Fibroblasty. Funkce fibroblastů

Hlavní činnost modern estetická medicína- prevence stárnutí pomocí špičkových technologií. Jako výsledek vědecký výzkum Bylo zjištěno, že buňky mají schopnost regenerace. Tyto vlastnosti mají i fibroblasty, jejichž regenerace vede k omlazení pokožky a odstranění viditelných defektů na nich.

Funkce a povaha fibroblastů

Termín "fibroblasty" se skládá ze dvou latinských slov přeložených doslovně jako "klíček" a "vlákno". Svou povahou jsou to buňky pojivové tkáně syntetizující extracelulární matrix (tkáňová struktura, která zajišťuje přenos chemické substance a mechanická podpora kožních buněk). Fibroblasty produkují látky, které jsou prekurzory kolagenových a elastinových vláken, kyseliny hyaluronové, fibrinu.

Pocházejí z mezenchymu - zárodečné tkáně, která se nachází v buňkách těla lidí a zvířat. V aktivním stavu struktura fibroplastů implikuje přítomnost jádra a procesů, mají zvětšenou velikost a obsahují velké množství ribozomů, v klidovém stavu se zmenšují a získávají vřetenovitý tvar.

Kožní fibroblasty mají široký rozsah funkcí. Díky jejich přítomnosti v těle probíhají následující procesy:

• Aktivace procesů syntézy kolagenu a elastinu.
• Tvorba krevních cév.
• Nasměrování buněk imunitního systému na bakterie a cizí částice.
• Zrychlení růstu tkání.
• Zvýšený růst buněk.
• Hojení poškozených oblastí kůže.
• Produkce řady proteinů (proteoglykan, laminin a další).

Příčiny změn souvisejících s věkem

Mladost pokožky je dána cyklickým procesem produkce kolagenu a elastinu, které se následně rozkládají na své složky, které využívají fibroblasty k jejich opětovné produkci. Postupem času tyto snižují svou aktivitu, přestávají produkovat kolagenová a elastinová vlákna, což v konečném důsledku vyvolává stárnutí pokožky.

Změny související s věkem se začínají objevovat od 28 do 30 let věku. Projevují se ztrátou elasticity a rozvojem ptózy, změnami barvy kůže, zvýšenou suchostí a tvorbou vrásek. A to vše díky skutečnosti, že každou dekádu se počet fibroblastů sníží o 10 % původní číslo.

Doplňování fibroblastů

Takže, aby se zpomalilo stárnutí a obnovilo mládí, je nutné obnovit fibroblasty. Většina moderních kosmetických technik vede pouze k dočasnému urychlení syntézy kolagenových vláken, ale nezvětšuje samotné buňky. Dlouho se všeobecně přijímalo, že to prostě není možné.

V dnešní době věda udělala velké kroky kupředu a obnova fibroblastů již není fantazií. Tento postup nazývaná SPRS terapie a je široce praktikována ve státech, evropských zemích a v poslední době i v Rusku.

SPRS terapie: vlastnosti a princip provádění

Obnova fibroblastů není snadná, vyžaduje složitou injekční proceduru. Výsledkem jeho provádění je ztluštění kůže a zvýšení její elasticity, prevence a redukce ptózy. Redukují se také vrásky, mizí pigmentace a vyhlazují se jizvy.

Terapie začíná odběrem buněk pacienta z kůže nacházející se za boltcem. Výsledný vzorek se používá pro diagnostiku a studium, nazývá se biomateriál. Používá se k vyvinutí léčebného režimu a umělé obnově fibroblastů, které budou následně injikovány zpět do kůže pomocí injekcí.

Buňky vypěstované z biomateriálů pacienta tělo neodmítne. Po transplantaci zůstávají aktivní jeden a půl roku, během kterého se stav kůže zlepšuje.

Fibroblasty se nedoporučuje podávat injekčně při exacerbaci chronických onemocnění, nachlazení, virových infekcích doprovázených zvýšená teplota těla. Mezi kontraindikace patří imunodeficience, zhoubné útvary, infekce a chronická onemocnění PROTI akutní stadium. Před provedením postupu je nutná předběžná konzultace s odborníkem k identifikaci jednotlivých kontraindikací.

Procedura netrvá déle než hodinu a provádí se v průběhu 2 sezení s přestávkou 5 až 7 týdnů. Před injekcí je nutná lokální anestezie.

Zavádění fibroblastů je drahé potěšení. Celá řada služby, včetně sběru, skladování, výzkumu a správy biomateriálů, se odhaduje na přibližně 400 000 rublů.

Video: provádění SPRS terapie

Fibroblasty jsou buňky pojivové tkáně, které zajišťují produkci kolagenu a elastinu, čímž udržují mladistvost naší pokožky. Postupem času se jejich počet v těle neustále snižuje, díky čemuž se objevují vnější známky změn souvisejících s věkem. Obnova počtu fibroblastů se provádí pomocí injekční techniky založené na uměle pěstovaných buňkách.

Fibroblasty- vedoucí buňky volné pojivové tkáně, produkující složky mezibuněčné látky. Jedná se o rozvětvené, vřetenovité nebo rozprostřené buňky o velikosti asi 20 mikronů. Dobře jsou v nich vyvinuty organely vnitřního metabolického prostředí. Jádro fibroblastu je oválného tvaru, obsahuje rovnoměrně rozptýlený chromatin a 2-3 jadérka. Cytoplazma je jasně rozdělena na silně zbarvenou endoplazmu a slabě zbarvenou ektoplazmu. Cytoplazma fibroblastů (zejména mladých) je bazofilní. Odhaluje dobře vyvinuté endoplazmatické retikulum s velkým počtem ribozomů připojených k membránám ve formě řetězců 10-30 granulí. Tato ultrastruktura granulárního endoplazmatického retikula je charakteristická pro buňky, které aktivně syntetizují protein „pro export“. Existují také četné volné ribozomy a dobře vyvinutý Golgiho komplex. Mitochondrie jsou velké, jejich počet je malý. Cytochemické metody prokázaly přítomnost glykolytických enzymů a hydrolytických enzymů lysozomů (zejména kolagenázy) v cytoplazmě fibroblastů. Oxidační enzymy mitochondrií jsou méně aktivní.

Muskuloskeletální systém buňky zajišťuje jejich pohyblivost, změnu tvaru, přichycení k substrátu, mechanické napětí filmu, na který je buňka v kultuře přichycena. Na povrchu buňky je mnoho mikroklků a vezikulárních výběžků. Fibroblasty suspendované v kapalném prostředí mají kulovitý tvar. Fibroblast se rozšíří po přilnutí k pevnému povrchu, po kterém se pohybuje díky pseudopodii.

Hlavní funkce fibroblastů- syntéza a sekrece proteinů a glykosaminoglykanů sloužících k tvorbě složek mezibuněčné hmoty pojivové tkáně, jakož i tvorba a sekrece faktorů stimulujících kolonie (granulocyty, makrofágy). Fibroblasty na dlouhou dobu zachovat schopnost proliferovat. Fibroblasty, které dokončily svůj vývojový cyklus, se nazývají fibrocyty. Jedná se o dlouhověké buňky. Buněčná cytoplazma je ochuzena o organely, buňka se zplošťuje a proliferační potenciál klesá. Buňka však neztrácí schopnost podílet se na regulaci metabolické procesy v látce.

