Діагностика є найважливішим етапом у лікуванні будь-якого захворювання. Залежно від правильно поставленого діагнозу знаходиться не лише успішне лікування, але й можливість запобігти розвитку ускладнень та супутніх патологій. Що це таке серологічне дослідження? Це метод діагностичного аналізубіологічного зразка пацієнта щодо наявності антитіл і антигенів. Тест дозволяє виявити десятки захворювань, фазу хвороби та контролювати лікування.
Навіщо призначається дослідження
Цей тип медичного дослідженняшироко застосовується у різних галузях медицини. Реакція зв'язування комплементу або РЗК спрямована на виявлення в сироватці крові специфічних клітин, антитіл, які виробляє організм для боротьби з інфекціями та вірусами.
Ізосерологічне дослідження спрямоване визначення групи крові, резус-фактора та інших параметрів крові пацієнта.
- Серологічний аналіз крові використовується в гінекології для виявлення захворювань, що передаються статевим шляхом. Також серологічне титрування використовується для комплексного обстеження майбутніх мам (токсоплазмоз, ВІЛ, сифіліс та ін.). При постановці на облік вагітних це обов'язковий тест.
- У педіатрії серологічні реакції застосовуються для підтвердження діагнозу «дитячих» хвороб (вітрянка, краснуха, кір та ін.), якщо симптоми виражені не яскраво і немає можливості визначити недугу за клінічними показаннями.
- Серологічні дослідження дозволяють венерологам швидко та безпомилково ставити діагноз. При подібних симптомахта скаргах аналіз крові дозволяє виявити антитіла до сифілісу, лямбліозу, уреплазмозу, хламідіозу, герпесу та інших захворювань.
- Гастроенерологи, гепатологи та інфекціоністи використовують серологічний аналіз крові для діагностики вірусного гепатиту.
- Підозра на будь-яке інфекційне або вірусне захворюванняможе виникнути у терапевта. Для підтвердження використовуються серологічні реакцію специфічні антитіла в організмі. Проводиться аналіз на енцефаліт, бруцельоз, кашлюк, вірус Денге, вірус імунодефіциту, алергію та ін.
- Серологічна діагностикадля госпіталізації грає важливу роль. Цей метод діагностики може показати, на якій стадії розвитку знаходиться хвороба, і чи потрібно негайне оформлення стаціонару або досить амбулаторного лікування.
Як біологічний матеріал для дослідження може використовуватися зразок слини та калу, але найчастіше використовується венозна кров пацієнта. Аналіз для серологічних реакцій має братися з ліктьової вени у лабораторних умовах. Перед тим як здати аналіз слід проконсультуватися з лікарем і підготуватися.
Підготовка до аналізу
Цей тип дослідження проводиться як і муніципальних, і у комерційних установах. Вибір краще зробити на користь тієї лабораторії, яка має найсучасніше обладнання і має тільки позитивні відгуки про свою роботу. Для зайнятих пацієнтів лабораторія може надавати послуги із забору крові на РЗК будинку.
У цьому випадку пацієнтові не доводиться витрачати час на дорогу, а черги виключені.
Підготовка до забору венозної крові включає кілька загальних правил. Перед тестом не можна вживати їжу, тобто аналіз береться натще. Здаючи кров необхідно перебувати у стані спокою та не хвилюватися. Перед процедурою не слід проходити інші процедури (рентгенографія, ультразвукове обстеженнята ін.). За кілька тижнів до забору крові за погодженням з лікарем скасовується прийом лікарських препаратів. Деякі рекомендації залежить від хвороби, яку проводиться тест. Наприклад, при дослідженні на гепатит за 2 дні до аналізу з раціону виключають жирну їжута алкоголь.
Реакція флюоресценції
Один із видів серологічних реакцій – флюоресценція або РІФ. Цей метод дослідження проводиться з використанням реагенту, який підсвічує шукані антитіла у сироватці крові. Для постановки серологічної реакції прямого типу або ПІФ специфічні антитіла позначаються флюоресцентною речовиною. Це найшвидший тип досліджень, що проводиться на один етап.
Інший спосіб, який називається непрямим або РНІФ, проводиться у 2 стадії. На першій специфічні клітини (антитіла) немає флюоресцирующих міток, але в другій використовуються відповідні мічені антитіла виявлення комплексу антиген-антитіло. Реакція світіння з'являється лише після зв'язку зі специфічним антитілом. Результат маніпуляцій оцінюється спеціальним приладом, який оцінює інтенсивність випромінювання, а також визначає форму та розмір досліджуваних об'єктів. Інфекційний агент визначається з достовірністю 90-95% залежно від типу та стадії захворювання.
