Metody badań nad HIV. Metody diagnozowania zakażenia wirusem HIV

1. Metody serologiczne wykrywanie przeciwciał (AT) przeciwko wirusowi HIV jest standardem w diagnostyce zakażenia wirusem HIV (systemy testowe ELISA oparte na peptydach syntetycznych charakteryzują się niemal 100% czułością i swoistością). Test ELISA umożliwia wykrycie przeciwciał HIV, które mogą być wskaźnikami wczesnego zakażenia lub odwrotnie, późnego - zaawansowanego rozwoju zakażenia wirusem HIV (p24 Ag)

2. Testy potwierdzające— immunoblotting (IB), immunofluorescencja pośrednia (IIF) i radioimmunoprecypitacja (RIP).

a) WHO zaleca, aby surowicę zawierającą przeciwciała przeciwko dwóm białkom otoczki i jednemu z białek wewnętrznych wirusa HIV uznać za dodatnią. Pacjenci, którzy uzyskali wynik pozytywny w teście ELISA, ale mają nieokreślone wyniki w teście IB, powinni zostać poddani ocenie klinicznej i ocenie innymi metodami, badanie lekarskie, immunologicznie i po 3 - 6 miesiącach ich surowica krwi musi zostać zbadana na obecność przeciwciał przeciwko HIV.

b) metoda immunofluorescencji pośredniej (IIF) – stosowana jako badanie potwierdzające w wielu laboratoriach lub jako badanie przesiewowe.

c) radioimmunoprecypitacja jest metodą bardzo czułą i specyficzną, polegającą na wykorzystaniu aminokwasów znakowanych izotopami promieniotwórczymi. Metoda jest bardzo czuła w wykrywaniu przeciwciał przeciwko białkom powierzchniowym i dlatego jest wysoce specyficzna, ponieważ te składniki wirusa są obecne u prawie wszystkich osób zakażonych wirusem HIV po serokonwersji.

3. Metody biologii molekularnej: metoda hybrydyzacji molekularnej kwasów nukleinowych, PCR

1) jako alternatywna i dodatkowa metoda potwierdzająca wykrywanie obecności wirusa w organizmie w stosunku do metod serologicznych diagnostyka laboratoryjna;

2) jako pierwsza metoda konkretna analiza przy diagnostyce wczesnego zakażenia wirusem HIV, gdy nie są jeszcze dostępne specyficzne przeciwciała przeciwwirusowe;

3) w diagnostyce zakażenia wirusem HIV u noworodków matek zakażonych wirusem HIV;

4) określenie wiremii i przepisanie określonej terapii przeciwretrowirusowej oraz monitorowanie jej realizacji;

5) jako metoda wyjaśniająca w przypadku niejasnych wyników serologicznych oraz w przypadku rozbieżności pomiędzy wynikami badań serologicznych i kulturowych;

6) podczas badania partnerów seksualnych osób zakażonych wirusem HIV;

7) jako metoda diagnostyki różnicowej HIV-1 i HIV-2;

4. Metoda wirusologiczna.

1. Zasady terapii przeciwretrowirusowej: leczenie należy rozpocząć przed wystąpieniem znacznych niedoborów odporności; terapia początkowa powinna obejmować kombinacje co najmniej trzech leków; modyfikacja terapii powinna polegać na wymianie lub dodaniu co najmniej dwóch nowych leków; Niezwykle ważny jest pomiar poziomu komórek CD4+ i wiremii; spadek wiremii do poziomu poniżej granicy wykrywalności czułych metod odzwierciedla optymalny efekt leczenia.

2. Istnieją trzy grupy nowoczesnych leków przeciwretrowirusowych:

a) nukleozydowe inhibitory odwrotnej transkryptazy (NRTI): zydowudyna (azydotymidyna, retrowir); didanozyna (ddI, Videx); zalcytabina (ddC, hivid); stawudyna (zerit, d4T); lamiwudyna (3TC, epiwir); abakawir; adefowir; kombiwir (zydowudyna + abakawir); triziwir (zydowudyna + lamiwudyna + abakawir); adefowir (nukleotydowe inhibitory odwrotnej transkryptazy).

b) nienukleozydowe inhibitory odwrotnej transkryptazy (NNRTI): delawerdyna (rescriptor); newirapina (wiramuna); efawirenz

c) inhibitory proteazy (PI): sakwinawir; rytonawir (norwir); indynawir (Crixivan); nelfinawir (Viracept); amprenawir (Agenerase); lopinawir (aluwiran); Kaletra (lopinawir + rytonawir).

3. Monoterapia jakimkolwiek lekiem nie może zapewnić wystarczająco wyraźnego i długotrwałego zahamowania replikacji wirusa HIV. Ponadto w przypadku monoterapii istnieje zwiększone ryzyko pojawienia się opornych szczepów i rozwoju oporności krzyżowej na leki z tej samej grupy. Jedynym wyjątkiem jest stosowanie zydowudyny w monoterapii w celu zmniejszenia ryzyka okołoporodowego przeniesienia wirusa HIV.

4. Najważniejszym kryterium skuteczności terapii jest dynamika wiremii, którą należy oznaczyć: bez leczenia – co 6-12 miesięcy, w trakcie leczenia – co 3-6 miesięcy, a także 4-8 tygodni po zabiegu rozpoczęcie terapii przeciwwirusowej.

Oprócz terapii przeciwretrowirusowej konieczne jest leczenie chorób wtórnych.

34,3 AIDS (warianty kliniczne, choroby oportunistyczne).

Choroby oportunistyczne- ciężkie, postępujące choroby, które rozwijają się na tle narastającej immunosupresji i nie występują u osoby z prawidłowo funkcjonującym układem odpornościowym (choroby definiujące AIDS).

a) pierwsza grupa- są to choroby charakteryzujące się jedynie ciężkim niedoborem odporności (poziom CD4+).< 200 кл/мкл) и поэтому определяют клинический диагноз: 1. Кандидоз пищевода, трахеи, бронхов. 2. Внелегочный криптококкоз. 3. Криптоспоридиоз с диареей более 1 месяца. 4. Цитомегаловирусная инфекция с поражением различных органов, помимо печени, селезенки или лимфоузлов. 5. Инфекции, обусловленные вирусом простого герпеса, проявляющиеся язвами на коже и слизистых оболочках. 6. Саркома Капоши у лиц, моложе 60 лет. 7. Первичная лимфома мозга у лиц, моложе 60 лет. 8. Лимфоцитарная интерстициальная пневмония и/или легочная лимфоидная гиперплазия у детей в возрасте до 12 лет. 9. Диссеминированная инфекция, вызванная атипичными микобактериями с внелегочной локализацией. 10. Пневмоцистная пневмония. 11. Прогрессирующая многоочаговая лейкоэнцефалопатия. 12. Токсоплазмоз с поражением головного мозга, легких, глаз у больного старше 1 месяца.

b) druga grupa- choroby, które mogą rozwinąć się zarówno na tle ciężkiego niedoboru odporności, jak i w niektórych przypadkach bez niego: 1. Infekcje bakteryjne, połączone lub nawracające u dzieci do 13. roku życia (więcej niż dwa przypadki w ciągu 2 lat obserwacji): posocznica, zapalenie płuc , zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych, uszkodzenia kości lub stawów, ropnie wywołane przez Haemophilus influenzae, paciorkowce. 2. Rozsiana kokcydioidomykoza (lokalizacja pozapłucna). 3. Encefalopatia HIV 4. Histoplazmoza rozsiana z lokalizacją pozapłucną. 5. Izosporoza z biegunką utrzymującą się dłużej niż 1 miesiąc. 6. Mięsak Kaposiego u osób w każdym wieku. 7. Chłoniaki z komórek B (z wyjątkiem choroby Hodgkina) lub chłoniaki o nieznanym immunofenotypie. 8. Gruźlica pozapłucna. 9. Posocznica Salmonella ma charakter nawracający. 10. Dystrofia HIV.

Najczęstsze to zapalenie płuc wywołane przez Pneumocystis, kryptokokowe zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych, uogólnione zakażenie wirusem cytomegalii (zapalenie mózgu, zapalenie siatkówki, zapalenie przełyku, zapalenie wątroby, zapalenie okrężnicy), posocznica o mieszanej etiologii, uogólniona postać mięsaka Kaposiego, gruźlica płuc.

Wszystkie te choroby występują z uszkodzeniem jednego lub większej liczby narządów i układów: mózgu, płuc, wątroby, przewodu pokarmowego i mają charakter poważnie postępujący. Choroby definiujące AIDS występują w różnych kombinacjach i nawet odpowiednia terapia nie przynosi oczekiwanego efektu.

Warianty kliniczne AIDS: AIDS zakaźny, neuro-, onkologiczny, w zależności od częstości występowania różnych klinik.

HIV: diagnostyka i leczenie, profilaktyka

Zespół nabytego niedoboru odporności jest od ponad czterdziestu lat jednym z kluczowych problemów współczesnego społeczeństwa. Dlatego diagnostyka HIV przyciąga obecnie wiele uwagi i zasobów. W końcu im szybciej wykryty zostanie wirus niszczący układ odpornościowy organizmu, tym większe są szanse na uniknięcie śmierci.

Pod skrótem HIV kryje się definicja ludzkiego wirusa niedoboru odporności – jednego z najniebezpieczniejszych spośród obecnie istniejących. Pod jego wpływem wszystkie właściwości ochronne organizmu zostają głęboko stłumione. To z kolei prowadzi do występowania różnych nowotworów złośliwych i wtórnych infekcji.

Zakażenie wirusem HIV może postępować na różne sposoby. Czasami choroba niszczy osobę w ciągu 3-4 lat, ale w niektórych przypadkach może trwać dłużej niż 20 lat. Warto wiedzieć, że wirus ten jest niestabilny i szybko umiera, jeśli znajdzie się poza organizmem żywiciela.

HIV może być przenoszony sztucznie, poprzez kontakt z krwią i poprzez mechanizm biokontaktu.

Jeśli doszło do jednorazowego kontaktu z nosicielem wirusa, ryzyko infekcji będzie niskie, ale przy stałej interakcji znacznie wzrasta. Rozpoznanie zakażenia wirusem HIV to coś, czego nie należy lekceważyć, zwłaszcza przy zmianie partnerów seksualnych

Warto zwrócić uwagę na pozajelitową drogę zakażenia. Może wystąpić podczas przetaczania skażonej krwi, iniekcji igłami zanieczyszczonymi krwią osób zakażonych wirusem HIV, a także podczas niesterylnych zabiegów medycznych (tatuaże, piercing, zabiegi stomatologiczne z użyciem niewłaściwie leczonych narzędzi) .

