Fibroblas. Fungsi fibroblas

Kegiatan utama modern kedokteran estetika- pencegahan penuaan dengan menggunakan teknologi tinggi. Sebagai akibat riset ilmiah Sebuah pola telah diidentifikasi bahwa sel memiliki kemampuan untuk beregenerasi. Fibroblas juga memiliki sifat-sifat ini, regenerasi yang mengarah pada peremajaan kulit dan penghapusan cacat yang terlihat pada kulit.

Fungsi dan sifat fibroblas

Istilah "fibroblas" terdiri dari dua kata Latin yang diterjemahkan secara harfiah sebagai "kecambah" dan "serat". Berdasarkan sifatnya, mereka adalah sel jaringan ikat, mensintesis matriks ekstraseluler (struktur jaringan yang memastikan transfer bahan kimia dan dukungan mekanis sel kulit). Fibroblas menghasilkan zat yang merupakan prekursor serat kolagen dan elastin, asam hialuronat, fibrin.

Mereka berasal dari mesenkim - jaringan germinal yang ditemukan di sel-sel tubuh manusia dan hewan. Dalam keadaan aktif, struktur fibroplas menyiratkan adanya nukleus dan proses; mereka memiliki ukuran yang meningkat dan mengandung sejumlah besar ribosom; dalam keadaan istirahat, mereka mengecil dan memperoleh bentuk berbentuk gelendong.

Fibroblas kulit punya jangkauan luas fungsi. Berkat kehadiran mereka di dalam tubuh, proses berikut terjadi:

• Aktivasi proses sintesis kolagen dan elastin.
• Pembentukan pembuluh darah.
• Mengarahkan sel sistem kekebalan tubuh terhadap bakteri dan partikel asing.
• Percepatan pertumbuhan jaringan.
• Peningkatan pertumbuhan sel.
• Penyembuhan area kulit yang rusak.
• Produksi sejumlah protein (proteoglikan, laminin dan lain-lain).

Penyebab perubahan terkait usia

Keremajaan kulit ditentukan oleh proses siklus produksi kolagen dan elastin, yang kemudian dipecah menjadi bagian-bagian komponennya, yang digunakan oleh fibroblas untuk memproduksinya kembali.

Seiring waktu, yang terakhir mengurangi aktivitasnya, berhenti memproduksi serat kolagen dan elastin, yang pada akhirnya memicu penuaan kulit. Perubahan terkait usia mulai muncul pada usia 28 hingga 30 tahun. Hal ini dinyatakan dalam hilangnya elastisitas dan perkembangan ptosis, perubahan warna kulit, peningkatan kekeringan, dan pembentukan kerutan. Dan semua ini disebabkan oleh fakta bahwa setiap dekade fibroblas berkurang 10%.

nomor asli

Pengisian kembali fibroblas Jadi, untuk memperlambat penuaan dan mengembalikan keremajaan, perlu dilakukan pemulihan fibroblas

. Kebanyakan teknik kosmetik modern hanya menyebabkan percepatan sementara sintesis serat kolagen, tetapi tidak meningkatkan sel itu sendiri. Untuk waktu yang lama, secara umum diterima bahwa hal ini tidak mungkin dilakukan. Saat ini, ilmu pengetahuan telah membuat kemajuan besar, dan pemulihan fibroblas bukan lagi sebuah fantasi. Prosedur ini

disebut terapi SPRS dan dipraktikkan secara luas di Amerika, negara-negara Eropa dan, baru-baru ini, di Rusia.

Terapi SPRS: ciri dan prinsip pelaksanaan

Memulihkan fibroblas tidaklah mudah; memerlukan prosedur injeksi yang rumit. Hasil penerapannya adalah penebalan kulit dan peningkatan elastisitas, pencegahan dan pengurangan ptosis. Kerutan juga berkurang, pigmentasi hilang dan bekas luka menjadi halus.

Terapi dimulai dengan pengambilan sel pasien dari kulit yang terletak di belakang daun telinga. Sampel yang dihasilkan digunakan untuk diagnosis dan penelitian, yang disebut biomaterial. Ini digunakan untuk mengembangkan rejimen pengobatan dan membuat ulang fibroblas secara artifisial, yang kemudian akan disuntikkan kembali ke kulit melalui suntikan.

Sel yang tumbuh dari biomaterial pasien tidak ditolak oleh tubuh. Setelah transplantasi, mereka tetap aktif selama satu setengah tahun, dan selama itu kondisi kulit membaik. Fibroblas tidak dianjurkan untuk diberikan melalui suntikan selama eksaserbasi penyakit kronis, pilek, disertai infeksi virus suhu tinggi tubuh. Kontraindikasi meliputi imunodefisiensi, formasi ganas , infeksi dan penyakit kronis V. Sebelum melakukan prosedur, konsultasi awal dengan spesialis diperlukan untuk mengidentifikasi kontraindikasi individu.

Prosedur ini memakan waktu tidak lebih dari satu jam dan dilakukan dalam 2 sesi dengan jeda 5 hingga 7 minggu. Sebelum disuntik, diperlukan anestesi lokal.

Memperkenalkan fibroblas adalah kesenangan yang mahal. Spektrum Penuh layanan, termasuk pengumpulan, penyimpanan, penelitian dan administrasi biomaterial, diperkirakan mencapai sekitar 400.000 rubel.

Video: melakukan terapi SPRS

Fibroblas adalah sel jaringan ikat yang menjamin produksi kolagen dan elastin, sehingga menjaga keremajaan kulit kita. Seiring waktu, jumlah mereka di dalam tubuh terus menurun, yang menyebabkan munculnya tanda-tanda eksternal dari perubahan terkait usia. Pemulihan jumlah fibroblas dilakukan dengan menggunakan teknik injeksi berdasarkan sel yang ditanam secara artifisial.

Fibroblas- sel-sel terkemuka dari jaringan ikat longgar, menghasilkan komponen zat antar sel. Ini adalah sel bercabang, berbentuk gelendong atau menyebar berukuran sekitar 20 mikron. Organel lingkungan metabolisme internal berkembang dengan baik di dalamnya. Inti fibroblas berbentuk lonjong, mengandung kromatin yang tersebar merata dan 2-3 nukleolus. Sitoplasma jelas terbagi menjadi endoplasma dengan warna intens dan ektoplasma dengan warna lemah. Sitoplasma fibroblas (terutama yang muda) bersifat basofilik. Ini menunjukkan retikulum endoplasma yang berkembang dengan baik dengan sejumlah besar ribosom yang menempel pada membran dalam bentuk rantai 10-30 butiran. Ultrastruktur retikulum endoplasma granular ini merupakan karakteristik sel yang secara aktif mensintesis protein “untuk diekspor”. Ada juga banyak ribosom bebas dan kompleks Golgi yang berkembang dengan baik. Mitokondria besar, jumlahnya sedikit. Metode sitokimia telah menunjukkan adanya enzim glikolitik dan enzim hidrolitik lisosom (terutama kolagenase) dalam sitoplasma fibroblas. Enzim oksidatif mitokondria kurang aktif.

Sistem muskuloskeletal sel memastikan mobilitasnya, perubahan bentuk, perlekatan pada substrat, ketegangan mekanis film tempat sel dilekatkan dalam kultur. Ada banyak mikrovili dan proyeksi vesikuler pada permukaan sel. Fibroblas yang tersuspensi dalam media cair berbentuk bola. Fibroblas menjadi menyebar setelah menempel pada permukaan padat, yang bergerak karena pseudopodia.

Fungsi utama fibroblas- sintesis dan sekresi protein dan glikosaminoglikan yang digunakan untuk membentuk komponen zat antar sel jaringan ikat, serta produksi dan sekresi faktor perangsang koloni (granulosit, makrofag). Fibroblas untuk waktu yang lama mempertahankan kemampuan untuk berkembang biak. Fibroblas yang telah menyelesaikan siklus perkembangannya disebut fibrosit. Ini adalah sel yang berumur panjang. Sitoplasma sel kehabisan organel, sel menjadi rata, dan potensi proliferasi menurun. Namun, sel tidak kehilangan kemampuannya untuk berpartisipasi dalam regulasi proses metabolisme dalam kain.

