Diaqnostika üsulları müasir dövr istifadə edərək laboratoriya şəraitində müəyyən bir xəstəliyi müəyyən etməyə imkan verir xüsusi analizlər. Bunlardan biri əvvəllər qoyulmuş diaqnozu təsdiqləyə bilən fermentlə əlaqəli immunosorbent qan testidir.
Enzim immunoassay ELISA ən təsirli və biridir müasir üsullar immun və ilə bağlı pozğunluqları müəyyən etməyə imkan verir hormonal balanssızlıqlar, həmçinin onkoloji proseslər. Tədqiqat zamanı bədəndə infeksiya olduğu zaman yaranan antikorlar qanda aşkar edilə bilər. Bu nüansı nəzərə alaraq, xəstəliyi hətta inkişafının ən erkən mərhələsində də aşkar etmək olar.
Texnikanın əsası nədir?
ELISA analizinin nəticələri əldə etməyə əsaslanır kimyəvi reaksiyalar antikorların tanınması üçün xüsusi identifikasiya işarəsi kimi xidmət edən fermentlər üzərində. Nəticədə, immunokimyəvi reaksiyalar zamanı antikorlar müəyyən antigenlərlə qarşılıqlı əlaqədə olmağa başlayır. Bütün bunlar bunu deməyə əsas verir yanlış nəticələr ELISA üçün qan bağışlayarkən minimaldır.
Tədqiqat məbləği müəyyən etməyə imkan verir immun hüceyrələri, onların xassələri, həmçinin zəruri antikorların olması
Məhlulun rənglənməsi aşkar edildikdə nəticə müsbət hesab olunur. Rəng antigenlərin antikorla qarşılıqlı əlaqədə olduğunu göstərir. Belə bir şey olmazsa, nəticə mənfi olur.
(bu fayldakı 3-cü məqaləyə keçid), bədənin müqavimət göstərmək qabiliyyətini qiymətləndirməyə imkan verir yoluxucu xəstəliklər və xəstəliyin fazasını göstərən fermentlə əlaqəli immunosorbent analizi (ELISA) mühüm yer tutur. Bu tədqiqatın aparılması qanın qoruyucu funksiyasının fəaliyyətini hərtərəfli qiymətləndirməyə və yoluxucu patologiyalarda immun çatışmazlığı vəziyyətini, həmçinin qan xəstəlikləri, otoimmün proseslər və hormonal problemləri müəyyən etməyə imkan verir.
Bir təhlildə bu qədər hədəfi necə əhatə etmək mümkündür və onun həyata keçirilməsi üçün hansı əlamətlər var? Gəlin bunu anlamağa çalışaq.
ELISA üsulu ilə aparılan qan testi nədir?
Bu laboratoriya testi, müəyyən antigenlərə (patogen agentlərə) xüsusi antikorların (zülal təbiətinin qoruyucu qan faktorları) mövcudluğunu müəyyən etməyə imkan verir. Antikorlar arasında immunokomplekslər şəklində mövcud ola bilən immunoqlobulinlər birinci dərəcəli əhəmiyyət kəsb edir.
İmmunoqlobulinlər xarici antigenlərin daxil olmasına cavab olaraq ortaya çıxan mürəkkəb insan neyrohumoral reaksiyaları nəticəsində istehsal olunur. Hər bir patogen agent növü öz spesifik antikorlarını istehsal edir. Onlar antigen və ya patoloji mikroorqanizmi “bağlayaraq”, kompleks “antigen-antikor” birləşməsini əmələ gətirir, ardınca zərərsizləşdirmə, fermentativ liziz, faqositoz reaksiyaları və bədəndən xaric olurlar.
Qeyd edək:Müəyyən komplekslərin olması ilə ELISA metodu xəstədə mövcud olan patogen və ya zərərli maddənin növünü təyin edir.
Bilmək əsas prinsiplər Baxaraq insan immun sisteminin necə işlədiyini görə bilərsiniz bu video baxış:
İmmunoqlobulinlər nədir?
İmmunoqlobulinlərin 5 əsas sinfi aşkar edilmiş və tədqiq edilmişdir - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. qalanların rolu hələ tam aydınlaşdırılmayıb və elmi araşdırmalar aparılır.
Qeyd edək:ən mühüm praktik tibb A, M və G siniflərinin immunoqlobulinləri vacibdir.
Bu məsələni daha ətraflı nəzərdən keçirək.
Əsas vəzifə immunoqlobulin A (IgA) selikli qişaların qoruyucu funksiyalarından ibarətdir tənəffüs yolları, mədə-bağırsaq traktının və sidik sistemi. Xəstəliyin kəskin başlanğıcında onları müəyyən etmək mümkün deyil. Bu qoruyucu komplekslər yalnız xəstəliyin başlanğıcının 2-ci həftəsindən, bəzən daha gec görünür. İmmunoqlobulin A-nın əsas hissəsi selikli toxumalarda cəmləşmişdir. Təxminən 80%. Qalan antikorlar qanda dövr edir. Əsas funksiyası mikroorqanizmlərin zərərsizləşdirilməsi və məhv edilməsidir. Sakitləşdikdən sonra kəskin təzahürlər xəstəlik olduqda, bu immunoqlobulinlərin miqdarı azalmağa başlayır və xəstəliyin başlanğıcından 8 həftəyə qədər tamamilə yox olur. İgA gec bir tarixdə aşkar edilərsə, bu, xroniki bir prosesi göstərir.
