Diagnostikas metodes mūsdienās ļauj identificēt konkrētu slimību laboratorijā, izmantojot īpašas analīzes. Viens no tiem ir ar enzīmu saistīta imūnsorbcijas asins analīze, kas var apstiprināt iepriekš noteiktu diagnozi.
Enzīmu imūnanalīze ELISA ir viena no efektīvākajām un modernas metodes kas ļauj identificēt traucējumus, kas saistīti ar imūno un hormonālā nelīdzsvarotība, kā arī onkoloģiskos procesus. Pārbaudes laikā asinīs var noteikt antivielas, kas rodas, ja organismā ir infekcija. Ņemot vērā šo niansi, slimību var atklāt pat tās agrīnākajā attīstības stadijā.
Kas ir tehnikas pamatā?
ELISA analīzes rezultāti ir balstīti uz iegūšanu ķīmiskās reakcijas uz fermentiem, kas kalpo kā īpašas identifikācijas zīmes antivielu atpazīšanai. Līdz ar to imūnķīmisko reakciju laikā antivielas sāk mijiedarboties ar noteiktiem antigēniem. Tas viss dod pamatu to apgalvot nepatiesi rezultāti ziedojot asinis ELISA ir minimālas.
Pētījums ļauj mums noteikt summu imūnās šūnas, to īpašības, kā arī nepieciešamo antivielu klātbūtne
Rezultāts tiek uzskatīts par pozitīvu, ja tiek konstatēta šķīduma krāsa. Krāsa norāda, ka antigēni mijiedarbojas ar antivielu. Ja nekas tāds nenotiek, rezultāts ir negatīvs.
(saite uz 3. rakstu šajā failā), ļaujot novērtēt ķermeņa spēju pretoties infekcijas slimības un, parādot slimības fāzi, svarīgu vietu ieņem ar enzīmu saistītais imūnsorbcijas tests (ELISA). Šī pētījuma veikšana ļauj vispusīgi novērtēt asins aizsargfunkcijas aktivitāti un identificēt imūndeficīta stāvokli infekciozo patoloģiju, kā arī asins slimību, autoimūnu procesu un hormonālo problēmu gadījumā.
Kā vienā analīzē ir iespējams aptvert tik daudz mērķu, un kādas ir norādes uz tās īstenošanu? Mēģināsim to izdomāt.
Kāda ir asins analīze, izmantojot ELISA metodi?
Šis laboratorijas tests, kas ļauj noteikt specifisku antivielu (proteīna rakstura asinsaizsardzības faktoru) klātbūtni noteiktiem antigēniem (patogēniem aģentiem). Starp antivielām primārā nozīme ir imūnglobulīniem, kas var pastāvēt imūnkompleksu veidā.
Imūnglobulīni tiek ražoti sarežģītu cilvēka neirohumorālu reakciju rezultātā, kas rodas kā reakcija uz svešu antigēnu ievadīšanu. Katrs patogēna veids ražo savas specifiskas antivielas. Tie darbojas, “saistot” antigēnu vai patoloģisku mikroorganismu, veidojot kompleksu “antigēna-antivielu” savienojumu, kam seko neitralizācija, fermentatīvā līze, fagocitozes reakcijas un izvadīšana no organisma.
Piezīme:Ar noteiktu kompleksu klātbūtni ELISA metode nosaka pacienta patogēna vai kaitīgās vielas veidu.
Zināt pamatprincipi Jūs varat redzēt, kā darbojas cilvēka imūnsistēma, aplūkojot šis video pārskats:
Kas ir imūnglobulīni?
Ir atklātas un pētītas 5 galvenās imūnglobulīnu klases - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. pārējo loma vēl nav pilnībā noskaidrota un tiek pētīta zinātniski.
Piezīme:svarīgākais iekšā praktiskā medicīna Svarīgi ir A, M un G klases imūnglobulīni Definīcijas informācijas saturs ir balstīts uz dažādiem to parādīšanās, maksimuma un izzušanas laika periodiem.
Apskatīsim šo jautājumu sīkāk.
Galvenais uzdevums imūnglobulīns A (IgA) sastāv no gļotādu aizsargfunkcijām elpceļi, kuņģa-zarnu trakta un urīnceļu sistēma. Akūtā slimības sākumā tos nav iespējams identificēt. Šie aizsargājošie kompleksi parādās tikai no 2. slimības sākuma nedēļas, dažreiz vēlāk. Lielākā daļa imūnglobulīna A ir koncentrēta gļotādas audos. Apmēram aptuveni 80%. Atlikušās antivielas cirkulē asinīs. Galvenā funkcija ir mikroorganismu neitralizācija un iznīcināšana. Pēc norimšanas akūtas izpausmes slimību, šo imūnglobulīnu daudzums sāk samazināties un pilnībā izzūd līdz 8 nedēļām pēc slimības sākuma. Ja IgA tiek atklāts vēlāk, tas norāda uz hronisku procesu.