Zat antar sel. Terdiri dari komponen fibrilar dan dasar (amorf). Dengan menggunakan metode histoautoradiografi dengan pengenalan asam amino berlabel (3H-prolin, 3H-glisin, dll.), ditemukan bahwa molekul protein disintesis dalam polisom fibroblas. Fibroblas secara bersamaan dapat mensintesis beberapa jenis protein dan glikosaminoglikan tertentu. Untuk sintesis protein kolagen, keberadaan vitamin C sangat penting, dengan kekurangan vitamin C yang menyebabkan penghambatan tajam kolagenogenesis. Sintesis zat antar sel terjadi lebih intensif dalam kondisi konsentrasi oksigen berkurang. Bersamaan dengan sintesis kolagen, fibroblas menghancurkan sekitar 2/3 protein ini menggunakan enzim kolagenase, yang mencegah sklerosis jaringan dini.

Molekul prokolagen yang disintesis dibawa ke permukaan fibroblas melalui eksositosis. Dalam hal ini, protein bertransisi dari bentuk larut ke bentuk tidak larut - tropokolagen. Penggabungan molekul tropokolagen menjadi struktur supramolekul - fibril kolagen - terjadi di sekitar permukaan sel karena aksi zat khusus yang disekresikan oleh sel. Secara khusus, protein, fibronektin, ditemukan pada permukaan fibroblas, yang melakukan fungsi perekat dan fungsi lainnya. Tahap selanjutnya dari fibrillogenesis terjadi melalui polimerisasi dan agregasi tropokolagen pada fibril yang terbentuk sebelumnya. Dalam hal ini, pematangan serat kolagen dapat terjadi tanpa hubungan langsung dengan fibroblas.
Glikosaminoglikan merupakan pengatur pembentukan kolagen dan merupakan bagian dari komponen utama (amorf) zat antar sel.

Komponen fibrilar Substansi antar sel dari jaringan ikat longgar mencakup tiga jenis serat - kolagen, elastis dan retikuler. Mereka memiliki mekanisme pembentukan yang serupa, tetapi berbeda satu sama lain komposisi kimia, ultrastruktur dan sifat fisik. Protein kolagen diidentifikasi berdasarkan komposisi asam aminonya dan urutan asam amino dalam molekul kolagen. Tergantung pada variasi asam amino dalam rantai polipeptida, sifat kekebalan, berat molekul, dll., 14 atau lebih jenis protein kolagen dibedakan, yang merupakan bagian dari jaringan ikat organ. Semuanya membentuk 4 jenis atau kelas utama kolagen.

Kolagen tipe 1 ditemukan dalam kata penghubung dan jaringan tulang, serta di sklera dan kornea mata; Tipe II - di jaringan tulang rawan; Tipe III - di dinding pembuluh darah, di jaringan ikat kulit janin; Tipe IV-ro - di membran basement.

Fibroblas(fibroblastosit) (dari bahasa Latin fibra - serat, bahasa Yunani blastos - tunas, kuman) - sel yang mensintesis komponen zat antar sel: protein (misalnya, kolagen, elastin), proteoglikan, glikoprotein.

Pada periode embrio, sejumlah sel mesenkim embrio muncul diferensiasi fibroblas, yang meliputi:

· sel induk,

sel progenitor semi-batang,

· fibroblas tidak terspesialisasi,

fibroblas yang berdiferensiasi (matang, berfungsi aktif),

fibrosit (definitif bentuk sel),

myofibroblast dan fibroclast.

DENGAN fungsi utama fibroblas berhubungan dengan pembentukan zat utama dan serat (yang dimanifestasikan dengan jelas, misalnya, selama penyembuhan luka, perkembangan jaringan parut, pembentukan kapsul jaringan ikat di sekitar benda asing).

Fibroblas terspesialisasi rendah adalah sel dengan sedikit proses dengan inti bulat atau oval dan nukleolus kecil, sitoplasma basofilik, kaya akan RNA. Ukuran sel tidak melebihi 20-25 mikron. Sejumlah besar ribosom bebas ditemukan di sitoplasma sel-sel ini. Retikulum endoplasma dan mitokondria kurang berkembang. Aparat Golgi diwakili oleh kelompok tabung pendek dan vesikel.
Pada tahap sitogenesis ini, fibroblas memiliki tingkat sintesis dan sekresi protein yang sangat rendah. Fibroblas ini mampu bereproduksi secara mitosis.

Fibroblas dewasa yang berdiferensiasi berukuran lebih besar. Ini adalah sel yang berfungsi secara aktif.

Pada fibroblas dewasa, biosintesis intensif kolagen, protein elastin, proteoglikan, yang diperlukan untuk pembentukan zat utama dan serat, dilakukan. Proses-proses ini ditingkatkan dalam kondisi konsentrasi oksigen rendah. Faktor perangsang biosintesis kolagen juga merupakan ion besi, tembaga, kromium, asam askorbat. Salah satu enzim hidrolitik adalah kolagenase- memecah kolagen yang belum matang di dalam sel, yang mengatur intensitas sekresi kolagen pada tingkat sel.

Fibroblas adalah sel yang bergerak. Pada sitoplasmanya, terutama pada lapisan perifer, terdapat mikrofilamen yang mengandung protein seperti aktin dan miosin. Pergerakan fibroblas menjadi mungkin hanya setelah mereka terikat pada struktur pendukung fibrilar menggunakan fibronektin- glikoprotein yang disintesis oleh fibroblas dan sel lain, memastikan adhesi sel dan struktur non-seluler. Selama pergerakan, fibroblas menjadi rata, dan permukaannya bisa meningkat 10 kali lipat.

Plasmalemma fibroblas merupakan zona reseptor penting yang memediasi efek berbagai faktor regulasi. Aktivasi fibroblas biasanya disertai dengan akumulasi glikogen dan peningkatan aktivitas enzim hidrolitik. Energi yang dihasilkan oleh metabolisme glikogen digunakan untuk mensintesis polipeptida dan komponen lain yang disekresikan oleh sel.

Berdasarkan kemampuannya untuk mensintesis protein fibrilar, keluarga fibroblas mencakup sel retikuler dari jaringan ikat retikuler organ hematopoietik, serta kondroblas dan osteoblas dari berbagai jaringan ikat kerangka.

Fibrosit- bentuk perkembangan fibroblas yang definitif (final). Sel-sel ini berbentuk gelendong dengan proses pterigoid. [Mereka mengandung sejumlah kecil organel, vakuola, lipid dan glikogen.] Sintesis kolagen dan zat lain dalam fibrosit berkurang tajam.

Myofibroblas- sel yang mirip dengan fibroblas, menggabungkan kemampuan untuk mensintesis tidak hanya kolagen, tetapi juga protein kontraktil dalam jumlah banyak. Fibroblas dapat berubah menjadi miofibroblas, yang secara fungsional mirip dengan sel halus sel otot, tetapi tidak seperti yang terakhir, mereka memiliki retikulum endoplasma yang berkembang dengan baik. Sel-sel tersebut diamati di jaringan granulasi luka penyembuhan dan di rahim selama kehamilan.

Fibroklas- sel dengan aktivitas fagositik dan hidrolitik yang tinggi, mengambil bagian dalam “resorpsi” zat antar sel selama periode involusi organ (misalnya, di dalam rahim setelah kehamilan). Mereka menggabungkan fitur struktural sel pembentuk fibril (retikulum endoplasma granular yang berkembang, aparatus Golgi, mitokondria yang relatif besar tetapi sedikit), serta lisosom dengan enzim hidrolitik khasnya. Kompleks enzim yang mereka keluarkan di luar sel memecah zat penyemen serat kolagen, setelah itu terjadi fagositosis dan pencernaan kolagen intraseluler.

