Teknik diagnostik zaman modern memungkinkan untuk mengidentifikasi penyakit tertentu di laboratorium dengan menggunakan analisis khusus. Salah satunya adalah tes darah imunosorben terkait-enzim, yang dapat memastikan diagnosis yang dibuat sebelumnya.
Enzim immunoassay ELISA adalah salah satu yang paling efektif dan metode modern memungkinkan untuk mengidentifikasi gangguan yang terkait dengan kekebalan dan ketidakseimbangan hormon, serta proses onkologis. Selama tes, antibodi yang diproduksi ketika ada infeksi di dalam tubuh dapat dideteksi di dalam darah. Dengan mempertimbangkan nuansa ini, penyakit ini dapat dideteksi bahkan pada tahap paling awal perkembangannya.
Apa dasar dari teknik ini?
Hasil analisis ELISA didasarkan pada perolehan reaksi kimia pada enzim yang berfungsi sebagai tanda identifikasi khusus untuk mengenali antibodi. Akibatnya, selama reaksi imunokimia, antibodi mulai berinteraksi dengan antigen tertentu. Semua ini memberi alasan untuk menegaskan hal itu hasil yang salah saat mendonorkan darah untuk ELISA sangat minim.
Studi ini memungkinkan kita untuk menentukan jumlahnya sel imun, sifat-sifatnya, serta keberadaan antibodi yang diperlukan
Hasilnya dianggap positif bila warna larutan terdeteksi. Warnanya menunjukkan bahwa antigen berinteraksi dengan antibodi. Jika hal seperti ini tidak terjadi, hasilnya negatif.
(tautan ke artikel ke-3 dalam file ini), memungkinkan Anda menilai kemampuan tubuh untuk melawan penyakit menular dan menunjukkan fase penyakit, uji imunosorben terkait-enzim (ELISA) menempati tempat yang penting. Melakukan penelitian ini memungkinkan Anda menilai secara komprehensif aktivitas fungsi pelindung darah dan mengidentifikasi keadaan defisiensi imun pada patologi infeksi, serta penyakit darah, proses autoimun, dan masalah hormonal.
Bagaimana mungkin untuk mencakup begitu banyak target dalam satu analisis, dan apa indikasi implementasinya? Mari kita coba mencari tahu.
Apa tes darah yang dilakukan dengan metode ELISA?
Ini tes laboratorium, yang memungkinkan Anda menentukan keberadaan antibodi spesifik (faktor pelindung darah yang bersifat protein) terhadap antigen tertentu (agen patogen). Di antara antibodi, imunoglobulin, yang dapat berbentuk imunokompleks, adalah yang paling penting.
Imunoglobulin diproduksi sebagai hasil reaksi neurohumoral kompleks manusia yang terjadi sebagai respons terhadap masuknya antigen asing. Setiap jenis agen patogen menghasilkan antibodi spesifiknya sendiri. Mereka bertindak dengan “mengikat” antigen atau mikroorganisme patologis, membentuk senyawa “antigen-antibodi” yang kompleks, diikuti dengan netralisasi, lisis enzimatik, reaksi fagositosis dan pengeluaran dari tubuh.
Catatan:Dengan adanya kompleks tertentu maka metode ELISA menentukan jenis patogen atau zat berbahaya yang ada pada pasien.
Untuk mengetahui prinsip dasar Anda dapat melihat bagaimana sistem kekebalan tubuh manusia berfungsi dengan melihat video ini tinjauan:
Apa itu imunoglobulin?
5 kelas utama imunoglobulin telah ditemukan dan dipelajari - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. peran sisanya belum sepenuhnya diklarifikasi dan masih dalam penelitian ilmiah.
Catatan:paling penting di pengobatan praktis Imunoglobulin kelas A, M dan G penting. Kandungan informasi definisinya didasarkan pada interval waktu kemunculan, maksimum, dan hilangnya yang berbeda.
Mari kita pertimbangkan masalah ini lebih terinci.
Tugas utama imunoglobulin A (IgA) terdiri dari fungsi pelindung selaput lendir saluran pernafasan, saluran pencernaan dan sistem kemih. Pada tahap awal penyakit yang akut, tidak mungkin untuk mengidentifikasinya. Kompleks pelindung ini hanya muncul pada minggu ke-2 setelah timbulnya penyakit, terkadang lebih lambat. Sebagian besar imunoglobulin A terkonsentrasi di jaringan mukosa. Sekitar 80%. Antibodi yang tersisa bersirkulasi di dalam darah. Fungsi utamanya adalah netralisasi dan penghancuran mikroorganisme. Setelah mereda manifestasi akut penyakit, jumlah imunoglobulin ini mulai menurun dan hilang sama sekali hingga 8 minggu setelah timbulnya penyakit. Jika IgA terdeteksi di kemudian hari, ini menandakan proses kronis.