Akūtās fāzes galvenie un pirmie marķieri attīstās patoloģija ir M klases imūnglobulīni (IgM). Tie tiek atklāti 5. dienā pēc slimības sākuma. To klātbūtni asinīs var noteikt aptuveni 6 nedēļu laikā. Tad viņi sāk ātri pazust.
Atlikušo imūnreakciju raksturo klātbūtne asinīs G klases imūnglobulīni (IgG). Šo faktoru parādīšanās asinīs tiek konstatēta aptuveni mēnesi pēc slimības sākuma. Nākotnē tos var noteikt daudziem mēnešiem, gadiem un pat mūža garumā, piepildot aizsardzības funkcija no slimības atgriešanās (recidīva) un dažos gadījumos padarot neiespējamu patoloģijas sekundāro attīstību. Ja imūnglobulīna G daudzums atkal sāk palielināties, tad var aizdomas atkārtota inficēšanās. Līdzīgu secinājumu var izdarīt, veicot divus vai trīs paraugus, kas ņemti ar 2 nedēļu intervālu.
Imūnglobulīns D (IgD) atrodas uz B-limfocītiem, kas atrodami zemā koncentrācijā in veseliem cilvēkiem. Pēc 10 dzīves gadiem tas sasniedz maksimālās vērtības. Imūnglobulīna D daudzums palielinās grūtniecības laikā, pacientiem sistēmiskas slimības saistaudi, imūndeficīta izraisītas slimības.
Indikācijas enzīmu imūnanalīzes asins analīžu lietošanai
Antivielu noteikšana pret klātbūtni organismā patogēni mikrobi, izraisot:
- trichomoniāze;
- ureaplazmoze un
Ir imūnglobulīnu daudzuma palielināšanās un ar.
Diagnostika tiek veikta, lai noteiktu:
- herpetiskas slimības;
- grupas vīrusu hepatīts;
- Epšteina-Barra vīruss;
- citomegoalovīruss.
Izmantojot ELISA, jūs varat noteikt antivielu klātbūtni pret 600 alergēnu veidiem, noteikt imūndeficīta stāvokli, veikt visaptveroša pārbaude pirms transplantācijas operācijām veiciet visaptverošu analīzi, lai noteiktu ārstēšanas efektivitāti.
ELISA ir papildu metode vēža šūnu noteikšana.
Kā tiek veikta asins ELISA?
Enzīmu imūnanalīzei vairumā gadījumu tiek izmantotas pacienta asinis, dažreiz tiek savākti audi stiklveida, mugurkaula kanālu šķidrums, amnija šķidrums.
Asinis tiek ievilktas caur injekcijas adatu šļircē no kubitālās vēnas. Pētījums tiek veikts tukšā dūšā. Jāatceras, ka, ņemot dažus medicīnas preces var ietekmēt analīzes rezultātu. Pirms asins nodošanas jums ir jāatturas no smēķēšanas un alkohola lietošanas. Narkotiku lietošana var izkropļot rezultātus.
Imūnglobulīnu IgM, IgG, IgA negatīvu vērtību gadījumā var runāt par slimības vai tās sākuma fāzes neesamību, arī rezultāts ar mīnusiem ir iespējams, ja pilnīga atveseļošanās pēc ievērojama laika posma.
Ja IgA un IgM nav konstatēti un IgG ir pozitīvs, tad, visticamāk, mēs runājam par imunitātes veidošanos pēc infekcijas slimības vai pēc vakcinācijas.
Kad augsts titrs IgM ar negatīvām IgG, IgA vērtībām mēs varam secināt, ka pastāv akūta infekcijas slimība.
Vienlaicīgas pozitīvas imūnglobulīna rezultātu vērtības - IgA, IgM, IgG ir raksturīgas esošas hroniskas slimības recidīva akūtā fāzē.
Priekš hroniska infekcija, kas atrodas procesa norimšanas fāzē (remisija), ELISA uzrāda negatīvas imūnglobulīna M (IgM) vērtības, savukārt imūnglobulīnu G (IgG) un A (IgA) rezultāts būs pozitīvs.
Fermentu imūnanalīzes asins analīzes metodes priekšrocības
Galvenās ELISA metodes priekšrocības ir:
- zemas analīzes izmaksas;
- diagnostikas specifika, precizitāte;
- dinamiskā kontrole (analīzes atkārtošana, lai noteiktu ārstēšanas efektivitāti un slimības stadijas);
- iespēja veikt masveida izmeklējumus infekcijas zonās;
- rezultātu iegūšanas ātrums;
- relatīvā analīzes vienkāršība;
- izmantošanas iespēja informācijas tehnoloģijas apstrādē;
- drošību un nesāpīgumu pacientam.