Mezibuněčná látka. Skládá se z fibrilární a základní (amorfní) složky. Pomocí histoautoradiografických metod se zavedením značených aminokyselin (3H-prolin, 3H-glycin atd.) bylo zjištěno, že proteinové molekuly jsou syntetizovány v polysomech fibroblastů. Fibroblasty mohou současně syntetizovat několik typů specifických proteinů a glykosaminoglykanů. Pro syntézu kolagenového proteinu je nezbytná přítomnost vitaminu C, při jehož nedostatku je kolagenogeneze prudce inhibována. Syntéza mezibuněčných látek probíhá intenzivněji za podmínek snížené koncentrace kyslíku. Fibroblast současně se syntézou kolagenu ničí přibližně 2/3 tohoto proteinu pomocí enzymu kolagenázy, který zabraňuje předčasné skleróze tkání.

Syntetizované molekuly prokolagenu jsou přiváděny na povrch fibroblastů exocytózou. V tomto případě protein přechází z rozpustné formy na nerozpustnou - tropokolagen. Ke spojení molekul tropokolagenu do supramolekulárních struktur - kolagenních fibril - dochází v bezprostřední blízkosti buněčného povrchu působením speciálních látek vylučovaných buňkou. Konkrétně byl na povrchu fibroblastů nalezen protein – fibronektin, který plní adhezivní a další funkce. Následná stádia fibrilogeneze probíhají polymerací a agregací tropokolagenu na dříve vytvořených fibrilách. V tomto případě může dozrávání kolagenových vláken probíhat bez přímého spojení s fibroblasty.
Glykosaminoglykany jsou regulátory tvorby kolagenu a jsou součástí hlavní (amorfní) složky mezibuněčné látky.

Fibrilární složka Mezibuněčná látka volné pojivové tkáně zahrnuje tři typy vláken – kolagenní, elastická a retikulární. Mají podobný mechanismus tvorby, ale liší se od sebe navzájem chemické složení, ultrastruktura a fyzikální vlastnosti. Kolagenní protein je identifikován svým složením aminokyselin a sekvencí aminokyselin v molekule kolagenu. V závislosti na variaci aminokyselin v polypeptidovém řetězci, imunitních vlastnostech, molekulové hmotnosti atd. se rozlišuje 14 nebo více odrůd kolagenových proteinů, které jsou součástí pojivové tkáně orgánů. Všechny tvoří 4 hlavní typy nebo třídy kolagenu.

Kolagen typu 1 nalezený v spojovacím a kostní tkáně, stejně jako ve bělmě a rohovce oka; Typ II - v chrupavčitých tkáních; Typ III - ve stěně krevních cév, v pojivové tkáni kůže plodu; Typ IV-ro - v bazálních membránách.

Fibroblasty(fibroblastocyty) (z lat. fibra - vláknina, řecky blastos - klíček, klíček) - buňky, které syntetizují složky mezibuněčné látky: proteiny (například kolagen, elastin), proteoglykany, glykoproteiny.

V embryonálním období vzniká řada mezenchymálních buněk embrya diferenciace fibroblastů, který zahrnuje:

· kmenové buňky,

semi-kmenové progenitorové buňky,

· nespecializované fibroblasty,

diferencované fibroblasty (zralé, aktivně fungující),

fibrocyty (definitivní tvary buněk),

myofibroblasty a fibroklasty.

S hlavní funkce fibroblasty jsou spojeny s tvorbou hlavní látky a vláken (což se zřetelně projevuje např. při hojení ran, vznikem jizevnaté tkáně, vznikem vazivového pouzdra kolem cizího tělesa).

Nízko specializované fibroblasty jsou málo zpracované buňky s kulatým nebo oválným jádrem a malým jadérkem, bazofilní cytoplazmou, bohatou na RNA. Velikost buněk nepřesahuje 20-25 mikronů. V cytoplazmě těchto buněk se nachází velké množství volných ribozomů. Endoplazmatické retikulum a mitochondrie jsou špatně vyvinuté. Golgiho aparát představují shluky krátkých trubiček a váčků.
V této fázi cytogeneze mají fibroblasty velmi nízkou úroveň syntézy a sekrece proteinů. Tyto fibroblasty jsou schopné mitotické reprodukce.

Diferencované zralé fibroblasty jsou větší velikosti. Jedná se o aktivně fungující buňky.

Ve zralých fibroblastech probíhá intenzivní biosyntéza kolagenu, elastinových proteinů, proteoglykanů, které jsou nezbytné pro tvorbu hlavní látky a vláken. Tyto procesy se zlepšují za podmínek nízké koncentrace kyslíku. Stimulačními faktory pro biosyntézu kolagenu jsou také ionty železa, mědi, chrómu, kyselina askorbová. Jedním z hydrolytických enzymů je kolagenáza- rozkládá nezralý kolagen uvnitř buněk, čímž reguluje intenzitu sekrece kolagenu na buněčné úrovni.

Fibroblasty jsou pohyblivé buňky. V jejich cytoplazmě, zejména v periferní vrstvě, se nacházejí mikrofilamenta obsahující proteiny jako aktin a myosin. Pohyb fibroblastů je možný až po jejich navázání na podpůrné fibrilární struktury pomocí fibronektin- glykoprotein syntetizovaný fibroblasty a jinými buňkami, zajišťující adhezi buněk a nebuněčných struktur. Během pohybu se fibroblast zplošťuje a jeho povrch se může zvětšit 10krát.

Plazmalema fibroblastů je důležitou receptorovou zónou, která zprostředkovává účinky různých regulačních faktorů. Aktivace fibroblastů je obvykle doprovázena akumulací glykogenu a zvýšenou aktivitou hydrolytických enzymů. Energie generovaná metabolismem glykogenu se používá k syntéze polypeptidů a dalších složek vylučovaných buňkou.

Na základě jejich schopnosti syntetizovat fibrilární proteiny rodina fibroblastů zahrnuje retikulární buňky retikulární pojivové tkáně hematopoetických orgánů, stejně jako chondroblasty a osteoblasty kosterní odrůdy pojivové tkáně.

Fibrocyty- definitivní (konečné) formy vývoje fibroblastů. Tyto buňky jsou vřetenovitého tvaru s pterygoidní procesy. [Obsahují malé množství organel, vakuol, lipidů a glykogenu.] Syntéza kolagenu a dalších látek ve fibrocytech je prudce snížena.

Myofibroblasty- buňky podobné fibroblastům, kombinující schopnost syntetizovat nejen kolagen, ale také kontraktilní proteiny ve významném množství. Fibroblasty se mohou transformovat na myofibroblasty, které jsou funkčně podobné hladkým svalové buňky, ale na rozdíl od posledně jmenovaných mají dobře vyvinuté endoplazmatické retikulum. Takové buňky jsou pozorovány v granulační tkáni hojících se ran a v děloze během těhotenství.

