Technika nepřímé Coombsovy reakce. Metoda stanovení krevních skupin

- studie, která pomáhá určit obsah nekompletních protilátek proti erytrocytům v krvi. Tento antiglobulinový test umožňuje detekovat protilátky u těhotných žen.

Navíc umožňuje diagnostikovat hemolytickou anémii u novorozenců s Rh konfliktem v počátečních fázích. To pomáhá předcházet destrukci červených krvinek nezbytných pro normální tvorbu krve. Tento test vytvořil v roce 1945 Robert Coombs, a proto dostal své jméno.

Coombsův test je všestranný test, který umožňuje včasnou diagnostiku poruch krvetvorby u dospělých i dětí.

Existují následující typy takových testů:

1. Přímý Coombsův test– umožňuje stanovit protilátky umístěné na povrchu červených krvinek. Obvykle je taková studie předepsána pro podezření na hemolýzu, autoimunitní hemolytickou anémii nebo jiné autoimunitní onemocnění. Kromě toho se provádí po medikamentózní terapie léky na bázi chininu, penicilinu nebo methyldopy nebo po krevní transfuzi. Chcete-li získat přesnější výsledky, musíte zcela přestat užívat léky alespoň 1 týden před studií.
2. Nepřímý Coombsův test– test, který lze použít k detekci protilátek proti erytrocytům v plazmě. Obvykle se provádí během těhotenství a před transfuzí krve. Protilátky proti erytrocytům se objevují v krvi člověka během reaktivního imunitního systému nebo jako reakce na určité léky. Pro přesnější studii se provádí několik odběrů najednou v intervalu 2 hodin.

Indikace pro použití

Coombsův test se provádí pouze v případě závažných indikací. Jedná se o nákladné a časově náročné studium, které je specifickým testem.

Následující situace jsou obvykle považovány za indikace pro jeho implementaci:

1. Během krevní transfuze. Test umožňuje určit, zda se krev příjemce zakoření v lidském těle, a také zda je možné darování. V tomto případě je nutné vyšetřit materiál od dárce i příjemce. Je důležité určit povahu protilátek, protože pokud jsou v těle na pozadí Rh konfliktu nekompatibilní, imunitní systém je zničen. To vede k rozvoji vážná onemocnění a ve vzácných případech i smrt.
2. Před operací, kdy hrozí ztráta krve. To se provádí proto, aby lékař mohl okamžitě zavést vhodnou krev k obnovení těla.
3. K detekci Rh senzibilizace. Rhesus je specifický antigen, který se během těhotenství objevuje v těle každé ženy. Pokud má matka pozitivní Rh a otec negativní, nebo naopak, nevzniká pro dítě žádná závislost – vydědit může kohokoli. Pokud dítě dostává od matky opačný rhesus, existuje vysoké riziko senzibilizace. Tento jev je charakterizován míšením krve matky a dítěte. To se může stát jak během těhotenství, tak během porodu.

Pokud se Rhesusův konflikt objeví v těle těhotné ženy, pak imunitní systém matky začne vnímat její plod jako cizí těleso. Kvůli tomu je vysoké riziko, že na něj začne útočit.

V důsledku takových akcí se u dítěte mohou vyvinout vážné patologie. Nejčastěji se vyskytuje erytroblastóza - jev, při kterém tělo dítěte nemůže produkovat dostatečné množství červených krvinek.

Navíc v důsledku Rh konfliktu může dojít k úmrtí plodu v děloze nebo bezprostředně po narození. Na správný přístup Takovým vážným následkům lze snadno předejít léčbou.

Odchylky od normy

Pokud je Coombsův test pozitivní, lékař dojde k závěru, že v krevním séru jsou protilátky proti červeným krvinkám. To znamená, že krev dárce nemusí být kompatibilní s krví pacienta.

Pokud je diagnostikován pozitivní výsledek v těle těhotné ženy s Rh-negativní krví, pak její tělo obsahuje protilátky proti krvi plodu.

To ukazuje na Rh konflikt, který vyžaduje extrémně pečlivý přístup k vedení těhotenství ze strany lékaře a také dodržování všech pokynů a doporučení ze strany ženy.

Pokud jsou v krvi dítěte přítomny protilátky, je to diagnostikováno hemolytické onemocnění novorozenci. V tomto případě se provádí opakovaná studie, aby se zjistilo, zda dojde ke zvýšení hladiny protilátek v krvi nastávající matky nebo ne.

Možné komplikace Coombsova testu

Coombsův test je poměrně bezpečný test, který umožňuje diagnostikovat řadu autoimunitní onemocnění. Zřídka způsobuje komplikace, obvykle negativní důsledky spojené s odběrem krve.

Oni jsou:

• Krvácení nebo krvácení pod kůží
• Závratě a mdloby
• Infekční infekce

7 295

– antiglobulinový test zaměřený na identifikaci v Rh-negativní krvi neúplných antierytrocytárních protilátek proti Rh faktoru - specifickému proteinu, který se nachází na povrchu erytrocytů Rh-pozitivní krve. Existují dva typy tohoto testu: přímý - průkaz protilátek na povrchu červených krvinek, nepřímý - průkaz protilátek v krevním séru. Přímé testování se provádí při diagnostice a sledování léčby krevních onemocnění: hemolytická anémie, hemolytická nemoc novorozenců a další. Nepřímý test se provádí k posouzení kompatibility krve dárce a příjemce během transfuze a také ke zjištění přítomnosti a rizika Rh konfliktu při plánování a řízení těhotenství. Materiálem pro Coombsův test je venózní krev, studie se provádí metodami založenými na aglutinační reakci. Normálně oba testy dávají negativní výsledek. Analýza je dokončena během jednoho dne.