Penanda utama dan pertama dari fase akut mengembangkan patologi adalah imunoglobulin kelas M (IgM). Mereka terdeteksi pada hari ke 5 sejak timbulnya penyakit. Kehadiran mereka dalam darah dapat ditentukan dalam waktu sekitar 6 minggu. Kemudian mereka mulai menghilang dengan cepat.
Respon imun sisa ditandai dengan adanya darah imunoglobulin kelas G (IgG). Munculnya faktor-faktor ini dalam darah terdeteksi sekitar satu bulan setelah timbulnya penyakit. Di masa depan, mereka dapat ditentukan selama berbulan-bulan, bertahun-tahun dan bahkan seumur hidup, memuaskan fungsi pelindung dari kembalinya (kambuh) penyakit, dan dalam beberapa kasus membuat perkembangan sekunder dari patologi menjadi tidak mungkin. Jika jumlah imunoglobulin G mulai meningkat lagi, maka bisa dicurigai infeksi ulang. Kesimpulan serupa dapat diambil dengan melakukan dua atau tiga sampel yang diambil dengan selang waktu 2 minggu.
Imunoglobulin D (IgD) terletak pada limfosit B, ditemukan dalam konsentrasi rendah di orang sehat. Setelah 10 tahun hidup, ia mencapai nilai maksimumnya. Jumlah imunoglobulin D meningkat selama kehamilan pada pasien penyakit sistemik jaringan ikat, penyakit yang disebabkan oleh keadaan imunodefisiensi.
Indikasi untuk meresepkan tes darah enzim immunoassay
Penentuan antibodi terhadap keberadaannya dalam tubuh mikroba patogen, menyebabkan:
- trikomoniasis;
- ureaplasmosis dan
Ada peningkatan jumlah imunoglobulin dan dengan.
Diagnostik dilakukan untuk mendeteksi:
- penyakit herpes;
- kelompok virus hepatitis;
- virus Epstein-Barr;
- sitomegoalovirus.
Dengan menggunakan ELISA, Anda dapat menentukan keberadaan antibodi terhadap 600 jenis alergen, mendeteksi keadaan imunodefisiensi, dan melakukan pemeriksaan komprehensif sebelum operasi transplantasi, lakukan analisis komprehensif untuk menentukan efektivitas pengobatan.
ELISA adalah metode tambahan deteksi sel kanker.
Bagaimana ELISA darah dilakukan?
Untuk immunoassay enzim, dalam banyak kasus, darah pasien digunakan, terkadang jaringan diambil seperti kaca, cairan saluran tulang belakang, cairan ketuban.
Darah diambil melalui jarum suntik ke dalam spuit dari vena cubiti. Penelitian dilakukan dengan perut kosong. Harus diingat bahwa mengambil beberapa suplai medis dapat mempengaruhi hasil analisis. Sebelum mendonor darah, Anda harus menahan diri dari merokok dan minum alkohol. Penggunaan narkoba dapat merusak hasil.
Dalam kasus nilai imunoglobulin IgM, IgG, IgA negatif, kita dapat berbicara tentang tidak adanya penyakit atau fase awalnya juga, hasil negatif mungkin terjadi jika pemulihan penuh setelah sejumlah besar waktu berlalu.
Jika IgA dan IgM tidak terdeteksi, dan IgG positif, kemungkinan besar kita berbicara tentang terbentuknya kekebalan setelah penyakit menular, atau setelah vaksinasi.
Kapan titer tinggi IgM dengan nilai IgG, IgA negatif maka dapat disimpulkan adanya penyakit infeksi akut.
Nilai positif simultan dari hasil imunoglobulin - IgA, IgM, IgG merupakan karakteristik fase akut kekambuhan penyakit kronis yang ada.
Untuk infeksi kronis yaitu pada proses fase mereda (remisi), ELISA menunjukkan nilai imunoglobulin M (IgM) negatif, sedangkan hasil imunoglobulin G (IgG) dan A (IgA) positif.
Keuntungan dari metode tes darah enzim immunoassay
Keuntungan utama metode ELISA adalah:
- biaya analisis yang rendah;
- spesifisitas diagnostik, akurasi;
- pengendalian dinamis (mengulangi analisis untuk menentukan efektivitas pengobatan dan stadium penyakit);
- kemungkinan melakukan pemeriksaan massal di area infeksi;
- kecepatan memperoleh hasil;
- analisis yang relatif sederhana;
- kemungkinan penggunaan teknologi Informasi dalam pemrosesan;
- keamanan dan rasa sakit bagi pasien.