Fibroklasty- buňky s vysokou fagocytární a hydrolytickou aktivitou se účastní „vstřebávání“ mezibuněčné látky během období involuce orgánu (například v děloze po těhotenství). Kombinují strukturální rysy buněk tvořících fibrily (vyvinuté granulární endoplazmatické retikulum, Golgiho aparát, relativně velké, ale málo mitochondrií), stejně jako lysozomy s jejich charakteristickými hydrolytickými enzymy. Komplex enzymů, které vylučují mimo buňku, rozkládá cementující látku kolagenových vláken, načež dochází k fagocytóze a intracelulárnímu trávení kolagenu.

Následující buňky vazivové tkáně již nepatří do diferenciace fibroblastů.

Kožní fibroblasty tvoří základ pojivové tkáně. Jsou producenty kyseliny hyaluronové, kolagenových vláken a elastinu. Změny související s věkem zpomalují fungování fibroblastů, což způsobuje, že kůže je tenká a ochablá. Díky buňkám vstřikovací technologie tělo nezávisle spouští funkci omlazení struktury dermis.

Podstata fibroblastů

Kožní fibroblasty- jedná se o buňky vrstvy pojivové tkáně dermis, jejichž předchůdci byly kmenové buňky. Přicházejí ve dvou formách:

1. Aktivní - velké buňky, vybavené plochým oválným jádrem, velkým množstvím ribozomů a procesů. Vyznačují se intenzivním dělením, produkcí kolagenu a dalších složek matrice.
2. Neaktivní (fibrocyty) – buňky jsou o něco menší a mají vřetenovitý tvar. Vznikají z fibroblastů a nemohou se dělit. Podílet se na syntéze vláken a regeneraci ran.

Jak tělo stárne, počet fibroblastů klesá a jejich aktivita klesá. To vede ke zhoršení syntézy mezibuněčných látek. Tento proces se projevuje na kůži ve formě ztenčení, suchosti a ochabnutí. Natahuje se a tvoří se vrásky.

Funkce

Jednou z hlavních funkcí fibroblastů je produkce a regenerace mezibuněčné látky. Tvořením růstových faktorů, složek extracelulární matrix, enzymů přispívají k destrukci a nové syntéze kolagenu a kyseliny hyaluronové. Díky nonstop procesu se obnovuje mezibuněčná látka. Kromě toho produkují buněčné růstové faktory:

• Hlavní je, že se stimuluje růst všech dermálních buněk, produkuje se fibronektin pro ochranné reakce;
• Transformace - syntetizují se kolagenová a elastinová vlákna, vytvářejí se krevní cévy, buňky imunitního systému jsou nasměrovány na cizí činitele, bakterie;
• Epidermální – aktivuje se tkáňová proliferace, buněčný růst a transport keratinocytů;
• Růst keratinocytů je epitelizace, poškození se regeneruje.

Fibroblastové růstové faktory jsou reprezentovány multifunkčními proteiny, které jsou mitogeny a také vykonávají endokrinní, regulační, strukturální funkce. Díky fibroblastům vznikají proteiny důležité pro kůži: proteoglykany, tinascin, nidogen a laminin.

Podstata techniky

SPRS terapie je technika injekčního omlazení pokožky pomocí fibroblastů, eliminující samotnou příčinu stárnutí kůže. Patent na technologii intradermální transplantace autofibroblastů patří americké společnosti FibrocellScience. Prostřednictvím buněčné technologie bylo možné pěstovat fibroblasty z částice lidské kůže (biopsie). Vlastní biomateriál odstraňuje problém s tkáňovou kompatibilitou a riziko infekce. Autologní buňky jsou pozitivně vnímány imunitní systém a jsou schopni plně fungovat.

Vzorek lze odebrat v jakémkoli věku, ale je lepší to udělat v mládí. Doporučený věk je od 20 do 30 let. Při jakékoli operaci můžete zachránit kus kůže a umístit z ní izolované buňky na mnoho let do kryogenního úložiště. Teplota -196 stupňů vám umožňuje uchovávat je po celý život a používat je podle potřeby. To vám umožní kdykoli provádět účinné kosmetické procedury.

Vlastní fibroblasty spolu s kmenovými buňkami mají tu vlastnost, že udržují potenciál během stárnutí. Pod lokální anestezie Pacientovi se odebere malý vzorek kůže za uchem, pupkem nebo v oblasti předloktí. Tyto oblasti jsou nejméně vystaveny ultrafialovému záření. Jeho velikost je cca 4 mm. Fibroblasty z něj izolované jsou umístěny ve speciálních lahvičkách.

Když jsou kultivovány v médiu s fetálním sérem, je u mladých buněk stimulována schopnost proliferace a staré jsou odplavovány. Dochází k „omlazení“ kultury. Po měsíci se počet buněk zvýší několik tisíckrát. Po reaktivaci je buněčná kultura transplantována pacientovi a aktivně vyplňuje dermis. Po měsíci a půl jsou namnožené fibroblasty injikovány do pokožky obličeje pacienta, včetně okolí očí, a také do krku, dekoltu a paží.

Postup

Kurz se skládá ze 3-5 sezení, intervaly mezi nimi jsou 3 až 6 týdnů. Fáze procedury:

• vyšetření pacienta k identifikaci existujících kontraindikací;
• odběr materiálu;
• kultivace fibroblastů;
• injekce buněčného materiálu do kůže dvěma způsoby: tunel - do hlubokých kožních záhybů, papulární mezoterapie;
• ochrana pokožky před ultrafialovým zářením pomocí krému.

Pacienti poznamenávají, že postup je bolestivý, proto se používá anestetický krém Emla. Množství použitého léku je až 3 ml na relaci. Doba zotavení trvá 2-3 dny. Po proceduře je zakázáno používat kosmetiku. Po dobu dvou týdnů se musíte zdržet návštěvy sauny nebo lázně. Pokožku je nutné chránit před sluncem mazáním krémem s vysokým stupněm ochrany. Postup se doporučuje opakovat jednou ročně. Výsledkem je zlepšení stavu pokožky obličeje během několika měsíců.

Účinnost a výhody metody

Omlazení pomocí fibroblastů dává první výsledky po 1,5 nebo 2 měsících. Plný efekt Efekt procedury se dostavuje po šesti měsících a přetrvává 2-3 roky. Začíná zvýšená produkce růstových faktorů a extracelulární matrix. Fibroblasty procházejí přirozenými fázemi cyklu: aktivují se, syntetizují elastin, kolagen a další látky, pak začíná fáze degradace, která je nahrazují novými fibroblasty.

Jejich použití je rozšířené v lékařství - proti popáleninám, pro regeneraci tkání při trofické vředy, rány Jejich význam v kosmetologii je velký. Mládí kůže je tvořeno množstvím fibroblastů. Vyrostlé fibroblasty umístěné v dermis jsou zabudovány do tkání a začínají produkovat kolagen a elastin. Díky tomu se pokožka stává elastickou, získává rovnoměrnou barvu a mizí jemné vrásky.

Neměli byste však od postupu očekávat stahující účinek. Tato technika je zaměřena na zlepšení kvalitativních charakteristik pokožky. Hlavní výhody SPRS terapie:

• lék pracuje s geny, což eliminuje narušení primární struktury kůže;
• jsou aktivovány přirozené omlazovací procesy;
• bezpečnost, žádné riziko odmítnutí, alergická reakce;
• dlouhodobé uchování výsledku.