Coombsův test - klinické hodnocení Rh-negativní krev, zaměřená na průkaz protilátek proti Rh faktoru. Test se používá k identifikaci rizika rozvoje Rh konfliktu a hemolytických reakcí. U každého člověka obsahuje povrch červených krvinek určitý soubor antigenů nebo aglutinogenů – sloučenin různé povahy, jejichž přítomnost či nepřítomnost se využívá k určení krevní skupiny a Rh faktoru. Existuje mnoho typů antigenů, včetně lékařská praxe Největší praktický význam mají aglutinogeny A a B, které určují krevní skupinu, a aglutinogen D, Rh faktor. Při pozitivním Rh faktoru jsou D antigeny detekovány na vnější membráně erytrocytů, při negativním však nikoliv.

Coombsův test, nazývaný také antiglobulinový test, je zaměřen na detekci neúplných antierytrocytárních protilátek proti systému Rh faktoru v krvi. Protilátky proti Rh faktoru jsou specifické imunoglobuliny, které se tvoří v Rh-negativní krvi, když do ní vstupují červené krvinky s aglutinogeny D. K tomu může dojít při smíchání krve plodu a těhotné ženy, při krevních transfuzích prováděných bez předchozí krve psaní na stroji. Coombsův test existuje ve dvou verzích – přímé a nepřímé. Při provádění přímého Coombsova testu jsou detekovány protilátky navázané na povrchu červených krvinek. Studie se používá k určení příčiny hemolytické reakce. Nepřímý Coombsův test je zaměřen na průkaz protilátek proti erytrocytům v krevní plazmě. Je nutné zjistit kompatibilitu krve mezi dárcem a příjemcem nebo matkou a plodem a pomáhá předcházet rozvoji Rh konfliktu a následné hemolýze červených krvinek.

Krev pro obě verze Coombsova testu se odebírá ze žíly. Analýza se provádí aglutinací pomocí antiglobulinového séra. Výsledky studie se využívají v hematologii k identifikaci příčin hemolytických reakcí, v chirurgii a resuscitaci při provádění krevních transfuzí, v porodnictví a gynekologii při sledování těhotenství u žen s Rh negativní krví.

Indikace

Přímý Coombsův test, který detekuje protilátky navázané na povrchu červených krvinek, je předepsán pro hemolytické reakce (destrukce červených krvinek) různého původu. Studie je indikována při primární autoimunitní hemolytické anémii, potransfuzní hemolytické anémii, hemolytickém onemocnění novorozence, hemolýze erytrocytů způsobené autoimunitním, nádorovým popř. infekční choroby, stejně jako recepce léky například chinidin, methyldopa, prokainamid. K prevenci vzniku Rh konfliktu se používá nepřímý Coombsův test, který stanovuje protilátky v krevní plazmě. Je indikován pro pacienty při přípravě na krevní transfuze a také pro těhotné ženy s negativním Rh faktorem za předpokladu, že budoucí otec dítěte má pozitivní Rh faktor.

Pro stanovení Rh kompatibility není Coombsův test předepisován pacientům s Rh-pozitivní krví. V těchto případech jsou již na povrchu červených krvinek antigeny, tvorbu protilátek nelze vyprovokovat krevní transfuzí ani vstupem fetální krve do krevního oběhu těhotné. Studie také není indikována těhotným ženám, pokud mají oba rodiče negativní Rh faktor – dědičný recesivní znak. Dítě v takových párech má vždy Rh-negativní krev, imunologický konflikt s matkou je nemožný. U hemolytických patologií se antiglobulinový test nepoužívá ke sledování úspěšnosti terapie, protože výsledky neodrážejí aktivitu procesu destrukce červených krvinek.

Limitací Coombsova testu je pracnost výzkumného postupu - pro získání spolehlivých výsledků je nutné dodržet teplotní a časové podmínky, pravidla pro přípravu reagencií a biomateriálu. Mezi výhody Coombsova testu patří jeho vysoká citlivost. U hemolytické anémie zůstávají výsledky tohoto testu pozitivní, i když jsou hladiny hemoglobinu, bilirubinu a retikulocytů normalizovány.

Příprava na analýzu a sběr materiálu

Materiál použitý k provedení Coombsova testu je venózní krev. Nejsou žádné zvláštní požadavky na dobu odběru krve a na přípravu pacienta. Jako u každé jiné studie se doporučuje udělat si po jídle alespoň 4 hodiny pauzu a na posledních 30 minut přestat kouřit. fyzická aktivita, vyvarujte se emočního stresu. Vyplatí se také předem prodiskutovat s lékařem nutnost vysazení léků – některé léky mohou zkreslit výsledky Coombsova testu. Krev se odebírá injekční stříkačkou z loketní žíly, méně často ze žíly dál zadní strana kartáče Během několika hodin je materiál doručen do laboratoře.

Při provádění přímého Coombsova testu se do krevního séra pacienta přidá antiglobulinové sérum. Po nějaké době se směs vyšetří na přítomnost aglutinátů – ty se tvoří, pokud jsou na červených krvinkách protilátky. Pokud je výsledek pozitivní, stanoví se aglutinační titr. Nepřímý Coombsův test se skládá z více kroků. Nejprve se protilátky přítomné v séru fixují na injikované červené krvinky během inkubace. Poté se ke vzorku přidá antiglobulinové sérum, po nějaké době se stanoví přítomnost a titr aglutinátů. Doba analýzy je 1 den.