Імуноферментний аналіз
Для дослідження ІФА серологічні реакції проводять із використанням унікальних стабільних реагентів. Речовини з міткою приєднуються до певного типу антитіл. У результаті серологія дає якісну чи кількісну оцінку за зразком крові пацієнта. Якщо субстрат немає виражених маркерів, результат вважається негативним. У разі якісного дослідження позитивний результатозначають лише присутність антитіл у біологічному зразку.
Серодиагностика з кількісним визначенням клітин антитіл дає повнішу картину. За сумою виявлених клітин лікар може сказати, чи знаходиться захворювання в початковій стадії, гострої чи це загострення хронічної форми хвороби. При постановці діагнозу також враховується кінічна картина та скарги пацієнта.
Особливості досліджень
При дослідженні бруцельозу проводиться контроль сироватки крові на самозатримку без антигену. Це дозволяє підвищити достовірність тесту. Результат аналізу на бруцельоз може бути позитивним, негативним або невираженим, тобто таким, що викликає сумніви. При отриманні сумнівних результатів рекомендується повторний забір крові. Також бруцельоз діагностується за результатами посіву крові, дослідження кісткового мозку та спинно-мозкової рідини.
Переваги та недоліки серології
Діагностика із застосуванням серологічних методів широко використовується в сучасної медицини. Особливо актуальним є цей тест при виявленні вірусних та інфекційних захворювань. Цей тип аналізів використовується при географічних скринінгах і медичних обстеженнях для запобігання епідеміологічних спалахів.
Серологічні аналізи мають низку переваг.
- Серологічний тест будь-якого типу має високу достовірність.
- Аналізи на серологію проводять досить швидко. Результат РЗК відомий вже через добу, а отримати його можна за допомогою інтернету, не виходячи з дому. У особливих випадкахпри стаціонарному лікуванні тест проводиться протягом кількох годин.
- РСК дозволяє контролювати розвиток хвороби, і відстежувати ефективність лікування, що проводиться.
- Серологічні методи дослідження відрізняються невисокою вартістю та доступні пацієнтам.
Серологічні аналізи мають деякі недоліки. Для того, щоб обстеження дало максимально достовірну інформацію, аналіз крові слід проводити з урахуванням часу інкубаційного періоду хвороби.
Простий герпес 1 та 2 типу можна визначити лише через 2 тижні після зараження, а дослідження на вірус імунодефіциту проводиться через 1, 3 та 6 місяців після контакту з хворим.
Достовірність дослідження може вплинути людський чинник. Якщо пацієнт нехтує правилами підготовки до дослідження або лаборант припустився помилки в обробці зразка крові, можливе отримання помилкового або сумнівного результату. Така ситуація виникає приблизно 5% випадків. Як правило, лікар на підставі клінічних показань легко обчислює помилку РЗК.
Серологічне дослідження крові сучасний та надійний спосібвиявлення таких небезпечних захворюваньяк ВІЛ, гепатит, бруцельоз, ЗПСШ та ін. Цей розділ медицини спрямований на вивчення плазми крові людини та її імунологічних властивостей. Серологічний метод поширений, а вартість досліджень у приватних лабораторіях порівняно невисока. Для проведення аналізу використовується сучасне устаткування, що зводить до мінімуму вплив людського чинника результати досліджень.
Що свідчить серологічний аналіз крові? Діагностичні заходи- це найважливіший етап у терапії будь-якого захворювання. Успіх лікування залежить не тільки від призначених препаратів, а й багато в чому від того, наскільки правильно було встановлено діагноз.
Крім того, діагностика дозволяє запобігти ускладненням і хвороби, що супруводжують. За допомогою серологічного аналізу крові пацієнта виявляють наявність антитіл та антигенів. Дослідження допомагає знайти безліч захворювань, визначити їх фазу та контролювати проходження лікування.
Що таке серологія?
Серологією називається галузь імунології, що вивчає реакції антигенів на антитіла. Цей розділ медицини займається вивченням плазми крові та її імунологічних характеристик.
На сьогоднішній день серологічний аналіз крові на антитіла – це надійний спосіб виявлення вірусу імунодефіциту людини, гепатиту, бруцельозу, ЗПСШ та інших небезпечних для життя захворювань. Розберемося, у яких випадках його призначають.
Показання до призначення
Серологічний аналіз крові необхідний виявлення збудника хвороби при труднощі у постановці діагнозу.