Sel-sel jaringan ikat fibrosa berikut ini tidak lagi termasuk dalam diferensiasi fibroblas.

Fibroblas kulit membentuk dasar jaringan ikat. Mereka adalah produsen asam hialuronat, serat kolagen, dan elastin. Perubahan terkait usia memperlambat fungsi fibroblas, menyebabkan kulit menjadi tipis dan lembek. Berkat seluler teknologi injeksi tubuh secara mandiri meluncurkan fungsi peremajaan struktur dermis.

Inti dari fibroblas

Fibroblas kulit- ini adalah sel-sel lapisan jaringan ikat dermis, yang pendahulunya adalah sel induk. Mereka datang dalam dua bentuk:

1. Aktif - sel besar, dilengkapi dengan inti datar berbentuk oval, sejumlah besar ribosom dan proses. Mereka dicirikan oleh pembelahan intensif, produksi kolagen dan komponen matriks lainnya.
2. Tidak aktif (fibrosit) - selnya sedikit lebih kecil dan berbentuk gelendong. Mereka terbentuk dari fibroblas dan tidak dapat membelah. Berpartisipasi dalam sintesis serat dan regenerasi luka.

Seiring bertambahnya usia tubuh, jumlah fibroblas berkurang dan aktivitasnya menurun. Hal ini menyebabkan penurunan sintesis zat antar sel. Proses ini tercermin pada kulit berupa penipisan, kekeringan, dan kendur. Ini meregang dan membentuk kerutan.

Fungsi

Salah satu fungsi utama fibroblas adalah produksi dan regenerasi zat antar sel. Dengan membentuk faktor pertumbuhan, komponen matriks ekstraseluler, enzim, mereka berkontribusi pada penghancuran dan sintesis baru kolagen dan asam hialuronat. Berkat proses tanpa henti, pembaruan zat antar sel terjadi. Selain itu, mereka menghasilkan faktor pertumbuhan sel:

• Yang utama adalah pertumbuhan semua sel kulit dirangsang, fibronektin diproduksi untuk reaksi perlindungan;
• Transformasi - serat kolagen dan elastin disintesis, pembuluh darah terbentuk, sel-sel sistem kekebalan diarahkan ke agen asing, bakteri;
• Epidermal - proliferasi jaringan, pertumbuhan sel, dan transportasi keratinosit diaktifkan;
• Pertumbuhan keratinosit adalah epitelisasi, kerusakan diregenerasi.

Faktor pertumbuhan fibroblas diwakili oleh protein multifungsi yang bersifat mitogen dan juga melakukan fungsi endokrin, regulasi, fungsi struktural. Berkat fibroblas, protein penting untuk kulit diproduksi: proteoglikan, tinascin, nidogen, dan laminin.

Inti dari teknik ini

Terapi SPRS adalah teknik peremajaan kulit dengan suntikan menggunakan fibroblas, menghilangkan penyebab utama penuaan kulit. Paten untuk teknologi transplantasi autofibroblas intradermal adalah milik FibrocellScience, sebuah perusahaan Amerika. Melalui teknologi sel, fibroblas dapat ditumbuhkan dari partikel kulit manusia (biopsi). Biomaterialnya sendiri menghilangkan masalah kompatibilitas jaringan dan risiko infeksi. Sel autologus dianggap positif sistem imun dan dapat berfungsi sepenuhnya.

Sampel dapat diambil pada usia berapa pun, namun sebaiknya dilakukan pada usia muda. Usia yang disarankan adalah 20 hingga 30 tahun. Anda dapat menyimpan sepotong kulit selama operasi apa pun dan menempatkan sel-sel yang diisolasi darinya dalam penyimpanan kriogenik selama bertahun-tahun. Suhu -196 derajat memungkinkan Anda menyimpannya sepanjang hidup Anda, menggunakannya sesuai kebutuhan. Ini akan memungkinkan Anda melakukan prosedur kosmetik yang efektif kapan saja.

Fibroblas sendiri, bersama dengan sel induk, cenderung mempertahankan potensinya selama penuaan. Di bawah anestesi lokal Sampel kecil kulit diambil dari area belakang telinga, pusar, atau lengan bawah pasien. Daerah-daerah ini paling sedikit terkena radiasi ultraviolet. Ukurannya sekitar 4 mm. Fibroblas yang diisolasi darinya ditempatkan dalam botol khusus.

Ketika mereka dibudidayakan dalam media dengan serum janin, kemampuan untuk berkembang biak dirangsang pada sel-sel muda, dan sel-sel tua dibersihkan. Ada “peremajaan” budaya. Setelah sebulan, jumlah sel meningkat beberapa ribu kali lipat. Setelah reaktivasi, kultur sel ditransplantasikan ke pasien dan secara aktif mengisi dermis. Setelah satu setengah bulan, fibroblas yang berlipat ganda disuntikkan ke kulit wajah pasien, termasuk di sekitar mata, juga ke leher, décolleté, dan lengan.

Prosedur

Kursus ini terdiri dari 3-5 sesi, interval antara 3 hingga 6 minggu. Tahapan prosedur:

• pemeriksaan pasien untuk mengidentifikasi kontraindikasi yang ada;
• pengambilan materi;
• budidaya fibroblas;
• injeksi bahan seluler ke dalam kulit menggunakan dua metode: terowongan - ke dalam lipatan kulit dalam, mesoterapi papular;
• melindungi kulit dari radiasi ultraviolet dengan mengoleskan krim.

Pasien mencatat bahwa prosedurnya menyakitkan, jadi krim anestesi Emla digunakan. Jumlah obat yang digunakan hingga 3 ml per sesi. Masa pemulihan berlangsung selama 2-3 hari. Setelah prosedur, dilarang menggunakan kosmetik. Selama dua minggu Anda harus menahan diri untuk tidak mengunjungi sauna atau pemandian. Kulit harus dilindungi dari sinar matahari dengan cara melumasinya dengan krim dengan tingkat perlindungan yang tinggi. Dianjurkan untuk mengulangi prosedur ini setahun sekali. Hasilnya adalah perbaikan kondisi kulit wajah selama beberapa bulan.

Efisiensi dan keunggulan metode ini

Peremajaan dengan fibroblas memberikan hasil pertama setelah 1,5 atau 2 bulan. Efek penuh Efek dari prosedur ini muncul setelah enam bulan dan berlangsung selama 2-3 tahun. Peningkatan produksi faktor pertumbuhan dan matriks ekstraseluler dimulai. Fibroblas melewati fase alami siklus: mereka diaktifkan, mensintesis elastin, kolagen, dan zat lainnya, kemudian fase degradasi dimulai, menggantikannya dengan fibroblas baru.

Penggunaannya tersebar luas dalam pengobatan - melawan luka bakar, untuk regenerasi jaringan tukak trofik, luka Pentingnya mereka dalam tata rias sangat besar. Keremajaan kulit dibentuk oleh banyaknya fibroblas. Ditempatkan di dermis, fibroblas yang tumbuh berintegrasi ke dalam jaringan, memulai produksi kolagen dan elastin. Hasilnya, kulit menjadi elastis, warnanya merata, dan kerutan halus hilang.

Tetapi Anda seharusnya tidak mengharapkan efek pengetatan dari prosedur ini. Teknik ini bertujuan untuk meningkatkan karakteristik kualitas kulit. Keuntungan utama terapi SPRS:

• obat ini bekerja dengan gen, yang menghilangkan gangguan pada struktur utama kulit;
• proses peremajaan alami diaktifkan;
• keamanan, tidak ada risiko penolakan, reaksi alergi;
• pelestarian hasilnya dalam jangka panjang.

