Fibroblasti. Funkcije fibroblasta

Osnovna djelatnost modernog estetska medicina- prevencija starenja uz pomoć visokih tehnologija. Kao rezultat naučno istraživanje Identifikovan je obrazac da ćelije imaju sposobnost regeneracije. Ova svojstva imaju i fibroblasti, čija regeneracija dovodi do pomlađivanja kože i uklanjanja vidljivih nedostataka na njoj.

Funkcije i priroda fibroblasta

Izraz "fibroblasti" sastoji se od dvije latinske riječi koje se doslovno prevode kao "izdanak" i "vlakno". Po svojoj prirodi su ćelije vezivno tkivo, sintetizirajući ekstracelularni matriks (struktura tkiva koja osigurava prijenos hemijske supstance i mehanička podrška ćelijama kože). Fibroblasti proizvode supstance koje su prekursori kolagenih i elastinskih vlakana, hijaluronske kiseline, fibrina.

Dolaze iz mezenhima - zametnog tkiva koje se nalazi u ćelijama tijela ljudi i životinja. U aktivnom stanju, struktura fibroplasta implicira prisustvo jezgre i procesa, oni imaju povećanu veličinu i sadrže veliki broj ribozoma u stanju mirovanja, smanjuju se u veličini i dobijaju vretenasti oblik;

Fibroblasti kože imaju širok raspon funkcije. Zahvaljujući njihovom prisustvu u organizmu, dešavaju se sledeći procesi:

• Aktivacija procesa sinteze kolagena i elastina.
• Formiranje krvnih sudova.
• Usmjeravanje ćelija imunološkog sistema prema bakterijama i stranim česticama.
• Ubrzanje rasta tkiva.
• Povećan rast ćelija.
• Zacjeljivanje oštećenih područja kože.
• Proizvodnja niza proteina (proteoglikana, laminina i drugih).

Uzroci starosnih promjena

Mladost kože određena je cikličnim procesom proizvodnje kolagena i elastina, koji se potom razgrađuju na sastavne dijelove koje fibroblasti koriste za njihovu ponovnu proizvodnju. S vremenom, potonji smanjuju svoju aktivnost, prestaju proizvoditi kolagena i elastinska vlakna, što u konačnici izaziva starenje kože.

Promjene vezane za dob počinju da se pojavljuju od 28 do 30 godine života. Izražavaju se u gubitku elastičnosti i nastanku ptoze, promjenama boje kože, povećanju suhoće i stvaranju bora. I sve to zbog činjenice da se svake decenije fibroblasti smanjuju za 10% originalni broj.

Dopuna fibroblasta

Dakle, da bi se usporilo starenje i vratila mladost, potrebno je vratiti fibroblaste. Većina modernih kozmetičkih tehnika dovodi samo do privremenog ubrzanja sinteze kolagenih vlakana, ali ne povećava same ćelije. Dugo je vremena bilo općeprihvaćeno da je to jednostavno nemoguće.

Trenutno je nauka napravila velike korake naprijed, a obnavljanje fibroblasta više nije fantazija. Ova procedura pod nazivom SPRS terapija i široko se praktikuje u Sjedinjenim Državama, evropskim zemljama i, odnedavno, u Rusiji.

SPRS terapija: karakteristike i princip implementacije

Obnavljanje fibroblasta nije lako; Rezultati njegove primjene su zadebljanje kože i povećanje njene elastičnosti, prevencija i smanjenje ptoze. Bore se također smanjuju, pigmentacija nestaje i ožiljci se izglađuju.

Terapija počinje sakupljanjem pacijentovih ćelija sa kože koja se nalazi iza ušne školjke. Dobijeni uzorak se koristi za dijagnozu i proučavanje, a naziva se biomaterijal. Koristi se za razvoj režima liječenja i umjetno rekreiranje fibroblasta, koji će se naknadno ubrizgati natrag u kožu pomoću injekcija.

Ćelije uzgojene iz biomaterijala pacijenata tijelo ne odbacuje. Nakon transplantacije ostaju aktivni godinu i po, tokom kojih se stanje kože poboljšava.

Ne preporučuje se davanje fibroblasta injekcijom tokom pogoršanja hroničnih bolesti, prehlada, virusnih infekcija praćenih povišena temperatura tijela. Kontraindikacije su imunodeficijencija, maligne formacije, infekcije i hronične bolesti V akutna faza. Prije izvođenja postupka potrebne su preliminarne konzultacije sa specijalistom kako bi se utvrdile pojedinačne kontraindikacije.

Postupak traje ne više od sat vremena i izvodi se u toku 2 sesije sa pauzom od 5 do 7 nedelja. Prije injekcije potrebna je lokalna anestezija.

Uvođenje fibroblasta je skupo zadovoljstvo. Kompletan asortiman usluge, uključujući prikupljanje, skladištenje, istraživanje i administraciju biomaterijala, procjenjuje se na približno 400.000 rubalja.

Video: provođenje SPRS terapije

Fibroblasti su ćelije vezivnog tkiva koje osiguravaju proizvodnju kolagena i elastina, čime održavaju mladost naše kože. S vremenom se njihov broj u tijelu stalno smanjuje, zbog čega se pojavljuju vanjski znakovi promjena vezanih za dob. Obnavljanje broja fibroblasta provodi se tehnikom injekcije na bazi umjetno uzgojenih stanica.

Fibroblasti- vodeće ćelije labavog vezivnog tkiva koje proizvode komponente međustanične supstance. To su razgranate, vretenaste ili raširene ćelije veličine oko 20 mikrona. U njima su dobro razvijene organele unutrašnje metaboličke sredine. Jezgro fibroblasta je ovalnog oblika, sadrži ravnomjerno raspršeni kromatin i 2-3 jezgre. Citoplazma je jasno podijeljena na intenzivno obojenu endoplazmu i slabo obojenu ektoplazmu. Citoplazma fibroblasta (posebno mladih) je bazofilna. Otkriva dobro razvijen endoplazmatski retikulum sa velikim brojem ribozoma vezanih za membrane u obliku lanaca od 10-30 granula. Ova ultrastruktura granularnog endoplazmatskog retikuluma karakteristična je za ćelije koje aktivno sintetiziraju protein "za izvoz". Tu su i brojni slobodni ribozomi i dobro razvijen Golgijev kompleks. Mitohondrije su velike, njihov broj je mali. Citokemijske metode su pokazale prisustvo glikolitičkih enzima i hidrolitičkih enzima lizosoma (posebno kolagenaze) u citoplazmi fibroblasta. Mitohondrijski oksidativni enzimi su manje aktivni.

Mišićno-skeletni sistem ćelije osigurava njihovu pokretljivost, promjenu oblika, vezivanje za supstrat, mehaničku napetost filma na koji je ćelija pričvršćena u kulturi. Na površini ćelije nalaze se mnoge mikrovile i vezikularne projekcije. Fibroblasti suspendovani u tečnom mediju imaju sferni oblik. Fibroblast se raširi nakon prianjanja na čvrstu površinu, duž koje se kreće zbog pseudopodije.

Glavna funkcija fibroblasta- sinteza i izlučivanje proteina i glikozaminoglikana koji se koriste za formiranje komponenti međućelijske supstance vezivnog tkiva, kao i stvaranje i izlučivanje faktora koji stimulišu kolonije (granulociti, makrofagi). Fibroblasti dugo vremena zadržavaju sposobnost razmnožavanja. Fibroblasti koji su završili svoj razvojni ciklus nazivaju se fibrociti. Ovo su dugovječne ćelije. Ćelijska citoplazma je iscrpljena organelama, stanica postaje spljoštena, a proliferativni potencijal se smanjuje. Međutim, ćelija ne gubi sposobnost da učestvuje u regulaciji metabolički procesi u tkanini.

