosomów. Siateczka śródplazmatyczna i mitochondria są słabo rozwinięte. Aparat Golgiego jest reprezentowany przez skupiska krótkich rurek i pęcherzyków.
Na tym etapie cytogenezy fibroblasty mają bardzo niski poziom syntezy i wydzielania białek. Te fibroblasty są zdolne do reprodukcji mitotycznej.

Zróżnicowane dojrzałe fibroblasty są większe. Są to aktywnie działające komórki.

W dojrzałych fibroblastach przeprowadzana jest intensywna biosynteza białek kolagenu, elastyny, proteoglikanów, które są niezbędne do tworzenia substancji głównej i włókien. Procesy te nasilają się w warunkach niskiego stężenia tlenu. Czynnikami stymulującymi biosyntezę kolagenu są także jony żelaza, miedzi, chromu, kwas askorbinowy. Jednym z enzymów hydrolitycznych jest kolagenaza- rozkłada niedojrzały kolagen wewnątrz komórek, co reguluje intensywność wydzielania kolagenu na poziomie komórkowym.

Fibroblasty są komórkami ruchliwymi. W ich cytoplazmie, zwłaszcza w warstwie obwodowej, znajdują się mikrofilamenty zawierające białka takie jak aktyna i miozyna. Ruch fibroblastów staje się możliwy dopiero po związaniu ich za pomocą struktur włóknistych podtrzymujących fibronektyna- glikoproteina syntetyzowana przez fibroblasty i inne komórki, zapewniająca adhezję komórek i struktur niekomórkowych. Podczas ruchu fibroblast ulega spłaszczeniu, a jego powierzchnia może zwiększyć się 10-krotnie.

Plazlemoma fibroblastów jest ważną strefą receptorową, która pośredniczy w działaniu różnych czynników regulacyjnych. Aktywacji fibroblastów towarzyszy zwykle akumulacja glikogenu i zwiększona aktywność enzymów hydrolitycznych. Energia wytwarzana w wyniku metabolizmu glikogenu jest wykorzystywana do syntezy polipeptydów i innych składników wydzielanych przez komórkę.

Ze względu na zdolność do syntezy białek fibrylarnych rodzina fibroblastów obejmuje komórki siatkowate siateczkowatej tkanki łącznej narządów krwiotwórczych, a także chondroblasty i osteoblasty szkieletowej odmiany tkanki łącznej.

Fibrocyty- ostateczne (ostateczne) formy rozwoju fibroblastów. Komórki te mają kształt wrzeciona procesy skrzydłowe. [Zawierają niewielką liczbę organelli, wakuoli, lipidów i glikogenu.] Synteza kolagenu i innych substancji w fibrocytach jest znacznie zmniejszona.

Miofibroblasty- komórki podobne do fibroblastów, łączące zdolność do syntezy nie tylko kolagenu, ale także białek kurczliwych w znacznych ilościach. Fibroblasty mogą przekształcić się w miofibroblasty, które funkcjonalnie są podobne do gładkich Komórki mięśniowe, ale w przeciwieństwie do tych ostatnich mają dobrze rozwiniętą siateczkę śródplazmatyczną. Komórki takie obserwuje się w tkance ziarninowej gojących się ran oraz w macicy w czasie ciąży.

Fibroklasty- komórki o wysokiej aktywności fagocytarnej i hydrolitycznej biorą udział w „resorpcji” substancji międzykomórkowej w okresie inwolucji narządów (na przykład w macicy po ciąży). Łączą w sobie cechy strukturalne komórek tworzących fibryle (rozwinięta ziarnista siateczka śródplazmatyczna, aparat Golgiego, stosunkowo duże, ale nieliczne mitochondria), a także lizosomy z charakterystycznymi dla nich enzymami hydrolitycznymi. Kompleks enzymów wydzielanych przez nie na zewnątrz komórki rozkłada substancję spajającą włókna kolagenowe, po czym następuje fagocytoza i wewnątrzkomórkowe trawienie kolagenu.

Następujące komórki włóknistej tkanki łącznej nie należą już do różnicowania fibroblastów.

Fibroblasty skóry stanowią podstawę tkanki łącznej. Są producentami kwasu hialuronowego, włókien kolagenowych i elastyny. Zmiany związane z wiekiem spowalniają funkcjonowanie fibroblastów, powodując, że skóra staje się cienka i zwiotczała. Dzięki komórce technologia wtrysku organizm samodzielnie uruchamia funkcję odmładzania struktury skóry właściwej.

Istota fibroblastów

Fibroblasty skóry- są to komórki warstwy tkanki łącznej skóry właściwej, których poprzednikami były komórki macierzyste. Występują w dwóch postaciach:

1. Aktywny - duże komórki, wyposażone w płaskie owalne jądro, dużą liczbę rybosomów i procesów. Charakteryzują się intensywnym podziałem, produkcją kolagenu i innych składników macierzy.
2. Nieaktywne (fibrocyty) - komórki są nieco mniejsze i mają wrzecionowaty kształt. Powstają z fibroblastów i nie mogą się dzielić. Uczestniczą w syntezie włókien i regeneracji ran.

W miarę starzenia się organizmu liczba fibroblastów maleje, a ich aktywność maleje. Prowadzi to do pogorszenia syntezy substancji międzykomórkowych. Proces ten odbija się na skórze w postaci ścieńczenia, wysuszenia i zwiotczenia. Rozciąga się i powstają zmarszczki.

Funkcje

Jedną z głównych funkcji fibroblastów jest produkcja i regeneracja substancji międzykomórkowej. Tworząc czynniki wzrostu, składniki macierzy pozakomórkowej, enzymy, przyczyniają się do niszczenia i nowej syntezy kolagenu i kwasu hialuronowego. Dzięki nieprzerwanemu procesowi odnawia się substancja międzykomórkowa. Ponadto wytwarzają czynniki wzrostu komórek:

• Najważniejszym z nich jest stymulacja wzrostu wszystkich komórek skóry, wytwarzanie fibronektyny w reakcjach ochronnych;
• Transformacja - synteza włókien kolagenu i elastyny, tworzą się naczynia krwionośne, komórki układu odpornościowego kierowane są na obce czynniki, bakterie;
• Naskórek - aktywowana jest proliferacja tkanek, wzrost komórek i transport keratynocytów;
• Wzrost keratynocytów to epitelizacja, uszkodzenia ulegają regeneracji.

Czynniki wzrostu fibroblastów są reprezentowane przez wielofunkcyjne białka, które są mitogenami i pełnią także funkcje endokrynologiczne, regulacyjne, funkcja strukturalna. Dzięki fibroblastom powstają ważne dla skóry białka: proteoglikany, tinascyna, nidogen i laminina.

