Непряма реакція кумбсу техніка проведення. Методика визначення груп крові

- Дослідження, яке допомагає визначити вміст неповних антиеритроцитарних антитіл у крові. Такий антиглобуліновий тест дозволяє виявити антитіла у вагітних жінок.

Крім того, він дозволяє на початкових стадіях діагностувати гемолітичну анемію новонароджених дітей з резус-конфліктом. Це допомагає запобігти руйнуванню еритроцитів, необхідних нормального кровотворення. Цей тест був створений у 1945 році Робертом Кумбсом, через що й отримав таку назву.

Проба Кумбса - різнобічне дослідження, що дозволяє своєчасно діагностувати порушення у кровотворенні як у дорослих, так і у дітей.

Існують такі види таких тестів:

1. Пряма проба Кумбса– дозволяє визначити антитіла, що знаходяться на поверхні еритроцитів. Зазвичай таке дослідження призначається за підозри на гемоліз, аутоімунну гемолітичну анемію, інші аутоімунні захворювання. Крім того, воно проводиться після медикаментозної терапіїпрепаратами на основі хініну, пеніциліну або метилдопу або після переливання крові. Для отримання більш точних результатів перед дослідженням слід повністю відмовитися від прийому ліків хоча б за 1 тиждень.
2. Непряма проба Кумбса- Тест, за допомогою якого можна виявити антиеритроцитарні антитіла в плазмі. Зазвичай його проводять при вагітності та перед переливанням крові. Антиеритроцитарні антитіла з'являються в крові людини при реактивній роботі імунітету або як реакція на деякі лікарські засоби. Для більш точного вивчення проводиться відразу кілька огорож з інтервалом в 2 години.

Показання до проведення

Проба Кумбса проводиться лише за наявності серйозних показань. Це дороге та тривале дослідження, яке є специфічним тестом.

Зазвичай свідченнями щодо його проведення вважаються такі ситуации:

1. При переливанні крові. Тест дозволяє визначити, чи приживеться кров реципієнта в організмі людини, а також чи можливе донорство. У такому разі необхідно досліджувати матеріал як донора, і реципієнта. Важливо визначити характер антитіл, адже у разі їхньої несумісності в організмі на тлі резус-конфлікту руйнується імунна система. Це призводить до розвитку серйозних захворювань, а в окремих випадках навіть смерті.
2. Перед хірургічними втручаннями, коли існує ризик крововтрати. Це робиться для того, щоб лікар зміг моментально ввести потрібну кров для відновлення організму.
3. Для виявлення резус-сенсибілізації.Резус – специфічний антиген, що виникає у організмі кожної жінки під час вагітності. Якщо ж у матері позитивний резус, а у батька негативний, або навпаки, залежності для дитини немає - він може успадкувати будь-який. Якщо ж дитина отримує протилежний материнському резусу, великий ризик сенсибілізації. Це явище характеризується змішуванням крові матері та дитини. Це може статися як під час виношування плода, і у процесі народження.

Якщо в організмі вагітної жінки виникає резус-конфлікт, то імунітет матері починає сприймати свій плід. чужорідне тіло. Тому великий ризик того, що він почне його атакувати.

Внаслідок таких дій у малюка можуть розвинутися серйозні патології. Найчастіше виникає еритробластоз – явище, у якому організм дитини неспроможна виробляти достатньо еритроцитів.

Крім того, через резус-конфлікт може статися загибель плода в утробі або відразу після народження. При правильному підходіДля лікування таких серйозних наслідків вдається легко уникнути.

Відхилення від норми

При позитивному результаті реакцію Кумбса лікар робить висновок у тому, що у сироватці крові є антитіла до еритроцитів. Це свідчить, що кров донора може бути сумісна з кров'ю пацієнта.

Якщо ж позитивний результат діагностується в організмі вагітної з резус-негативною кров'ю, то в її організмі присутні антитіла до крові плоду.

Це говорить про резус-конфлікт, який вимагає вкрай уважного підходу до ведення вагітності з боку лікаря, а також виконання всіх вказівок та рекомендацій від жінки.

Якщо ж антитіла присутні у крові дитини, діагностується гемолітична хворобановонароджених. У такому випадку проводиться повторне дослідження, що дозволяє визначити, чи наростає цитра антитіл у кров майбутньої матері чи ні.

Можливі ускладнення від тесту Кумбса

Тест Кумбса – досить безпечне дослідження, що дозволяє на початкових стадіях діагностувати ряд аутоімунних захворювань. Воно рідко викликає ускладнення, зазвичай негативні наслідкипов'язані із забором крові.

Вони полягають у:

• Чи кровотечах чи крововиливах під шкіру
• Запаморочення і непритомність
• Інфекційне зараження

7 295

– антиглобулінова проба, спрямована на виявлення у резус-негативній крові неповних антиеритроцитарних антитіл до резус-фактора – специфічного білка, що знаходиться на поверхні еритроцитів резус-позитивної крові. Існує два види цього тесту: прямий – виявлення антитіл на поверхні еритроцитів, непрямий – виявлення антитіл у сироватці крові. Пряма проба здійснюється при діагностиці та моніторингу лікування захворювань крові: гемолітичної анемії, гемолітичної хвороби новонароджених та інших. Непряма проба виконується для оцінки сумісності крові донора та реципієнта при переливанні, а також для визначення наявності та ризику резус-конфлікту при плануванні та веденні вагітності. Матеріалом для тесту Кумбса є венозна кров, дослідження проводиться методами з урахуванням реакції аглютинації. У нормі обидві проби дають негативний результат. Аналіз виконується протягом дня.

