Techniki diagnostyczne współczesne czasy umożliwiają identyfikację konkretnej choroby w laboratorium specjalne analizy. Jednym z nich jest badanie krwi immunoenzymatyczne, które może potwierdzić wcześniej postawioną diagnozę.
Test immunoenzymatyczny ELISA jest jednym z najskuteczniejszych i nowoczesne metody pozwalające na identyfikację zaburzeń związanych z układem odpornościowym i zaburzenia równowagi hormonalnej, a także procesy onkologiczne. Podczas testu we krwi można wykryć przeciwciała powstałe w wyniku infekcji w organizmie. Biorąc pod uwagę ten niuans, chorobę można wykryć nawet na najwcześniejszym etapie jej rozwoju.
Jaka jest podstawa tej techniki?
Wyniki analizy ELISA opierają się na uzyskaniu reakcje chemiczne na enzymach, które służą jako specjalne znaki identyfikacyjne do rozpoznawania przeciwciał. W konsekwencji podczas reakcji immunochemicznych przeciwciała zaczynają oddziaływać z określonymi antygenami. Wszystko to daje podstawy, aby tak twierdzić fałszywe wyniki przy oddawaniu krwi do testu ELISA są minimalne.
Badanie pozwala określić kwotę komórki odpornościowe, ich właściwości, a także obecność niezbędnych przeciwciał
Wynik uważa się za pozytywny w przypadku wykrycia zabarwienia roztworu. Kolor wskazuje, że antygeny oddziałują z przeciwciałem. Jeśli nic takiego się nie stanie, wynik będzie negatywny.
(link do trzeciego artykułu w tym pliku), pozwalający ocenić zdolność organizmu do stawiania oporu choroba zakaźna i pokazujące fazę choroby, ważne miejsce zajmuje enzymatyczny test immunoenzymatyczny (ELISA). Przeprowadzenie tego badania pozwala na kompleksową ocenę aktywności funkcji ochronnej krwi i identyfikację stanu niedoborów odporności w patologiach zakaźnych, a także chorobach krwi, procesach autoimmunologicznych i problemach hormonalnych.
Jak można objąć w jednej analizie tak wiele celów i jakie są przesłanki do jej realizacji? Spróbujmy to rozgryźć.
Na czym polega badanie krwi metodą ELISA?
Ten test laboratoryjny, co pozwala określić obecność specyficznych przeciwciał (ochronnych czynników krwi o charakterze białkowym) wobec niektórych antygenów (czynników chorobotwórczych). Wśród przeciwciał najważniejsze znaczenie mają immunoglobuliny, które mogą występować w postaci kompleksów immunologicznych.
Immunoglobuliny powstają w wyniku złożonych reakcji neurohumoralnych człowieka, które zachodzą w odpowiedzi na wprowadzenie obcych antygenów. Każdy rodzaj czynnika chorobotwórczego wytwarza własne, specyficzne przeciwciała. Działają poprzez „wiązanie” antygenu lub patologicznego mikroorganizmu, tworząc złożony związek „antygen-przeciwciało”, po którym następuje neutralizacja, liza enzymatyczna, reakcje fagocytozy i usunięcie z organizmu.
Notatka:To właśnie na podstawie obecności określonych kompleksów metoda ELISA pozwala określić rodzaj patogenu lub szkodliwej substancji występującej u pacjenta.
Wiedzieć podstawowe zasady Przyglądając się temu, możesz zobaczyć, jak działa ludzki układ odpornościowy ten film recenzja:
Co to są immunoglobuliny?
Odkryto i zbadano 5 głównych klas immunoglobulin - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. rola pozostałych nie została jeszcze w pełni wyjaśniona i jest przedmiotem badań naukowych.
Notatka:najważniejsze w medycyna praktyczna Ważne są immunoglobuliny klas A, M i G. Treść informacyjna definicji opiera się na różnych przedziałach czasowych ich pojawienia się, maksimum i zaniku.
Rozważmy ten problem bardziej szczegółowo.
Główne zadanie immunoglobulina A (IgA) polega na funkcjach ochronnych błon śluzowych drogi oddechowe, przewód pokarmowy i układu moczowego. W ostrym początku choroby nie można ich zidentyfikować. Te kompleksy ochronne pojawiają się dopiero od 2. tygodnia wystąpienia choroby, czasem później. Większość immunoglobuliny A koncentruje się w tkankach śluzowych. Około około 80%. Pozostałe przeciwciała krążą we krwi. Główną funkcją jest neutralizacja i niszczenie mikroorganizmów. Po ustąpieniu ostre objawy choroby, ilość tych immunoglobulin zaczyna się zmniejszać i zanika całkowicie do 8 tygodni od wystąpienia choroby. Jeśli IgA zostanie wykryte później, oznacza to proces przewlekły.