Međućelijska supstanca. Sastoji se od fibrilarnih i osnovnih (amorfnih) komponenti. Histoautoradiografskim metodama uz uvođenje označenih aminokiselina (3H-prolin, 3H-glicin i dr.) ustanovljeno je da se proteinski molekuli sintetiziraju u polizomima fibroblasta. Fibroblasti mogu istovremeno sintetizirati nekoliko vrsta specifičnih proteina i glikozaminoglikana. Za sintezu proteina kolagena neophodno je prisustvo vitamina C, čijim je nedostatkom kolagenogeneza oštro inhibirana. Sinteza međućelijskih tvari odvija se intenzivnije u uvjetima smanjene koncentracije kisika. Istovremeno sa sintezom kolagena, fibroblast uništava približno 2/3 ovog proteina pomoću enzima kolagenaze, koji sprečava preuranjenu sklerozu tkiva.

Sintetizirani molekuli prokolagena se egzocitozom dovode na površinu fibroblasta. U ovom slučaju, protein prelazi iz rastvorljivog oblika u netopivi - tropokolagen. Kombinacija molekula tropokolagena u supramolekularne strukture - kolagene fibrile - nastaje u neposrednoj blizini površine stanice zbog djelovanja posebnih tvari koje luči stanica. Konkretno, na površini fibroblasta pronađen je protein - fibronektin, koji obavlja adhezivne i druge funkcije. Naknadne faze fibrilogeneze nastaju polimerizacijom i agregacijom tropokolagena na prethodno formiranim fibrilima. U tom slučaju može doći do sazrevanja kolagenih vlakana bez direktne veze sa fibroblastima.
Glikozaminoglikani su regulatori stvaranja kolagena i dio su glavne (amorfne) komponente međustanične tvari.

Fibrilarna komponenta Međućelijska tvar labavog vezivnog tkiva uključuje tri vrste vlakana - kolagena, elastična i retikularna. Imaju sličan mehanizam formiranja, ali se međusobno razlikuju hemijski sastav, ultrastruktura i fizička svojstva. Protein kolagena se identificira po sastavu aminokiselina i redoslijedu aminokiselina u molekulu kolagena. Ovisno o varijaciji aminokiselina u polipeptidnom lancu, imunološkim svojstvima, molekularnoj težini itd., razlikuje se 14 ili više varijanti kolagenskih proteina koji su dio vezivnog tkiva organa. Svi oni čine 4 glavne vrste ili klase kolagena.

Kolagen tipa 1 nalazi u vezivnom i koštanog tkiva, kao i u skleri i rožnjači oka; Tip II - u hrskavičnom tkivu; Tip III - u zidu krvnih sudova, u vezivnom tkivu kože fetusa; IV-ro tip - u bazalnim membranama.

Fibroblasti(fibroblastociti) (od latinskog fibra - vlakno, grčki blastos - klica, klica) - ćelije koje sintetiziraju komponente međustanične tvari: proteine ​​(na primjer, kolagen, elastin), proteoglikane, glikoproteine.

U embrionalnom periodu nastaje niz mezenhimskih ćelija embrija diferencijacija fibroblasta, što uključuje:

· matične ćelije,

polumatične progenitorske ćelije,

· nespecijalizirani fibroblasti,

diferencirani fibroblasti (zreli, aktivno funkcionalni),

fibrociti (definitivno oblici ćelija),

miofibroblasti i fibroklasti.

WITH glavna funkcija fibroblasti su povezani sa formiranjem glavne supstance i vlakana (što se jasno manifestuje, na primer, tokom zarastanja rana, razvoja ožiljnog tkiva, formiranja kapsule vezivnog tkiva oko stranog tela).

Niskospecijalizovani fibroblasti su maloprocesirane ćelije sa okruglim ili ovalnim jezgrom i malim nukleolom, bazofilna citoplazma, bogata RNK. Veličina ćelije ne prelazi 20-25 mikrona. U citoplazmi ovih ćelija nalazi se veliki broj slobodnih ribozoma. Endoplazmatski retikulum i mitohondrije su slabo razvijeni. Golgijev aparat predstavljen je skupovima kratkih cijevi i vezikula.
U ovoj fazi citogeneze, fibroblasti imaju vrlo nizak nivo sinteze i sekrecije proteina. Ovi fibroblasti su sposobni za mitotičku reprodukciju.

Diferencirani zreli fibroblasti su veće veličine. Ovo su aktivno funkcionalne ćelije.

U zrelim fibroblastima vrši se intenzivna biosinteza kolagena, proteina elastina, proteoglikana koji su neophodni za formiranje glavne supstance i vlakana. Ovi procesi se pojačavaju u uslovima niske koncentracije kiseonika. Stimulativni faktori za biosintezu kolagena su i joni gvožđa, bakra, hroma, askorbinska kiselina. Jedan od hidrolitičkih enzima je kolagenaza- razgrađuje nezreli kolagen unutar ćelija, čime se reguliše intenzitet lučenja kolagena na ćelijskom nivou.

Fibroblasti su pokretne ćelije. U njihovoj citoplazmi, posebno u perifernom sloju, nalaze se mikrofilamenti koji sadrže proteine ​​kao što su aktin i miozin. Kretanje fibroblasta postaje moguće tek nakon što se pomoću njih vežu za potporne fibrilarne strukture fibronektin- glikoprotein koji sintetiziraju fibroblasti i druge stanice, osiguravajući prianjanje stanica i nestaničnih struktura. Tokom kretanja, fibroblast postaje spljošten, a njegova površina se može povećati 10 puta.

Plazmalema fibroblasta je važna receptorna zona koja posreduje u efektima različitih regulatornih faktora. Aktivacija fibroblasta obično je praćena akumulacijom glikogena i povećanom aktivnošću hidrolitičkih enzima. Energija stvorena metabolizmom glikogena koristi se za sintezu polipeptida i drugih komponenti koje luči stanica.

Na osnovu njihove sposobnosti da sintetiziraju fibrilarne proteine, porodica fibroblasta uključuje retikularne ćelije retikularnog vezivnog tkiva hematopoetskih organa, kao i hondroblaste i osteoblaste skeletnog varijeteta vezivnog tkiva.

Fibrociti- definitivni (konačni) oblici razvoja fibroblasta. Ove ćelije su vretenaste sa pterigoidni procesi. [Sadrže mali broj organela, vakuola, lipida i glikogena.] Sinteza kolagena i drugih supstanci u fibrocitima je naglo smanjena.

Miofibroblasti- ćelije slične fibroblastima, kombinirajući sposobnost sintetiziranja ne samo kolagena, već i kontraktilnih proteina u značajnim količinama. Fibroblasti se mogu transformirati u miofibroblaste, koji su funkcionalno slični glatkim mišićne ćelije, ali za razliku od potonjih imaju dobro razvijen endoplazmatski retikulum. Takve ćelije se uočavaju u granulacionom tkivu zarastanja rana i u materici tokom trudnoće.

Fibroklasti- ćelije sa visokom fagocitnom i hidrolitičkom aktivnošću, učestvuju u "resorpciji" međustanične supstance tokom perioda involucije organa (na primer, u maternici nakon trudnoće). Oni kombinuju strukturne karakteristike ćelija koje formiraju fibrile (razvijen granularni endoplazmatski retikulum, Golgijev aparat, relativno veliki, ali mali broj mitohondrija), kao i lizozome sa njihovim karakterističnim hidrolitičkim enzimima. Kompleks enzima koje luče izvan ćelije razgrađuje cementnu supstancu kolagenih vlakana, nakon čega dolazi do fagocitoze i intracelularne probave kolagena.