Тест Кумбса – клінічне дослідженнярезус-негативної крові, спрямоване виявлення антитіл до резус-фактору. Проба використовується для виявлення ризику розвитку резус-конфлікту та гемолітичних реакцій. У кожної людини поверхня еритроцитів містить певний набір антигенів або аглютиногенів – сполук різної природи, за наявністю чи відсутністю яких судять про групу крові та резус-фактор. Існує безліч видів антигенів, медичної практикинайбільше практичне значення мають аглютиногени A та B, що визначають групу крові, та аглютиноген D – резус-фактор. При позитивному резус-факторі зовнішньої мембрані еритроцитів визначаються антигени D, при негативному – немає.

Тест Кумбса, який також називають антиглобуліновою пробою, спрямований на виявлення в крові неповних антиеритроцитарних антитіл до системи резус-фактора. Антитіла до резус-фактора – специфічні імуноглобуліни, які виробляються у резус-негативній крові при попаданні до неї еритроцитів з аглютиногенами D. Це може статися при змішуванні крові плода та вагітної, при гемотрансфузіях, проведених без попереднього типування крові. Тест Кумбса існує у двох варіантах – прямий та непрямий. При виконанні прямого тесту Кумбса виявляються антитіла, що закріплені на поверхні еритроцитів. Дослідження використовується встановлення причини гемолітичної реакції. Непрямий тест Кумбса спрямований на виявлення антиеритроцитарних антитіл у плазмі. Він необхідний визначення сумісності крові донора і реципієнта чи матері та плода, дозволяє попередити розвиток резус-конфлікту і наступного гемолізу еритроцитів.

Кров для обох варіантів тесту Кумбса береться з вени. Аналіз виконується методом аглютинації з використанням антиглобулінової сироватки. Результати дослідження знаходять застосування в гематології при виявленні причин гемолітичних реакцій, хірургії та реаніматології при проведенні гемотрансфузій, в акушерстві та гінекології при моніторингу вагітностей у жінок з резус-негативною кров'ю.

Показання

Прямий тест Кумбса, що виявляє антитіла, що закріплені на поверхні еритроцитів, призначається при гемолітичних реакціях (руйнуванні еритроцитів) різного походження. Дослідження показано при первинній аутоімунній гемолітичній анемії, посттрансфузійній гемолітичній анемії, гемолітичній хворобі новонародженого, гемолізі еритроцитів, викликаному аутоімунними, пухлинними або інфекційними захворюваннями, а також прийомом лікарських засобівнаприклад, хінідину, метилдопи, прокаїнаміду. Непрямий тест Кумбса, що визначає антитіла в плазмі, використовується для попередження розвитку резус-конфлікту. Він показаний пацієнтам при підготовці до гемотрансфузій, а також вагітним із негативним резус-фактором за умови, що майбутній батько дитини має позитивний резус-фактор.

З метою визначення резус-сумісності тест Кумбса не призначається пацієнтам із резус-позитивною кров'ю. У цих випадках на поверхні еритроцитів вже є антигени, вироблення антитіл не може бути спровоковано гемотрансфузією або потраплянням крові плода в кровотік вагітної. Також дослідження не показане вагітним жінкам, якщо обидва батьки мають негативний резус-фактор – рецесивна ознака, що передається у спадок. Дитина в таких парах завжди має резус-негативну кров, імунологічний конфлікт з матір'ю неможливий. При гемолітичних патологіях антиглобулінова проба не використовується з метою контролю за успішністю терапії, оскільки результати не відображають активність процесу руйнування еритроцитів.

Обмеженням тесту Кумбса є трудомісткість процедури дослідження – для отримання достовірних результатів необхідне дотримання температурних та часових режимів, правил підготовки реагентів та біоматеріалу. До переваг тіста Кумбса належить його висока чутливість. При гемолітичній анемії результати цього аналізу залишаються позитивними, навіть якщо показники гемоглобіну, білірубіну та ретикулоцитів нормалізуються.

Підготовка до аналізу та забір матеріалу

Матеріалом до виконання тесту Кумбса є венозна кров. Спеціальних вимог на час проведення процедури забору крові та підготовки пацієнта немає. Як і при будь-якому дослідженні рекомендується витримати перерву після їди не менше 4 годин, а в останні 30 хвилин відмовитися від куріння, фізичних навантажень, уникати емоційного напруження. Також варто заздалегідь обговорити з лікарем необхідність відміни ліків, що приймаються – деякі препарати можуть спотворити результати тесту Кумбса. Кров беруть за допомогою шприца з ліктьової вени, рідше з вени на тильній стороніпензля. Протягом кількох годин матеріал доставляється до лабораторії.

При виконанні прямого тесту Кумбса до сироватки крові пацієнта додається антиглобулінова сироватка. Через деякий час суміш досліджується на наявність аглютинатів – вони утворюються, якщо на еритроцитах є антитіла. При позитивному результаті визначається аглютинуючий титр. Непрямий тест Кумбса складається з більшої кількості етапів. Спочатку антитіла, що знаходяться в сироватці, під час інкубації фіксуються на введених еритроцитах. Потім до зразка додається антиглобулінова сироватка, через деякий час визначається наявність та титр аглютинатів. Строки виконання аналізу – 1 день.