Główne i pierwsze markery ostrej fazy rozwijająca się patologia Czy immunoglobuliny klasy M (IgM). Wykrywa się je do 5 dnia wystąpienia choroby. Ich obecność we krwi można określić w ciągu około 6 tygodni. Potem zaczynają szybko znikać.
Resztkowa odpowiedź immunologiczna charakteryzuje się obecnością we krwi immunoglobuliny klasy G (IgG). Pojawienie się tych czynników we krwi wykrywa się około miesiąc po wystąpieniu choroby. W przyszłości można je określić na wiele miesięcy, lat, a nawet na całe życie, spełniając się funkcję ochronną od nawrotu (nawrotu) choroby, a w niektórych przypadkach uniemożliwiając wtórny rozwój patologii. Jeśli ilość immunoglobuliny G zacznie ponownie wzrastać, można podejrzewać ponowna infekcja. Do podobnego wniosku można dojść pobierając dwie lub trzy próbki w odstępie 2 tygodni.
Immunoglobulina D (IgD) zlokalizowane na limfocytach B, występujące w niskich stężeniach w zdrowi ludzie. Po 10 latach życia osiąga maksymalne wartości. Ilość immunoglobuliny D wzrasta u pacjentek w czasie ciąży choroby ogólnoustrojowe tkanka łączna, choroby spowodowane niedoborami odporności.
Wskazania do przepisania testu immunoenzymatycznego krwi
Oznaczanie przeciwciał na obecność w organizmie drobnoustroje chorobotwórcze, powodując:
- rzęsistkowica;
- ureaplazmoza i
Występuje wzrost ilości immunoglobulin i wraz z.
Diagnostyka ma na celu wykrycie:
- choroby opryszczkowe;
- grupy Wirusowe zapalenie wątroby;
- wirus Epsteina-Barra;
- wirus cytomegoalo.
Za pomocą testu ELISA można określić obecność przeciwciał na 600 rodzajów alergenów, wykryć stan niedoborów odporności, przeprowadzić kompleksowe badanie przed operacjami przeszczepiania należy przeprowadzić kompleksową analizę w celu określenia skuteczności leczenia.
ELISA jest dodatkowa metoda wykrywanie komórek nowotworowych.
Jak przeprowadza się test ELISA krwi?
Do testów immunoenzymatycznych w większości przypadków wykorzystuje się krew pacjenta, czasami pobiera się tkankę szklisty, płyn z kanału kręgowego, płyn owodniowy.
Krew pobierana jest przez igłę iniekcyjną do strzykawki z żyły łokciowej. Badanie przeprowadza się na czczo. Należy pamiętać, że biorąc trochę Produkty medyczne może mieć wpływ na wynik analizy. Przed oddaniem krwi należy powstrzymać się od palenia i spożywania alkoholu. Używanie narkotyków może zniekształcać wyniki.
W przypadku ujemnych wartości immunoglobulin IgM, IgG, IgA, możemy mówić o braku choroby lub jej początkowej fazie, możliwy jest również wynik z minusami pełne wyzdrowienie po upływie znacznej ilości czasu.
Jeśli IgA i IgM nie zostaną wykryte, a IgG będzie dodatnie, najprawdopodobniej mówimy o odporności uformowanej po chorobie zakaźnej lub po szczepieniu.
Gdy wysokie miano IgM przy ujemnych wartościach IgG, IgA możemy stwierdzić, że istnieje ostra choroba zakaźna.
Jednoczesne dodatnie wartości wyników immunoglobulin - IgA, IgM, IgG są charakterystyczne dla ostrej fazy nawrotu istniejącej choroby przewlekłej.
Dla przewlekła infekcja, który znajduje się w fazie zanikania procesu (remisji), test ELISA wykaże ujemne wartości immunoglobuliny M (IgM), natomiast wynik immunoglobulin G (IgG) i A (IgA) będzie dodatni.
Zalety metody badania krwi metodą immunoenzymatyczną
Główne zalety metody ELISA to:
- niski koszt analizy;
- swoistość diagnostyczna, dokładność;
- kontrola dynamiczna (powtórzenie analizy w celu określenia skuteczności leczenia i etapów choroby);
- możliwość przeprowadzenia masowych badań w obszarach infekcji;
- szybkość uzyskiwania wyników;
- względna prostota analizy;
- możliwość wykorzystania Technologie informacyjne w przetwórstwie;
- bezpieczeństwo i bezbolesność dla pacjenta.
Czy są jakieś wady testu ELISA z krwi?