Apakah ada kerugian dari ELISA darah?
Aspek negatif utama dari penelitian ini adalah kemungkinan memperoleh data negatif palsu dan positif palsu. Penyebab kesalahpahaman mungkin karena kekurangan teknis atau penggunaan obat-obatan, yang dapat merusak gambarannya.
ELISA digunakan untuk mendeteksi:
- (ascaris, cacing kremi);
- akut dan bentuk kronis opisthorchiasis;
- trikinosis;
- kehadiran Giardia (sebagai analisis tambahan);
- bentuk leishmaniasis;
- amebiasis;
- kandungan toksoplasma;
Sebagai kesimpulan, perlu dicatat bahwa imunologi modern terus-menerus berada pada tahap perkembangan, mencari metode baru untuk mendiagnosis dan mengobati penyakit.
Stepanenko Vladimir, ahli bedah
Bagaimana studi ELISA dilakukan?
Mekanisme reaksi
Enzim immunoassay didasarkan pada reaksi imun antigen dengan antibodi, dan pelekatan label enzim pada antibodi memungkinkan untuk memperhitungkan hasil reaksi antigen-antibodi dengan munculnya aktivitas enzimatik atau dengan perubahan levelnya Mekanisme reaksi dapat disajikan sebagai berikut:
|
Reaksi pertama terjadi antara Ig (Ab) yang terdeteksi dan antigen patogen yang dimurnikan (Ag), yang difiksasi pada permukaan lubang tablet imunologi. |
|
|
|
Untuk mengidentifikasi kompleks imun yang terbentuk, reaksi imunologi kedua dilakukan, di mana Ig spesifik yang terikat bertindak sebagai antigen, dan konjugat yang mewakili Ig (Ab) menjadi Ig manusia yang sesuai, diberi label dengan enzim -peroksidase (K) , digunakan sebagai antibodi terhadapnya. |
|
|
Selanjutnya, terjadi reaksi enzimatik, yang dikatalisis oleh bagian enzimatik dari molekul konjugat. Substrat untuk reaksi ini adalah zat tidak berwarna - kromogen, yang selama reaksi membentuk zat berwarna. Intensitas warna dalam sumur tergantung pada jumlah imunoglobulin yang terkandung dalam sampel. |
Perhitungan hasil
Melakukan immunoassay enzim
Untuk serodiagnosis, pelat polistiren 96 lubang digunakan, pada dinding sel yang antigennya telah diserap sebelumnya. Serum uji ditambahkan ke sel tablet. Dalam hal ini, antibodi yang homolog dengan antigen menempel padanya. Antibodi yang tidak terikat dihilangkan dengan pencucian. Selanjutnya, antibodi terhadap imunoglobulin manusia (antibodi) yang diberi label enzim ditambahkan ke dalam sel. Jika antibodi yang terdeteksi terdapat dalam serum uji, maka pada tahap ini antibodi tersebut akan bertindak sebagai antigen yang akan bereaksi dengan antibodi berlabel. Penambahan zat kromogenik (pewarna) setelah pencucian akan memungkinkan kita memperhitungkan reaksi berkembangnya warna dalam sel. Intensitas warna sebanding dengan jumlah enzim, dan oleh karena itu, jumlah antibodi. Saat mengukur kepadatan optik (OD) cairan dalam sel dan membandingkannya dengan sampel kontrol, konsentrasi antibodi dihitung dalam satuan. volume. Yang paling sering digunakan adalah menghitung hasil dalam satuan kepadatan optik. Harus diingat bahwa Setiap sistem pengujian memiliki indikatornya sendiri untuk mencatat hasil dan indikator normalitas dan patologi yang harus dijadikan pedoman saat menafsirkan hasil. hasil.
Infeksi apa yang dapat dideteksi dengan ELISA?
Terutama dalam venereologi modern digunakan untuk diagnosis sifilis (dalam kombinasi dengan reaksi lain), infeksi HIV, virus hepatitis nilai terbatas untuk diagnosis infeksi klamidia, infeksi sitomegalovirus dan infeksi herpes lainnya. Metode ELISA juga digunakan untuk menentukan antibodi terhadap berbagai penyakit menular, kadar hormon, autoantibodi dan berbagai penanda penyakit onkologis.
