مطالعه متابولیسم لیپیدها ارزش بالینی و تشخیصی تعیین سطح چربی کل در پلاسمای خون (سرم) مقادیر بهینه پروفایل لیپیدی خون

هیپرلیپیدمی (هیپرلیپیدمی) -افزایش غلظت کل لیپیدهاشبیه پلاسما پدیده فیزیولوژیکیرا می توان 1-4 ساعت پس از غذا مشاهده کرد. هیپرلیپمی تغذیه ای بارزتر است، هر چه سطح لیپیدها در خون بیمار با معده خالی کمتر باشد.

غلظت لیپیدها در خون تحت تعدادی تغییر می کند شرایط پاتولوژیک:

سندرم نفروتیکنفروز لیپوئید، نفریت حاد و مزمن.

سیروز صفراوی کبد، هپاتیت حاد؛

چاقی - آترواسکلروز؛

کم کاری تیروئید؛

پانکراتیت و غیره

مطالعه سطح کلسترول (CH) فقط آسیب شناسی متابولیسم لیپید در بدن را منعکس می کند. هیپرکلسترولمی یک عامل خطر مستند است آترواسکلروز عروق کرونر. CS یک جزء ضروری از غشای تمام سلول‌ها است که ویژگی‌های فیزیکوشیمیایی خاص کریستال‌های CS و ترکیب مولکول‌های آن به نظم و تحرک فسفولیپیدها در غشاها در هنگام تغییر دما کمک می‌کند، که به غشاء اجازه می‌دهد در حالت فاز میانی قرار گیرد. ("ژل - کریستال مایع") و حفظ کنید عملکردهای فیزیولوژیکی. CS به عنوان پیش ساز در بیوسنتز هورمون های استروئیدی (گلوکوکورتیکوئیدها و مینرالوکورتیکوئیدها، هورمون های جنسی)، ویتامین D3 و همچنین استفاده می شود. اسیدهای صفراوی. به طور معمول، ما می توانیم 3 استخر کلسترول را تشخیص دهیم:

A - تبادل سریع (30 گرم)؛

ب - تعویض آهسته (50 گرم)؛

ب – تعویض بسیار آهسته (60 گرم).

کلسترول درون زا به مقدار قابل توجهی در کبد (80%) سنتز می شود. کلسترول اگزوژن به عنوان بخشی از محصولات حیوانی وارد بدن می شود. انتقال کلسترول از کبد به بافت های خارج کبدی انجام می شود

LDL. حذف کلسترول از کبد از بافت های خارج کبدی به داخل کبد توسط اشکال بالغ HDL (50٪ - LDL، 25٪ HDL، 17٪ VLDL، 5٪ -CM) تولید می شود.

هیپرلیپوپروتئینمی و هیپرکلسترولمی (طبقه بندی فردریکسون):

نوع 1 - هیپرکیلومیکرونمی؛

نوع 2 - a - hyper-β-lipoproteinemia، b - hyper-β و hyperpre-β-lipoproteinemia.

نوع 3 - دیس بتا لیپوپروتئینمی؛

نوع 4 - هیپر پیش-بتا لیپوپروتئینمی؛

نوع 5 - هیپر پیش-بتا لیپوپروتئینمی و هیپرکیلومیکرونمی.

آتروژن ترین آنها انواع 2 و 3 هستند.

فسفولیپیدها گروهی از لیپیدها هستند که علاوه بر اسید فسفریک (یک جزء ضروری)، الکل (معمولاً گلیسرول)، باقی مانده اسیدهای چرب و بازهای نیتروژن دار هستند. در عمل بالینی و آزمایشگاهی روشی برای تعیین سطح فسفولیپیدهای کل وجود دارد که سطح آن در بیماران مبتلا به هیپرلیپوپروتئینمی اولیه و ثانویه IIa و IIb افزایش می یابد. کاهش در تعدادی از بیماری ها رخ می دهد:

دیستروفی تغذیه؛

دژنراسیون کبد چرب،

سیروز پورتال؛

پیشرفت آترواسکلروز؛

پرکاری تیروئید و غیره

پراکسیداسیون لیپیدی (LPO) یک فرآیند رادیکال آزاد است که شروع آن با تشکیل گونه های فعال اکسیژن - یون سوپراکسید O 2 اتفاق می افتد. . ; رادیکال هیدروکسیل HO . ; رادیکال هیدروپراکسید HO 2 . ; اکسیژن تک O 2 ; یون هیپوکلریت ClO - . سوبستراهای اصلی LPO اسیدهای چرب چند غیراشباع هستند که در ساختار فسفولیپیدهای غشایی یافت می شوند. قوی ترین کاتالیزور یون های فلز آهن است. سکس یک فرآیند فیزیولوژیکی است که دارد مهمبرای بدن، از آنجایی که نفوذپذیری غشاء را تنظیم می کند، بر تقسیم و رشد سلولی تأثیر می گذارد، فاگوسنتز را آغاز می کند، مسیری برای بیوسنتز برخی موارد است. مواد بیولوژیکی(پروستاگلاندین ها، ترومبوکسان ها). سطح پراکسیداسیون لیپیدی توسط سیستم آنتی اکسیدانی کنترل می شود. اسید اسکوربیک, اسید اوریک، بتا کاروتن و غیره). از دست دادن تعادل بین دو سیستم منجر به مرگ سلول ها و ساختارهای سلولی می شود.

برای تشخیص، مرسوم است که محتوای محصولات پراکسیداسیون لیپیدی (کونژوگه های دین، مالون دی آلدئید، پایه های شیف) و غلظت آنتی اکسیدان اصلی اصلی - آلفا توکوفرول در پلاسما و گلبول های قرمز خون را با محاسبه ضریب MDA / TF تعیین کنید. . یک آزمایش جدایی ناپذیر برای ارزیابی LPO، تعیین نفوذپذیری غشاهای گلبول قرمز است.

2. تبادل رنگدانهمجموعه ای از دگرگونی های پیچیده مواد رنگی مختلف در بدن انسان و حیوان.