Kəskin fazanın əsas və ilk markerləri inkişaf edən patologiya var immunoqlobulinlər sinfi M (IgM). Onlar xəstəliyin başlanğıcının 5-ci günündə aşkar edilir. Onların qanda olması təxminən 6 həftə ərzində müəyyən edilə bilər. Sonra onlar tez yox olmağa başlayırlar.
Qalıq immun reaksiya qanda olması ilə xarakterizə olunur immunoqlobulinlər sinfi G (IgG). Bu amillərin qanda görünüşü xəstəliyin başlanğıcından təxminən bir ay sonra aşkar edilir. Gələcəkdə, onlar bir çox aylar, illər və hətta bir ömür boyu müəyyən edilə bilər, yerinə yetirirlər qoruyucu funksiya xəstəliyin qayıdışından (residivindən) və bəzi hallarda patologiyanın ikincil inkişafını qeyri-mümkün edir. Əgər immunoqlobulin G-nin miqdarı yenidən artmağa başlayırsa, onda şübhələnmək olar təkrar infeksiya. Bənzər bir nəticəni 2 həftəlik fasilə ilə iki və ya üç nümunə götürməklə də çıxarmaq olar.
İmmunoqlobulin D (IgD) B-limfositlərdə yerləşir, aşağı konsentrasiyalarda tapılır sağlam insanlar. 10 illik həyatdan sonra maksimum dəyərlərə çatır. Hamiləlik dövründə, xəstələrdə immunoqlobulin D-nin miqdarı artır sistem xəstəlikləri birləşdirici toxuma, immun çatışmazlığından yaranan xəstəliklər.
Ferment immunoassay qan testlərinin istifadəsinə göstərişlər
Bədəndə mövcudluğuna qarşı antikorların təyini patogen mikroblar, səbəb olur:
- trichomoniasis;
- ureaplazmoz və
İmmunoglobulinlərin miqdarında və ilə artım var.
Diaqnostika aşağıdakıları aşkar etmək üçün aparılır:
- herpetik xəstəliklər;
- qruplar viral hepatit;
- Epstein-Barr virusu;
- sitomeqolovirus.
ELISA istifadə edərək, 600 növ allergenə qarşı antikorların varlığını təyin edə, immun çatışmazlığı vəziyyətini aşkar edə, apara bilərsiniz. hərtərəfli müayinə transplantasiya əməliyyatlarından əvvəl müalicənin effektivliyini müəyyən etmək üçün hərtərəfli təhlil aparın.
ELISA əlavə üsul xərçəng hüceyrələrinin aşkarlanması.
Qan ELISA necə aparılır?
Ferment immunoassay üçün əksər hallarda xəstə qanı istifadə olunur, bəzən toxuma toplanır şüşəvari, onurğa kanalı mayesi, amniotik maye.
Qan kubital venadan bir şprisə bir enjeksiyon iynəsi vasitəsilə çəkilir. Tədqiqat boş bir mədədə aparılır. Bəziləri götürdüyünü xatırlamaq lazımdır tibbi ləvazimatlar təhlilin nəticələrinə təsir göstərə bilər. Qan vermədən əvvəl siqaretdən və spirtli içkilərdən imtina etməlisiniz. Dərman istifadəsi nəticələri təhrif edə bilər.
IgM, IgG, IgA immunoqlobulinlərinin mənfi dəyərləri halında, xəstəliyin olmaması və ya onun ilkin mərhələsi haqqında danışa bilərik, həmçinin mənfi cəhətləri olan bir nəticə mümkündür. tam bərpa xeyli vaxt keçdikdən sonra.
IgA və IgM aşkar edilmirsə və IgG müsbətdirsə, o zaman hər ehtimala qarşı bir yoluxucu xəstəlikdən sonra və ya peyvənddən sonra formalaşmış toxunulmazlıqdan danışırıq.
halda yüksək titr IgG, IgA-nın mənfi dəyərləri ilə IgM, kəskin bir yoluxucu xəstəlik olduğu qənaətinə gələ bilərik.
İmmunoqlobulin nəticələrinin eyni vaxtda müsbət dəyərləri - IgA, IgM, IgG mövcud xroniki xəstəliyin residivinin kəskin mərhələsi üçün xarakterikdir.
üçün xroniki infeksiya, prosesin (remissiya) azalma mərhələsində olan ELISA immunoqlobulin M (IgM) mənfi dəyərlərini göstərir, G (IgG) və A (IgA) immunoqlobulinlərinin nəticəsi müsbət olacaqdır.
Ferment immunoassay qan testi metodunun üstünlükləri
ELISA metodunun əsas üstünlükləri bunlardır:
- analizin aşağı qiyməti;
- diaqnostik spesifiklik, dəqiqlik;
- dinamik nəzarət (müalicənin effektivliyini və xəstəliyin mərhələlərini müəyyən etmək üçün təhlilin təkrarlanması);
- infeksiya zonalarında kütləvi müayinələrin aparılması imkanı;
- nəticə əldə etmə sürəti;
- təhlilin nisbi sadəliyi;
- istifadə etmək imkanı informasiya texnologiyaları emalda;
- xəstə üçün təhlükəsizlik və ağrısızlıq.