Jednocześnie warto wiedzieć, że nie trzeba bać się kontaktu i domowego przenoszenia wirusa. Ale faktem pozostaje: dana osoba jest bardzo podatna na zakażenie wirusem HIV. A jeśli osoba w wieku powyżej 35 lat zostanie zarażona, rozwój AIDS następuje znacznie szybciej niż u osób, które nie przekroczyły jeszcze trzydziestego roku życia.

Oczywiście najlepszym sposobem na zidentyfikowanie problemu lub jego braku jest zdiagnozowanie wirusa HIV. Ale jakie powody może mieć dana osoba, aby przewodzić zdrowy wizerunek life, idź i sprawdź, czy nie masz infekcji? Oczywiście taką inicjatywę trzeba w jakiś sposób uzasadnić. Dlatego warto wiedzieć, jakie objawy mogą świadczyć o procesach destrukcyjnych, tłumiących układ odpornościowy.

Jest mało prawdopodobne, aby możliwe było zidentyfikowanie etapu inkubacji wirusa bez badania krwi, ponieważ organizm w tym czasie nie reaguje jeszcze w żaden sposób na wrogie elementy.

Drugi etap (pierwotne objawy) może również pozostać niezauważony bez pomocy lekarza. Ale czasami następuje aktywna replikacja wirusa i organizm zaczyna na to reagować - odnotowuje się gorączkę, różne polimorficzne wysypki, zespół liniowy i zapalenie gardła. W drugim etapie można dodać choroby wtórne, takie jak opryszczka, infekcje grzybicze, zapalenie płuc itp.

Trzeci, utajony etap charakteryzuje się stopniowym narastaniem niedoborów odporności. W związku z tym, że ogniwa układu ochronnego obumierają, zwiększa się dynamika ich produkcji, co pozwala zrekompensować znaczne straty. Na tym etapie jest ich kilka węzły chłonne należące do różnych układów mogą ulec zapaleniu. Ale silny bolesne doznania nie są przestrzegane. Okres utajony trwa średnio od 6 do 7 lat, ale może trwać do 20 lat.

W fazie chorób wtórnych, czyli w fazie czwartej, pojawiają się współistniejące infekcje grzybicze, bakteryjne, pierwotniakowe, wirusowe, a także złośliwe formacje. Wszystko to dzieje się na tle ciężkiego niedoboru odporności.

Metody diagnozowania zakażenia wirusem HIV

Mówimy o głębokim ucisku mechanizmy obronne organizmu w wyniku narażenia na wirusa, warto zauważyć, że przyszłość pacjenta w tym przypadku zależy bezpośrednio od terminowej i trafnej diagnozy.

Aby to zrobić w nowoczesna medycyna Stosuje się różne systemy testowe, które opierają się na badaniach krwi immunochemiluminescencyjnych i immunoenzymatycznych. Techniki te umożliwiają określenie obecności przeciwciał należących do różnych klas. Wynik ten pozwala znacząco zwiększyć zawartość informacyjną metod o analitycznej, klinicznej specyficzności i czułości w pracy z chorobami zakaźnymi.

Interesujący jest również fakt, że to właśnie metoda reakcji łańcuchowej polimerazy umożliwiła przeniesienie diagnostyki HIV na zupełnie nowy poziom. Do badań nadają się różne materiały biologiczne: osocze krwi, biopsja, skrobanie, surowica, płyn mózgowo-rdzeniowy lub opłucnowy.

Jeśli mówimy o metodach badań laboratoryjnych, to skupiają się one przede wszystkim na identyfikacji kilku kluczowych chorób. Mówimy o zakażeniu wirusem HIV, gruźlicą, wszystkimi infekcjami przenoszonymi drogą płciową i wirusowym zapaleniem wątroby.

Do identyfikacji wirusa niedoboru odporności wykorzystuje się także molekularne testy genetyczne i serologiczne. W pierwszym przypadku określa się RNA wirusa i DNA prowirusa, w drugim przypadku analizuje się przeciwciała przeciwko HIV i wykrywa się antygen P24.

W klinikach, które używają, że tak powiem, klasyczne metody W diagnostyce stosuje się głównie standardowy protokół badań serologicznych.

Wczesna diagnostyka HIV

Tego typu ustalenie faktu zakażenia jest konieczne, aby jak najwcześniej rozpoznać zagrożenie uszkodzeniem układu odpornościowego. To, po pierwsze, pozwala uniknąć rozprzestrzeniania się infekcji, a po drugie, wpływa na chorobę w początkowej fazie.

Jeśli weźmiemy pod uwagę przykład Rosji, w armii i marynarce wojennej Federacji Rosyjskiej wprowadzono kliniczną klasyfikację zakażenia wirusem HIV. Przyniosło to pozytywne rezultaty: proces wczesnej diagnozy klinicznej stał się znacznie łatwiejszy.

Typowe objawy wskazujące na możliwe uszkodzenie układu odpornościowego to ból głowy, nocne poty i niemotywowane zmęczenie. Możliwe jest również wystąpienie gorączki, której towarzyszą objawy zapalenia migdałków. Oznacza to, że temperatura wzrasta do 38 stopni lub więcej, a jednocześnie powiększają się migdałki i pojawia się ból podczas połykania. Dopełnieniem tego wszystkiego jest szybka utrata wagi. Co więcej, objawy te są często złożone.

W niektórych przypadkach zakażenie wirusem HIV wczesne stadia może objawiać się różnymi zmianami w stanie skóry. Mówimy tu o plamach, różyczkach, krostach, czyraczności itp. Wczesna diagnostyka wirusa HIV obejmuje również pracę z objawami, takimi jak uogólnione lub ograniczone powiększenie obwodowych węzłów chłonnych.

W przypadku jednoczesnego powiększenia kilku węzłów chłonnych, trwającego trzy miesiące lub dłużej, w różnych grupach, z wyjątkiem obszar pachwiny, czyli istnieją podstawy, aby podejrzewać wirusa ludzkiego układu odpornościowego.

O diagnostyce mowa w dalszej części późny okres, musisz zwrócić uwagę na manifestację wtórny niedobór odporności, co często występuje pod przykrywką różnych objawów klinicznych. Mówimy o następujących przejawach:

• niemotywowana uogólniona limfadenopatia obwodowa;
• bóle stawów o nieznanej etiologii, które mają falisty przebieg;
• ARVI (ARI), zmiany zapalne płuc i drogi oddechowe, które dają o sobie znać dość często;
• gorączki niewiadomego pochodzenia i długotrwała gorączka o niskim stopniu nasilenia;
• ogólne zatrucie, które objawia się niemotywowaną słabością, zmęczenie, letarg itp.

Diagnostyka HIV włączona późne stadium obejmuje badanie w kierunku choroby takiej jak mięsak Kaposiego, który objawia się pojawieniem się licznych nowotworów, często u młodych osób w górnej części ciała, po którym następuje dynamiczny rozwój i przerzuty.

Reakcja łańcuchowa polimerazy

Rozważając różne metody diagnozowania zakażenia wirusem HIV, warto zwrócić na to szczególną uwagę. Należy od razu zauważyć, że to badanie krwi może mieć na celu określenie cech ilościowych i jakościowych.

Cel tej metody wykrywania wirusa można zdefiniować następująco:

• przeprowadzanie wczesna diagnoza zakażenie wirusem HIV;
• wyjaśnienie obecności wątpliwych wyników w wyniku badania immunoblottingu;
• identyfikacja konkretnego stadium choroby;
• monitorowanie skuteczności leczenia mającego na celu supresję wirusa.

Jeśli mówimy o infekcji pierwotnej, należy zaznaczyć, że technika ta umożliwia oznaczenie RNA wirusa HIV we krwi pacjenta już po 14 dniach od momentu zakażenia. To bardzo dobry wynik. W takim przypadku sam wynik badania będzie miał wyraz jakościowy: albo pozytywny (wirus jest obecny), albo negatywny.

Ilościowa ekspresja PCR

Ten typ reakcji łańcuchowej polimerazy wykorzystuje się do określenia prawdopodobnego tempa postępu AIDS i przewidywania oczekiwanej długości życia pacjenta.

Ilościowe oznaczenie komórek RNA HIV we krwi pozwala zrozumieć, kiedy choroba wchodzi w fazę kliniczną.

Warto zwrócić uwagę na fakt, że laboratoryjne metody diagnostyki HIV dają dokładniejsze wyniki, jeśli biomateriał wymagany do analizy zostanie prawidłowo określony, a jego pobranie zostanie przeprowadzone kompetentnie.

Aby przeprowadzić wysokiej jakości monitorowanie osób zakażonych, konieczne jest (jeśli to możliwe) korzystanie Złożone podejście w celu zbadania stanu odporności pacjenta. Mówimy o ilościowym i funkcjonalnym określeniu wszystkich części układu obronnego: odporności komórkowej, humoralnej i odporności nieswoistej jako takiej.

Diagnostyka laboratoryjna

Coraz częściej we współczesnych warunkach laboratoryjnych stosuje się wieloetapową metodę oceny stanu układu odpornościowego. Technika ta często polega na określeniu subpopulacji immunoglobulin i limfocytów we krwi. Oznacza to, że brany jest pod uwagę stosunek komórek CD4/CD8. Jeśli wynik wynosi mniej niż 1,0, istnieje powód, aby podejrzewać niedobór odporności.

Diagnostyka laboratoryjna zakażenia wirusem HIV musi obejmować ten test, ponieważ wirus ten charakteryzuje się selektywnym uszkodzeniem limfocytów CD4, co prowadzi do zauważalnego naruszenia powyższego stosunku (mniejszego niż 1,0).

Aby ocenić stan immunologiczny, lekarze mogą przeprowadzić test na obecność „poważnych” lub ogólnych defektów układu odporności humoralnej i komórkowej. Mówimy o hipogammaglobulinemii lub hipergammaglobulinemii etap końcowy, a także zmniejszenie produkcji cytokin, wzrost stężenia krążących kompleksów immunologicznych i osłabienie odpowiedzi limfocytów na mitogeny i antygeny.