Istota techniki

Terapia SPRS to technika iniekcyjnego odmładzania skóry za pomocą fibroblastów, eliminująca samą przyczynę starzenia się skóry. Patent na technologię śródskórnego przeszczepiania autofibroblastów należy do amerykańskiej firmy FibrocellScience. Dzięki technologii komórkowej możliwa stała się hodowanie fibroblastów z cząsteczki ludzkiej skóry (biopsja). Własny biomateriał eliminuje problem zgodności tkankowej i ryzyko infekcji. Komórki autologiczne są postrzegane pozytywnie układ odpornościowy i są w stanie w pełni funkcjonować.

Próbkę można pobrać w każdym wieku, ale najlepiej jest to zrobić w młodym wieku. Zalecany wiek to od 20 do 30 lat. Podczas dowolnej operacji można uratować kawałek skóry i wyizolowane z niego komórki umieścić w kriogenicznym magazynie na wiele lat. Temperatura -196 stopni pozwala przechowywać je przez całe życie i wykorzystywać w miarę potrzeb. Dzięki temu w dowolnym momencie będziesz mogła przeprowadzić skuteczne zabiegi kosmetyczne.

Własne fibroblasty wraz z komórkami macierzystymi mają właściwość utrzymywania potencjału podczas starzenia. Pod znieczulenie miejscowe Od pacjenta pobierana jest niewielka próbka skóry za uchem, pępkiem lub przedramieniem. Obszary te są najmniej narażone na promieniowanie ultrafioletowe. Jego wielkość wynosi około 4 mm. Wyizolowane z niego fibroblasty umieszcza się w specjalnych fiolkach.

Hodując je na podłożu z surowicą płodową, w młodych komórkach stymuluje się zdolność do namnażania, a stare są wypłukiwane. Następuje „odmłodzenie” kultury. Po miesiącu liczba komórek wzrasta kilka tysięcy razy. Po reaktywacji kultura komórkowa zostaje przeszczepiona pacjentowi i aktywnie wypełnia skórę właściwą. Po półtora miesiąca namnożone fibroblasty wstrzykiwane są w skórę twarzy pacjenta, także wokół oczu, a także w szyję, dekolt i ramiona.

Procedura

Kurs składa się z 3-5 sesji, przerwy pomiędzy nimi wynoszą od 3 do 6 tygodni. Etapy zabiegu:

• badanie pacjenta w celu identyfikacji istniejących przeciwwskazań;
• pobieranie materiału;
• hodowla fibroblastów;
• wstrzyknięcie materiału komórkowego w skórę dwiema metodami: tunelową – w głębokie fałdy skórne, mezoterapią grudkową;
• zabezpieczając skórę przed promieniowaniem ultrafioletowym stosując krem.

Pacjenci zauważają, że zabieg jest bolesny, dlatego stosuje się krem ​​znieczulający Emla. Ilość stosowanego leku wynosi do 3 ml na sesję. Okres rekonwalescencji trwa 2-3 dni. Po zabiegu zabrania się stosowania kosmetyków. Przez dwa tygodnie należy powstrzymać się od wizyty w saunie lub łaźni. Skórę należy chronić przed słońcem smarując ją kremem o wysokim stopniu ochrony. Zaleca się powtarzanie zabiegu raz w roku. Efektem jest poprawa stanu skóry twarzy na przestrzeni kilku miesięcy.

Skuteczność i zalety metody

Odmładzanie fibroblastami daje pierwsze efekty po 1,5 lub 2 miesiącach. Pełny efekt Efekt zabiegu pojawia się po sześciu miesiącach i utrzymuje się 2-3 lata. Rozpoczyna się wzmożona produkcja czynników wzrostu i macierzy zewnątrzkomórkowej. Fibroblasty przechodzą naturalne fazy cyklu: ulegają aktywacji, syntetyzują elastynę, kolagen i inne substancje, następnie rozpoczyna się faza degradacji, zastępując je nowymi fibroblastami.

Ich zastosowanie jest szeroko rozpowszechnione w medycynie – przeciw oparzeniom, do regeneracji tkanek w trakcie owrzodzenia troficzne, rany Ich znaczenie w kosmetologii jest ogromne. Młodość skóry kształtuje się na podstawie liczby fibroblastów. Umieszczone w skórze właściwej, wyhodowane fibroblasty osadzają się w tkankach, rozpoczynając produkcję kolagenu i elastyny. W efekcie skóra staje się elastyczna, nabiera równomiernego kolorytu, a drobne zmarszczki znikają.

Ale nie należy spodziewać się efektu zaostrzenia po zabiegu. Technika ta ma na celu poprawę cech jakościowych skóry. Główne zalety terapii SPRS:

• lek działa z genami, co eliminuje zakłócenia pierwotnej struktury skóry;
• aktywowane są naturalne procesy odmładzania;
• bezpieczeństwo, brak ryzyka odrzucenia, Reakcja alergiczna;
• długotrwałe zachowanie wyniku.

W ciągu 6 miesięcy zmarszczki wokół oczu zostają wygładzone o 90%. Dekolt i szyja wyglądają młodziej o 95%, policzki o 87%. Fałdy wokół ust zostają zmniejszone o 55%.

Przeciwwskazania

Pomimo całkowitego bezpieczeństwa zabieg ma pewne przeciwwskazania:

• ciąża, okres laktacji;
• zaburzenia krzepnięcia krwi;
• nowotwory złośliwe;
• choroby autoimmunologiczne;
• predyspozycja do powstawania blizn;
• ARVI;
• zapalenie skóry.

W ciągu dnia po zabiegu na skórze może pojawić się zaczerwienienie oraz mikrokrwiaki. Następnego dnia objawy ustępują.

Technologia przeszczepiania autofibroblastów posiada oficjalne zezwolenie Roszdravnadzoru. Jego bezpieczeństwo potwierdza laboratoryjne monitorowanie żywotności komórek.