Dalam waktu 6 bulan, kerutan di sekitar mata hilang 90%. Bagian décolleté dan leher terlihat lebih muda sebesar 95%, pipi sebesar 87%. Lipatan di sekitar mulut berkurang 55%.

Kontraindikasi

Meskipun sepenuhnya aman, prosedur ini memiliki beberapa kontraindikasi:

• kehamilan, masa menyusui;
• gangguan pembekuan darah;
• neoplasma ganas;
• penyakit autoimun;
• kecenderungan pembentukan bekas luka;
• ARVI;
• peradangan pada kulit.

Sehari setelah sesi, kemerahan pada kulit dan mikrohematoma dapat diamati. Keesokan harinya gejalanya hilang.

Teknologi transplantasi autofibroblast mendapat izin resmi dari Roszdravnadzor. Keamanannya dikonfirmasi oleh pemantauan laboratorium terhadap viabilitas sel.

Pemilik paten RU 2536992:

Invensi ini berkaitan dengan bidang bioteknologi, khususnya teknologi seluler, dan dapat digunakan dalam bidang kedokteran. Metode ini melibatkan penskalaan sel diploid dari garis M-20 dari cryobank IPVE yang dinamai demikian. anggota parlemen Akademi Ilmu Kedokteran Rusia Chumakov dari ampul bank sel benih jalur 7 untuk mendapatkan bank sel kerja jalur 16. Dalam hal ini, sel dengan 20-33 saluran, cocok untuk digunakan untuk tujuan terapeutik dan/atau diagnostik, diperoleh dengan mengkultur dalam media nutrisi yang mengandung 10% plasma aktif fibrinolitik (FAP) dari seseorang yang mengandung faktor pertumbuhan turunan trombosit PDGF di konsentrasi 155 hingga 342 pg/ml. Penemuan ini memungkinkan untuk meningkatkan aktivitas proliferasi sel fibroblas manusia diploid. 1 gaji file, 2 tabel.

Invensi ini berkaitan dengan bioteknologi, imunologi, kedokteran, khususnya metode untuk meningkatkan sifat proliferasi sel fibroblas manusia diploid untuk penggunaan sel tersebut untuk tujuan terapeutik dan diagnostik, termasuk untuk menentukan aktivitas antivirus interferon manusia, untuk penggantian sel. terapi.

Garis sel diploid manusia (HDCL) memiliki keunggulan yang tidak dapat disangkal dibandingkan semua jenis kultur sel yang diketahui dalam kemampuannya mempertahankan karakteristik biologis dan genetik yang stabil selama perjalanan. Sertifikasi LDCC yang ditujukan untuk produksi vaksin dilakukan sesuai dengan persyaratan seragam yang dikembangkan oleh Organisasi Kesehatan Dunia. Rekomendasi ini dijadikan dasar kriteria nasional untuk sertifikasi vaksin LDKCH, yang dikembangkan oleh Institut Penelitian Penyakit Menular Klinis Negara. LA. Tarasevich dan Kementerian Kesehatan Uni Soviet [ Rekomendasi metodis“Sertifikasi lini sel berkelanjutan - substrat untuk produksi dan pengendalian medis persiapan imunobiologis»RD-42-28-10-89. Kementerian Kesehatan Uni Soviet. M., 1989. - Hal.16]. Garis sel diploid manusia yang tersertifikasi memiliki umur terbatas dan memiliki karakteristik biologis, budaya dan genetik yang stabil, bebas dari kontaminan (bakteri, jamur, mikoplasma, virus) dan tidak menyebabkan pembentukan tumor pada hewan yang mengalami imunosupresi. Garis sel diploid harus memiliki bank sel benih bersertifikat pada tingkat lintasan awal (hingga lintasan 10), yang terdiri dari setidaknya 200 cryovial. Dengan meneruskan sel benih dari satu atau beberapa cryovial ke tingkat lintasan ke-16, kumpulan sel yang berfungsi diperoleh, dari mana kultur produsen yang diperlukan dapat diperoleh untuk produksi atau untuk pekerjaan penelitian. Di Rusia dan luar negeri, hanya ada beberapa lini sel diploid manusia (Wi-38, MRC-5, M-22, dll.) yang disertifikasi sesuai dengan persyaratan yang tercantum. LDCV bersertifikat digunakan dalam produksi vaksin terhadap polio, campak, rubella, rabies, pernafasan dan infeksi sitomegalovirus, serta interferon [T.K. Borisova, L.L. Mironova, O.I. Konyushko, V.D. Popova, V.P. Grachev, N.R. Shukhmina, V.V. Zverev. Strain sel diploid manusia dalam negeri merupakan substrat untuk produksi vaksin. Virologi medis. Bahan konferensi ilmiah-praktis « Masalah terkini virologi medis, didedikasikan untuk peringatan 100 tahun M.P. Chumakov." M.2009. Jilid XXVI. hal.305-307; II. Mironova, V.D. Popova, O.I. Konyushko. Pengalaman dalam menciptakan kumpulan sel asli yang dapat ditransplantasikan dan penggunaannya dalam praktik virologi. Bioteknologi. 2000, hal. 41-47]. LDCN banyak digunakan secara in vitro untuk diagnosis infeksi virus dan analisis toksisitas berbagai obat dan produk untuk terapi penggantian [Paten RF No. 2373944, 23/06/2008. Metode pengobatan luka bakar. SEBAGAI. Ermolov, S.V. Smirnov, V.B. Khvatov, L.L. Mironov; S.V. Smirnov, V.B. Hvatov. Teknologi inovatif pengobatan luka bakar lokal di Research Institute of Emergency Medicine dinamai demikian. N.V. Sklifosovsky. Dalam buku: Ekonomi Baru. Potret inovatif Rusia. M., Pusat Kemitraan Strategis, 2009. hlm.388-390].

Di IPVE mereka. anggota parlemen Chumakov RAMS pada tahun 80-an abad ke-20, beberapa baris sel diploid dibuat dari kulit dan otot embrio manusia berumur 8-10 minggu. Karya ini dikhususkan untuk memodifikasi produksi sel diploid manusia untuk tujuan diagnostik dan terapi penggantian sel, yaitu produksi sel fibroblas manusia diploid dengan peningkatan sifat proliferasi.

Prototipe. Paten RF No. 1440029 tanggal 22 Maret 1993 [Mironova L.L., Preobrazhenskaya N.K., Solovyova M.N., Orlova T.G. Stobetsky V.I., Kryuchkova G.P., Karmysheva V.Ya., Kudinova S.I., Popova V.D., Alpatova G.A. IPVE dan NIIEiM im. N.F. Gamaleya. Strain sel kulit dan otot embrio manusia diploid yang digunakan sebagai sistem pengujian untuk menentukan aktivitas antivirus interferon manusia dan penyebaran virus].

Strain LDCC ini diberi nama M-21, namun kultur fibroblas M-21 memiliki aktivitas proliferasi yang tidak mencukupi, yang mengurangi waktu pembentukan lapisan tunggal dan meningkatkan konsumsi sel dan bahan, dan hal ini pada akhirnya menyebabkan penipisan total cadangannya. Akibatnya, timbul kebutuhan akan lini sel baru, yang cocok untuk menentukan aktivitas antivirus interferon manusia dan tujuan medis dan biologis lainnya, lebih hemat biaya, ditandai dengan aktivitas proliferasi tinggi, dan memiliki kumpulan benih dan sel kerja. Jalur ini diberi nama M-20. Pada bagian level 7, bank sel benih telah disiapkan. Pada tahun 2012, kumpulan sel kerja pada tingkat lintasan ke-16 dibuat dari ampul kumpulan sel kerja 7. Kumpulan sel benih dan sel kerja di jalur level 7 dan 16 disimpan di Institut Kapal Fisika Eksperimental yang dinamai demikian. anggota parlemen Chumakov RAMS dan izinkan kami menyediakan keduanya proses produksi, dan penelitian ilmiah.