Głównym negatywnym aspektem badania jest możliwość uzyskania danych fałszywie negatywnych i fałszywie pozytywnych. Przyczyną nieporozumień mogą być braki techniczne lub stosowanie leków, co może zniekształcić obraz.
Test ELISA służy do wykrywania:
- (ascaris, owsiki);
- ostre i postać przewlekła przywr;
- trychinoza;
- obecność Giardii (jako dodatkowa analiza);
- formy leiszmaniozy;
- amebiaza;
- zawartość toksoplazmy;
Podsumowując, należy stwierdzić, że współczesna immunologia stale znajduje się na etapie rozwoju, poszukując nowych metod diagnozowania i leczenia chorób.
Stepanenko Władimir, chirurg
Jak przeprowadza się badanie ELISA?
Mechanizm reakcji
Test immunologiczny enzymatyczny opiera się na reakcja immunologiczna antygenu z przeciwciałem i dołączenie do przeciwciał znacznika enzymatycznego umożliwia uwzględnienie wyniku reakcji antygen-przeciwciało poprzez pojawienie się aktywności enzymatycznej lub zmianę jej poziomu, w uproszczonej formie mechanizm reakcji można przedstawić następująco:
|
Pierwsza reakcja zachodzi pomiędzy wykrytą Ig (Ab) a oczyszczonym antygenem patogenu (Ag), utrwalonym na powierzchni dołków tabletki immunologicznej |
|
|
|
Aby zidentyfikować powstałe kompleksy immunologiczne, przeprowadza się drugą reakcję immunologiczną, w której związana specyficzna Ig działa jak antygen, a koniugat reprezentujący Ig (Ab) z odpowiednią ludzką Ig, znakowany enzymem -peroksydazą (K) , jest stosowany jako przeciwciała przeciwko niemu. |
|
|
Następnie zachodzi reakcja enzymatyczna, katalizowana przez część enzymatyczną cząsteczki koniugatu. Substratem tej reakcji jest bezbarwna substancja – chromogen, która podczas reakcji tworzy barwną substancję. Intensywność zabarwienia dołka zależy w pewnym stopniu od ilości immunoglobulin zawartych w próbce. |
Obliczanie wyników
Przeprowadzanie testu immunologicznego enzymatycznego
Do serodiagnostyki stosuje się 96-dołkowe płytki polistyrenowe, na ściankach komórek, w których antygen jest wstępnie adsorbowany. Surowicę testową dodaje się do komórki tabletki. W tym przypadku przyłączają się do niego przeciwciała homologiczne do antygenu. Nieprzyłączone przeciwciała usuwa się przez przemywanie. Następnie do komórek dodaje się przeciwciała przeciwko ludzkim immunoglobulinom (przeciwciała) znakowanym enzymem. Jeżeli w surowicy testowej obecne były wykrywalne przeciwciała, to na tym etapie będą one pełnić rolę antygenów, z którymi zareagują znakowane przeciwciała. Dodatek substancji chromogennej (barwnika) po umyciu pozwoli nam uwzględnić reakcję rozwijającego się koloru w komórkach. Intensywność zabarwienia jest proporcjonalna do ilości enzymu, a co za tym idzie, ilości przeciwciał. Podczas pomiaru gęstości optycznej (OD) cieczy w komórce i porównania jej z próbką kontrolną, stężenie przeciwciał oblicza się w jednostkach. objętości. Najczęściej stosuje się obliczanie wyników w jednostkach gęstości optycznej. Należy wziąć pod uwagę, że każdy system testowy ma swoje własne wskaźniki rejestrowania wyników oraz wskaźniki normalności i patologii, którymi należy się kierować przy interpretacji. wyniki.
Jakie infekcje można wykryć za pomocą testu ELISA?
Głównie we współczesnej wenerologii stosuje się go w diagnostyce kiły (w połączeniu z innymi reakcjami), zakażenia wirusem HIV, wirusowego zapalenia wątroby ograniczona wartość do diagnostyki infekcji chlamydiami, infekcji wirusem cytomegalii i innych infekcji wirusem opryszczki. Metodę ELISA wykorzystuje się także do oznaczania przeciwciał przeciwko różnym chorobom zakaźnym, poziomu hormonów, autoprzeciwciał i różnych markerów choroby onkologiczne.