Нормальні результати

У нормі результат прямого тесту Кумбса негативний (-). Це означає, що в крові немає антитіл, пов'язаних з еритроцитами, і вони не можуть бути причиною гемолізу. Нормальний результат непрямого тесту Кумбса також негативний (-), тобто антитіла до резус-фактора в плазмі відсутні. При підготовці до гемотрансфузії для реципієнта це означає сумісність з кров'ю донора, моніторинг вагітності – відсутність резус-сенсибілізації матері, низький ризик розвитку імунологічного конфлікту. Фізіологічні фактори, такі як особливості харчування або фізичної активності, що не можуть вплинути на результат проби. Тому, якщо результат позитивний, необхідна консультація лікаря.

Діагностичне значення аналізу

Позитивний результат тесту Кумбса виражається якісно, ​​від (+) до (++++) або кількісно, ​​титрами від 1:16 до 1:256. Визначення концентрації антитіл на еритроцитах та у сироватці крові виконується в обох видах проби. При позитивному результаті прямого тесту Кумбса на зовнішній мембрані еритроцитів виявляються антитіла, що призводять до руйнування цих клітин крові. Причиною може стати переливання крові без попереднього типування – посттрансфузійна гемолітична реакція, а також еритробластоз новонародженого, гемолітична реакція внаслідок застосування ліків, первинна чи вторинна аутоімунна гемолітична анемія. Вторинне руйнування еритроцитів може бути викликане системним червоним вовчаком, синдромом Еванса, макроглобулінемією Вальденстрема, пароксизмальною холодовою гемоглобінурією, хронічним лімфолейкозом, лімфомою, інфекційним мононуклеозом, міфілісом.

Позитивний результат непрямого тесту Кумбса свідчить про наявність у плазмі антитіл до резус-фактору. Насправді це означає, що відбулася резус-сенсибілізація, існує можливість розвитку резус-конфлікту після вливання крові донора, під час вагітності. Для запобігання ускладненням вагітності жінки з позитивним результатом тесту Кумбса ставляться на спеціальний облік.

Лікування відхилень від норми

Тест Кумбса відноситься до ізосерологічних досліджень. Його результати дозволяють виявити гемолітичну реакцію, а також визначити сумісність крові донора та реципієнта, матері та плода, щоб запобігти розвитку резус-конфлікту. Якщо результат проби позитивний, то необхідно звернутися за консультацією до лікаря – акушера-гінеколога, гематолога, хірурга.

Антиглобуліновий тест, призначений для виявлення неповних антиеритроцитарних антитіл, був запропонований Кумбсом, Морантом, Рейс в 1945 і отримав надалі назву проби Кумбса. Суть даного методуполягає в тому, що антиглобулінова сироватка, що містить антитіла до імуноглобулінів людини, при реакції з еритроцитами, сенсибілізованими неповними антитілами, призводить до їх аглютинації.

Залежно від того, фіксовані антитіла на поверхні еритроцитів або знаходяться в вільному станіу плазмі крові, застосовується пряма або непряма пробаКумбс.

Пряма проба Кумбса ставиться в тих випадках, коли є підстави припускати, що червоні кров'яні клітини, що досліджуються, вже in vivoзазнали сенсибілізації відповідними антитілами, тобто. перша фаза реакції - фіксація антитіл на поверхні еритроцитів - відбулася в організмі і подальше додавання антиглобулінової сироватки викликає аглютинацію сенсибілізованих клітин.

За допомогою непрямої проби Кумбса виявляють неповні антитіла, присутні в сироватці, що досліджується. У даному випадкуреакція протікає у два етапи. Перший етап - інкубація тест-еритроцитів з досліджуваною сироваткою, під час якої відбувається фіксація на еритроцитарній поверхні антитіл, що містяться в досліджуваному зразку сироватки. Другий етап – додавання антиглобулінової сироватки.

Дотепер проба Кумбса широко застосовується в лабораторній практиці для діагностики імунопатологічних станів, зокрема при аутоімунних гемолітичних анеміях, що характеризуються деструкцією еритроцитів внаслідок зв'язування. клітинної мембраниз антитілами та (або) компонентами системи комплементу. З його допомогою виявляють присутність на еритроцитарній мембрані Ig G (зазвичай Ig G1 та Ig G3), які можуть активувати комплемент, а іноді комплементу (С3d). Однак у гострому періодізахворювання у зв'язку з руйнуванням еритроцитів, на яких фіксувалася велика кількість антитіл, при гемолітичному кризі, а також за недостатньої кількості антитіл при хронічному перебігухвороби може відзначатися негативна пряма проба Кумбса.

Необхідно наголосити, що непряма проба Кумбса залишається найкращим методоміндивідуального підбору трансфузійних середовищ, оскільки дозволяє найбільш точно встановити індивідуальну сумісність донора та реципієнта за еритроцитарними антигенами.

Додаткове виконання прямого антиглобулінового тесту на наявність аутоантитіл рекомендується при обстеженні всіх реципієнтів органів і тканин у передтрансплантаційному періоді та реципієнтів гемопоетичних стовбурових клітин також і після трансплантації.

Крім імуногематології та трансфузіології антиглобулінові проби широко застосовуються при діагностиці цілого ряду патологічних станів: при гематологічних захворюваннях, включаючи лімфопроліферативні, при системних захворюваннях сполучної тканини, хвороби Шегрена, хронічному активному гепатиті та ін.