Для проведення цієї реакції в плазму вводять антигени збудників, а потім процес, що протікає, вивчає лаборант. Або здійснюють зворотну реакцію: в інфіковану кров вводять антитіла визначення конкретної приналежності збудника.
Сфера використання
Дане дослідження використовують у різних галузях медицини. За допомогою цієї реакції виявляють специфічні клітини та антитіла, що виробляються організмом для того, щоб боротися з інфекціями та вірусами.
Крім того, за допомогою серологічного методу визначається група крові людини.
Подібне серологічне дослідження аналізу крові використовують у гінекології для діагностики хвороб, що передаються статевим шляхом. Практикується такий метод і для комплексних обстеженьвагітних жінок (виявлення токсоплазмозу, ВІЛ, сифілісу тощо). Проходження цього тесту є обов'язковим під час постановки на облік у жіночій консультації.
У дітей серологічна реакція використовується для підтвердження діагнозу так званих дитячих захворювань (вітрянки, кору, краснухи і т. д.) у тому випадку, якщо симптоматика не має виражених проявів і неможливо виявити хворобу, аналізуючи клінічні показання.
Виявлення венеричних захворювань
Для венерологів це тестування насправді незамінне і дозволяє поставити діагноз дуже точно.
При змащеній клінічній картині серологічний аналіз крові на сифіліс, лямбліоз, уреаплазмоз, хламідіоз, герпес та інші захворювання дає змогу швидко виявити наявність антитіл.
Вірусні та інфекційні захворювання
Серологічний аналіз активно використовується гастроентерологами, гепатологами та інфекціоністами для діагностики вірусного гепатиту.
Розшифрування серологічного аналізу крові дає можливість визначити стадію перебігу захворювання та відповісти на питання, наскільки необхідна госпіталізація в Наразі. Як правильно підготуватись?
Підготовка до здачі аналізу
Серологічний аналіз крові роблять і в державних, і комерційних клініках. Перевагу варто віддати лабораторії, що має сучасне обладнання і кваліфікований персонал.
Біологічними зразками для дослідження можуть бути слина та кал, але здебільшого використовується венозна кров хворого. Кров для серологічного тесту беруть із ліктьової вени в умовах лабораторії. Перед тим, як здавати аналіз, слід проконсультуватися з лікарем щодо підготовки до цієї процедури.
Для підготовки до здачі аналізу на серологічне дослідження необхідно дотримати кілька нескладних правил.
Кров здають у спокійному станідо їди, тобто натще. Перед цим не слід проходити інші дослідження, наприклад, робити рентген, УЗД і т.д.
Потрібно виключити прийом антибактеріальних та інших препаратів за кілька тижнів до здачі крові. Певні рекомендації у разі залежать від захворювання, яким робиться тест. Наприклад, дослідження на гепатит передбачає виключення жирної їжі та алкоголю за 48 годин до процедури.
Реакція флюоресценції
Серед різновидів серологічних реакцій є реакція флюоресценції. За цією методикою використовується реагент, що підсвічує антитіла у сироватці крові.
Постановка серологічної реакції прямого типу передбачає маркування специфічних антитіл речовиною, що флюорескує. Така реакція є найшвидшою та проводиться одноетапно.
Інший варіант проведення такого аналізу має назву непрямого, або РНДФ. Проводиться він у два етапи. У першому етапі антитіла не маркуються флюоресцирующими мітками, але в другому застосовуються відповідно зазначені антитіла визначення антигенів і антитіл. Світло виникає тільки після того, як відбувається зв'язування зі специфічним антитілом.
Що ж свідчить серологічний аналіз крові? Підсумок усієї процедури оцінює спеціальний прилад, який аналізує силу випромінювання, виявляє форму та розмір об'єкта, що досліджується. Збудники інфекційних захворювань виявляються з результатом, достовірність якого становить 90-95%, залежно від виду та стадії патології.
Імуноферментний аналіз
У цих видах серологічного дослідження використовуються унікальні стабільні реагенти. Зазначені речовини начебто приклеюються до шуканих антитіл. У результаті ми отримуємо якісний чи кількісний результат.
Якщо виражених маркерів не виявилося, результат буде вважатися негативним. Якщо присутність антитіл у біологічних зразках при якісному дослідженні виявлено, результат аналізу вважається позитивним. При кількісне визначенняклітинний аналіз дає більш точний результат.
Аналізуючи показники аналізу (наприклад, суму виявлених клітин) фахівець визначає, чи перебуває захворювання на початковому етапі, гострої стадії, або це загострилася хронічна формапатології. Щоб поставити діагноз, лікар враховує як дані серологічного дослідження, а й клінічну картинузахворювання.