Sljedeće ćelije fibroznog vezivnog tkiva više ne pripadaju diferencijaciji fibroblasta.

Fibroblasti kože čine osnovu vezivnog tkiva. Oni su proizvođači hijaluronske kiseline, kolagenih vlakana i elastina. Promjene vezane za dob usporavaju funkcioniranje fibroblasta, uzrokujući da koža postaje tanka i mlohava. Zahvaljujući celularnoj tehnologija ubrizgavanja tijelo samostalno pokreće funkciju pomlađivanja strukture dermisa.

Suština fibroblasta

Fibroblasti kože- to su ćelije sloja vezivnog tkiva dermisa, čiji su prethodnici bile matične ćelije. Dolaze u dva oblika:

1. Aktivne - velike ćelije, opremljene ravnim jezgrom ovalnog oblika, velikim brojem ribozoma i procesa. Odlikuje ih intenzivna dioba, proizvodnja kolagena i drugih komponenti matriksa.
2. Neaktivni (fibrociti) - ćelije su nešto manje i imaju oblik vretena. Nastaju od fibroblasta i ne mogu se dijeliti. Učestvuje u sintezi vlakana i regeneraciji rana.

Kako tijelo stari, broj fibroblasta se smanjuje i njihova aktivnost se smanjuje. To dovodi do pogoršanja sinteze međustaničnih tvari. Ovaj proces se reflektuje na kožu u vidu stanjivanja, suvoće i opuštenosti. Rasteže se i formiraju se bore.

Funkcije

Jedna od glavnih funkcija fibroblasta je proizvodnja i regeneracija međustanične tvari. Formirajući faktore rasta, komponente ekstracelularnog matriksa, enzime, doprinose uništavanju i novoj sintezi kolagena i hijaluronske kiseline. Zahvaljujući non-stop procesu, međućelijska tvar se obnavlja. Osim toga, proizvode faktore rasta stanica:

• Glavni je da se stimulira rast svih dermalnih stanica, proizvodi fibronektin za zaštitne reakcije;
• Transformacija - sintetišu se kolagena i elastinska vlakna, formiraju se krvni sudovi, ćelije imunog sistema se usmeravaju na strane agense, bakterije;
• Epidermalno - aktiviraju se proliferacija tkiva, rast ćelija i transport keratinocita;
• Rast keratinocita je epitelizacija, oštećenja se obnavljaju.

Faktori rasta fibroblasta predstavljeni su multifunkcionalnim proteinima koji su mitogeni i također obavljaju endokrine, regulatorne, strukturnu funkciju. Zahvaljujući fibroblastima nastaju proteini važni za kožu: proteoglikani, tinascin, nidogen i laminin.

Suština tehnike

SPRS terapija je tehnika injekcionog podmlađivanja kože pomoću fibroblasta, eliminirajući sam uzrok starenja kože. Patent za tehnologiju intradermalne transplantacije autofibroblasta pripada američkoj kompaniji FibrocellScience. Kroz ćelijsku tehnologiju, postalo je moguće uzgajati fibroblaste iz čestice ljudske kože (biopsija). Vlastiti biomaterijal eliminira problem kompatibilnosti tkiva i rizik od infekcije. Autologne ćelije se pozitivno percipiraju imunološki sistem i sposobni su da funkcionišu u potpunosti.

Uzorak se može uzeti u bilo kojoj dobi, ali je poželjno da se to uradi kada ste mladi. Preporučena starost je od 20 do 30 godina. Možete sačuvati komad kože tokom bilo koje operacije i staviti ćelije izolirane iz njega u kriogeno skladište na dugi niz godina. Temperatura od -196 stepeni omogućava vam da ih čuvate tokom celog života, koristeći ih po potrebi. To će vam omogućiti da u svakom trenutku izvršite efikasne kozmetičke procedure.

Vlastiti fibroblasti, zajedno sa matičnim ćelijama, imaju svojstvo održavanja potencijala tokom starenja. Ispod lokalna anestezija Pacijentu se uzima mali uzorak kože iza uha, pupka ili podlaktice. Ova područja su najmanje izložena ultraljubičastom zračenju. Njegova veličina je oko 4 mm. Iz njega izolirani fibroblasti stavljaju se u posebne bočice.

Kada se uzgajaju u podlozi sa fetalnim serumom, kod mladih ćelija se stimuliše sposobnost proliferacije, a stare se ispiru. Dolazi do “podmlađivanja” kulture. Nakon mjesec dana, broj ćelija se povećava nekoliko hiljada puta. Nakon reaktivacije, ćelijska kultura se transplantira u pacijenta i aktivno ispunjava dermis. Nakon mjesec i po dana, umnoženi fibroblasti se ubrizgavaju u pacijentovu kožu lica, uključujući područje oko očiju, kao i u vrat, dekolte i ruke.

Procedura

Kurs se sastoji od 3-5 sesija, intervali između kojih se kreću od 3 do 6 sedmica. Faze postupka:

• pregled pacijenta radi utvrđivanja postojećih kontraindikacija;
• uzimanje materijala;
• kultivacija fibroblasta;
• ubrizgavanje ćelijskog materijala u kožu pomoću dvije metode: tunel - u duboke kožne nabore, papularna mezoterapija;
• štiti kožu od ultraljubičastog zračenja nanošenjem kreme.

Pacijenti napominju da je postupak bolan, pa se koristi anestetička krema Emla. Količina lijeka koji se koristi je do 3 ml po sesiji. Period oporavka traje 2-3 dana. Nakon zahvata zabranjeno je nanošenje kozmetike. Dvije sedmice morate se suzdržati od posjeta sauni ili kupatilu. Kožu morate zaštititi od sunca tako što ćete je mazati kremom sa visokim stepenom zaštite. Preporučuje se ponavljanje postupka jednom godišnje. Rezultat je poboljšanje stanja kože lica tokom nekoliko mjeseci.

Efikasnost i prednosti metode

Pomlađivanje fibroblastima daje prve rezultate nakon 1,5 ili 2 mjeseca. Pun efekat Efekat postupka se javlja nakon šest meseci i traje 2-3 godine. Počinje pojačana proizvodnja faktora rasta i ekstracelularnog matriksa. Fibroblasti prolaze kroz prirodne faze ciklusa: aktiviraju se, sintetiziraju elastin, kolagen i druge tvari, zatim počinje faza razgradnje, zamjenjujući ih novim fibroblastima.

Njihova upotreba je rasprostranjena u medicini - protiv opekotina, za regeneraciju tkiva tokom trofični ulkusi, rane Njihov značaj u kozmetologiji je veliki. Mladost kože formira se brojem fibroblasta. Postavljeni u dermis, izrasli fibroblasti se ugrađuju u tkiva, započinjući proizvodnju kolagena i elastina. Kao rezultat, koža postaje elastična, dobiva ujednačenu boju, a fine bore nestaju.

Ali ne treba očekivati ​​efekat zatezanja od postupka. Ova tehnika ima za cilj poboljšanje kvalitetnih karakteristika kože. Glavne prednosti SPRS terapije:

• lijek radi s genima, što eliminira poremećaj primarne strukture kože;
• aktiviraju se prirodni procesi podmlađivanja;
• sigurnost, bez rizika od odbijanja, alergijska reakcija;
• dugoročno očuvanje rezultata.

U roku od 6 meseci, bore oko očiju su izglađene za 90%. Dekolte i vrat izgledaju mlađe za 95%, a obrazi za 87%. Nabori oko usta su smanjeni za 55%.