Normální výsledky

Normálně je výsledek přímého Coombsova testu negativní (-). To znamená, že v krvi nejsou žádné protilátky spojené s červenými krvinkami a nemohou způsobit hemolýzu. Normální výsledek nepřímého Coombsova testu je také negativní (-), to znamená, že v krevní plazmě nejsou žádné protilátky proti Rh faktoru. Při přípravě na transfuzi krve pro příjemce to znamená kompatibilitu s krví dárce, při sledování těhotenství to znamená absenci Rh senzibilizace matky, nízké riziko rozvoje imunologického konfliktu. Fyziologické faktory, jako jsou stravovací návyky popř fyzická aktivita, nemůže ovlivnit výsledek testu. Pokud je tedy výsledek pozitivní, je nutná konzultace s lékařem.

Diagnostická hodnota analýzy

Pozitivní výsledek Coombsova testu je vyjádřen kvalitativně, od (+) do (++++), nebo kvantitativně, titry od 1:16 do 1:256. Stanovení koncentrace protilátek na červených krvinkách a v krevním séru se provádí u obou typů vzorků. Pokud je přímý Coombsův test pozitivní, jsou na vnější membráně červených krvinek detekovány protilátky, které vedou k destrukci těchto krvinek. Příčinou může být krevní transfuze bez předchozí typizace – potransfuzní hemolytická reakce, dále erytroblastóza novorozence, hemolytická reakce v důsledku užívání léků, primární nebo sekundární autoimunitní hemolytická anémie. Sekundární destrukci červených krvinek může způsobit systémový lupus erythematodes, Evansův syndrom, Waldenströmova makroglobulinémie, paroxysmální studená hemoglobinurie, chronická lymfocytární leukémie, lymfom, infekční mononukleóza, syfilis, mykoplazmatická pneumonie.

Pozitivní výsledek nepřímého Coombsova testu ukazuje na přítomnost protilátek proti Rh faktoru v plazmě. V praxi to znamená, že došlo k Rh senzibilizaci a existuje možnost rozvoje Rh konfliktu po infuzi dárcovské krve během těhotenství. Aby se předešlo těhotenským komplikacím, jsou ženy s pozitivním výsledkem Coombsova testu zařazeny do speciálního registru.

Léčba abnormalit

Coombsův test odkazuje na izoserologické studie. Jeho výsledky umožňují identifikovat hemolytickou reakci a také určit kompatibilitu krve dárce a příjemce, matky a plodu, aby se zabránilo rozvoji Rh konfliktu. Pokud je výsledek testu pozitivní, musíte požádat o radu svého ošetřujícího lékaře - porodníka-gynekologa, hematologa, chirurga.

Antiglobulinový test, navržený k detekci nekompletních anti-erytrocytárních protilátek, byl navržen Coombsem, Morantem, Reisem v roce 1945 a později byl nazván Coombsův test. Vůně tato metoda spočívá v tom, že antiglobulinové sérum obsahující protilátky proti lidským imunoglobulinům vede při reakci s červenými krvinkami senzibilizovanými nekompletními protilátkami k jejich aglutinaci.

Podle toho, zda jsou protilátky fixovány na povrchu červených krvinek nebo jsou v svobodný stát v krevní plazmě, přímé popř nepřímý vzorek Coombs.

Přímý Coombsův test se provádí v případech, kdy existuje důvod předpokládat, že studované červené krvinky již jsou in vivo byly senzibilizovány vhodnými protilátkami, tzn. v těle nastala první fáze reakce - fixace protilátek na povrchu červených krvinek a následné přidání antiglobulinového séra způsobuje aglutinaci senzibilizovaných buněk.

Pomocí nepřímého Coombsova testu jsou detekovány neúplné protilátky přítomné v testovacím séru. V v tomto případě reakce probíhá ve dvou fázích. První fází je inkubace testovacích erytrocytů s testovacím sérem, při které se protilátky obsažené ve vzorku testovacího séra fixují na povrch erytrocytů. Druhým krokem je přidání antiglobulinového séra.

Coombsův test je dosud široce používán v laboratorní praxi pro diagnostiku imunopatologických stavů, zejména u autoimunitní hemolytické anémie, charakterizované destrukcí červených krvinek v důsledku vazby buněčná membrána s protilátkami a (nebo) složkami komplementového systému. Používá se k detekci přítomnosti Ig G na membráně erytrocytů (obvykle Ig G1 a Ig G3), které mohou aktivovat komplement, někdy i komplement (C3d). Nicméně, v akutní období onemocnění v důsledku destrukce červených krvinek, na kterých bylo zaznamenáno velké množství protilátek, při hemolytické krizi a také s nedostatečným počtem protilátek během chronický průběh onemocnění, může být pozorován negativní přímý Coombsův test.

Je třeba zdůraznit, že nepřímý Coombsův test zůstává nejlepší metoda individuální výběr transfuzních médií, protože umožňuje nejpřesněji určit individuální kompatibilitu dárce a příjemce podle erytrocytárních antigenů.

Dodatečný přímý antiglobulinový test na přítomnost autoprotilátek se doporučuje při vyšetření všech příjemců orgánů a tkání v předtransplantačním období a příjemců hematopoetických kmenových buněk také po transplantaci.

Kromě imunohematologie a transfuziologie jsou antiglobulinové testy široce používány v diagnostice řady patologických stavů: hematologických onemocnění včetně lymfoproliferativních onemocnění, systémová onemocnění pojivové tkáně, Sjogrenova choroba, chronická aktivní hepatitida atd.