Активно використовуються проби Кумбса у медичній генетиці та судовій медицині для визначення поверхневих еритроцитарних антигенів.

Проба Кумбса відноситься до досить трудомістких методів дослідження, що вимагають особливої ​​ретельності у виконанні. При її використанні трапляються деякі складнощі, пов'язані, зокрема, з інтерпретацією слабопозитивних реакцій. Відомо, що помилкові слабопозитивні або негативні реакціїпри виконанні проб Кумбса можуть бути наслідком недостатньо ефективної відмивання еритроцитів, нейтралізації антиглобулінового реагенту слідами сироватки, а також контакту з необезжиренной поверхнею, де може фіксуватися антиглобулін, втрачаючи при цьому свою активність. Ще один недолік проби Кумбса — нестійкість антиглобулінового реагенту, одержання та зберігання якого мають певні особливості, що також утруднює кількісну оцінку реакції гемаглютинації з антиглобуліновою сироваткою.

Крім того, дослідження, проведені А. Holburn, D. Voak та ін. , показали, що причиною помилковонегативних результатів може бути надмірне струшування при ресуспендуванні суспензії еритроцитів. Помилкові результати при виконанні антиглобулінових тестів можуть також обумовлюватися присутністю в антиглобуліновому реагенті домішки антикомплементарних антитіл, зокрема до С3d-, С3c-, С4c- і С4d- компонентів комплементу, які адсорбуються на поверхні тест-еритроцитів у процесі інкубації.

Зазначені недоліки легко усуваються при ретельному відмиванні досліджуваних зразків та контролі за умовами проведення реакції.

В останнє десятиліття для скорочення часу проведення непрямої проби Кумбса та підвищення її чутливості використовують ізотонічний розчин із низькою іонною силою (LISS).

Безперечною перевагою антиглобулінових проб, на думку ряду авторів, є їх висока чутливість, що значно перевищує роздільну здатність альтернативних методівдослідження, які використовуються для виявлення неаглютинуючих антитіл.

Нами було проведено порівняння роздільної здатності методів дослідження сироваток крові на наявність неповних антитіл із застосуванням поліглюкіну, желатину та антиглобулінової сироватки. У ході дослідження було здійснено контроль титрів неповних анти-D-антитіл у 140 зразках сироваток крові ізоімунних донорів із застосуванням желатинового, поліглюкінового та непрямого антиглобулінового тестів. Постановка даних методів здійснювалася відповідно до загальноприйнятими методиками.

Було встановлено, що за своєю здатністю способи виявлення сенсибілізації еритроцитів анти-D-антитілами розташовуються наступним чином: найбільш чутливий - непряма проба Кумбса, потім желатиновий тест і найменш інформативний - поліглюкіновий. Отримані в цій серії дослідів результати повною мірою відповідають літературним даним, що дозволяє зробити висновок про достатньо високому рівнічутливість проб Кумбса, що дозволяє з великим ступенем достовірності ідентифікувати присутність в організмі антиеритроцитарних антитіл, що не викликають аглютинації червоних кров'яних клітин.

Тим не менш, при постановці проб Кумбса на практиці трапляються випадки, коли неповні антитіла не виявляються, хоча клінічна картина захворювання або попередня імунізація вказує на можливу їхню присутність. У таких випадках можна припустити, що кількості антитіл недостатньо для того, щоб вони були антитілами антиглобулінової сироватки.

Зроблений висновок підтверджений власним експериментом, у якому за допомогою методу аналітичного мікроелектрофорезу клітин було встановлено наявність на тест-еритроцитах анти-D-антитіл, які не визначаються в непрямій пробі Кумбса. У цій серії дослідів антиглобулінова сироватка додавалася до еритроцитів, попередньо інкубованих з сироватками, отриманими з крові донорів, що імунізуються, в період антителогенезу в ходу, тобто. у період, коли відомими методами, зокрема пробою Кумбса, антитіла у яких не визначалися.

У проведених дослідженнях доказом присутності неповних антитіл на поверхні еритроцитів було статистично значну змінувеличини електрофоретичної рухливості сенсибілізованих червоних кров'яних клітин після додавання антиглобулінової сироватки Слід зазначити, що у всіх імунізованих донорів у непрямої пробі Кумбса в сироватці крові визначалися анти-D-антитіла.

Gillerand та ін. також показали, що для антиглобулінових тестів характерний певний поріг чутливості: позитивний результат відзначається лише тоді, коли на поверхні одного еритроциту фіксується щонайменше 500 молекул Ig G.

Крім того, у літературі наводяться дані на користь того, що можливий негативний результат проби Кумбса може бути пов'язаний з низькою афінністю антитіл, що сенсибілізують еритроцити, внаслідок чого вони легко елююють з поверхні червоних кров'яних клітин у процесі відмивання.

З урахуванням вищесказаного можна дійти невтішного висновку, що у ряді випадків негативний результат проби Кумбса ще немає доказ відсутності фіксованих лежить на поверхні еритроцитів антитіл.

Відомо, що реакції Кумбса мають високу специфічність і дозволяють виявити більшість різновидів неповних антитіл. Однак, як показують деякі експериментальні дані, антиглобулінові проби можуть виявитися позитивними при неімунологічних станах. E. Muirhead та ін. другого дня після введення фенілгідразину собакам спостерігали позитивну пробу Кумбса. Така швидка поява позитивної реакції свідчить проти її імунологічної природи і, швидше, пов'язане з неспецифічною адсорбцією білка на поверхні еритроцитів.