Vai ir kādi asins ELISA trūkumi?
Galvenais pētījuma negatīvais aspekts ir iespēja iegūt viltus negatīvus un viltus pozitīvus datus. Pārpratumu cēlonis var būt tehniskas nepilnības vai medikamentu lietošana, kas var deformēt priekšstatu.
ELISA izmanto, lai noteiktu:
- (ascaris, pinworms);
- akūts un hroniska forma opisthorchiasis;
- trihineloze;
- Giardia klātbūtne (kā papildu analīze);
- leišmaniozes formas;
- amēbiāze;
- Toksoplazmas saturs;
Noslēgumā jāatzīmē, ka mūsdienu imunoloģija pastāvīgi atrodas attīstības stadijā, meklējot jaunas metodes slimību diagnosticēšanai un ārstēšanai.
Stepaņenko Vladimirs, ķirurgs
Kā tiek veikts ELISA pētījums?
Reakcijas mehānisms
Enzīmu imūntests ir balstīts uz imūnā reakcija antigēnu ar antivielu, un enzīma marķējuma pievienošana antivielām ļauj ņemt vērā antigēna-antivielu reakcijas rezultātu, parādoties fermentatīvai aktivitātei vai mainoties tās līmenim. reakcijas mehānismu var attēlot šādi:
|
Pirmā reakcija notiek starp konstatēto Ig (Ab) un attīrīto patogēna antigēnu (Ag), kas fiksēts uz imunoloģiskās tabletes iedobju virsmas. |
|
|
|
Lai identificētu izveidotos imūnkompleksus, tiek veikta otrā imunoloģiskā reakcija, kurā saistītais specifiskais Ig darbojas kā antigēns, un konjugāts, kas pārstāv Ig (Ab) ar atbilstošo cilvēka Ig, iezīmēts ar enzīmu -peroksidāzi (K). , tiek izmantots kā antivielas pret to. |
|
|
Tālāk notiek fermentatīvā reakcija, ko katalizē konjugāta molekulas fermentatīvā daļa.Šīs reakcijas substrāts ir bezkrāsaina viela - hromogēns, kas reakcijas laikā veido krāsainu vielu. Krāsas intensitāte iedobē zināmā mērā ir atkarīga no paraugā esošo imūnglobulīnu daudzuma. |
Rezultātu aprēķins
Enzīmu imūnanalīzes veikšana
Serodiagnostikai izmanto 96 bedrīšu polistirola plāksnes, uz kuru šūnu sieniņām ir iepriekš adsorbēts antigēns. Testa serumu pievieno tabletes šūnai. Šajā gadījumā tam tiek pievienotas antigēnam homologas antivielas. Nesaistītās antivielas tiek noņemtas, mazgājot. Pēc tam šūnām pievieno antivielas pret cilvēka imūnglobulīniem (antivielas), kas marķētas ar fermentu. Ja testa serumā bija nosakāmas antivielas, tad šajā posmā tās darbosies kā antigēni, ar kuriem reaģēs iezīmētās antivielas. Hrogēnas vielas (krāsvielas) pievienošana pēc mazgāšanas ļaus mums ņemt vērā attīstošās krāsas reakciju šūnās. Krāsas intensitāte ir proporcionāla fermenta daudzumam, tātad arī antivielu daudzumam.Mērot šķidruma optisko blīvumu (OD) šūnā un salīdzinot ar kontroles paraugu, antivielu koncentrāciju aprēķina vienībās. tilpuma.Visbiežāk izmanto rezultātu aprēķināšanu optiskā blīvuma vienībās.Jāņem vērā,ka katrai testa sistēmai ir savi rādītāji rezultātu fiksēšanai un normalitātes un patoloģijas rādītāji, pēc kuriem jāvadās interpretējot rezultātus.
Kādas infekcijas var noteikt ar ELISA palīdzību?
Galvenokārt mūsdienu veneroloģijā to izmanto sifilisa (kombinācijā ar citām reakcijām), HIV infekcijas, vīrusu hepatīta diagnosticēšanai. ierobežota vērtība hlamīdiju infekcijas, citomegalovīrusa infekcijas un citu herpes infekciju diagnostikai.ELISA metodi izmanto arī dažādu infekcijas slimību antivielu, hormonu līmeņa, autoantivielu un dažādu marķieru noteikšanai. onkoloģiskās slimības.