Bagaimana menginterpretasikan hasil ELISA
Studi tentang keberadaan dan tingkat antibodi berbagai kelas dalam beberapa kasus membantu menentukan tahapan proses infeksi
|
Tahap penyakit |
IgM |
IgA |
IgG |
|
Fase primer |
|||
|
Fase primer |
|||
|
Fase primer |
|||
|
Eksaserbasi fase kronis |
|||
|
Fase kronis |
|||
|
Masa lalu (infeksi yang disembuhkan) |
|||
|
Pemulihan |
penurunan titer sebanyak 2-4 kali setelahnya pengobatan yang berhasil |
titer menurun 4-8 kali 1-1,5 bulan setelah pengobatan berhasil |
|
|
Hasil negatif |
Sayangnya, ini keuntungan penting ELISA, bagaimana caranya kuantisasi antibodi tidak terlalu penting dalam kerja praktek - mis. tidak memungkinkan diagnosis yang akurat dan tidak mempengaruhi dosis dan waktu peresepan obat.
Apa peran metode ELISA dalam diagnosis sifilis
Metode ELISA dalam diagnosis sifilis pertama kali digunakan pada tahun 1975. Saat ini, metode ini banyak digunakan untuk diagnosis serologis sifilis di Rusia dan digunakan sebagai tes konfirmasi sifilis antibodi total terhadap antigen Treponema pallidum (IgM dan IgG) , meskipun dalam beberapa kasus hanya antibodi “awal” dari kelas M yang dapat ditentukan. ELISA untuk sifilis menjadi positif setelah 3 minggu sejak saat infeksi dan tetap positif untuk beberapa orang waktu lama bahkan setelah pengobatan (kadang-kadang sepanjang hidup). Oleh karena itu, ELISA tidak digunakan sebagai tes untuk memastikan kesembuhan sifilis. hanya hasil positif atau negatif, meskipun penentuan kuantitatif juga dimungkinkan.
(ELISA) adalah metode pengujian darah di laboratorium, berdasarkan pencarian sel khusus - antibodi terhadap berbagai penyakit. Metode ini memungkinkan tidak hanya untuk mengidentifikasi patogen, tetapi juga untuk menentukan pada tahap apa patogen tersebut berada proses patologis. Yang terakhir ini sangat penting untuk prognosis dan perawatan lebih lanjut sabar.
Keuntungan dan kerugian dari metode ini
Di antara semuanya metode modern ELISA diagnostik adalah yang paling inovatif dan akurat secara teknis. Keuntungan utamanya adalah:
- Kemampuan untuk mencari semua antibodi yang ada terhadap penyakit menular di dalam darah pasien.
- Aksesibilitas tinggi dari metode penelitian. Saat ini, tes ELISA dapat dilakukan di laboratorium berukuran sedang mana pun.
- Spesifisitas dan sensitivitas metode ini hampir 100%.
- Kemampuan untuk mencari antibodi dan antigen, serta menentukan tahapan proses patologis dan melacak dinamikanya, berkat perbandingan kuantitas.
Sejumlah keunggulan dibandingkan tes lainnya menutupi satu-satunya kelemahan tes ini: tes ini mampu mendeteksi antibodi, tetapi tidak mampu mendeteksi patogen itu sendiri.
Istilah kunci untuk menilai analisis
Untuk memahami apa itu analisis ELISA, apa itu dan bagaimana cara melakukannya, Anda perlu mengenal istilah-istilah dasar yang digunakan oleh para spesialis.
- Antibodi- protein yang diproduksi oleh sel-sel sistem kekebalan tubuh manusia (limfosit tipe B). Mereka menjawab reaksi spesifik masuknya zat atau zat asing ke dalam tubuh. Nama lain untuk antibodi adalah imunoglobulin kelas yang berbeda: A, E, M, G. Mereka berbeda satu sama lain dalam massa, kecepatan reaksi, waktu paruh dan sejumlah karakteristik lainnya. Biasanya, darah manusia sebagian besar mengandung imunoglobulin kelas G. Jika terjadi infeksi, jumlah imunoglobulin A dan M meningkat tajam.
- Antigen- agen asing yang memiliki asal organik dan berat molekul tinggi. Paling sering itu mewakili patogen atau zat aktif biologisnya.
- Kompleks antigen-antibodi, atau kompleks imun, adalah kombinasi langsung dari zat asing dan imunoglobulin, yang menimbulkan perkembangan reaksi imun.
Esensi dan ruang lingkup metode ini
Pasien sering bertanya-tanya: Analisis ELISA, apa itu, bagaimana cara melakukannya dan untuk apa? Anda dapat membicarakan metode ini dengan cara yang mudah diakses dengan menjelaskan secara singkat tahapannya.
Tahap persiapan. Dokter laboratorium menggunakan plat khusus dengan 96 sumur. Antigen dari patogen tertentu diterapkan pada permukaan setiap sumur.