Właściciele patentu RU 2536992:

Wynalazek dotyczy dziedziny biotechnologii, w szczególności technologii komórkowych, i może być stosowany w medycynie. Metoda polega na skalowaniu komórek diploidalnych linii M-20 z kriobanku IPVE nazwanego od ich nazwiska. POSEŁ. Chumakowa Rosyjskiej Akademii Nauk Medycznych z ampułki banku komórek nasiennych pasażu 7 w celu uzyskania banku komórek roboczych pasażu 16. W tym przypadku komórki z 20-33 pasaży, odpowiednie do celów terapeutycznych i/lub diagnostycznych, otrzymuje się poprzez hodowlę w pożywce zawierającej 10% osocza aktywnego fibrynolitycznie (FAP) osoby zawierającego płytkopochodny czynnik wzrostu PDGF w stężenie od 155 do 342 pg/ ml. Wynalazek pozwala na zwiększenie aktywności proliferacyjnej diploidalnych ludzkich komórek fibroblastów. 1 pensja pliki, 2 tabele.

Wynalazek dotyczy biotechnologii, immunologii, medycyny, w szczególności sposobu zwiększania właściwości proliferacyjnych diploidalnych komórek fibroblastów ludzkich do wykorzystania tych komórek do celów terapeutycznych i diagnostycznych, w tym do oznaczania aktywności przeciwwirusowej ludzkich interferonów, do zastępowania komórek terapia.

Ludzkie diploidalne linie komórkowe (HDCL) mają niezaprzeczalną przewagę nad wszystkimi znanymi typami hodowli komórkowych pod względem zdolności do utrzymywania stabilnych cech biologicznych i genetycznych podczas pasaży. Certyfikacja LDCC przeznaczonych do produkcji szczepionek prowadzona jest zgodnie z jednolitymi wymaganiami opracowanymi przez Światową Organizację Zdrowia. Zalecenia te stanowią podstawę krajowych kryteriów certyfikacji szczepionki LDKCH, opracowanych przez Państwowy Instytut Badawczy Klinicznych Chorób Zakaźnych im. LA. Tarasewicz i Ministerstwo Zdrowia ZSRR [ Wytyczne„Certyfikacja ciągłych linii komórkowych – substratów do produkcji i kontroli wyrobów medycznych preparaty immunobiologiczne» RD-42-28-10-89. Ministerstwo Zdrowia ZSRR. M., 1989. - s. 16]. Certyfikowana linia ludzkich komórek diploidalnych ma ograniczoną żywotność, stabilne cechy biologiczne, kulturowe i genetyczne, jest wolna od zanieczyszczeń (bakterie, grzyby, mykoplazmy, wirusy) i nie powoduje powstawania nowotworów u zwierząt z obniżoną odpornością. Diploidalna linia komórkowa musi posiadać certyfikowany bank komórek posiewowych na wczesnych poziomach pasażu (do pasażu 10), składający się z co najmniej 200 kriofiolek. Pasażując komórki posiewowe z jednej lub kilku kriofiolek na 16. poziom pasażu, uzyskuje się roboczy bank komórek, z którego można uzyskać niezbędne kultury produkcyjne do produkcji lub do celów Praca badawcza. W Rosji i za granicą istnieje tylko kilka ludzkich diploidalnych linii komórkowych (Wi-38, MRC-5, M-22 itp.) certyfikowanych zgodnie z wymienionymi wymaganiami. Certyfikowane LDCV wykorzystywane są do produkcji szczepionek przeciwko polio, odrze, różyczce, wściekliźnie, chorobom układu oddechowego i zakażenia wirusem cytomegalii, jak również interferon [T.K. Borisova, L.L. Mironova, O.I. Konyushko, V.D. Popowa, V.P. Grachev, N.R. Szuchmina, V.V. Zverev. Krajowe szczepy ludzkich komórek diploidalnych stanowią substrat do produkcji szczepionek. Wirusologia medyczna. Materiały konferencja naukowo-praktyczna « Rzeczywiste problemy wirusologii medycznej, poświęcony 100-leciu M.P. Czumakow.” M. 2009. Tom XXVI. s. 305-307; LL. Mironova, V.D. Popova, O.I. Koniuszki. Doświadczenie w tworzeniu banku oryginalnych linii komórek przeszczepialnych i ich wykorzystaniu w praktyce wirusologicznej. Biotechnologia. 2000, s. 2000 41-47]. LDCN są szeroko stosowane in vitro do diagnostyki infekcji wirusowych i analizy toksyczności różne leki oraz produkty terapii zastępczej [Patent RF nr 2373944 z 23.06.2008. Metoda leczenia oparzenie rany. JAK. Ermołow, S.V. Smirnow, V.B. Khvatov, L.L. Mironow; S.V. Smirnow, V.B. Hvatov. Innowacyjne technologie miejscowe leczenie oparzeń w Instytucie Badawczym Medycyny Ratunkowej im. N.V. Sklifosowski. W książce: Nowa ekonomia. Nowatorski portret Rosji. M., Centrum Partnerstwa Strategicznego, 2009. s. 388-390].

W IPVE im. POSEŁ. Chumakowa RAMS w latach 80-tych XX wieku ze skóry i mięśni 8-10-tygodniowych embrionów ludzkich wyhodowano kilka linii komórek diploidalnych. Niniejsza praca poświęcona jest modyfikacji wytwarzania ludzkich komórek diploidalnych do celów diagnostycznych i terapii zastępczej, czyli produkcji diploidalnych komórek fibroblastów ludzkich o podwyższonych właściwościach proliferacyjnych.

Prototyp. Patent RF nr 1440029 z 22 marca 1993 r. [Mironova L.L., Preobrazhenskaya N.K., Solovyova M.N., Orlova T.G. Stobetsky V.I., Kryuchkova G.P., Karmysheva V.Ya., Kudinova S.I., Popova V.D., Alpatova G.A. IPVE i NIIEiM im. N.F. Gamaleja. Szczep diploidalnych komórek skóry i mięśni embrionów ludzkich stosowany jako system testowy do określania aktywności przeciwwirusowej ludzkich interferonów i propagacji wirusa].

Szczep ten LDCC oznaczony jest jako M-21, jednakże kultura fibroblastów M-21 wykazywała niewystarczającą aktywność proliferacyjną, co skracało czas tworzenia się monowarstwy oraz zwiększało zużycie komórek i materiałów, co ostatecznie doprowadziło do całkowitego wyczerpania jej rezerw. W rezultacie pojawiło się zapotrzebowanie na nową linię komórkową nadającą się do oznaczania aktywności przeciwwirusowej ludzkich interferonów i do innych celów medycznych i biologicznych, bardziej opłacalną, charakteryzującą się wysoką aktywnością proliferacyjną, posiadającą banki komórek nasiennych i roboczych. Linia ta oznaczona jest jako M-20. Na poziomie pasażu 7 przygotowano bank komórek nasiennych. W 2012 roku z ampułki banku przejścia 7 wykonano bank komórek roboczych na poziomie pasażu 16. Banki nasion i komórek roboczych w przejściach poziomów 7 i 16 przechowywane są w Instytucie Naczyń Fizyki Doświadczalnej im. POSEŁ. Chumakov RAMS i pozwól nam zapewnić jedno i drugie procesy produkcji i badania naukowe.