Coombsovy testy se aktivně používají v lékařské genetice a soudním lékařství k určení povrchových erytrocytárních antigenů.

Coombsův test je poměrně pracná výzkumná metoda, která vyžaduje zvláštní péči při její implementaci. Při jeho použití jsou určité potíže spojené zejména s interpretací slabě pozitivních reakcí. Je známo, že falešně slabě pozitivní resp negativní reakce při provádění Coombsových testů mohou být důsledkem nedostatečně účinného promývání červených krvinek, neutralizace antiglobulinového činidla stopami séra, ale i kontaktu s nemastným povrchem, na který může být antiglobulin fixován a tím ztrácí svou aktivitu . Další nevýhodou Coombsova testu je nestabilita antiglobulinového činidla, jehož příprava a skladování má určité rysy, což také ztěžuje kvantifikaci hemaglutinační reakce s antiglobulinovým sérem.

Kromě toho studie provedené A. Holburnem, D. Voakem a kol. ukázal, že příčinou falešně negativních výsledků může být nadměrné třepání při resuspendování suspenze červených krvinek. Chybné výsledky při provádění antiglobulinových testů mohou být způsobeny také přítomností příměsi anti-komplementárních protilátek v antiglobulinovém činidle, zejména ke složkám komplementu C3d-, C3c-, C4c- a C4d-, které jsou adsorbovány na povrchu otestujte červené krvinky během inkubace a vytvořte zdání pozitivního výsledku.

Tyto nevýhody lze snadno odstranit důkladným promytím zkoumaných vzorků a sledováním reakčních podmínek.

V posledním desetiletí se pro zkrácení doby potřebné k provedení nepřímého Coombsova testu a zvýšení jeho citlivosti používal izotonický fyziologický roztok s nízkou iontovou silou (LISS).

Nepopiratelnou výhodou antiglobulinových testů je podle řady autorů jejich vysoká citlivost, která výrazně převyšuje jejich rozlišovací schopnost. alternativní metody testy, které se používají k detekci neaglutinujících protilátek.

Porovnali jsme rozlišení metod pro studium krevních sér na přítomnost nekompletních protilátek pomocí polyglucinu, želatiny a antiglobulinového séra. Během studie byly sledovány titry nekompletních anti-D protilátek ve 140 vzorcích krevního séra od izoimunních dárců pomocí želatinových, polyglucinových a nepřímých antiglobulinových testů. Formulace těchto metod byla provedena v souladu s obecně uznávané metody.

Bylo zjištěno, že z hlediska jejich rozlišení jsou metody detekce senzibilizace erytrocytů anti-D protilátkami uspořádány následovně: nejcitlivější je nepřímý Coombsův test, dále želatinový test a nejméně vypovídající je polyglucinový test. Výsledky získané v této sérii experimentů plně odpovídají údajům z literatury, což nám umožňuje učinit závěr vysoká úroveň citlivost Coombsových testů, která umožňuje s vysokou mírou jistoty identifikovat v těle přítomnost protilátek proti erytrocytům, které nezpůsobují aglutinaci červených krvinek.

Při provádění Coombsových testů v praxi však dochází k případům, kdy neúplné protilátky nejsou detekovány, ačkoli klinický obraz onemocnění nebo předchozí imunizace naznačuje jejich možnou přítomnost. V takových případech lze předpokládat, že množství protilátek je nedostatečné k tomu, aby byly vysráženy protilátkami antiglobulinového séra.

Tento závěr byl potvrzen vlastním experimentem, ve kterém byla metodou analytické mikroelektroforézy buněk zjištěna přítomnost anti-D protilátek na testovaných erytrocytech, které nebyly detekovány nepřímým Coombsovým testem. V této sérii experimentů bylo antiglobulinové sérum přidáno k erytrocytům preinkubovaným se séry získanými z krve imunizovaných dárců během období probíhající tvorby protilátek, tzn. v období, kdy u nich nebyly pomocí známých metod, včetně Coombsova testu, detekovány protilátky.

V provedených studiích byly poskytnuty statistické důkazy o přítomnosti neúplných protilátek na povrchu červených krvinek. výrazná změna velikost elektroforetické mobility senzibilizovaných červených krvinek po přidání antiglobulinového séra. Je třeba poznamenat, že anti-D protilátky byly následně stanoveny u všech imunizovaných dárců nepřímým Coombsovým testem v krevním séru.

Gillerand a kol. také ukázaly, že antiglobulinové testy se vyznačují určitým prahem citlivosti: pozitivní výsledek je zaznamenán pouze tehdy, když je na povrchu jedné červené krvinky zaznamenáno alespoň 500 molekul Ig G.

Kromě toho literatura poskytuje důkazy, že případný negativní výsledek Coombsova testu může být spojen s nízkou afinitou protilátek, které senzibilizují červené krvinky, v důsledku čehož se snadno vymývají z povrchu červených krvinek během promývacího procesu. .

Vezmeme-li v úvahu výše uvedené, můžeme dojít k závěru, že v některých případech negativní výsledek Coombsova testu ještě není důkazem nepřítomnosti protilátek fixovaných na povrchu červených krvinek.

Je známo, že Coombsovy reakce jsou vysoce specifické a mohou detekovat většinu typů nekompletních protilátek. Jak však ukazují některá experimentální data, antiglobulinové testy mohou být pozitivní i v neimunologických podmínkách. E. Muirhead a kol. druhý den po podání fenylhydrazinu psům byl pozorován pozitivní Coombsův test. Takto rychlý výskyt pozitivní reakce hovoří proti její imunologické povaze a je spíše spojen s nespecifickou adsorpcí proteinu na povrchu erytrocytů.