Jak interpretować wyniki testu ELISA
Badanie obecności i poziomu przeciwciał różne zajęcia w niektórych przypadkach pomaga określić etapy proces zakaźny
|
Etap choroby |
IgM |
IgA |
IgG |
|
Faza pierwotna |
|||
|
Faza pierwotna |
|||
|
Faza pierwotna |
|||
|
Zaostrzenie fazy przewlekłej |
|||
|
Faza przewlekła |
|||
|
Przeszłość (wyleczona infekcja) |
|||
|
Powrót do zdrowia |
później zmniejszenie miana 2-4 razy skuteczne leczenie |
zmniejszenie miana o 4-8 razy w ciągu 1-1,5 miesiąca po skutecznym leczeniu |
|
|
Wynik negatywny |
Niestety, to ważna zaleta ELISA, jak oznaczenie ilościowe przeciwciała nie mają większego znaczenia w pracy praktycznej - tj. nie pozwala na dokładną diagnozę i nie ma wpływu na dawkowanie i termin przepisywania leku leki.
Jaka jest rola metody ELISA w diagnostyce kiły?
Metodę ELISA w diagnostyce kiły po raz pierwszy zastosowano w 1975 roku. Obecnie jest ona powszechnie stosowana w diagnostyce serologicznej kiły w Rosji i służy jako test potwierdzający kiłę. Zwykle przeprowadza się badanie, które identyfikuje tzw całkowite przeciwciała przeciwko antygenom Treponema pallidum (IgM i IgG), choć w niektórych przypadkach możliwe jest oznaczenie jedynie „wczesnych” przeciwciał klasy M. Test ELISA na kiłę staje się dodatni po 3 tygodniach od momentu zakażenia i u niektórych pozostaje dodatni czas długi czas nawet po leczeniu (czasami przez całe życie). Dlatego też testu ELISA nie stosuje się jako testu potwierdzającego wyleczenie kiły. W większości przypadków przeprowadza się jedynie jakościowe oznaczenie testu ELISA – tj. tylko wynik pozytywny lub negatywny, chociaż możliwe jest również oznaczenie ilościowe.
(ELISA) to laboratoryjna metoda badania krwi, polegająca na poszukiwaniu specjalnych komórek – przeciwciał przeciwko różne choroby. Metoda pozwala nie tylko zidentyfikować patogen, ale także określić, na jakim jest etapie proces patologiczny. To ostatnie jest bardzo ważne dla rokowania i dalsze leczenie pacjent.
Zalety i wady metody
Wśród wszystkich nowoczesne metody Diagnostyka ELISA jest najbardziej innowacyjna i technicznie dokładna. Jego główne zalety to:
- Możliwość wyszukiwania wszystkich istniejących przeciwciał przeciwko chorobom zakaźnym we krwi pacjenta.
- Wysoka dostępność metody badawczej. Obecnie testy ELISA może wykonać każde średniej wielkości laboratorium.
- Prawie 100% swoistość i czułość metody.
- Możliwość wyszukiwania przeciwciał i antygenów, a także ustalenia stadium procesu patologicznego i śledzenia jego dynamiki, dzięki porównaniu ilości.
Ta liczba przewag nad innymi testami całkowicie przyćmiewa jedyną wadę testu: jest on w stanie wykryć przeciwciała, ale nie sam patogen.
Terminy kluczowe dla analizy oceniającej
Aby zrozumieć, czym jest analiza ELISA, na czym polega i jak się ją przeprowadza, należy zapoznać się z podstawowymi pojęciami używanymi przez specjalistów.
- Przeciwciało- białko wytwarzane przez komórki układu odpornościowego człowieka (limfocyty typu B). Oni odpowiadają konkretna reakcja przedostaniem się obcego czynnika lub substancji do organizmu. Inną nazwą przeciwciał są immunoglobuliny, do których należą różne klasy: A, E, M, G. Różnią się między sobą masą, szybkością reakcji, okresem półtrwania i szeregiem innych cech. Zwykle ludzka krew zawiera głównie immunoglobuliny klasy G. W przypadku wystąpienia jakiejkolwiek infekcji ilość immunoglobulin A i M gwałtownie wzrasta. Immunoglobuliny E biorą udział w reakcjach alergicznych.
- Antygen- zagraniczny agent, który to zrobił pochodzenie organiczne i o dużej masie cząsteczkowej. Najczęściej reprezentuje patogeny lub ich substancje biologicznie czynne.
- Kompleks antygen-przeciwciało, czyli kompleks immunologiczny, to bezpośrednie połączenie obcej substancji i immunoglobuliny, które powoduje rozwój reakcji immunologicznej.
Istota i zakres metody
Pacjenci często zadają sobie pytanie: Analiza ELISA, na czym polega, jak się ją wykonuje i do czego służy? O metodzie można w przystępny sposób opowiedzieć, krótko opisując jej etapy.
Etap przygotowawczy. Lekarz laboratoryjny używa specjalnej płytki z 96 dołkami. Na powierzchnię każdego dołka nanosi się antygen określonego patogenu.