Różnica pomiędzy niniejszym wynalazkiem a najbliższym analogiem (prototypem) polega na zwiększeniu aktywności proliferacyjnej komórek M-20 przy zastosowaniu 10% osocza aktywnego fibrynolitycznie (FAP).

Zatem przedmiotem wynalazku jest sposób zwiększania właściwości proliferacyjnych diploidalnych ludzkich komórek fibroblastów do celów medycznych i biologicznych poprzez hodowlę komórek z kriobanku IPVE nazwanego od tego nazwiska. POSEŁ. Chumakowa Rosyjskiej Akademii Nauk Medycznych, w którym wykorzystuje się komórki diploidalne scharakteryzowanej linii M-20, które są skalowane z ampułki banku komórek nasiennych pasażu 7 i uzyskuje się bank komórek roboczych pasażu 16, z komórkami pasaży 20-33, nadające się do stosowania w celach terapeutycznych i/lub diagnostycznych, otrzymane przez hodowlę w pożywce zawierającej 10% ludzkiego osocza aktywnego fibrynolitycznie (FAP). Podczas hodowli komórek korzystnie stosuje się pożywkę DMEM z 10% FAP.

Ludzkie komórki diploidalne scharakteryzowanej linii M-20 otrzymane powyższą metodą charakteryzują się wysoką aktywnością proliferacyjną i nadają się do stosowania w celach terapeutycznych i/lub diagnostycznych.

Schemat wdrożenia metody:

1. Wykorzystuje się jedną kriofiolkę z banku komórek nasiennych z 7. pasażu IPVE nazwanego od nazwiska. POSEŁ. Chumakowa RAMS

2. Przygotowanie banku komórek roboczych na poziomie przejścia 16 IPVE im. POSEŁ. Chumakowa RAMS

3. Odzyskiwanie fibroblastów linii M-20 z banku komórek roboczych pasażu 16 (IPVE nazwany na cześć M.P. Chumakowa, Rosyjskiej Akademii Nauk Medycznych).

4. Uzyskanie hodowli jednowarstwowej fibroblastów linii M-20, pasaż 17.

5. Przywrócenie właściwości biologicznych fibroblastom linii M-20 poprzez trzykrotne pasażowanie (do 20. włącznie) w celu naprawy ewentualnych uszkodzeń DNA podczas procesu kriokonserwacji.

6. Pozyskiwanie hodowli komórkowych do celów diagnostycznych i terapii zastępczej komórek poprzez replikację fibroblastów linii M-20 z pasażu 20 do 33 przy użyciu pożywki zawierającej 10% osocza aktywnego fibrynolitycznie (o zawartości PDGF od 155 do 342 pg/ml).

Proponowana metoda zapewnia produkcję komórek o wysokiej aktywności proliferacyjnej i nadających się do zastosowania w diagnostyce i/lub celów leczniczych.

Ten wynik techniczny uzyskano poprzez hodowlę ludzkich fibroblastów linii M-20 w pożywce z dodatkiem 10% osocza aktywnego fibrynolitycznie (FAP), które ma działanie stymulujące wzrost i wzmaga aktywność proliferacyjną hodowli komórkowej.

FAP jest klinicznie stosowanym środkiem do transfuzji, otrzymywanym z krwi osób, które nagle zmarły na skutek zawału mięśnia sercowego, ostrej niewydolności serca, krwotoku mózgowego, w ciągu pierwszych 6 godzin po śmierci [Zarządzenie Ministra Zdrowia ZSRR nr 482 z czerwca br. 14.1972 „W sprawie poprawy zaopatrzenia placówek i klinik leczniczych i profilaktycznych w tkanki zwłok, szpik kostny i krew”]. Krew pośmiertna jest kompletnym medium transfuzyjnym, które posiada szereg właściwości biologicznych – przede wszystkim zwiększony potencjał fibrynolityczny. W związku z tym proponuje się również określenie pośmiertnej fibrynolizy krwi. Główne wskazania do pośmiertnej transfuzji krwi: ostra utrata krwi, wstrząs, niedokrwistość różnego pochodzenia, oparzenia, wymiana metaboliczna w okresie zatrucie egzogenne, wypełnianie AIK podczas stosowania krążenia pozaustrojowego w chirurgii [np. Tsurinowa. Transfuzja krwi fibrynolitycznej. M., 1960, 159 s.; S.V. Ryżkow. Przygotowanie i możliwości wykorzystania krwi fibrynolitycznej w zależności od terminu pobrania i przyczyny zgonu. Streszczenie autora. doktor. diss. L., 1968, 21 s.; GA Pafomow. Biologiczna charakterystyka krwi nagle zmarłych i jej zastosowanie w praktyce chirurgicznej. Diss. doktor. Miód. Nauka. M., 1971, 355 s.; K.S. Simonyan, K.P. Gutiontova, E.G. Tsurinowa. Krew pośmiertna w aspekcie transfuzjologii. M., Medycyna, 1975, 271 s.]. Obecnie wykorzystuje się pośmiertne składniki krwi: osocze aktywne fibrynolitycznie, masa czerwonych krwinek, masa leukocytów, masa płytek [G.Ya. Levina. Właściwości hemokoagulacyjne i zastosowanie kliniczne osocze i płytki krwi ze zwłok. Streszczenie autora. doktor. diss. M., 1978, 31 s.; V.B. Hvatov. Preparaty o działaniu fibrynolitycznym i antyproteazowym z osocza krwi osób nagle zmarłych. Diss. doktor. Med Sciences, 1984, 417 s.; V.B. Plasmakinaza Khvatova – nowy preparat trombolityczny z osocza pośmiertnego W: Zakrzepica i tromboliza wyd. E.I. Chazow, V.V. Smirnow). Consultants Bureau, N.Y., L, 1986, s. 25. 283-310; V.B. Hvatov. Medyczne i biologiczne aspekty wykorzystania krwi pośmiertnej. Biuletyn Akademii Nauk Medycznych ZSRR, 1991, 9. s. 18-24; V.B. Hvatov. Krew zwłok – historia i aktualny stan zagadnienia. Problem hematol. i przepełnienie. krew, 1997, 1. S. 51-59]. Zastosowanie kliniczne znalazły także składniki krwi zwłok uzyskane od dawców narządów [osoba zmarła z bijącym sercem zgodnie z „Instrukcją stwierdzania zgonu osoby na podstawie rozpoznania śmierci mózgu” z dnia 20 grudnia 2001 r. nr 460, Rejestracja Ministra Sprawiedliwości nr 3170 z dnia 17 stycznia 2002 r.] . Przeszczepianie narządów, tkanek i komórek odbywa się zgodnie z ustawą Federacji Rosyjskiej „O przeszczepianiu narządów i (lub) tkanek ludzkich” – z późniejszymi zmianami. Prawa federalne z dnia 20 czerwca 2000 r. nr 91-F3, z dnia 16 października 2006 r. nr 160-F3; V.B. Chwatow, S.V. Zhuravel, VA Guliajew, E.N. Kobzeva, M.S. Makarowa. Przydatność biologiczna i aktywność funkcjonalna komórkowych składników krwi dawców narządów. Transplantologia, 2011, 4, s. 2011-2011. 13-19; Khubutia M.Sh., Khvatov V.B., Gulyaev V.A. itp. Metoda kompensacji objętości kulistej krwi i efektów immunomodulacyjnych podczas przeszczepu. Patent RF na wynalazek nr 2452519, pub. 06.10.2012, biuletyn. nr 16].