Qan ELISA-nın mənfi cəhətləri varmı?
Tədqiqatın əsas mənfi tərəfi yanlış mənfi və yanlış müsbət məlumatların əldə edilməsinin mümkünlüyüdür. Anlaşılmazlıqların səbəbi texniki çatışmazlıqlar və ya dərmanların istifadəsi ola bilər ki, bu da şəkli təhrif edə bilər.
ELISA aşağıdakıları aşkar etmək üçün istifadə olunur:
- (askaridas, pinworms);
- kəskin və xroniki forma opistorxoz;
- trixinoz;
- Giardia varlığı (əlavə bir analiz olaraq);
- leyşmaniozun formaları;
- amöbiaz;
- Toksoplazma tərkibi;
Sonda qeyd etmək lazımdır ki, müasir immunologiya daim inkişaf mərhələsindədir, xəstəliklərin diaqnostikası və müalicəsi üçün yeni üsullar axtarır.
Stepanenko Vladimir, cərrah
ELISA tədqiqatı necə aparılır?
Reaksiya mexanizmi
ferment immunoassay əsaslanır immun reaksiya antikor ilə antigen və bir ferment etiketinin antikorlara bağlanması, fermentativ aktivliyin görünüşü və ya onun səviyyəsinin dəyişməsi ilə antigen-antikor reaksiyasının nəticəsini nəzərə almağa imkan verir reaksiya mexanizmi aşağıdakı kimi təqdim edilə bilər:
|
İlk reaksiya aşkar edilmiş Ig (Ab) və immunoloji tabletin quyularının səthinə bərkidilmiş təmizlənmiş patogen antigen (Ag) arasında baş verir. |
|
|
|
Yaranan immun kompleksləri müəyyən etmək üçün ikinci immunoloji reaksiya aparılır ki, bu reaksiyada bağlı spesifik Ig antigen kimi çıxış edir və insan Ig (K) fermenti ilə işarələnmiş müvafiq insan Ig ilə Ig (Ab) konjugatı çıxış edir. , ona qarşı antikor kimi istifadə olunur. |
|
|
Sonra, konjugat molekulunun enzimatik hissəsi tərəfindən kataliz olunan bir fermentativ reaksiya meydana gəlir. Quyudakı rəngin intensivliyi müəyyən şəkildə nümunənin tərkibində olan immunoqlobulinlərin miqdarından asılıdır. |
Nəticələrin hesablanması
Ferment immunoassayının aparılması
Serodiaqnoz üçün antigenin əvvəlcədən adsorbsiya olunduğu hüceyrələrin divarlarında 96 quyu polistirol plitələr istifadə olunur. Test serumu tabletin hüceyrəsinə əlavə olunur. Bu zaman ona antigenə homoloji olan anticisimlər yapışdırılır. Bağlanmamış antikorlar yuyulma yolu ilə çıxarılır. Daha sonra hüceyrələrə fermentlə işarələnmiş insan immunoqlobulinlərinə (antikorlar) qarşı antikorlar əlavə edilir. Test serumunda aşkar edilə bilən antikorlar varsa, bu mərhələdə onlar etiketlənmiş antikorların reaksiya verəcəyi antigenlər kimi çıxış edəcəklər. Yuyulduqdan sonra xromogen maddənin (boya) əlavə edilməsi hüceyrələrdə inkişaf edən rəngin reaksiyasını nəzərə almağa imkan verəcəkdir. Rəngin intensivliyi fermentin miqdarına və buna görə də antikorların miqdarına mütənasibdir Hüceyrədəki mayenin optik sıxlığını (OD) ölçərkən və onu nəzarət nümunəsi ilə müqayisə edərkən, antikorların konsentrasiyası vahidlərlə hesablanır. Nəzərə almaq lazımdır ki, hər bir test sisteminin nəticələrini qeyd etmək üçün öz göstəriciləri və normallıq və patoloji göstəriciləri şərh edərkən rəhbər tutulmalıdır. nəticələr.
ELISA ilə hansı infeksiyalar aşkar edilə bilər?
Əsasən müasir venerologiyada sifilis (digər reaksiyalarla birlikdə), HİV infeksiyası, virus hepatiti üçün istifadə olunur məhdud dəyər xlamidiya infeksiyası, sitomeqalovirus infeksiyası və digər herpes infeksiyalarının diaqnozu üçün ELISA üsulu müxtəlif yoluxucu xəstəliklər, hormon səviyyələri, otoantikorlar və müxtəlif markerlər üçün antikorları təyin etmək üçün də istifadə olunur. onkoloji xəstəliklər.