Scena 1. Pobiera się krew, którą następnie kropla po kropli wprowadza się do studzienki. Dołek inicjuje reakcję pomiędzy antygenem a przeciwciałem we krwi.
Etap 2. Reakcja z tworzeniem się kompleksów immunologicznych przebiega pełną parą w dziurze. W rezultacie powstaje substancja o określonym kolorze. Intensywność koloru zależy od ilości przeciwciał we krwi pacjenta przeciwko każdemu konkretnemu patogenowi.
Etap 3. Ocena wyniku metodą fotometryczną. W tym celu wykorzystuje się specjalne urządzenie zwane spektrofotometrem. Służy do porównania gęstości materiału w otworze i próbki kontrolnej. Następnie urządzenie wg Analiza matematyczna generuje wynik.
Ocena wyników i cel testu ELISA
Interpretacja wyniku zależy od kilku ważnych niuansów:
- Gęstość optyczna studni.
- Producent płyt ze studniami (systemy testowe).
- Laboratorium, w którym przeprowadzono badanie.
Biorąc pod uwagę te niuanse, nigdy nie należy porównywać dwóch wyników uzyskanych z różnych systemów testowych lub z różnych laboratoriów.
Kolejnym ważnym punktem wpływającym na analizę ELISA jest tzw. awidność przeciwciał. Parametr ten charakteryzuje ilość antygenu i siłę wiązania w kompleksie antygen-przeciwciało. Jego definicja opiera się na traktowaniu kompleksu immunologicznego mocznikiem w celu rozdzielenia struktur białkowych. Pozwala to zniszczyć słabe wiązania pomiędzy antygenem a przeciwciałem i pozostawić jedynie silne. Znaczenie badania awidności polega na tym, że można je wykorzystać do określenia czasu trwania infekcji. Informacje te są niezwykle ważne dla postawienia diagnozy u kobiet w ciąży.
Badanie krwi metodą ELISA służy:
- Wyszukiwanie różnych antygenów patogenów.
- Aby zbadać poziom hormonów.
- Do badania na obecność patologii autoimmunologicznej.
- Aby wykryć markery nowotworowe.
Odmiany testu ELISA
Analiza ELISA ma następujące typy:
- Pośredni.
- Prosty.
- Konkurencyjny.
- Metoda blokowania.
Ale tak naprawdę obecnie stosowana jest tylko metoda zwana ELISA (test immunoenzymatyczny). Polega ona na opisanej powyżej reakcji tworzenia kompleksu antygen-przeciwciało ze zmianą koloru powierzchni dołka.
Na szczególną uwagę zasługuje ilościowe badanie krwi ELISA. Nie jest to rodzaj analizy, ale sposób oceny wyników. Dzięki niemu obliczana jest liczba przeciwciał i określana jest ich klasa. Wynik zależy od gęstości optycznej próbki, systemu testowego, na którym przeprowadzono analizę ELISA, a także od laboratorium.
Choroby wykryte metodą ELISA
ELISA to badanie krwi, które pozwala zidentyfikować wielka ilość różny choroba zakaźna. Co więcej, zarówno infekcje wirusowe, jak i wirusowe są wykrywane z równą dokładnością. choroby bakteryjne. Na przykład, wykorzystując tworzenie kompleksów immunologicznych, można wykazać obecność antygenów patogenów następujących chorób:
Ponadto test ELISA umożliwia wykrycie:
- Markery nowotworowe – TNF (czynnik martwicy nowotworu), PSA (antygen specyficzny dla prostaty), CEA (antygen rakowo-embrionalny), CA-125 (marker nowotworu jajnika)
- Hormonem ciążowym jest hCG (ludzka gonadotropina kosmówkowa).
- Naruszenia układ rozrodczy: hormony żeńskiego i męskiego układu rozrodczego.
- Patologia tarczycy.
Należy wspomnieć, że test ELISA na obecność wirusa HIV jest dziś głównym sposobem diagnozowania tej niebezpiecznej choroby.
Materiał do testu ELISA i technika pobierania próbek
Aby wykonać test ELISA, od pacjenta pobierana jest krew na pusty żołądek. Następnie z krwi pobierana jest surowica, którą bezpośrednio wykorzystuje się do analizy. Ponadto można wykonać test ELISA płyn mózgowo-rdzeniowy(płyn mózgowo-rdzeniowy), śluz kanału szyjki macicy (szyjka macicy), płyn owodniowy, a nawet płyn szklisty (gałka oczna).