Během 6 měsíců se vrásky kolem očí vyhladí o 90 %. Dekolt a krk vypadají mladší o 95 %, tváře o 87 %. Záhyby kolem úst jsou redukovány o 55 %.

Kontraindikace

Navzdory naprosté bezpečnosti má postup některé kontraindikace:

• těhotenství, období laktace;
• zhoršená srážlivost krve;
• zhoubné novotvary;
• autoimunitní onemocnění;
• predispozice k tvorbě jizev;
• ARVI;
• zánět na kůži.

Během dne po sezení lze pozorovat zarudnutí na kůži a mikrohematomy. Následující den příznaky zmizí.

Technologie transplantace autofibroblastů má oficiální povolení od Roszdravnadzor. Jeho bezpečnost je potvrzena laboratorním sledováním životaschopnosti buněk.

Majitelé patentu RU 2536992:

Vynález se týká oblasti biotechnologie, konkrétně buněčných technologií, a může být použit v lékařství. Metoda zahrnuje škálování diploidních buněk linie M-20 z kryobanky IPVE pojmenované po. M.P. Čumakov Ruská akademie lékařských věd z ampule banky semenných buněk pasáže 7 k získání banky pracovních buněk pasáže 16. V tomto případě se buňky o 20-33 pasážích, vhodné pro použití pro terapeutické a/nebo diagnostické účely, získají kultivací v živném médiu obsahujícím 10 % fibrinolyticky aktivní plazmy (FAP) osoby obsahující destičkový růstový faktor PDGF v koncentraci 155 až 342 pg/ml. Vynález umožňuje zvýšit proliferační aktivitu diploidních lidských fibroblastových buněk. 1 plat soubory, 2 tabulky.

Vynález se týká biotechnologie, imunologie, medicíny, zejména způsobu pro zvýšení proliferačních vlastností diploidních lidských fibroblastových buněk pro použití takových buněk pro terapeutické a diagnostické účely, včetně stanovení antivirové aktivity lidských interferonů, pro buněčnou náhradu. terapie.

Lidské diploidní buněčné linie (HDCL) mají nepopiratelné výhody oproti všem známým typům buněčných kultur ve své schopnosti udržovat stabilní biologické a genetické vlastnosti během pasáží. Certifikace LDCC určených pro výrobu vakcín se provádí v souladu s jednotnými požadavky vypracovanými Světovou zdravotnickou organizací. Tato doporučení jsou brána jako základ pro národní kritéria pro certifikaci vakcíny LDKCH, vyvinutá Státním výzkumným ústavem klinických infekčních nemocí pojmenovaným po něm. LOS ANGELES. Tarasevič a ministerstvo zdravotnictví SSSR [ Směrnice„Certifikace kontinuálních buněčných linií – substrátů pro výrobu a kontrolu medicin imunobiologické přípravky» RD-42-28-10-89. Ministerstvo zdravotnictví SSSR. M., 1989. - str. 16]. Certifikovaná řada lidských diploidních buněk má omezenou životnost a stabilní biologické, kulturní a genetické vlastnosti, neobsahuje kontaminanty (bakterie, houby, mykoplazmata, viry) a nezpůsobuje tvorbu nádorů u imunosuprimovaných zvířat. Diploidní buněčná linie musí mít certifikovanou banku semenných buněk na úrovních časné pasáže (až do pasáže 10), sestávající z alespoň 200 kryozkumavek. Pasážováním očkovacích buněk z jedné nebo několika kryozkumavek do 16. úrovně pasáže se získá pracovní banka buněk, ze které lze získat potřebné produkční kultury pro produkci nebo pro výzkumná práce. V Rusku a v zahraničí existuje pouze několik linií lidských diploidních buněk (Wi-38, MRC-5, M-22 atd.) certifikovaných podle uvedených požadavků. Certifikované LDCV se používají při výrobě vakcín proti dětské obrně, spalničkám, zarděnkám, vzteklině, respiračním a cytomegalovirové infekce stejně jako interferon [T.K. Borisová, L.L. Miroňová, O.I. Konyushko, V.D. Popová, V.P. Grachev, N.R. Shukhmina, V.V. Zverev. Domácí kmeny lidských diploidních buněk jsou substrátem pro výrobu vakcín. Lékařská virologie. Materiály vědecko-praktická konference « Skutečné problémy lékařské virologie, věnované 100. výročí M.P. Čumakov." M. 2009. Ročník XXVI. str. 305-307; L.L. Miroňová, V.D. Popová, O.I. Konyushko. Zkušenosti s tvorbou banky originálních linií transplantovatelných buněk a jejich využití ve virologické praxi. Biotechnologie. 2000, str. 41-47]. LDCN jsou široce používány in vitro pro diagnostiku virových infekcí a analýzu toxicity různé drogy a produkty pro substituční terapii [RF patent č. 2373944, 23.06.2008. Způsob léčby popálenina. TAK JAKO. Ermolov, S.V. Smirnov, V.B. Chvatov, L.L. Mironov; S.V. Smirnov, V.B. Hvatov. Inovativní technologie lokální léčba popálenin ve Výzkumném ústavu urgentní medicíny pojmenovaná po. N.V. Sklifosovský. V knize: Nová ekonomie. Inovativní portrét Ruska. M., Centrum pro strategické partnerství, 2009. s. 388-390].

V IPVE im. M.P. Chumakov RAMS V 80. letech 20. století bylo založeno několik linií diploidních buněk z kůže a svalů 8-10 týdnů starých lidských embryí. Tato práce se věnuje modifikaci produkce lidských diploidních buněk pro diagnostické účely a buněčnou substituční terapii, konkrétně produkci diploidních lidských fibroblastových buněk se zvýšenými proliferačními vlastnostmi.

Prototyp. RF patent č. 1440029 ze dne 22. března 1993 [Mironova L.L., Preobraženskaja N.K., Solovyova M.N., Orlova T.G. Stobetsky V.I., Kryuchkova G.P., Karmysheva V.Ya., Kudinova S.I., Popova V.D., Alpatova G.A. IPVE a NIIEiM im. N.F. Gamaleya. Kmen diploidních lidských embryonálních kožních a svalových buněk používaný jako testovací systém pro stanovení antivirové aktivity lidských interferonů a množení viru].

Tento kmen LDCC je označen jako M-21, nicméně kultura fibroblastů M-21 měla nedostatečnou proliferační aktivitu, což zkracovalo dobu tvorby monovrstvy a zvyšovalo spotřebu buněk a materiálů, což v konečném důsledku vedlo k úplnému vyčerpání jejích zásob. V důsledku toho vyvstala potřeba nové buněčné linie, vhodné pro stanovení antivirové aktivity lidských interferonů a pro jiné lékařské a biologické účely, nákladově efektivnější, vyznačující se vysokou proliferační aktivitou a mající banky semenných a pracovních buněk. Tato řada je označena jako M-20. Na úrovni pasáže 7 byla připravena banka očkovacích buněk. V roce 2012 byla z ampule banky pasáže 7 vyrobena banka pracovních buněk na 16. úrovni pasáže. Banky semenných a pracovních buněk na úrovních 7 a 16 pasáží jsou uloženy v Ústavu nádob experimentální fyziky pojmenovaném po něm. M.P. Chumakov RAMS a dovolte nám poskytnout obojí výrobní procesy a vědecký výzkum.