شناخته شده ترین رنگدانه خون هموگلوبین است (کروموپروتئینی که از قسمت پروتئینی گلوبین و یک گروه مصنوعی که با 4 هِم تشکیل شده است، هر هِم از 4 هسته پیرول تشکیل شده است که توسط پل های متین به هم متصل شده اند، در مرکز یک هسته وجود دارد. یون آهن با حالت اکسیداسیون 2 +). میانگین طول عمر یک گلبول قرمز 100-110 روز است. در پایان این دوره، تخریب و از بین رفتن هموگلوبین رخ می دهد. روند فروپاشی در حال حاضر آغاز می شود بستر عروقیبه عناصر سلولی سیستم سلول‌های تک هسته‌ای فاگوسیتیک (سلول‌های کوپفر کبد، هیستوسیت‌ها) ختم می‌شود. بافت همبند، پلاسماسل ها مغز استخوان). هموگلوبین در بستر عروقی به هاپتوگلوبین پلاسما متصل می شود و بدون عبور از فیلتر کلیه در بستر عروقی باقی می ماند. به دلیل عملکرد تریپسین مانند زنجیره بتا هاپتوگلوبین و تغییرات ساختاری ناشی از تأثیر آن در حلقه پورفیرین همو، شرایط برای تخریب آسان تر هموگلوبین در عناصر سلولی سیستم تک هسته ای فاگوسیتی ایجاد می شود - رنگدانه سبز مولکولی وردوگلوبین(مترادف: verdohemoglobin، choleglobin، pseudohemoglobin) مجموعه ای متشکل از گلوبین، یک سیستم حلقه پورفیرین شکسته و آهن فریک است. دگرگونی های بیشتر منجر به از دست دادن آهن و گلوبین توسط وردوگلوبین می شود که در نتیجه حلقه پورفیرین به صورت زنجیره ای باز می شود و رنگدانه صفرا سبز با وزن مولکولی کم تشکیل می شود. بیلیوردین. تقریباً تمام آن به صورت آنزیمی به مهمترین رنگدانه زرد زرد صفرا بازیابی می شود - بیلی روبین،که جزء معمولی پلاسمای خون در سطح است غشای پلاسماییهپاتوسیت دچار تجزیه می شود. در این حالت، بیلی روبین آزاد شده با لیپیدهای غشای پلاسمایی ارتباط موقتی ایجاد می کند و به دلیل فعالیت سیستم های آنزیمی خاص از طریق آن حرکت می کند. عبور بیشتر بیلی روبین آزاد به داخل سلول با مشارکت دو پروتئین حامل در این فرآیند اتفاق می افتد: لیگاندین (مقدار اصلی بیلی روبین را منتقل می کند) و پروتئین Z.

لیگاندین و پروتئین Z نیز در کلیه ها و روده ها یافت می شوند، بنابراین در صورت عملکرد ناکافی کبد، آنها آزادند تا ضعیف شدن فرآیندهای سم زدایی در این اندام را جبران کنند. هر دو کاملاً در آب محلول هستند، اما توانایی حرکت در لایه لیپیدی غشاء را ندارند. با اتصال بیلی روبین به اسید گلوکورونیک، سمیت ذاتی بیلی روبین آزاد تا حد زیادی از بین می رود. بیلی روبین آبگریز و بدون چربی دوست، به راحتی در لیپیدهای غشاء حل می شود و در نتیجه به میتوکندری ها نفوذ می کند، تنفس و فسفوریلاسیون اکسیداتیو در آنها را از هم جدا می کند، سنتز پروتئین، جریان یون های پتاسیم را از طریق غشای سلول ها و اندامک ها مختل می کند. این تأثیر منفی بر وضعیت مرکزی دارد سیستم عصبی، باعث ایجاد تعدادی از خصوصیات در بیماران می شود علائم عصبی.

گلوکورونیدهای بیلی روبین (یا بیلی روبین متصل، کونژوگه)، بر خلاف بیلی روبین آزاد، بلافاصله با معرف دیازو (بیلی روبین "مستقیم") واکنش می دهند. باید در نظر داشت که در خود پلاسمای خون، بیلی روبین که با اسید گلوکورونیک کونژوگه نشده است، می تواند با آلبومین مرتبط باشد یا خیر. آخرین بخش (بیلی روبین که با آلبومین، لیپیدها یا سایر اجزای خون مرتبط نیست) سمی ترین است.

گلوکورونیدهای بیلی روبین، به لطف سیستم های آنزیمی غشاء، به طور فعال از طریق آنها (بر خلاف گرادیان غلظت) به داخل حرکت می کنند. مجاری صفراوی، همراه با صفرا در مجرای روده دفع می شود. در آن، تحت تأثیر آنزیم های تولید شده توسط میکرو فلور روده، پیوند گلوکورونید شکسته می شود. بیلی روبین آزاد آزاد شده کاهش می یابد تا ابتدا مزوبیلی روبین و سپس مزوبیلینوژن (اوروبیلینوژن) در روده کوچک تشکیل شود. به طور معمول، بخش خاصی از مزوبیلینوژن در روده کوچک و در قسمت بالایی روده بزرگ از طریق سیستم جذب می شود. ورید پورتالوارد کبد می شود، جایی که تقریباً به طور کامل از بین می رود (با اکسیداسیون)، تبدیل به ترکیبات دی پیرولیک - پروپنت-دیوپنت و مزوبیلوکان می شود.

مزوبیلینوژن (اوروبیلینوژن) وارد گردش خون عمومی نمی شود. بخشی از آن، همراه با محصولات تخریب، دوباره به عنوان بخشی از صفرا (گردش خون انتروهپوتیک) به مجرای روده فرستاده می شود. با این حال، حتی با جزئی ترین تغییرات در کبد، آن را عملکرد مانعتا حد زیادی "حذف" می شود و مزوبیلینوژن ابتدا وارد گردش خون عمومی و سپس به ادرار می شود. بخش عمده ای از آن هدایت می شود روده کوچکبه ضخیم، جایی که تحت تأثیر میکرو فلور بی هوازی (اشریشیا کلی و سایر باکتری ها) با تشکیل استرکوبیلینوژن کاهش بیشتری می یابد. استرکوبیلینوژن حاصله (مقدار روزانه 100-200 میلی گرم) تقریباً به طور کامل از طریق مدفوع دفع می شود. در هوا اکسید می شود و به استرکوبیلین تبدیل می شود که یکی از رنگدانه های مدفوع است. بخش کوچکی از استرکوبیلینوژن از طریق غشای مخاطی روده بزرگ به سیستم ورید اجوف تحتانی جذب می شود و از طریق خون به کلیه ها منتقل می شود و از طریق ادرار دفع می شود.

بنابراین در ادرار فرد سالمهیچ مزوبیلینوژن (اوروبیلینوژن) وجود ندارد، اما حاوی مقداری استرکوبیلین است (که اغلب به اشتباه "اوروبیلین" نامیده می شود).

تعیین میزان بیلی روبین در سرم خون (پلاسما)، شیمیایی و روش های فیزیکی و شیمیاییمطالعات رنگ سنجی، اسپکتروفتومتری (دستی و خودکار)، کروماتوگرافی، فلورمتری و برخی دیگر.