Tahap 1. Darah diambil, yang kemudian dioleskan setetes demi setetes ke dalam sumur. Sumur memulai reaksi antara antigen dan antibodi dalam darah.
Tahap 2. Reaksi dengan pembentukan kompleks imun sedang berjalan lancar. Akibatnya, suatu zat dengan warna tertentu terbentuk. Intensitas warnanya bergantung pada jumlah antibodi dalam darah pasien terhadap setiap patogen tertentu.
Tahap 3. Evaluasi hasil dengan fotometri. Untuk tujuan ini digunakan alat khusus yang disebut spektrofotometer. Ini digunakan untuk membandingkan kepadatan material di dalam lubang dan sampel kontrol. Selanjutnya, perangkat oleh analisis matematis menghasilkan hasilnya.
Evaluasi hasil dan tujuan ELISA
Interpretasi hasil bergantung pada beberapa nuansa penting:
- Kepadatan optik sumur.
- Produsen pelat dengan sumur (sistem pengujian).
- Laboratorium tempat penelitian dilakukan.
Mengingat perbedaan ini, Anda tidak boleh membandingkan dua hasil dari sistem pengujian yang berbeda atau dari laboratorium yang berbeda.
Poin penting lainnya yang mempengaruhi analisis ELISA adalah apa yang disebut aviditas antibodi. Parameter ini mencirikan jumlah antigen dan kekuatan ikatan dalam kompleks antigen-antibodi. Definisinya didasarkan pada pemrosesan kompleks imun dengan urea untuk menyelesaikan struktur protein. Hal ini memungkinkan Anda untuk menghancurkan ikatan lemah antara antigen dan antibodi dan hanya menyisakan ikatan kuat. Pentingnya studi aviditas adalah dapat digunakan untuk menentukan durasi infeksi. Informasi ini sangat penting untuk menegakkan diagnosis pada ibu hamil.
Pemeriksaan darah dengan metode ELISA berfungsi:
- Untuk mencari berbagai antigen patogen.
- Untuk mempelajari tingkat hormonal.
- Untuk pemeriksaan adanya patologi autoimun.
- Untuk mendeteksi penanda kanker.
Varietas ELISA
Analisis ELISA memiliki tipe sebagai berikut:
- Tidak langsung.
- Lurus.
- Kompetitif.
- Metode pemblokiran.
Namun kenyataannya, saat ini hanya metode yang disebut ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) yang digunakan. Hal ini didasarkan pada reaksi pembentukan kompleks antigen-antibodi yang dijelaskan di atas dengan perubahan warna pada permukaan sumur.
Tes darah ELISA kuantitatif sendiri patut mendapat perhatian khusus. Ini bukan jenis analisis, tapi cara mengevaluasi hasil. Berkat itu, jumlah antibodi dihitung dan kelasnya ditentukan. Hasilnya tergantung pada kepadatan optik sampel, sistem pengujian di mana analisis ELISA dilakukan, dan juga pada laboratorium.
Penyakit yang terdeteksi oleh ELISA
ELISA adalah tes darah yang mendeteksi jumlah yang banyak bermacam-macam penyakit menular. Selain itu, infeksi virus dan virus terdeteksi dengan akurasi yang sama. penyakit bakteri. Misalnya, dengan menggunakan pembentukan kompleks imun, keberadaan antigen patogen penyakit berikut dapat dibuktikan:
Selain itu, ELISA memungkinkan Anda mendeteksi:
- Penanda kanker - TNF (faktor nekrosis tumor), PSA (antigen spesifik prostat), CEA (antigen karsinoembrionik), CA-125 (penanda tumor ovarium)
- Hormon kehamilan adalah hCG (human chorionic gonadotropin).
- Pelanggaran sistem reproduksi: hormon sistem reproduksi wanita dan pria.
- Patologi kelenjar tiroid.
Penting untuk disebutkan bahwa tes ELISA untuk HIV saat ini adalah cara utama untuk mendiagnosis penyakit berbahaya ini.
Materi ELISA dan teknik pengambilan sampel
Untuk melakukan ELISA, darah diambil dari pasien saat perut kosong. Selanjutnya serum diambil dari darah, yang langsung digunakan untuk analisis. Selain itu, ELISA dapat dilakukan pada cairan serebrospinal(cairan serebrospinal), lendir saluran serviks (leher rahim), cairan ketuban bahkan cairan vitreous (bola mata).
Sebelum mendonorkan darah, pasien diperingatkan untuk tidak meminumnya obat, dan pengobatan dengan antibiotik dan obat antivirus Disarankan untuk menyelesaikannya setidaknya dua minggu sebelum pengambilan darah.