Warto zwrócić uwagę na fakt, że diagnostyka laboratoryjna wirusa HIV składa się z dwóch kluczowych etapów:

1. Laboratorium przesiewowe. Jeżeli uzyskano wynik pozytywny w teście ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay), to powtarza się go jeszcze dwukrotnie w tym samym systemie i bez zmiany surowicy. W przypadku, gdy dwa z trzech badań pozwolą na wykrycie wpływu wirusa, surowica wysyłana jest do dalszych badań do laboratorium referencyjnego.
2. Drugi etap, obejmujący laboratoryjne metody diagnostyki zakażenia wirusem HIV, polega na określeniu stanu układu odpornościowego. Wykonuje się je we wspomnianym laboratorium referencyjnym. Tutaj surowica dodatnia jest ponownie badana w teście ELISA, ale przy użyciu innego systemu testowego, który różni się od poprzedniego składem antygenów, przeciwciał czy formatem samych testów. W przypadku uzyskania wyniku negatywnego przeprowadza się powtórne badanie w trzecim systemie testowym. Jeżeli ostatecznie nie wykryto wpływu wirusa, rejestruje się brak zakażenia wirusem HIV. Ale jeśli wynik jest pozytywny, surowicę bada się metodą liniową lub immunoblot.

Ostatecznie taki algorytm prowadzi do wyników pozytywnych, neutralnych lub negatywnych.

Każdy obywatel powinien wiedzieć, że ma dostęp do diagnostyki w kierunku HIV. AIDS można wykryć w placówkach prywatnego, gminnego lub państwowego systemu opieki zdrowotnej.

Naturalnie identyfikacja wirusa byłaby mało przydatna w przypadku braku różnych metod wpływania na infekcję. I chociaż w tej chwili nadal nie ma szczepionki, która mogłaby całkowicie zneutralizować wirusa, właściwa diagnoza, leczenie wirusa HIV i późniejsza profilaktyka mogą znacznie poprawić stan pacjenta, przedłużając w ten sposób jego życie. Tezę tę potwierdza fakt, że średnia długość życia mężczyzn, którzy rozpoczęli leczenie HIV w odpowiednim czasie, wynosi 38 lat. Kobiety, które rozpoczynają walkę z wirusem niedoboru odporności, żyją średnio 41 lat.

Po postawieniu diagnozy leczenie HIV sprowadza się do zastosowania kilku technik. Jedną z najbardziej powszechnych jest aktywna terapia przeciwretrowirusowa, znana również jako HAART. Jeśli ten rodzaj leczenia zostanie zastosowany szybko i prawidłowo, można znacznie spowolnić rozwój AIDS lub całkowicie go zatrzymać.

Istotą HAART jest jednoczesne stosowanie kilku leków, których zadaniem jest oddziaływanie na różne mechanizmy rozwoju wirusa niedoboru odporności.

Po ustaleniu faktu zakażenia różnymi metodami diagnostyki HIV można zastosować leki o następującym działaniu:

Immunologiczny. Stabilizacja układ odpornościowy, wzrasta poziom limfocytów T i przywracana jest ochrona przed różnymi infekcjami.

Kliniczny. Zapobiega się rozwojowi AIDS i wszelkim jego przejawom, wydłuża się życie pacjentów, zachowując wszystkie funkcje organizmu.

Wirusologiczne. Replikacja wirusa zostaje zablokowana, w wyniku czego miano wirusa spada, a następnie utrzymuje się na niskim poziomie.

Trudno przecenić znaczenie takich środków wpływania na chorobę, jak diagnostyka, leczenie i zapobieganie zakażeniu wirusem HIV. Dlatego najlepszą rzeczą, jaką można zrobić po pozytywnym wyniku testu na infekcję, jest natychmiastowe rozpoczęcie walki z chorobą. Inną metodą, która może w tym pomóc, jest leczenie wirusologiczne.

W tym przypadku mówimy o stosowaniu leków, które nie pozwalają wirusowi przyczepić się do limfocytów T i przedostać się do organizmu. Leki te nazywane są inhibitorami penetracji. Konkretnym przykładem jest Celsentry.

Do tłumienia wirusa HIV można zastosować wirusowe inhibitory proteazy. Celem tej grupy leków jest zapobieganie zakażeniu nowych limfocytów. Są to leki takie jak Viracept, Reyataz, Kaletra itp.

Trzecią grupą leków stosowanych miejscowo są inhibitory odwrotnej transkryptazy. Są potrzebne do blokowania enzymu umożliwiającego namnażanie się RNA wirusa w jądrze limfocytu. Takie metody mogą mieć znaczący wpływ na problem, jakim jest zakażenie wirusem HIV. Diagnostyka, leczenie i profilaktyka AIDS to praca wykwalifikowanych lekarzy, dlatego to oni powinni opracować algorytm stosowania leków.

Jeśli to konieczne, można również zastosować interwencje immunologiczne i kliniczne.

Sugeruje Światowa Organizacja Zdrowia następujące metody walka z zakażeniem wirusem HIV:

Zapobieganie przenoszeniu drogą płciową. Należą do nich seks chroniony, dystrybucja prezerwatyw, leczenie chorób przenoszonych drogą płciową i programy edukacyjne.

Dla kobiet w ciąży, u których zdiagnozowano zakażenie wirusem HIV – diagnostyka, profilaktyka za pomocą odpowiednich środków chemikalia oraz profesjonalne doradztwo i leczenie.

Organizacja profilaktyki poprzez produkty krwiopochodne. W tym przypadku mówimy o przetwarzaniu antywirusowym i kontroli dawców.

Społeczne i opieka zdrowotna pacjentów i ich rodzin.

Aby mieć pewność, że diagnoza HIV nie ujawni obecności wirusa, należy postępować zgodnie z zaleceniami proste zasady bezpieczeństwo:

jeżeli krew zakażonej osoby dostanie się na skórę, należy ją natychmiast zmyć wodą z mydłem, a następnie miejsce kontaktu spryskać alkoholem;

jeśli uszkodzenie zostało spowodowane przez przedmiot zawierający elementy wirusa, ranę należy ucisnąć, wycisnąć krew, obszar leczyć nadtlenkiem wodoru, a krawędzie wypalić jodem;

nigdy nie używaj strzykawek, których sterylność została naruszona;

Podczas stosunku płciowego używaj prezerwatywy i lepiej najpierw sprawdzić partnera pod kątem infekcji.

Dzięki temu, że diagnoza HIV nie stoi w miejscu, tysiące ludzi ma możliwość terminowego rozpoczęcia leczenia i znacznego wydłużenia swojego życia. Najważniejsze, aby nie ignorować oczywistych objawów i nie bać się iść do lekarza.

Diagnostyka laboratoryjna zakażenia wirusem HIV

Testom na zakażenie wirusem HIV poddawani są:

2. Osoby, u których istnieje podejrzenie lub potwierdzone rozpoznanie: zakażenia bakteryjnego u dzieci do lat 13, mnogiego i nawracającego; kandydoza przełyku, tchawicy, oskrzeli lub płuc; inwazyjny rak szyjki macicy; rozsiana lub pozapłucna kokcydioidomykoza; kryptokokoza pozapłucna; kryptosporydioza z biegunką trwającą 1 miesiąc lub dłużej; zakażenie wirusem cytomegalii innych narządów, z wyjątkiem wątroby, śledziony, węzłów chłonnych u pacjentów w wieku powyżej 1 miesiąca; zapalenie siatkówki wywołane wirusem cytomegalii z utratą wzroku; infekcja opryszczkowa, powodująca wieloogniskowe owrzodzenia, które nie goją się w ciągu 1 miesiąca lub zapalenie oskrzeli, zapalenie płuc, zapalenie przełyku; rozsiana lub pozapłucna histoplazmoza; izosporoza z biegunką trwającą dłużej niż 1 miesiąc; gruźlica rozległa lub pozapłucna; gruźlica płuc u dorosłych i młodzieży powyżej 13. roku życia; gruźlica pozapłucna; inna choroba wywołana przez prątki inne niż M. tuberculosis rozsiane lub pozapłucne; zapalenie płuc wywołane przez pneumocystis; postępująca wieloogniskowa leukoencefalopatia; Posocznica Salmonella (z wyjątkiem Salmonella typhi), nawracająca; toksoiloza mózgu u dzieci w wieku powyżej 1 miesiąca; mięsak Kaposiego; limfoidalne śródmiąższowe zapalenie płuc u dzieci poniżej 13 roku życia; chłoniak Burkitta; chłoniak immunoblastyczny; pierwotny chłoniak mózgu; zespół wyniszczenia, wirusowe zapalenie wątroby typu B, nosicielstwo HBsAg; mononukleoza zakaźna; nawracający półpasiec u osób powyżej 60. roku życia; choroby przenoszone drogą płciową.

W wysokospecjalistycznym laboratorium wykonywane są:

a) oznaczanie przeciwciał, antygenów i kompleksów immunologicznych krążących we krwi; hodowanie wirusa, identyfikacja jego materiału genomowego i enzymów;

b) ocena funkcji komórkowej części układu odpornościowego. Główną rolę odgrywają serologiczne metody diagnostyczne, mające na celu oznaczenie przeciwciał, a także antygenów patogenów we krwi i nie tylko płyny biologiczne ciało.

Badanie przeciwciał przeciwko wirusowi HIV przeprowadza się w celu:

a) bezpieczeństwo transfuzji i przeszczepów krwi;

b) nadzór, badania w celu monitorowania częstości występowania zakażenia wirusem HIV i badania dynamiki jego występowania w określonej populacji;

c) diagnostyka zakażenia wirusem HIV, czyli dobrowolne badanie surowicy krwi osób praktycznie zdrowych lub pacjentów z różnymi objawami klinicznymi podobnymi do zakażenia wirusem HIV lub AIDS.

System diagnostyki laboratoryjnej zakażenia wirusem HIV zbudowany jest na zasadzie trójstopniowej. Pierwszym etapem są badania przesiewowe, polegające na wykonaniu podstawowych badań krwi na obecność przeciwciał przeciwko białkom wirusa HIV. Drugi etap ma charakter referencyjny - pozwala za pomocą specjalnego techniki metodologiczne wyjaśnić (potwierdzić) pierwotnie pozytywny wynik uzyskany na etapie badań przesiewowych. Trzeci etap to etap ekspercki, mający na celu ostateczną weryfikację obecności i swoistości markerów zakażenia wirusem HIV zidentyfikowanych na wcześniejszych etapach diagnostyki laboratoryjnej. Konieczność kilkuetapowej diagnostyki laboratoryjnej wynika przede wszystkim ze względów ekonomicznych.