Kā interpretēt ELISA rezultātus
Antivielu klātbūtnes un līmeņa izpēte dažādas nodarbības dažos gadījumos palīdz noteikt posmus infekcijas process
|
Slimības stadija |
IgM |
IgA |
IgG |
|
Primārā fāze |
|||
|
Primārā fāze |
|||
|
Primārā fāze |
|||
|
Hroniskās fāzes saasināšanās |
|||
|
Hroniska fāze |
|||
|
Pagātne (izārstēta infekcija) |
|||
|
Atveseļošanās |
titra samazināšanās 2-4 reizes pēc tam veiksmīga ārstēšana |
titra samazināšanās 4-8 reizes 1-1,5 mēnešus pēc veiksmīgas ārstēšanas |
|
|
Negatīvs rezultāts |
Diemžēl šis svarīga priekšrocība ELISA, kā kvantitatīvā noteikšana antivielām praktiskajā darbā nav lielas nozīmes – t.i. neļauj noteikt precīzu diagnozi un neietekmē devu un receptes izrakstīšanas laiku zāles.
Kāda ir ELISA metodes nozīme sifilisa diagnostikā
ELISA metodi sifilisa diagnostikā pirmo reizi izmantoja 1975. gadā.Šobrīd to plaši izmanto sifilisa seroloģiskajai diagnostikai Krievijā un izmanto kā sifilisa apstiprinošu testu.Parasti tiek veikts pētījums, kas identificē t.s. kopējās antivielas pret Treponema pallidum antigēniem (IgM un IgG), lai gan atsevišķos gadījumos ir iespējams noteikt tikai “agrīnās” M klases antivielas.Sifilisa ELISA rezultāts kļūst pozitīvs pēc 3 nedēļām no inficēšanās brīža un paliek pozitīvs diezgan ilgu laiku laiks ilgu laiku pat pēc ārstēšanas (dažreiz visu mūžu).Tāpēc ELISA netiek izmantots kā tests, lai apstiprinātu sifilisa izārstēšanu.Vairumā gadījumu tiek veikta tikai kvalitatīva ELISA noteikšana – t.i. tikai pozitīvs vai negatīvs rezultāts, lai gan ir iespējama arī kvantitatīvā noteikšana.
(ELISA) ir asins analīzes metode laboratorijā, kuras pamatā ir īpašu šūnu - antivielu dažādas slimības. Metode ļauj ne tikai identificēt patogēnu, bet arī noteikt, kurā stadijā tas ir patoloģisks process. Pdjais ir oti svargs prognozei un turpmāka ārstēšana pacients.
Metodes priekšrocības un trūkumi
Starp visiem modernas metodes diagnostikas ELISA ir visnovatoriskākā un tehniski precīzākā. Tās galvenās priekšrocības ir:
- Iespēja meklēt visas esošās antivielas pret infekcijas slimībām pacienta asinīs.
- Augsta pētījuma metodes pieejamība. Mūsdienās ELISA testus var veikt jebkura vidēja izmēra laboratorija.
- Gandrīz 100% metodes specifika un jutīgums.
- Iespēja meklēt antivielas un antigēnus, kā arī noteikt patoloģiskā procesa stadiju un izsekot tā dinamikai, pateicoties daudzumu salīdzināšanai.
Šis priekšrocību skaits salīdzinājumā ar citiem testiem pilnībā aizēno vienu un vienīgo testa trūkumu: tas spēj noteikt antivielas, bet ne pašu patogēnu.
Galvenie termini analīzes novērtēšanai
Lai saprastu, kas ir ELISA analīze, kas tā ir un kā tā tiek veikta, jāiepazīstas ar speciālistu lietotajiem pamatjēdzieniem.
- Antiviela- proteīns, ko ražo cilvēka imūnsistēmas šūnas (B tipa limfocīti). Viņi atbild specifiska reakcija svešas vielas vai vielas iekļūšanai organismā. Vēl viens antivielu nosaukums ir imūnglobulīni, tie pieder dažādas klases: A, E, M, G. Tie atšķiras viens no otra pēc masas, reakcijas ātruma, pussabrukšanas perioda un vairākām citām īpašībām. Parasti cilvēka asinīs galvenokārt ir G klases imūnglobulīni. Ja rodas kāda infekcija, imūnglobulīnu A un M daudzums strauji palielinās. Imūnglobulīni E piedalās alerģiskās reakcijās.
- Antigēns- ārvalstu aģents, kuram ir organiska izcelsme un augsta molekulmasa. Visbiežāk tas pārstāv patogēnus vai to bioloģiski aktīvās vielas.
- Antigēna-antivielu komplekss jeb imūnkomplekss ir svešas vielas un imūnglobulīna tieša kombinācija, kas izraisa imūnreakcijas attīstību.
Metodes būtība un apjoms
Pacientiem bieži rodas jautājums: ELISA analīze, kas tā ir, kā tā tiek veikta un kam tā paredzēta? Jūs varat runāt par metodi pieejamā veidā, īsi aprakstot tās posmus.
Sagatavošanas posms. Laboratorijas ārsts izmanto īpašu plāksni ar 96 iedobēm. Uz katras iedobes virsmas tiek uzklāts konkrēta patogēna antigēns.
1. posms. Tiek ņemtas asinis, kuras pēc tam pilienu pa pilienam tiek uzklātas uz akas. Aka ierosina reakciju starp antigēnu un antivielu asinīs.