M. Williams та ін. встановили, що клавуланова кислота може бути причиною позитивної реакції, що, на думку авторів, пов'язано з неспецифічною адсорбцією білків плазми на еритроцитарній поверхні. Аналогічний ефект спостерігався і при лікуванні цефалоспориновими антибіотиками.

Автори вищенаведених досліджень підкреслюють неімунологічний характер одержаних позитивних результатів проб Кумбса і наполягають на тому, що зазначені речовини здатні викликати модифікацію мембран червоних кров'яних клітин, в результаті якої еритроцити можуть адсорбувати білки (зокрема, альбумін), які в нормі присутні в плазмі крові властивостями антитіл. Крім того, можливо, саме ксенобіотик, адсорбуючись на клітинній поверхні, служить сполучною ланкою між мембраною клітини та білками плазми.

Для правильного тлумачення результатів постановки антиглобулінових проб слід враховувати і кількісне співвідношення молодих і зрілих еритроцитів у периферичній крові. Було встановлено, що ретикулоцити, виділені з організму в період посиленої регенерації еритрону, можуть аглютинуватись антиглобулінової сироваткою.

Позитивний результат прямого антиглобулінового тесту ечается і при різних патологічних станах, що супроводжуються порушеннями імунної системи, запальними процесами, що ведуть до неспецифічної адсорбції антитіл різної специфічності на мембранах еритроцитів Це дає підставу вважати, що молекули Ig G не взаємодіють зі специфічними антигенами еритроцитів, лише фіксуються на поверхні досліджуваних клітин .

Слід враховувати, що при постановці проби Кумбса у випадках захворювань, що характеризуються розвитком диспротеїнемії або появою парапротеїнів, позитивний результат обумовлений присутністю на поверхні еритроцитів білків, що не володіють властивостями антитіл, що також свідчить про недостатню специфічність антиглобулінових проб щодо природи.

Таким чином, як показали численні дослідження, позитивні результатипрямого та непрямого антиглобулінових тестів не є абсолютним доказом наявності антитіл, оскільки позитивні реакціїможуть спостерігатися і за різних патологічних станів, не пов'язаних з ізосенсибілізацією або аутосенсибілізацією організму. Тому тільки зіставлення результатів декількох імуносерологічних методів клінічною картиноюзахворювання дозволяє повною мірою судити про патологічний процес, що розвивається.

Позитивний непрямий антиглобуліновий тест при негативній прямій пробі зазвичай вказує на присутність у досліджуваній сироватці алоантитіл у вільному стані, пов'язану з попередніми переливаннями крові або вагітністю.

Проба Кумбса часто буває позитивною при загостренні пароксизмальної нічної гемоглобінурії; позитивна проба Кумбса з анти-С3 та анти-С3dg є маркером холодової аглютинінової хвороби.

У випадках, коли значний ризик розвитку гемолітичної хвороби новонароджених, велике значеннядля постановки діагнозу (найчастіше під час вагітності) та при необхідності динамічного спостереження за появою та зміною титру антитіл мають результати прямого та непрямого антиглобулінових тестів. Найчастіше гемолітична хвороба новонароджених пов'язана з несумісністю матері та плоду за антигеном D, рідше - за антигенами системи АВ0 і ще рідше - за іншими антигенами (С, С, К та ін). Антиті, що при цьому утворюються ла, будучи, як правило, неповними антитілами класу Ig G, чітко виявляється у непрямому антиглобуліновому тесті. При даному захворюванні велике значення мають правильно встановлені титр та специфічність виявлених антитіл, оскільки існує певна кореляція між рівнем антиеритроцитарних антитіл у крові вагітної жінки та можливим прогнозомтяжкості гемолітичної хвороби.

Непряма проба Кумбса також необхідна клінічній практиціз метою забезпечення проведення безпечної трансфузійної терапії. Її виконання є обов'язковою складовою імуногематологічних досліджень донорів та різних категорій реципієнтів, а також планових обстежень усіх пацієнтів лікувально-профілактичних закладів, яким може знадобитися переливання крові та її компонентів.

Непрямий антиглобуліновий тест застосовується у таких випадках:

Для більш точного встановлення резус-приналежності (антиген D) за нечітких результатів визначення резус-фактора іншими методами (поліглюкіновий, желатиновий та ін.);

Для виявлення слабких еритроцитарних антигенів (системи Келл, Даффі, Кідд, Льюїс та ін) та антитіл до цих антигенів;

Для виявлення та ідентифікації алоімунних антиеритроцитарних антитіл, включаючи антитіла, що викликають гемолітичні посттрансфузійні реакції;

Для визначення наявності імунних антитіл системи АВ0 при гемолітичних трансфузійних ускладненнях;

Як проба на сумісність при індивідуальному підборі крові, що переливається, і її компонентів.

Таким чином, проба Кумбса є важливим діагностичним тестом, що застосовується у різних галузях медицини (гематологія, акушерство, ревматологія, трансфузіологія, клініко-лабораторна діагностика та ін.). Знання особливостей постановки проби Кумбса допоможе підвищити достовірність отриманих результатів та сприятиме правильному трактуванню лабораторних даних.

Література

1. Антитіла. Методи/під ред. Д. Кетті. - М.: Світ, 1991.