یکی از نشانه های ذهنی مهم اختلال متابولیسم رنگدانه ها، ظهور زردی است که معمولاً زمانی که سطح بیلی روبین در خون 27-34 میکرومول در لیتر یا بیشتر باشد، مشخص می شود. علل هیپربیلی روبینمی عبارتند از: 1) افزایش همولیز گلبول های قرمز خون (بیش از 80٪). بیلی روبین کلنشان داده شده توسط رنگدانه غیر کونژوگه)؛ 2) اختلال در عملکرد سلول های کبدی و 3) تاخیر در خروج صفرا (هیپربیلی روبینمی منشا کبدی دارد اگر بیش از 80 درصد بیلی روبین کل بیلی روبین کونژوگه باشد). در مورد اول، آنها در مورد به اصطلاح زردی همولیتیک صحبت می کنند، در مورد دوم - در مورد زردی پارانشیمی (می تواند ناشی از نقص ارثی در فرآیندهای انتقال بیلی روبین و گلوکورونیداسیون آن باشد)، در مورد سوم - در مورد مکانیکی (یا انسدادی، احتقانی) یرقان.

با فرم پارانشیمی زردیتغییرات مخرب-دیستروفیک در سلول های پارانشیمی کبد و آنهایی که نفوذی در استروما هستند، منجر به افزایش فشار در کبد می شود. مجاری صفراوی. رکود بیلی روبین در کبد همچنین با تضعیف شدید فرآیندهای متابولیک در سلول های کبدی آسیب دیده تسهیل می شود که توانایی انجام عادی فرآیندهای مختلف بیوشیمیایی و فیزیولوژیکی را از دست می دهند، به ویژه انتقال بیلی روبین متصل از سلول ها به صفرا در برابر گرادیان غلظت. افزایش غلظت بیلی روبین کونژوگه در خون منجر به ظاهر شدن آن در ادرار می شود.

ظریف ترین علامت آسیب کبدی در هپاتیت ظاهر آن است مزوبیلینوژن(اوروبیلینوژن) در ادرار.

با زردی پارانشیمی، غلظت بیلی روبین متصل (کونژوگه) در خون عمدتا افزایش می یابد. محتوای بیلی روبین آزاد افزایش می یابد، اما به میزان کمتر.

پاتوژنز زردی انسدادی بر اساس توقف جریان صفرا به روده است که منجر به ناپدید شدن استرکوبیلینوژن از ادرار می شود. با زردی احتقانی، محتوای بیلی روبین کونژوگه در خون به طور عمده افزایش می یابد. زردی کلستاتیک خارج کبدی با یک سه گانه همراه است علائم بالینی: تغییر رنگ مدفوع، ادرار تیره و خارش پوست. کلستاز داخل کبدی از نظر بالینی با خارش پوست و یرقان ظاهر می شود. در تحقیقات آزمایشگاهیهیپربیلی روبینمی (به علت همراه)، بیلی روبینوری، افزایش آلکالین فسفاتاز با مقادیر نرمالترانس آمینازها در سرم خون

زردی همولیتیکناشی از همولیز گلبول های قرمز و در نتیجه افزایش تشکیل بیلی روبین است. افزایش بیلی روبین آزاد یکی از علائم اصلی زردی همولیتیک است.

که در عمل بالینیتشخیص هیپربیلی روبینمی عملکردی مادرزادی و اکتسابی، ناشی از نقض حذف بیلی روبین از بدن (وجود نقص در آنزیم و سایر سیستم ها برای انتقال بیلی روبین از طریق غشای سلولی و گلوکورونیداسیون آن در آنها). سندرم گیلبرت یک بیماری مزمن خوش خیم ارثی است که با هیپربیلی روبینمی غیرهمولیتیک غیرکونژوگه متوسط ​​رخ می دهد. هیپربیلی روبینمی پس از هپاتیت Kalka - نقص آنزیمی اکتسابی که منجر به افزایش سطح بیلی روبین آزاد در خون می شود، زردی مادرزادی غیر همولیتیک خانوادگی کریگلر - نایجار (عدم وجود گلوکورونیل ترانسفراز در سلول های کبدی)، زردی همراه با هیپوتوکسی مادرزادی تحریک می شود. سیستم آنزیم گلوکورونیل ترانسفراز)، زردی فیزیولوژیکی نوزادان، زردی دارویی و غیره.

اختلال در متابولیسم رنگدانه می تواند ناشی از تغییرات نه تنها در فرآیندهای تجزیه هم، بلکه در تشکیل پیش سازهای آن - پورفیرین ها (ترکیبات آلی حلقوی مبتنی بر یک حلقه پورفین متشکل از 4 پیرول که توسط پل های متین متصل شده اند) باشد. پورفیریا - گروه بیماری های ارثی، همراه با کمبود ژنتیکی در فعالیت آنزیم های دخیل در بیوسنتز هم، که در آن افزایش محتوای پورفیرین یا پیش سازهای آنها در بدن مشاهده می شود که باعث تعدادی علائم بالینی می شود (تشکیل بیش از حد محصولات متابولیک، باعث ایجاد علائم عصبی و (یا) افزایش حساسیت به نور پوست می شود.

متداول ترین روش های مورد استفاده برای تعیین بیلی روبین بر اساس برهمکنش آن با دیازورآجنت (معرف ارلیش) است. روش Jendrassik-Grof گسترده شده است. در این روش از مخلوط کافئین و بنزوات سدیم در بافر استات به عنوان "آزاد کننده" بیلی روبین استفاده می شود. تعیین آنزیمی بیلی روبین بر اساس اکسیداسیون آن توسط بیلی روبین اکسیداز است. تعیین بیلی روبین غیر کونژوگه با روش های دیگر اکسیداسیون آنزیمی امکان پذیر است.

در حال حاضر، تعیین بیلی روبین با استفاده از روش های "شیمی خشک" به طور فزاینده ای در حال گسترش است، به ویژه در تشخیص سریع.

ویتامین ها

ویتامین ها مواد ضروری کم مولکولی هستند که با غذا از بیرون وارد بدن می شوند و در تنظیم فرآیندهای بیوشیمیایی در سطح آنزیم نقش دارند.

شباهت ها و تفاوت های ویتامین ها و هورمون ها.

شباهت ها- تنظیم متابولیسم در بدن انسان از طریق آنزیم ها:

· ویتامین هابخشی از آنزیم ها هستند و کوآنزیم یا کوفاکتور هستند.

· هورمون هایا فعالیت آنزیم های موجود در سلول را تنظیم می کنند و یا القاء کننده یا سرکوب کننده در بیوسنتز آنزیم های ضروری هستند.

تفاوت:

· ویتامین ها- وزن مولکولی کم ترکیبات آلی، عوامل برون زا تنظیم کننده متابولیسم هستند و از مواد غذایی خارج می آیند.