2. posms. Reakcija ar imūnkompleksu veidošanos bedrē rit pilnā sparā. Rezultātā veidojas noteiktas krāsas viela. Krāsas intensitāte ir atkarīga no antivielu daudzuma pacienta asinīs pret katru konkrēto patogēnu.
3. posms. Rezultāta novērtēšana ar fotometriju. Šim nolūkam tiek izmantota īpaša ierīce, ko sauc par spektrofotometru. To izmanto, lai salīdzinātu materiāla blīvumu caurumā un kontroles paraugā. Tālāk ierīce ar matemātiskā analīze rada rezultātu.
ELISA rezultātu un mērķa novērtēšana
Rezultāta interpretācija ir atkarīga no vairākām svarīgām niansēm:
- Urbuma optiskais blīvums.
- Plāksnes ar urbumiem (testu sistēmas) ražotājs.
- Laboratorija, kurā tika veikts pētījums.
Ņemot vērā šīs nianses, nekad nevajadzētu salīdzināt divus rezultātus no dažādām testēšanas sistēmām vai no dažādām laboratorijām.
Vēl viens svarīgs punkts, kas ietekmē ELISA analīzi, ir tā sauktā antivielu aviditāte. Šis parametrs raksturo antigēna daudzumu un saites stiprumu antigēna-antivielu kompleksā. Tās definīcija ir balstīta uz imūnkompleksa apstrādi ar urīnvielu, lai atrisinātu olbaltumvielu struktūras. Tas ļauj iznīcināt vājās saites starp antigēnu un antivielu un atstāt tikai spēcīgas. Aviditātes pētījuma nozīme ir tāda, ka to var izmantot, lai noteiktu infekcijas ilgumu. Šī informācija ir ārkārtīgi svarīga diagnozes noteikšanai grūtniecēm.
Asins analīze, izmantojot ELISA metodi, kalpo:
- Lai meklētu dažādus patogēnu antigēnus.
- Lai pētītu hormonālo līmeni.
- Autoimūnas patoloģijas klātbūtnes pārbaudei.
- Lai noteiktu vēža marķierus.
ELISA šķirnes
ELISA analīzei ir šādi veidi:
- Netiešs.
- Taisni.
- Konkurētspējīgs.
- Bloķēšanas metode.
Bet patiesībā šodien tiek izmantota tikai metode, ko sauc par ELISA (ar enzīmu saistīto imūnsorbcijas testu). Tas ir balstīts uz iepriekš aprakstīto antigēna-antivielu kompleksa veidošanās reakciju ar krāsas maiņu uz iedobes virsmas.
Kvantitatīvā ELISA asins analīze ir pelnījusi īpašu uzmanību. Tas nav analīzes veids, bet gan rezultātu novērtēšanas veids. Pateicoties tam, tiek aprēķināts antivielu skaits un noteiktas to klases. Rezultāts ir atkarīgs no parauga optiskā blīvuma, testa sistēmas, kurā tika veikta ELISA analīze, kā arī no laboratorijas.
Slimības, kas atklātas ar ELISA
ELISA ir asins analīze, kas atklāj liela summa dažādi infekcijas slimības. Turklāt gan vīrusu, gan vīrusu infekcijas tiek atklātas ar vienādu precizitāti. bakteriālas slimības. Piemēram, izmantojot imūnkompleksu veidošanos, var pierādīt šādu slimību patogēnu antigēnu klātbūtni:
Turklāt ELISA ļauj noteikt:
- Vēža marķieri - TNF (audzēja nekrozes faktors), PSA (prostatas specifiskais antigēns), CEA (karcinoembrionālais antigēns), CA-125 (olnīcu audzēja marķieris)
- Grūtniecības hormons ir hCG (cilvēka horiona gonadotropīns).
- Pārkāpumi reproduktīvā sistēma: sieviešu un vīriešu reproduktīvās sistēmas hormoni.
- Vairogdziedzera patoloģija.
Ir svarīgi pieminēt, ka ELISA tests HIV noteikšanai mūsdienās ir galvenais veids, kā diagnosticēt šo bīstamo slimību.
Materiāls ELISA un paraugu ņemšanas tehnikai
Lai veiktu ELISA, no pacienta tukšā dūšā ņem asinis. Pēc tam no asinīm iegūst serumu, ko tieši izmanto analīzei. Turklāt ELISA var veikt cerebrospinālais šķidrums(cerebrospinālais šķidrums), dzemdes kakla kanāla gļotas (dzemdes kakls), amnija šķidrums un pat stiklveida šķidrums (acs ābols).
Pirms asins nodošanas pacients tiek brīdināts, ka viņš nedrīkst lietot asinis zāles, un ārstēšana ar antibiotikām un pretvīrusu zāles Ieteicams pabeigt vismaz divas nedēļas pirms asins savākšanas.