Kontraindikacije

Unatoč potpunoj sigurnosti, postupak ima neke kontraindikacije:

• trudnoća, period laktacije;
• oštećeno zgrušavanje krvi;
• maligne neoplazme;
• autoimune bolesti;
• predispozicija za stvaranje ožiljaka;
• ARVI;
• upala na koži.

Tokom dana nakon tretmana može se uočiti crvenilo na koži i mikrohematomi. Sljedećeg dana simptomi nestaju.

Tehnologija transplantacije autofibroblasta ima službenu dozvolu Roszdravnadzora. Njegova sigurnost je potvrđena laboratorijskim praćenjem vitalnosti ćelija.

Vlasnici patenta RU 2536992:

Pronalazak se odnosi na oblast biotehnologije, konkretno na ćelijske tehnologije, i može se koristiti u medicini. Metoda uključuje skaliranje diploidnih ćelija linije M-20 iz kriobanke IPVE nazvane po. M.P. Čumakova Ruske akademije medicinskih nauka iz ampule banke sjemenskih ćelija prolaza 7 kako bi se dobila banka radnih ćelija prolaza 16. U ovom slučaju, ćelije od 20-33 pasaža, pogodne za upotrebu u terapijske i/ili dijagnostičke svrhe, dobijaju se kultivisanjem u hranljivoj podlozi koja sadrži 10% fibrinolitički aktivne plazme (FAP) osobe koja sadrži trombocitni faktor rasta PDGF u koncentracija od 155 do 342 pg/ml. Pronalazak omogućava povećanje proliferativne aktivnosti diploidnih ćelija humanih fibroblasta. 1 plata datoteke, 2 tabele.

Pronalazak se odnosi na biotehnologiju, imunologiju, medicinu, posebno na metodu za povećanje proliferativnih svojstava diploidnih ćelija humanih fibroblasta za upotrebu takvih ćelija u terapeutske i dijagnostičke svrhe, uključujući i za određivanje antivirusne aktivnosti humanih interferona, za zamjenu ćelija terapija.

Ljudske diploidne ćelijske linije (HDCL) imaju neosporne prednosti u odnosu na sve poznate vrste ćelijskih kultura u svojoj sposobnosti da održe stabilne biološke i genetske karakteristike tokom pasaža. Certifikacija LDCC-a namijenjenih za proizvodnju vakcina vrši se u skladu sa jedinstvenim zahtjevima razvijenim od strane Svjetske zdravstvene organizacije. Ove preporuke su uzete kao osnova za nacionalne kriterijume za sertifikaciju vakcine LDKCH, koje je razvio Državni istraživački institut za kliničke infektivne bolesti po imenu. L.A. Tarasevich i Ministarstvo zdravlja SSSR-a [ Smjernice“Certifikacija kontinuiranih ćelijskih linija – supstrata za proizvodnju i kontrolu medicinskih imunobiološki preparati» RD-42-28-10-89. Ministarstvo zdravlja SSSR-a. M., 1989. - S. 16]. Certificirana linija ljudskih diploidnih stanica ima ograničen životni vijek i ima stabilne biološke, kulturne i genetske karakteristike, ne sadrži zagađivače (bakterije, gljivice, mikoplazme, viruse) i ne uzrokuje nastanak tumora kod imunosupresivnih životinja. Diploidna ćelijska linija mora imati certificiranu banku sjemenskih ćelija na ranim nivoima prolaska (do pasaža 10), koja se sastoji od najmanje 200 kriopijala. Prelaskom sjemenskih ćelija iz jedne ili više kriopijala na 16. nivo prolaza, dobija se radna banka ćelija iz koje se mogu dobiti potrebne proizvođačke kulture za proizvodnju ili za istraživački rad. U Rusiji i inostranstvu postoji samo nekoliko linija ljudskih diploidnih ćelija (Wi-38, MRC-5, M-22 itd.) certificiranih prema navedenim zahtjevima. Certificirani LDCV se koriste u proizvodnji vakcina protiv dječje paralize, malih boginja, rubeole, bjesnila, respiratornih i citomegalovirusne infekcije, kao i interferon [T.K. Borisova, L.L. Mironova, O.I. Konyushko, V.D. Popova, V.P. Gračev, N.R. Šuhmina, V.V. Zverev. Domaći sojevi ljudskih diploidnih ćelija su supstrat za proizvodnju vakcina. Medicinska virologija. Materijali naučno-praktična konferencija « Stvarni problemi medicinske virologije, posvećen 100. godišnjici M.P. Čumakov." M. 2009. Sveska XXVI. str. 305-307; LL. Mironova, V.D. Popova, O.I. Konyushko. Iskustvo u kreiranju banke originalnih linija transplantabilnih ćelija i njihovoj upotrebi u virološkoj praksi. Biotehnologija. 2000, str. 41-47]. LDCN se široko koristi in vitro za dijagnozu virusnih infekcija i analizu toksičnosti razne droge i proizvodi za nadomjesnu terapiju [RF Patent br. 2373944, 23.06.2008. Način liječenja opekotina. A.S. Ermolov, S.V. Smirnov, V.B. Khvatov, L.L. Mironov; S.V. Smirnov, V.B. Hvatov. Inovativne tehnologije lokalno liječenje opekotina u Istraživačkom institutu za urgentnu medicinu im. N.V. Sklifosovsky. U knjizi: Nova ekonomija. Inovativni portret Rusije. M., Centar za strateško partnerstvo, 2009. str. 388-390].

U IPVE im. M.P. Čumakov RAMS 80-ih godina 20. vijeka ustanovljeno je nekoliko linija diploidnih ćelija iz kože i mišića ljudskih embriona starih 8-10 sedmica. Ovaj rad je posvećen modificiranju proizvodnje ljudskih diploidnih stanica u dijagnostičke svrhe i terapije zamjene stanica, odnosno proizvodnji diploidnih humanih fibroblastnih stanica sa povećanim proliferativnim svojstvima.

Prototip. RF patent br. 1440029 od 22. marta 1993. [Mironova L.L., Preobrazhenskaya N.K., Solovyova M.N., Orlova T.G. Stobetsky V.I., Kryuchkova G.P., Karmysheva V.Ya., Kudinova S.I., Popova V.D., Alpatova G.A. IPVE i NIIEiM im. N.F. Gamaleya. Soj diploidnih ljudskih embrionalnih ćelija kože i mišića koji se koristi kao test sistem za određivanje antivirusne aktivnosti humanih interferona i razmnožavanja virusa].

Ovaj LDCC soj je označen kao M-21, međutim kultura fibroblasta M-21 nije imala dovoljnu proliferativnu aktivnost, što je smanjilo vrijeme formiranja monosloja i povećalo potrošnju ćelija i materijala, što je u konačnici dovelo do potpunog iscrpljivanja njenih rezervi. Kao rezultat toga, javila se potreba za novom linijom ćelija pogodnom za određivanje antivirusne aktivnosti humanih interferona i u druge medicinske i biološke svrhe, isplativijom, karakteriziranom visokom proliferativnom aktivnošću, te s bankama sjemena i radnih stanica. Ova linija je označena kao M-20. Na nivou prolaza 7 pripremljena je banka sjemenskih ćelija. 2012. godine od ampule banke prolaza 7 napravljena je banka radnih ćelija na nivou 16. prolaza. Banke sjemena i radnih ćelija na nivoima 7 i 16 prolaza pohranjene su u Institutu za plovila i eksperimentalnu fiziku po imenu. M.P. Čumakov RAMS i dozvoli nam da obezbedimo oboje proizvodni procesi, i naučna istraživanja.