Rozdíl mezi předkládaným vynálezem a nejbližším analogem (prototypem) je zvýšení proliferační aktivity buněk M-20 při použití 10% fibrinolyticky aktivní plazmy (FAP).

Předmětem vynálezu je tedy způsob zvýšení proliferativních vlastností diploidních lidských fibroblastových buněk pro lékařské a biologické účely kultivací buněk z kryobanky Ústavu veterinární fyziky pojmenované po. M.P. Čumakova Ruská akademie lékařských věd, ve které se používají diploidní buňky charakterizované linie M-20, které se odeberou z ampule banky zárodečných buněk pasáže 7 a získá se banka pracovních buněk pasáže 16, s buňkami pasáží 20-33 vhodné pro použití pro terapeutické a/nebo diagnostické účely, získané kultivací v živném médiu obsahujícím 10 % fibrinolyticky aktivní plazmy (FAP) osoby. Při kultivaci buněk se s výhodou používá živné médium DMEM s 10 % FAP.

Lidské diploidní buňky charakterizované linie M-20, získané výše uvedeným způsobem, mají vysokou proliferační aktivitu a jsou vhodné pro použití pro terapeutické a/nebo diagnostické účely.

Schéma implementace metody:

1. Jedna kryozkumavka je použita z banky zárodečných buněk 7. pasáže IPVE pojmenované po. M.P. Čumaková RAMS

2. Příprava banky pracovních buněk na úrovni pasáže 16 IPVE pojmenované po. M.P. Čumaková RAMS

3. Získání fibroblastů linie M-20 z banky pracovních buněk pasáže 16 (IPVE pojmenované po M.P. Chumakovovi, Ruská akademie lékařských věd).

4. Získání jednovrstvé kultury fibroblastů linie M-20, pasáž 17.

5. Obnovení biologických vlastností fibroblastů řady M-20 trojnásobným pasážováním (do 20. pasáže včetně) k opravě případného poškození DNA během procesu kryokonzervace.

6. Získání buněčných kultur pro diagnostické účely a buněčnou substituční terapii replikací fibroblastů linie M-20 z pasáže 20 až 33 za použití živného média obsahujícího 10 % fibrinolyticky aktivní plazmy (s obsahem PDGF od 155 do 342 pg/ml).

Navržený způsob zajišťuje produkci buněk s vysokou proliferativní aktivitou a vhodných pro použití v diagnostice a/nebo léčebné účely.

Tohoto technického výsledku je dosaženo kultivací lidských fibroblastů řady M-20 v živném médiu s přídavkem 10% fibrinolyticky aktivní plazmy (FAP), která má růstově stimulující účinek a zesiluje proliferační aktivitu buněčné kultury.

FAP je klinicky používané transfuzní médium, které se získává z krve lidí, kteří náhle zemřeli na infarkt myokardu, akutní srdeční selhání, krvácení do mozku, v prvních 6 hodinách po smrti [Nařízení Ministerstva zdravotnictví SSSR č. 482 z června 14, 1972 „O zlepšení poskytování léčebných a profylaktických ústavů a ​​klinik s kadaverózními tkáněmi, kostní dřeně a krev"]. Postmortální krev je kompletní transfuzní médium, které má řadu biologických vlastností – především zvýšený fibrinolytický potenciál. V tomto ohledu se také navrhuje nazývat posmrtnou krevní fibrinolýzu. Hlavní indikace pro posmrtnou transfuzi krve: akutní krevní ztráta, šok, anémie různého původu, popáleniny, metabolická náhrada při exogenní otravy, plnění AIK při použití mimotělního oběhu v chirurgii [např. Tsurinová. Transfuze fibrinolýzy krve. M., 1960, 159 s.; S.V. Ryžkov. Příprava a možnosti použití fibrinolýzy krve v závislosti na době odběru a příčině smrti. Autorský abstrakt. doc. diss. L., 1968, 21 s.; G.A. Pafomov. Biologická charakteristika krve náhle zemřelých a její využití v chirurgické praxi. Diss. doc. Miláček. Sci. M., 1971, 355 stran; K.S. Simonyan, K.P. Gutiontová, E.G. Tsurinová. Posmrtná krev z hlediska transfuziologie. M., Medicína, 1975, 271 s.]. V současné době se používají posmrtné krevní složky: fibrinolyticky aktivní plazma, hmoty červených krvinek, hmotnost leukocytů, hmotnost krevních destiček [G.Ya. Levin. Hemokoagulační vlastnosti a klinická aplikace plazmy a krevních destiček mrtvé krve. Autorský abstrakt. doc. diss. M., 1978, 31 s.; V.B. Hvatov. Přípravky fibrinolytického a antiproteneázového účinku z krevní plazmy náhle zemřelých lidí. Diss. doc. Med Sciences, 1984, 417 s.; V.B. Khvatovova plazmakináza - nový trombolytický přípravek z posmrtné plazmy In: Trombóza a trombolýza edd. E.I. Chazov, V.V. Smirnov). Consultants Bureau, N.Y., L, 1986, s. 283-310; V.B. Hvatov. Lékařské a biologické aspekty použití posmrtné krve. Bulletin Akademie lékařských věd SSSR, 1991, 9. s. 18-24; V.B. Hvatov. Mrtvá krev - historie a současný stav problematiky. Problém hematol. a přetečení. krev, 1997, 1. S. 51-59]. Složky kadaverózní krve získané od dárců orgánů se rovněž dočkaly klinického využití [zesnulý jedinec s bijícím srdcem podle „Pokynu ke zjištění úmrtí osoby na základě diagnózy mozkové smrti“ ze dne 20. prosince 2001 č. 460, Ministerstvo spravedlnosti registrační číslo 3170 ze dne 17. ledna 2002] . Transplantace orgánů, tkání a buněk se provádí v souladu se zákonem Ruské federace „O transplantacích lidských orgánů a (nebo) tkání“ - v platném znění. Federální zákony ze dne 20. června 2000 č. 91-F3, ze dne 16. října 2006 č. 160-F3; V.B. Chvatov, S.V. Zhuravel, V.A. Guljajev, E.N. Kobzeva, M.S. Makarov. Biologická užitečnost a funkční aktivita buněčných složek krve dárců orgánů. Transplantologie, 2011, 4, s. 13-19; Khubutia M.Sh., Khvatov V.B., Gulyaev V.A. atd. Metoda kompenzace globulárního objemu krve a imunomodulačních účinků při transplantaci. RF patent na vynález č. 2452519, publ. 6. 10. 2012, bulletin. č. 16].