2. Байрамалібейлі І.Е., Рагімов А.А., Гаджієв А.Б. // Трансфузійна терапія анемій: навч. посібник для лікарів. - М.: Практ. медицина, 2005. - С. 105-106.

3. Волкова О.Я., Фрегатова Л.М., Левченко Л.Б.//Трансфузіологія. - 2006. - №2. - С. 39-62.

4. Донсков С.І.// Групи крові системи Rhesus: теорія та практика. - М.: ВІНІТІ РАН, 2005. - С. 180-186, 195.

5.Імуносерологія ( нормативні документи) / Упоряд. А.Г. Башлай, С.І. Донськів. - М.: ВІНІТІ РАН, 1998.

6.Дослідження системи крові у клінічній практиці / за ред. Г.І. Козинця, В.А. Макарова. - М.: Тріада-Х, 1997.

7. Левін В.І. До механізму еритродієрезу та еритропоезу в період гострої постгеморагічної анемії: автореф. дис. …канд. мед. наук. - Мінськ, 1968.

8. Рагімов А.А., Байрамалібейлі І.Е.. // Основи діагностики, профілактики та лікування анемій. - М.: ГОУ ВУНМЦ МОЗ РФ, 2002. - С. 204-209.

9. Чумакова О.Д. // Актуальні проблемигематології та трансфузіології: м-ли VI з'їзду гематологів та трансфузіологів Республіки Білорусь, Мінськ, 24-25 травня 2007 р. / за ред. А.І. Свірновського, М.П. Потапнєва. - Мінськ: РНПЦ гематології та трансфузіології, 2007. - С. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lancet. - 1945. - Vol. 2. - P. 15.

11. Freedman J. // J. Clin. Pathol. - 1979. - Vol. 32. - P. 1014-1018.

12. Holburn A.M. Quality Control. Методи в Hematology /ed. I. Cavill. - Edinburg: Churchill Livingstone, 1982. - Vol. 4. - P. 34-50.

13. Khan S.// CMAJ. - 2006. - Vol. 175, N 8. - P. 919.

14. Комацу F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (suppl. 7). - P. 719-721.

15. Комацу F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (suppl. 7). - P. 716-718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// New Engl. J. Med. -1976. - Vol. 277. - P. 123-125.

17. Muirhead E.E., GrovesM., Brian S. // J. Lab. Clin. Med. -1954. - Vol. 44. - P. 902-903.

18. Rosse W.F.// Hosp. Prac. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., MooreB.та ін. //Biotests Bull. - 1986. - Vol. 1. - P. 41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D.та ін. Cell Washing machines for antiglobulin tests. Replicate testing — новим методом, демонструючи нездатність до одного широкого використання машин — Sorvall CW1-AF2: повідомлення до DHSS Technical Branch, February 1991.

21. Williams M.E., Thomas D., Harman C. P. та ін. //Antimicrobial Agents and Chemotherapy. -1985. - P. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H. // CMAJ. - 2006. - Vol. 174, N 3. - P. 305-307.

Медичні новини. – 2008. – №3. – С. 33-36.

Увага! Стаття адресована лікарям-фахівцям. Передрук цієї статті або її фрагментів в Інтернеті без гіперпосилання на першоджерело розглядається як порушення авторських прав.

З безлічі існуючих антигенів у медичній практиці найбільше значенняприділяється трьом типам аглютиногену крові. Одним із них є тип відповідальний за прояв резус-фактора: якщо він присутній на мембрані еритроциту, діагностують Rh+ групу крові, якщо відсутня – Rh-. Якщо до складу резус-негативної крові потрапляють еритроцити з аглютиногенами Rh+, організм запускає реакцію імунної відповіді та починає виробляти антитіла до цього антигену, що стає причиною патологічних станів.

ДОВІДКА! Резус-фактор – складна багатокомпонентна система з кількох десятків антигенів. Найчастіше зустрічаються їх — аглютиногени типу D (85% випадків), і навіть E і C.

Пробу Кумбса проводять лише за наявності прямих показань. Загальний перелік причин призначення проби Кумбса:

• планування та ведення вагітності (батьки мають різний Rh);
• донорство і підготовка до переливання крові (несупад крові за Rh не менш згубно, ніж розбіжність по системі АВ0);
• заплановане хірургічне втручання(на випадок поповнення крововтрати за допомогою переливання крові);
• діагностика гемолітичних хвороб

Більш конкретні показання залежить від типу дослідження.

Пряма проба Кумбса

Прямий тест дозволяє виявити антитіла на поверхні еритроцитів. Це необхідно для діагностики наявних гемолітичних патологій:

• аутоімунних (еритроцити та гемоглобін руйнуються в результаті атаки антитіл власного організму);
• медикаментозних ( патологічний процесзапускає прийом деяких лікарських засобів типу хінідину або прокаїнаміду);
• посттрансфузійних (при розбіжності групи крові при переливанні), а також у вигляді резус-конфлікту при вагітності (еритробластоз новонароджених).

ДОВІДКА! Гемолітична анемія - захворювання, пов'язане з передчасним руйнуванням еритроцитів внаслідок гемолізу, що призводить до недостатнього насичення крові киснем та гіпоксії головного мозку та/або внутрішніх органів.

Гемоліз кров'яних елементів спостерігається при онкологічних, інфекційних, ревматичних захворюваннях, тому пряма проба Кумбса може використовуватись як додатковий засіб діагностики патологічного стану. У цьому варто пам'ятати: негативне значення аналізу виключає ймовірність гемолізу, а є приводом для додаткового обстеження.