Razlika između ovog pronalaska i najbližeg analoga (prototipa) je povećanje proliferativne aktivnosti M-20 ćelija kada se koristi 10% fibrinolitički aktivne plazme (FAP).

Dakle, predmet pronalaska je metoda za povećanje proliferativnih svojstava diploidnih ćelija humanih fibroblasta u medicinske i biološke svrhe kultivisanjem ćelija iz kriobanke IPVE-a nazvanog po. M.P. Čumakova Ruske akademije medicinskih nauka, u kojoj se koriste diploidne ćelije okarakterisane linije M-20, koje se skaliraju iz ampule banke sjemenskih ćelija prolaza 7 i dobija se banka radnih ćelija prolaza 16, sa ćelijama pasaža 20-33 pogodnih za upotrebu u terapijske i/ili dijagnostičke svrhe, dobijeni uzgojem u hranjivom mediju koji sadrži 10% fibrinolitički aktivne plazme (FAP) osobe. Prilikom kultivacije ćelija, poželjno je da se koristi hranljiva podloga DMEM sa 10% FAP.

Ljudske diploidne ćelije okarakterisane linije M-20, dobijene gornjom metodom, imaju visoku proliferativnu aktivnost i pogodne su za upotrebu u terapijske i/ili dijagnostičke svrhe.

Šema implementacije metode:

1. Koristi se jedna kriopijala iz banke sjemenskih ćelija 7. odlomka IPVE-a po imenu. M.P. Chumakova RAMS

2. Priprema banke radnih ćelija na nivou prolaza 16 IPVE po imenu. M.P. Chumakova RAMS

3. Izvlačenje fibroblasta linije M-20 iz banke radnih ćelija prolaza 16 (IPVE nazvan po M.P. Chumakovu, Ruska akademija medicinskih nauka).

4. Dobivanje jednoslojne kulture fibroblasta linije M-20, pasus 17.

5. Obnavljanje bioloških svojstava fibroblasta linije M-20 trostrukim pasažom (do 20. pauze uključujući) radi popravljanja mogućih oštećenja DNK tokom procesa krioprezervacije.

6. Dobivanje ćelijskih kultura u dijagnostičke svrhe i terapiju zamjene ćelija replikacijom fibroblasta linije M-20 iz pasaža 20 do 33 koristeći hranljivu podlogu koja sadrži 10% fibrinolitički aktivne plazme (sa sadržajem PDGF od 155 do 342 pg/ml).

Predložena metoda osigurava proizvodnju ćelija sa visokom proliferativnom aktivnošću i pogodnih za upotrebu u dijagnostici i/ili medicinske svrhe.

Ovaj tehnički rezultat postiže se kultivacijom humanih fibroblasta linije M-20 u hranljivoj podlozi sa dodatkom 10% fibrinolitički aktivne plazme (FAP), koja deluje stimulativno na rast i pojačava proliferativnu aktivnost ćelijske kulture.

FAP je klinički korišćen transfuzijski medij, koji se dobija iz krvi ljudi koji su iznenada umrli od infarkta miokarda, akutnog zatajenja srca, cerebralnog krvarenja, u prvih 6 sati nakon smrti [Naredba Ministarstva zdravlja SSSR-a br. 482 od juna 14, 1972 „O poboljšanju snabdijevanja terapijskih i profilaktičkih ustanova i klinika kadavernim tkivom, koštana srž i krv"]. Postmortemna krv je potpuni medij za transfuziju, koji ima niz bioloških svojstava - prvenstveno povećan fibrinolitički potencijal. S tim u vezi, također se predlaže nazvati postmortem fibrinolizom krvi. Glavne indikacije za postmortem transfuziju krvi: akutni gubitak krvi, šok, anemija različitog porijekla, opekotina, metabolička nadoknada tijekom egzogeno trovanje, popunjavanje AIK-a kada se koristi ekstrakorporalna cirkulacija u hirurgiji [Npr. Tsurinova. Transfuzija krvi fibrinolize. M., 1960, 159 str.; S.V. Ryzhkov. Priprema i mogućnosti upotrebe fibrinolizne krvi u zavisnosti od vremena uzimanja i uzroka smrti. Autorski sažetak. doc. diss. L., 1968, 21 str.; G.A. Pafomov. Biološke karakteristike krvi iznenada preminulog i njena upotreba u hirurškoj praksi. Diss. doc. med. Sci. M., 1971, 355 str.; K.S. Simonyan, K.P. Gutiontova, E.G. Tsurinova. Posmrtna krv u aspektu transfuziologije. M., Medicina, 1975, 271 str.]. Trenutno se koriste posmrtni sastojci krvi: fibrinolitički aktivna plazma, masa crvenih krvnih zrnaca, masa leukocita, masa trombocita [G.Ya. Levin. Hemokoagulacijska svojstva i kliničku primjenu plazma i trombociti leševe krvi. Autorski sažetak. doc. diss. M., 1978, 31 str.; V.B. Hvatov. Preparati fibrinolitičkog i antiproteneaznog djelovanja iz krvne plazme iznenada preminulih osoba. Diss. doc. Med Sciences, 1984, 417 str.; V.B. Khvatov plazmakinaza - novi trombolitički preparat iz postmortem plazme U: Tromboza i tromboliza edd. E.I. Chazov, V.V. Smirnov). Consultants Bureau, N.Y., L, 1986, str. 283-310; V.B. Hvatov. Medicinski i biološki aspekti upotrebe posmrtne krvi. Bilten Akademije medicinskih nauka SSSR, 1991, 9. str. 18-24; V.B. Hvatov. Krv leša - istorijat i trenutno stanje problema. Problem hematol. i prelivanje. krv, 1997, 1. S. 51-59]. Komponente mrtvačke krvi dobijene od davalaca organa su takođe dobile kliničku upotrebu [umrla osoba sa kucajućim srcem prema „Uputstvu za utvrđivanje smrti osobe na osnovu dijagnoze moždane smrti“ od 20. decembra 2001. godine br. 460, Registarski broj Ministarstva pravde broj 3170 od 17. januara 2002. godine] . Transplantacija organa, tkiva i ćelija vrši se u skladu sa Zakonom Ruske Federacije „O transplantaciji ljudskih organa i (ili) tkiva“ - sa izmjenama i dopunama. Savezni zakoni od 20.06.2000.godine broj 91-F3 od 16.10.2006.godine broj 160-F3; V.B. Khvatov, S.V. Zhuravel, V.A. Gulyaev, E.N. Kobzeva, M.S. Makarov. Biološka korisnost i funkcionalna aktivnost ćelijskih komponenti krvi donatora organa. Transplantologija, 2011, 4, str. 13-19; Khubutia M.Sh., Khvatov V.B., Gulyaev V.A. itd. Metoda za kompenzaciju globularnog volumena krvi i imunomodulatornih efekata tokom transplantacije. RF patent za pronalazak br. 2452519, publ. 06/10/2012, bilten. br. 16].