W praktyce stosuje się kilka testów, które pozwalają na identyfikację osób zakażonych wirusem HIV z wystarczającym stopniem wiarygodności:

Test ELISA (enzyme-linked immunosorbent test) do wykrywania pierwszego poziomu charakteryzuje się wysoką czułością, choć mniejszą swoistością niż poniższe:

Immunoblot (Western-blot), bardzo specyficzny i najczęściej stosowany test pozwalający na odróżnienie HIV-1 od HIV-2;

Test na antygenem p25, skuteczny w początkowe etapy infekcja;

Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR).

W przypadku masowych badań przesiewowych próbek krwi zaleca się badanie mieszanin surowic pochodzących z grupy osób, dobranych w taki sposób, aby końcowe rozcieńczenie każdej próbki nie przekraczało 1:100. Jeżeli mieszanina prądu surowicy jest dodatnia, badana jest każda surowica w mieszaninie dodatniej. Metoda ta nie prowadzi do utraty czułości zarówno w teście ELISA, jak i immunoblocie, ale obniża koszty pracy i koszt badania wstępnego o 60-80%.

Podczas pierwotnej serodiagnostyki zakażenia wirusem HIV oznacza się przeciwciała całkowite za pomocą testów przesiewowych – ELISA i reakcji aglutynacji. Na drugim etapie (arbitrażowym) stosuje się bardziej złożony test – immunoblot, który pozwala nie tylko potwierdzić lub odrzucić wstępny wniosek, ale także dokonać tego na poziomie oznaczenia przeciwciał przeciwko poszczególnym białkom wirusa.

Połączony test immunoabsorpcyjny(ELISA) jest główną i najpowszechniej stosowaną metodą oznaczania przeciwciał przeciwko wirusowi HIV. Jednak wady stosowania testu ELISA w serodiagnostyce zakażenia wirusem HIV są częste fałszywe alarmy. W związku z tym wynik testu ELISA nie jest podstawą do wyciągnięcia wniosku na temat seropozytywności pacjenta względem wirusa HIV. Wynika to z niedostatecznego oczyszczenia immunosorbentu z białek balastowych; spontaniczne wiązanie przeciwciał surowicy z tworzywem sztucznym, jeśli jego obszary niezajęte przez immunosorbent są niewystarczająco lub w ogóle nie są blokowane przez specjalne neutralne białko; interakcja krzyżowa z białkami immunosorbującymi HIV lub różnymi białkami obecnymi we krwi osób z niektórymi, często autoimmunologicznymi, procesami patologicznymi, takimi jak stwardnienie rozsiane, SLE, gruźlica; przy częstych dawstwach, chorobach zakaźnych i onkologicznych, oparzeniach, ciąży, wielokrotnych transfuzjach krwi, przeszczepach narządów i tkanek, a także u osób hemodializowanych; z obecnością czynnika reumatoidalnego we krwi, który często wywołuje fałszywie dodatnie reakcje na HIV; obecność we krwi osób badanych przeciwciał przeciwko białkom gag wirusa HIV, a przede wszystkim białku p24 (oczywiście powstają przeciwciała przeciwko egzo- lub endogennym retrowirusom, które nie zostały jeszcze zidentyfikowane). Ponieważ anty-p24 jest syntetyzowane bez przerwy we wczesnych stadiach serokonwersji wirusa HIV, prowadzone jest dalsze monitorowanie immunologiczne osób z przeciwciałami przeciwko białkom gag HIV, a także ich wykluczenie z dawstwa.

Czułość i swoistość testów immunoenzymatycznych stale rośnie. Dzięki temu testy ELISA czwartej generacji nie ustępują w swoich możliwościach diagnostycznych immunoblottingowi i mogą być stosowane nie tylko w badaniach przesiewowych, ale także na etapie potwierdzającym diagnozowanie zakażenia wirusem HIV [Smolskaya T. T., 1997].

Immunoblot jest ostateczną metodą diagnostyki serologicznej, pozwalającą na wyciągnięcie ostatecznego wniosku na temat nosicielstwa wirusa HIV lub negatywnego wyniku badania.

Istnieje wyraźna korelacja pomiędzy wynikami badania surowic w immunoblocie i teście ELISA - surowice podwójnie dodatnie w teście ELISA z różnymi systemami testowymi w 97-98% przypadków okazują się wówczas w teście immunoblottingu nosicielami wirusa HIV. Jeżeli surowice okazały się pozytywne w teście ELISA tylko w jednym z dwóch stosowanych systemów testowych, to w immunoblocie wykryto je jako pozytywne jedynie w 4% przypadków. W 5% przypadków, podczas prowadzenia badań potwierdzających u osób z pozytywnymi danymi, immunoblot ELISA może dać „niepewne” wyniki, a wśród nich w około 20% przypadków „niepewne” wyniki są spowodowane przez przeciwciała przeciwko białkom gag HIV-1 (s. 55, s. 25, s. 18). Powodem jest obecność przeciwciał tylko przeciwko białkom gag HIV-1 dodatkowe badanie surowica krwi w kierunku zakażenia HIV-2.

Ocena wyników immunoblottingu odbywa się ściśle według instrukcji dołączonej do systemu testowego. Jeżeli instrukcje nie zawierają wskazówek dotyczących interpretacji wyników, należy zastosować kryteria WHO.

W przypadku uzyskania pozytywnych wyników badań na referencyjnym etapie diagnostyki laboratoryjnej zakażenia wirusem HIV i uzyskania negatywnego wyniku testu immunoblottingu, obowiązkową powtórną diagnozę specjalistyczną przeprowadza się 6 miesięcy po pierwszym badaniu.

Jeżeli wyniki immunoblotu po 12 miesiącach od badania pierwszej próbki pozostaną negatywne lub nieokreślone, wówczas w przypadku braku czynników ryzyka, objawów klinicznych lub innych czynników związanych z zakażeniem wirusem HIV, pacjent zostaje usunięty z obserwacji ambulatoryjnej.

Wśród metod serologicznych, w przypadku nieokreślonych wyników, jako diagnostykę ekspercką stosuje się immunoblot radioimmunoprecypitacja(ROZERWAĆ). Polega na wykorzystaniu białek wirusowych znakowanych radioaktywnym jodem, a osady wykrywa się za pomocą liczników beta. Wady tej metody obejmują wysoki koszt sprzętu i konieczność wyposażenia specjalnych pomieszczeń do tych celów.

Osoby, u których zdiagnozowano zakażenie wirusem HIV, podlegają stałemu dynamicznemu monitorowaniu z obowiązkowymi badaniami laboratoryjnymi co 6 miesięcy.

Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) ujawnia wstępnie zwielokrotnione sekwencje nukleotydowe specyficzne dla genomu danego patogenu. Izolowane namnażanie genu lub jego fragmentu, zwane amplifikacją, PCR umożliwia przeprowadzenie in vitro z wykorzystaniem enzymu termostabilnej polimerazy DNA. W ciągu 2-3 godzin PCR pozwala uzyskać miliony kopii określonego regionu wirusa. Podczas zakażenia wirusem HIV z komórkowego RNA, w tym RNA wirusa, jeśli uległ on reprodukcji w komórce lub został zintegrowany z jej genomem, metodą odwrotnej transkrypcji i hybrydyzacji ze znakowanymi „sondami” oligonukleotydowymi, uzyskuje się wystarczającą ilość prowirusowego DNA do analiza, która jest identyfikowana i charakteryzowana ilościowo, pod względem przynależności do genomu HIV, przy użyciu radioaktywnego lub innego znacznika sondy, ustalająca homologię DNA i sekwencji aminokwasowych specyficznych dla wirusa. Czułość PCR polega na wykryciu genów wirusowych w jednej na pięć tysięcy komórek.

PCR, w tym ilościowy, można zastosować jedynie w celu określenia wiremii w osoczu i podjęcia decyzji o rozpoczęciu leczenia pacjenta lub zmianie leków przeciwretrowirusowych. PCR nie może być zalecany do diagnostyki zakażenia wirusem HIV, ponieważ nawet najnowocześniejsze metody i odczynniki pozwalają określić wiremię nie niższą niż określony poziom - 50 kopii/ml. Złożoność testu PCR i jego wysoki koszt (około 200 dolarów) negują jego powszechne stosowanie jako metody rutynowej diagnostyki laboratoryjnej zakażenia wirusem HIV. Zatem PCR pozostaje niezbędna jedynie do oceny wiremii w osoczu u pacjentów z już ustalonym rozpoznaniem zakażenia wirusem HIV, aby rozwiązać problem leczenia pacjenta.

Etapy diagnostyki laboratoryjnej zakażenia wirusem HIV przedstawiono schematycznie na ryc. 1.

Ryż. 1. Etapy diagnostyki laboratoryjnej zakażenia wirusem HIV

Podczas zakażenia wirusem HIV następuje okres „ciemnego okna laboratoryjnego”, kiedy ilość przeciwciał przeciwko wirusowi HIV jest niewystarczająca dla czułości systemów testowych. Okres ten wynosi od tygodnia do trzech miesięcy od momentu zakażenia wirusem HIV, w zależności od poziomu czułości systemu testowego. Biorąc pod uwagę to zjawisko, podczas badania pojawiają się trudności oddana krew od osób przebywających we wspomnianym okresie zakażenia wirusem HIV. Dlatego w większości krajów świata wprowadzono system wykorzystania krwi dopiero po jej przechowywaniu przez 3-6 miesięcy w celu przeprowadzenia obowiązkowego ponownego badania dawców tych dawek krwi i jej składników na zakażenie wirusem HIV .

Scena pierwotne przejawy charakteryzuje się aktywnością procesu replikacyjnego. Powstała wiremia i antygenemia powodują powstawanie swoistych przeciwciał klasy IgM: anty-p24, anty-gp41, anty-gp120. U niektórych zakażonych osób antygen p24 można wykryć we krwi metodą ELISA już 2 tygodnie po zakażeniu i można go wykryć aż do 8. tygodnia. Następny w przebieg kliniczny Zakażenie wirusem HIV charakteryzuje się drugim wzrostem poziomu białka p24 we krwi; występuje podczas powstawania stadium AIDS.

Wystąpienie całkowitej serokonwersji, gdy we krwi obwodowej stwierdza się wysoki poziom swoistych przeciwciał IgG przeciwko białkom strukturalnym wirusa HIV gp41, p24, gpl20, znacznie ułatwia rozpoznanie zakażenia wirusem HIV. Większość dostępnych na rynku zestawów zaprojektowano tak, aby wskazywały właśnie takie przeciwciała.