Perbedaan antara penemuan ini dan analog terdekat (prototipe) adalah peningkatan aktivitas proliferasi sel garis M-20 bila menggunakan 10% plasma aktif fibrinolitik (FAP).

Dengan demikian, objek penemuan ini adalah metode untuk meningkatkan sifat proliferasi sel fibroblas manusia diploid untuk tujuan medis dan biologis dengan mengolah sel dari cryobank dari Institut Fisika Hewan yang dinamai demikian. anggota parlemen Akademi Ilmu Kedokteran Rusia Chumakov, yang menggunakan sel diploid dari garis M-20 yang dikarakterisasi, yang diskalakan dari ampul kumpulan sel benih jalur 7 dan kumpulan sel kerja jalur 16 diperoleh, dengan sel bagian 20-33 cocok untuk digunakan untuk tujuan terapeutik dan/atau diagnostik, diperoleh dengan budidaya dalam media nutrisi yang mengandung 10% plasma aktif fibrinolitik (FAP) seseorang. Saat membiakkan sel, sebaiknya digunakan media nutrisi DMEM dengan FAP 10%.

Sel diploid manusia dari garis M-20 yang dikarakterisasi, diperoleh dengan metode di atas, memiliki aktivitas proliferasi yang tinggi dan cocok untuk digunakan untuk tujuan terapeutik dan/atau diagnostik.

Skema penerapan metode:

1. Satu cryovial digunakan dari kumpulan sel benih dari bagian ke-7 dari IPVE yang dinamai demikian. anggota parlemen RAM Chumakova

2. Persiapan kumpulan sel kerja pada tingkat lintasan 16 IPVE yang dinamai. anggota parlemen RAM Chumakova

3. Pemulihan fibroblas garis M-20 dari tepi sel kerja bagian 16 (IPVE dinamai M.P. Chumakov, Akademi Ilmu Kedokteran Rusia).

4. Memperoleh kultur monolayer fibroblas garis M-20, bagian 17.

5. Pemulihan sifat biologis fibroblas dari garis M-20 dengan jalur tiga kali lipat (termasuk jalur ke-20) untuk memperbaiki kemungkinan kerusakan DNA selama proses kriopreservasi.

6. Memperoleh kultur sel untuk tujuan diagnostik dan terapi penggantian sel dengan mereplikasi fibroblas garis M-20 dari bagian 20 hingga 33 menggunakan media nutrisi yang mengandung 10% plasma aktif fibrinolitik (dengan kandungan PDGF dari 155 hingga 342 pg/ml).

Metode yang diusulkan memastikan produksi sel dengan aktivitas proliferasi tinggi dan cocok untuk digunakan dalam diagnostik dan/atau tujuan pengobatan.

Hasil teknis ini dicapai dengan membudidayakan fibroblas manusia dari garis M-20 dalam media nutrisi dengan penambahan 10% plasma aktif fibrinolitik (FAP), yang memiliki efek merangsang pertumbuhan dan meningkatkan aktivitas proliferasi kultur sel.

FAP adalah media transfusi yang digunakan secara klinis, yang diperoleh dari darah orang yang meninggal mendadak karena infark miokard, gagal jantung akut, pendarahan otak, dalam 6 jam pertama setelah kematian [Perintah Kementerian Kesehatan Uni Soviet No. 482 bulan Juni 14 Tahun 1972 “Tentang peningkatan penyediaan institusi terapeutik dan profilaksis serta klinik dengan jaringan kadaver, sumsum tulang dan darah"]. Darah postmortem adalah media transfusi lengkap yang memiliki sejumlah sifat biologis - terutama peningkatan potensi fibrinolitik. Dalam hal ini, diusulkan juga untuk menyebut fibrinolisis darah postmortem. Indikasi utama transfusi darah postmortem: kehilangan darah akut, syok, anemia dari berbagai asal, luka bakar, penggantian metabolik selama keracunan eksogen, mengisi AIK saat menggunakan sirkulasi ekstrakorporeal dalam pembedahan [E.G. Tsurinova. Transfusi darah fibrinolisis. M., 1960, 159 hal.; S.V. Ryzhkov. Persiapan dan kemungkinan penggunaan darah fibrinolisis tergantung pada waktu pengambilan dan penyebab kematian. Abstrak penulis. dokter. dis. L., 1968, 21 hal.; G.A. Pafomov. Karakteristik biologis darah orang yang meninggal mendadak dan kegunaannya dalam praktik bedah. Dis. dokter. Sayang. Sains. M., 1971, 355 hal.; K.S. Simonyan, K.P. Gutiontova, E.G. Tsurinova. Darah post-mortem dalam aspek transfusiologi. M., Kedokteran, 1975, 271 hal.]. Saat ini, komponen darah postmortem digunakan: plasma yang aktif secara fibrinolitik, massa sel darah merah, massa leukosit, massa trombosit [G.Ya. Kilat. Sifat hemokoagulasi dan aplikasi klinis plasma dan trombosit darah mayat. Abstrak penulis. dokter. dis. M., 1978, 31 hal.; V.B. Hvatov. Persiapan tindakan fibrinolitik dan antiprotenease dari plasma darah orang yang meninggal mendadak. Dis. dokter. Ilmu Kedokteran, 1984, 417 hal.; V.B. Khvatov Plasmakinase - sediaan trombolitik baru dari plasma postmortem Dalam: Trombosis dan Trombolisis edd. E.I. Chazov, V.V. Smirnov). Biro Konsultan, N.Y., L, 1986, hal. 283-310; V.B. Hvatov. Aspek medis dan biologis dari penggunaan darah anumerta. Buletin Akademi Ilmu Kedokteran Uni Soviet, 1991, 9. hal.18-24; V.B. Hvatov. Darah mayat - sejarah dan keadaan terkini dari masalah ini. Masalah hematol. dan meluap. darah, 1997, 1.S.51-59]. Komponen darah kadaver yang diperoleh dari donor organ juga telah mendapat kegunaan klinis [orang yang meninggal dengan jantung berdebar menurut “Petunjuk untuk memastikan kematian seseorang berdasarkan diagnosis kematian otak” tertanggal 20 Desember 2001 No. 460, Pendaftaran Menteri Kehakiman No. 3170 tanggal 17 Januari 2002] . Transplantasi organ, jaringan, dan sel dilakukan sesuai dengan Hukum Federasi Rusia “Tentang Transplantasi Organ dan (atau) Jaringan Manusia” - sebagaimana telah diubah. hukum federal tanggal 20 Juni 2000 Nomor 91-F3, tanggal 16 Oktober 2006 Nomor 160-F3; V.B. Khvatov, S.V. Zhuravel, V.A. Gulyaev, E.N. Kobzeva, M.S. Makarov. Kegunaan biologis dan aktivitas fungsional komponen seluler darah donor organ. Transplantologi, 2011, 4, hal. 13-19; Khubutia M.Sh., Khvatov V.B., Gulyaev V.A. dll. Suatu metode untuk mengkompensasi volume darah globular dan efek imunomodulator selama transplantasi. Paten RF untuk penemuan No. 2452519, publ. 06/10/2012, buletin. Nomor 16].