Fibrinolitički aktivna plazma se dobija iz krvi iznenada preminulih osoba, pripremljena sa konzervansom Glyugitsir (omjer krv: konzervans 4:1) kako bi se očuvala fibrinolitički aktivna svojstva. Odvajanje plazme od ćelijskih elemenata krvi vrši se u sterilnoj kutiji uz poštivanje svih pravila asepse i antiseptike i slično je dobijanju donorske plazme iz konzervirane krvi donora. Klinička upotreba FAP-a u hirurgiji i traumatologiji otkrila je efekat stimulacije zarastanja rana [I.Yu. Klyukvin, M.V. Zvezdina, V.B. Khvatov, F.A. Burdyga. Metoda za liječenje rana od ugriza. Patent za pronalazak Ruske Federacije br. 2372927, objavljen, 20. novembar 2009, bilten. br. 32]. Ovaj efekat smo povezali sa prisustvom faktora koji stimulišu rast u FAP-u, koje luče aktivirane trombocite. Naknadno smo identifikovali trombocitni faktor rasta (PDGF) u FAP-u. Efekat stimulacije rasta FAP-a u kulturi ljudskih ćelija je pokazano u posebnim studijama. Proučeni uzorci FAP-a u koncentraciji od 10% dodani su u ćelijsku suspenziju humanih fibroblasta linije M-20, koja je sadržavala poznati broj ćelija, a 10 ml dobijene smjese stavljeno je u tikvice za kulturu površine rasta od 25 cm 2. Ćelije su uzgajane 3-4 dana u atmosferi od 5% CO2 i na 37°C. Nakon trostrukog pasiranja, izrasle ćelije su prebrojane u Fuchs-Rosenthal komori i određen je odnos broja izraslih ćelija i broja zasađenih ćelija - indeks proliferacije (u tabeli 1).

Iz sprovedenih eksperimenata proizilazi da svojstva rasta FAP-a obezbeđuju visoku proliferativnu aktivnost i da se ne razlikuju od fetalnog goveđeg seruma. Štaviše, FAP sadrži faktore rasta ljudskih trombocita, tj. alogenog tipa, za razliku od fetalnog goveđeg seruma - ksenogenog tipa. Ova činjenica je odlučujuća za transplantaciju ćelija tokom supstitucione terapije. Imajte na umu da je efekat stimulacije rasta na ćelijsku kulturu M-20 posledica, posebno, prisustva PDGF-a u FAP-u u koncentraciji od 155 do 342 pg/ml. Ovi podaci su dobijeni korištenjem Qantikine, Human PDGF-BB Immunoassay kita iz R&D Systems i Multiskan Ascent sistema iz Thermo. Koncentracija PDGF-BB u FAP je slična njegovom sadržaju u krvnom serumu. Tako se u serumu davalaca krvi i pregledanih pacijenata sadržaj PDGF kretao od 110 do 880 pg/l, u prosjeku 244 pg/ml, dok je u plazmi sadržaj PDGF varirao od 0-2 pg/ml.

Za bolje razumijevanje predloženog tehničkog rješenja „proizvodnja ljudskih diploidnih ćelija linije M-20 u medicinske i biološke svrhe“ navodimo sljedeći primjer.

Ćelije linije M-20, prolaz 16, izvučene su iz radne banke. Da bi se to postiglo, krioovijal sa ćelijama se uklanja iz tekućeg dušika i stavlja unutra vodeno kupatilo na temperaturi od 38°C i nakon odmrzavanja sadržaj se prenosi u posudu za kulturu sa DMEM hranljivim medijumom koji sadrži 10% FAP (sa sadržajem PDGF od 155 do 342 pg/ml), dodaje se antibiotik gentamicin brzinom od 1 ml 4% rastvora na 1 litar hranljive podloge. Da bi se formirao monosloj, ćelije se uzgajaju 4-5 dana na 37°C i 5% CO 2 u atmosferi. Nakon formiranja monosloja ćelija, izvode se 3 uzastopna prolaza neophodna za popravku DNK nakon krioprezervacije. Zatim se ćelije repliciraju iz pasusa 20 u pasus 33. Ćelije iz ovih prolaza namijenjene su za biomedicinske svrhe. Rezultirajuća ćelijska linija je detaljno okarakterisana u skladu sa zahtjevima SZO i GNIISiK MIBP po imenu. L.A. Tarasevicha, uključujući HLA tipizaciju M-20 ćelijske linije, kao i proučavanje njenog spektra citokina. Dajemo uporedni opis svojstava linije M-20 i linije M-22 (Tablica 2). Linija M 22 (humani diploidni fibroblasti) je licencirana kao supstrat za vakcinu i odobrena za proizvodnju bilo koje vrste medicinskih virusnih vakcina, a koristi se i za liječenje opekotina II-IIIA stepena [RF Patent za pronalazak br. 2373944 , 23.06.2008. Metoda za liječenje opekotine. A.S. Ermolov, S.V. Smirnov, V.B. Khvatov, L.L. Mironova, O.I. Klnyushko, E.A. Žirkova, B.C. Bocharova].

Linija M-20 je instalirana na IPVE po imenu. M.P. Chumakov RAMS 1986. godine iz kože i mišića 10-tjednog ljudskog embrija dobivenog kao rezultat pobačaja od zdrave žene. Nije bilo raka, polno prenosivih bolesti, hepatitisa ili tuberkuloze; genetski i kongenitalne bolesti nije primećeno u porodici. Podloga za ćelijsku kulturu DMEM dopunjena sa 10% FAP. Odnos sjetve je 1:3-1:4 dva puta sedmično sa dozom sjemenja ćelija od 7×10 4 ćelija/ml. Stanični monosloj se sastoji od orijentiranih homogenih ćelija vretenastog oblika sa ovalnim jezgrima koje sadrže 1-3 jezgre i male nakupine hromatina. IN životni ciklus Linija se može podijeliti u 3 faze razvoja: formiranje 1-3 prolaza, aktivni rast 4-40 i starenje 41-52, zatim dolazi do smrti. Ćelije linije imaju ljudski kariotip 2m=46, XY. Linija se odlikuje visokom genetskom stabilnošću: 93,3-96,9% ćelija ima diploidni set hromozoma, ćelije sa poliploidnim setom nisu više od 1,6%. Nisu uočene praznine, lomovi ili prstenasti hromozomi. Broj traka izoenzima G-6PDE i LDE i njihova elektroforetska pokretljivost poklapaju se s onima za ljudske eritrocite. G-6FDG sporog tipa. Prilikom sjetve na selektivne hranljive podloge nije otkrivena kontaminacija bakterijama, gljivicama ili mikoplazmama. Osim toga, nije otkrivena kontaminacija mikoplazmom kod bojenja DNK fluorohromima Hochst 33258 i olivomicinom, kao i PCR metoda. Kontaminacija virusima u eksperimentima na odojcima i odraslim bijelim miševima, zamorci, zečevima i pilećim embrionima, kao i na homolognim i heterolognim kulturama ćelija. Kontrola tumorigenosti. Kada su ćelije iz linije davane imunosupresivnim životinjama, tumori se nisu formirali. Nije otkrivena reverzna transkriptaza. HLA markeri: Klasa I: A*(02.03)/B*(07.40)/CW*(03.07). Klasa II: DRB1*(15.16)/DQB1*(05.06). Ćelije linije M-20 na 20. nivou prolaza proizvode mRNA za α-interferon (IFNα) i interleukine: IL1β, 2, 4, 6, 8, 10, 18.

Dakle, predložena linija je diploidna – ima ograničen životni vek, zadržava kariotip normalnih ljudskih ćelija tokom života, nema kontaminanata i nema onkogeni potencijal. Okarakterisan je za bezbednost u skladu sa preporukama SZO i zahtevima GNIISiK MIBP po imenu. L.A. Tarasevich. U IPVE im. M.P. Čumakov RAMS postoje banke sjemena i radnih ćelija koje mogu zadovoljiti sve potrebe proizvodnje i naučno-istraživačkog rada. Ćelije M-20 linije su osjetljive na infekcije raznim virusima. Dodatno je proučavan citokinski spektar M-20 linije. Poznavanje citokinskog spektra stanica omogućava precizniju procjenu rezultata pri utvrđivanju interferonskog statusa pacijenata i davanje informiranih preporuka o primjeni terapijskih i profilaktičkih lijekova.