ELISA nəticələrini necə şərh etmək olar
Antikorların mövcudluğunun və səviyyəsinin öyrənilməsi müxtəlif siniflər bəzi hallarda mərhələləri müəyyən etməyə kömək edir yoluxucu proses
|
Xəstəlik mərhələsi |
IgM |
IgA |
IgG |
|
İlkin mərhələ |
|||
|
İlkin mərhələ |
|||
|
İlkin mərhələ |
|||
|
Xroniki mərhələnin kəskinləşməsi |
|||
|
Xroniki mərhələ |
|||
|
Keçmiş (müalicə olunan infeksiya) |
|||
|
Bərpa |
sonra titrin 2-4 dəfə azalması uğurlu müalicə |
uğurlu müalicədən sonra 1-1,5 aydan sonra titrin 4-8 dəfə azalması |
|
|
Mənfi nəticə |
Təəssüf ki, bu mühüm üstünlük ELISA, necə kəmiyyət göstəricisi praktik işdə antikorların böyük əhəmiyyəti yoxdur - yəni. dəqiq diaqnoz qoymağa imkan vermir və reseptin dozasına və vaxtına təsir etmir dərmanlar.
Sifilis diaqnozunda ELISA metodunun rolu nədir
Sifilis diaqnozunda ELISA üsulu ilk dəfə 1975-ci ildə istifadə edilmişdir. Hal-hazırda Rusiyada sifilisin seroloji diaqnostikası üçün geniş istifadə olunur və sifilis üçün təsdiqedici test kimi istifadə olunur Treponema pallidum antigenlərinə (IgM və IgG) ümumi antikorlar, baxmayaraq ki, bəzi hallarda sifilis üçün yalnız M sinifinin "erkən" antikorlarını təyin etmək mümkündür, infeksiya anından 3 həftə sonra müsbət olur və kifayət qədər müsbət olaraq qalır vaxt uzun müddət hətta müalicədən sonra (bəzən həyat boyu) Buna görə də, ELISA sifilisin müalicəsini təsdiqləmək üçün bir test kimi istifadə edilmir. yalnız müsbət və ya mənfi nəticə, baxmayaraq ki, kəmiyyət təyini də mümkündür.
(ELISA) xüsusi hüceyrələrin - antikorların axtarışına əsaslanan laboratoriyada qan testi üsuludur. müxtəlif xəstəliklər. Metod yalnız patogeni müəyyən etməyə deyil, həm də onun hansı mərhələdə olduğunu müəyyən etməyə imkan verir patoloji proses. Sonuncu proqnoz və üçün çox vacibdir əlavə müalicə xəstə.
Metodun üstünlükləri və mənfi cəhətləri
Hamısı arasında müasir üsullar diaqnostik ELISA ən yenilikçi və texniki cəhətdən dəqiqdir. Onun əsas üstünlükləri bunlardır:
- Xəstənin qanında yoluxucu xəstəliklərə qarşı bütün mövcud antikorları axtarmaq imkanı.
- Tədqiqat metodunun yüksək əlçatanlığı. Bu gün ELISA testləri istənilən orta ölçülü laboratoriya tərəfindən həyata keçirilə bilər.
- Metodun demək olar ki, 100% spesifikliyi və həssaslığı.
- Kəmiyyətlərin müqayisəsi sayəsində antikor və antigenləri axtarmaq, həmçinin patoloji prosesin mərhələsini təyin etmək və dinamikasını izləmək imkanı.
Digər testlərlə müqayisədə bu sayda üstünlük testin yeganə və yeganə çatışmazlığını tamamilə kölgədə qoyur: o, antikorları aşkar edə bilir, lakin patogenin özünü yox.
Təhlilin qiymətləndirilməsi üçün əsas şərtlər
ELISA analizinin nə olduğunu, onun nə olduğunu və necə aparıldığını başa düşmək üçün mütəxəssislərin istifadə etdiyi əsas terminlərlə tanış olmaq lazımdır.
- Antikor- insan immun sisteminin hüceyrələri tərəfindən istehsal olunan bir protein (B tipi limfositlər). Cavab verirlər spesifik reaksiya xarici agentin və ya maddənin bədənə daxil olmasına. Antikorların başqa bir adı immunoglobulinlərdir, bunlara aiddir müxtəlif siniflər: A, E, M, G. Onlar bir-birindən kütləsi, reaksiya sürəti, yarımxaricolma dövrü və bir sıra digər xüsusiyyətlərinə görə fərqlənirlər. Normalda insan qanı əsasən G sinif immunoqlobulinləri ehtiva edir, əgər hər hansı bir infeksiya baş verərsə, immunoqlobulinlər E və allergik reaksiyaların miqdarı kəskin şəkildə artır.
- Antigen- olan xarici agent üzvi mənşəli və yüksək molekulyar çəki. Çox vaxt patogenləri və ya onların bioloji aktiv maddələrini təmsil edir.
- Antigen-antikor kompleksi və ya immun kompleksi yad maddə ilə immunoqlobulinin birbaşa birləşməsidir ki, bu da immun reaksiyasının inkişafına səbəb olur.
Metodun mahiyyəti və əhatə dairəsi
Xəstələr tez-tez sual verirlər: ELISA analizi, bu nədir, necə aparılır və nə üçün lazımdır? Metod haqqında onun mərhələlərini qısaca təsvir etməklə əlçatan bir şəkildə danışa bilərsiniz.
Hazırlıq mərhələsi. Laborator həkim 96 quyu olan xüsusi boşqabdan istifadə edir. Hər bir quyunun səthinə xüsusi bir patogenin antigeni tətbiq olunur.