Trudności w wykryciu przeciwciał u pacjentów zakażonych wirusem HIV mogą pojawić się w okresach masywnej wiremii i antygenemii, kiedy istniejące specyficzne przeciwciała we krwi są wykorzystywane do wiązania cząstek wirusa, a proces replikacji wyprzedza produkcję nowych przeciwciał przeciwwirusowych.

U osób z początkowo osłabionym układem odpornościowym wiremia i antygenemia pojawiają się wcześniej i utrzymują się na wysokim poziomie aż do zakończenia choroby. Jednocześnie u takich pacjentów występuje niska zawartość wolnych przeciwciał przeciwko HIV z dwóch powodów - niewystarczającej produkcji przeciwciał przez limfocyty B oraz wiązania przez przeciwciała wirionów HIV i rozpuszczalnych białek, dlatego też systemy testowe z nadwrażliwość lub modyfikacje metod testowych obejmujące etap uwalniania przeciwciał z kompleksów immunologicznych.

Pomimo obfitości swoistych markerów zakażenia wirusem HIV, najczęściej stwierdza się obecność przeciwciał całkowitych przeciwko białkom wirusa HIV. Termin „całkowity” oznacza obecność dwóch klas przeciwciał (IgG i IgM) oraz szeroki zasięg przeciwciała przeciwko różnym, głównie strukturalnym, białkom wirusa HIV.

Oznaczanie komórek CD4. Głównym wskaźnikiem klinicznym i laboratoryjnym do diagnozowania stadium zakażenia wirusem HIV, stopnia zniszczenia układu odpornościowego u pacjentów w Życie codzienne oznaczenie zawartości limfocytów CD4+ stało się: głównym kryterium rozpoznania AIDS jest spadek poziomu poniżej 200 komórek/mm3. Uważa się, że wszystkie osoby zakażone wirusem HIV, u których liczba limfocytów CD4+ wynosi 200 komórek/mm3 lub mniej, wymagają zarówno leczenia przeciwwirusowego, jak i profilaktyki przeciwko zapaleniu płuc wywołanemu przez Pneumocystis. I chociaż 1/3 osób zakażonych wirusem HIV, u których liczba limfocytów CO4+ jest mniejsza niż 200 komórek/mm3, nie ma objawy kliniczne Doświadczenie pokazuje, że ich objawy rozwijają się w ciągu najbliższych 2 miesięcy, zatem wszystkich uważa się za pacjentów w stadium AIDS.

Diagnostyka zakażenia wirusem HIV

Jak sprawdzić, czy dana osoba jest zakażona wirusem HIV? Najpopularniejszą metodą diagnozowania zakażenia wirusem HIV jest test immunoenzymatyczny (ELISA). Systemy testów immunoenzymatycznych służą do wykrywania przeciwciał przeciwko wirusowi HIV w surowicy krwi.

Zakażenie wirusem HIV potwierdza się za pomocą dwóch różnych testów – testu przesiewowego i testu potwierdzającego. Badania przesiewowe ze względu na dużą czułość mogą dawać wyniki fałszywie dodatnie. Dlatego zwykle przy odbiorze podstawowym wynik pozytywny pobiera się tę samą próbkę krwi i powtarza badanie przesiewowe po raz drugi, a w przypadku ponownego wyniku pozytywnego dopiero wtedy wykonuje się badanie potwierdzające innego typu. Testy potwierdzające przeprowadza się wyłącznie na próbkach krwi, które wielokrotnie dają wynik pozytywny („reaktywne”).

Najpopularniejszym testem przesiewowym jest test immunoenzymatyczny (ELISA). Zazwyczaj jako test potwierdzający stosuje się immunoblot. Połączenie dwóch różnych typów testów gwarantuje, że uzyskane wyniki są „wysoce dokładne”.

Systemy testów przesiewowych wykorzystują sztucznie stworzone białka wirusa HIV, które „wyłapują” specyficzne przeciwciała wytwarzane przez organizm w odpowiedzi na białka wirusowe. Po wychwyceniu przeciwciał „można je wykryć za pomocą odczynników stosowanych w połączeniu ze wskaźnikiem, takim jak enzym, który powoduje zmianę koloru”. Zmiany koloru są odczytywane przez maszynę, która określa wynik. Immunoblotting działa w podobny sposób, ale wykorzystuje pole elektryczne do rozróżnienia różnych składników na podstawie ich masy cząsteczkowej. Umożliwia to wykrycie przeciwciał skierowanych przeciwko określonym antygenom wirusowym, które następnie są przedstawiane na papierze w postaci rozpoznawalnych „pasków”. U większości ludzi nowoczesne systemy testowe są w stanie wykryć zakażenie wirusem HIV w ciągu 3–5 tygodni.

Jeśli istniało ryzyko zarażenia wirusem HIV, kiedy mogę się przebadać?

Test immunoenzymatyczny (ELISA), stosowany do diagnozowania wirusa HIV, może wykazać wyniki dopiero po kilku tygodniach od zakażenia. Ten rodzaj analizy określa nie samego wirusa, ale przeciwciała przeciwko niemu. U niektórych osób przeciwciała są obecne we krwi w wystarczającej ilości po 2 tygodniach. Jednakże u większości osób wytwarzanie przeciwciał (serokonwersja) trwa dłużej. Aby wynik badania był wystarczająco wiarygodny, od wystąpienia ryzykownej sytuacji musi upłynąć około 3 miesięcy. Czasami tworzenie przeciwciał trwa dłużej - od 3 do 6 miesięcy.

Jeżeli wynik testu jest negatywny po 3 miesiącach, czy konieczne jest powtórzenie testu po 6 miesiącach?

U zdecydowanej większości osób test jest w miarę wiarygodny już po 3 miesiącach (u większości osób przeciwciała pojawiają się jeszcze wcześniej). Możesz całkowicie wykluczyć możliwość infekcji, wykonując test po 6 miesiącach.

Jak długo należy czekać na wyniki badań?

Zależy to od charakterystyki laboratorium, w którym przeprowadzane jest badanie. Test ELISA można wykonać tego samego dnia, jednak w większości laboratoriów okres ten może wynosić od 1-2 dni do 2 tygodni. Biorąc pod uwagę, że oczekiwanie na wyniki może być bardzo nieprzyjemnym okresem, najlepiej wyjaśnić tę kwestię wcześniej, przed przystąpieniem do badania. Możesz także dowiedzieć się, czy weekendy i święta będą miały wpływ na termin egzaminu.

Jak wiarygodny jest pozytywny wynik testu?

Czasami test ELISA daje wyniki fałszywie dodatnie (w około 1% przypadków), przyczyną takiego wyniku może być ciąża, różne infekcje wirusowe lub zwykły wypadek. Po uzyskaniu pozytywnego wyniku, więcej dokładny test- immunoblot, na podstawie wyników którego stawiana jest diagnoza. Dodatni wynik immunoblotu po pozytywnym teście ELISA jest wiarygodny w 99,9% – jest to maksymalna dokładność każdego testu medycznego. Jeśli wynik immunoblotu jest ujemny, oznacza to, że pierwszy test był fałszywie dodatni i w rzeczywistości dana osoba nie jest nosicielem wirusa HIV.

Co to jest niepewny (wątpliwy) wynik?

Jeśli wynik testu ELISA jest dodatni lub ujemny, immunoblot może dać wynik dodatni, ujemny lub nieokreślony. Nieokreślony wynik immunoblotu, tj. obecność co najmniej jednego białka wirusa w immunoblocie można zaobserwować, jeśli infekcja nastąpiła niedawno, a we krwi nadal jest niewiele przeciwciał przeciwko wirusowi HIV, w takim przypadku immunoblot po pewnym czasie da wynik pozytywny. Ponadto może pojawić się niepewny wynik w przypadku braku zakażenia wirusem HIV z zapaleniem wątroby, niektóre choroby przewlekłe natury metabolicznej lub w czasie ciąży. W takim przypadku albo immunoblot będzie ujemny, albo zostanie znaleziona przyczyna nieokreślonego wyniku.

Czy muszę wykonać test na HIV, starając się o pracę?

Zgodnie z ustawodawstwem Federacji Rosyjskiej badanie na obecność wirusa HIV może być obowiązkowe jedynie w przypadku dawców krwi, cudzoziemców i bezpaństwowców pragnących wjechać na terytorium Federacji Rosyjskiej na okres dłuższy niż trzy miesiące, a także personelu medycznego współpracującego bezpośrednio z krew; osoby przebywające w więzieniu. Wszyscy pozostali obywatele poddają się testowi na obecność wirusa HIV dobrowolnie.

Zakażenie wirusem HIV– choroba wynikająca z zakażenia ludzkim wirusem niedoboru odporności (HIV).

HIV to wirus RNA należący do rodziny retrowirusów.

Wspólną właściwością retrowirusów jest obecność enzymu – odwrotnej transkryptazy (rewertazy), który „usuwa” genetycznie dokładną kopię w postaci DNA z RNA. Na podstawie morfologii, struktury genomu i innych cech HIV należy do rodziny lentiwirusów, czyli wirusów powolnych infekcji. Ogólne cechy chorób wywoływanych przez wirusy z tej rodziny obejmują: długi okres inkubacji, który nie ma dokładnych dat (od 1 miesiąca do 10 lat i więcej); niepozorny, bezobjawowy początek choroby; powoli rosnący obraz kliniczny; patogeneza odbywa się za pośrednictwem układu odpornościowego i wysoka prędkość zmienność genetyczna wirusa. Wszystko to znacznie komplikuje diagnostykę, leczenie i zapobieganie zakażeniu wirusem HIV.

Obecnie znane są dwa typy wirusa HIV: HIV-1 i HIV-2. Choroba wywołana wirusem HIV-2 charakteryzuje się powolną dynamiką i dłuższym przebiegiem.

Epidemiologia i drogi przenoszenia:

Zakażenie wirusem HIV jest antroponozą, jedynym źródłem patogenu dla człowieka jest nosiciel wirusa i pacjent z AIDS.

Cząsteczki wirusowe (wiriony) są obecne we wszystkich płynach biologicznych organizmu, ale w różnych stężeniach. Najwyższy poziom wirusa występuje we krwi i płynie nasiennym.

Wirus przenoszony jest na trzy sposoby:

- od matki do płodu/noworodka.

HIV nie jest przenoszony przez zwykłe kontakty domowe ani przez kropelki unoszące się w powietrzu. Nie odnotowano przypadków przeniesienia wirusa HIV przez ukąszenia owadów wysysających krew.