Fibrinolyticky aktivní plazma se získává z krve náhle zemřelých lidí, připravená s konzervační látkou Glyugitsir (poměr krev:konzervační látka 4:1), aby byly zachovány její fibrinolyticky aktivní vlastnosti. Separace plazmy od buněčných elementů krve se provádí ve sterilním boxu za dodržení všech pravidel asepse a antiseptik a je podobná získávání dárcovské plazmy z konzervy dárcovské krve. Klinické použití FAP v chirurgii a traumatologii odhalilo účinek stimulace hojení ran [I.Yu. Klyukvin, M.V. Zvezdina, V.B. Chvatov, F.A. Burdyga. Způsob léčby kousnutí. Patent na vynález Ruské federace č. 2372927, publ., 20. listopadu 2009, bulletin. č. 32]. Tento účinek jsme spojovali s přítomností růstově stimulujících faktorů ve FAP, vylučovaných aktivovanými krevními destičkami. Následně jsme identifikovali destičkový růstový faktor (PDGF) u FAP. Růst stimulující účinek FAP v kultuře lidských buněk byl prokázán ve speciálních studiích. Studované vzorky FAP v 10% koncentraci byly přidány k buněčné suspenzi lidských fibroblastů řady M-20, obsahující známý počet buněk, a 10 ml výsledné směsi bylo umístěno do kultivačních baněk s růstovým povrchem 25 cm2. Buňky byly pěstovány po dobu 3-4 dnů v atmosféře 5% CO2 a při 37 °C. Po trojnásobném pasážování byly pěstované buňky spočítány ve Fuchs-Rosenthalově komůrce a byl stanoven poměr počtu vypěstovaných buněk k počtu vysazených buněk - index proliferace (v tabulce 1).

Z provedených experimentů vyplývá, že růstové vlastnosti FAP poskytují vysokou proliferační aktivitu a neliší se od fetálního bovinního séra. Navíc FAP obsahuje růstové faktory lidských krevních destiček, tj. alogenní typ, na rozdíl od fetálního bovinního séra - xenogenní typ. Tato skutečnost je rozhodující pro transplantaci buněk při substituční léčbě. Všimněte si, že účinek stimulující růst na buněčnou kulturu M-20 je způsoben zejména přítomností PDGF ve FAP v koncentraci 155 až 342 pg/ml. Tato data byla získána pomocí soupravy Qantikine, Human PDGF-BB Immunoassay kit od R&D Systems a systému Multiskan Ascent od Thermo. Koncentrace PDGF-BB ve FAP je podobná jeho obsahu v séru. V séru dárců krve a vyšetřovaných pacientů se tedy obsah PDGF pohyboval od 110 do 880 pg/l, s průměrem 244 pg/ml, zatímco v plazmě se obsah PDGF pohyboval od 0-2 pg/ml.

Pro lepší pochopení navrhovaného technického řešení „výroba lidských diploidních buněk řady M-20 pro lékařské a biologické účely“ uvádíme následující příklad.

Buňky linie M-20, pasáž 16, jsou získány z pracovní banky. K tomu je kryozkumavka s buňkami vyjmuta z kapalného dusíku a umístěna dovnitř vodní koupel při teplotě 38°C a po rozmrazení se obsah přenese do kultivační nádoby s živným médiem DMEM obsahujícím 10% FAP (s obsahem PDGF od 155 do 342 pg/ml), přidává se antibiotikum gentamicin rychlostí 1 ml 4% roztoku na 1 litr živného média . Pro vytvoření monovrstvy se buňky kultivují po dobu 4-5 dnů při 37 °C a 5% CO2 v atmosféře. Po vytvoření monovrstvy buněk se provedou 3 po sobě jdoucí pasáže, nezbytné pro opravu DNA po kryokonzervaci. Poté se buňky replikují z pasáže 20 do pasáže 33. Buňky z těchto pasáží jsou určeny pro biomedicínské účely. Výsledná buněčná linie byla podrobně charakterizována v souladu s požadavky WHO a GNIISiK MIBP pojmenované po. LOS ANGELES. Taraseviče, včetně HLA typizace buněčné linie M-20 a také studie jejího cytokinového spektra. Uvádíme srovnávací popis vlastností řady M-20 a řady M-22 (tabulka 2). Linie M 22 (lidské diploidní fibroblasty) je licencována jako očkovací substrát a schválena pro výrobu všech typů lékařských virových vakcín a používá se také k léčbě popálenin II-IIIA stupně [RF patent na vynález č. 2373944 , 23.06.2008. Způsob ošetření popálenin. TAK JAKO. Ermolov, S.V. Smirnov, V.B. Chvatov, L.L. Miroňová, O.I. Klnyushko, E.A. Žirková, B.C. Bocharová].

Linka M-20 byla instalována na IPVE pojmenovaném po. M.P. Chumakov RAMS v roce 1986 z kůže a svalů 10týdenního lidského embrya získaného jako výsledek potratu od zdravé ženy. V anamnéze se nevyskytla rakovina, pohlavně přenosné choroby, hepatitida nebo tuberkulóza; genetické a vrozená onemocnění nebyl v rodině pozorován. Buněčné kultivační médium DMEM doplněné 10% FAP. Poměr výsevu je 1:3-1:4 dvakrát týdně s výsevní dávkou buněk 7×104 buněk/ml. Buněčná monovrstva se skládá z orientovaných homogenních vřetenovitých buněk s oválnými jádry obsahujícími 1-3 jadérka a malé shluky chromatinu. V životní cyklus linii lze rozlišit na 3 fáze vývoje: tvorba 1-3 pasáže, aktivní růst 4-40 a stárnutí 41-52, poté nastává smrt. Buňky linie mají lidský karyotyp 2m=46, XY. Linie se vyznačuje vysokou genetickou stabilitou: 93,3-96,9 % buněk má diploidní sadu chromozomů, buněk s polyploidní sadou není více než 1,6 %. Nebyly pozorovány žádné mezery, zlomy nebo prstencové chromozomy. Počet pásů izoenzymů G-6PDE a LDE a jejich elektroforetická pohyblivost se shodují s těmi pro lidské erytrocyty. Pomalý typ G-6FDG. Při výsevu na selektivní živná média nebyla zjištěna žádná kontaminace bakteriemi, plísněmi nebo mykoplazmaty. Kromě toho nebyla při barvení DNA fluorochromy Hochst 33258 a olivomycinem detekována žádná mykoplazmová kontaminace, stejně jako PCR metoda. Kontaminace viry při pokusech na mláďatech a dospělých bílých myších, morčata, králičí a kuřecí embrya, stejně jako na homologních a heterologních buněčných kulturách. Kontrola tumorigenicity. Když byly buňky linie podávány imunosuprimovaným zvířatům, nádory se nevytvářely. Nebyla detekována žádná reverzní transkriptáza. HLA markery: Třída I: A*(02.03)/B*(07.40)/CW*(03.07). Třída II: DRB1*(15.16)/DQB1*(05.06). Buňky linie M-20 na úrovni 20. pasáže produkují mRNA pro a-interferon (IFNa) a interleukiny: IL1p, 2, 4, 6, 8, 10, 18.

Navržená linie je tedy diploidní – má omezenou životnost, zachovává si karyotyp normálních lidských buněk po celý život, je bez kontaminantů a nemá onkogenní potenciál. Byl charakterizován z hlediska bezpečnosti v souladu s doporučeními WHO a požadavky GNIISiK MIBP pojmenovaného po něm. LOS ANGELES. Tarasevič. V IPVE im. M.P. Chumakov RAMS existují banky semenných a pracovních buněk, které mohou splnit všechny potřeby výroby a vědeckého výzkumu. Buňky linie M-20 jsou citlivé na infekci různými viry. Dále bylo studováno cytokinové spektrum linie M-20. Znalost cytokinového spektra buněk umožňuje přesněji vyhodnotit výsledky při stanovení interferonového stavu pacientů a poskytnout informovaná doporučení pro použití terapeutických a profylaktických léků.