Особливості даного тесту
Проведення даного аналізу не завжди здатне дати 100% впевненість у тому, що певне захворювання виявлено. Буває так, що результати можуть бути неоднозначними і потрібне проведення інших процедур.
Наприклад, під час дослідження на бруцельоз сироватка крові проходить контроль самозатримки без антигену. Це значно підвищує достовірність тестування. Аналіз на бруцельоз може мати позитивне чи негативне значення, а також викликати сумніви.
При отриманні сумнівних результатів, які мають однозначної трактування, рекомендовано здати аналіз повторно. Крім того, бруцельоз можна виявити в результаті посівів крові, дослідивши кістковий мозокта спинно-мозкову рідину.
Плюси серологічного аналізу крові
Діагностичні методики з використанням серологічних реакцій широко використовуються в сучасній медичної практики. Особливо це робиться щодо вірусних і інфекційних патологій.
Ці ж аналізи застосовуються при проведенні географічного скринінгу та медичного обстеженняз метою запобігання епідеміологічному поширенню інфекції.
До переваг методу можна віднести:
- Високий рівень достовірності.
- Швидке проведення реакції та отримання результатів. Результати РЗК відомі вже через 24 години. За особливої ситуації, в умовах стаціонару, аналіз буде готовий за кілька годин.
- Здійснення контролю розвитку хвороби та ефективності терапії, що проводиться.
- Невисока вартість та доступність для пацієнтів.
Мінуси методу
Проте серологічні дослідження мають свої недоліки.
До них відноситься той факт, що при проведенні аналізу слід враховувати Інкубаційний періодзахворювання, щоб отримати більш достовірну картину.
Наприклад, визначення простого герпесупершого чи другого типу можливе лише через 14 днів із моменту зараження. Аналіз на наявність вірусу імунодефіциту проводять через 30 днів, через 90 днів та через півроку після контакту з інфікованою людиною.
Безумовно, на достовірність результатів може впливати і людський фактор: нехтування правилами підготовки до забору крові чи помилка, допущена лаборантом під час проведення реакції.
За статистикою, помилковий результат може бути отриманий у 5% випадків. Досвідчений лікарпри обстеженні пацієнта, вивчивши клінічну картину, у більшості випадків може обчислити допущену помилку.
Серологічні дослідження (тести)- лабораторні методи досліджень, засновані на виявленні антитіл або антигенів у біологічному матеріаліпацієнта. Найчастіше для аналізу використовується кров, рідше - сеча, слина, гнійне відділення або зразки тканин, взяті в ході біопсії.
Галузь застосування
- Визначення групи крові.
- Виявлення специфічних пухлинних білків - онкомаркерів (наприклад, при підозрах на рак яєчників, передміхурової залози, сечового міхура, шлунка та ін).
- Діагностика вірусних, бактеріальних, грибкових, протозойних інфекцій (ВІЛ, сифілісу, токсоплазмозу, хламідіозу, краснухи, герпесу, гельмінтозів, кліщового енцефалітуі т.д.).
- Визначення гормонів, ферментів та лікарських препаратів, що містяться в досліджуваному біоматеріалі у мінорних концентраціях (менше 10-10 г/л).
Суть методу серологічні тести
Серологічні тести відрізняються за технікою постановки, однак вони є результатом взаємодії антигенів (чужорідних сполук) з відповідними антитілами. Дослідження складається із двох послідовних фаз. Перша фаза характеризується взаємодією між антигенами та антитілами з утворенням імунних комплексів ( позитивна реакція). У другій фазі з'являються зовнішні ознаки, що підтверджують наявність цих самих комплексів (залежно від типу реакції це можуть бути помутніння випробуваного розчину, зміна його кольору, випадання пластівців тощо). Відсутність видимих фізичних явищ оцінюється як негативний результат тесту.
Підготовка до серологічних досліджень
Залежить від виду дослідження. Про особливості здачі конкретного аналізуповинен розповісти медичний фахівецьпід час запису на процедуру.
Скласти необхідний серологічний тест ви можете у клініці «Спектра». Ми замовляємо проведення аналізів у найкращих столичних лабораторіях, які працюють за європейськими стандартами, що є гарантією отримання швидких та достовірних результатів. Наші лікарі допоможуть розшифрувати висновок та дадуть рекомендації щодо подальшої діагностики.