· هورمون ها- ترکیبات آلی با وزن مولکولی بالا، عوامل درون زا، در غدد درون ریز بدن در پاسخ به تغییرات خارجی یا محیط داخلیبدن انسان و همچنین متابولیسم را تنظیم می کند.

ویتامین ها به دو دسته تقسیم می شوند:

1. محلول در چربی: A، D، E، K، A.

2. محلول در آب: گروه B، PP، H، C، THFA (اسید تتراهیدروفولیک)، اسید پانتوتنیک(B 3)، P (روتین).

ویتامین A (رتینول، ضد اکسروفتالمیک) –ساختار شیمیایی توسط یک حلقه β-یونون و 2 باقی مانده ایزوپرن نشان داده شده است. نیاز بدن 30-2.5 میلی گرم در روز است.

قدیمی ترین و علامت خاصهیپوویتامینوز A - همرالوپی (شب کوری) - اختلال در دید گرگ و میش. به دلیل کمبود رخ می دهد رنگدانه بصری- رودوپسین رودوپسین حاوی رتینال (آلدئید ویتامین A) به عنوان یک گروه فعال - واقع در میله های شبکیه است. این سلول ها (میله ها) سیگنال های نوری با شدت کم را درک می کنند.

رودوپسین = اپسین (پروتئین) + سیس رتینال.

هنگامی که رودوپسین توسط نور برانگیخته می شود، سیس-رتینال، در نتیجه بازآرایی های آنزیمی در داخل مولکول، به تمام ترانس شبکیه (در نور) تبدیل می شود. این منجر به بازآرایی ساختاری کل مولکول رودوپسین می شود. رودوپسین به اپسین و ترانس رتینال تجزیه می شود، که محرکی است که در انتهای آن تحریک می شود. عصب باصرهیک تکانه که سپس به مغز منتقل می شود.

در تاریکی، در نتیجه واکنش های آنزیمی، ترانس رتینال دوباره به سیس-رتینال تبدیل می شود و با ترکیب با اپسین، رودوپسین را تشکیل می دهد.

ویتامین A همچنین بر فرآیندهای رشد و نمو تأثیر می گذارد پوشش اپیتلیوم. بنابراین، با کمبود ویتامین، آسیب به پوست، غشاهای مخاطی و چشم مشاهده می شود که در کراتینه شدن پاتولوژیک پوست و غشاهای مخاطی خود را نشان می دهد. بیماران دچار خشکی قرنیه چشم می شوند، زیرا کانال اشکی در نتیجه کراتینه شدن اپیتلیوم مسدود می شود. از آنجایی که چشم با اشک شسته نمی شود، که اثر باکتریایی دارد، ملتحمه، زخم و نرم شدن قرنیه - کراتومالاسی - ایجاد می شود. با کمبود ویتامین A ممکن است به مخاط دستگاه گوارش، دستگاه تنفسی و دستگاه تناسلی ادراری. مقاومت تمام بافت ها در برابر عفونت ها مختل می شود. با ایجاد کمبود ویتامین در دوران کودکی، تاخیر رشد رخ می دهد.

در حال حاضر، مشارکت ویتامین A در محافظت از غشای سلولی در برابر اکسیدان ها نشان داده شده است - یعنی ویتامین A عملکرد آنتی اکسیدانی دارد.

لیپیدهاچربی هایی نامیده می شوند که با غذا وارد بدن می شوند و در کبد تشکیل می شوند. خون (پلاسما یا سرم) حاوی 3 دسته اصلی چربی است: تری گلیسیرید (TG)، کلسترول (CS) و استرهای آن، فسفولیپیدها (PL).
لیپیدها قادر به جذب آب هستند، اما بیشتر آنها در خون حل نمی شوند. آنها در حالت متصل به پروتئین (به شکل لیپوپروتئین یا به عبارت دیگر لیپوپروتئین) منتقل می شوند. لیپوپروتئین ها نه تنها در ترکیب، بلکه از نظر اندازه و چگالی نیز متفاوت هستند، اما ساختار آنها تقریباً یکسان است. قسمت مرکزی(هسته) توسط کلسترول و استرهای آن نشان داده می شود، اسیدهای چرب، تری گلیسیرید. پوسته مولکول از پروتئین ها (آپوپروتئین ها) و لیپیدهای محلول در آب (فسفولیپیدها و کلسترول غیر استری شده) تشکیل شده است. قسمت بیرونی آپوپروتئین ها قادر به تشکیل پیوند هیدروژنی با مولکول های آب است. بنابراین، لیپوپروتئین ها می توانند تا حدی در چربی ها و تا حدی در آب حل شوند.
شیلومیکرون ها پس از ورود به خون به گلیسرول و اسیدهای چرب تجزیه می شوند و در نتیجه لیپوپروتئین ها تشکیل می شوند. بقایای شیلومیکرون حاوی کلسترول در کبد پردازش می شود.
کلسترول و تری گلیسیریدها در کبد به لیپوپروتئین‌های با چگالی بسیار کم (VLDL) تبدیل می‌شوند که مقداری از تری‌گلیسریدها را به بافت‌های محیطی آزاد می‌کنند، در حالی که بقیه به کبد برمی‌گردند و به لیپوپروتئین‌های با چگالی کم (LDL) تبدیل می‌شوند.
L PN II ناقل کلسترول برای بافت های محیطی است که برای ساخت غشای سلولی و واکنش های متابولیکی استفاده می شود. در این حالت کلسترول غیر استری شده وارد پلاسمای خون می شود و به لیپوپروتئین های با چگالی بالا (HDL) متصل می شود. کلسترول استری شده (که به استرها متصل است) به VLDL تبدیل می شود. سپس چرخه تکرار می شود.
خون همچنین حاوی لیپوپروتئین های با چگالی متوسط ​​(IDL) است که بقایای شیلومیکرون ها و VLDL هستند و حاوی مقادیر زیادی کلسترول هستند. DILI در سلول های کبد با مشارکت لیپاز به LDL تبدیل می شود.
پلاسمای خون حاوی 3.5-8 گرم در لیتر لیپید است. افزایش سطح چربی خون را هیپرلیپیدمی و به کاهش آن هیپولیپیدمی می گویند. شاخص کل چربی خون تصویر دقیقی از وضعیت متابولیسم چربی در بدن ارائه نمی دهد.
تعیین کمی لیپیدهای خاص از اهمیت تشخیصی برخوردار است. ترکیب لیپیدی پلاسمای خون در جدول ارائه شده است.