M. Williams a kol. zjistili, že kyselina klavulanová může vyvolat i pozitivní reakci, která je podle autorů spojena s nespecifickou adsorpcí plazmatických proteinů na povrchu erytrocytů. Podobný účinek byl pozorován při léčbě cefalosporinovými antibiotiky.

Autoři výše uvedených studií zdůrazňují neimunologický charakter pozitivních výsledků Coombsových testů a trvají na tom, že tyto látky jsou schopny způsobit modifikaci membrán červených krvinek, v důsledku čehož mohou červené krvinky adsorbovat proteiny (zejména albumin), které jsou normálně přítomny v krevní plazmě a nemají vlastnosti protilátek. Kromě toho je možné, že xenobiotikum adsorbované na buněčném povrchu slouží jako spojovací článek mezi buněčnou membránou a plazmatickými proteiny.

Pro správnou interpretaci výsledků antiglobulinových testů je třeba vzít v úvahu také kvantitativní poměr mezi mladými a zralými červenými krvinkami v periferní krvi. Bylo zjištěno, že retikulocyty izolované z těla v období zvýšené regenerace erythronu mohou být aglutinovány antiglobulinovým sérem.

Pozitivní výsledek přímého antiglobulinového testu Vyskytuje se také při různých patologických stavech doprovázených poruchami imunitní systém, zánětlivé procesy, což vede k nespecifické adsorpci protilátek různých specificit na membránách erytrocytů. To naznačuje, že molekuly Ig G neinteragují se specifickými antigeny erytrocytů, ale jsou pouze fixovány na povrchu studovaných buněk.

Je třeba vzít v úvahu, že při provádění Coombsova testu v případech onemocnění charakterizovaných rozvojem dysproteinémie nebo výskytem paraproteinů je pozitivní výsledek způsoben přítomností erytrocytů na povrchu proteinů, které nemají vlastnosti protilátky, což také ukazuje na nedostatek specifity antiglobulinových testů, pokud jde o povahu proteinu detekovaného s jejich pomocí.

Jak tedy ukázaly četné studie, pozitivní výsledky přímé a nepřímé antiglobulinové testy nejsou absolutním důkazem přítomnosti protilátek, protože pozitivní reakce lze také pozorovat u různých patologických stavů, které nejsou spojeny s izosenzibilizací nebo autosenzibilizací těla. Proto pouze srovnání výsledků několika imunosérologických metod s klinický obraz onemocnění nám umožňuje plně posoudit vyvíjející se patologický proces.

Pozitivní nepřímý antiglobulinový test s negativním přímým testem obvykle indikuje přítomnost volných aloprotilátek v testovaném séru, související s předchozími krevními transfuzemi nebo těhotenstvím.

Coombsův test je často pozitivní během exacerbace paroxysmální noční hemoglobinurie; pozitivní Coombsův test s anti-C3 a anti-C3dg je markerem studené aglutininové choroby.

V případech, kdy je vysoké riziko rozvoje hemolytického onemocnění novorozence, velká důležitost Pro stanovení diagnózy (nejčastěji v těhotenství) a v případě potřeby dynamické sledování vzhledu a změny titru protilátek mějte k dispozici výsledky přímých i nepřímých antiglobulinových testů. Nejčastěji je hemolytické onemocnění novorozenců spojeno s inkompatibilitou matky a plodu pro antigen D, méně často pro antigeny systému ABO a ještě méně často pro jiné antigeny (C, c, K atd.). Během tohoto procesu vznikají protilátky La, které jsou zpravidla neúplnými protilátkami třídy Ig G, jsou jasně detekovány nepřímým antiglobulinovým testem. U tohoto onemocnění má velký význam správně stanovený titr a specificita identifikovaných protilátek, protože existuje určitá korelace mezi hladinou antierytrocytárních protilátek v krvi těhotné ženy a možná prognóza závažnost hemolytického onemocnění.

Je také nutný nepřímý Coombsův test klinická praxe aby byla zajištěna bezpečná transfuzní terapie. Jeho provádění je povinnou součástí imunohematologických studií dárců a různých kategorií příjemců, stejně jako rutinních vyšetření všech pacientů ve zdravotnických zařízeních, kteří mohou vyžadovat transfuzi krve a jejích složek.

Nepřímý antiglobulinový test se používá v následujících případech:

Pro přesnější stanovení Rh příslušnosti (antigen D) při nejasných výsledcích stanovení Rh faktoru jinými metodami (polyglucin, želatina apod.);

Identifikovat slabé erytrocytární antigeny (systémy Kell, Duffy, Kidd, Lewis atd.) a protilátky proti těmto antigenům;

Pro detekci a identifikaci aloimunitních antierytrocytárních protilátek, včetně protilátek, které způsobují hemolytické potransfuzní reakce;

Stanovit přítomnost imunitních protilátek systému AB0 při transfuzních hemolytických komplikacích;

Jako test kompatibility pro individuální výběr transfuzované krve a jejích složek.

Coombsův test je tedy důležitým diagnostickým testem používaným v různých oblastech medicíny (hematologie, porodnictví, revmatologie, transfuziologie, klinická a laboratorní diagnostika atd.). Znalost zvláštností provádění Coombsova testu pomůže zvýšit spolehlivost získaných výsledků a přispěje ke správné interpretaci laboratorních dat.