Przed oddaniem krwi pacjent jest ostrzegany, że nie powinien jej pobierać leki oraz leczenie antybiotykami i leki przeciwwirusowe Zaleca się zakończyć co najmniej dwa tygodnie przed pobraniem krwi.
Terminy odbioru i dekodowania wyników
Czas otrzymania odpowiedzi z laboratorium nie zależy od szybkości jego pracy, ale od tego, na jakim etapie jest choroba i jakie przeciwciała pojawiły się już we krwi. I tak np.: immunoglobuliny M pojawiają się po około 2 tygodniach od pobrania krwi do analizy i oznaczają, że proces ten znajduje się na etapie infekcji pierwotnej lub nastąpiło zaostrzenie infekcji przewlekłej. Jednocześnie podczas pierwotnej infekcji pojawiają się przeciwciała klas M i G. Co więcej, to ostatnie można wykryć po 4 tygodniach.
IgA pojawia się po 2-3 tygodniach samodzielnie lub razem z M, co oznacza ostra infekcja lub razem z G, wskazując na proces przewlekły.
Taki różne terminy pojawienie się przeciwciał we krwi zmusi pacjenta do długiego oczekiwania na wynik. Dopuszczalny jest odczekanie ponad miesiąca od wykonania testu ELISA. Odszyfrowanie i interpretacja przez lekarza również zajmuje pewien czas.
Lista dostępnych metod diagnostycznych w ostatnich dziesięcioleciach gwałtownie się poszerza; diagności próbują połączyć zalety wszystkich dotychczasowych analiz w nowych metodach, pozbywając się wszystkich ich dotychczasowych wad.
W Ostatnio coraz częściej na liście procedury diagnostyczne obejmuje test immunologiczny enzymatyczny – nowoczesny i dość nowy test, o którym niewiele wie przeciętny człowiek nie zajmujący się medycyną. Niemniej jednak technika ta szybko zyskuje rzeszę zwolenników wśród wykwalifikowanego personelu medycznego. Możesz spróbować dowiedzieć się, co to jest i w jakich przypadkach należy go używać, zapoznając się z jego funkcjami i głównymi cechami.
Test immunologiczny enzymatyczny jest instrumentalną techniką laboratoryjną opartą na molekularnej reakcji „antygen-przeciwciało”, która umożliwia wykrycie określonych białek w materiały biologiczne(próbki do badań). Takimi białkami mogą być enzymy, różne mikroorganizmy (wirusy, bakterie, grzyby), pierwotniaki itp.
Po odkryciu metody nadano jej nazwę test ELISA, która nie ma nic wspólnego z nazwiskiem odkrywców, ale jest skrótem od pełnej nazwy w języku angielskim - enzymatyczny test immunoenzymatyczny. Lekarze na całym świecie używają tej nazwy; niektórzy lekarze w krajach rosyjskojęzycznych również tak nazywają tego typu badania.
Główną zasadą tej metody jest molekularna reakcja „antygen-przeciwciało”.
Antygen to dowolna obca cząsteczka, która przedostaje się do Ludzkie ciało jako część drobnoustroju wywołującego chorobę. Antygeny są zwykle cząsteczkami białek. Oprócz mikroorganizmów takim „obcym” mogą być obce krwinki, które nie pasują do grupy lub czynnika Rh.
W odpowiedzi na przedostanie się takiego antygenu do organizmu uruchamia się reakcja immunologiczna, której celem jest ochrona przed obcymi cząsteczkami. Dzieje się tak w wyniku syntezy środków specjalnych układ odpornościowy- przeciwciała (immunoglobuliny). Każde przeciwciało jest odpowiednie tylko dla konkretnego antygenu i neutralizuje patogennego „obcego” wiążąc się z nim w jeden kompleks. Jest to proces takiego wiązania, który nazywany jest reakcją „antygen-przeciwciało”.
Rodzaje przeciwciał
Wszystkie przeciwciała (immunoglobuliny) dzielą się na 5 typów w zależności od tego, na jakim etapie odpowiedzi immunologicznej się pojawiają:
W diagnostyce metodą ELISA najczęściej znaczenie mają poziomy immunoglobulin IgG, IgM i IgA. Na podstawie ich mian można dowiedzieć się, czy dana osoba chorowała wcześniej lub niedawno została zarażona, czy rozwinęła odporność lub czy jego organizm jest bezbronny przed patologią.
Zalety i wady testu immunologicznego enzymatycznego
NA ten moment ELISA jest jedną z najdokładniejszych i najbardziej czułych metod. Został przyjęty przez specjalistów z różnych dziedzin medycyny i stale poszerza zakres jego zastosowania.
Zalety metody
- Wysoka dokładność uzyskiwanych danych.