ترکیب لیپیدی پلاسمای خون

کسر لیپیدی		نشانگر عادی
لیپیدهای عمومی		4.6-10.4 میلی مول در لیتر
فسفولیپیدها		1.95-4.9 میلی مول در لیتر
فسفر لیپید		1.97-4.68 mmol/l
چربی های خنثی		0-200 میلی گرم٪
تری گلیسیرید		0.565-1.695 mmol/l (سرم)
اسیدهای چرب غیر استری شده		400-800 میلی مول در لیتر
اسیدهای چرب آزاد		0.3-0.8 میکرومول در لیتر
کلسترول تام (هنجارهای سنی خاص وجود دارد)		3.9-6.5 mmol/l (روش یکپارچه)
کلسترول رایگان		1.04-2.33 میلی مول در لیتر
استرهای کلسترول		2.33-3.49 میلی مول در لیتر
HDL	م	1.25-4.25 گرم در لیتر
	و	2.5-6.5 گرم در لیتر
LDL		3-4.5 گرم در لیتر

تغییر دادن ترکیب چربیخون - دیس لیپیدمی - علامت مهمآترواسکلروز یا شرایط قبل از آن. آترواسکلروز نیز به نوبه خود است دلیل اصلی بیماری عروق کرونرقلب ها و او اشکال حاد(آنژین صدری و انفارکتوس میوکارد).
دیس لیپیدمی ها به اولیه، همراه با خطاهای متابولیسم ذاتی و ثانویه تقسیم می شوند. علل دیس لیپیدمی ثانویه کم تحرکی و تغذیه بیش از حد، اعتیاد به الکل، دیابت شیرین، پرکاری تیروئید، سیروز کبدی و نارسایی مزمن کلیه است. علاوه بر این، آنها می توانند در طول درمان با گلوکوکورتیکواستروئیدها، بلوکرهای B، پروژستین ها و استروژن ها ایجاد شوند. طبقه بندی دیس لیپیدمی ها در جدول ارائه شده است.

طبقه بندی دیس لیپیدمی ها

تایپ کنید	افزایش سطح خون
	لیپوپروتئین ها	لیپیدها
من	شیلومیکرون ها	کلسترول، تری گلیسیرید
بر	LDL	کلسترول (نه همیشه)
تایپ کنید	افزایش سطح خون
	لیپوپروتئین ها	لیپیدها
Nb	LDL، VLDL	کلسترول، تری گلیسیرید
III	VLDL، LPPP	کلسترول، تری گلیسیرید
IV	VLDL	کلسترول (نه همیشه)، تری گلیسیرید
V	Chylomicrons، VLDL	کلسترول، تری گلیسیرید

- گروهی از ناهمگن ساختار شیمیاییو خواص فیزیکی و شیمیایی مواد. در سرم خون آنها عمدتاً توسط اسیدهای چرب، تری گلیسیرید، کلسترول و فسفولیپیدها نشان داده می شوند.

تری گلیسیریدشکل اصلی ذخیره چربی در بافت چربی و انتقال چربی در خون هستند. مطالعه سطح تری گلیسیرید برای تعیین نوع هیپرلیپوپروتئینمی و ارزیابی خطر ابتلا ضروری است. بیماری های قلبی عروقی.

کلسترولاجرا می کند توابع ضروری: شامل غشای سلولی، پیش ساز اسیدهای صفراوی، هورمون های استروئیدی و ویتامین D است و به عنوان یک آنتی اکسیدان عمل می کند. حدود 10 درصد از جمعیت روسیه دارند افزایش سطحکلسترول در خون این وضعیت بدون علامت است و می تواند منجر به بیماری های جدی(ضایعات عروقی آترواسکلروتیک، بیماری عروق کرونر قلب).

لیپیدها در آب نامحلول هستند، بنابراین توسط سرم خون در ترکیب با پروتئین ها منتقل می شوند. کمپلکس های لیپید + پروتئین نامیده می شوند لیپوپروتئین ها. و پروتئین هایی که در انتقال چربی نقش دارند نامیده می شوند آپوپروتئین ها.

چندین کلاس در سرم خون وجود دارد لیپوپروتئین ها: شیلومیکرون ها، لیپوپروتئین های با چگالی بسیار کم (VLDL)، لیپوپروتئین های با چگالی کم (LDL) و لیپوپروتئین های با چگالی بالا (HDL).

هر بخش لیپوپروتئین عملکرد خاص خود را دارد. در کبد سنتز می شود و عمدتاً تری گلیسیرید را حمل می کند. بازی کردن نقش مهمدر آتروژنز لیپوپروتئین های کم چگالی (LDL)سرشار از کلسترول، کلسترول را به بافت های محیطی می رساند. سطوح VLDL و LDL باعث رسوب کلسترول در دیواره عروقی می شود و عوامل آتروژنیک در نظر گرفته می شوند. لیپوپروتئین های با چگالی بالا (HDL)در انتقال معکوس کلسترول از بافت‌ها شرکت می‌کند، آن را از سلول‌های بافتی که بیش از حد بارگیری می‌کنند دور می‌کنند و به کبد منتقل می‌کنند، که آن را «استفاده» کرده و از بدن خارج می‌کند. بالا سطح HDLبه عنوان یک عامل آنتی آتروژنیک (از بدن در برابر تصلب شرایین محافظت می کند) در نظر گرفته می شود.

نقش کلسترول و خطر ابتلا به آترواسکلروز بستگی به این دارد که در کدام بخش لیپوپروتئین قرار می گیرد. برای ارزیابی نسبت لیپوپروتئین های آتروژنیک و آنتی آتروژنیک از آن استفاده می شود شاخص آتروژنیک

آپولیپوپروتئین ها- اینها پروتئین هایی هستند که روی سطح لیپوپروتئین ها قرار دارند.

آپولیپوپروتئین A (پروتئین آپوآ)جزء پروتئینی اصلی لیپوپروتئین ها (HDL) است که کلسترول را از سلول های بافت محیطی به کبد منتقل می کند.

آپولیپوپروتئین B (پروتئین ApoB)بخشی از لیپوپروتئین ها است که لیپیدها را به بافت های محیطی منتقل می کند.

اندازه‌گیری غلظت آپولیپوپروتئین A و آپولیپوپروتئین B در سرم خون، دقیق‌ترین و بدون ابهام‌ترین تعیین نسبت خواص آتروژنیک و آنتی‌آتروژنیک لیپوپروتئین‌ها را فراهم می‌کند که به عنوان خطر ایجاد ضایعات عروقی آترواسکلروتیک و بیماری عروق کرونر قلب طی پنج سال آینده ارزیابی می‌شود. .