Batas waktu untuk menerima dan menguraikan hasil
Waktu yang dibutuhkan untuk menerima jawaban dari laboratorium tidak bergantung pada kecepatan kerjanya, tetapi pada stadium penyakit apa dan antibodi apa yang sudah muncul dalam darah. Jadi, misalnya: imunoglobulin M muncul kira-kira 2 minggu setelah pengambilan darah untuk dianalisis dan berarti prosesnya berada pada tahap infeksi primer atau telah terjadi eksaserbasi infeksi kronis. Pada saat yang sama, antibodi kelas M dan G muncul selama infeksi primer. Apalagi yang terakhir bisa dideteksi setelah 4 minggu.
IgA muncul setelah 2-3 minggu baik sendiri atau bersamaan dengan M, artinya infeksi akut, atau bersama dengan G, menunjukkan proses kronis.
Seperti istilah yang berbeda Munculnya antibodi dalam darah akan memaksa pasien menunggu lama untuk mengetahui hasilnya. Menunggu lebih dari sebulan setelah tes ELISA dilakukan dapat diterima. Penguraian dan interpretasi oleh dokter juga membutuhkan jangka waktu tertentu.
Daftar metode diagnostik yang tersedia telah berkembang pesat dalam beberapa dekade terakhir; para ahli diagnosa mencoba menggabungkan kelebihan dari semua analisis sebelumnya dalam metode baru, menghilangkan semua kelemahan mereka sebelumnya.
DI DALAM Akhir-akhir ini semakin banyak dalam daftar prosedur diagnostik termasuk enzim immunoassay - tes modern dan cukup baru, yang hanya sedikit diketahui oleh rata-rata orang yang tidak terkait dengan kedokteran. Meski demikian, teknik ini berkembang pesat di kalangan penganutnya di kalangan tenaga medis yang mumpuni. Anda dapat mencoba mencari tahu apa itu dan dalam kasus apa sebaiknya digunakan dengan membiasakan diri dengan fitur dan karakteristik utamanya.
Immunoassay enzim adalah teknik laboratorium instrumental yang didasarkan pada reaksi molekuler “antigen-antibodi”, yang memungkinkan untuk mendeteksi protein spesifik dalam bahan biologis(sampel untuk penelitian). Protein tersebut dapat berupa enzim, berbagai mikroorganisme (virus, bakteri, jamur), protozoa, dll.
Setelah ditemukannya metode tersebut, maka diberi nama tes ELISA, yang tidak ada hubungannya dengan nama penemunya, melainkan merupakan singkatan dari nama lengkap dalam bahasa Inggris - enzim-linked immunosorbent assay. Dokter di seluruh dunia menggunakan nama ini; beberapa dokter di negara-negara berbahasa Rusia juga menyebut jenis penelitian ini demikian.
Prinsip utama metode ini adalah reaksi molekuler “antigen-antibodi”.
Antigen adalah molekul asing yang masuk ke dalam tubuh tubuh manusia sebagai bagian dari mikroba penyebab penyakit. Antigen biasanya merupakan molekul protein. Selain mikroorganisme, “orang asing” tersebut bisa berupa sel darah asing yang tidak sesuai golongan atau faktor Rhnya.
Menanggapi masuknya antigen tersebut ke dalam tubuh, reaksi kekebalan dipicu, yang bertujuan untuk melindungi terhadap molekul asing. Hal ini terjadi karena sintesis agen khusus sistem imun- antibodi (imunoglobulin). Setiap antibodi hanya cocok untuk antigen tertentu dan menetralkan “orang asing” patogen dengan mengikatnya menjadi satu kompleks. Proses pengikatan inilah yang disebut reaksi “antigen-antibodi”.
Jenis antibodi
Semua antibodi (imunoglobulin) dibagi menjadi 5 jenis tergantung pada tahap respon imun yang muncul:
Untuk diagnosis ELISA, kadar imunoglobulin IgG, IgM dan IgA seringkali penting. Berdasarkan titernya, Anda dapat mengetahui apakah seseorang pernah menderita penyakit ini sebelumnya atau baru saja terinfeksi, apakah ia telah mengembangkan kekebalan atau apakah tubuhnya tidak berdaya melawan patologi.
Keuntungan dan kerugian dari immunoassay enzim
Pada saat ini ELISA adalah salah satu metode yang paling akurat dan sensitif. Ini telah diadopsi oleh para spesialis di berbagai bidang kedokteran dan terus memperluas cakupan penerapannya.
Keuntungan dari metode ini
- Akurasi tinggi dari data yang diperoleh.
- Sensitivitas (memungkinkan Anda mendeteksi zat yang diperlukan bahkan dengan kehadiran minimal patogen dalam sampel).