Реакція Вассермана (RW) - це найпопулярніша імунологічна реакція, що застосовується для діагностики сифілісу, починаючи з часу відкриття в 1906 році. RW відноситься до групи реакцій зв'язування комплементу (РСК) і ґрунтується на здатності сироватки крові хворого на сифіліс утворювати комплекс з відповідними антигенами. Сучасні методики РСК, що застосовуються для діагностики сифілісу, значно відрізняються за своїми антигенами від класичної реакції Вассермана, проте термін «реакція Вассермана» за ними традиційно зберігається.
У крові людини, що заразилася, з'являються антитіла, вироблені імунною системою. У збуднику захворювання - блідої трепонеми (Treponema pallidum), міститься антиген кардіоліпін, який викликає вироблення антитіл, що визначаються за допомогою RW. Позитивна реакція Вассермана якраз і свідчить про наявність таких антитіл у крові людини і на цій підставі робиться висновок про наявність захворювання.
Показником результату дослідження в РЗК служить реакція гемолізу. У реакції беруть участь два компоненти: еритроцити барана та гемолітична сироватка. Гемолітичну сироватку одержують шляхом імунізації кролика еритроцитами барана. Її інактивують протягом 30 хвилин при температурі 56°С. Результати РЗК оцінюють залежно від наявності або відсутності гемолізу в дослідних пробірках. Наявність гемолізу пояснюється тим, що якщо в сироватці, що випробовується, відсутні сифілітичні антитіла, то реакція антиген-антитіло не відбувається, і весь комплемент йде на реакцію баранячі еритроцити-гемолізин. А якщо специфічні антитіла, комплемент повністю йде на реакцію антиген-антитіло і гемолізу не відбувається.
Усі інгредієнти для реакції Вассермана беруться в однаковому обсязі – 0,5 або 0,25 мл. Для міцної фіксації комплементу на специфічному комплексі суміш досліджуваної сироватки, антигену і комплементу поміщають в термостат при температурі 37° на 45-60 хв. (I фаза реакції), після чого вносять гемолітичну систему, що складається з баранячих еритроцитів та гемолітичної сироватки (II фаза реакції). Далі пробірки знову поміщають у термостат на 30-60 хвилин до гемолізу в контролі, в якому антиген замінюють фізіологічним розчином, а замість досліджуваної сироватки вносять фізіологічний розчин. Антигени для реакції Вассермана випускають у готовому вигляді із зазначенням титру та способу розведення.
Максимальну позитивність реакції Вассермана прийнято позначати кількістю хрестів: ++++ (різко позитивна реакція) – свідчить про повну затримку гемолізу; +++ (позитивна реакція) - відповідає значній затримці гемолізу, ++ (слабкопозитивна реакція) - свідчення часткової затримки гемолізу, + (сумнівна реакція) - відповідає про незначну утримування гемолізу. Негативна RW характеризується повним гемолізом у всіх пробірках досвіду.
Однак, іноді можливі і хибнопозитивні результати - це пов'язано з тим, що кардіоліпін у деякій кількості міститься і в клітинах людського організму. Імунна система людини не створює антитіл проти «власного» кардіоліпіну, але з цього правила бувають і винятки, завдяки яким позитивна реакція Вассермана виникає у здорової людини. Особливо це спостерігається після перенесених важких вірусних та інших захворювань — пневмонії, малярії, хвороб печінки і крові, при вагітності, тобто. у моменти серйозного ослаблення імунітету.
Якщо лікар підозрює у пацієнта хибнопозитивний результат на реакцію Вассермана, він може призначити йому ряд додаткових дослідженьякі зазвичай застосовуються при діагностиці захворювань, що передаються статевим шляхом.
Захворювання та випадки, при яких лікар може призначити аналіз крові на RW
Проведення процедури здачі аналізу крові на RW
Кров на RW здається тільки натще. Крайній прийом їжі повинен бути не пізніше 6:00 до здачі аналізу. Медичний працівникусаджує пацієнта або укладає на кушетку і здійснює забір 8-10 мл крові з ліктьової вени.
Якщо аналіз необхідно зробити немовляті, паркан здійснюється з черепної або яремної вени.
Підготовка зі здачі аналізу крові на RW
За 1-2 доби до здачі аналізу слід припинити вживання спиртних напоїв. Також не рекомендується їсти жирну їжу - вона може спотворити результат. У період підготовки до аналізу слід утриматися від прийому препаратів наперстянки.
Протипоказання
Результат аналізу буде помилковим, якщо:
- людина хвора на інфекційне захворювання або тільки перехворіла на неї,
- у жінки період менструації,
- вагітна в останні тижні перед пологами,
- перші 10 днів після пологів,
- перші 10 днів життя немовляти.