به مطالعه پروفایل چربیشامل شاخص های زیر است: کلسترول، تری گلیسیرید، VLDL، LDL، HDL، ضریب آتروژنیسیته، نسبت کلسترول به تری گلیسیرید، گلوکز. این پروفایل می دهد اطلاعات کاملدر مورد متابولیسم لیپید، به شما امکان می دهد خطرات ایجاد ضایعات عروقی آترواسکلروتیک، بیماری عروق کرونر قلب را تعیین کنید، وجود دیس لیپوپروتئینمی را شناسایی کرده و آن را تایپ کنید، و همچنین، در صورت لزوم، درمان مناسب برای کاهش چربی را انتخاب کنید.

نشانه ها

افزایش تمرکزکلسترولاین دارد ارزش تشخیصیبا هیپرلیپیدمی اولیه خانوادگی (اشکال ارثی بیماری)؛ بارداری، کم کاری تیروئید، سندرم نفروتیک، بیماری های انسدادی کبد، بیماری های پانکراس ( پانکراتیت مزمن, نئوپلاسم های بدخیم), دیابت قندی.

کاهش تمرکزکلسترولدارای ارزش تشخیصی برای بیماری های کبدی (سیروز، هپاتیت)، گرسنگی، سپسیس، پرکاری تیروئید، کم خونی مگالوبلاستیک است.

افزایش تمرکزتری گلیسیریدارزش تشخیصی برای هیپرلیپیدمی اولیه (اشکال ارثی بیماری) دارد. چاقی، مصرف بیش از حدکربوهیدرات، الکلیسم، دیابت، کم کاری تیروئید، سندرم نفروتیک، مزمن نارسایی کلیهنقرس، پانکراتیت حاد و مزمن.

کاهش تمرکزتری گلیسیریددارای ارزش تشخیصی برای هیپولیپوپروتئینمی، پرکاری تیروئید، سندرم سوء جذب است.

لیپوپروتئین های با چگالی بسیار کم (VLDL)برای تشخیص دیس لیپیدمی (نوع IIb، III، IV و V) استفاده می شود. غلظت بالای VLDL در سرم خون به طور غیرمستقیم خواص آتروژنیک سرم را منعکس می کند.

افزایش تمرکزلیپوپروتئین با چگالی کم (LDL)دارای ارزش تشخیصی برای هیپرکلسترولمی اولیه، دی لیپوپروتئینمی (نوع IIa و IIb) است. برای چاقی، زردی انسدادی، سندرم نفروتیک، دیابت شیرین، کم کاری تیروئید. تعیین سطح LDL برای تجویز درمان طولانی مدت که هدف آن کاهش غلظت لیپید است، ضروری است.

افزایش تمرکزدارای ارزش تشخیصی برای سیروز کبدی و اعتیاد به الکل است.

کاهش تمرکزلیپوپروتئین با چگالی بالا (HDL)دارای ارزش تشخیصی برای هیپرتری گلیسریدمی، تصلب شرایین، سندرم نفروتیک، دیابت شیرین، عفونت های حاد، چاقی ، سیگار کشیدن

تعیین سطح آپولیپوپروتئین Aبرای ارزیابی اولیه خطر بیماری عروق کرونر قلب نشان داده شده است. شناسایی بیماران با استعداد ارثی به آترواسکلروز در یک نسبت در سن جوانی; نظارت بر درمان با داروهای کاهنده چربی

افزایش تمرکزآپولیپوپروتئین Aارزش تشخیصی برای بیماری های کبدی و بارداری دارد.

کاهش تمرکزآپولیپوپروتئین Aدارای ارزش تشخیصی برای سندرم نفروتیک، نارسایی مزمن کلیه، تری گلیسیریدمی، کلستاز، سپسیس است.

ارزش تشخیصیآپولیپوپروتئین B- دقیق ترین شاخص خطر ابتلا به بیماری های قلبی عروقی، همچنین کافی ترین شاخص اثربخشی درمان با استاتین است.

افزایش تمرکزآپولیپوپروتئین Bدارای ارزش تشخیصی برای دیس لیپوپروتئینمی (انواع IIa، IIb، IV و V)، بیماری عروق کرونر قلب، دیابت شیرین، کم کاری تیروئید، سندرم نفروتیک، بیماری های کبدی، سندرم Itsenko-Cushing، پورفیری است.

کاهش تمرکزآپولیپوپروتئین Bدارای ارزش تشخیصی پرکاری تیروئید، سندرم سوء جذب، کم خونی مزمن, بیماری های التهابیمفاصل، مولتیپل میلوما.

روش شناسی

تعیین بر روی آنالایزر بیوشیمیایی "Architect 8000" انجام می شود.

آماده سازی

برای مطالعه پروفایل لیپیدی (کلسترول، تری گلیسیرید، HDL-C، LDL-C، آپو پروتئین لیپوپروتئین ها (Apo A1 و Apo-B)

لازم است از فعالیت بدنی، نوشیدن الکل، استعمال دخانیات و داروهاتغییر رژیم غذایی حداقل دو هفته قبل از خونگیری.

خون فقط با معده خالی، 12-14 ساعت پس از آخرین وعده غذایی گرفته می شود.

ترجیحا پذیرایی صبحگاهی داروهاپس از خونگیری (در صورت امکان) انجام دهید.

اقدامات زیر نباید قبل از اهدای خون انجام شود: تزریق، سوراخ کردن، ماساژ عمومیبدن، آندوسکوپی، بیوپسی، ECG، معاینه اشعه ایکس، به ویژه با معرفی ماده حاجب، دیالیز.

اگر باز هم بی اهمیت بود استرس ورزش- قبل از اهدای خون باید حداقل 15 دقیقه استراحت کنید.

آزمایش لیپید زمانی انجام نمی شود بیماری های عفونیاز آنجایی که بدون توجه به نوع عامل عفونی یا وضعیت بالینی بیمار، سطح کلسترول تام و HDL-C کاهش می یابد. پروفایل لیپیدی فقط باید بعد از بررسی شود بهبودی کاملصبور.

رعایت دقیق این توصیه ها بسیار مهم است، زیرا تنها در این صورت نتایج آزمایش خون قابل اعتماد به دست می آید.

برای تعیین کمی لیپیدهای کل سرم خون، اغلب از روش رنگ سنجی با یک معرف فسفووانیلین استفاده می شود. لیپیدهای رایج پس از هیدرولیز با اسید سولفوریک با یک معرف فسفووانیلین واکنش داده و رنگ قرمز تشکیل می دهند. شدت رنگ متناسب با محتوای کل لیپیدهای سرم خون است.

1. معرف ها را به سه لوله آزمایش اضافه کنید نمودار زیر:

2. محتویات لوله های آزمایش را با هم مخلوط کرده و 60-40 دقیقه در تاریکی بگذارید. (رنگ محلول از زرد به صورتی تغییر می کند).