Lidské diploidní buňky - fibroblasty kmene M-20 se zvýšenou proliferační aktivitou, získané navrženou metodou, lze použít pro diagnostické účely, zejména pro stanovení aktivity interferonu (IFN) v lidském krevním séru, ale i pro léčebné účely. například pro lokální ošetření proleženin, kousnutí, dlouhodobě se nehojících a popáleninových ran.

1. Způsob zvýšení proliferačních vlastností diploidních lidských fibroblastových buněk, vyznačující se tím, že pojmenované diploidní buňky charakterizované linie M-20 z kryobanky Ústavu cév. M.P. Chumakov RAMS se měří z ampule banky seed buněk pasáže 7 a získá se banka pracovních buněk pasáže 16, zatímco buňky pasáží 20-33, vhodné pro použití pro terapeutické a/nebo diagnostické účely, se získají kultivaci v živném médiu obsahujícím 10% lidskou fibrinolyticky aktivní plazmu (FAP) obsahující destičkový růstový faktor PDGF v koncentraci 155 až 342 pg/ml.

2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se při kultivaci buněk použije živné médium DMEM s 10 % FAP.

Podobné patenty:

Vynález se týká farmaceutického průmyslu, konkrétně použití lidských placentárních perfusátových buněk při výrobě lék k potlačení proliferace nádorových buněk u jedince.

Skupina vynálezů se týká oblasti biotechnologie a onkologie. Metoda zahrnuje: a) izolaci postnatálních tkáňově specifických multipotentních autologních kmenových buněk (ASC) a/nebo autologních progenitorových buněk (APC) pro jejich následné proteomické a plně transkriptomické analýzy; b) izolace ASC a/nebo APC a/nebo multipotentních alogenních HLA-haploidentických kmenových buněk (HLA-CK) pro následnou remodelaci jejich proteomického profilu; c) izolace CSC z nádoru pacienta; d) proteomická analýza ASC a/nebo APC a RSC; e) úplná analýza transkriptomu ASC a/nebo APC a CSC; f) stanovení sady proteinů, z nichž každý je obsažen v proteomických profilech jak ASC a/nebo APC, tak CSC; g) analýza dříve definovaného souboru proteinů k identifikaci intracelulárních signálních drah v CSC, které neprošly neoplastickou transformací v důsledku karcinogeneze, a ke stanovení cílových proteinů, které jsou membránovými akceptory identifikovaných signálních drah; h) analýza úplného transkriptomového genového expresního profilu CSC a potvrzení integrity a funkčního významu strukturálních složek identifikovaných signálních drah v CSC; i) identifikace ligandových proteinů schopných aktivovat cílové proteiny; Na) srovnávací analýzaúplné transkriptomické profily ASA a/nebo APC s transkriptomickými profily obsaženými ve známých databázích transkriptomů k identifikaci perturbogenů schopných modifikovat profil genové exprese ASA a/nebo APC a/nebo HLA-CK, izolované za účelem remodelace jejich proteomického profilu v směr sekrece dříve určité ligandové proteiny; k) remodelace proteomického profilu ASA a/nebo APC a/nebo HLA-CK perturbogeny za účelem získání modifikovaného transkriptomického profilu různých buněčné systémy, schopný vyvinout regulační účinek na RSC pacienta.

Vynález se týká oblasti biotechnologie, konkrétně buněčných technologií, a může být použit v lékařství. Populace mononukleárních buněk nebo neembryonálních kmenových buněk obohacených o buňky monocytární linie obsahující promonocyty se používá k léčbě ischemie u subjektu.

Vynález se týká oblasti biotechnologie a buněčné technologie. Nárokovaný vynález je zaměřen na vytvoření pluripotentních, multipotentních a/nebo samoobnovujících buněk, které jsou schopné začít se diferencovat v kultuře v Různé typy a jsou schopné další diferenciace in vivo.

Vynález se týká oblasti medicíny a může být použit pro selekci spermií ve způsobech technologií asistované reprodukce. Metoda spočívá v umístění kapky spermatu a kapky kultivačního média do Petriho misky ve vzdálenosti ne více než 5 cm od sebe, přičemž kapky se spojí proužkem viskózního média s parametry viskozity 1-4 Pa s, poté inkubace misky s obsahem po dobu 30-90 minut za podmínek simulujících přírodní prostředí cervikální kanálženský reprodukční trakt.

Vynález se týká oblasti medicíny, biotechnologie a buněčné technologie. Způsob diferenciace pluripotentních kmenových buněk reprezentujících lidskou buněčnou linii na buňky exprimující markery charakteristické pro vytvořenou endodermální linii zahrnuje ošetření pluripotentních kmenových buněk médiem charakterizovaným tím, že neobsahuje aktivin A a obsahuje GDF-8 po určitou dobu. , dostatečné pro to, aby se pluripotentní kmenové buňky diferencovaly na buňky exprimující markery charakteristické pro linii vytvořeného endodermu.

Předkládaný vynález se týká oblasti imunologie. Byly navrženy varianty oligopeptidu izolovaného z proteinu RAB6KIFL (KIFL20A), které jsou schopné indukovat cytotoxické T lymfocyty (CTL) jako součást komplexu s molekulou HLA-A*0201.

Vynález se týká oblasti potravinářského průmyslu a je to způsob vaření piva, který zahrnuje přidání termostabilní proteázy do mladiny po filtraci mladiny, ale před vařením mladiny, přičemž tepelná stabilita proteázy znamená, že aktivita této proteázy je alespoň 70 % jeho aktivity, měřeno podle na další metodu: proteáza se zředí na koncentraci 1 mg/ml v testovacím pufru obsahujícím 100 mmol kyseliny jantarové, 100 mmol HEPES, 100 mmol CHES, 100 mmol CABS, 1 mmol CaCl2, 150 mmol KCl, 0,01 % Triton X-100 a c pH upraveno na 5,5 pomocí NaOH; poté se proteáza preinkubuje i) na ledu a ii) 10 minut při 70 °C; substrát, na který je proteáza aktivní, se suspenduje v 0,01% Tritonu X-100: pro zahájení reakce se do zkumavky přidá 20 ul proteázy a inkubuje se v termomixéru Eppendorf při 70 °C, 1400 ot./min. po dobu 15 minut; reakce se zastaví umístěním zkumavek do ledu; vzorky se centrifugují za studena při 14000 g po dobu 3 minut a měří se optická hustota OD590 supernatantu; získaná hodnota OD590 vzorků bez proteázy se odečte od získané hodnoty OD590 vzorků ošetřených proteázou; určit termostabilitu proteázy výpočtem procenta proteázové aktivity ve vzorcích předinkubovaných při 70 °C vzhledem k proteázové aktivitě ve vzorcích inkubovaných na ledu jako 100% aktivita.