Mərhələ 1. Qan götürülür, sonra damcı-damcı quyuya vurulur. Quyu qanda antigen və antikor arasında reaksiyaya başlayır.
Mərhələ 2.İmmun komplekslərinin meydana gəlməsi ilə reaksiya çuxurda tam sürətlə davam edir. Nəticədə müəyyən rəngli bir maddə əmələ gəlir. Rəngin intensivliyi xəstənin qanında hər bir xüsusi patogenə qarşı antikorların miqdarından asılıdır.
Mərhələ 3. Nəticənin fotometriya ilə qiymətləndirilməsi. Bu məqsədlə spektrofotometr adlanan xüsusi cihaz istifadə olunur. O, çuxurdakı materialın sıxlığını və nəzarət nümunəsini müqayisə etmək üçün istifadə olunur. Sonra, cihaz tərəfindən riyazi analiz nəticə yaradır.
ELISA-nın nəticələrinin və məqsədinin qiymətləndirilməsi
Nəticənin təfsiri bir neçə vacib nüansdan asılıdır:
- Quyunun optik sıxlığı.
- Quyuları olan plitə istehsalçısı (sınaq sistemləri).
- Tədqiqatın aparıldığı laboratoriya.
Bu nüansları nəzərə alaraq, heç vaxt fərqli test sistemlərindən və ya müxtəlif laboratoriyalardan iki nəticəni müqayisə etməməlisiniz.
ELISA analizinə təsir edən digər vacib məqam sözdə antikor avidliyidir. Bu parametr antigenin miqdarını və antigen-antikor kompleksində əlaqənin gücünü xarakterizə edir. Onun tərifi zülal strukturlarını həll etmək üçün immun kompleksinin karbamid ilə müalicəsinə əsaslanır. Bu, antigen və antikor arasındakı zəif bağları məhv etməyə və yalnız güclü olanları buraxmağa imkan verir. Avidite tədqiqatının əhəmiyyəti ondan ibarətdir ki, infeksiyanın müddətini təyin etmək üçün istifadə edilə bilər. Bu məlumat hamilə qadınlarda diaqnoz qoymaq üçün son dərəcə vacibdir.
ELISA metodundan istifadə edərək qan testi aşağıdakılara xidmət edir:
- Müxtəlif patogen antigenləri axtarmaq.
- Hormonal səviyyələri öyrənmək.
- Otoimmün patologiyanın olması üçün müayinə üçün.
- Xərçəng markerlərini aşkar etmək üçün.
ELISA növləri
ELISA analizinin aşağıdakı növləri var:
- dolayı.
- Birbaşa.
- Rəqabətli.
- Bloklama üsulu.
Ancaq əslində bu gün yalnız ELISA (fermentlə əlaqəli immunosorbent analizi) adlı bir üsul istifadə olunur. Quyunun səthində rəng dəyişikliyi ilə antigen-antikor kompleksinin əmələ gəlməsinin yuxarıda təsvir edilmiş reaksiyasına əsaslanır.
Kəmiyyət ELISA qan testinin özü xüsusi diqqətə layiqdir. Bu bir analiz növü deyil, nəticələrin qiymətləndirilməsi üsuludur. Onun sayəsində antikorların sayı hesablanır və onların sinifləri müəyyən edilir. Nəticə nümunənin optik sıxlığından, ELISA analizinin aparıldığı sınaq sistemindən, həmçinin laboratoriyadan asılıdır.
ELISA ilə aşkar edilən xəstəliklər
ELISA müəyyən etməyə imkan verən qan testidir böyük məbləğ müxtəlif yoluxucu xəstəliklər. Üstəlik, həm viral, həm də viral infeksiyalar eyni dəqiqliklə aşkar edilir. bakterial xəstəliklər. Məsələn, immun komplekslərin formalaşmasından istifadə edərək, aşağıdakı xəstəliklərin patogenlərinin antigenlərinin mövcudluğunu sübut etmək olar:
Bundan əlavə, ELISA aşağıdakıları aşkar etməyə imkan verir:
- Xərçəng markerləri - TNF (şiş nekrozu faktoru), PSA (prostata spesifik antigen), CEA (karsinoembrion antigen), CA-125 (yumurtalıq şişinin markeri)
- Hamiləlik hormonu hCG-dir (insan xorionik gonadotropini).
- Qanun pozuntuları reproduktiv sistem: qadın və kişi reproduktiv sistemlərinin hormonları.
- Tiroid bezinin patologiyası.
Qeyd etmək lazımdır ki, bu gün HİV üçün ELISA testi bu təhlükəli xəstəliyə diaqnoz qoymağın əsas yoludur.
ELISA və nümunə götürmə texnikası üçün material
ELISA aparmaq üçün xəstədən acqarına qan alınır. Sonra qandan zərdab alınır ki, bu da birbaşa analiz üçün istifadə olunur. Bundan əlavə, ELISA üzərində aparıla bilər serebrospinal maye(serebrospinal maye), servikal kanalın mucus (serviks), amniotik maye və hətta şüşə maye (göz alma).