3. دوباره مخلوط کنید و چگالی نوری 500-560 نانومتر (فیلتر سبز) را در برابر نمونه کور در یک کووت با ضخامت لایه 5 میلی متر اندازه گیری کنید.

4. مقدار کل لیپیدها را با استفاده از فرمول محاسبه کنید:

که در آن D 1 انقراض نمونه آزمایشی در کووت است.

د 2 - از بین رفتن محلول کالیبراسیون لیپیدها در کووت.

X غلظت کل لیپیدها در محلول استاندارد است.

مفهوم "لیپیدهای کل" را تعریف کنید. مقداری را که به دست آورده اید با مقادیر عادی مقایسه کنید. چه فرآیندهای بیوشیمیایی را می توان با این شاخص قضاوت کرد؟

آزمایش 4. تعیین محتوای b- و pre-b-لیپوپروتئین در سرم خون.

2. مجموعه ای از پیپت ها.

3. میله شیشه ای.

5. کووت، 0.5 سانتی متر.

معرف ها 1. سرم خون.

2. کلرید کلسیم، محلول 0.025 M.

3. هپارین، محلول 1٪.

4. آب مقطر.

1. 2 میلی لیتر کلرید کلسیم 0.025 مولار را در لوله آزمایش ریخته و 0.2 میلی لیتر سرم خون اضافه کنید.

2. دانسیته نوری نمونه (D 1) را روی FEC-e در طول موج 630-690 نانومتر (فیلتر قرمز) در یک کووت با ضخامت لایه 0.5 سانتی متر در برابر آب مقطر مخلوط کرده و اندازه گیری کنید. مقدار چگالی نوری D 1 را ثبت کنید.

3. سپس 0.04 میلی لیتر از محلول هپارین 1% (1000 واحد در 1 میلی لیتر) را به کووت اضافه کنید و دقیقاً پس از 4 دقیقه دوباره چگالی نوری D2 را اندازه گیری کنید.

تفاوت در مقادیر (D 2 - D 1) مربوط به چگالی نوری ناشی از رسوبات b-lipoproteins است.

محتوای لیپوپروتئین های b و pre-b را با استفاده از فرمول محاسبه کنید:

که در آن 12 ضریب تبدیل به g/l است.

محل بیوسنتز b-lipoproteins را مشخص کنید. چه عملکردی در بدن انسان و حیوان انجام می دهند؟ مقداری را که به دست آورده اید با مقادیر عادی مقایسه کنید. در چه مواردی انحراف از مقادیر نرمال مشاهده می شود؟

درس شماره 16. "متابولیسم لیپید (قسمت 2)"

هدف درس: بررسی فرآیندهای کاتابولیسم و ​​آنابولیسم اسیدهای چرب.

سوالات آزمون:

1. مکانیسم بیوشیمیایی اکسیداسیون اسیدهای چرب.

2. متابولیسم اجسام کتون: تشکیل، هدف بیوشیمیایی. چه عواملی باعث بروز کتوز در حیوانات می شود؟

3. مکانیسم بیوشیمیایی سنتز اسیدهای چرب.

4. بیوسنتز تری گلیسرول. نقش بیوشیمیایی این فرآیند.

5. بیوسنتز فسفولیپیدها. نقش بیوشیمیایی این فرآیند.

تاریخ اتمام ________ نقطه ____ امضای معلم ____________

کار تجربی.

آزمایش 1. روش اکسپرس برای تعیین اجسام کتون در ادرار، شیر، سرم خون (تست لستراد).

دستگاه ها 1. قفسه با لوله های آزمایش.

2. مجموعه ای از پیپت ها.

3. میله شیشه ای.

4. کاغذ فیلتر.

معرف ها 1. پودر معرف.

3. سرم خون.

4. شیر.

1. مقدار کمی (0.1-0.2 گرم) پودر معرف را روی کاغذ صافی در نوک اسکالپل قرار دهید.

2. چند قطره سرم خون را به پودر معرف بریزید.

حداقل سطح اجسام کتون در خون که می دهد واکنش مثبت، برابر با 10 میلی گرم در 100 میلی لیتر (10 میلی گرم درصد). سرعت توسعه رنگ و شدت آن متناسب با غلظت اجسام کتون در نمونه آزمایش است: اگر رنگ بنفش بلافاصله ظاهر شود - محتوای آن 50-80 میلی گرم٪ یا بیشتر است. اگر بعد از 1 دقیقه ظاهر شود، نمونه حاوی 30-50 میلی گرم٪ است. ایجاد رنگ ضعیف پس از 3 دقیقه نشان دهنده وجود اجسام کتونی 10-30 میلی گرم است.

لازم به یادآوری است که تست در هنگام تعیین استو بیش از 3 برابر حساس تر است استیک اسیداز استون از بین تمام اجسام کتونی سرم انسان، اسید استواستیک غالب است، اما در خون گاوهای سالم، 90-70 درصد اجسام کتونی را اسید b-هیدروکسی بوتیریک تشکیل می دهد و در شیر 92-87 درصد است.

بر اساس نتایج تحقیق خود نتیجه بگیرید. توضیح دهید چرا تشکیل بیش از حد اجسام کتون در بدن انسان و حیوان خطرناک است؟

آنها چگالی متفاوتی دارند و شاخص متابولیسم لیپید هستند. روش های مختلفی برای تعیین کمی چربی کل وجود دارد: رنگ سنجی، نفلومتریک.

اصل روش. محصولات هیدرولیز لیپیدهای غیر اشباع ترکیبی قرمز رنگ با معرف فسفووانیلین تشکیل می دهند که شدت رنگ آن با محتوای کل لیپیدها رابطه مستقیم دارد.

بیشتر لیپیدها در خون در حالت آزاد یافت نمی شوند، بلکه به عنوان بخشی از کمپلکس های پروتئین-لیپیدی هستند: شیلومیکرون ها، α-لیپوپروتئین ها، β-لیپوپروتئین ها. لیپوپروتئین ها را می توان با روش های مختلفی جدا کرد: سانتریفیوژ در محلول های نمکیچگالی های مختلف، الکتروفورز، کروماتوگرافی لایه نازک. در طول اولتراسانتریفیوژ، شیلومیکرون ها و لیپوپروتئین ها با چگالی های مختلف جدا می شوند: بالا (HDL - α-لیپوپروتئین ها)، کم (LDL - β-لیپوپروتئین ها)، بسیار کم (VLDL - pre-β-lipoproteins) و غیره.