Rezultātu saņemšanas un atšifrēšanas termiņi
Laiks, kas nepieciešams, lai saņemtu atbildi no laboratorijas, nav atkarīgs no tās darba ātruma, bet gan no tā, kādā stadijā ir slimība un kādas antivielas jau parādījušās asinīs. Tā, piemēram, imūnglobulīni M parādās aptuveni 2 nedēļas pēc asins ņemšanas analīzei un nozīmē, ka process ir primārās infekcijas stadijā vai ir notikusi hroniskas infekcijas saasināšanās. Tajā pašā laikā primārās infekcijas laikā parādās M un G klases antivielas. Turklāt pēdējo var noteikt pēc 4 nedēļām.
IgA parādās pēc 2-3 nedēļām atsevišķi vai kopā ar M, kas nozīmē akūta infekcija, vai kopā ar G, kas norāda uz hronisku procesu.
Tādas dažādi termini Antivielu parādīšanās asinīs liks pacientam ilgi gaidīt rezultātu. Ir pieļaujams gaidīt vairāk nekā mēnesi pēc ELISA testa veikšanas. Arī ārsta veiktā atšifrēšana un interpretācija prasa noteiktu laiku.
Pieejamo diagnostikas metožu saraksts pēdējās desmitgadēs strauji paplašinās, diagnostikas speciālisti cenšas apvienot visu iepriekšējo testu priekšrocības jaunās metodēs, atbrīvojoties no visiem iepriekšējiem trūkumiem.
IN Nesen sarakstā diagnostikas procedūras ietver enzīmu imūntestu - modernu un diezgan jaunu testu, par kuru vidusmēra cilvēks, kas nav saistīts ar medicīnu, ir maz zināms. Neskatoties uz to, šī tehnika strauji iegūst piekritējus kvalificēta medicīnas personāla vidū. Varat mēģināt noskaidrot, kas tas ir un kādos gadījumos to vajadzētu izmantot, iepazīstoties ar tā iezīmēm un galvenajām īpašībām.
Enzīmu imūntests ir instrumentāla laboratorijas metode, kuras pamatā ir molekulārā “antigēna-antivielu” reakcija, kas ļauj noteikt specifiskus proteīnus bioloģiskie materiāli(paraugi pētījumiem). Šādi proteīni var būt fermenti, dažādi mikroorganismi (vīrusi, baktērijas, sēnītes), vienšūņi utt.
Pēc metodes atklāšanas tai tika dots nosaukums ELISA tests, kam nav nekāda sakara ar atklājēju vārdiem, bet gan ir saīsinājums no pilna nosaukuma angļu valodā – enzim-linked immunosorbent assay. Ārsti visā pasaulē izmanto šo nosaukumu, daži ārsti krievvalodīgajās valstīs arī šādi dēvē šāda veida pētījumus.
Metodes galvenais princips ir molekulārā “antigēna-antivielu” reakcija.
Antigēns ir jebkura sveša molekula, kas nonāk cilvēka ķermenis kā daļa no mikroba, kas izraisa slimību. Antigēni parasti ir olbaltumvielu molekulas. Papildus mikroorganismiem šāds “svešinieks” var būt svešas asins šūnas, kas neatbilst grupai vai Rh faktoram.
Reaģējot uz šāda antigēna iekļūšanu organismā, tiek uzsākta imūnreakcija, kuras mērķis ir aizsargāt pret jebkādām svešām molekulām. Tas notiek īpašu vielu sintēzes dēļ imūnsistēma- antivielas (imūnglobulīni). Katra antiviela ir piemērota tikai konkrētam antigēnam un neitralizē patogēno “svešinieku”, saistoties ar to vienā kompleksā. Tieši šādas saistīšanās procesu sauc par “antigēna-antivielu” reakciju.
Antivielu veidi
Visas antivielas (imūnglobulīnus) iedala 5 veidos atkarībā no tā, kurā imūnās atbildes stadijā tās parādās:
ELISA diagnostikai visbiežāk svarīgs ir imūnglobulīnu IgG, IgM un IgA līmenis. Pēc to titriem var noskaidrot, vai persona ir slimojusi ar šo slimību iepriekš vai nesen inficējusies, vai viņam ir izveidojusies imunitāte un vai viņa ķermenis ir neaizsargāts pret patoloģijām.
Enzīmu imūnanalīzes priekšrocības un trūkumi
Ieslēgts Šis brīdis ELISA ir viena no precīzākajām un jutīgākajām metodēm. To ir pieņēmuši speciālisti dažādās medicīnas jomās un turpina paplašināt tā pielietojuma jomu.
Metodes priekšrocības
- Augsta iegūto datu precizitāte.
- Jutība (ļauj noteikt nepieciešamo vielu pat ar minimālu patogēna klātbūtni paraugā).