Qan verməzdən əvvəl xəstəyə heç bir qan qəbul etməməsi barədə xəbərdarlıq edilir dərmanlar, və antibiotiklərlə müalicə və antiviral dərmanlar Qan toplanmasından ən azı iki həftə əvvəl bitirmək tövsiyə olunur.
Nəticələrin qəbulu və dekodlanması üçün son tarixlər
Laboratoriyadan cavab almaq üçün lazım olan vaxt onun işinin sürətindən deyil, xəstəliyin hansı mərhələdə olduğundan və qanda hansı antikorların artıq göründüyündən asılıdır. Beləliklə, məsələn: immunoqlobulinlər M analiz üçün qan götürdükdən təxminən 2 həftə sonra görünür və prosesin ilkin infeksiya mərhələsində olduğunu və ya xroniki infeksiyanın kəskinləşməsini bildirir. Eyni zamanda, birincil infeksiya zamanı M və G siniflərinin antikorları görünür. Üstəlik, sonuncu 4 həftədən sonra aşkar edilə bilər.
IgA 2-3 həftədən sonra ya tək, ya da M ilə birlikdə görünür, yəni kəskin infeksiya, və ya G ilə birlikdə xroniki bir prosesi göstərir.
Belə fərqli terminlər Qanda antikorların görünüşü xəstəni nəticəni uzun müddət gözləməyə məcbur edəcək. ELISA testi aparıldıqdan sonra bir aydan çox gözləmək məqbuldur. Həkim tərəfindən deşifrə və təfsir də müəyyən vaxt tələb edir.
Mövcud diaqnostika üsullarının siyahısı son onilliklərdə sürətlə genişlənir.
IN son vaxtlar siyahıda getdikcə daha çox yer alır diaqnostik prosedurlar bir ferment immunoassay daxildir - tibbdə iştirak etməyən adi insana çox az şey məlum olan müasir və kifayət qədər yeni bir test. Buna baxmayaraq, bu texnika ixtisaslı tibb işçiləri arasında sürətlə öz tərəfdarlarının sıralarını qazanır. Onun xüsusiyyətləri və əsas xüsusiyyətləri ilə tanış olaraq bunun nə olduğunu və hansı hallarda istifadə edilməli olduğunu anlamağa cəhd edə bilərsiniz.
Ferment immunoanalizi molekulyar “antigen-antikor” reaksiyasına əsaslanan instrumental laboratoriya üsuludur ki, bu da orqanizmdə spesifik zülalları aşkar etməyə imkan verir. bioloji materiallar(tədqiqat üçün nümunələr). Belə zülallar fermentlər, müxtəlif mikroorqanizmlər (viruslar, bakteriyalar, göbələklər), protozoa və s. ola bilər.
Metodun kəşfindən sonra ona kəşf edənlərin adı ilə heç bir əlaqəsi olmayan, lakin ingilis dilində tam adın abreviaturası olan ELISA testi adı verildi - fermentlə əlaqəli immunosorbent analizi. Bütün dünyada həkimlər bu addan istifadə edirlər, rusdilli ölkələrdə də bəzi həkimlər bu cür tədqiqatları belə adlandırırlar.
Metodun əsas prinsipi molekulyar “antigen-antikor” reaksiyasıdır.
Bir antigen daxil olan hər hansı bir yad molekuldur insan bədəni xəstəliyə səbəb olan mikrobun bir hissəsi kimi. Antigenlər adətən protein molekullarıdır. Mikroorqanizmlərə əlavə olaraq, belə bir "qərib" qrupa və ya Rh faktoruna uyğun gəlməyən xarici qan hüceyrələri ola bilər.
Belə bir antigenin bədənə daxil olmasına cavab olaraq, hər hansı bir xarici molekuldan qorunmağa yönəlmiş bir immun reaksiya başlayır. Bu, xüsusi agentlərin sintezi səbəbindən baş verir immun sistemi- antikorlar (immunoqlobulinlər). Hər bir antikor yalnız müəyyən bir antigen üçün uyğundur və patogen "qəribi" vahid kompleksə bağlayaraq zərərsizləşdirir. Məhz belə bağlanma prosesi “antigen-antikor” reaksiyası adlanır.
Antikorların növləri
Bütün antikorlar (immunoqlobulinlər) immun reaksiyanın hansı mərhələsində meydana çıxmasından asılı olaraq 5 növə bölünür:
ELISA diaqnostikası üçün immunoqlobulinlərin IgG, IgM və IgA səviyyələri çox vaxt vacibdir. Onların titrlərinə görə, bir insanın əvvəllər xəstələndiyini və ya bu yaxınlarda yoluxduğunu, toxunulmazlığı inkişaf etdirdiyini və ya bədəninin patologiyaya qarşı müdafiəsiz olub olmadığını öyrənə bilərsiniz.
Ferment immunoassayının üstünlükləri və mənfi cəhətləri
Aktiv hal-hazırda ELISA ən dəqiq və həssas üsullardan biridir. O, tibbin müxtəlif sahələrində mütəxəssislər tərəfindən qəbul edilib və tətbiq dairəsini genişləndirməkdə davam edir.
Metodun üstünlükləri
- Alınan məlumatların yüksək dəqiqliyi.
- Həssaslıq (nümunədə patogenin minimal olması ilə belə tələb olunan maddəni aşkar etməyə imkan verir).