При первинному сифіліс реакція Вассермана стає позитивною на 6-8 тижні перебігу захворювання (у 90% випадків), при цьому відзначається наступна динаміка:
- у перші 15-17 днів після зараження реакція у більшості хворих, як правило, негативна;
- на 5-6-му тижні захворювання приблизно у 1/4 частини хворих реакція стає позитивною;
- на 7-8-му тижні захворювання RW стає позитивним у більшості.
При вторинному сифілісі RW завжди позитивна. Разом з іншими серологічними реакціями(РПГА, ІФА, РІФ) дозволяє не лише виявити наявність збудника, а й з'ясувати приблизний термін зараження.
При розвитку сифілітичної інфекції на 4-му тижні захворювання, після виникнення первинної сифіломи, реакція Вассермана переходить з негативної до позитивної, залишаючись такою і у вторинному свіжому, і у вторинному рецидивному періоді сифілісу. У прихованому вторинному періоді і без лікування RW може переходити в негативну для того, щоб при настанні клінічного рецидиву сифілісу знову стати позитивною. Тому, в прихованому періоді сифілісу негативна реакція Вассермана не свідчить про його відсутність чи вилікуваність, лише служить сприятливим прогностичним симптомом.
При активних ураженнях третинного періоду сифілісу позитивна RW зустрічається приблизно у 3/4 випадків захворювання. Коли ж активні прояви третинного періоду сифілісу зникають, вона часто перетворюється на негативну. У цьому випадку негативна реакція Вассермана у хворих не свідчить про те, що вони не мають сифілітичної інфекції.
При ранньому вродженому сифілісі RW практично завжди позитивна і є цінним методом для верифікації хвороби. При пізньому вродженому сифіліс результати її відповідають таким, отриманим у третинному періоді набутого сифілісу.
Велике практичне значення має дослідження реакції Вассермана в крові у хворих на сифіліс, що піддаються лікуванню. У деяких хворих, незважаючи на енергійну протисифілітичну терапію, реакція Вассермана не переходить у негативну — це так званий серорезистентний сифіліс. У даному випадкупроводити нескінченно протисифілітичну терапію, домагаючись переходу позитивної RW в негативну, немає сенсу.
З викладеного вище випливає, що негативна реакція Вассермана не завжди є ознакою відсутності сифілітичної інфекції в організмі.
Можлива позитивна реакція Вассермана у людей при низці інших, не пов'язаних із сифілісом захворюваннях та станах:
Все перераховане свідчить про те, що позитивний результат реакції Вассермана ще не є безумовним доказом наявності сифілітичної інфекції.
Відновлення після здачі аналізу
Після здачі аналізу крові лікарі рекомендують правильне та збалансоване харчування, а також якомога більше рідини. Можна дозволити собі теплий чай та шоколад. Буде корисним утриматися від фізичних навантаженьі в жодному разі не приймати алкоголь.
Норми
У нормі в крові має спостерігатися гемоліз - це вважається негативною реакцієюна сифіліс (реакція Вассермана негативна). Якщо ж гемолізу відсутній, оцінюється ступінь реакції, яка залежить від стадії захворювання (позначається знаками «+»). У цьому слід знати, що з 3-5% абсолютно здорових людейреакція може бути хибнопозитивною. У той же час, у перші 15-17 днів після зараження, реакція у хворих людей може бути помилково-негативною.
Реакція зв'язування комплементу (РСК) ставиться у дві фази: у першій фазі антиген з'єднують з досліджуваною сироваткою, в якій припускають наявність антитіл і додають комплемент, інкубують термостаті 30 хвилин.
Друга фаза: додають гемолітичну систему (еритроцити барана + гемолітична сироватка). Після інкубації термостаті протягом 30 хвилин враховують результат.
При позитивній РЗК антитіла сироватки, з'єднавшись з антигеном, утворюють імунний комплекс, який приєднує до себе комплемент, і гемолізу не відбудеться. Якщо реакція негативна (антитіл у досліджуваної сироватки немає) – комплемент залишиться вільним і станеться гемоліз.
РЗК застосовується для серологічної діагностики сифілісу, гонореї, висипного тифу та інших захворювань.
Реакції імунітету з використанням мічених антигенів і антитіл засновані на тому, що один з інгредієнтів, що беруть участь у реакції (антигени або антитіла), з'єднують з якоюсь міткою, яку легко можна виявити. Як мітки використовують флюорохроми (РІФ), ферменти (ІФА), радіоізотопи (РІА), електрооплотні сполуки (ІЕМ).