Literatura

1. Protilátky. Metody / ed. D. Katie. - M.: Mir, 1991.

2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadzhiev A.B.. // Transfuzní terapie anémie: učebnice. manuál pro lékaře. - M.: Prakt. Medicína, 2005. - S. 105-106.

3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfuziologie. - 2006. - č. 2. — S. 39—62.

4. Donskov S.I.// Krevní skupiny systému Rhesus: teorie a praxe. - M.: VINITI RAS, 2005. - S. 180-186, 195.

5.Imunoserologie ( předpisy) / komp. A.G. Bashlay, S.I. Donskov. - M.: VINITI RAS, 1998.

6.Studium krevního systému v klinické praxi / ed. G.I. Kozinets, V.A. Makarová. - M.: Triada-X, 1997.

7. Levin V.I. K mechanismu erytrodiézy a erytropoézy v období akutní posthemoragické anémie: abstrakt. dis. ...bonbón. Miláček. Sci. - Minsk, 1968.

8. Ragimov A.A., Bayramalibeyli I.E.. // Základy diagnostiky, prevence a léčby anémie. - M.: GOU VUNMC MH RF, 2002. - S. 204-209.

9. Čumaková E.D.. // Skutečné problémy hematologie a transfuziologie: sborník VI. kongresu hematologů a transfuziologů Běloruské republiky, Minsk, 24.-25. května 2007 / ed. A.I. Svirnovský, M.P. Potapneva. - Minsk: Republikánské vědecké a praktické centrum hematologie a transfuziologie, 2007. - S. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lancet. - 1945. - Sv. 2. - S. 15.

11. Freedman J. // J. Clin. Pathol. - 1979. - Sv. 32. - S. 1014-1018.

12. Holburn A.M.. Kontrola kvality. Metody v hematologii/ed. I. Cavill. - Edinburgh: Churchill Livingstone, 1982. - Sv. 4. - S. 34-50.

13. Khan S.// CMAJ. - 2006. - Sv. 175, N 8. - S. 919.

14. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Sv. 63 (dod. 7). - S. 719-721.

15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Sv. 63 (dod. 7). — S. 716—718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// New Engl. J. Med. —1976. - Sv. 277. - S. 123-125.

17. Muirhead E.E., HájeM., Brian S. // J. Lab. Clin. Med. —1954. - Sv. 44. - S. 902-903.

18. Rosse W.F.//Hosp. Prac. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., MooreB. a kol. //Biotests Bull. - 1986. - Sv. 1. - S. 41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. a kol. Myčky buněk pro antiglobulinové testy. Opakované testování – nová metoda prokazující neúčinnost jednoho široce používaného stroje – Sorvall CW1-AF2: zpráva technickému oddělení DHSS, únor 1991.

21. Williams M.E., Thomas D., Harman C.P.. a kol. //Antimikrobiální látky a chemoterapie. —1985. - S. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H.. // CMAJ. - 2006. - Sv. 174, N 3. - S. 305-307.

Lékařské novinky. - 2008. - č. 3. - str. 33-36.

Pozornost! Článek je určen lékařským specialistům. Přetištění tohoto článku nebo jeho částí na internetu bez hypertextového odkazu na zdroj je považováno za porušení autorských práv.

Z mnoha existujících antigenů v lékařské praxi nejvyšší hodnotu se zaměřuje na tři typy krevních aglutinogenů. Jedním z nich je typ odpovědný za projev faktoru Rh: pokud je přítomen na membráně erytrocytů, je krevní skupina diagnostikována jako Rh+, pokud chybí - Rh-. Pokud se erytrocyty s Rh+ aglutinogeny dostanou do Rh-negativní krve, tělo spustí imunitní odpověď a začne produkovat protilátky proti tomuto antigenu, což vyvolává patologické stavy.

ODKAZ! Rh faktor je komplexní vícesložkový systém několika desítek antigenů. Nejběžnější z nich jsou aglutinogeny typu D (85 % případů), dále E a C.

Coombsův test se provádí pouze v případě, že existují přímé důkazy. Obecný seznam důvodů pro předepsání Coombsova testu:

• plánování a řízení těhotenství (rodiče mají různé Rh);
• darování a příprava na transfuzi krve (neshoda krve podle Rh není méně destruktivní než neshoda podle systému AB0);
• plánované chirurgický zákrok(v případě doplnění krevní ztráty transfuzí krve);
• diagnostika hemolytických onemocnění.

Specifičtější indikace závisí na typu prováděné studie.

Přímý Coombsův test

Přímý test detekuje protilátky na povrchu červených krvinek. To je nezbytné pro diagnostiku existujících hemolytické patologie:

• autoimunitní (červené krvinky a hemoglobin jsou zničeny v důsledku útoku vlastních protilátek);
• léčivý ( patologický proces spouští užívání určitých léků, jako je chinidin nebo prokainamid);
• posttransfuzní (pokud se krevní skupina při transfuzi neshoduje), stejně jako ve formě Rh konfliktu během těhotenství (erytroblastóza novorozenců).

ODKAZ! Hemolytická anémie je onemocnění spojené s předčasnou destrukcí červených krvinek v důsledku hemolýzy, která vede k nedostatečnému nasycení krve kyslíkem a hypoxii mozku a/nebo vnitřních orgánů.

Hemolýza krevních elementů je pozorována u onkologických, infekčních a revmatických onemocnění, proto lze přímý Coombsův test použít jako další diagnostický nástroj patologický stav. Stojí za připomenutí: negativní hodnota testu nevylučuje možnost hemolýzy, ale je důvodem pro další vyšetření.