Ljudske diploidne ćelije - fibroblasti soja M-20 sa povećanom proliferativnom aktivnošću, dobijeni predloženom metodom, mogu se koristiti u dijagnostičke svrhe, posebno za određivanje aktivnosti interferona (IFN) u ljudskom krvnom serumu, kao i u medicinske svrhe , na primjer, za lokalno liječenje rana od proleža, rana od ugriza, dugotrajnih rana koje ne zacjeljuju i opekotina.

1. Metoda za povećanje proliferativnih svojstava diploidnih ćelija humanih fibroblasta, naznačena time što su diploidne ćelije okarakterisane M-20 linije iz kriobanke Instituta za plovila im. M.P. Čumakov RAMS se skalira iz ampule banke sjemenskih ćelija prolaza 7 i dobije se banka radnih ćelija prolaza 16, dok se ćelije prolaza 20-33, pogodne za upotrebu u terapijske i/ili dijagnostičke svrhe, dobijaju pomoću kultivacija u hranjivom mediju koji sadrži 10% fibrinolitički aktivne plazme (FAP) koji sadrži faktor rasta PDGF koji potiče od trombocita u koncentraciji od 155 do 342 pg/ml.

2. Metoda prema patentnom zahtjevu 1, naznačena time što se hranljivi medij DMEM sa 10% FAP koristi za kultivaciju ćelija.

Slični patenti:

Pronalazak se odnosi na farmaceutsku industriju, odnosno na upotrebu perfuznih ćelija ljudske placente u proizvodnji lijek za suzbijanje proliferacije tumorskih ćelija kod pojedinca.

Grupa pronalazaka se odnosi na oblast biotehnologije i onkologije. Metoda uključuje: a) izolaciju postnatalnih tkivno specifičnih multipotentnih autolognih matičnih ćelija (ASC) i/ili autolognih progenitornih ćelija (APC) za njihove naknadne proteomske i potpune transkriptomske analize; b) izolacija ASC i/ili APC i/ili multipotentnih alogenih HLA-haploidentičnih matičnih ćelija (HLA-CK) za naknadno remodeliranje njihovog proteomskog profila; c) izolacija CSC-a iz tumora pacijenta; d) proteomska analiza ASC i/ili APC i RSC; e) potpuna analiza transkriptoma ASC i/ili APC i CSC; f) određivanje skupa proteina, od kojih je svaki sadržan u proteomskim profilima i ASC i/ili APC, i CSC; g) analizu prethodno definisanog skupa proteina za identifikaciju intracelularnih signalnih puteva u CSC-ima koji nisu prošli neoplastičnu transformaciju kao rezultat karcinogeneze, i za određivanje ciljnih proteina koji su membranski akceptori identifikovanih signalnih puteva; h) analiza potpunog profila ekspresije gena transkriptoma u CSC i potvrda integriteta i funkcionalnog značaja strukturnih komponenti identifikovanih signalnih puteva u CSC; i) identifikacija ligandnih proteina sposobnih za aktivaciju ciljnih proteina; do) komparativna analiza potpuni transkriptomski profili ASA i/ili APC sa transkriptomskim profilima sadržanim u poznatim bazama podataka transkriptoma, za identifikaciju perturbogena sposobnih da modifikuju profil ekspresije gena ASA i/ili APC i/ili HLA-CK, izolovanih da remodeliraju njihov proteomski profil, u smjer sekrecije ranije određenih proteina liganda; k) remodeliranje proteomskog profila ASA i/ili APC i/ili HLA-CK pomoću perturbogena kako bi se dobio modificirani transkriptomski profil različitih ćelijskih sistema, sposoban da izvrši regulatorni efekat na RSC pacijenta.

Pronalazak se odnosi na oblast biotehnologije, konkretno na ćelijske tehnologije, i može se koristiti u medicini. Populacija mononuklearnih ćelija ili neembrionalnih matičnih ćelija obogaćenih ćelijama monocitne loze koje sadrže promonocite koristi se za lečenje ishemije kod subjekta.

Pronalazak se odnosi na oblast biotehnologije i ćelijske tehnologije. Predmetni izum ima za cilj stvaranje pluripotentnih, multipotentnih i/ili samoobnavljajućih ćelija koje su sposobne da počnu da se diferenciraju u kulturi u Razne vrstećelije i sposobne su za dalju diferencijaciju in vivo.

Pronalazak se odnosi na oblast medicine i može se koristiti za selekciju spermatozoida u metodama potpomognutih reproduktivnih tehnologija. Metoda uključuje stavljanje kapi sperme i kapi medija za kulturu u Petrijevu zdjelu na udaljenosti ne većoj od 5 cm jedna od druge, spajanje kapi sa trakom viskoznog medija s parametrima viskoznosti 1-4 Pa s, zatim inkubiranje posude sa sadržajem 30-90 minuta u uslovima simulacije prirodno okruženje cervikalni kanalženski reproduktivni trakt.

Pronalazak se odnosi na oblast medicine, biotehnologije i ćelijske tehnologije. Metoda diferenciranja pluripotentnih matičnih stanica koje predstavljaju ljudsku ćelijsku liniju u stanice koje eksprimiraju markere karakteristične za formiranu lozu endoderma uključuje tretiranje pluripotentnih matičnih stanica podlogom koji je karakteriziran time da ne sadrži aktivin A i sadrži GDF-8 u određenom vremenskom periodu. , dovoljno da se pluripotentne matične ćelije diferenciraju u ćelije koje eksprimiraju markere karakteristične za lozu formiranog endoderma.

Ovaj pronalazak se odnosi na oblast imunologije. Predložene su varijante oligopeptida izolovanog iz proteina RAB6KIFL (KIFL20A) koje su sposobne da indukuju citotoksične T limfocite (CTL) kao deo kompleksa sa molekulom HLA-A*0201.

Pronalazak se odnosi na oblast prehrambene industrije i predstavlja metodu pivarstva koja uključuje dodavanje termostabilne proteaze u sladovinu nakon filtriranja sladovine, ali pre ključanja sladovine, pri čemu toplotna stabilnost proteaze znači da je aktivnost ove proteaze najmanje 70% njegove aktivnosti, mjereno prema na sledeću metodu: proteaza je razrijeđena do koncentracije od 1 mg/ml u puferu za ispitivanje koji sadrži 100 mmol jantarne kiseline, 100 mmol HEPES, 100 mmol CHES, 100 mmol CABS, 1 mmol CaCl2, 150 mmol KCl, 0,01% tritona i X c pH podešen na 5,5 sa NaOH; nakon čega se proteaza preinkubira i) u ledu i ii) 10 min na 70°C; supstrat na koji je proteaza aktivna se suspenduje u 0,01% Triton X-100: za početak reakcije, 20 μl proteaze se dodaje u epruvetu i inkubira u Eppendorf termomikseru na 70°C, 1400 rpm tokom 15 minuta; reakcija se zaustavlja stavljanjem epruveta u led; uzorci se centrifugiraju na hladno na 14000 g tokom 3 minute i izmjeri se optička gustina OD590 supernatanta; dobijena OD590 vrijednost uzoraka bez proteaze oduzima se od dobijene vrijednosti OD590 uzoraka tretiranih proteazom; odrediti termostabilnost proteaze izračunavanjem procenta aktivnosti proteaze u uzorcima prethodno inkubiranim na 70°C u odnosu na aktivnost proteaze u uzorcima inkubiranim na ledu kao 100% aktivnosti.