Jednak HIV nie jest tak zaraźliwy jak inne choroby przenoszone drogą płciową. Zatem spośród ponad 1600 przebadanych partnerów seksualnych osób zakażonych wirusem HIV tylko 15% zostało zakażonych tym wirusem.

O rozwoju zakażenia wirusem HIV decydują dwa wzajemnie na siebie oddziałujące czynniki: główna patogenna właściwość wirusa HIV, polegająca na osłabianiu układu odpornościowego osoby zakażonej oraz specyficzna odpowiedź immunologiczna organizmu, która rozwija się w trakcie choroby.

HIV jest wirusem pantropowym, ale jego głównymi komórkami docelowymi są komórki pomocnicze T, które niosą na swojej błonie setki cząsteczek receptora CD4+. W organizmie wirus przechodzi ze stanu mniej agresywnego w bardziej agresywny, co wyraża się postępującym spadkiem liczby limfocytów CD4+ we krwi, aż do ich całkowitego zaniku i prowadzi do pogorszenia obraz kliniczny.

Od momentu zakażenia do pojawienia się specyficznych przeciwciał przeciwwirusowych mija zwykle 6-8 tygodni. Okres pomiędzy zakażeniem a pojawieniem się wykrywalnych przeciwciał przeciwko wirusowi HIV w surowicy krwi nazywany jest okresem „okna”.

Z jednej strony układ odpornościowy jest celem wirusa, z drugiej strony sam wytwarza przeciwko niemu specyficzne przeciwciała. Jednocześnie w układzie odpornościowym dochodzi do rozwoju procesów autoimmunologicznych, które nasilają proces niszczenia komórek i tkanek organizmu.

Zakażenie wirusem HIV charakteryzuje się brakiem określonego obrazu klinicznego, a jego rozpoznanie stawia się zwykle na podstawie starannie zebranego wywiadu w połączeniu z szeregiem objawów potwierdzonych diagnostyką laboratoryjną. W 1983 roku WHO opracowała kryteria umożliwiające stwierdzenie obecności zakażenia wirusem HIV w przypadku braku możliwości diagnostyki serologicznej (kryteria z Bangui). Obejmują one:

- utrata masy ciała o więcej niż 10% pierwotnej;

— przewlekła biegunka przez ponad miesiąc;

- długotrwała gorączka utrzymująca się przez jeden miesiąc (stała lub przerywana).

- uporczywy kaszel utrzymujący się dłużej niż miesiąc;

- uogólnione swędzące zapalenie skóry;

- historia półpaśca;

- przewlekle postępująca lub rozsiana infekcja opryszczkowa(opryszczka pospolita);

W przypadku stwierdzenia zakażenia wirusem HIV u pacjenta, na podstawie tych kryteriów, można postawić diagnozę jednocześnie co najmniej dwa „duże” znaki i jeden „mały”. Wystarczającą podstawą do postawienia diagnozy AIDS może być wykrycie u pacjenta uogólnionego mięsaka Kaposiego lub kryptokokowego zapalenia opon mózgowo-rdzeniowych. Ze względu na niską czułość i swoistość tych kryteriów WHO zażądała następnie serologicznego potwierdzenia diagnozy.

Klasyfikacja kliniczna zakażenia wirusem HIV:

Etap pierwotnych przejawów:

A. ostra faza gorączkowa;

B. faza bezobjawowa;

B. przetrwała uogólniona limfadenopatia.

Stadium chorób wtórnych:

A. Utrata masy ciała poniżej 10 kg, powierzchowna bakteryjna, wirusowa, infekcje grzybowe skóry i błon śluzowych, półpasiec, nawracające zapalenie gardła, zapalenie zatok.

B. Postępująca utrata masy ciała powyżej 10 kg, niewyjaśniona biegunka, gorączka utrzymująca się dłużej niż 1 miesiąc, leukoplakia owłosiona, gruźlica płuc, nawracające lub utrzymujące się zmiany bakteryjne, grzybicze, wirusowe, pierwotniakowe narządy wewnętrzne(bez rozsiewu) lub głębokich zmian skórnych i błon śluzowych, nawracający i rozsiany półpasiec, zlokalizowany mięsak Kaposiego.

Obecność przeciwciał przeciwko HIV w zależności od stadium choroby.

Przeciwciała przeciwko wirusowi HIV we krwi

Wynik testu na HIV

II. Pierwotne manifestacje

B. Faza bezobjawowa

III. Choroby wtórne

Po przedostaniu się wirusa do organizmu, rozmnaża się on we krwi. U 50% zakażonych osób w tym okresie może rozwinąć się stan prodromalny, któremu towarzyszy wzrost temperatury ciała do 38,5-39,5°C i inne objawy przypominające mononukleozę, utrzymujący się od trzech do 10 dni. Stan ten mija, przypominając okres rekonwalescencji po infekcji grypowej.

Począwszy od 6-8 tygodnia choroby następuje wzrost poziomu przeciwciał we krwi, czyli serokonwersja. W tym okresie może rozwinąć się uogólniona limfadenopatia i niewielki niedobór odporności, ale u niektórych pacjentów objawy kliniczne zakażenia wirusem HIV są minimalne. W przypadku ciężkiego nabytego ludzkiego zespołu niedoboru odporności (AIDS) szybko rozwijają się oportunistyczne infekcje narządów wewnętrznych, wpływając system nerwowy. Na skórze i błonach śluzowych obserwuje się aktywację flory saprofitycznej. Rozwija się mięsak Kaposiego i inne nowotwory. Infekcje takie jak gruźlica, kiła, głębokie grzybice itp. mogą stać się bardziej aktywne. Charakterystyczną chorobą dla osób zakażonych wirusem HIV jest zapalenie płuc wywołane przez Pneumocystis. U niektórych pacjentów dochodzi do powiększenia wątroby i śledziony, co jest niekorzystnym objawem wskazującym na szybki postęp procesu. Istnieją mózgowe formy zakażenia wirusem HIV, takie jak zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych wywołane przez grzyby drożdżakowe, toksoplazmatyczne ropnie mózgu, ostre i podostre zapalenie mózgu, izolowane guzy mózgu (chłoniaki). U pacjentów mogą występować różne zmiany naczyniowe.

Do nieswoistych metod diagnostycznych zalicza się: oznaczanie zawartości subpopulacji limfocytów T we krwi, ocenę aktywności i reaktywności limfocytów T krwi obwodowej lub materiału biopsyjnego.

Konkretne metody diagnostyczne obejmują:

— wykrywanie prowirusowego DNA lub RNA wirusa HIV w komórkach ludzkich metodą PCR;

— wykrywanie dojrzałych zakaźnych wirionów w płynach biologicznych i komórkach;

— oznaczanie rozpuszczalnych białek wirusowych (antygenów);

— oznaczanie przeciwciał przeciwko HIV (ELISA, immunoblot, reakcja aglutynacji, radioimmunoprecypitacja).

Najpopularniejszą metodą badań przesiewowych jest test ELISA. Wynik ujemny może wskazywać:

— o braku infekcji;

— o przeprowadzeniu badania przed wystąpieniem serokonwersji (w okresie „okna” lub w innych okresach zaniku miana przeciwciał).

Pozytywne wyniki mogą być prawdziwe lub fałszywe. Fałszywie pozytywne wyniki można uzyskać podczas badania pacjentów z przewlekłymi chorobami zakaźnymi, autoimmunologicznymi lub onkologicznymi, niezakażonych kobiet w ciąży, pacjentów po transfuzjach krwi i pacjentów z przewlekłym alkoholizmem. Najwcześniejszy czas wykrycia przeciwciał przeciwko wirusowi HIV to 3-4 tygodnie od daty zakażenia.

Analiza potwierdzająca. Immunoblot.

Po badaniu przesiewowym wszystkie pozytywne wyniki sprawdzane są w innym systemie immunoenzymatycznym, a następnie w bardziej czułym teście – immunoblocie. Surowice potwierdzone tym testem można uznać za prawdziwie pozytywne.

Przed wykonaniem testu na obecność wirusa HIV pacjent musi zostać poinformowany (porada przed testem) o powodach konieczności wykonania testu, a po otrzymaniu wyniku odpowiednio przeprowadzić poradę po teście w celu wyjaśnienia wyniku badania. Na wszystkich etapach diagnozy i późniejszego leczenia należy zachować poufność.

Istnieją cztery główne podejścia do leczenia zakażenia wirusem HIV: etiologiczne, immunostymulujące, immunozastępcze i patogenetyczne (przeciwko zakażeniom wtórnym).

Analogi lub inhibitory nukleotydów innych klas mają zdolność tłumienia wirusowej odwrotnej transkryptazy. Pierwszym lekiem stosowanym w leczeniu chorych na AIDS był analog nukleotydu, azydotymidyna. Lek powoduje skutki uboczne, wpływając przede wszystkim na hematopoezę, a u większości pacjentów przy długotrwałym stosowaniu (ponad 6 miesięcy) rozwija się na nie oporność. Obecnie stosuje się ponad 10 nowych leków – inhibitory proteaz i odwrotnej transkryptazy. Znacząco komplikuje proces tworzenia skuteczne leki szybkie tempo mutacji wirusa HIV w organizmie, któremu towarzyszy pojawienie się szczepów opornych na leczenie.

Tylko podejście łączone może ograniczyć replikację wirusa i zapobiec rozwojowi lekooporności. Standardem stała się potrójna terapia antyretrowirusowa (połączenie trzech leków opartych na dwóch analogach nukleozydów i inhibitorach proteazy).

Produkowane kilkoma różnymi metodami. Wydawać by się mogło, że nie ma nic prostszego niż wykrycie tej choroby poprzez pobranie krwi. Ale tak nie jest. Rzeczywiście w ten sposób można wykryć zakażenie wirusem HIV, jednak dalsze badania prowadzi się przy użyciu innych metod. Od nich w dużej mierze zależy, jakie leczenie zostanie przepisane pacjentowi i jakie działania zostaną podjęte później. Do najpowszechniejszych i wysoce skutecznych metod należą analiza przesiewowa i immunoblot. Każdy z nich należy rozważyć bardziej szczegółowo.