- Diagnozes iespēja pirmajās slimības dienās vai inkubācijas periodā.
- Datu iegūšanas ātrums salīdzinājumā ar citām līdzīgas precizitātes metodēm.
- Augsta procesa automatizācija un minimāla cilvēka līdzdalība, kas samazina izpildītāja kļūdu.
- Datu iegūšana par patoloģiskā procesa stadiju un izvēlētās terapijas efektivitāti.
- Nesāpīgs un minimāli invazīvs, vācot materiālu.
Metodes trūkumi
- Vairumā gadījumu tas ļauj noteikt ķermeņa reakciju uz patogēnu, nevis pašu patogēnu.
- Pirms pārbaudes ir precīzi jāzina iespējamā slimība, jo tests ir ļoti specifisks.
- Nepatiesu rādījumu iespējamība, ko izraisa tehniskas problēmas, medikamentu lietošana vai vairāku vienlaicīga klātbūtne hroniskas slimības vai pārkāpumiem vielmaiņas procesi pacienta ķermenī.
- Rezultātu interpretāciju drīkst veikt tikai augsti kvalificēts speciālists, jo iegūto datu interpretācijai ir nepieciešamas zināšanas īpaša apmācība un liels medicīnas zināšanu krājums noteiktā jomā.
- ELISA ir diezgan reti sastopams tests, tāpēc tas netiek veikts visās diagnostikas laboratorijās.
- Metode ir diezgan dārga, jo papildus reaģentiem laboratorijā ir jābūt daudzām dārgām iekārtām un īpašos institūtos ražotiem antigēnu paraugiem.
Kādos gadījumos izmanto enzīmu imūntestu?
Pilns enzīmu imūnanalīžu indikāciju saraksts ir ļoti plašs, tas ietver gandrīz visas medicīnas nozares.
Visbiežāk ELISA izmanto šādiem mērķiem:
- infekcijas slimību noteikšana;
- seksuāli transmisīvo slimību diagnostika;
- definīcija imūnsistēmas stāvoklis vai noteiktas autoimūnas slimības;
- audzēja marķieru identificēšana;
- hormonu noteikšana.
Gadījumā, ja ir infekcijas un vīrusu slimībasŠī metode ļauj identificēt šādas patoloģijas:
Turklāt ELISA ļauj ātri un efektīvi noteikt infarkta stāvokli, novērtēt organisma reproduktīvo potenciālu, identificēt alerģiju, to avotu utt.
Lai veiktu, tiek izmantota enzīmu imūnanalīzes tehnika klīniskie pētījumi jaunu medikamentu izstrādes gaitā un novērtējot to ietekmi uz cilvēka organismu.
Paraugu veidi un to atlases metodes pētījumiem
Visbiežāk enzīmu imūnanalīzes testa materiāls ir asinis, kas tiek ņemtas no pacienta antecubitālās vēnas. Paraugu ņemšana notiek tukšā dūšā, galvenokārt no rīta. Pēc paraugu ņemšanas tās izveidotās šūnas, kas traucē pētniecībai, tiek atdalītas un izņemtas no asinīm, atstājot tikai serumu.
Diagnosticējot uroģenitālās infekcijas, materiāls bieži kļūst par smērēm no dzimumorgānu gļotādas audiem, gļotām no urīnizvadkanāla vai dzemdes kakla, paraugiem no taisnās zarnas, skrāpējumiem no erozijas vai čūlas cirkšņa zonā un no citām ķermeņa daļām. Tamponus var ņemt arī no mutes dobums, kā arī no nazofarneksa.
Dažreiz enzīmu imūnanalīzi izmanto dzemdību un ginekoloģiskajā praksē grūtniecības laikā, lai noteiktu amnija šķidruma stāvokli. Šajā gadījumā par paraugu kļūst amnija šķidrums. Lai to izdarītu, ar garu adatu caurdurot amnija maisu, tiek uzņemts neliels šķidruma daudzums. Visas manipulācijas tiek veiktas ar steriliem instrumentiem, lai samazinātu iespējamos riskus.
Bieži vien materiāls kļūst par cerebrospinālu vai serozu šķidrumu. Tas notiek, kad vietējā anestēzija, ko ievada injekcijas veidā.
Speciālistam, kas nosūta uz pētījumu, ir jāprecizē, kādi materiāli ir nepieciešami enzīmu imūnanalīzei. Bieži vien tiek ņemti uzreiz vairāku veidu vai no dažādām vietām paraugi. Ārstam, kurš izsniedz nosūtījumu šāda veida izmeklējumam, pacientam jāpastāsta arī par gatavošanos biomateriāla ziedošanai.