- Kemungkinan diagnosis pada hari-hari pertama sakit atau pada masa inkubasi.
- Kecepatan perolehan data dibandingkan dengan metode lain yang memiliki akurasi serupa.
- Otomatisasi proses yang tinggi dan partisipasi manusia yang minimal, sehingga mengurangi kesalahan pelaku.
- Memperoleh data tentang tahapan proses patologis dan efektivitas terapi yang dipilih.
- Tidak menimbulkan rasa sakit dan invasif minimal saat mengumpulkan bahan.
Kekurangan metode ini
- Dalam kebanyakan kasus, ini memungkinkan Anda menentukan respons tubuh terhadap agen patogen, dan bukan patogen itu sendiri.
- Sebelum dilakukan pemeriksaan, penyakit yang dicurigai harus diketahui secara pasti, karena pemeriksaan tersebut sangat spesifik.
- Kemungkinan pembacaan yang salah disebabkan oleh masalah teknis, penggunaan obat, atau kehadiran beberapa obat secara bersamaan penyakit kronis atau pelanggaran proses metabolisme dalam tubuh pasien.
- Interpretasi hasil hanya boleh dilakukan oleh ahli yang berkualifikasi tinggi, karena untuk menginterpretasikan data yang diperoleh diperlukan pengetahuan Pelatihan khusus dan sejumlah besar pengetahuan medis di bidang tertentu.
- ELISA merupakan tes yang cukup langka, sehingga tidak dilakukan di semua laboratorium diagnostik.
- Caranya cukup mahal, karena selain reagen, laboratorium juga harus memiliki banyak peralatan mahal dan sampel antigen yang diproduksi di lembaga khusus.
Dalam kasus apa immunoassay enzim digunakan?
Daftar lengkap indikasi untuk immunoassay enzim sangat luas; mencakup hampir semua cabang kedokteran.
Paling sering, ELISA digunakan untuk tujuan berikut:
- deteksi penyakit menular;
- diagnosis penyakit menular seksual;
- definisi status kekebalan atau penyakit autoimun tertentu;
- identifikasi penanda tumor;
- penentuan hormon.
Dalam kasus menular dan penyakit virus Teknik ini memungkinkan kita mengidentifikasi patologi berikut:
Selain itu, ELISA memungkinkan Anda dengan cepat dan efektif menentukan keadaan infark, menilai potensi reproduksi tubuh, mengidentifikasi alergi, sumbernya, dll.
Teknik immunoassay enzim digunakan untuk melakukan uji klinis selama pengembangan obat baru dan dalam menilai efeknya terhadap tubuh manusia.
Jenis sampel dan metode pemilihannya untuk penelitian
Paling sering, bahan uji untuk enzim immunoassay adalah darah, yang diambil dari vena antecubital pasien. Pengambilan sampel dilakukan pada saat perut kosong, terutama pada pagi hari. Setelah pengambilan sampel, sel-sel yang terbentuk yang mengganggu penelitian dipisahkan dan dikeluarkan dari darah, hanya menyisakan serum.
Saat mendiagnosis infeksi genitourinari, bahan yang sering digunakan adalah apusan dari jaringan mukosa alat kelamin, lendir dari uretra atau leher rahim, sampel dari rektum, kerokan dari erosi atau bisul di daerah selangkangan dan dari bagian tubuh lainnya. Swab juga bisa diambil rongga mulut, serta dari nasofaring.
Terkadang enzim immunoassay digunakan dalam praktik obstetri dan ginekologi selama kehamilan untuk mengetahui keadaan cairan ketuban. Dalam hal ini, cairan ketuban menjadi sampelnya. Caranya, sejumlah kecil cairan diambil dengan cara menusuk kantung ketuban dengan jarum panjang. Semua manipulasi dilakukan dengan instrumen steril untuk meminimalkan kemungkinan risiko.
Seringkali bahan tersebut menjadi cairan serebrospinal atau serosa. Ini terjadi ketika anestesi lokal, yang diberikan melalui suntikan.
Spesialis yang dikirim untuk penelitian harus menjelaskan jenis bahan apa yang diperlukan untuk immunoassay enzim. Seringkali sampel dari beberapa jenis atau dari tempat berbeda diambil sekaligus. Dokter yang mengeluarkan rujukan untuk pemeriksaan jenis ini juga harus memberi tahu pasien tentang persiapan sumbangan biomaterial.