Diagnostyka AIDS: analiza przesiewowa

Na początkowym etapie diagnozowania zakażenia wirusem HIV stosuje się badanie przesiewowe lub metodę ELISA. Opracowując tę ​​metodę, w laboratorium sztucznie stworzono białka wirusa. W szczególny sposób reagują na przeciwciała. Te ostatnie powstają w organizmie, gdy pojawiają się w nim komórki zakażone straszliwą chorobą. Diagnostyka laboratoryjna wirusa HIV w tym przypadku odbywa się przy użyciu sztucznych enzymów. Kiedy wchodzą w interakcję z przeciwciałami, zmieniają określony kolor. Pasek ze wskaźnikiem po dostaniu się krwi umieszcza się pod specjalnym urządzeniem, za pomocą którego można określić, czy dana osoba cierpi na tę chorobę, czy nie. Nowoczesne metody diagnozowania wirusa HIV, w tym test ELISA, pozwalają z dużą dokładnością określić fakt zakażenia lub jego brak. Jednak, jak każdy sprzęt, w aparacie do analizy przesiewowej występuje błąd. Dlatego w razie potrzeby pacjent powtarza badanie.

Warto wiedzieć, że test ELISA jest jedną z najwcześniejszych metod określenia obecności wirusa niedoboru odporności w organizmie. Zakażenie wirusem HIV to diagnoza, którą można wykryć dopiero kilka tygodni po zakażeniu. Kiedy zakażone komórki dostają się do krwioobiegu, układ odpornościowy organizmu zaczyna aktywnie stawiać opór. Wytwarzają się przeciwciała, które po dwóch lub trzech tygodniach wykrywa się w badaniach laboratoryjnych. Wczesna diagnostyka zakażenia wirusem HIV za pomocą testu ELISA pozwala wykryć we krwi człowieka przeciwciała przeciwko wirusowi niedoboru odporności. Na tym polega główna różnica w porównaniu z innymi nowoczesnymi metodami.

Warto zauważyć, że niektórzy ludzie mają przeciwciała przeciwko tę chorobę zaczną być produkowane w późniejszym terminie. Od momentu zakażenia do rozpoczęcia tego procesu może minąć od trzech do sześciu tygodni. Z tego powodu eksperci medyczni zalecają poddanie się badaniu przesiewowemu cztery do pięciu tygodni po odbyciu stosunku płciowego bez zabezpieczenia lub z innej przyczyny podejrzenia przypadkowej infekcji.

Metody laboratoryjnej diagnostyki zakażenia wirusem HIV metodą ELISA są opracowywane od dawna. Do chwili obecnej istnieją cztery generacje testów. Najdokładniejsze i najskuteczniejsze z nich to te, które zostały opracowane ostatnio. Diagnostyka laboratoryjna zakażenia wirusem HIV i AIDS za pomocą testów ELISA trzeciej i czwartej generacji przeprowadzana jest z wykorzystaniem rekombinowanych białek i peptydów. Czułość tych testów na przeciwciała wytwarzane przez organizm wynosi 92 - 93%. Mówimy o rosyjskich metodach badawczych. Europejczycy nauczyli się przeprowadzać podobne testy z czułością na poziomie 99%.

Nowoczesne metody diagnostyki laboratoryjnej zakażenia wirusem HIV w oparciu o test ELISA służą nie tylko wykryciu obecności choroby. Za pomocą analizy przesiewowej można monitorować rozprzestrzenianie się wirusa niedoboru odporności, a także pobrać materiał do badań przed pobraniem krwi od dawców.

ELISA to standardowa metoda diagnozowania zakażenia wirusem HIV: jak się ją wykonuje, dlaczego daje fałszywy wynik?

Diagnostyka HIV i AIDS za pomocą testu ELISA jest standardową procedurą. Krew pacjenta pobierana jest z żyły. Do analizy wystarczy pięć mililitrów materiału. Kliniczny HIV typu 2 i 1 rozpoznaje się co najmniej osiem godzin po spożyciu. Lekarze zalecają robienie tego rano na pusty żołądek. Wyniki pełnego badania będą znane za dwa lub trzy dni. Ekspresowy przegląd odbywa się w krótszym czasie. Z reguły zajmuje to tylko kilka godzin. Jednak w tym przypadku błąd wzrasta. Ekspresowa diagnoza wirusa HIV jest konieczna w nagłych przypadkach, na przykład gdy pacjent potrzebuje pilnej operacji. Taką analizę należy przeprowadzić przed nieplanowanymi interwencjami chirurgicznymi, ponieważ w przypadku zakażenia wirusem niedoboru odporności lekarze przestrzegają zwiększonych środków bezpieczeństwa. Kliniczne rozpoznanie zakażenia wirusem HIV w krótkim czasie jest konieczne również w przypadkach, gdy oddana krew musi zostać szybko pobrana, aby uratować innego pacjenta.

Zdarzają się przypadki, gdy u danej osoby zdiagnozowano AIDS lub HIV, ale w rezultacie nie potwierdzono tego lub odwrotnie. Dlaczego tak się dzieje w przypadku testu ELISA? Wynik fałszywie ujemny może wynikać z nieprawidłowego przygotowania krwi do badania. Czasami przyczyną tego jest niewłaściwe wykonanie jej odbioru. Wynik fałszywie ujemny przy weryfikacji rozpoznania zakażenia wirusem HIV nie zostaje potwierdzony nawet w przypadku zbyt wczesnego pobrania materiału do badania. W końcu od zakażenia musiały minąć co najmniej trzy tygodnie. Zdarzają się przypadki, gdy wynik wykrycia wirusa niedoboru odporności jest fałszywie dodatni. Jest to powiązane z ogólne warunki układ odpornościowy i hormonalny organizmu człowieka. W większości przypadków u pacjenta występują choroby, które są wynikiem fałszywie dodatniego wyniku. Mówimy o alkoholowym zapaleniu wątroby, w którym wątroba wytwarza specjalne enzymy, które mogą powodować nieprawidłowe rozpoznanie wirusa HIV. Ciąża i nie tylko choroby autoimmunologiczne, wraz ze szpiczakiem mnogim, może również powodować fałszywie dodatni wynik. Lista ta może obejmować pacjentów dializowanych oraz osoby zaszczepione na krótko przed diagnostyką różnicową wirusa HIV.

Mówiąc o analizie przesiewowej, należy zaznaczyć, że ta metoda badawcza wymaga potwierdzenia. Lekarze, zanim na tej podstawie postawią diagnozę HIV, zawsze wysyłają pacjenta na badanie immunologiczne.

Podstawowe metody diagnostyki laboratoryjnej zakażenia wirusem HIV: immunoblotting

AIDS, którego diagnostyka i leczenie są ze sobą ściśle powiązane, wykrywa się na kilka sposobów. Jak wspomniano powyżej, jeden test ELISA nie wystarczy, aby ostatecznie postawić diagnozę. Diagnostykę różnicową zakażenia wirusem HIV w tym przypadku uzupełnia immunoblot. We współczesnej medycynie nazywa się to ostateczną metodą potwierdzającą diagnozę. W tym przypadku do badań wykorzystywane są białka zawarte we krwi pacjenta. Są one rozdzielane w specjalnym żelu, po czym pracownicy laboratorium mają możliwość zbadania składu molekularnego krwi.

Czas potrzebny do zdiagnozowania wirusa HIV przy użyciu tej metody waha się od jednego do trzech dni. Do badania pobierana jest krew z żyły pacjenta i umieszczana na testerze z żelem. Wynik, który jest kwestionowany, może wystąpić w czasie ciąży, obecności procesów onkologicznych lub gruźlicy. Fałszywie negatywna reakcja na test może wystąpić, jeśli test zostanie przeprowadzony nieprawidłowo lub jeśli zostanie przeprowadzony zbyt wcześnie. Od momentu zakażenia muszą minąć co najmniej trzy tygodnie. W końcu czas, po którym zdiagnozowano HIV, zależy bezpośrednio od stanu układu odpornościowego.

Inne metody diagnozowania AIDS i HIV

Metody diagnostyki radiacyjnej AIDS stosuje się z reguły w stadium terminalnym lub wtórnym. Za ich pomocą możliwa jest identyfikacja zmian, jakie zachodzą w organizmie na skutek chorób wtórnych czy infekcji oportunistycznych.

Diagnostyka biorezonansowa wirusa HIV, zwana także skanowaniem nieliniowym, stosowana jest głównie w prywatnych klinikach do wykrywania wirusa niedoboru odporności. Oficjalna medycyna uważa tę metodę za niewystarczająco dokładną i skuteczną. Być może udoskonalenie diagnostyki nieliniowej w przyszłości umożliwi identyfikację tej strasznej diagnozy już w okresie inkubacji.

Diagnostyka zakażenia wirusem HIV: metoda serologiczna i jej cechy

To porównawcze nowa technika, w którym laboratoryjne kryteria diagnozowania zakażenia wirusem HIV opierają się na zasadzie antygen-przeciwciało. W przypadku wirusa niedoboru odporności w organizmie człowieka następuje poszukiwanie przeciwciał przeciwko wirusowi. W tym celu wykorzystuje się sztucznie uzyskany antygen, na który muszą zareagować przeciwciała. Specyficzne markery serologiczne zakażenia wirusem HIV powodują specyficzne zmiany w składzie krwi. Warto zaznaczyć, że ta metoda badawcza jest najskuteczniejsza w ostrej fazie, która kończy się serokonwersją. Po tym następuje bezobjawowy okres utajony, podczas którego znalezienie antygenu nie jest łatwe.

Diagnostyka referencyjna zakażenia wirusem HIV: opis i cechy

Wartości referencyjne HIV są uważane za najdokładniejsze w ustalaniu diagnozy. Ta metoda badawcza łączy w sobie test ELISA i immunoblot. Laboratorium referencyjne diagnostyki HIV umożliwia pobieranie i późniejsze przetwarzanie próbek na dwa sposoby. Pozwala to uzyskać najdokładniejszy wynik w ciągu 24 godzin. Ponowne sprawdzenie analizy uzyskanej w laboratorium referencyjnym jest konieczne tylko wtedy, gdy dane z testu ELISA i immunoblotu są ze sobą sprzeczne. Wystarczy rzadkie wydarzenie, która najczęściej występuje u osób z wyżej opisanymi chorobami współistniejącymi.

Terminowe rozpoznanie zakażenia wirusem HIV staje się niezwykle ważnym środkiem, ponieważ wczesne rozpoczęcie leczenia może w dużej mierze determinować dalszy rozwój choroby i przedłużyć życie pacjenta. W ostatnich latach nastąpił znaczny postęp w rozpoznawaniu tej strasznej choroby: starsze systemy testowe są zastępowane bardziej zaawansowanymi, metody badawcze stają się coraz bardziej dostępne, a ich dokładność znacznie wzrasta.