Імуноферментний аналіз(ІФА), як і інші реакції імунітету, використовується: 1) для визначення невідомого антигену за допомогою відомих антитіл або 2) для виявлення антитіл у сироватці за допомогою відомого антигену. Особливість реакції в тому, що відомий інгредієнт реакції з'єднаний із ферментом (наприклад, пероксидазою). Присутність ферменту визначають за допомогою субстрату, що при дії ферменту забарвлюється. Найбільш широко застосовується твердофазний ІФА.
1) Виявлення антигену. Перший етап - адсорбція специфічних антитіл на твердій фазі, як яку використовують полістиролові або полівінілхлоридні поверхні лунок пластикових панелей. Другий етап – додавання досліджуваного матеріалу, в якому передбачається наявність антигену. Антиген зв'язується із антитілами. Після цього лунки промивають. Третій етап - додавання специфічної сироватки, що містить антитіла проти даного антигену, мічені ферментом. Мічені антитіла приєднуються до антигенів, які надлишок видаляється промиванням. Таким чином, якщо досліджуваний матеріал має антигени, на поверхні твердої фази утворюється комплекс антитіла - антиген - антитіла, мічені ферментом. Для виявлення ферменту додають субстрат. Для пероксидази субстратом служить ортофенілендіамін у суміші з Н 2 Про 2 у буферному розчині. Під дією ферменту утворюються продукти, що мають коричневе забарвлення.
2) Виявлення антитіл. Перший етап – адсорбція специфічних антигенів на стінках лунок. Зазвичай у комерційних тест-системах антигени вже адсорбовані на поверхні лунок. Другий етап – додавання досліджуваної сироватки. За наявності антитіл утворюється комплекс антиген-антитіло. Третій етап – після відмивання у лунки додають антиглобулінові антитіла (антитіла проти людських глобулінів), мічені ферментом. Результати реакції оцінюють, як зазначено вище.
Як контроль використовують зразки свідомо позитивні і свідомо негативні, які є в комерційних системах.
ІФА застосовується для діагностики багатьох інфекційних захворюванняхзокрема, ВІЛ-інфекції, вірусних гепатитів.
Імуноблот - це різновид ІФА (поєднання електрофорезу та ІФА). Методом електрофорезу в гелі поділяють біополімери, наприклад антигени вірусу імунодефіциту людини. Потім переносять розділені молекули на поверхню нітроцелюлози в тому ж порядку, як вони знаходилися в гелі. Процес перенесення називається блот, а отриманий відбиток - блот (англ. blot - пляма). Цей відбиток діють досліджуваної сироваткою. Потім додають сироватку проти глобулінів людини, мічену пероксидазою, потім субстрат, який під дією ферменту набуває коричневий колір. Утворюються коричневі смуги тих місцях, де антитіла з'єдналися з антигенами. Метод дозволяє виявити антитіла до окремих антигенів вірусу.
Радіоімунний аналіз (РІА). Метод дозволяє визначити кількість антигену в досліджуваній пробі. Спочатку до імунної сироватці приєднують матеріал, ймовірно містить антиген, потім відомий антиген, мічений радіоізотопом, наприклад I 125 . В результаті відбувається зв'язування визначеного (німецького) та відомого міченого антигену з обмеженою кількістю антитіл. Оскільки мічений антиген додається у певній дозі, то можна визначити, яка його частина зв'язалася з антитілами, а яка залишилася вільною через конкуренцію з неміченим антигеном і була видалена. Кількість міченого антигену, що зв'язався з антитілами, визначають за допомогою лічильника. Воно обернено пропорційно кількості визначеного антигену.
Імуноелектронна мікроскопія (ІЕМ). До антигену, наприклад, до вірусу грипу, приєднується специфічна антисироватка, мічена електроноплотною речовиною. Як мітки застосовують металовмісні білки (феритин, гемоціанін) або колоїдне золото. При мікроскопії в електронному мікроскопіроблять фотографії, на яких видно віріони грипу з темними точками, що приєдналися до них - молекулами мічених антитіл.
Набутий імунітет, відмінність його від спадкового (видового, вродженого). Види набутого імунітету.
Завдання.У сім'ї захворіла на дифтерію дитина Валерій, трьох років. Інші члени сім'ї не захворіли, причому мати перехворіла на дифтерію в дитинстві, а батько був щеплений дифтерійним анатоксином. Старша сестраНаташа, п'яти років, свого часу не була щеплена дифтерійним анатоксином через медичні протипоказання, тому довелося провести їй екстрену профілактику за допомогою протидифтерійної антитоксичної сироватки. Молодший брат, Віталію, трьох місяців, не захворів, хоча нічим не був щеплений. У будинку є кішка та собака, вони не захворіли. Назвіть для кожного з членів сім'ї та для тварин вид імунітету, завдяки якому вони не захворіли.