فراکسیون های لیپوپروتئینی از نظر مقدار پروتئین، وزن مولکولی نسبی لیپوپروتئین ها و درصد اجزای لیپیدی منفرد متفاوت هستند. بنابراین، α-لیپوپروتئین ها، حاوی مقدار زیادی پروتئین (50-60٪)، تراکم نسبی بالاتری دارند (1.063-1.21)، در حالی که β-لیپوپروتئین ها و پر-β-لیپوپروتئین ها حاوی پروتئین کمتر و مقدار قابل توجهی لیپید هستند. تا 95 درصد از وزن مولکولی نسبی کل و چگالی نسبی کم (1.01-1.063).

اصل روش. هنگامی که LDL سرم با معرف هپارین تعامل می کند، کدورت ظاهر می شود که شدت آن از طریق فتومتریک تعیین می شود. معرف هپارین مخلوطی از هپارین و کلرید کلسیم است.

مواد مورد مطالعه: سرم خون

معرف ها: محلول 0.27% CaCl 2، محلول 1% هپارین.

تجهیزات: میکروپیپت، FEC، کووت با طول مسیر نوری 5 میلی متر، لوله های آزمایش.

پیش رفتن. 2 میلی لیتر از محلول 0.27٪ CaCl 2 و 0.2 میلی لیتر سرم خون را در یک لوله آزمایش اضافه کرده و مخلوط کنید. چگالی نوری محلول (E1) را در برابر محلول 0.27% CaCl 2 در کووت ها با استفاده از فیلتر قرمز (630 نانومتر) تعیین کنید. محلول کووت داخل لوله آزمایش ریخته می شود، 0.04 میلی لیتر از محلول هپارین 1 درصد با میکروپیپت اضافه می شود، مخلوط می شود و دقیقاً 4 دقیقه بعد دوباره چگالی نوری محلول (E 2) در همان شرایط تعیین می شود. .

تفاوت در چگالی نوری محاسبه و در 1000 ضرب می شود - ضریب تجربی پیشنهاد شده توسط لدوینا، زیرا ساخت منحنی کالیبراسیون با تعدادی از مشکلات همراه است. پاسخ در g/l بیان می شود.

x(g/l) = (E 2 - E 1) 1000.

. محتوای LDL (b-lipoproteins) در خون بسته به سن، جنسیت متفاوت است و به طور معمول 3.0-4.5 گرم در لیتر است. افزایش غلظت LDL در تصلب شرایین، زردی انسدادی، هپاتیت حاد، بیماری های مزمنکبد، دیابت، گلیکوژنوز، زانتوماتوز و چاقی، در b-plasmocytoma کاهش یافت. میانگین کلسترول LDL حدود 47 درصد است.

تعیین کلسترول تام در سرم خون بر اساس واکنش لیبرمن-بورکهارد (روش Ilk)

کلسترول اگزوژن به مقدار 0.3-0.5 گرم حاصل می شود محصولات غذاییو درون زا به مقدار 0.8-2 گرم در روز در بدن سنتز می شود. به خصوص کلسترول زیادی در کبد، کلیه ها، غدد فوق کلیوی و دیواره شریان سنتز می شود. کلسترول از 18 مولکول استیل کوآ، 14 مولکول NADPH و 18 مولکول ATP سنتز می شود.

هنگامی که استیک انیدرید و اسید سولفوریک غلیظ به سرم خون اضافه می شود، مایع متوالی به رنگ قرمز، آبی و در نهایت تبدیل می شود. رنگ سبز. این واکنش با تشکیل کلستریلن اسید سولفونیک سبز ایجاد می شود.

معرف ها: معرف Liebermann-Burkhard (مخلوطی از اسید استیک یخچالی، انیدرید استیک و اسید سولفوریک غلیظ به نسبت 1:5:1)، محلول استاندارد (1.8 گرم در لیتر) کلسترول.

تجهیزات: لوله آزمایش خشک، پیپت خشک، FEC، کووت با طول مسیر نوری 5 میلی متر، ترموستات.

پیش رفتن. تمام لوله های آزمایش، پیپت ها، کووت ها باید خشک باشند. هنگام کار با معرف Liebermann-Burkhard باید بسیار مراقب باشید. 2.1 میلی لیتر از معرف لیبرمن-بورکهارد در یک لوله آزمایش خشک قرار داده می شود، 0.1 میلی لیتر سرم خون غیر همولیز شده به آرامی در امتداد دیواره لوله آزمایش اضافه می شود، لوله آزمایش به شدت تکان داده می شود و سپس به مدت 20 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد ترموست می شود. . رنگ سبز زمردی ایجاد می شود که در FEC با فیلتر قرمز (630-690 نانومتر) در برابر معرف Liebermann-Burkhard رنگ سنجی می شود. چگالی نوری به دست آمده در FEC برای تعیین غلظت کلسترول بر اساس نمودار کالیبراسیون استفاده می شود. غلظت کلسترول یافت شده در 1000 ضرب می شود، زیرا 0.1 میلی لیتر سرم در آزمایش گرفته شده است. ضریب تبدیل به واحدهای SI (mmol/l) 0.0258 است. محتوای معمولیکلسترول تام (آزاد و استری شده) در سرم خون 2.97-8.79 mmol/l (115-340 میلی گرم درصد).

ساخت نمودار کالیبراسیون. از محلول استاندارد کلسترول، که در آن 1 میلی لیتر حاوی 1.8 میلی گرم کلسترول است، 0.05 را بگیرید. 0.1; 0.15; 0.2; 0.25 میلی لیتر و با معرف Liebermann-Burkhard به حجم 2.2 میلی لیتر (به ترتیب 2.15؛ 2.1؛ 2.05؛ 2.0؛ 1.95 میلی لیتر) تنظیم شد. مقدار کلسترول در نمونه 0.09 است. 0.18; 0.27; 0.36; 0.45 میلی گرم. محلول های استاندارد کلسترول به دست آمده و همچنین لوله های آزمایش به شدت تکان داده می شوند و به مدت 20 دقیقه در ترموستات قرار می گیرند و پس از آن نورسنجی می شوند. نمودار کالیبراسیون بر اساس مقادیر انقراض بدست آمده در نتیجه نورسنجی محلول های استاندارد ساخته شده است.

ارزش بالینی و تشخیصی. اگر متابولیسم لیپید مختل شود، کلسترول می تواند در خون انباشته شود. افزایش کلسترول در خون (هیپرکلسترولمی) در تصلب شرایین، دیابت شیرین، زردی انسدادی، نفریت، نفروز (به ویژه نفروز لیپوئید)، کم کاری تیروئید مشاهده می شود. کاهش کلسترول در خون (هیپوکلسترولمی) با کم خونی، ناشتا، سل، پرکاری تیروئید، کاشکسی سرطان، زردی پارانشیمی، آسیب به سیستم عصبی مرکزی، شرایط تب، هنگام تجویز مشاهده می شود.