Vynález se týká oblasti buněčné biologie, buněčné transplantologie a tkáňového inženýrství. Způsob zvýšení angiogenní aktivity stromálních buněk tukové tkáně ve tkáních a orgánech zahrnuje izolaci buněk stromatu tukové tkáně, kultivaci izolovaných buněk v přítomnosti tumor nekrotizujícího faktoru alfa v množství 5 nebo 100 ng/ml po dobu 24-72 hodin s následnou transplantací do tkání nebo orgánů.

Vynález se týká oblasti biotechnologie, buněčné technologie a tkáňové chirurgie. Způsob získání kultury buněk hladkého svalstva spočívá ve vyříznutí fragmentu krevní cévy, jeho rozmělnění na kousky o velikosti maximálně 2 mm v jakémkoliv rozměru a inkubaci kousků v kultivační baňce s předem nanesenými škrábanci na dno baňky, obsahující kultivační médium obsahující 10% embryonální fetální sérum, po dobu alespoň 10 dnů, ale ne déle než 24 dnů, při teplotě 37 °C v CO2 inkubátoru, vyznačující se tím, že uvedený fragment krevní céva je fragmentem vzestupné končetiny hrudní aorta, vyříznuté během procedury bypassu koronární tepny a uvedené kousky fragmentu vzestupné hrudní aorty se uchovávají v kultivačním médiu obsahujícím 0,1 % kolagenázy po dobu alespoň 30 minut, ale ne déle než 60 minut, při teplotě 37 °C. °C před inkubací a poté promyjte buněčným kultivačním médiem.

Metoda získávání mezenchymálních kmenových buněk z lidských pluripotentních kmenových buněk a mezenchymálních kmenových buněk získaných touto metodou // 2528250

Vynález se týká oblasti genetického inženýrství, tkáňové technologie a medicíny. Způsob získávání mezenchymálních kmenových buněk z pluripotentních lidských kmenových buněčných linií zahrnuje získání embryoidních těl z lidských pluripotentních kmenových buněk, připojení embryoidních těl na Petriho misku, aby se vyvolala spontánní diferenciace embryoidních těl na mezenchymální kmenové buňky, kultivace s proliferací mezenchymálních kmenových buněk. zachování identity mezenchymálních kmenových buněk, a kde dochází k indukci spontánní diferenciace stadia tvorbou autologních cytokinových smyček bez přidání externího cytokinu, také odpovídající buňky, jejich použití, nábor a způsob kultivace.

Vynález se týká oblasti molekulární biologie, biochemie a medicíny. Pro indukci migrace dospělých kmenových buněk tukové tkáně je navržena kompozice, která obsahuje jako účinnou látku lidské mezenchymální kmenové buňky z dospělé tukové tkáně v množství od 1x107 do 1x1010, které exprimují receptor chemokinu nebo růstového faktoru na buněčném povrchu, popř. sekreční produkt z těchto kmenových buněk zahrnuje receptor chemokinu nebo růstového faktoru; kde secernovaným produktem dospělých kmenových buněk tukové tkáně je adiponektin; a kde jsou kmenové buňky lidské dospělé tukové tkáně primárně aktivované směsí obsahující chemokin nebo růstový faktor.

Vynález se týká biotechnologie a medicíny. Byla navržena metoda pro expanzi mononukleárních buněk z pupečníkové krve (pcBMC) ex vivo v přítomnosti multipatentních mezenchymálních buněk (MMSC), která zahrnuje kultivaci MMSC ze stromálně-vaskulární frakce tukové tkáně, dokud se nedosáhne monovrstvy Koncentrace O2 v médiu 5 %, přidání suspenze pcMNC k monovrstvě MMSC, kultivace po dobu 72 hodin při koncentraci O2 v médiu 5 %, selekce nepřipojených psMNC a nahrazení média, pokračování kultivace MMSC s připojenými psMNC po dobu 7 dnů při koncentraci O2 v médiu 5 %.

Vynález se týká oblasti biotechnologie a medicíny. Je navržena kompozice obsahující kmenové buňky z lidské plodové vody s fenotypem CD73+/CD90+/CD105+/CK19+, živné médium, erytropoetin, epidermální růstový faktor a kolagen v účinném množství.

Vynález se týká oblasti medicíny a buněčné technologie. Buněčný produkt obsahující populaci duktálních kmenových buněk submandibulárních slinná žláza, vyznačující se fenotypem CD49f+/EpCAM+ a po ošetření kyselinou valproovou v koncentraci 0,1-40 mM a kultivaci v kolagenovém gelu, změně expresního profilu na 1AAT+/PEPCK+/G6P+/TDO+/CYP P4503A13+, jakož i získání schopnosti k syntéze močoviny a albuminu.

Vynález se týká oblasti biotechnologie, buněčného a tkáňového inženýrství. Je popsán způsob získávání rezidentních kmenových buněk srdce savců exprimujících povrchové markery c-kit a/nebo sca-1 a/nebo MDR1, během kterého jsou vzorky tkáně myokardu izolovány, rozdrceny, ošetřeny kolagenázou a trypsinem a kultivovány na kultivační misce potažené fibronektinem explantovanou kulturou rozdrcených vzorků s následnou imunoselekcí.

Vynález se týká oblasti biochemie, biotechnologie a medicíny. Navrhuje se N-terminální fragment rozpustného supresoru imunitní odpovědi o délce 21 aminokyselin, mající aminokyselinovou sekvenci podle Seq ID NO: 1, která umožňuje stimulaci tvorby regulačních T-lymfocytů, jakož i způsob stimulace tvorby regulačních T-lymfocytů s N-terminálním fragmentem rozpustného supresoru imunitní odpovědi se Sekv. id. č.: 1, při podávání v koncentraci 0,1-50 ug/ml.

Dermatologický krém pro lokální léčbu bakteriálních kožních infekcí a pro hojení souvisejících ran Oblast techniky Vynález se týká farmaceutického průmyslu a jedná se o dermatologický krém určený pro lokální léčbu bakteriálních kožních infekcí a pro hojení souvisejících ran, obsahující framycetinsulfát a biopolymer obsažený v základu krému, který obsahuje alespoň jednu látku z každé z následujících skupin : konzervant ; primární a sekundární emulgátor vybraný ze skupiny sestávající z ketostearylalkoholu, ketomakrogolu 1000, polysorbátu-80 a Span-80; parafín jako voskový produkt; pomocné rozpouštědlo vybrané ze skupiny sestávající z propylenglykolu, hexylenglykolu a polyethylenglykolu-400; kyselina dusičná nebo kyselina mléčná a voda a uvedeným biopolymerem je výhodně chitosan.

Vynález se týká oblasti biotechnologie, konkrétně buněčných technologií, a může být použit v lékařství. Metoda zahrnuje škálování diploidních buněk linie M-20 z kryobanky IPVE pojmenované po. M.P. Čumakov Ruská akademie lékařských věd z ampule banky semenných buněk pasáže 7 k získání banky pracovních buněk pasáže 16. V tomto případě se buňky o 20-33 pasážích, vhodné pro použití pro terapeutické a diagnostické účely, získají kultivací v živném médiu obsahujícím 10 fibrinolyticky aktivní lidské plazmy obsahující destičkový růstový faktor PDGF v koncentraci 155 až 342 pgml. Vynález umožňuje zvýšit proliferační aktivitu diploidních lidských fibroblastových buněk. 1 plat soubory, 2 tabulky.