- Xəstəliyin ilk günlərində və ya inkubasiya dövründə diaqnozun mümkünlüyü.
- Bənzər dəqiqliyin digər üsulları ilə müqayisədə məlumat əldə etmə sürəti.
- Prosesin yüksək avtomatlaşdırılması və insanın minimal iştirakı, bu da ifaçının səhvini azaldır.
- Patoloji prosesin mərhələsi və seçilmiş terapiyanın effektivliyi haqqında məlumatların əldə edilməsi.
- Material toplayarkən ağrısız və minimal invaziv.
Metodun çatışmazlıqları
- Əksər hallarda, patogenin özünə deyil, bədənin patogen agentə reaksiyasını təyin etməyə imkan verir.
- Testdən əvvəl şübhəli xəstəlik dəqiq bilinməlidir, çünki test yüksək spesifikdir.
- Texniki problemlər, dərman qəbul etmə və ya bir neçə dərmanın eyni vaxtda olması səbəbindən yanlış oxunma ehtimalı xroniki xəstəliklər və ya pozuntular metabolik proseslər xəstənin bədənində.
- Nəticələrin təfsiri yalnız yüksək ixtisaslı mütəxəssis tərəfindən aparılmalıdır, çünki əldə edilmiş məlumatları şərh etmək üçün biliyə sahib olmaq lazımdır. xüsusi təlim və müəyyən bir sahədə böyük tibbi bilik ehtiyatı.
- ELISA kifayət qədər nadir bir testdir, buna görə də bütün diaqnostik laboratoriyalarda aparılmır.
- Metod kifayət qədər bahadır, çünki laboratoriyada reagentlərdən əlavə, xüsusi institutlarda istehsal olunan çoxsaylı bahalı avadanlıq və antigen nümunələri olmalıdır.
Ferment immunoassay hansı hallarda istifadə olunur?
Ferment immunoassay üçün göstərişlərin tam siyahısı çox genişdir, demək olar ki, bütün tibb sahələrini əhatə edir.
Çox vaxt ELISA aşağıdakı məqsədlər üçün istifadə olunur:
- yoluxucu xəstəliklərin aşkarlanması;
- cinsi yolla keçən xəstəliklərin diaqnozu;
- tərifi immun statusu və ya müəyyən otoimmün xəstəliklər;
- şiş markerlərinin müəyyən edilməsi;
- hormonların təyini.
Yoluxucu və viral xəstəliklər Texnika aşağıdakı patologiyaları müəyyən etməyə imkan verir:
Bundan əlavə, ELISA infarkt vəziyyətini tez və effektiv şəkildə müəyyən etməyə, bədənin reproduktiv potensialını qiymətləndirməyə, allergiyanı, onların mənbəyini və s.
Enzim immunoassay texnikası həyata keçirmək üçün istifadə olunur klinik sınaqlar yeni dərman vasitələrinin hazırlanması zamanı və onların insan orqanizminə təsirinin qiymətləndirilməsində.
Nümunələrin növləri və onların tədqiqat üçün seçilməsi üsulları
Çox vaxt ferment immunoassay üçün test materialı xəstənin antekubital venasından alınan qandır. Nümunələrin toplanması boş bir mədədə, əsasən səhər saatlarında aparılır. Nümunə götürdükdən sonra tədqiqata mane olan formalaşmış hüceyrələr ayrılır və qandan çıxarılır, yalnız serum qalır.
Genitouriya infeksiyalarına diaqnoz qoyulduqda, material tez-tez cinsiyyət orqanlarının selikli toxumalarından, uretradan və ya uşaqlıq boynundan gələn selikdən, düz bağırsaqdan nümunələrdən, qasıq nahiyəsində və bədənin digər hissələrindən eroziya və ya xoralardan qırıntılara çevrilir. Swablar da götürülə bilər ağız boşluğu, həmçinin nazofarenksdən.
Bəzən amniotik mayenin vəziyyətini təyin etmək üçün hamiləlik dövründə mamalıq və ginekoloji praktikada ferment immunoassay istifadə olunur. Bu vəziyyətdə amniotik maye nümunəyə çevrilir. Bunun üçün uzun iynə ilə amnion kisəsini deşərək az miqdarda maye alınır. Bütün manipulyasiyalar mümkün riskləri minimuma endirmək üçün steril alətlərlə aparılır.
Tez-tez material serebrospinal və ya seroz maye olur. Bu o zaman olur yerli anesteziya, inyeksiya ilə idarə olunur.
Tədqiqata göndərən mütəxəssis ferment immunoassay üçün hansı növ materialların lazım olduğunu aydınlaşdırmalıdır. Çox vaxt bir neçə növdən və ya müxtəlif yerlərdən nümunələr götürülür. Bu növ müayinə üçün göndəriş verən həkim də xəstəyə biomaterialın verilməsi üçün hazırlıqlar barədə məlumat verməlidir.