Непряма проба Кумбса

Непряма проба найчастіше застосовується для запобігання патологічним ситуаціям.Вона допомагає виявити антитіла у плазмі крові, що необхідно для оцінки сумісності при переливанні та діагностиці ризиків резус-конфлікту під час вагітності.

Більше 80% людей мають позитивний резус-фактор (Rh+), відповідно трохи менше 20% є резус-негативними. Якщо Rh- матері розвивається Rh+ дитина, її організм починає виробляти антитіла, атакуючі еритроцити плоду, провокуючи гемоліз.

З урахуванням того, що відсоток "різнорезусних" шлюбів досягає 12-15%, ризик гемолітичної хвороби новонароджених повинен бути великий, але в реальності лише в 1 з 25 подібних випадків у жінок спостерігається явище сенсибілізації (на 200 успішних пологів 1 приклад гемолітичної патології). Частково це зумовлено тим, що перша резус-позитивна дитина зазвичай не викликає відкритої агресії організму матері; переважна кількість випадків припадає на другого та наступних дітей. Чинить той самий принцип, що і при звичайній сенсибілізації до того чи іншого алергену.

При першому контакті реакції немає. Організм лише знайомиться з новим для нього антигеном, виробляючи антитіла класу IgМ, які відповідають за швидку імунну відповідь, але рідко проникають через плацентарний бар'єр у кров дитини. Всі патологічні реакції виявляються при повторній зустрічі, коли в організмі починають вироблятися антитіла класу IgG, що легко проникають в кровотік плода, запускаючи процес гемолізу.

Непряма проба Кумбса під час вагітностідозволяє виявити наявність антитіл в організмі матері та вчасно виявити початкову стадію сенсибілізації. Позитивна відповідь вимагає постановки на облік з щомісячним дослідженням титру антитіл і обов'язковою госпіталізацією за 3-4 тижні до пологів.

ДОВІДКА! Несумісність за резус-фактором на стані матері ніяк не позначається, гемолітична хвороба розвивається лише у дитини. У важких випадках та за відсутності своєчасної реакції плід може загинути ще в утробі або відразу після народження.

Підготовка до процедури та її проведення

Для діагностики використовують венозну кров. Спеціальна тривала підготовка до проведення проби Кумбса не потрібна. Намагайтеся дотримуватися стандартного набору правил перед взяттям крові з вени на аналіз:

• за 3 доби відмовтеся від алкоголю, медикаментозних препаратів(по можливості);
• останній прийом їжі плануйте пізніше, ніж за 8 годин до взяття крові на аналіз;
• за 1 годину відмовтеся від куріння, фізичних, розумових та емоційних навантажень;
• Перед процедурою випийте склянку чистої негазованої води.

Метод дослідження заснований на реакції гемаглютинації.

При проведенні прямої пробина зразок крові впливають заздалегідь заготовленою антиглобулінової сироваткою з відомими показниками, витримують суміш деякий час і перевіряють на предмет аглютинатів, які утворюються за наявності еритроцитів антитіл. Рівень вмісту аглютинатів діагностують за допомогою аглютинуючого титру.

Непряма пробаКумбса має схожу методику, але складнішу послідовність дій. У відокремлену сироватку крові вводять антигенні еритроцити (з резус-фактором) і лише після цих маніпуляцій додають антиглобулінову сироватку для діагностики та титру аглютинатів.

Результати дослідження

У нормі і пряма, і непряма проба Кумбсаповинні давати негативний результат:

• негативна пряма проба свідчить про те, що специфічні антитіла до резус-фактора, пов'язані з еритроцитами, у крові відсутні і не можуть бути причиною гемолізу
• негативна непряма проба показує, що вільні антитіла до резус-фактору у плазмі також відсутні; факт свідчить про сумісність крові донора з кров'ю реципієнта (або крові матері та дитини) за резус-фактором.

Позитивна проба Кумбса говорить про факт резус-сенсибілізації організму, що є головною причиноюрезус-конфлікту у разі переливання крові або при виношуванні дитини з іншим резус-статусом. І тут результати зберігаються постійними протягом 3-х місяців (термін життя еритроцитів). Якщо причиною стала аутоімунна гемолітична анемія, то позитивна проба може переслідувати пацієнта протягом кількох років (у ряді випадків – все життя).

ДОВІДКА! Антиглобуліновий тест відрізняється високою чутливістюале має малу інформативність. Він не реєструє активність гемолітичного процесу, не визначає тип антитіла і не може виявити причину патології. Для отримання більш повної картини, лікар обов'язково призначає додаткові дослідження(мікроскопію крові, загальний та біохімічний аналіз, ревмопроби, ШОЕ, рівень заліза та феритину).

Ступінь сенсибілізації може мати якісний вираз (від "+" до "++++") або кількісне - у вигляді титру:

• 1:2 - низьке значення, не становить небезпеки;
• 1:4 – 1:8 – початок розвитку імунологічної реакції; не становить небезпеки, але потребує постійного контролю;
• 1:16 -1:1024 - яскрава форма сенсибілізації, слід негайно вжити заходів.