- Czułość (pozwala wykryć wymaganą substancję nawet przy minimalnej obecności patogenu w próbce).
- Możliwość diagnozy już w pierwszych dniach choroby lub w okresie inkubacji.
- Szybkość pozyskiwania danych w porównaniu do innych metod o podobnej dokładności.
- Wysoka automatyzacja procesu i minimalny udział człowieka, co zmniejsza błąd wykonawcy.
- Uzyskanie danych o stadium procesu patologicznego i skuteczności wybranej terapii.
- Bezbolesne i minimalnie inwazyjne podczas pobierania materiału.
Wady metody
- W większości przypadków pozwala określić reakcję organizmu na czynnik chorobotwórczy, a nie sam patogen.
- Przed badaniem należy dokładnie poznać podejrzenie choroby, ponieważ test jest wysoce swoisty.
- Prawdopodobieństwo fałszywych odczytów spowodowane problemami technicznymi, przyjmowaniem leków lub jednoczesną obecnością kilku choroby przewlekłe lub naruszenia procesy metaboliczne w ciele pacjenta.
- Interpretacji wyników powinien dokonywać wyłącznie wysoko wykwalifikowany specjalista, gdyż do interpretacji uzyskanych danych konieczna jest wiedza specjalny trening oraz duży zasób wiedzy medycznej w określonej dziedzinie.
- ELISA jest badaniem dość rzadkim, dlatego nie we wszystkich laboratoriach diagnostycznych wykonuje się go.
- Metoda jest dość droga, ponieważ oprócz odczynników laboratorium musi posiadać wiele drogiego sprzętu i próbki antygenów wytwarzanych w specjalnych instytutach.
W jakich przypadkach stosuje się immunoenzymatyczny test?
Pełna lista wskazań do wykonania testu immunoenzymatycznego jest bardzo szeroka i obejmuje niemal wszystkie gałęzie medycyny.
Najczęściej test ELISA stosuje się w następujących celach:
- wykrywanie chorób zakaźnych;
- diagnostyka chorób przenoszonych drogą płciową;
- definicja stan odporności lub niektóre choroby autoimmunologiczne;
- identyfikacja markerów nowotworowych;
- oznaczanie hormonów.
W przypadku zakaźnych i choroby wirusowe Technika ta pozwala zidentyfikować następujące patologie:
Ponadto test ELISA pozwala szybko i skutecznie określić stan zawału, ocenić potencjał rozrodczy organizmu, zidentyfikować alergie, ich źródło itp.
Do przeprowadzenia wykorzystuje się technikę immunoenzymatycznego testu Badania kliniczne podczas opracowywania nowych leków i oceny ich wpływu na organizm ludzki.
Rodzaje próbek i metody ich doboru do badań
Najczęściej materiałem do badań immunoenzymatycznych jest krew pobierana z żyły łokciowej pacjenta. Pobieranie próbek odbywa się na czczo, głównie rano. Po pobraniu próbki powstałe komórki zakłócające badanie są oddzielane i usuwane z krwi, pozostawiając jedynie surowicę.
Podczas diagnozowania infekcji dróg moczowo-płciowych materiałem często stają się rozmazy z tkanek śluzowych narządów płciowych, śluz z cewki moczowej lub szyjki macicy, próbki z odbytnicy, zeskrobiny z nadżerek lub wrzodów w okolicy pachwiny oraz z innych części ciała. Można też pobrać wymazy Jama ustna, a także z nosogardzieli.
Czasami w praktyce położniczej i ginekologicznej podczas ciąży stosuje się test immunoenzymatyczny w celu określenia stanu płynu owodniowego. W tym przypadku próbką staje się płyn owodniowy. W tym celu należy pobrać niewielką ilość płynu, przekłuwając worek owodniowy długą igłą. Wszystkie manipulacje przeprowadzane są przy użyciu sterylnych narzędzi, aby zminimalizować potencjalne ryzyko.
Często materiał staje się płynem mózgowo-rdzeniowym lub surowiczym. Dzieje się tak, gdy znieczulenie miejscowe, który podaje się w zastrzyku.
Specjalista wysyłający na badanie powinien wyjaśnić, jakiego rodzaju materiały są potrzebne do wykonania testu immunoenzymatycznego. Często pobiera się próbki kilku rodzajów lub z różnych miejsc jednocześnie. Lekarz wystawiający skierowanie na tego typu badanie powinien poinformować pacjenta także o przygotowaniach do pobrania biomateriału.