Plasma yang aktif secara fibrinolitik diperoleh dari darah orang yang meninggal mendadak, dibuat dengan bahan pengawet Glyugitsir (rasio darah: pengawet 4:1) untuk mempertahankan sifat aktif fibrinolitiknya. Pemisahan plasma dari unsur seluler darah dilakukan dalam kotak steril sesuai dengan semua aturan asepsis dan antiseptik dan mirip dengan memperoleh plasma donor dari darah donor kaleng. Penggunaan klinis FAP dalam pembedahan dan traumatologi telah mengungkapkan efek merangsang penyembuhan luka [I.Yu. Klyukvin, M.V. Zvezdina, V.B. Khvatov, F.A. Burdyga. Sebuah metode untuk mengobati luka gigitan. Paten untuk penemuan Federasi Rusia No. 2372927, publ., 20 November 2009, buletin. Nomor 32]. Kami mengaitkan efek ini dengan adanya faktor perangsang pertumbuhan di FAP, yang disekresikan oleh trombosit yang teraktivasi. Kami kemudian mengidentifikasi faktor pertumbuhan turunan trombosit (PDGF) di FAP. Efek stimulasi pertumbuhan FAP dalam kultur sel manusia telah ditunjukkan dalam penelitian khusus. Sampel FAP yang diteliti pada konsentrasi 10% ditambahkan ke suspensi sel fibroblas manusia dari garis M-20, yang mengandung sejumlah sel yang diketahui, dan 10 ml campuran yang dihasilkan ditempatkan dalam labu kultur dengan luas permukaan pertumbuhan sebesar 25 cm 2 . Sel ditanam selama 3-4 hari dalam atmosfer 5% CO 2 dan pada suhu 37°C. Setelah melewati 3 kali lipat, sel-sel yang tumbuh dihitung dalam ruang Fuchs-Rosenthal dan rasio jumlah sel yang tumbuh dengan jumlah sel yang ditanam ditentukan - indeks proliferasi (pada Tabel 1).

Dari percobaan yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa sifat pertumbuhan FAP memberikan aktivitas proliferasi yang tinggi dan tidak berbeda dengan serum janin sapi. Selain itu, FAP mengandung faktor pertumbuhan trombosit manusia, yaitu. tipe alogenik, berbeda dengan serum janin sapi - tipe xenogenik. Fakta ini sangat menentukan untuk transplantasi sel selama terapi penggantian. Perhatikan bahwa efek stimulasi pertumbuhan pada kultur sel M-20 terutama disebabkan oleh adanya PDGF dalam FAP pada konsentrasi 155 hingga 342 pg/ml. Data ini diperoleh dengan menggunakan Qantikine, kit Immunoassay Human PDGF-BB dari R&D Systems dan sistem Multiskan Ascent dari Thermo. Konsentrasi PDGF-BB pada FAP mirip dengan kandungannya dalam serum darah. Dengan demikian, pada serum darah donor dan pasien yang diperiksa, kandungan PDGF berkisar antara 110 hingga 880 pg/l dengan rata-rata 244 pg/ml, sedangkan dalam plasma kandungan PDGF bervariasi antara 0-2 pg/ml.

Untuk pemahaman yang lebih baik tentang solusi teknis yang diusulkan “produksi sel diploid manusia dari lini M-20 untuk tujuan medis dan biologis,” kami memberikan contoh berikut.

Sel-sel jalur M-20, jalur 16, diambil dari bank kerja. Untuk melakukan ini, cryovial dengan sel dikeluarkan dari nitrogen cair dan ditempatkan di dalamnya mandi air pada suhu 38°C dan setelah dicairkan, isinya dipindahkan ke dalam wadah kultur dengan media nutrisi DMEM yang mengandung 10% FAP (dengan kandungan PDGF 155 hingga 342 pg/ml), ditambahkan antibiotik gentamisin sebanyak 1 ml larutan 4% per 1 liter media nutrisi . Untuk membentuk lapisan tunggal, sel dikultur selama 4-5 hari pada suhu 37°C dan 5% CO 2 di atmosfer. Setelah pembentukan sel monolayer, 3 jalur berturut-turut dilakukan, yang diperlukan untuk perbaikan DNA setelah kriopreservasi. Kemudian sel direplikasi dari bagian 20 ke bagian 33. Sel dari bagian ini dimaksudkan untuk tujuan biomedis. Garis sel yang dihasilkan dikarakterisasi secara rinci sesuai dengan persyaratan WHO dan nama GNIISiK MIBP. LA. Tarasevich, termasuk pengetikan HLA dari garis sel M-20, dan juga studi tentang spektrum sitokinnya. Kami memberikan gambaran perbandingan sifat-sifat garis M-20 dan garis M-22 (Tabel 2). Jalur M 22 (fibroblas diploid manusia) dilisensikan sebagai substrat vaksin dan disetujui untuk produksi semua jenis vaksin virus medis, dan juga digunakan untuk pengobatan luka bakar derajat II-IIIA [Paten RF untuk penemuan No. 2373944 , 23/06/2008. Cara mengobati luka bakar. SEBAGAI. Ermolov, S.V. Smirnov, V.B. Khvatov, L.L. Mironova, O.I. Klnyushko, E.A. Zhirkova, B.C. Bocharova].

Jalur M-20 dipasang di IPVE yang dinamai demikian. anggota parlemen Chumakov RAMS pada tahun 1986 dari kulit dan otot embrio manusia berumur 10 minggu yang diperoleh dari aborsi dari seorang wanita sehat. Tidak ada riwayat penyakit kanker, penyakit menular seksual, hepatitis, atau tuberkulosis; genetik dan penyakit bawaan tidak diamati dalam keluarga. Media kultur sel DMEM ditambah dengan 10% FAP. Rasio penyemaian 1:3-1:4 dua kali seminggu dengan dosis penyemaian sel 7×10 4 sel/ml. Lapisan tunggal sel terdiri dari sel-sel berbentuk gelendong homogen yang berorientasi dengan inti oval yang mengandung 1-3 nukleolus dan gumpalan kecil kromatin. DI DALAM siklus hidup garis tersebut dapat dibedakan menjadi 3 fase perkembangan: pembentukan 1-3 lintasan, pertumbuhan aktif 4-40 dan penuaan 41-52, kemudian terjadi kematian. Sel-sel garis tersebut memiliki kariotipe manusia 2m=46, XY. Garis ini dicirikan oleh stabilitas genetik yang tinggi: 93,3-96,9% sel memiliki set kromosom diploid, sel dengan set poliploid tidak lebih dari 1,6%. Tidak ada celah, kerusakan, atau cincin kromosom yang diamati. Jumlah pita isoenzim G-6PDE dan LDE serta mobilitas elektroforesisnya sama dengan eritrosit manusia. Tipe lambat G-6FDG. Saat disemai pada media nutrisi selektif, tidak ditemukan kontaminasi bakteri, jamur, atau mikoplasma. Selain itu, tidak ada kontaminasi mikoplasma yang terdeteksi saat pewarnaan dengan DNA fluorokrom Hochst 33258 dan olivomisin, serta metode PCR. Kontaminasi virus dalam percobaan pada tikus putih menyusui dan dewasa, kelinci percobaan, embrio kelinci dan ayam, serta pada kultur sel homolog dan heterolog. Pengendalian tumorigenisitas. Ketika sel-sel garis tersebut diberikan pada hewan yang mengalami imunosupresi, tumor tidak terbentuk. Tidak ada transkriptase balik yang terdeteksi. Penanda HLA: Kelas I: A*(02.03)/B*(07.40)/CW*(03.07). Kelas II: DRB1*(15.16)/DQB1*(05.06). Sel garis M-20 pada tingkat lintasan ke-20 menghasilkan mRNA untuk α-interferon (IFNα) dan interleukin: IL1β, 2, 4, 6, 8, 10, 18.

Dengan demikian, garis yang diusulkan adalah diploid - memiliki umur terbatas, mempertahankan kariotipe sel manusia normal sepanjang hidup, bebas dari kontaminan dan tidak memiliki potensi onkogenik. Keamanannya telah dikarakterisasi sesuai dengan rekomendasi WHO dan persyaratan Institut Penelitian Ilmiah Negara Penyakit Menular Klinis yang dinamai demikian. LA. Tarasevich. Di IPVE mereka. anggota parlemen Chumakov RAMS terdapat bank benih dan sel kerja yang dapat memenuhi semua kebutuhan produksi dan penelitian ilmiah. Sel garis M-20 sensitif terhadap infeksi berbagai virus. Selain itu, spektrum sitokin dari garis M-20 dipelajari. Pengetahuan tentang spektrum sitokin sel memungkinkan untuk mengevaluasi hasil dengan lebih akurat dalam menentukan status interferon pasien dan memberikan rekomendasi yang masuk akal mengenai penggunaan obat terapeutik dan profilaksis.