Pronalazak se odnosi na oblast ćelijske biologije, ćelijske transplantologije i tkivnog inženjerstva. Metoda za povećanje angiogene aktivnosti stromalnih ćelija masnog tkiva u tkivima i organima uključuje izolaciju stromalnih ćelija masnog tkiva, kultivisanje izolovanih ćelija u prisustvu faktora tumorske nekroze-alfa u količinama od 5 ili 100 ng/ml tokom 24-72 sata. , nakon čega slijedi transplantacija u tkiva ili organe .

Pronalazak se odnosi na oblast biotehnologije, ćelijske tehnologije i hirurgije tkiva. Metoda za dobivanje kulture glatkih mišićnih stanica sastoji se u izrezivanju fragmenta krvne žile, mljevenju na komade do veličine ne veće od 2 mm u bilo kojoj dimenziji i inkubiranju dijelova u tikvici za kulturu s prethodno nanesenim ogrebotinama. na dno tikvice, koja sadrži medij za kulturu koji sadrži 10% embrionalnog fetalnog seruma, najmanje 10 dana, ali ne više od 24 dana, na temperaturi od 37°C u CO2 inkubatoru, naznačen time što navedeni fragment krvni sud je fragment uzlaznog ekstremiteta torakalna aorta, ekscidirani tokom postupka premosivanja koronarne arterije, a navedeni komadići fragmenta ascendentne torakalne aorte drže se u mediju za kulturu koji sadrži 0,1% kolagenaze najmanje 30 minuta, ali ne duže od 60 minuta, na temperaturi od 37°C. °C prije inkubacije, a zatim isprana podlogom za ćelijsku kulturu.

Metoda za dobivanje mezenhimalnih matičnih stanica iz ljudskih pluripotentnih matičnih stanica i mezenhimalnih matičnih stanica dobivenih ovom metodom // 2528250

Pronalazak se odnosi na oblast genetskog inženjeringa, tehnologije tkiva i medicine. Metoda za dobivanje mezenhimalnih matičnih stanica iz pluripotentnih ljudskih matičnih stanica uključuje dobivanje embrioidnih tijela iz ljudskih pluripotentnih matičnih stanica, pričvršćivanje embrioidnih tijela na Petrijevu zdjelu kako bi se izazvala spontana diferencijacija embrioidnih tijela u mezenhimalne matične stanice, kultiviranje uz proliferaciju mezenhimalnih matičnih stanica održavanje identiteta mezenhimskih matičnih ćelija, a gdje se indukcija spontane faze diferencijacije javlja formiranjem autolognih citokinskih petlji bez dodavanja vanjskog citokina, također i odgovarajuće ćelije, njihova upotreba, regrutacija i metoda kulture.

Pronalazak se odnosi na oblast molekularne biologije, biohemije i medicine. Predložena je kompozicija za induciranje migracije matičnih ćelija odraslog masnog tkiva koja kao aktivni sastojak sadrži ljudske mezenhimske matične ćelije iz masnog tkiva odraslih u količini od 1x107 do 1x1010, koje eksprimiraju hemokin ili receptor faktora rasta na površini ćelije, ili sekretorni proizvod ovih matičnih ćelija uključuje hemokin ili receptor faktora rasta; pri čemu je izlučeni proizvod matičnih ćelija masnog tkiva odraslih adiponektin; i gdje su matične ćelije ljudskog masnog tkiva odrasle osobe napunjene mješavinom koja sadrži hemokin ili faktor rasta.

Pronalazak se odnosi na biotehnologiju i medicinu. Predložena je metoda za ekspanziju mononuklearnih ćelija krvi pupčane vrpce (pcBMC) ex vivo u prisustvu multipatentnih mezenhimskih ćelija (MMSC), koja uključuje kultivisanje MMSC iz stromalno-vaskularne frakcije masnog tkiva dok se ne postigne monosloj na Koncentracija O2 u mediju od 5%, dodavanje pcMNC suspenzije u MMSC monosloj, kultivacija 72 sata pri koncentraciji O2 u mediju od 5%, odabir nevezanih psMNC i zamjena podloge, nastavak kultivacije MMSC sa pričvršćenim psMNCs 7 dana pri koncentraciji O2 u mediju od 5%.

Pronalazak se odnosi na oblast biotehnologije i medicine. Predlaže se kompozicija koja sadrži matične ćelije iz ljudske amnionske tečnosti sa fenotipom CD73+/CD90+/CD105+/CK19+, hranljivi medij, eritropoetin, epidermalni faktor rasta i kolagen, uzet u efektivnoj količini.

Pronalazak se odnosi na oblast medicine i ćelijske tehnologije. Ćelijski proizvod koji sadrži populaciju duktalnih matičnih ćelija submandibularnog pljuvačna žlezda, karakteriziran fenotipom CD49f+/EpCAM+ i nakon tretmana valproinskom kiselinom u koncentraciji od 0,1-40 mM i kultivacije u kolagen gelu, mijenja profil ekspresije na 1AAT+/PEPCK+/G6P+/TDO+/CYP P4503A13+, kao i sposobnost sticanja za sintezu uree i albumina.

Pronalazak se odnosi na oblast biotehnologije, inženjerstva ćelija i tkiva. Opisana je metoda za dobijanje rezidentnih matičnih ćelija srca sisara koje eksprimiraju površinske markere c-kit, i/ili sca-1, i/ili MDR1, tokom koje se izoluju uzorci tkiva miokarda, drobe, tretiraju kolagenazom i tripsinom i kultivisan na posudi za kulturu sa obloženom fibronektinom eksplantnom kulturom usitnjenih uzoraka nakon čega slijedi imunoselekcija.

Pronalazak se odnosi na oblast biohemije, biotehnologije i medicine. Predložen je N-terminalni fragment rastvorljivog supresora imunog odgovora u dužini od 21 aminokiseline, koji ima aminokiselinsku sekvencu prema sekvenci ID NO: 1, što omogućava stimulaciju stvaranja regulatornih T-limfocita, kao i kao metoda za stimulaciju formiranja regulatornih T-limfocita sa N-terminalnim fragmentom rastvorljivog supresora imunog odgovora sa Seq ID NO: 1, kada se daje u koncentraciji od 0,1-50 μg/ml.

Izum se odnosi na farmaceutsku industriju i dermatološka je krema namijenjena za lokalno liječenje bakterijskih infekcija kože i za zacjeljivanje pridruženih rana, koja sadrži framicetin sulfat i biopolimer uključen u bazu kreme koja sadrži najmanje jednu supstancu iz svake od sljedećih grupa : konzervans ; primarni i sekundarni emulgator odabran iz grupe koju čine ketostearil alkohol, ketomakrogol 1000, polisorbat-80 i Span-80; parafin kao voštani proizvod; ko-rastvarač izabran iz grupe koju čine propilen glikol, heksilen glikol i polietilen glikol-400; dušična kiselina ili mliječna kiselina i voda, a navedeni biopolimer je poželjno hitozan.

Pronalazak se odnosi na oblast biotehnologije, konkretno na ćelijske tehnologije, i može se koristiti u medicini. Metoda uključuje skaliranje diploidnih ćelija linije M-20 iz kriobanke IPVE nazvane po. M.P. Čumakova Ruske akademije medicinskih nauka iz ampule banke sjemenskih ćelija prolaza 7 kako bi se dobila banka radnih ćelija prolaza 16. U ovom slučaju, ćelije od 20-33 pasaža, pogodne za upotrebu u terapijske i dijagnostičke svrhe, dobijaju se kultivisanjem u hranljivoj podlozi koja sadrži 10 fibrinolitički aktivne ljudske plazme koja sadrži trombocitni faktor rasta PDGF u koncentraciji od 155 do 342 pgml. Pronalazak omogućava povećanje proliferativne aktivnosti diploidnih ćelija humanih fibroblasta. 1 plata datoteke, 2 tabele.