Osocze aktywne fibrynolitycznie otrzymuje się z krwi osób nagle zmarłych, przygotowanej z dodatkiem środka konserwującego Glyugitsir (stosunek krew: środek konserwujący 4:1), aby zachować jego właściwości aktywne fibrynolitycznie. Oddzielenie osocza od komórkowych elementów krwi odbywa się w sterylnym pudełku z zachowaniem wszelkich zasad aseptyki i środków antyseptycznych i przypomina uzyskiwanie osocza dawcy z krwi dawcy w puszkach. Kliniczne zastosowanie FAP w chirurgii i traumatologii ujawniło działanie stymulujące gojenie się ran [I.Yu. Klyukvin, M.V. Zvezdina, V.B. Chwatow, F.A. Burdyga. Sposób leczenia ran po ukąszeniach. Patent na wynalazek Federacji Rosyjskiej nr 2372927, wyd., 20.11.2009, biuletyn. nr 32]. Powiązaliśmy ten efekt z obecnością czynników stymulujących wzrost w FAP, wydzielanych przez aktywowane płytki krwi. Następnie zidentyfikowaliśmy płytkopochodny czynnik wzrostu (PDGF) w FAP. W specjalnych badaniach wykazano stymulujący wzrost wpływ FAP na hodowlę komórek ludzkich. Badane próbki FAP w stężeniu 10% dodano do zawiesiny komórkowej ludzkich fibroblastów linii M-20 zawierającej znaną liczbę komórek i 10 ml powstałej mieszaniny umieszczono w kolbach hodowlanych o powierzchni wzrostu wynoszącej 25 cm 2 . Komórki hodowano przez 3-4 dni w atmosferze 5% CO2 i w temperaturze 37°C. Po 3-krotnym pasażowaniu wyhodowane komórki zliczano w komorze Fuchsa-Rosenthala i określano stosunek liczby wyhodowanych komórek do liczby wysianych komórek - wskaźnik proliferacji (tab. 1).

Z przeprowadzonych doświadczeń wynika, że ​​właściwości wzrostu FAP zapewniają wysoką aktywność proliferacyjną i nie różnią się od płodowej surowicy bydlęcej. Ponadto FAP zawiera ludzkie czynniki wzrostu płytek krwi, tj. typ allogeniczny, w odróżnieniu od płodowej surowicy bydlęcej – typ ksenogeniczny. Fakt ten ma decydujące znaczenie dla przeszczepienia komórek w trakcie terapii zastępczej. Należy zauważyć, że działanie stymulujące wzrost na hodowlę komórek M-20 wynika w szczególności z obecności PDGF w FAP w stężeniu od 155 do 342 pg/ml. Dane te uzyskano przy użyciu zestawu Qantikine, zestawu immunologicznego Human PDGF-BB firmy R&D Systems i systemu Multiskan Ascent firmy Thermo. Stężenie PDGF-BB w FAP jest podobne do jego zawartości w surowicy. I tak, w surowicy dawców krwi i badanych pacjentów zawartość PDGF wahała się od 110 do 880 pg/l, średnio 244 pg/ml, natomiast w osoczu zawartość PDGF wahała się od 0-2 pg/ml.

Dla lepszego zrozumienia proponowanego rozwiązania technicznego „produkcja ludzkich komórek diploidalnych linii M-20 do celów medycznych i biologicznych” podajemy następujący przykład.

Komórki linii M-20, pasaż 16, odzyskuje się z działającego banku. W tym celu kriofiolkę z komórkami wyjmuje się z ciekłego azotu i umieszcza w niej kąpiel wodna w temperaturze 38°C i po rozmrożeniu zawartość przenosi się do naczynia hodowlanego z pożywką DMEM zawierającą 10% FAP (o zawartości PDGF od 155 do 342 pg/ml), dodaje się antybiotyk gentamycynę w ilości 1 ml 4% roztworu na 1 litr pożywki. Aby utworzyć monowarstwę, komórki hoduje się przez 4-5 dni w temperaturze 37°C i 5% CO2 w atmosferze. Po utworzeniu się monowarstwy komórek przeprowadza się 3 kolejne pasaże, niezbędne do naprawy DNA po kriokonserwacji. Następnie komórki replikuje się z pasażu 20 do pasażu 33. Komórki z tych pasaży są przeznaczone do celów biomedycznych. Powstałą linię komórkową szczegółowo scharakteryzowano zgodnie z wymogami WHO i GNIISiK MIBP im. LA. Tarasewicza, obejmujące typowanie HLA linii komórkowej M-20, a także badanie widma jej cytokin. Podajemy porównawczy opis właściwości linii M-20 i linii M-22 (tab. 2). Linia M 22 (ludzkie diploidalne fibroblasty) jest dopuszczona jako substrat szczepionki i dopuszczona do produkcji wszelkiego rodzaju medycznych szczepionek wirusowych, a także stosowana jest do leczenia ran oparzeniowych stopnia II-IIIA [Patent RF na wynalazek nr 2373944 , 23.06.2008. Sposób leczenia ran oparzeniowych. JAK. Ermołow, S.V. Smirnow, V.B. Khvatov, L.L. Mironova, O.I. Klnyushko, E.A. Żyrkowa, BC Boczarowa].