Sel diploid manusia - fibroblas strain M-20 dengan peningkatan aktivitas proliferasi, diperoleh dengan metode yang diusulkan, dapat digunakan untuk tujuan diagnostik, khususnya untuk menentukan aktivitas interferon (IFN) dalam serum darah manusia, serta untuk tujuan pengobatan , misalnya untuk pengobatan lokal luka baring, luka gigitan, luka yang tidak kunjung sembuh dan luka bakar dalam jangka waktu lama.

1. Suatu metode untuk meningkatkan sifat proliferasi sel fibroblas manusia diploid, yang dicirikan bahwa sel diploid dari garis M-20 yang dikarakterisasi dari cryobank Institute of Vessels dinamai demikian. anggota parlemen Chumakov RAMS diskalakan dari ampul kumpulan sel benih saluran 7 dan kumpulan sel kerja saluran 16 diperoleh, sedangkan sel saluran 20-33, cocok untuk digunakan untuk tujuan terapeutik dan/atau diagnostik, diperoleh dengan budidaya dalam media nutrisi yang mengandung 10% plasma aktif fibrinolitik (FAP) manusia yang mengandung faktor pertumbuhan turunan trombosit PDGF dalam konsentrasi 155 hingga 342 pg/ml.

2. Metode menurut klaim 1, dimana media nutrisi DMEM dengan FAP 10% digunakan saat membiakkan sel.

Paten serupa:

Invensi ini berkaitan dengan industri farmasi, yaitu penggunaan sel perfusi plasenta manusia dalam produksinya obat untuk menekan proliferasi sel tumor pada seseorang.

Kelompok penemuan berkaitan dengan bidang bioteknologi dan onkologi. Metode ini melibatkan: a) mengisolasi sel induk autologus multipoten (ASC) spesifik jaringan pascakelahiran dan/atau sel progenitor autologus (APC) untuk analisis proteomik dan transkripsi penuh berikutnya; b) isolasi ASC dan/atau APC dan/atau sel induk haploidentikal HLA-haploidentik alogenik multipoten (HLA-CK) untuk selanjutnya dilakukan remodeling profil proteomiknya; c) isolasi CSC dari tumor pasien; d) analisis proteomik ASC dan/atau APC dan RSC; e) analisis transkriptome lengkap terhadap ASC dan/atau APC dan CSC; f) penentuan sekumpulan protein, yang masing-masing terkandung dalam profil proteomik ASC dan/atau APC, dan CSC; g) analisis sekumpulan protein yang telah ditentukan sebelumnya untuk mengidentifikasi jalur pensinyalan intraseluler di CSC yang belum mengalami transformasi neoplastik akibat karsinogenesis, dan untuk menentukan protein target yang merupakan akseptor membran dari jalur pensinyalan yang teridentifikasi; h) analisis profil ekspresi gen transkriptome lengkap CSC dan konfirmasi integritas dan signifikansi fungsional komponen struktural jalur pensinyalan yang teridentifikasi di CSC; i) identifikasi protein ligan yang mampu mengaktifkan protein target; Ke) analisis komparatif profil transkriptomik lengkap ASA dan/atau APC dengan profil transkriptomik yang terdapat dalam database transkriptome yang diketahui, untuk mengidentifikasi perturbogen yang mampu memodifikasi profil ekspresi gen ASA dan/atau APC dan/atau HLA-CK, diisolasi untuk merombak profil proteomiknya, di arah sekresi protein ligan tertentu sebelumnya; k) remodeling profil proteomik ASA dan/atau APC dan/atau HLA-CK oleh perturbogen untuk mendapatkan profil transkriptomik yang dimodifikasi dari berbagai sistem seluler, mampu memberikan efek regulasi pada RSC pasien.

Invensi ini berkaitan dengan bidang bioteknologi, khususnya teknologi seluler, dan dapat digunakan dalam bidang kedokteran. Populasi sel mononuklear atau sel induk non-embrio yang diperkaya dengan sel dari garis keturunan monositik yang mengandung promonosit digunakan untuk mengobati iskemia pada suatu subjek.

Penemuan tersebut berkaitan dengan bidang bioteknologi dan teknologi sel. Invensi yang diklaim ini bertujuan untuk menciptakan sel-sel yang berpotensi majemuk, multipoten, dan/atau memperbaharui diri yang mampu mulai berdiferensiasi dalam kultur di berbagai jenis sel dan mampu berdiferensiasi lebih lanjut secara in vivo.

Invensi ini berkaitan dengan bidang kedokteran dan dapat digunakan untuk seleksi sperma dalam metode teknologi reproduksi berbantuan. Caranya dengan menempatkan setetes sperma dan setetes media kultur ke dalam cawan Petri dengan jarak satu sama lain tidak lebih dari 5 cm, menghubungkan tetesan tersebut dengan strip media kental dengan parameter viskositas 1-4 Pa s, kemudian menginkubasi cawan beserta isinya selama 30-90 menit dalam kondisi simulasi lingkungan alam saluran serviks saluran reproduksi wanita.

Penemuan tersebut berkaitan dengan bidang kedokteran, bioteknologi dan teknologi sel. Suatu metode untuk membedakan sel induk berpotensi majemuk yang mewakili garis sel manusia menjadi sel yang mengekspresikan penanda karakteristik garis keturunan endoderm yang terbentuk melibatkan perlakuan terhadap sel induk berpotensi majemuk dengan media yang ditandai dengan tidak mengandung aktivin A dan mengandung GDF-8 untuk jangka waktu tertentu. , cukup bagi sel induk berpotensi majemuk untuk berdiferensiasi menjadi sel yang mengekspresikan penanda karakteristik garis keturunan endoderm yang terbentuk.

Invensi ini berhubungan dengan bidang imunologi. Varian oligopeptida yang diisolasi dari protein RAB6KIFL (KIFL20A), yang mampu menginduksi limfosit T sitotoksik (CTL) sebagai bagian dari kompleks dengan molekul HLA-A*0201, telah diusulkan.

Invensi ini berkaitan dengan bidang industri makanan dan merupakan metode pembuatan bir yang mencakup penambahan protease termostabil ke dalam wort setelah menyaring wort, tetapi sebelum merebus wort, dimana stabilitas panas protease berarti aktivitas protease ini adalah setidaknya 70% dari aktivitasnya, diukur menurut ke metode berikutnya: protease diencerkan hingga konsentrasi 1 mg/ml dalam buffer pengujian yang mengandung 100 mmol asam suksinat, 100 mmol HEPES, 100 mmol CHES, 100 mmol CABS, 1 mmol CaCl2, 150 mmol KCl, 0,01% Triton X-100, dan c pH disesuaikan menjadi 5,5 dengan NaOH; setelah itu protease dipreinkubasi i) dalam es dan ii) 10 menit pada suhu 70°C; substrat tempat protease aktif disuspensikan dalam 0,01% Triton X-100: untuk memulai reaksi, 20 μl protease ditambahkan ke tabung reaksi dan diinkubasi dalam termomixer Eppendorf pada 70°C, 1400 rpm selama 15 menit; reaksi dihentikan dengan menempatkan tabung di dalam es; sampel disentrifugasi dingin pada 14000 g selama 3 menit dan kerapatan optik OD590 supernatan diukur; nilai OD590 yang diperoleh dari sampel tanpa protease dikurangi dari nilai OD590 yang diperoleh dari sampel yang diberi perlakuan protease; menentukan termostabilitas protease dengan menghitung persentase aktivitas protease dalam sampel yang dipreinkubasi pada suhu 70°C relatif terhadap aktivitas protease dalam sampel yang diinkubasi di es sebagai aktivitas 100%.