W tym artykule będziemy rozmawiać nowoczesne metody diagnoza zakażenia wirusem HIV, której wiedza jest przydatna do szybkiego leczenia tego problemu i utrzymania normalnej jakości życia pacjenta.

Metody diagnostyki HIV

W Rosji przeprowadza się standardową procedurę diagnozowania zakażenia wirusem HIV, która obejmuje dwa poziomy:

• System testowy ELISA (analiza przesiewowa);
• immunoblot (IB).

Do diagnozy można również zastosować inne metody:

• szybkie testy.

Systemy testów ELISA

Na pierwszym etapie diagnozy do wykrycia zakażenia wirusem HIV wykorzystuje się test przesiewowy (ELISA), który opiera się na powstałych w laboratoriach białkach wirusa HIV, które wychwytują specyficzne przeciwciała wytwarzane w organizmie w odpowiedzi na zakażenie. Po ich interakcji z odczynnikami (enzymami) układu testowego zmienia się kolor wskaźnika. Następnie te zmiany barwy poddawane są obróbce przy użyciu specjalnego sprzętu, który determinuje wynik przeprowadzonej analizy.

Takie testy ELISA mogą dać wyniki w ciągu kilku tygodni po wprowadzeniu zakażenia wirusem HIV. Test ten nie określa obecności wirusa, ale wykrywa wytwarzanie przeciwko niemu przeciwciał. Czasami w organizmie człowieka wytwarzanie przeciwciał przeciwko wirusowi HIV rozpoczyna się już po 2 tygodniach od zakażenia, jednak u większości osób powstają one w późniejszym terminie, po 3-6 tygodniach.

Istnieją cztery generacje testów ELISA o różnej czułości. W ostatnich latach coraz częściej stosuje się systemy testowe trzeciej i czwartej generacji, które opierają się na syntetycznych peptydach lub białkach rekombinowanych i charakteryzują się większą swoistością i dokładnością. Można ich używać do diagnozowania zakażenia wirusem HIV, monitorowania częstości występowania wirusa HIV i zapewnienia bezpieczeństwa podczas badania oddanej krwi. Dokładność systemów testów ELISA III i IV generacji wynosi 93-99% (testy produkowane w Europie Zachodniej są bardziej czułe – 99%).

Do wykonania testu ELISA pobiera się z żyły pacjenta 5 ml krwi. Pomiędzy ostatnim posiłkiem a analizą musi upłynąć co najmniej 8 godzin (zwykle wykonuje się ją rano na czczo). Zaleca się wykonanie takiego badania nie wcześniej niż 3 tygodnie od podejrzenia zakażenia (np. po stosunku płciowym bez zabezpieczenia z nowym partnerem seksualnym).

Wyniki testu ELISA uzyskuje się w ciągu 2-10 dni:

• wynik negatywny: wskazuje na brak zakażenia wirusem HIV i nie wymaga konsultacji ze specjalistą;
• wynik fałszywie ujemny: można zaobserwować dn wczesne stadia infekcja (do 3 tygodni), z późne etapy AIDS z ciężką immunosupresją i niewłaściwym przygotowaniem krwi;
• wynik fałszywie dodatni: można zaobserwować w niektórych chorobach oraz w przypadku nieprawidłowego przygotowania krwi;
• wynik pozytywny: wskazuje na zakażenie wirusem HIV, wymaga przeprowadzenia IB i skontaktowania się pacjenta ze specjalistą w ośrodku AIDS.

Dlaczego test ELISA może dawać fałszywie dodatnie wyniki?

Fałszywie dodatnie wyniki testu ELISA na HIV mogą wystąpić w wyniku nieprawidłowego przetwarzania krwi lub u pacjentów z następującymi schorzeniami i chorobami:

• szpiczak mnogi;
• choroby zakaźne wywołane wirusem Epsteina-Barra;
• stan po;
• choroby autoimmunologiczne;
• na tle ciąży;
• stan po szczepieniu.

Z powodów opisanych powyżej we krwi mogą znajdować się nieswoiste przeciwciała reagujące krzyżowo, których wytwarzanie nie zostało spowodowane zakażeniem wirusem HIV.

W ostatnich latach częstotliwość wyników fałszywie dodatnich znacznie spadła ze względu na stosowanie systemów testowych III i IV generacji, które zawierają bardziej czułe peptydy i białka rekombinowane (są syntetyzowane przy użyciu Inżynieria genetyczna in vitro). Po wprowadzeniu takich testów ELISA częstotliwość wyników fałszywie dodatnich znacznie spadła i wynosi około 0,02-0,5%.

Wynik fałszywie dodatni nie oznacza, że ​​dana osoba jest zakażona wirusem HIV. W takich przypadkach WHO zaleca wykonanie kolejnego testu ELISA (koniecznie IV generacji).

Krew pacjenta przesyłana jest do laboratorium referencyjnego lub arbitrażowego z oznaczeniem „powtórz” i badana systemem testowym ELISA IV generacji. Jeżeli wynik nowej analizy jest negatywny, wówczas pierwszy wynik uważa się za błędny (fałszywie dodatni) i nie przeprowadza się IS. Jeśli wynik drugiego testu będzie pozytywny lub wątpliwy, pacjent musi po 4-6 tygodniach przejść IB, aby potwierdzić lub wykluczyć zakażenie wirusem HIV.

Immunoblotting

Ostateczną diagnozę zakażenia wirusem HIV można postawić dopiero po uzyskaniu dodatniego wyniku immunoblottingu (IB). Do jego przeprowadzenia wykorzystuje się pasek nitrocelulozowy, na który nanoszone są białka wirusowe.

Pobieranie krwi w kierunku IB pobiera się z żyły. Następnie poddawany jest specjalnej obróbce, a białka zawarte w jego surowicy zostają rozdzielone w specjalnym żelu według ich ładunku i masy cząsteczkowej (manipulacja odbywa się za pomocą specjalnego sprzętu pod wpływem pola elektrycznego). Na żel surowicy krwi nakłada się pasek nitrocelulozowy i w specjalnej komorze przeprowadza się bloting („blotting”). Pasek jest przetwarzany i jeśli użyte materiały zawierają przeciwciała przeciwko wirusowi HIV, wiążą się one z prążkami antygenowymi na IB i pojawiają się w postaci linii.

IB uważa się za pozytywne, jeżeli:

• według amerykańskich kryteriów CDC - na pasku znajdują się dwie lub trzy linie gp41, p24, gp120/gp160;
• według amerykańskich kryteriów FDA pasek ma dwie linie p24, p31 i linię gp41 lub gp120/gp160.

W 99,9% przypadków dodatni wynik IB wskazuje na zakażenie wirusem HIV.

Jeśli nie ma linii, IB jest ujemne.

Identyfikując linie z gr160, gr120 i gr41, IB jest wątpliwe. Wynik ten może wystąpić, gdy:

• choroby onkologiczne;
• ciąża;
• częste transfuzje krwi.

W takich przypadkach zaleca się powtórzenie badania z użyciem zestawu innej firmy. Jeżeli po dodatkowym IB wynik pozostaje wątpliwy, konieczna jest obserwacja przez pół roku (IB przeprowadza się co 3 miesiące).

Reakcja łańcuchowa polimerazy

Test PCR może wykryć RNA wirusa. Jego czułość jest dość wysoka i pozwala wykryć zakażenie wirusem HIV w ciągu 10 dni od zakażenia. W niektórych przypadkach PCR może dać fałszywie dodatnie wyniki, ponieważ wysoka czułość może również reagować na przeciwciała przeciwko innym infekcjom.

Ta technika diagnostyczna jest kosztowna i wymaga specjalnego sprzętu oraz wysoko wykwalifikowanych specjalistów. Powody te nie pozwalają na masowe badanie populacji.

PCR stosuje się w następujących przypadkach:

• do wykrywania wirusa HIV u noworodków urodzonych przez matki zakażone wirusem HIV;
• w celu wykrycia wirusa HIV w „okresie okna” lub w przypadku wątpliwego IB;
• kontrolować stężenie wirusa HIV we krwi;
• do badania krwi dawców.

Sam test PCR nie pozwala na rozpoznanie wirusa HIV, ale jest przeprowadzany w celu: dodatkowa metoda diagnostyka w celu rozwiązania kontrowersyjnych sytuacji.

Metody ekspresowe

Jedną z innowacji w diagnostyce HIV są szybkie testy, których wyniki można ocenić w ciągu 10-15 minut. Najbardziej efektywne i dokładne wyniki uzyskuje się stosując testy immunochromatograficzne oparte na zasadzie przepływu kapilarnego. Są to specjalne paski, na które nanosi się krew lub inne płyny testowe (ślina, mocz). Jeżeli obecne są przeciwciała przeciwko wirusowi HIV, po 10-15 minutach na teście pojawia się kolorowy pasek kontrolny – wynik pozytywny. Jeśli wynik będzie negatywny, pojawi się tylko pasek kontrolny.

Podobnie jak po testach ELISA, wyniki szybkich testów należy potwierdzić analizą IB. Dopiero po tym można postawić diagnozę zakażenia wirusem HIV.

Dostępne są zestawy do szybkich testów domowych. Test OraSure Technologies1 (USA) jest zatwierdzony przez FDA, jest dostępny bez recepty i może być stosowany do wykrywania wirusa HIV. Po badaniu, jeśli wynik jest pozytywny, zaleca się pacjentowi poddanie się badaniu w specjalistycznym ośrodku w celu potwierdzenia diagnozy.

Inne testy do użytku domowego nie zostały jeszcze zatwierdzone przez FDA, a ich wyniki mogą być bardzo wątpliwe.

Pomimo tego, że szybkie testy mają gorszą dokładność niż testy ELISA IV generacji, są one powszechnie stosowane w dodatkowych badaniach populacji.

Testy na wykrycie zakażenia wirusem HIV można wykonać w dowolnej przychodni, centralnym szpitalu powiatowym lub wyspecjalizowanych ośrodkach AIDS. Na terytorium Rosji przeprowadzane są one w sposób całkowicie poufny lub anonimowy. Każdy pacjent może liczyć na konsultację lekarską lub psychologiczną przed lub po badaniu. Za testy na HIV będziesz musiał zapłacić jedynie w handlu instytucje medyczne, a w przychodniach i szpitalach publicznych wykonywane są bezpłatnie.

Przeczytaj, w jaki sposób można zarazić się wirusem HIV i jakie mity krążą na temat możliwości zarażenia się.