Причиною позитивної пробиможу стати:

• переливання нетипованої крові (або з помилкою типування), коли резус-фактор донора та реципієнта не збігаються;
• резус-конфлікт при вагітності (якщо склад антигенів крові у батька та матері не збігаються);
• аутоімунна гемолітична анемія – як вроджена (первинна), так і вторинна, яка є наслідком деяких хвороб (синдрому Евансу, інфекційної пневмонії, сифілісу, холодової гемоглобінурії, лімфоми);
• медикаментозна гемолітична реакція.

Жодна з перелічених вище проблем не може бути вирішена пацієнтом без лікарської допомоги. У всіх випадках буде потрібна термінова консультація, постановка на облік або екстрена госпіталізація.

УВАГА! У поодиноких випадках можлива хибнопозитивна проба Кумбса. Причиною цього можуть стати часті переливання крові, а також низка захворювань: ревматоїдні артрити, червоний вовчак, саркоїдози. Також це явище може спостерігатись після видалення селезінки, а також при порушенні перебігу реакції (часті струшування вмісту, наявність забруднюючих домішок).

Проба Кумбса є методом лабораторного дослідження, Зроблений шляхом впливу на гемаглютинацію. У її підставі лежить сприйнятливість антитіл до імуноглобулінів і елементів ферменту, і навіть їх здатність аглютинувати еритроцити, вкриті C3 чи Lg.

Пряма діагностика Кумбса

Використовується для виявлення антитіл або компонентів комплементу, встановлених із зовнішньої частини клітин. Пряма проба Кумбса виконується такими діями.

Застосування такої проби

Пряму діагностику Кумбса використовують у певних випадках, таких як:

• трансфузійні дії;
• аутоімунний гемоліз;
• медикаментозна гемолітична анемія.

Непряма проба Кумбса

Ця діагностика дає можливість виявити антитіла до клітин у сироватці, яку інкубують, як правило, з донорськими еритроцитами типу 0, а потім здійснюють пряму пробу. Застосовують непряму діагностикуКумбса у таких випадках:

Як готуватись до аналізу

Існують деякі правила підготовки до обстеження.

1. Якщо пацієнт є новонародженим, батькам потрібно знати, що дослідження сприятиме діагностуванню ГЗН (гемолітичному захворюванню новонароджених).
2. Якщо у хворого є підозри гемолітичного недокрів'я, йому повинні пояснити, що аналіз дозволить дізнатися, чи воно викликане захисними розладами, прийомами ліків або іншими факторами.
3. Проба Кумбса пряма та непряма не робить жодних обмежень у режимі харчування чи дієті.
4. Необхідно повідомити пацієнта, що для обстеження потрібно взяти кров із вени, а також сказати йому, коли саме проводитиметься венепункція.
5. Ще слід попередити про ймовірність неприємних відчуттіву період накладення пов'язки на руку та самої процедури.
6. Препарати, які здатні вплинути на результат зразка, потрібно скасувати.

До таких ліків відносяться:

• "Стрептоміцин";
• "Метілдофа";
• «Прокаїнамід»;
• сульфаніламіди;
• "Мелфалан";
• "Хінідин";
• "Ріфампін";
• «Ізоніазид»;
• цефалоспорини;
• "Гідралазин";
• "Хлорпромазин";
• "Леводопа";
• "Тетрациклін";
• «Діфенілгідантоїн»;
• «Цесуксімід»;
• "Пеніцилін";
• мефенамінова кислота.

Забір крові роблять з ранку натще.

Як проводиться захід

Проба Кумбса здійснюється в такому порядку:

1. При виконанні діагностики у дорослого хворого після венепункції беруть кров у трубочки з ЕДТА (етилендіамінтетраацетатом).
2. У новонародженого виробляють забір крові з пуповини до мензурки з ЕДТА.
3. Зону проколу притискають ватним тампоном до припинення кровотечі.
4. При появі синця в місці венепункції прописують компреси, що зігрівають.
5. Після набору крові пацієнту дозволяється повернутися до прийому відмінних препаратів.
6. Необхідно повідомити батькам новонародженого, що для спостереження за динамікою анемії може знадобитися вторинний аналіз.

Переваги проби Кумбса

Таке дослідження має деякі переваги, а саме:

Мінуси аналізу

Проба Кумбса позитивна є досить трудомістким методом огляду, що передбачає характерну точність виконання. При її використанні можна зіткнутися з певними труднощами, пов'язаними з інтерпретацією слабопозитивних впливів.

Встановлено, що помилкові негативні або слабопозитивні реакції під час виробництва проб Кумбса можуть стати наслідками незадовільно активної відмивання клітин, ослаблення антиглобулінового реагенту залишками сироватки, і навіть сполуки з необезжиренной зовнішністю, де може закріплюватися антиглобулін, втрачаючи у своїй свою дієвість.

Проба Кумбса відрізняється ще одним недоліком - малостійкістю антиглобулінового реагенту, придбання та збереження якого мають індивідуальні особливостіщо аналогічно робить складною чисельну оцінку впливу антиглобулінової сироватки на гемаглютинацію.

Хвороби, які можна виявити під час дослідження

Діагностика Кумбса дає можливість виявити деякі види захворювань, такі як:

• гемолітичне нездужання новонароджених;
• різні трансфузійні реакції;
• аутоімунний гемоліз;
• лікарська гемолітична недокрів'я.

На сьогоднішній день проба Кумбса вважається досить популярною системою дослідження крові як у дорослої людини, так і новонародженої дитини. Вона дає можливість виявити безліч різноманітних хвороб.