Penemuan ini berkaitan dengan bidang biologi sel, transplantasi sel dan rekayasa jaringan. Suatu metode untuk meningkatkan aktivitas angiogenik sel stroma jaringan adiposa di jaringan dan organ melibatkan isolasi sel stroma jaringan adiposa, membiakkan sel yang diisolasi dengan adanya tumor necrosis factor-alpha dalam jumlah 5 atau 100 ng/ml selama 24-72 jam , diikuti dengan transplantasi ke jaringan atau organ.

Penemuan tersebut berkaitan dengan bidang bioteknologi, teknologi sel dan bedah jaringan. Cara memperoleh kultur sel otot polos adalah dengan memotong sebagian pembuluh darah, menggilingnya menjadi potongan-potongan dengan ukuran tidak lebih dari 2 mm dalam berbagai dimensi, dan menginkubasi potongan tersebut dalam labu kultur yang telah diberi goresan sebelumnya. ke bagian bawah labu, berisi media kultur yang mengandung 10% serum janin embrio, selama sekurang-kurangnya 10 hari, tetapi tidak lebih dari 24 hari, pada suhu 37°C dalam inkubator CO2, yang ditandai dengan fragmen tersebut dari pembuluh darah adalah bagian dari tungkai menaik aorta toraks, dipotong selama prosedur pencangkokan bypass arteri koroner, dan potongan fragmen aorta toraks asendens tersebut disimpan dalam media kultur yang mengandung kolagenase 0,1% selama minimal 30 menit, tetapi tidak lebih dari 60 menit, pada suhu 37 °C sebelum inkubasi, lalu dicuci dengan media kultur sel.

Metode memperoleh sel induk mesenkim dari sel induk berpotensi majemuk manusia dan sel induk mesenkim diperoleh dengan metode ini // 2528250

Invensi tersebut berkaitan dengan bidang rekayasa genetika, teknologi jaringan dan kedokteran. Suatu metode untuk memperoleh sel induk mesenkim dari lini sel induk berpotensi majemuk manusia meliputi memperoleh badan embrioid dari sel induk berpotensi majemuk manusia, menempelkan badan embrioid ke cawan petri untuk menginduksi diferensiasi spontan badan embrioid menjadi sel induk mesenkim, mengkultur dengan proliferasi sel induk mesenkim, dan mempertahankan identitas sel induk mesenkim , dan di mana induksi diferensiasi tahap spontan terjadi melalui pembentukan loop sitokin autolog tanpa penambahan sitokin eksternal, juga sel yang sesuai, penggunaannya, metode rekrutmen dan kultur.

Penemuan ini berkaitan dengan bidang biologi molekuler, biokimia dan kedokteran. Suatu komposisi diusulkan untuk menginduksi migrasi sel induk jaringan adiposa dewasa, yang mengandung bahan aktif sel induk mesenkim manusia dari jaringan adiposa dewasa dalam jumlah 1x107 hingga 1x1010, yang mengekspresikan kemokin atau reseptor faktor pertumbuhan pada permukaan sel, atau produk sekretorik dari sel induk ini meliputi kemokin atau reseptor faktor pertumbuhan; dimana produk yang disekresikan sel induk jaringan adiposa dewasa adalah adiponektin; dan di mana sel induk jaringan adiposa dewasa manusia diberi campuran yang mengandung kemokin atau faktor pertumbuhan.

Penemuan ini berkaitan dengan bioteknologi dan kedokteran. Sebuah metode telah diusulkan untuk perluasan sel mononuklear darah tali pusat (pcBMC) ex vivo dengan adanya sel mesenkim multipaten (MMSC), yang mencakup pembiakan MMSC dari fraksi stroma-vaskular jaringan adiposa hingga lapisan tunggal tercapai pada tingkat yang sama. Konsentrasi O2 dalam media 5%, penambahan suspensi pcMNC pada monolayer MMSC, budidaya selama 72 jam pada konsentrasi O2 dalam media 5%, pemilihan psMNC yang tidak terikat dan penggantian media, dilanjutkan budidaya MMSC dengan psMNC yang terpasang selama 7 hari pada konsentrasi O2 dalam medium 5%.

Penemuan tersebut berkaitan dengan bidang bioteknologi dan kedokteran. Diusulkan suatu komposisi yang mengandung sel induk dari cairan ketuban manusia dengan fenotip CD73+/CD90+/CD105+/CK19+, media nutrisi, eritropoietin, faktor pertumbuhan epidermal dan kolagen, diambil dalam jumlah yang efektif.

Penemuan tersebut berkaitan dengan bidang kedokteran dan teknologi sel. Produk sel yang mengandung populasi sel induk duktal submandibular kelenjar ludah, ditandai dengan fenotip CD49f+/EpCAM+ dan setelah pengobatan dengan asam valproat pada konsentrasi 0,1-40 mM dan budidaya dalam gel kolagen, mengubah profil ekspresi menjadi 1AAT+/PEPCK+/G6P+/TDO+/CYP P4503A13+, serta memperoleh kemampuan untuk mensintesis urea dan albumin.

Penemuan tersebut berkaitan dengan bidang bioteknologi, rekayasa sel dan jaringan. Suatu metode dijelaskan untuk memperoleh sel induk residen jantung mamalia yang mengekspresikan penanda permukaan c-kit, dan/atau sca-1, dan/atau MDR1, di mana sampel jaringan miokard diisolasi, dihancurkan, diolah dengan kolagenase dan trypsin, dan dikultur pada cawan kultur yang dilapisi fibronektin dengan kultur eksplan dari sampel yang dihancurkan diikuti dengan imunoseleksi.

Penemuan tersebut berkaitan dengan bidang biokimia, bioteknologi dan kedokteran. Fragmen N-terminal dari penekan respon imun terlarut dengan panjang 21 asam amino telah diusulkan, memiliki urutan asam amino menurut Seq ID NO: 1, yang memungkinkan merangsang pembentukan limfosit T pengatur, juga sebagai metode untuk merangsang pembentukan limfosit T pengatur dengan fragmen N-terminal dari penekan respon imun yang larut dengan Seq ID NO: 1, bila diberikan pada konsentrasi 0,1-50 g/ml.

Invensi ini berkaitan dengan industri farmasi dan merupakan krim dermatologis yang ditujukan untuk pengobatan lokal infeksi bakteri pada kulit dan untuk penyembuhan luka terkait, mengandung framycetin sulfate dan biopolimer yang termasuk dalam dasar krim yang mengandung setidaknya satu zat dari masing-masing kelompok berikut. : pengawet ; suatu pengemulsi primer dan sekunder yang dipilih dari kelompok yang terdiri dari ketostearil alkohol, ketomacrogol 1000, polisorbat-80 dan Span-80; parafin sebagai produk lilin; suatu pelarut bersama yang dipilih dari kelompok yang terdiri dari propilen glikol, heksilen glikol dan polietilen glikol-400; asam nitrat atau asam laktat dan air, dan biopolimer tersebut lebih disukai kitosan.

Invensi ini berkaitan dengan bidang bioteknologi, khususnya teknologi seluler, dan dapat digunakan dalam bidang kedokteran. Metode ini melibatkan penskalaan sel diploid dari garis M-20 dari cryobank IPVE yang dinamai demikian. anggota parlemen Akademi Ilmu Kedokteran Rusia Chumakov dari ampul bank sel benih jalur 7 untuk mendapatkan bank sel kerja jalur 16. Dalam hal ini, sel dengan 20-33 saluran, cocok untuk digunakan untuk tujuan terapeutik dan diagnostik, diperoleh dengan mengkultur dalam media nutrisi yang mengandung 10 plasma manusia yang aktif secara fibrinolitik yang mengandung faktor pertumbuhan PDGF turunan trombosit dalam konsentrasi 155 hingga 342 pgml. Penemuan ini memungkinkan untuk meningkatkan aktivitas proliferasi sel fibroblas manusia diploid. 1 gaji file, 2 tabel.