Persiapan untuk immunoassay enzim
Untuk meningkatkan keakuratan data yang diperoleh setelah immunoassay enzim, persiapan pemilihan bahan harus sebagai berikut:
- 10 hari sebelum penelitian, singkirkan antibiotik, obat antivirus dan antimikotik;
- selama sehari perlu untuk mengecualikan alkohol, merokok dan mengonsumsi obat-obatan;
- selama periode yang sama, perlu untuk menghindari aktivitas fisik yang berlebihan;
- Peringatkan pemberi resep tentang semua obat yang diminum pasien;
- Beritahu dokter Anda jika Anda sedang hamil atau mencurigai Anda hamil.
Sebaiknya bahan pengujian dikumpulkan pada pagi hari dengan perut kosong.
Jika diagnosis bertujuan untuk mengetahui keadaan kadar hormonal, maka penting untuk memastikannya keadaan tenang sehari sebelumnya dan hindari ketegangan saraf. Bagi wanita, mendonorkan darah untuk hormon jelas ditentukan oleh jangka waktunya siklus bulanan, yang akan didiskusikan oleh dokter pada saat janji temu.
2-3 hari sebelum pengambilan sampel, Anda perlu mengecualikan makanan yang digoreng dan berlemak dari menu, dan sebelum melakukan tes hepatitis, jangan makan buah jeruk atau buah dan sayuran berwarna oranye atau kuning lainnya.
Interpretasi hasil immunoassay enzim
Hasil penelitian kualitatif biasanya ditunjukkan dengan tanda “+” (terdeteksi) atau “-” (tidak ditemukan).
Berdasarkan ada tidaknya kelompok imunoglobulin tertentu, dapat diambil kesimpulan sebagai berikut:
- JgM (-), JgG (-), JgA (-) - kekebalan terhadap penyakit sama sekali tidak ada (tubuh sebelumnya belum pernah menemukan antigen jenis ini);
- JgM (-), JgG (+), JgA (-) - pernah terjadi benturan sebelumnya dengan antigen atau vaksin ini;
- JgM (+), JgG (-/+), JgA (-/+) - proses patologis akut (kemungkinan besar primer);
- JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) - proses kronis;
- JgM (+), JgG (+), JgA (+) - kambuh;
- JgM (-) - tahap pemulihan.
Nilai kuantitatif membawa beban informasi yang besar, namun hanya dokter yang merawat yang dapat menafsirkannya, berdasarkan indikasi sebelumnya, usia pasien, dan norma untuk setiap penyakit tertentu. Karena alasan inilah Anda tidak dapat mengevaluasi sendiri hasilnya.
Berapa lama Anda harus menunggu hasilnya?
Teknik ini memiliki banyak variasi, tergantung pada periode perolehan data yang ditentukan. Durasi rata-rata Diagnostik ELISA membutuhkan waktu 4-6 jam, yang memungkinkan Anda memberikan hasil pada hari berikutnya.
Metode yang paling lama memakan waktu hingga 10 hari, misalnya pada kasus infeksi HIV.
Pada kebutuhan mendesak Dimungkinkan untuk menggunakan metode ekspres, di mana jawabannya diperoleh dalam waktu 1-2 jam.
Dimana saya bisa mendapatkan tes ELISA?
Karena peralatan untuk diagnostik jenis ini cukup mahal, tidak semua laboratorium dapat membelinya. Selain itu, tes yang mengandung antigen spesifik memiliki umur simpan yang terbatas (biasanya sekitar 1 tahun) dan oleh karena itu memerlukan pembaruan terus-menerus.
Oleh karena itu, pemerintah institusi medis Laboratorium ELISA tidak selalu tersedia. Paling sering perlu untuk menghubungi pusat medis swasta besar atau pusat diagnostik besar.
Untuk melakukan uji ELISA, laboratorium harus memiliki izin khusus, dan staf serta asisten laboratorium harus menjalani pelatihan khusus.
Paling sering spesifik pusat diagnostik atau laboratorium yang direkomendasikan oleh dokter merujuk pasien untuk diperiksa.
Biaya immunoassay enzim
Harga untuk pelajaran ini tergantung pada wilayah negara dan tingkat klinik yang menyediakan layanan. Di Moscow harga minimal untuk menentukan satu antigen mulai dari 700 rubel. Jika perlu mengidentifikasi beberapa imunoglobulin sekaligus, harganya akan dijumlahkan.
Kapan analisis mendesak biayanya meningkat 150-200 rubel. untuk setiap antigen.
Meskipun biayanya agak mahal, enzim immunoassay memungkinkan pemeriksaan pasien menjadi informatif dan secepat mungkin, sehingga mengurangi waktu sebelum memulai pengobatan dan memungkinkan stabilisasi kondisi orang tersebut lebih cepat.
Video ini menyajikan film “Dasar-dasar Enzim Immunoassay”.