Що таке антиген? Які речовини можуть бути антигенами? Повноцінні антигени та гаптени, чим вони відрізняються один від одного? Структура антигену. Як називається частина молекули антигену, що визначає його специфічність? Назвіть відомі вам антигени. Що таке аутоантигени? Антигенна будова мікробної клітини. Жгутикові та соматичні антигени; локалізація, літерне позначення, хімічна природа, ставлення до температури, спосіб отримання, практичне застосування. Анатоксин, його властивості, застосування, одержання. Яка тканина становить імунну систему? Вкажіть центральні та периферичні органи імунної системилюдини. Опишіть процес формування гуморальної та клітинної імунної відповіді. Вкажіть клітини, які здійснюють захоплення та перетравлення антигену; клітини, що взаємодіють при формуванні гуморального імунітету, клітинного імунітету; клітини, які трансформуються та перетворюються на плазмоцити, що продукують антитіла; клітини, що стимулюють цей процес; клітини, які пригнічують імунну відповідь; клітини, які вбивають пухлинні клітини, та заражені вірусом клітини. Що таке антитіла? Як отримати імунну сироватку? Як отримати сироватку, яка б нейтралізувала правцевий токсин? Проти яких антигенів утворюються антитоксини, аглютиніни, гемолізини? Які антитіла утворюються під час введення в організм дифтерійного анатоксину? дифтерійних бактерій? Хімічна природа та структура антитіл. Що таке активний центр імуноглобуліну? Перерахуйте класи імуноглобулінів, їх властивості. Вкажіть клас імуноглобулінів, здатних проникати крізь плаценту. До якого класу відносяться секреторні імуноглобуліни? Динаміка накопичення антитіл. Чим відрізняється вторинна імунна відповідь від первинної? Як в практичної медицинивикористовуються знання про динаміку імунної відповіді? Що таке реакції імунітету, який їхній механізм, фази реакції. У яких 2 напрямках використовують реакції імунітету? Перерахуйте реакції імунітету.
Завдання.Поставте замість пропущених слів "анатоксин" або "антитоксин": _________ є антигеном, _________ є антитілом, __________ створює при введенні в організм активний імунітет __________ створює при введенні в організм пасивний імунітет, __________ отримують шляхом імунізації тварин, ___________ отримують з токсину при впливі формаліном і теплом, ___________ нейтралізує токсини, __________ викликає в організмі утворення антитіл.
Реакція аглютинації: що таке аглютинація, що є антигеном, що – антитілом; способи постановки, які контролі ставляться і навіщо; як мають виглядати контролі. Аглютинуючі сироватки, що вони містять, як їх отримують, для чого застосовуються; що таке титр аглютинуючої сироватки? Реакція непрямої (пасивної) гемаглютинації: що служить антигеном у цій реакції, як його одержують, механізм реакції. Що таке еритроцитарний діагностикум? Що таке античний еритроцитарний діагностикум? Реакції преципітації: що таке преципітація, що є антигеном; як отримати сироватку, що преципітує? Що таке титр преципітуючої сироватки? Методи постановки, практичне застосування.
Реакція зв'язування комплементу (РЗК): принцип РЗК; що утворюється при взаємодії імунної сироватки зі специфічним антигеном; що відбувається з комплементом, якщо він є при цьому взаємодії? Яка доля комплементу у тому випадку, якщо між антигеном та антитілами немає специфічної спорідненості? Якщо кінцевим результатом РСК є гемоліз, що це означає – позитивний чи негативний результат? Методика постановки РЗК. Чому досліджувану сироватку треба інактивувати? Гемолітична сироватка: що містить, як її одержують, що таке титр і як його визначають? Комплемент: хімічна природа, ставлення до високій температурі, де міститься? Як можна зруйнувати комплемент? Що практично застосовується як комплемент?
Завдання.На одязі людини, звинуваченої у вбивстві, виявлено пляму крові. За допомогою якої реакції можна визначити, чи це людська кров; що в цій реакції буде антигеном і що антитілами; який діагностичний препарат потрібно мати у лабораторії для цієї реакції, як його готують?
Завдання.Як за допомогою реакції преципітації визначити, чи доставлений для аналізу зразок м'яса великого рогатої худобиабо м'ясом коня; які необхідні діагностичні препарати?
Реакція преципітації в агаровому гелі, способи постановки, практичне застосування.