Linia M-20 została zainstalowana w IPVE im. POSEŁ. Chumakov RAMS w 1986 roku ze skóry i mięśni 10-tygodniowego zarodka ludzkiego, uzyskanego w wyniku aborcji od zdrowej kobiety. Nie było w przeszłości raka, chorób przenoszonych drogą płciową, zapalenia wątroby ani gruźlicy; genetyczne i choroby wrodzone w rodzinie nie zaobserwowano. Pożywka do hodowli komórkowej DMEM uzupełniona 10% FAP. Stosunek zaszczepiania wynosi 1:3-1:4 dwa razy w tygodniu przy dawce zaszczepiania komórek wynoszącej 7 x 104 komórek/ml. Monowarstwa komórkowa składa się z zorientowanych jednorodnych wrzecionowatych komórek z owalnymi jądrami zawierającymi 1-3 jąderka i małe grudki chromatyny. W koło życia linię można podzielić na 3 fazy rozwoju: tworzenie 1-3 przejść, aktywny wzrost 4-40 i starzenie się 41-52, po czym następuje śmierć. Komórki linii posiadają ludzki kariotyp 2m=46, XY. Linia charakteryzuje się dużą stabilnością genetyczną: 93,3-96,9% komórek ma diploidalny zestaw chromosomów, komórki z zestawem poliploidalnym nie więcej niż 1,6%. Nie zaobserwowano żadnych przerw, pęknięć ani chromosomów pierścieniowych. Liczba prążków izoenzymów G-6PDE i LDE oraz ich ruchliwość elektroforetyczna pokrywają się z ruchliwością elektroforetyczną ludzkich erytrocytów. Wolny typ G-6FDG. Podczas siewu na pożywki selektywne nie stwierdzono zanieczyszczenia bakteriami, grzybami i mykoplazmami. Ponadto nie wykryto skażenia mykoplazmą podczas barwienia fluorochromami DNA Hochst 33258 i oliwomycyną, a także Metoda PCR. Zanieczyszczenie wirusami w doświadczeniach na oseskach i dorosłych białych myszach, świnki morskie, królików i zarodków kurzych, a także na homologicznych i heterologicznych hodowlach komórkowych. Kontrola rakotwórczości. Kiedy komórki tej linii podawano zwierzętom z obniżoną odpornością, guzy nie tworzyły się. Nie wykryto odwrotnej transkryptazy. Markery HLA: Klasa I: A*(02.03)/B*(07.40)/CW*(03.07). Klasa II: DRB1*(15.16)/DQB1*(05.06). Komórki linii M-20 na 20. poziomie pasażu wytwarzają mRNA dla α-interferonu (IFNα) i interleukin: IL1β, 2, 4, 6, 8, 10, 18.

Zatem proponowana linia jest diploidalna – ma ograniczoną żywotność, przez całe życie zachowuje kariotyp normalnych komórek ludzkich, jest wolna od zanieczyszczeń i nie ma potencjału onkogennego. Charakteryzuje się bezpieczeństwem zgodnie z zaleceniami WHO oraz wymogami GNIISiK MIBP im. LA. Tarasewicz. W IPVE im. POSEŁ. Chumakov RAMS istnieją banki nasion i komórek roboczych, które mogą zaspokoić wszystkie potrzeby produkcyjne i badawcze. Komórki linii M-20 są wrażliwe na infekcję różnymi wirusami. Dodatkowo zbadano widmo cytokin linii M-20. Znajomość widma cytokin komórkowych pozwala na dokładniejszą ocenę wyników przy określaniu statusu interferonu u pacjentów i udzielanie świadomych zaleceń dotyczących stosowania leków terapeutycznych i profilaktycznych.

Ludzkie komórki diploidalne – fibroblasty szczepu M-20 o zwiększonej aktywności proliferacyjnej, uzyskane proponowaną metodą, mogą znaleźć zastosowanie w celach diagnostycznych, w szczególności do oznaczania aktywności interferonu (IFN) w ludzkiej surowicy krwi, a także do celów leczniczych np. do miejscowego leczenia odleżyn, ran po ugryzieniu, długotrwale niegojących się i oparzeniowych.

1. Sposób zwiększania właściwości proliferacyjnych diploidalnych komórek fibroblastów ludzkich, charakteryzujący się tym, że diploidalne komórki scharakteryzowanej linii M-20 pochodzą z kriobanku Instytutu Naczyń im. POSEŁ. Chumakov RAMS pobiera się z ampułki banku komórek nasiennych z pasażu 7 i otrzymuje się bank komórek roboczych z pasażu 16, natomiast komórki z pasaży 20-33, odpowiednie do stosowania w celach terapeutycznych i/lub diagnostycznych, otrzymuje się poprzez hodowlę w pożywce zawierającej 10% fibrynolitycznie aktywnego osocza (FAP) ludzkiego zawierającego płytkopochodny czynnik wzrostu PDGF w stężeniu od 155 do 342 pg/ml.

2. Sposób według zastrzeżenia 1, w którym do hodowli komórek stosuje się pożywkę DMEM z 10% FAP.

Podobne patenty:

Wynalazek dotyczy przemysłu farmaceutycznego, a mianowicie zastosowania do produkcji ludzkich komórek perfuzatu łożyskowego medycyna w celu zahamowania proliferacji komórek nowotworowych u osobnika.

Grupa wynalazków dotyczy dziedziny biotechnologii i onkologii. Metoda obejmuje: a) izolację poporodowych, specyficznych tkankowo, multipotencjalnych autologicznych komórek macierzystych (ASC) i/lub autologicznych komórek progenitorowych (APC) w celu ich późniejszych analiz proteomicznych i pełnej transkryptomii; b) izolacja ASC i/lub APC i/lub multipotencjalnych allogenicznych haploidentycznych komórek macierzystych HLA (HLA-CK) w celu późniejszej przebudowy ich profilu proteomicznego; c) izolacja CSC z guza pacjenta; d) analiza proteomiczna ASC i/lub APC i RSC; e) pełna analiza transkryptomu ASC i/lub APC i CSC; f) określenie zestawu białek, z których każde jest zawarte w profilach proteomicznych zarówno ASC i/lub APC, jak i CSC; g) analiza wcześniej zdefiniowanego zestawu białek w celu identyfikacji wewnątrzkomórkowych szlaków sygnałowych w CSC, które nie uległy transformacji nowotworowej w wyniku karcynogenezy, oraz określenia białek docelowych będących akceptorami błonowymi zidentyfikowanych szlaków sygnałowych; h) analiza pełnego profilu ekspresji genów transkryptomu CSC i potwierdzenie integralności i znaczenia funkcjonalnego elementów strukturalnych zidentyfikowanych szlaków sygnałowych w CSC; i) identyfikacja białek ligandowych zdolnych do aktywacji białek docelowych; Do) analiza porównawcza pełne profile transkryptomiczne ASA i/lub APC z profilami transkryptomicznymi zawartymi w znanych bazach danych transkryptomów, w celu identyfikacji perturbogenów zdolnych do modyfikowania profilu ekspresji genów ASA i/lub APC i/lub HLA-CK, wyizolowanych w celu przemodelowania ich profilu proteomicznego, w kierunek wydzielania wcześniej niektórych białek ligandowych; k) przebudowa profilu proteomicznego ASA i/lub APC i/lub HLA-CK przez perturbogeny w celu uzyskania zmodyfikowanego profilu transkryptomicznego różnych systemy komórkowe, zdolny do wywierania wpływu regulacyjnego na RSC pacjenta.