Nepřímý Coombsův test

K prevenci patologických situací se častěji používá nepřímé testování. Pomáhá detekovat protilátky v krevní plazmě, což je nezbytné pro posouzení transfuzní kompatibility a diagnostiku rizik Rh konfliktu v těhotenství.

Více než 80 % lidí má pozitivní Rh faktor (Rh+), respektive necelých 20 % je Rh negativní. Pokud se u Rh-matky vyvine Rh+ dítě, její tělo začne produkovat protilátky, které napadají červené krvinky plodu a způsobují hemolýzu.

Vezmeme-li v úvahu skutečnost, že procento sňatků „různých rhesus“ dosahuje 12–15 %, riziko hemolytického onemocnění novorozenců by mělo být vysoké, ale ve skutečnosti pouze v 1 z 25 takových případů ženy zažívají fenomén senzibilizace. (na každých 200 úspěšných porodů připadá 1 příklad hemolytické patologie). To je částečně způsobeno skutečností, že první Rh-pozitivní dítě obvykle nezpůsobuje otevřenou agresi z těla matky; Naprostá většina případů se vyskytuje u druhého a dalších dětí. Platí stejný princip jako u konvenční senzibilizace na konkrétní alergen.

Při prvním kontaktu nedochází k žádné reakci. Tělo se teprve seznamuje s novým antigenem, produkujícím protilátky třídy IgM, které jsou zodpovědné za rychlou imunitní odpověď, ale málokdy proniknou placentární bariérou do krve dítěte. Všechny patologické reakce se projeví při druhém „setkání“, kdy tělo začne produkovat protilátky třídy IgG, které snadno proniknou do krevního řečiště plodu a zahájí proces hemolýzy.

Nepřímý Coombsův test během těhotenství umožňuje detekovat přítomnost protilátek v těle matky a včas identifikovat počáteční fázi senzibilizace. Kladná odpověď vyžaduje registraci s měsíčním testem titru protilátek a povinnou hospitalizaci 3-4 týdny před porodem.

ODKAZ! Inkompatibilita Rh faktoru nijak neovlivňuje stav matky, hemolytické onemocnění vzniká pouze u dítěte. V závažných případech a při absenci včasné odpovědi může plod zemřít v děloze nebo bezprostředně po narození.

Příprava na proceduru a její provedení

K diagnostice se používá žilní krev. Na Coombsův test není potřeba žádná speciální dlouhodobá příprava. Pokuste se před odběrem krve z žíly na analýzu dodržovat standardní soubor pravidel:

• vzdát se alkoholu na 3 dny, léky(Pokud možno);
• Naplánujte si poslední jídlo později než 8 hodin před odběrem krve na analýzu;
• vzdát se kouření, fyzického, duševního a emočního stresu do 1 hodiny;
• Před zákrokem vypijte sklenici čisté neperlivé vody.

Výzkumná metoda je založena na hemaglutinační reakci.

Při provádění přímého testu vzorek krve je vystaven předem připravenému antiglobulinovému séru se známými indikátory, směs se nějakou dobu uchovává a kontroluje se na aglutináty, které se tvoří při přítomnosti protilátek na červených krvinkách. Hladina aglutinátů je diagnostikována pomocí aglutinačního titru.

Nepřímý vzorek Coombs má podobnou techniku, ale složitější sled akcí. Antigenní erytrocyty (s Rh faktorem) jsou zavedeny do separovaného krevního séra a teprve po těchto manipulacích je přidáno antiglobulinové sérum pro diagnostiku a aglutinační titr.

Výsledky výzkumu

Normálně jak rovné, tak nepřímý Coombsův test měl by dát negativní výsledek:

• negativní přímý test ukazuje, že specifické protilátky proti Rh faktoru spojenému s červenými krvinkami v krvi chybí a nemohou způsobit hemolýzu
• negativní nepřímý test ukazuje, že v krevní plazmě také nejsou žádné volné protilátky proti Rh faktoru; tato skutečnost ukazuje na kompatibilitu krve dárce s krví příjemce (resp. s krví matky a dítěte) podle Rh faktoru.

Pozitivní Coombsův test ukazuje na skutečnost Rh senzibilizace těla, což je hlavní důvod Rh konflikt v případě krevní transfuze nebo při nošení dítěte s jiným stavem Rh. V tomto případě zůstávají výsledky nezměněny po dobu 3 měsíců (životnost červených krvinek). Pokud je příčinou autoimunitní hemolytická anémie, pozitivní test může pacienta sledovat několik let (v některých případech i po celý život).

ODKAZ! Antiglobulinový test je jiný vysoká citlivost, ale má malý informační obsah. Nezaznamenává aktivitu hemolytického procesu, neurčuje typ protilátky a není schopen identifikovat příčinu patologie. Chcete-li získat úplnější obrázek, musí ošetřující lékař předepsat další výzkum(mikroskopie krve, obecná a biochemická analýza revmatické testy, ESR, hladiny železa a feritinu).

Stupeň senzibilizace lze vyjádřit kvalitativně (od „+“ do „++++“) nebo kvantitativně ve formě titru:

• 1:2 - nízká hodnota, nepředstavuje nebezpečí;
• 1:4 - 1:8 - začátek rozvoje imunologické reakce; nepředstavuje nebezpečí, ale vyžaduje neustálé sledování;
• 1:16 -1:1024 - silná forma senzibilizace, měla by být přijata okamžitá opatření.