Przygotowanie do testu immunologicznego enzymatycznego
Aby zwiększyć dokładność danych uzyskanych po teście immunoenzymatycznym, przygotowanie do selekcji materiału powinno przebiegać następująco:
- na 10 dni przed badaniem należy wykluczyć antybiotyki, leki przeciwwirusowe i przeciwgrzybicze;
- na jeden dzień należy wykluczyć alkohol, palić i zażywać substancje odurzające;
- w tym samym okresie należy unikać nadmiernego wysiłku fizycznego;
- Ostrzeż lekarza przepisującego lek o wszystkich lekach przyjmowanych przez pacjenta;
- Jeśli jesteś w ciąży lub podejrzewasz, że jesteś w ciąży, poinformuj o tym swojego lekarza.
Najlepiej, jeśli materiały do badań pobierane są rano, na czczo.
Jeśli diagnoza ma na celu określenie stanu poziomu hormonów, ważne jest, aby to zapewnić spokojny stan dzień wcześniej i unikaj Napięcie nerwowe. W przypadku kobiet o oddawaniu krwi na hormony wyraźnie decyduje okres cykl miesięczny, które zostaną omówione przez lekarza podczas wizyty.
Na 2-3 dni przed pobraniem próbki należy wykluczyć z menu potrawy smażone i tłuste, a przed badaniem na zapalenie wątroby nie spożywać owoców cytrusowych ani innych pomarańczowych lub żółtych owoców i warzyw.
Interpretacja wyników testów immunoenzymatycznych
Wynik badania jakościowego jest zwykle oznaczony znakami „+” (wykryty) lub „-” (nie znaleziony).
Na podstawie obecności lub braku pewnych grup immunoglobulin można wyciągnąć następujące wnioski:
- JgM (-), JgG (-), JgA (-) - odporność na chorobę jest całkowicie nieobecna (organizm nie spotkał się wcześniej z tego typu antygenem);
- JgM (-), JgG (+), JgA (-) - doszło do wcześniejszej kolizji z tym antygenem lub ze szczepionką;
- JgM (+), JgG (-/+), JgA (-/+) - ostry proces patologiczny (najprawdopodobniej pierwotny);
- JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) - proces przewlekły;
- JgM (+), JgG (+), JgA (+) - nawrót;
- JgM (-) - etap zdrowienia.
Wartości ilościowe niosą ze sobą duży ładunek informacyjny, ale tylko lekarz prowadzący może je zinterpretować na podstawie wcześniejszych wskazań, wieku pacjenta i norm dla każdej konkretnej choroby. Z tego powodu nie możesz sam ocenić wyników.
Jak długo trzeba czekać na wyniki?
Technika ta ma wiele odmian, w zależności od tego, jaki jest okres pozyskiwania danych. Przeciętny czas trwania Diagnostyka metodą ELISA trwa 4-6 godzin, co pozwala na dostarczenie wyników już następnego dnia.
Najdłuższe metody trwają do 10 dni, np. w przypadku zakażenia wirusem HIV.
Na nagła potrzeba Możliwe jest zastosowanie metod ekspresowych, w których odpowiedź uzyskuje się w ciągu 1-2 godzin.
Gdzie mogę wykonać test ELISA?
Ponieważ sprzęt do tego typu diagnostyki jest dość drogi, nie wszystkie laboratoria mogą go kupić. Ponadto testy zawierające określone antygeny mają ograniczony okres przydatności do spożycia (zwykle około 1 roku) i dlatego wymagają ciągłej aktualizacji.
Z tych powodów rząd instytucje medyczne Laboratoria ELISA nie zawsze są dostępne. Najczęściej konieczny jest kontakt z dużymi prywatnymi ośrodkami medycznymi lub dużymi ośrodkami diagnostycznymi.
Aby przeprowadzić badanie ELISA, laboratorium musi posiadać specjalną licencję, a personel i asystenci laboratorium muszą przejść specjalne szkolenie.
Najczęściej konkretny centrum diagnostyczne lub laboratorium zaleci lekarz kierujący pacjenta na badanie.
Koszt testu immunologicznego enzymatycznego
Cena za to badanie zależy od regionu kraju i poziomu kliniki świadczącej usługę. W Moskwie Cena minimalna za określenie jednego antygenu zaczyna się od 700 rubli. W przypadku konieczności jednoczesnej identyfikacji kilku immunoglobulin cena zostanie zsumowana.
Gdy pilna analiza koszt wzrasta o 150-200 rubli. dla każdego antygenu.
Pomimo dość wysokiego kosztu, immunoenzymatyczny test pozwala na możliwie szybkie i pouczające badanie pacjenta, co skraca czas do rozpoczęcia leczenia i pozwala na szybszą stabilizację stanu pacjenta.
W tym filmie prezentowany jest film „Podstawy testu immunologicznego enzymatycznego”.