Sagatavošanās enzīmu imūnanalīzei
Lai palielinātu pēc enzīmu imūnanalīzes iegūto datu precizitāti, sagatavošanās materiāla atlasei jāveic šādi:
- 10 dienas pirms pētījuma izslēdziet antibiotikas, pretvīrusu un pretsēnīšu līdzekļus;
- uz dienu ir jāizslēdz alkohols, smēķēšana un narkotisko vielu lietošana;
- tajā pašā periodā ir jāizvairās no fiziskas pārslodzes;
- Brīdiniet ārstam par visām zālēm, ko pacients lieto;
- Pastāstiet savam ārstam, ja esat grūtniece vai jums ir aizdomas par grūtniecību.
Vislabāk, ja pārbaudes materiālus savāc no rīta tukšā dūšā.
Ja diagnozes mērķis ir noteikt hormonālā līmeņa stāvokli, tad ir svarīgi nodrošināt mierīgs stāvoklis iepriekšējā dienā un izvairieties nervu spriedze. Sievietēm asins ziedošanu hormoniem skaidri nosaka periods ikmēneša cikls, ko ārsts apspriedīs pieņemšanas laikā.
2-3 dienas pirms paraugu ņemšanas no ēdienkartes jāizslēdz cepti un trekni ēdieni, kā arī pirms hepatīta pārbaudes neēdiet citrusaugļus vai citus oranžus vai dzeltenus augļus un dārzeņus.
Enzīmu imūnanalīzes rezultātu interpretācija
Kvalitatīvā pētījuma rezultātu parasti norāda ar zīmēm “+” (konstatēts) vai “-” (nav atrasts).
Pamatojoties uz noteiktu imūnglobulīnu grupu esamību vai neesamību, var izdarīt šādus secinājumus:
- JgM (-), JgG (-), JgA (-) - imunitāte pret slimību pilnībā nav (organisms iepriekš nav saskāries ar šāda veida antigēnu);
- JgM (-), JgG (+), JgA (-) - iepriekš bijusi sadursme ar šo antigēnu vai vakcīnu;
- JgM (+), JgG (-/+), JgA (-/+) - akūts patoloģisks process (visticamāk, primārais);
- JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) - hronisks process;
- JgM (+), JgG (+), JgA (+) - recidīvs;
- JgM (-) - atveseļošanās stadija.
Kvantitatīvie lielumi nes lielu informācijas slodzi, taču tos interpretēt var tikai ārstējošais ārsts, pamatojoties uz iepriekšējām indikācijām, pacienta vecumu un katras konkrētās slimības normām. Šī iemesla dēļ jūs pats nevarat novērtēt rezultātus.
Cik ilgi jāgaida rezultāti?
Šim paņēmienam ir daudz šķirņu, atkarībā no tā tiek noteikts datu iegūšanas periods. Vidējais ilgums ELISA diagnostika aizņem 4-6 stundas, kas ļauj sniegt rezultātus jau nākamajā dienā.
Garākās metodes aizņem līdz 10 dienām, piemēram, HIV infekcijas gadījumā.
Plkst steidzama vajadzība Ir iespējams izmantot ekspresmetodes, kurās atbilde tiek iegūta 1-2 stundu laikā.
Kur es varu veikt ELISA testu?
Tā kā šāda veida diagnostikas aprīkojums ir diezgan dārgs, ne visas laboratorijas to var iegādāties. Turklāt testiem, kas satur specifiskus antigēnus, ir ierobežots glabāšanas laiks (parasti apmēram 1 gads), un tāpēc tie ir pastāvīgi jāatjaunina.
Šo iemeslu dēļ valdība medicīnas iestādēm ELISA laboratorijas ne vienmēr ir pieejamas. Visbiežāk ir jāsazinās ar lieliem privātiem medicīnas vai lieliem diagnostikas centriem.
Lai veiktu ELISA testu, laboratorijai ir jābūt speciālai licencei, un darbiniekiem un laborantiem ir jāiziet īpaša apmācība.
Visbiežāk specifisks diagnostikas centrs vai laboratoriju iesaka ārsts, kas nosūta pacientu uz pārbaudi.
Fermentu imūntesta izmaksas
Cena par šis pētījums atkarīgs no valsts reģiona un pakalpojumu sniedzošās klīnikas līmeņa. Maskavā minimālā cena viena antigēna noteikšanai sākas no 700 rubļiem. Ja nepieciešams identificēt vairākus imūnglobulīnus vienlaikus, cena tiks summēta.
Kad steidzama analīze izmaksas palielinās par 150-200 rubļiem. katram antigēnam.
Neskatoties uz diezgan augstajām izmaksām, enzīmu imūnanalīze ļauj pacienta izmeklēšanu padarīt pēc iespējas informatīvāku un ātrāku, kas samazina laiku pirms ārstēšanas uzsākšanas un ļauj ātrāk stabilizēt cilvēka stāvokli.
Šajā video tiek prezentēta filma “Enzīmu imūnanalīzes pamati”.