Wynalazek dotyczy dziedziny biotechnologii, w szczególności technologii komórkowych, i może być stosowany w medycynie. Do leczenia niedokrwienia u osobnika stosuje się populację komórek jednojądrzastych lub nieembrionalnych komórek macierzystych wzbogaconą w komórki linii monocytowej zawierającej promonocyty.

Wynalazek dotyczy dziedziny biotechnologii i technologii komórkowej. Zastrzegany wynalazek ma na celu stworzenie komórek pluripotencjalnych, multipotencjalnych i/lub samoodnawiających się, które są w stanie zacząć różnicować się w hodowli w Różne rodzaje komórek i są zdolne do dalszego różnicowania in vivo.

Wynalazek dotyczy dziedziny medycyny i może być stosowany do selekcji plemników w sposobach technologii wspomaganego rozrodu. Metoda polega na umieszczeniu kropli plemnika i kropli pożywki na szalce Petriego w odległości nie większej niż 5 cm od siebie, połączeniu kropli paskiem lepkiego pożywki o parametrach lepkości 1-4 Pa s, następnie inkubację szalki z zawartością przez 30-90 minut w warunkach symulujących środowisko naturalne kanał szyjki macicyżeński układ rozrodczy.

Wynalazek dotyczy dziedziny medycyny, biotechnologii i technologii komórkowej. Metoda różnicowania pluripotencjalnych komórek macierzystych reprezentujących ludzką linię komórkową na komórki wykazujące ekspresję markerów charakterystycznych dla utworzonej linii endodermy polega na traktowaniu pluripotencjalnych komórek macierzystych pożywką charakteryzującą się tym, że nie zawiera aktywiny A i zawiera GDF-8 przez pewien okres czasu , wystarczające, aby pluripotencjalne komórki macierzyste różnicowały się w komórki wyrażające markery charakterystyczne dla linii utworzonej endodermy.

Niniejszy wynalazek dotyczy dziedziny immunologii. Zaproponowano warianty oligopeptydu wyizolowanego z białka RAB6KIFL (KIFL20A), które mają zdolność indukowania cytotoksycznych limfocytów T (CTL) w ramach kompleksu z cząsteczką HLA-A*0201.

Wynalazek dotyczy dziedziny przemysłu spożywczego i jest sposobem warzenia piwa obejmującym dodanie termostabilnej proteazy do brzeczki po przefiltrowaniu brzeczki, ale przed zagotowaniem brzeczki, przy czym stabilność termiczna proteazy oznacza, że ​​aktywność tej proteazy jest co najmniej 70% swojej aktywności, mierzonej wg do następnej metody: proteazę rozcieńcza się do stężenia 1 mg/ml w buforze testowym zawierającym 100 mmol kwasu bursztynowego, 100 mmol HEPES, 100 mmol CHES, 100 mmol CABS, 1 mmol CaCl2, 150 mmol KCl, 0,01% Triton X-100 i c pH doprowadzono do 5,5 za pomocą NaOH; po czym proteazę wstępnie inkubuje się i) w lodzie i ii) 10 minut w temperaturze 70°C; substrat, na którym proteaza jest aktywna, zawiesza się w 0,01% Triton X-100: w celu rozpoczęcia reakcji do probówki dodaje się 20 µl proteazy i inkubuje w termomikserze Eppendorf w temperaturze 70°C, 1400 obr./min przez 15 minut; reakcję zatrzymuje się poprzez umieszczenie probówek w lodzie; próbki wiruje się na zimno przy 14000 g przez 3 minuty i mierzy gęstość optyczną OD590 supernatantu; uzyskaną wartość OD590 próbek bez proteazy odejmuje się od uzyskanej wartości OD590 próbek traktowanych proteazą; określić termostabilność proteazy poprzez obliczenie procentu aktywności proteazy w próbkach wstępnie inkubowanych w temperaturze 70°C w stosunku do aktywności proteazy w próbkach inkubowanych na lodzie jako 100% aktywności.

Wynalazek dotyczy dziedziny biologii komórki, transplantologii komórek i inżynierii tkankowej. Sposób zwiększania aktywności angiogennej komórek zrębowych tkanki tłuszczowej w tkankach i narządach obejmuje izolację komórek zrębowych tkanki tłuszczowej, hodowanie wyizolowanych komórek w obecności czynnika martwicy nowotworu alfa w ilościach 5 lub 100 ng/ml przez 24-72 godziny , a następnie przeszczepienie do tkanek lub narządów .

Wynalazek dotyczy dziedziny biotechnologii, technologii komórkowej i chirurgii tkankowej. Metoda otrzymywania hodowli komórek mięśni gładkich polega na wycięciu fragmentu naczynia krwionośnego, rozdrobnieniu go na kawałki o wielkości nie większej niż 2 mm w dowolnym wymiarze i inkubowaniu kawałków w kolbie hodowlanej z uprzednio naniesionymi rysami na dno kolby zawierającej pożywkę zawierającą 10% surowicy zarodkowej płodu, przez co najmniej 10 dni, ale nie dłużej niż 24 dni, w temperaturze 37°C w inkubatorze CO2, charakteryzującą się tym, że wspomniany fragment naczynie krwionośne to fragment kończyny wstępującej aorta piersiowa, wycięty podczas zabiegu pomostowania tętnic wieńcowych, a wspomniane fragmenty fragmentu aorty piersiowej wstępującej umieszcza się w pożywce hodowlanej zawierającej 0,1% kolagenazy przez co najmniej 30 minut, ale nie dłużej niż 60 minut, w temperaturze 37°C °C przed inkubacją, a następnie przemyto pożywką do hodowli komórkowej.