Enzim immunoassay üçün hazırlıq
Ferment immunoassaydan sonra əldə edilən məlumatların dəqiqliyini artırmaq üçün materialın seçilməsinə hazırlıq aşağıdakı kimi olmalıdır:
- Tədqiqatdan 10 gün əvvəl antibiotikləri, antiviral və antimikotik dərmanları istisna edin;
- bir gün ərzində alkoqol, siqaret və narkotik maddələrin qəbulunu istisna etmək lazımdır;
- eyni dövrdə fiziki həddindən artıq yüklənmədən qaçınmaq lazımdır;
- Xəstənin qəbul etdiyi bütün dərmanlar barədə həkimə xəbərdarlıq edin;
- Əgər hamiləsinizsə və ya hamilə olduğunuzdan şübhələnirsinizsə, həkiminizə məlumat verin.
Sınaq materialları səhər acqarına yığılsa yaxşıdır.
Diaqnoz hormonal səviyyələrin vəziyyətini təyin etmək məqsədi daşıyırsa, o zaman təmin etmək vacibdir sakit dövlət bir gün əvvəl və çəkinin sinir gərginliyi. Qadınlar üçün hormonlar üçün qan bağışlaması dövrə görə aydın şəkildə müəyyən edilir aylıq dövr, təyinat zamanı həkim tərəfindən müzakirə olunacaq.
Nümunə götürmədən 2-3 gün əvvəl menyudan qızardılmış və yağlı qidaları xaric etməlisiniz və hepatit üçün test etməzdən əvvəl sitrus meyvələri və ya hər hansı digər narıncı və ya sarı meyvə və tərəvəzləri yeməyin.
Enzim immunoassay nəticələrinin şərhi
Keyfiyyətli tədqiqatın nəticəsi adətən “+” (aşkar edildi) və ya “-” (tapılmadı) işarələri ilə göstərilir.
Müəyyən immunoqlobulin qruplarının mövcudluğuna və ya olmamasına əsaslanaraq, aşağıdakı nəticələr çıxarıla bilər:
- JgM (-), JgG (-), JgA (-) - xəstəliyə qarşı immunitet tamamilə yoxdur (orqanizm əvvəllər bu tip antigenlə qarşılaşmamışdır);
- JgM (-), JgG (+), JgA (-) - bu antigen və ya peyvəndlə əvvəllər toqquşma olub;
- JgM (+), JgG (-/+), JgA (-/+) - kəskin patoloji proses (çox güman ki, birincil);
- JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) - xroniki proses;
- JgM (+), JgG (+), JgA (+) - residiv;
- JgM (-) - bərpa mərhələsi.
Kəmiyyət dəyərləri böyük bir məlumat yükü daşıyır, lakin yalnız iştirak edən həkim onları əvvəlki göstəricilərə, xəstənin yaşına və hər bir xüsusi xəstəlik üçün normalara əsaslanaraq şərh edə bilər. Bu səbəbdən nəticələri özünüz qiymətləndirə bilməzsiniz.
Nəticələri nə qədər gözləmək lazımdır?
Bu texnikanın bir çox çeşidi var, bunlardan asılı olaraq əldə edilən məlumatların əldə edilməsi müddəti müəyyən edilir. Orta müddət ELISA diaqnostikası 4-6 saat çəkir ki, bu da ertəsi gün nəticələri təqdim etməyə imkan verir.
Ən uzun üsullar, məsələn, HİV infeksiyası halında, 10 günə qədər davam edir.
At təcili ehtiyac Cavabın 1-2 saat ərzində alındığı ekspress üsullardan istifadə etmək mümkündür.
ELISA testini haradan ala bilərəm?
Bu tip diaqnostika üçün avadanlıq olduqca bahalı olduğundan, bütün laboratoriyalar onu ala bilmir. Bundan əlavə, xüsusi antigenləri ehtiva edən testlər məhdud raf ömrünə malikdir (adətən təxminən 1 il) və buna görə də daimi yenilənmə tələb olunur.
Bu səbəblərə görə hökumət tibb müəssisələri ELISA laboratoriyaları həmişə mövcud deyil. Çox vaxt böyük özəl tibb və ya böyük diaqnostika mərkəzlərinə müraciət etmək lazımdır.
ELISA testini keçirmək üçün laboratoriyanın xüsusi lisenziyası olmalıdır, işçilər və laborantlar xüsusi təlim keçməlidirlər.
Çox vaxt spesifik diaqnostika mərkəzi və ya laboratoriya xəstəni müayinəyə göndərən həkim tərəfindən tövsiyə olunur.
Ferment immunoassayının qiyməti
üçün qiymət bu araşdırmaölkənin regionundan və xidmət göstərən klinikanın səviyyəsindən asılıdır. Moskvada minimum qiymət bir antigeni təyin etmək üçün 700 rubldan başlayır. Bir anda bir neçə immunoqlobulini müəyyən etmək lazımdırsa, qiymət əlavə olunacaq.
halda təcili analiz dəyəri 150-200 rubl artır. hər bir antigen üçün.
Kifayət qədər yüksək qiymətə baxmayaraq, ferment immunoassay xəstənin müayinəsini mümkün qədər məlumatlı və sürətli etməyə imkan verir ki, bu da müalicəyə başlamazdan əvvəl vaxtı azaldır və insanın vəziyyətini daha sürətli sabitləşdirməyə imkan verir.
Bu video “Ferment immunoassayının əsasları” filmini təqdim edir.