Důvod pozitivní test Můžu být:

• transfuze netypizované krve (nebo s překlepem), kdy se Rh faktor dárce a příjemce neshoduje;
• Rh konflikt během těhotenství (pokud se složení krevních antigenů u otce a matky neshoduje);
• autoimunitní hemolytická anémie - vrozená (primární) i sekundární, která je důsledkem některých onemocnění (Evansův syndrom, infekční pneumonie, syfilis, studená hemoglobinurie, lymfom);
• léková hemolytická reakce.

Žádný z výše uvedených problémů nemůže pacient vyřešit bez zdravotní péče. Ve všech případech bude vyžadována naléhavá konzultace, registrace nebo naléhavá hospitalizace.

POZORNOST! Ve vzácných případech je možný falešně pozitivní Coombsův test. Důvodem mohou být časté krevní transfuze, stejně jako řada onemocnění: revmatoidní artritida, lupus erythematodes, sarkoidóza. Tento jev lze pozorovat i po odstranění sleziny, stejně jako při narušení reakce (časté protřepávání obsahu, přítomnost kontaminantů).

Coombsův test je metoda laboratorní výzkum, vyrobený ovlivněním hemaglutinace. Je založena na citlivosti protilátek k imunoglobulinům a enzymovým prvkům a také na jejich schopnosti aglutinovat erytrocyty potažené C3 nebo Lg.

Přímá Coombsova diagnostika

Používá se k detekci protilátek nebo komponent komplementu instalovaných na vnější straně buněk. Přímý Coombsův test se provádí následovně.

Použití takového vzorku

Přímá Coombsova diagnostika se používá v určitých případech, jako jsou:

• transfuzní účinky;
• autoimunitní hemolýza;
• hemolytická anémie způsobená léky.

Nepřímý Coombsův test

Tato diagnóza umožňuje detekovat protilátky proti buňkám v séru, které je inkubováno zpravidla s dárcovskými červenými krvinkami typu 0, a poté je proveden přímý test. Aplikovat nepřímá diagnóza Coombs v následujících případech:

Jak se připravit na analýzu

Pro přípravu na zkoušku platí určitá pravidla.

1. Pokud je pacient novorozenec, rodiče si musí být vědomi toho, že test pomůže diagnostikovat hemolytické onemocnění novorozence.
2. Pokud má pacient podezření na hemolytickou anémii, je třeba mu vysvětlit, že analýza mu umožní zjistit, zda je způsobena ochrannými poruchami, léky nebo jinými faktory.
3. Coombsův test, přímý ani nepřímý, nečiní žádná omezení ve výživě nebo dietě.
4. Je nutné pacienta upozornit, že vyšetření bude vyžadovat odběr krve ze žíly, a také mu přesně sdělit, kdy bude venepunkce provedena.
5. Také byste měli být na tuto možnost upozorněni nepohodlí po dobu přikládání obvazu na paži a samotného zákroku.
6. Léky, které mohou ovlivnit výsledek vzorku, by měly být vysazeny.

Mezi tyto léky patří:

• "Streptomycin";
• "Methyldopa";
• "Prokainamid";
• sulfonamidy;
• "Melfalan";
• "chinidin";
• "Rifampin";
• "Isoniazid";
• cefalosporiny;
• "Hydralazin";
• "chlorpromazin";
• "Levodopa";
• "tetracyklin";
• "difenylhydantoin";
• "Ethosuximid";
• "Penicilin";
• kyselina mefenamová.

Odběr krve se provádí ráno nalačno.

Jak se akce koná

Coombsův test se provádí v následujícím pořadí:

1. Při provádění diagnostiky u dospělého pacienta se po venepunkci odebírá krev do zkumavek s EDTA (ethylendiamintetraacetát).
2. Krev novorozence se odebírá z pupeční šňůry do kádinky obsahující EDTA.
3. Oblast vpichu se přitlačí vatovým tamponem, dokud se krvácení nezastaví.
4. Pokud se v místě venepunkce objeví modřina, předepisují se teplé obklady.
5. Po odběru krve je pacientovi umožněn návrat k užívání léků.
6. Je nutné informovat rodiče novorozence, že může být zapotřebí sekundární analýza pro sledování dynamiky anémie.

Výhody Coombsova testu

Takový výzkum má některé výhody, jmenovitě:

Nevýhody analýzy

Pozitivní Coombsův test je poměrně pracná vyšetřovací metoda, která vyžaduje charakteristickou přesnost provedení. Při jeho užívání se můžete setkat s určitými obtížemi, souvisejícími zejména s interpretací slabě pozitivních účinků.

Bylo zjištěno, že chybné negativní nebo slabě pozitivní reakce při výrobě Coombsových testů mohou být důsledky neuspokojivě aktivního mytí buněk, oslabení antiglobulinového činidla zbytky séra a také spojení s nemastnými povrchy, na kterých může antiglobulin opravit, čímž ztratí svou účinnost.

Coombsův test má ještě jednu nevýhodu – nízkou stabilitu antiglobulinového činidla, jehož získávání a skladování individuální vlastnosti, což obdobně znesnadňuje numerické posouzení vlivu antiglobulinového séra na hemaglutinaci.

Nemoci, které lze zjistit při vyšetření

Coombsova diagnostika umožňuje odhalit určité typy onemocnění, jako jsou:

• hemolytická malátnost novorozence;
• různé transfuzní reakce;
• autoimunitní hemolýza;
• hemolytická anémie způsobená léky.

Dnes je Coombsův test považován za poměrně populární systém krevních testů pro dospělé i novorozence. Umožňuje identifikovat mnoho různých onemocnění.