Sposób otrzymywania mezenchymalnych komórek macierzystych z ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych i mezenchymalnych komórek macierzystych otrzymanych tą metodą // 2528250

Wynalazek dotyczy dziedziny inżynierii genetycznej, technologii tkankowej i medycyny. Sposób otrzymywania mezenchymalnych komórek macierzystych z linii pluripotencjalnych ludzkich komórek macierzystych obejmuje otrzymywanie ciałek embrioidalnych z ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych, przyczepianie ciał embrionalnych do szalki Petriego w celu wywołania spontanicznego różnicowania ciał embrionalnych do mezenchymalnych komórek macierzystych, hodowlę z proliferacją mezenchymalnych komórek macierzystych podczas utrzymanie tożsamości mezenchymalnych komórek macierzystych, a w przypadku gdy indukcja spontanicznego stadium różnicowania następuje poprzez utworzenie autologicznych pętli cytokin bez dodatku zewnętrznej cytokiny, także odpowiednie komórki, ich zastosowanie, rekrutację i metodę hodowli.

Wynalazek dotyczy dziedziny biologii molekularnej, biochemii i medycyny. Proponuje się kompozycję indukującą migrację dorosłych komórek macierzystych tkanki tłuszczowej, która jako substancję czynną zawiera ludzkie mezenchymalne komórki macierzyste z dorosłej tkanki tłuszczowej w ilości od 1x107 do 1x1010, które wyrażają na powierzchni komórki receptor chemokiny lub czynnika wzrostu, lub produkt wydzielniczy tych komórek macierzystych obejmuje receptor chemokiny lub czynnika wzrostu; przy czym produktem wydzielanym przez komórki macierzyste dorosłej tkanki tłuszczowej jest adiponektyna; oraz gdzie ludzkie dorosłe komórki macierzyste tkanki tłuszczowej są pobudzane mieszaniną zawierającą chemokinę lub czynnik wzrostu.

Wynalazek dotyczy biotechnologii i medycyny. Zaproponowano metodę namnażania jednojądrzastych komórek krwi pępowinowej (pcBMC) ex vivo w obecności wielopatentowych komórek mezenchymalnych (MMSC), która obejmuje hodowanie MMSC z frakcji zrębowo-naczyniowej tkanki tłuszczowej aż do osiągnięcia monowarstwy w stężenie O2 w pożywce 5%, dodanie zawiesiny pcMNC do monowarstwy MMSC, hodowanie przez 72 godziny przy stężeniu O2 w pożywce 5%, selekcja niezwiązanych psMNC i wymiana pożywki, kontynuacja hodowli MMSC przyłączonymi psMNC przez 7 dni przy stężeniu O2 w podłożu 5%.

Wynalazek dotyczy dziedziny biotechnologii i medycyny. Proponuje się kompozycję zawierającą komórki macierzyste z ludzkiego płynu owodniowego o fenotypie CD73+/CD90+/CD105+/CK19+, pożywkę, erytropoetynę, naskórkowy czynnik wzrostu i kolagen, pobrane w skutecznej ilości.

Wynalazek dotyczy dziedziny medycyny i technologii komórkowej. Produkt komórkowy zawierający populację przewodowych komórek macierzystych tkanki podżuchwowej gruczoł ślinowy, charakteryzującej się fenotypem CD49f+/EpCAM+ i po leczeniu kwasem walproinowym w stężeniu 0,1-40 mM i hodowli w żelu kolagenowym, zmianie profilu ekspresji na 1AAT+/PEPCK+/G6P+/TDO+/CYP P4503A13+ oraz nabyciu zdolności do syntezy mocznika i albuminy.

Wynalazek dotyczy dziedziny biotechnologii oraz inżynierii komórkowej i tkankowej. Opisano metodę otrzymywania rezydentnych komórek macierzystych serca ssaków wykazujących ekspresję markerów powierzchniowych c-kit i/lub sca-1 i/lub MDR1, podczas której próbki tkanki mięśnia sercowego izoluje się, rozdrabnia, poddaje działaniu kolagenazy i trypsyny oraz hodowano na płytkach hodowlanych pokrytych fibronektyną poprzez hodowlę eksplantacyjną rozdrobnionych próbek, a następnie immunoselekcję.

Wynalazek dotyczy dziedziny biochemii, biotechnologii i medycyny. Zaproponowano N-końcowy fragment rozpuszczalnego supresora odpowiedzi immunologicznej o długości 21 aminokwasów, posiadający sekwencję aminokwasową zgodną z Seq ID NO: 1, który umożliwia stymulację tworzenia regulatorowych limfocytów T, a także sposób stymulacji tworzenia regulatorowych limfocytów T za pomocą N-końcowego fragmentu rozpuszczalnego supresora odpowiedzi immunologicznej o SEQ ID NO: 1, przy podawaniu w stężeniu 0,1-50 µg/ml.

Wynalazek dotyczy przemysłu farmaceutycznego i stanowi krem ​​dermatologiczny przeznaczony do miejscowego leczenia bakteryjnych infekcji skóry i gojenia towarzyszących ran, zawierający siarczan framycetyny i biopolimer zawarty w bazie kremu, która zawiera co najmniej jedną substancję z każdej z następujących grup : konserwant ; emulgator pierwotny i wtórny wybrany z grupy składającej się z alkoholu ketostearylowego, ketomakrogolu 1000, polisorbatu-80 i Span-80; parafina jako produkt woskowy; współrozpuszczalnik wybrany z grupy obejmującej glikol propylenowy, glikol heksylenowy i glikol polietylenowy-400; kwas azotowy lub kwas mlekowy i wodę, a biopolimerem jest korzystnie chitozan.

Wynalazek dotyczy dziedziny biotechnologii, w szczególności technologii komórkowych, i może być stosowany w medycynie. Metoda polega na skalowaniu komórek diploidalnych linii M-20 z kriobanku IPVE nazwanego od ich nazwiska. POSEŁ. Chumakowa Rosyjskiej Akademii Nauk Medycznych z ampułki banku komórek nasiennych pasażu 7 w celu uzyskania banku komórek roboczych pasażu 16. W tym przypadku komórki z 20-33 pasaży, odpowiednie do celów terapeutycznych i diagnostycznych, otrzymuje się przez hodowlę w pożywce zawierającej 10 fibrynolitycznie aktywnego osocza ludzkiego zawierającego płytkowy czynnik wzrostu PDGF w stężeniu od 155 do 342 pgml. Wynalazek pozwala na zwiększenie aktywności proliferacyjnej diploidalnych ludzkich komórek fibroblastów. 1 pensja pliki, 2 tabele.